CN110790824A - 具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物及其制备方法和应用，小豆肽组合物包括：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的多肽，小豆肽组合物的相对分子质量为16032；本发明得到的小豆肽组合物与挤压小豆蛋白相比，达到小豆蛋白的同等α糖苷酶抑制率的用量仅为挤压蛋白的十分之一，具有优异的降血糖功能，而且该组合物的结构清晰，分子量大小明确，对进一步研究红小豆的降糖原理起到进一步推动作用。

Description

具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及蛋白质有效成分的确定制备领域。更具体地说，本发明涉及一种具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物及其制备方法和应用。
背景技术
红小豆具有降血糖的功效；植物学家通过对红小豆的降糖原理进行分析研究，发现红小豆是通过对糖苷酶进行抑制，使得血糖得到下降的，为了提高降血糖的效果，前人对红小豆采用了多种提取手段，以期望能找到主要起到降血糖作用的有效成分；
CN103565904A公开了一种小豆在制备降血糖药物或降血糖食品中的应用，充分说明了小豆的降血糖效果；
CN103743869B公开了一种提高红小豆降血糖效果的物质的确定方法，其主要是确定了红小豆中起到降糖作用的重要的关键性生物活性物质，即挤压小豆蛋白和多糖；
上述现有技术中对红小豆具体起到降糖活性的物质的研究还不够深入，并没有获得具有该降糖生物活性物质的具体结构或者序列表，特别是小豆蛋白。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物及其制备方法和应用，其得到的小豆肽组合物结构明了，提取步骤简单，条件宽松，得到的小豆肽相比挤压小豆蛋白在等量使用条件下，具有等同甚至更好的降血糖效果。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种活具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物，或其药学上可接受的盐，所述小豆肽组合物包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的多肽，小豆肽组合物的相对分子质量为16032。
一种活具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的制备方法：
将挤压小豆蛋白粉进行进一步纯化得到，具体纯化步骤为：
S1、取挤压小豆蛋白粉，将挤压小豆蛋白粉溶于平衡液中，转速12000r离心15-25min，取上清液；
S2、将S1得到的上清液用脱盐柱除盐，具体顺序为：先用2倍柱体积的平衡液冲柱子至基线平衡，上样，用洗脱液洗脱；其中，洗脱液的盐梯度为0-1M NaCl，至基线完全平衡为止，上样进行洗脱，洗脱流速均为4mL/min，采用波长280nm的紫外波进行监测，取含量最大的峰的洗脱液透析合并，将合并后的洗脱液冻干，得到除盐后的混合物；；
S3、利用HitrapSP-FF预装柱，设置流速为1mL/min，S2得到的除盐后的混合物为原始样品，上样；具体过程为：预装柱先经平衡液洗脱4CV，上样后再经过平衡液平衡5CV,最后洗脱液洗脱，梯度为0-1M NaCl，洗脱体积为2CV，采用280nm紫外波长在线检测洗脱峰，合并主峰，经过流水透析3天；在环境为4℃的条件下，放置12h，再冻干备用，得到纯化后的样品；
纯化后的样品分为流穿部分和收集部分，流穿部分是电导未出峰之前280nm蛋白收集峰，收集部分是电导出峰后收集得到的280nm蛋白收集峰；
S4、将S3中的收集部分经高效液相色谱检测，制备色谱进行分离，收集出峰时间第8.2分钟开始出峰的单峰样品。
优选的是，所述平衡液为20mM HAC-NaAC，pH4.5。
