CN110849979A - 一种葡萄糖酸锌口服液的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种葡萄糖酸锌口服液的检测方法,所述方法包括以下步骤:葡萄糖酸锌口服液加入丙酮和硝酸溶液至总体积为250mL;过滤后准确量取10μL用于HPLC进样分析;取葡萄糖酸锌对照品溶液10μL用于HPLC进样分析;按照外标法计算葡萄糖酸锌口服液中葡萄糖酸锌的有效含量。本发明的检测方法适用于非溶解态的葡萄糖酸锌含量测定;本发明的检测方法精密度高,重现性好,稳定性好,能够准确测定葡萄糖酸锌含量。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域;涉及一种口服液的检测方法,尤其是一种葡萄糖酸锌口服液的检测方法。
背景技术
锌是人和动物体内重要的微量元素之一,对于维持人和动物体的正常生长发育和身体健康具有重要作用。锌参与人和动物体内多种酶的作用,对促进儿童生长发育, 减轻感冒症状,促进创面愈合,抗感染,增强宿主防御能力和在抗癌方面均有不同程度的作用。根据报道,正常成年人体内血清锌浓度为109-124μg/100mL,血浆锌浓度为100-140μg/100mL。当人体摄入锌不足时,容易出现营养性锌缺乏病,从而导致发育不良,免疫力下降,甚至出现侏儒症和智力发育不良的现象。
正常情况下,人体内锌的平衡代谢主要依赖于富锌食物进行补充。然而,我国粮食和蔬菜等主要膳食中锌和铁的生物利用率太低。在此基础上,逐渐发展出营养强化补锌产品。最早的补锌产品为无机锌,主要包括硫酸锌、氯化锌和氧化锌,然而,无机锌生物利用度仅为7%,并且对肠胃副作用较明显。在此基础上,人们选择多种有机锌作为补锌产品,主要包括葡萄糖酸锌、乳酸锌、柠檬酸锌、甘草锌和氨基酸锌,然而,这些有机锌的生物利用度仅为14%左右,同时容易干扰体内锌铜离子平衡以及超氧化物歧化酶(SOD)活性。较新的补锌产品为酵母锌,酵母锌通过生物发酵制得,生物利用度较高,但制备工艺较为复杂。
在上述补锌产品中,应用最为广泛的是葡萄糖酸锌。葡萄糖酸锌疗效确切,但制剂种类集中在常规片剂、胶囊和颗粒剂。这些葡萄糖酸锌制剂释放速率不稳定,生物利用度低。
为了解决这些问题,哈药六厂开发出葡萄糖酸锌口服液,其处方组成为:纯净水、白砂糖、葡萄糖酸锌、柠檬酸、香精。然而,葡萄糖酸锌的药物释放曲线存在触发反转现象,在1-2h内血药浓度达到最高,然后在4-5h回归正常水平,血液浓度波动较大。
中国专利申请CN104224701A公开了一种葡萄糖酸锌口服液的配方,包括葡萄糖酸锌、白砂糖、酪蛋白膦酸肽和香精。与传统配方相比,新配方加入了酪蛋白膦酸肽作为吸收促进剂,有效促进人体对锌的吸收和利用。然而,该口服液加入的酪蛋白膦酸肽仅0.1%左右,难以显著改善锌的吸收利用率。
然而,上述专利申请的主要活性成分是溶解态的葡萄糖酸锌分子,按照中国药典2015第二版记载的EDTA滴定法能够较好地实现葡萄糖酸锌中锌离子含量的检测。其中每1mLEDTA滴定液相当于22.78mg的葡萄糖酸锌。然而,该方法消耗试样体积较大,耗时较长,同时,由于该方法属于水相滴定法,难以适用于非溶解态的葡萄糖酸锌含量测定。
因此,为了解决上述问题,需要寻找一种葡萄糖酸锌口服液的检测方法。
发明内容
为实现上述目的,本发明提供了一种葡萄糖酸锌口服液的检测方法,所述方法包括以下步骤:
(1) 葡萄糖酸锌口服液加入丙酮和硝酸溶液至总体积为250mL;过滤后准确量取10μL用于HPLC进样分析;
(2) 取葡萄糖酸锌对照品溶液10μL用于HPLC进样分析;
(3) 按照外标法计算葡萄糖酸锌口服液中葡萄糖酸锌的有效含量。
