CN110857905B - 粪便分析仪的质控物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种粪便分析仪的质控物及其制备方法,其中,所述质控物包括灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、粪便模拟物、缓冲液和防腐剂;所述粪便模拟物为草酸钙或硫酸钡。本发明提供了一种含有多种检验组分的质控物,通过将灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、草酸钙或硫酸钡粪便模拟物、缓冲液和防腐剂组合成质控物,在粪便模拟物、缓冲液和防腐剂的共同作用下,所述质控物体系均匀稳定,灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白可以共存,可以用作粪便分析仪的质控物,判断粪便分析仪的检测结果是否准确,以及为调整粪便分析仪的检测参数提供参考依据。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域,特别是涉及一种粪便分析仪的质控物及其制备方法。
背景技术
粪便检查是医学实验室诊断的常规项目之一,通过此项检查可较直观地了解胃肠道一些病理现象,间接地判断消化道、胰腺、肝胆的功能状况,其检查结果对临床诊断有确诊性意义。粪便检查的常规内容包括外观性检测、粪便形态学检测(主要有细胞、寄生虫卵、食物残渣、细菌等)、粪便化学检测(如隐血、钙卫蛋白、胆色素等)和粪便免疫学检测等。
目前国内粪便检查仍以半自动和人工镜检为主,虽然,自动粪便分析仪可以使用全自动显微镜自动获取镜检图片等以提高检测效率,但是其推广和应用还处于起步阶段,各种技术还不成熟,目前,也没有评价自动粪便分析仪的检验结果是否准确的质量控制方法。
传统的用于粪便检验的质控物所包含的项目有限,如只含有红细胞的质控物,或只含有白细胞的质控物,不能满足粪便分析仪的质量控制的需要,而临床上检验主要采用临床样本来充当质控物,保存期有限。因此,有必要提供一种质控物,可以用来检验粪便分析仪的检测结果是否准确,以及为调整粪便分析仪的检测参数提供参考依据。
发明内容
基于此,有必要提供一种粪便分析仪的质控物,可以为判断粪便分析仪的检测结果是否准确,以及为调整检粪便分析仪的测参数提供参考依据。
一种粪便分析仪的质控物,包括灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、粪便模拟物、缓冲液和防腐剂;
所述粪便模拟物为草酸钙或硫酸钡。
本发明提供了含有多种检验组分的质控物,通过将灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、草酸钙或硫酸钡粪便模拟物、缓冲液和防腐剂组合成质控物,在缓冲液和防腐剂的共同作用下,所述质控物体系均匀稳定,灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白可以共存,而粪便模拟物草酸钙或硫酸钡一方面可以模拟粪便,另一方面对体系的稳定性无影响,不会导致体系稳定性下降,可以用作粪便分析仪的质控物,判断粪便分析仪的检测结果是否准确,以及为调整粪便分析仪的检测参数提供参考依据。
在其中一个实施例中,所述灭活的寄生虫卵的浓度为5个/μL~20个/μL,所述灭活的红细胞的浓度为5个/μL~20个/μL,所述血红蛋白的浓度为0.5μg/mL~2μg/mL。此范围浓度非常适合用作质控物浓度,保证结果可靠。
在其中一个实施例中,所述寄生虫卵选自蛔虫卵、肝吸虫卵和姜片虫卵中的至少一种。
在其中一个实施例中,所述红细胞为采用醛化剂灭活的红细胞,所述红细胞取自人血、兔血、鼠血、猪血、羊血、猴血或牛血。