优选的是，所述洗脱液为20mM HAC-NaAC，1M NaCl，pH4.5。
优选的是，所述S2中的脱盐柱使用后采用0.5M NaOH的再生液清洗，清洗完后用20％乙醇保存柱子。
优选的是，所述挤压小豆蛋白粉的制备方法为：
挤压小豆粉加去离子水30℃恒温水浴浸泡过夜，用1M氢氧化钠调pH＝9.0，室温下搅拌30min，3000r/min离心10min，收集上清液，沉渣加5倍去离子水再调pH＝9.0，搅拌离心，合并两次离心所得上清液，用1N HCl调上清液pH＝4.5，离心，收集沉淀用蒸馏水洗涤沉淀至pH＝7.0，真空冷冻干燥以保证蛋白活性，冻干得到挤压小豆蛋白粉。
优选的是，所述挤压小豆粉的具体制备方法为:
取红小豆，粉碎、过60目筛，得小豆粉；在小豆粉中添加水，搅拌均匀；取搅拌后的小豆粉，进行挤压膨化，初次挤压膨化的温度范围为140-160℃、二次挤压膨化温度范围为120-140℃，将二次挤压膨化后的小豆粉粉碎、过筛得到。
具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的应用，将得到的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物制备成药学上可接受用于降血糖的赋形剂。
本发明至少包括以下有益效果：
第一、通过对挤压小豆蛋白进行进一步处理，得到了挤压小豆蛋白具有糖苷酶抑制性的主要的氨基酸序列组，并确定了提取条件，进一步提高了红小豆降血糖的利用率；
第二、通过检测小豆肽组合物和挤压小豆蛋白的α-糖苷酶抑制率，可以得出提取到的小豆肽具有挤压小豆蛋白相当甚至更优的降血糖活性。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
<实施例1>
一种具有降血糖功能的小豆肽的制备方法：
步骤一、挤压小豆粉的制备：
取红小豆，粉碎、过60目筛，得小豆粉；在小豆粉中添加水，搅拌均匀；取搅拌后的小豆粉，进行挤压膨化，初次挤压膨化的温度范围为140-160℃、二次挤压膨化温度范围为120-140℃，将二次挤压膨化后的小豆粉粉碎、过筛得到。
步骤二、挤压小豆蛋白粉的提取：
将挤压小豆粉加去离子水中，30℃恒温水浴浸泡过夜，用1M氢氧化钠溶液调节pH值，使pH值为9.0，室温下搅拌30min，3000r/min离心10min，收集上清液，沉渣加5倍去离子水再调pH＝9.0，搅拌离心，合并两次离心所得上清液，用1N HCl调上清液pH＝4.5，离心，收集沉淀用蒸馏水洗涤沉淀至pH＝7.0，真空冷冻干燥以保证蛋白活性，冻干得到挤压小豆蛋白粉。
步骤三、小豆肽的提取：
S1、取挤压小豆蛋白粉，将挤压小豆蛋白粉溶于平衡液中，转速12000r离心20min，取上清液；
S2、将上清液用脱盐柱除盐，具体顺序为：先用2倍柱体积的平衡液冲柱子至基线平衡，上样，用洗脱液洗脱，盐梯度为0-1M NaCl至基线完全平衡为止，上样进行洗脱，洗脱的流速均为4mL/min，以10mL/管接收洗脱液，采用波长280nm的紫外波进行监测，取含量最大的峰的洗脱液透析合并，将合并后的洗脱液冻干；
S3、利用HitrapSP-FF预装柱，设置流速为1mL/min，S2得到的除盐后的混合物为原始样品，上样；具体过程为：预装柱先经平衡液洗脱4CV，上样后再经过平衡液平衡5CV,最后洗脱液洗脱，梯度为0-1M NaCl，洗脱体积为2CV，每25mL/tube收集洗脱液，采用280nm紫外波长在线检测洗脱峰，合并主峰，经过流水透析3天；在环境为4℃的条件下，放置12h，再冻干备用，得到纯化后的样品；
纯化后的样品分为流穿部分和收集部分，流穿部分是电导未出峰之前280nm蛋白收集峰，收集部分是电导出峰后收集得到的280nm蛋白收集峰；
S4、将S3中的收集部分经高效液相色谱检测，采用制备色谱进行分离，收集出峰时间第8.2分钟开始出峰的单峰样品。
其中，经过SDS-PAGE实验测定多肽的分子量，测定条件为：浓缩胶浓度：5％，分离胶浓度：12％水溶解复溶蛋白上样体积：20uL，电泳条件：80v 25min；170v 1h。