根据本发明所述的检测方法,其中,所述步骤(1)具体为:准确量取1-10mL葡萄糖酸锌口服液,加入10-30mL丙酮,充分搅拌后得到溶液1;然后加入1-10mL的5wt%的硝酸溶液至总体积为250mL,静置10-60min;然后使用0.45μm滤膜过滤,得到溶液2;准确量取10μL用于HPLC进样分析。
优选地,所述步骤(1)具体为:准确量取2-8mL葡萄糖酸锌口服液,加入10-20mL丙酮,充分搅拌后得到溶液1;然后加入1-5mL的5wt%的硝酸溶液至总体积为250mL,静置20-40min;然后使用0.45μm滤膜过滤,得到溶液2;准确量取10μL用于HPLC进样分析。
在一个具体的实施方式中,所述步骤(1)具体为:准确量取5mL葡萄糖酸锌口服液,加入10mL丙酮,充分搅拌后得到溶液1;然后加入2mL的5wt%的硝酸溶液至总体积为250mL,静置30min;然后使用0.45μm滤膜过滤,得到溶液2;准确量取10μL用于HPLC进样分析。
根据本发明所述的检测方法,其中,所述步骤(2)具体为:取纯度99.0%的葡萄糖酸锌对照品,配制成50μg/mL的溶液,取10μL用于HPLC进样分析。
根据本发明所述的检测方法,其中,所述步骤(1)和(2)的HPLC检测条件为:C18色谱柱;检测波长为205nm;流速为0.1-1.0mL/min;柱温25°C。
优选地,所述步骤(1)和(2)的HPLC检测条件为:C18色谱柱;检测波长为205nm;流速为0.3-0.7mL/min;柱温25°C。
在一个具体的实施方式中,所述步骤(1)和(2)的HPLC检测条件为:C18色谱柱;检测波长为205nm;流速为0.5mL/min;柱温25°C。
根据本发明所述的检测方法,其中,所述步骤(1)和(2)的HPLC流动相为A和B两相。
根据本发明所述的检测方法,其中,A相为0.02mol/L的磷酸二氢钾缓冲液,该缓冲液用磷酸调节pH值至约2.50;B相为所述磷酸二氢钾缓冲液与乙腈按照体积比40:60组成的混合溶液。
根据本发明所述的检测方法,其中,A相和B相的梯度洗脱顺序为:0分钟A相:B相为10:90;15分钟A相:B相为100: 0;20分钟A相:B相为20:80。
根据本发明所述的检测方法,其中,以峰面积A对浓度c绘制标准曲线,得到葡萄糖酸锌对照品的标准曲线为:A=15896c-12196,r2=0.9942;浓度在10-90μg/mL范围内线性关系良好。
根据本发明所述的检测方法,其中,所述葡萄糖酸锌口服液按照以下方法制备:
(1) 将葡萄糖酸锌溶液真空冷冻干燥得到葡萄糖酸锌干粉;
(2) 将葡萄糖酸锌干粉制成葡萄糖酸锌微球;
(3) 取配方量的所述葡萄糖酸锌微球、辅剂和纯化水,制成葡萄糖酸锌口服液。
进一步地,所述步骤(1)的所述冷冻为在-30至-40°C下冷冻1-12h。
优选地,所述冷冻为在-30至-40°C下冷冻2-10h;更优选地,所述冷冻为在-30至-40°C下冷冻3-8h;以及,最优选地,所述冷冻为在-30至-40°C下冷冻4-6h。
在一个具体的实施方式中,所述冷冻为在-30下冷冻5h。
进一步地,所述步骤(1)的所述干燥为二次干燥过程,包括在-30至-40°C下的一次干燥步骤以及20至30°C下的二次干燥步骤。
进一步地,所述一次干燥步骤的时间为4-48h,所述二次干燥的时间为1-36h。
优选地,所述一次干燥步骤的时间为6-36h,所述二次干燥的时间为2-24h;更优选地,所述一次干燥步骤的时间为8-24h,所述二次干燥的时间为4-18h;以及,最优选地,所述一次干燥步骤的时间为10-18h,所述二次干燥的时间为4-12h。