在其中一个实施例中,所述缓冲液为磷酸盐缓冲液,所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.8~7.2。
在其中一个实施例中,所述防腐剂选自甲醛、甲苯和硫柳汞中的至少一种。
在其中一个实施例中,所述质控物包括以下终浓度的物质:8个/μL~12个/μL灭活的寄生虫卵、8个/μL~12个/μL灭活的红细胞、0.8μg/mL~1.2μg/mL血红蛋白、0.08mol~0.1mol磷酸缓冲液、0.005wt%~0.01wt%的防腐剂,以及0.4mmol/L~0.6mmol/L的硫酸钡或0.8mmol/L~1.2mmol/L的草酸钙。
本发明另一目的在于提供一种粪便分析仪的质控物的制备方法,包括以下步骤:
将灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、粪便模拟物、缓冲液和防腐剂按照测试需求的比例混合均匀,即得到粪便分析仪的质控物;
所述粪便模拟物为草酸钙或硫酸钡。
上述制备方法操作简单,易于实现,所得质控物体系稳定,灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞和血红蛋白能够很好的共存。
在其中一个实施例中,所述测试需求的比例为所述质控物中包括5个/μL~20个/μL灭活的寄生虫卵、5个/μL~20个/μL灭活的红细胞和0.5μg/mL~2μg/mL血红蛋白。
在其中一个实施例中,所述制备方法还包括所述灭活的红细胞的制备步骤:
收取人或动物的新鲜红细胞,将所得的红细胞用质量浓度为1%~2.5%醛化剂进行灭活处理,即得到所述灭活的红细胞;
所述醛化剂选自甲醛、乙醛和戊二醛中的至少一种。
本发明具有以下有益效果:
本发明通过将灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、粪便模拟物、缓冲液和防腐剂按照测试需求的比例混合均匀,得到质控物;所述质控物体系均匀、稳定性好,其中包含寄生虫卵、红细胞和血红蛋白三种检验项目,解决了传统质控物只含有红细胞质控物或只含血红蛋白质控物等单一检验项目,而且,寄生虫卵、红细胞和血红蛋白的辨识度高,比如蛔虫卵呈现形态规则一致的堕球形、肝吸虫卵呈形态规则的芝麻形,醛化灭活的红细胞的形态呈规则一致的球状,同时,草酸钙或硫酸钡作为粪便模拟物可以提高结果判断的准确性,又不会对质控物体系的稳定性带来不良影响,因此,本发明为粪便分析仪提供了一种实用廉价而可靠的质控物。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将对本发明进行更全面的描述,并给出了本发明的较佳实施例。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明一实施方式的粪便分析仪的质控物,包括灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、粪便模拟物、缓冲液和防腐剂;
其中,粪便模拟物为草酸钙或硫酸钡。
粪便是大肠的排遗物,其中含有未消化的食物纤维、蛋白质、无机物等颗粒物,在检验粪便分析仪的检验结果是否准确时,需要考虑粪便样品中颗粒物的干扰。为了模拟粪便样品,本申请发明通过大量创造性实验,筛选出草酸钙和硫酸钡,适合用做质控物的粪便模拟物;并通过将灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞和血红蛋白三种检验项目,以及粪便模拟物、缓冲液和防腐剂组合成质控物,在缓冲液和防腐剂的共同作用下,质控物体系稳定,灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白可以共存,可以用作粪便分析仪的质控物,判断粪便分析仪的检测结果是否准确,以及为调整粪便分析仪的检测参数提供参考依据。