经过检测小豆肽组合物的相对分子质量为16032。
<实施例2>
一种具有降血糖功能的小豆肽的制备方法：
步骤一、挤压小豆粉的制备：
取红小豆，粉碎、过60目筛，得小豆粉；在小豆粉中添加水，搅拌均匀；取搅拌后的小豆粉，进行挤压膨化，初次挤压膨化的温度范围为140-160℃、二次挤压膨化温度范围为120-140℃，将二次挤压膨化后的小豆粉粉碎、过筛得到。
步骤二、挤压小豆蛋白粉的提取：
将挤压小豆粉加去离子水中，30℃恒温水浴浸泡过夜，用1M氢氧化钠溶液调节pH值，使pH值为8.0，室温下搅拌30min，3000r/min离心5min，收集上清液，沉渣加5倍去离子水再调pH＝8.0，搅拌离心，合并两次离心所得上清液，用1N HCl调上清液pH＝4，离心，收集沉淀用蒸馏水洗涤沉淀至pH＝7.0，真空冷冻干燥以保证蛋白活性，冻干得到挤压小豆蛋白粉。
步骤三、小豆肽的提取：
S1、取挤压小豆蛋白粉，将挤压小豆蛋白粉溶于平衡液中，转速12000r离心15min，取上清液；
S2、将上清液用脱盐柱除盐，具体顺序为：先用2倍柱体积的平衡液冲柱子至基线平衡，上样，用洗脱液洗脱，盐梯度为0-1M NaCl至基线完全平衡为止，上样进行洗脱，洗脱的流速均为4mL/min，以10mL/管接收洗脱液，采用波长280nm的紫外波进行监测，取含量最大的峰的洗脱液透析合并，将合并后的洗脱液冻干；
S3、利用HitrapSP-FF预装柱，设置流速为1mL/min，S2得到的除盐后的混合物为原始样品，上样；具体过程为：预装柱先经平衡液洗脱4CV，上样后再经过平衡液平衡5CV,最后洗脱液洗脱，梯度为0-1M NaCl，洗脱体积为2CV，每25mL/tube收集洗脱液，采用280nm紫外波长在线检测洗脱峰，合并主峰，经过流水透析3天；在环境为4℃的条件下，放置12h，再冻干备用，得到纯化后的样品；
纯化后的样品分为流穿部分和收集部分，流穿部分是电导未出峰之前280nm蛋白收集峰，收集部分是电导出峰后收集得到的280nm蛋白收集峰；
S4、将S3中的收集部分经高效液相色谱检测，采用制备色谱进行分离，收集出峰时间第8.2分钟开始出峰的单峰样品。
其中，经过SDS-PAGE实验测定多肽的分子量，测定条件为：浓缩胶浓度：5％，分离胶浓度：12％；水溶解复溶蛋白上样体积：20uL，电泳条件：80v 25min；170v 1h。
经过检测小豆肽组合物的相对分子质量为16032。
<实施例3>
一种具有降血糖功能的小豆肽的制备方法：
步骤一、挤压小豆粉的制备：
取红小豆，粉碎、过60目筛，得小豆粉；在小豆粉中添加水，搅拌均匀；取搅拌后的小豆粉，进行挤压膨化，初次挤压膨化的温度范围为140-160℃、二次挤压膨化温度范围为120-140℃，将二次挤压膨化后的小豆粉粉碎、过筛得到。
步骤二、挤压小豆蛋白粉的提取：
将挤压小豆粉加去离子水中，30℃恒温水浴浸泡过夜，用1M氢氧化钠溶液调节pH值，使pH值为10.0，室温下搅拌30min，3000r/min离心15min，收集上清液，沉渣加5倍去离子水再调pH＝10.0，搅拌离心，合并两次离心所得上清液，用1N HCl调上清液pH＝5，离心，收集沉淀用蒸馏水洗涤沉淀至pH＝7.0，真空冷冻干燥以保证蛋白活性，冻干得到挤压小豆蛋白粉。
步骤三、小豆肽的提取：
S1、取挤压小豆蛋白粉，将挤压小豆蛋白粉溶于平衡液中，转速12000r离心25min，取上清液；
S2、将上清液用脱盐柱除盐，具体顺序为：先用2倍柱体积的平衡液冲柱子至基线平衡，上样，用洗脱液洗脱，盐梯度为0-1M NaCl至基线完全平衡为止，上样进行洗脱，洗脱的流速均为4mL/min，以10mL/管接收洗脱液，采用波长280nm的紫外波进行监测，取含量最大的峰的洗脱液透析合并，将合并后的洗脱液冻干；