在一个具体的实施方式中,所述一次干燥步骤的时间为12h,所述二次干燥的时间为8h。
进一步地,所述真空条件为20Pa以下的真空度。有利地,所述真空条件为2-20Pa的真空度;更优选地,所述真空条件为5-20Pa的真空度;以及,最优选地,所述真空条件为10-20Pa的真空度。
在一个具体的实施方式中,所述真空条件为15Pa的真空度。
在一个更为具体的实施方式中,所述步骤(1)具体为:将10g葡萄糖酸锌溶于纯化水中,过滤,西林瓶分装,在-30°C下冷冻5h,打开真空泵,控制真空度为15Pa,在-30°C下一次干燥12h,在室温下二次干燥8h,得到葡萄糖酸锌干粉。
更进一步地,所述步骤(2)进一步包括以下步骤:
(a) 得到聚乳酸溶液;
(b) 得到葡萄糖酸锌干粉的悬浮液;
(c) 将所述悬浮液缓慢滴入所述聚乳酸溶液中,乳化后得到乳化液;
(d) 将乳化液加入液体石蜡中,挥发溶剂后形成固化微球;过滤洗涤干燥后得到葡萄糖酸锌微球。
进一步地,所述步骤(a)为:将分子量为30000-60000的聚乳酸溶解于有机溶剂中,得到聚乳酸溶液。
优选地,所述聚乳酸的分子量为35000-60000;更优选地,所述聚乳酸的分子量为40000-60000;以及,最优选地,所述聚乳酸的分子量为45000-60000。
在一个具体的实施方式中,所述聚乳酸的分子量为45000。
进一步地,所述有机溶剂选自丙酮,或者丙酮与无水乙醇的混合溶剂。
在一个具体的实施方式中,所述混合溶剂为3:1丙酮和无水乙醇混合溶剂。
在另一个具体的实施方式中,所述混合溶剂为4:1丙酮和无水乙醇混合溶剂。
进一步地,所述聚乳酸与有机溶剂的重量体积比为(0.8-1.2)g:10mL。
进一步地,所述步骤(b)为:将葡萄糖酸锌干粉分散于大豆油形成悬浮液。
有利地,葡萄糖酸锌干粉与大豆油的重量比为1:3至3:5。
在一个具体的实施方式中,葡萄糖酸锌干粉与大豆油的重量比为2:5。
进一步地,所述步骤(c)的乳化时间为10-60s。
优选地,所述乳化时间为15-50s;更优选地,所述乳化时间为20-45s;以及,最优选地,所述乳化时间为25-40s。
进一步地,所述乳化时间为30s。
进一步地,所述步骤(d)的所述液体石蜡含有0.5-1.5wt%的司盘-80。
优选地,所述液体石蜡含有0.6-1.4wt%的司盘-80;更优选地,所述液体石蜡含有0.7-1.3wt%的司盘-80;以及,最优选地,所述液体石蜡含有0.8-1.2wt%的司盘-80。
在一个具体的实施方式中,所述液体石蜡含有1.0wt%的司盘-80。
进一步地,所述步骤(d)的挥发溶剂在30至40°C的温度下进行。
优选地,所述步骤(d)的挥发溶剂在31至39°C的温度下进行;更优选地,所述步骤(d)的挥发溶剂在32至38°C的温度下进行;以及,最优选地,所述步骤(d)的挥发溶剂在33至37°C的温度下进行。
在一个具体的实施方式中,所述步骤(d)的挥发溶剂在35°C的温度下进行。
进一步地,所述步骤(d)的所述洗涤步骤为使用正己烷洗涤。
进一步地,所述葡萄糖酸锌微球的平均粒径D50为108.7至135.0μm;微球表面光滑。
在一个具体的实施方式中,所述葡萄糖酸锌微球的平均粒径D50为114.2μm;微球表面光滑。
进一步地,所述葡萄糖酸锌微球的包封率为68.9-76.1%,载药量率为19.4-21.8%。
在一个具体的实施方式中,所述葡萄糖酸锌微球的包封率为76.1%,载药率为21.8%。
进一步地,所述步骤(3)的辅剂为:蔗糖、乳酸和香精。
进一步地,所述步骤(3)的配方量为:每100mL的纯化水中,葡萄糖酸锌微球折算为葡萄糖酸锌的重量为0.3-0.4g;蔗糖为8-10g;乳酸为0.3-0.4g;香精0.05-0.1g。