在一个实施例中,灭活的寄生虫卵的浓度为5个/μL~20个/μL,灭活的红细胞的浓度为5个/μL~20个/μL,血红蛋白的浓度为0.5μg/mL~2μg/mL。上述各项目的范围浓度非常适合用作质控物浓度,能保证结果可靠。
进一步地,灭活的寄生虫卵的浓度为8个/μL~16个/μL,灭活的红细胞的浓度为8个/μL~16个/μL,血红蛋白的浓度为0.8μg/mL~1.2μg/mL。
在一个实施例中,寄生虫卵选自蛔虫卵、肝吸虫卵和姜片虫卵中的至少一种。较优的,寄生虫卵为蛔虫卵和肝吸虫卵。可以理解,蛔虫卵呈堕球形、肝吸虫卵呈芝麻形,姜片虫卵呈卵球形,选择两种形状不相似的寄生虫卵,便于辨识,提高准确度。
进一步地,质控物中蛔虫卵的浓度为4个/μL~8个/μL,肝吸虫卵的浓度为4个/μL~8个/μL。
在一个实施例中,红细胞为采用醛化剂灭活的红细胞,所述红细胞取自人血或兔、鼠、猪、羊、猴、牛等哺乳动物的新鲜血液。醛化灭活对细胞的形态有明显的修饰作用,经过醛化剂灭活的红细胞的形态趋于规则、一致,呈球状,辨识度高。
在一个实施例中,缓冲液为磷酸盐缓冲液,磷酸盐缓冲液的pH值为6.8~7.2。
在一个实施例中,防腐剂选自甲醛、甲苯和硫柳汞中的至少一种。优选甲醛。
在一个实施例中,质控物包括以下终浓度的物质:8个/μL~12个/μL灭活的寄生虫卵、8个/μL~12个/μL灭活的红细胞、0.8μg/mL~1.2μg/mL血红蛋白、0.08M~0.1M磷酸盐缓冲液、0.005wt%~0.01wt%的防腐剂,以及0.0004mol/L~0.0006mol/L的硫酸钡或0.0008mol/L~0.0012mol/L的草酸钙。
本发明另一实施方式提供一种粪便分析仪的质控物的制备方法,包括以下步骤:
将灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、粪便模拟物、缓冲液、防腐剂按照测试需求的比例混合均匀,即得到粪便分析仪的质控物;
其中,粪便模拟物为草酸钙溶液或硫酸钡溶液。
上述制备方法操作简单,易于实现,所得质控物体系均匀、稳定,灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞和血红蛋白能够很好的共存,寄生虫卵和红细胞的辨识度高,血红蛋白不易降解和下沉,所得质控物的保存期长。
在一个实施例中,测试需求的比例为质控物中包括5个/μL~20个/μL灭活的寄生虫卵、5个/μL~20个/μL灭活的红细胞和0.5μg/mL~2μg/mL血红蛋白。
在一个实施例中,灭活的红细胞可以为普通市售,也可以通过以下制备方法得到,具体包括以下制备步骤:
收取人或动物的新鲜红细胞,将所得的红细胞用质量浓度为1%~2.5%醛化剂进行灭活处理,即得到灭活的红细胞;
醛化剂选自甲醛、乙醛和戊二醛中的至少一种。
具体地,包括以下步骤:
1)、用抗凝剂收取人或哺乳动物的新鲜血液,离心分离,得到红细胞,备用;其中,抗凝剂选自柠檬酸钠、乙二胺四乙酸盐和枸橼酸盐。
2)、将所得红细胞用生理盐水进行离心洗涤三遍后,加入到红细胞处理液中,红细胞处理液包含1wt%~2.5wt%的醛化剂,红细胞与细胞处理液的体积为1:(2~20),2℃~8℃处理时间为12~16小时。其中,醛化剂优选为戊二醛。
3)、用细胞处理液处理完后,用生理盐水再次进行离心洗涤,得到灭活的红细胞,用保存液进行储存,备用。
在一个实施例中,草酸钙溶液的浓度为0.05mol/L~0.01mol/L,具体可通过采用氯化钡与硫酸反应制备得到。如此,草酸钙呈均匀的晶粒存在溶液中,可以模拟粪便中的晶体颗粒物,用作背景物质,可减少或消除粪便检验误差。
在一个实施例中,硫酸钡溶液的浓度为0.05mol/L~0.01mol/L,具体可通过采用一水合草酸铵与氯化钙反应制备得到。如此,硫酸钡呈均匀的晶粒存在溶液中,可以模拟粪便中的晶体颗粒物,用作背景物质,可减少或消除粪便检验误差。