S3、利用HitrapSP-FF预装柱，设置流速为1mL/min，S2得到的除盐后的混合物为原始样品，上样；具体过程为：预装柱先经平衡液洗脱4CV，上样后再经过平衡液平衡5CV,最后洗脱液洗脱，梯度为0-1M NaCl，洗脱体积为2CV，每25mL/tube收集洗脱液，采用280nm紫外波长在线检测洗脱峰，合并主峰，经过流水透析3天；在环境为4℃的条件下，放置过夜，再冻干备用，得到纯化后的样品；
纯化后的样品分为流穿部分和收集部分，流穿部分是电导未出峰之前280nm蛋白收集峰，收集部分是电导出峰后收集得到的280nm蛋白收集峰；
S4、将S3中的收集部分经高效液相色谱检测，采用制备色谱进行分离，收集出峰时间第8.2分钟开始出峰的单峰样品。
其中，经过SDS-PAGE实验测定多肽的分子量，测定条件为：浓缩胶浓度：5％，分离胶浓度：12％水溶解复溶蛋白上样体积：20uL，电泳条件：80v 25min；170v 1h。
经过检测小豆肽组合物的相对分子质量为16032。
<对比例1>
按下述方法得到的挤压小豆蛋白：
步骤一、挤压小豆粉的制备：
取红小豆，粉碎、过60目筛，得小豆粉；在小豆粉中添加水，搅拌均匀；取搅拌后的小豆粉，进行挤压膨化，初次挤压膨化的温度范围为140-160℃、二次挤压膨化温度范围为120-140℃，将二次挤压膨化后的小豆粉粉碎、过筛得到。
步骤二、挤压小豆蛋白粉的提取：
将挤压小豆粉加去离子水中，30℃恒温水浴浸泡过夜，用1M氢氧化钠溶液调节pH值，使pH值为10.0，室温下搅拌30min，3000r/min离心15min，收集上清液，沉渣加5倍去离子水再调pH＝10.0，搅拌离心，合并两次离心所得上清液，用1N HCl调上清液pH＝5，离心，收集沉淀用蒸馏水洗涤沉淀至pH＝7.0，真空冷冻干燥以保证蛋白活性，冻干得到挤压小豆蛋白粉。
<实验例>
一、体内降血糖活性评价测试
实验动物：遗传型糖尿病KK-Ay小鼠(雄性，体重35g±5g)购自维通丽华动物实验中心；饲养于北京大学医学部SPF级动物实验室，温度为25℃，相对湿度55％。
KK-Ay小鼠分组
KK-Ay小鼠适应性饲养，于第4天、第10天检测空腹血糖，取血糖值稳定且大于11.1mol/L的KK-Ay小鼠随机分为糖尿病模型组、小豆肽高剂量组(60mg/只)及小豆肽低剂量组(30mg/只)，小豆肽均为灌胃给药。其中，小豆肽采用的是实施例1所制备得到的小豆肽组合物。
体重与血糖监测
从实验开始起，每7天测定小鼠体重及空腹血糖值。
40天时空腹血糖值见表1：
表1
由表1的数据可知，小豆肽组合物相较于模型组而言，血糖值下降了24.4％～26.7％，具有明显的降血糖功效，高剂量组和低剂量组的差别为2.3％，随着剂量的翻倍增加，效果增加的不明显，说明较少的给药量即可达到优异的降血糖效果。
二、小豆肽组合物与挤压小豆蛋白的α-糖苷酶抑制率对比检测；
α-糖苷酶测定方法
在5mL离心管中用移液器准确吸取0.7mL麦芽糖溶液，再依次加入不同浓度的拜唐苹溶液(或是待测样品)0.2mL，糖苷酶溶液0.1mL，盖上盖子混匀后置于37℃的水浴锅中精确计时15min。反应完成后迅速在各管中加入反应终止液1.5mL。再次混匀后吸取混合液200uL与800uL的葡萄糖显色液混匀，再次置于37℃的水浴锅中精确反应30min，将反应液在490nm处测定各管的吸光度值，记录数据。
测试样品的空白液测定，主要是去除各反应液自身的颜色对测定的影响，将磷酸缓冲液替换麦芽糖溶液，其余试剂用量不变。
测试时整个体系的对照溶液是在加入麦芽糖的溶液中加入0.2mL磷酸缓冲液替换样品溶液，其余试剂和用量不变；测试时整个体系的空白溶液是在加入0.9mL磷酸缓冲液替换样品溶液和麦芽糖，其余试剂和用量不变。
检测结果见表2；
表2
组别 α-糖苷酶抑制(％)
挤压小豆蛋白(<u>100mg/ml</u>) 60.44±5.68
小豆肽组合物(<u>10mg/ml</u>) 67.32±2.74