在一个具体的实施方式中,所述葡萄糖酸锌的重量为0.3g、蔗糖8g、乳酸0.4g和玫瑰香精0.1g。
进一步地,将配方量的所述葡萄糖酸锌微球和辅剂混合均匀后,加纯化水至100mL;然后滴加少量碱液调节pH为4.0-5.0。
在一个具体的实施方式中,所述碱液选自稀氢氧化钠溶液。
最后,搅拌均匀,灭菌,灌封,得到葡萄糖酸锌口服液。
与现有技术相比,本发明具有下列有益技术效果:
i) 本发明的检测方法适用于非溶解态的葡萄糖酸锌含量测定;
ii) 本发明的检测方法精密度高,重现性好,稳定性好,能够准确测定葡萄糖酸锌含量。
具体实施方式
下面结合具体实施方式,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
通过下述实施例将有助于理解本发明,但不能限制本发明的范围。
实施例1:
将10g葡萄糖酸锌溶于纯化水中,过滤,西林瓶分装,在-30°C下冷冻5h,打开真空泵,控制真空度为15Pa左右,在-30°C下一次干燥12h,在室温下二次干燥8h,得到葡萄糖酸锌干粉。
取5g分子量Mn为45000的聚乳酸溶解于50mL3:1丙酮和无水乙醇混合溶剂中,得到聚乳酸溶液;然后,将2g葡萄糖酸锌干粉分散于6g大豆油中形成悬浮液;将悬浮液缓慢滴入聚乳酸溶液中,滴加完毕后乳化30s,得到乳化液;将乳化液缓慢滴入含有1.0wt%司盘-80的100mL液体石蜡中,不断搅拌,然后升温至35°C,使丙酮和无水乙醇挥发,形成固化微球。然后离心过滤,用正己烷洗涤,干燥后得到葡萄糖酸锌微球。这些微球的平均粒径D50=114.2μm。微球包封率为76.1%,载药率为21.8%。
然后,取葡萄糖酸锌微球1.38g(相当于葡萄糖酸锌0.3g)、蔗糖8g、乳酸0.4g和玫瑰香精0.1g,然后加纯化水补足100mL,最后滴加少量稀氢氧化钠溶液调节pH为4.5,搅拌均匀,灭菌,灌封,得到实施例1的葡萄糖酸锌口服液。
准确量取5mL葡萄糖酸锌口服液,加入10mL丙酮,充分搅拌后得到溶液1;然后加入2mL的5wt%的硝酸溶液至总体积为250mL,静置30min;然后使用0.45μm滤膜过滤,得到溶液2;准确量取10μL用于HPLC进样分析。
另一方面,取纯度99.0%的葡萄糖酸锌对照品,配制成50μg/mL的溶液,取10μL用于HPLC进样分析。
HPLC检测条件为:C18色谱柱;检测波长为205nm;流速为0.5mL/min;柱温25°C。HPLC流动相为A和B两相。A相为0.02mol/L的磷酸二氢钾缓冲液,该缓冲液用磷酸调节pH值至约2.50;B相为所述磷酸二氢钾缓冲液与乙腈按照体积比40:60组成的混合溶液。A相和B相的梯度洗脱顺序为:0分钟A相:B相为10:90;15分钟A相:B相为100: 0;20分钟A相:B相为20:80。
以峰面积A对浓度c绘制标准曲线,得到葡萄糖酸锌对照品的标准曲线为:A=15896c-12196,r2=0.9942。结果表明,浓度在10-90μg/mL范围内线性关系良好。
平行测定三次,葡萄糖酸锌口服液中所含葡萄糖酸锌的含量平均值为2.86mg/L,RSD=1.04%。
此外,本发明的检测方法重现性好,稳定性好,能够准确测定葡萄糖酸锌含量。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种葡萄糖酸锌口服液的检测方法,所述方法包括以下步骤:
(1) 葡萄糖酸锌口服液加入丙酮和硝酸溶液至总体积为250mL;过滤后准确量取10μL用于HPLC进样分析;
(2) 取葡萄糖酸锌对照品溶液10μL用于HPLC进样分析;