具体地,按照梯度法通过往质控物中添加不同量的粪便模拟物,保持其他组分含量不变,得到不同的质控物;同时按照粪便分析仪说明书进行粪便样品处理,得到待测样品,然后将待测样品和所得到的质控物置于粪便分析中进行镜检,通过比镜检的结果,筛选出与粪便样品中颗粒物类似的质控物,从而得到合适的粪便模拟物浓度,具体为草酸钙或硫酸钡的浓度为0.05mol/L~0.01mol/L。
以下为具体实施例
灭活的蛔虫卵溶液购自沅江卫生院寄生虫卵研究中心,浓度为30个/μL;灭活的肝吸虫卵溶液购自沅江卫生院寄生虫卵研究中心,浓度为60个/μL;灭活的红细胞溶液来源于兔血,经醛化处理后稀释浓度至200个/μL;血红蛋白购自美国Fitzgerald公司,用生理盐水稀释至浓度为20μg/mL。
实施例1
质控物的制备方法和质控物
1)、用氯化钡与硫酸反应,配制0.05mol/L的硫酸钡溶液,并稀释10倍,作为粪便模拟物备用。
2)、配制0.2M磷酸盐(PBS)缓冲液,pH值为7.0,备用。
3)、将浓度为40wt%的甲醛溶液用去离子水稀释100倍,作为防腐剂备用。
4)、取30个/μL的灭活的蛔虫卵溶液160μL、60个/μL的灭活的肝吸虫卵溶液80μL、200个/μL红细胞悬液50μL、20μg/mL血红蛋白50μL、粪便模拟物100μL、PBS缓冲液460μL、防腐剂100μL加入1.5μL的EP管内充分混匀,得到1mL质控物。
5)取配制1d内的质控物和于4℃放置3个月的质控物,用显微镜观察虫卵和红细胞的形态,用胶体金免疫层析法测定血红蛋白含量,发现前后无明显变化,蛔虫卵呈堕球形、肝吸虫卵呈芝麻形,红细胞呈球形,辨识度非常高,蛔虫卵4~5个/μL、肝吸虫卵4~5个/μL,红细胞浓度为9~10个/μL,浓度为1μg/mL血红蛋白检测结果为+(阳性)。
实施例2
实施例2与实施例1基本相同,不同之处在于,实施例2的粪便模拟物为草酸钙溶液,具体为:用一水合草酸铵和氯化钙反应配制0.1mol/L的草酸钙溶液,然后稀释10倍。
取于制备当天和于4℃放置3个月的质控物放置3个月的质控物,按照实施例1的方法检测,结果与实施例相同,质控物的稳定好。
实施例3
实施例3与实施例1基本相同,不同之处在于灭活的红细胞为采用下述步骤制备得到的。
灭活的红细胞制备步骤如下:
1)、用抗凝剂柠檬酸钠收取兔的新鲜血液,离心分离洗涤,得到红细胞,备用。
2)、将所得红细胞用细胞处理液进行处理,细胞处理液的主要成分为2.5wt%的戊二醛,红细胞与细胞处理液的体积为1:10,处理时间为3小时。
3)、用细胞处理液处理完后,进行离心洗涤,得到灭活的红细胞,用保存液将灭活的红细胞稀释至约200个/μL,备用。
取于制备当天和于4℃放置3个月的质控物放置3个月的质控物,按照实施例1的方法检测,结果与实施例基本相同,蛔虫卵呈堕球形、肝吸虫卵呈芝麻形,红细胞呈球形,蛔虫卵4~5个/μL、肝吸虫卵4~5个/μL,红细胞浓度为9~10个/μL,浓度为1μg/mL血红蛋白检测结果为+(阳性)。
实施例4
质控物中血红蛋白的浓度选择:取100mg/L血红蛋白溶液1mL,用生理盐水稀释成5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL共5个浓度的血红蛋白溶液。
按照实施例1的方法,分别取取30个/μL的灭活的蛔虫卵溶液160μL、60个/μL的灭活的肝吸虫卵溶液80μL、200个/μL红细胞悬液50μL、上述血红蛋白50μL、粪便模拟物100μL、PBS缓冲液460μL、防腐剂100μL加入1.5μL的EP管内充分混匀,得到1mL质控物,质控物中血红蛋白的浓度依次为0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL。分别于配制好的第3个月末取5种质控物,用胶体金免疫层析法测定血红蛋白含量,测试线与对照线颜色相仿为++,测试线颜色比对照线略淡为+,测试线呈现微红线痕为±,测试结果呈阴性为-,重复5次。结果:2μg/mL和3μg/mL的为++,1μg/mL为+,0.5μg/mL为±,0.25μg/mL的为-,因此,选取0.5μg/mL~2μg/mL为质控物中血红蛋白的浓度。