由表2可知，当将小豆肽组合物与其原本的原料挤压小豆蛋白进行α-糖苷酶抑制率对照时，挤压小豆蛋白采用小豆肽组合物10倍的量进行检测，得到的小豆肽组合物的α-糖苷酶抑制率是原始的挤压小豆蛋白的1.11倍，换而言之，仅需要原始的挤压小豆蛋白的十分之一的量的小豆肽组合物，即可达到原始的挤压小豆蛋白的降血糖效果，该技术方案为小豆降血糖的研究提供了更进一步的结果，说明随着对挤压小豆蛋白进行进一步的处理，能够进一步提高小豆中活性物质对α-糖苷酶的抑制效果。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Figure BDA0002293390330000101
Figure BDA0002293390330000111
Figure BDA0002293390330000131
SEQUENCE LISTING
<110> 中国农业科学院作物科学研究所
<120> 具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物及其制备方法和应用
<130> 20191120
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> Vigna umbellata
<400> 1
Lys Asn Ile Leu Glu Ala Ser Phe Asp Ser Asp Ile Lys Glu Ile Asn
1 5 10 15
Arg Val
<210> 2
<211> 26
<212> PRT
<213> Vigna umbellata
<400> 2
Lys Asp Leu Asp Val Phe Ile Ser Ser Val Asp Met Lys Glu Gly Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Pro His Tyr Asn Ser Lys Ala
20 25
<210> 3
<211> 26
<212> PRT
<213> Vigna umbellata
<400> 3
Lys Asp Leu Asp Val Phe Ile Ser Ser Val Asp Met Lys Glu Gly Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Pro His Tyr Asn Ser Lys Ala
20 25
<210> 4
<211> 21
<212> PRT
<213> Vigna umbellata
<400> 4
Lys Ile Pro Ala Gly Thr Ile Phe Phe Leu Val Asn Pro Asp Asp Asn
1 5 10 15
Glu Asn Leu Arg Ile
20
<210> 5
<211> 34
<212> PRT
<213> Vigna umbellata
<400> 5
Arg Asn Phe Leu Ala Gly Glu Lys Asp Asn Val Ile Ser Glu Ile Pro
1 5 10 15
Thr Glu Val Leu Asp Leu Ala Phe Pro Ala Pro Gly Glu Lys Val Glu
20 25 30
Lys Leu
<210> 6
<211> 31
<212> PRT
<213> Vigna umbellata
<400> 6
Arg Asn Phe Leu Ala Gly Glu Lys Asp Asn Val Ile Ser Glu Ile Pro
1 5 10 15
Thr Glu Val Leu Asp Leu Ala Phe Pro Ala Pro Gly Glu Lys Val
20 25 30

Claims (8)

1.具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物，或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述小豆肽组合物包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6所示氨基酸序列的多肽。