(3) 按照外标法计算葡萄糖酸锌口服液中葡萄糖酸锌的有效含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其中,准确量取1-10mL葡萄糖酸锌口服液,加入10-30mL丙酮,充分搅拌后得到溶液1;然后加入1-10mL的5wt%的硝酸溶液至总体积为250mL,静置10-60min;然后使用0.45μm滤膜过滤,得到溶液2;准确量取10μL用于HPLC进样分析。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其中,准确量取5mL葡萄糖酸锌口服液,加入10mL丙酮,充分搅拌后得到溶液1;然后加入2mL的5wt%的硝酸溶液至总体积为250mL,静置30min;然后使用0.45μm滤膜过滤,得到溶液2;准确量取10μL用于HPLC进样分析。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其中,所述步骤(2)具体为:取纯度99.0%的葡萄糖酸锌对照品,配制成50μg/mL的溶液,取10μL用于HPLC进样分析。
5.根据权利要求1所述的检测方法,其中,所述步骤(1)和(2)的HPLC检测条件为:C18色谱柱;检测波长为205nm;流速为0.1-1.0mL/min;柱温25°C。
6.根据权利要求5所述的检测方法,其中,所述步骤(1)和(2)的HPLC流动相为A和B两相。
7.根据权利要求6所述的检测方法,其中,A相为0.02mol/L的磷酸二氢钾缓冲液,该缓冲液用磷酸调节pH值至约2.50;B相为所述磷酸二氢钾缓冲液与乙腈按照体积比40:60组成的混合溶液。
8.根据权利要求7所述的检测方法,其中,A相和B相的梯度洗脱顺序为:0分钟A相:B相为10:90;15分钟A相:B相为100: 0;20分钟A相:B相为20:80。
9.根据权利要求8所述的检测方法,其中,以峰面积A对浓度c绘制标准曲线,得到葡萄糖酸锌对照品的标准曲线为:A=15896c-12196,r2=0.9942;浓度在10-90μg/mL范围内线性关系良好。
10.根据权利要求1所述的检测方法,其中,所述葡萄糖酸锌口服液按照以下方法制备:
(1) 将葡萄糖酸锌溶液真空冷冻干燥得到葡萄糖酸锌干粉;
(2) 将葡萄糖酸锌干粉制成葡萄糖酸锌微球;
(3) 取配方量的所述葡萄糖酸锌微球、辅剂和纯化水,制成葡萄糖酸锌口服液。
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Effective date of registration: 20220614 Address after: 310000 room 1404, building B, No. 3, Weiye Road, Puyan street, Binjiang District, Hangzhou City, Zhejiang Province Applicant after: Zhejiang Changdian Pharmaceutical Technology Development Co.,Ltd. Address before: 310000 701, room 2, Tong CE square, 3688 Jiangnan Road, Binjiang District, Hangzhou, Zhejiang. Applicant before: ZHEJIANG CHANGDIAN PHARMACEUTICAL CO.,LTD. |
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