对比例1
对比例1与实施例1基本相同,不同之处在于,对比例1的粪便模拟物为0.01mol/L烟灰溶液。
放置1d,采用实施例1的方法检测,结果正常。放置3个月后,发现血红蛋白浓度为1μg/mL的检测结果为-(阴性),红细胞和寄生虫卵均出现不规则状态,且能观察的数量仅为1~3个/μL。
对比例2
对比例2与实施例1基本相同,不同之处在于,对比例2的粪便模拟物为1%的草木灰。
放置1d,采用实施例1的方法检测,结果正常。放置3个月后,发现血红蛋白浓度为1μg/mL的检测结果为-(阴性),红细胞和寄生虫卵均出现不规则状态,且能观察的数量仅为1~2个/μL。
对比例3
对比例3与实施例1基本相同,不同之处在于,对比例1中未添加防腐剂。
对比例3的质控物放置3个月后,基本上检测不到血红蛋白、寄生虫卵和红细胞的形态呈现不一致,且能观察到的均出现不同程度的不规则化。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (8)
1.一种粪便分析仪的质控物,其特征在于,所述质控物包括灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、粪便模拟物、缓冲液和防腐剂;在所述质控物中,所述灭活的寄生虫卵的浓度为5个/μL~20个/μL,所述灭活的红细胞的浓度为5个/μL~20个/μL,所述血红蛋白的浓度为0.5μg/mL~2μg/mL;
所述粪便模拟物为草酸钙或硫酸钡。
2.根据权利要求1所述的质控物,其特征在于,所述寄生虫卵选自蛔虫卵、肝吸虫卵和姜片虫卵中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的质控物,其特征在于,所述红细胞为采用醛化剂灭活的红细胞,所述红细胞取自人血、兔血、鼠血、猪血、羊血、猴血或牛血。
4.根据权利要求1所述的质控物,其特征在于,所述缓冲液为磷酸盐缓冲液,所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.8~7.2。
5.根据权利要求1所述的质控物,其特征在于,所述防腐剂选自甲醛、甲苯和硫柳汞中的至少一种。
6.根据权利要求1~5任一所述的质控物,其特征在于,所述质控物包括以下终浓度的物质:8个/μL~12个/μL灭活的寄生虫卵、8个/μL~12个/μL灭活的红细胞、0.8μg/mL~1.2μg/mL血红蛋白、0.08mol~0.1mol磷酸缓冲液、0.005wt%~0.01wt%的防腐剂,以及0.4mmol/L~0.6mmol/L的硫酸钡或0.8mmol/L~1.2mmol/L的草酸钙。
7.一种粪便分析仪的质控物的制备方法,其物征在于,包括以下步骤:
将灭活的寄生虫卵、灭活的红细胞、血红蛋白、粪便模拟物、缓冲液和防腐剂按照测试需求的比例混合均匀,即得到粪便分析仪的质控物;所述测试需求的比例为所述质控物中包括5个/μL~20个/μL灭活的寄生虫卵、5个/μL~20个/μL灭活的红细胞和0.5μg/mL~2μg/mL血红蛋白;
所述粪便模拟物为草酸钙或硫酸钡。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述灭活的红细胞灭活所采用的灭活剂为质量浓度为1%~2.5%醛化剂;
所述醛化剂选自甲醛、乙醛和戊二醛中的至少一种。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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