2.如权利要求1所述的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的制备方法，其特征在于，将挤压小豆蛋白粉进行进一步纯化得到，具体纯化步骤为：
S1、取挤压小豆蛋白粉，将挤压小豆蛋白粉溶于平衡液中，转速12000r离心15-25min，取上清液；
S2、将S1得到的上清液用脱盐柱除盐，具体顺序为：先用2倍柱体积的平衡液冲柱子至基线平衡，上样，用洗脱液洗脱；其中，洗脱液的盐梯度为0-1M NaCl，至基线完全平衡为止，上样进行洗脱，洗脱流速均为4mL/min，采用波长280nm的紫外波进行监测，取含量最大的峰的洗脱液透析合并，将合并后的洗脱液冻干，得到除盐后的混合物；；
S3、利用HitrapSP-FF预装柱，设置流速为1mL/min，S2得到的除盐后的混合物为原始样品，上样；具体过程为：预装柱先经平衡液洗脱4CV，上样后再经过平衡液平衡5CV,最后洗脱液洗脱，梯度为0-1M NaCl，洗脱体积为2CV，采用280nm紫外波长在线检测洗脱峰，合并主峰，经过流水透析3天；在环境为4℃的条件下，放置12h，再冻干备用，得到纯化后的样品；
纯化后的样品分为流穿部分和收集部分，流穿部分是电导未出峰之前280nm蛋白收集峰，收集部分是电导出峰后收集得到的280nm蛋白收集峰；
S4、将S3中的收集部分经高效液相色谱检测，制备色谱进行分离，收集出峰时间第8.2分钟开始出峰的单峰样品。
3.如权利要求2所述的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的制备方法，其特征在于，所述平衡液为20mM HAC-NaAC，pH4.5。
4.如权利要求2所述的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的制备方法，其特征在于，所述洗脱液为20mM HAC-NaAC，1M NaCl，pH4.5。
5.如权利要求2所述的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的制备方法，其特征在于，所述S2中的脱盐柱使用后采用0.5M NaOH的再生液清洗，清洗完后用20％乙醇保存柱子。
6.如权利要求2所述的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的制备方法，其特征在于，所述挤压小豆蛋白粉的制备方法为：
挤压小豆粉加去离子水30℃恒温水浴浸泡过夜，用1M氢氧化钠调pH＝9.0，室温下搅拌30min，3000r/min离心10min，收集上清液，沉渣加5倍去离子水再调pH＝9.0，搅拌离心，合并两次离心所得上清液，用1N HCl调上清液pH＝4.5，离心，收集沉淀用蒸馏水洗涤沉淀至pH＝7.0，真空冷冻干燥以保证蛋白活性，冻干得到挤压小豆蛋白粉。
7.如权利要求6所述的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的制备方法，其特征在于，所述挤压小豆粉的具体制备方法为:
取红小豆，粉碎、过60目筛，得小豆粉；在小豆粉中添加水，搅拌均匀；取搅拌后的小豆粉，进行挤压膨化，初次挤压膨化的温度范围为140-160℃、二次挤压膨化温度范围为120-140℃，将二次挤压膨化后的小豆粉粉碎、过筛得到。
8.如权利要求1所述的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物的应用，其特征在于，将得到的具有糖苷酶抑制性的小豆肽组合物制备成药学上可接受用于降血糖的赋形剂。
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CN103743869A (zh) * 2014-01-08 2014-04-23 中国农业科学院作物科学研究所 一种提高红小豆降血糖效果的物质的确定方法

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