CN110790675A - 一种秋水仙碱化合物及其制备方法、制剂、应用与药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种秋水仙碱化合物及其制备方法、制剂、用途与药物组合物，所述的秋水仙碱化合物为无定形态，具有式Ⅰ所示结构，其X‑射线粉末衍射图如图2所示，其差示扫描量热分析曲线如图3所示，在约118.6℃处有放热峰，在约162.4℃处有吸热峰。本发明的秋水仙碱对痛风、关节炎、肿瘤和肝、肺纤维化具有良好的治疗效果。与现有产品和技术相比，本发明的秋水仙碱为无定形态，具有更好的抗热、抗湿性能，性质更加稳定，生物利用度高，能更好地满足临床用药的要求。本发明提供的制备方法工艺简单、条件温和，便于操作，质量稳定可控，适合于产业化大规模生产。

Description

一种秋水仙碱化合物及其制备方法、制剂、应用与药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种秋水仙碱化合物及其制备方法、制剂、应用与药物组合物。

背景技术

秋水仙碱(Colchicine)，是最早从百合科秋水仙的球茎和种子中提取的一种卓酚酮类生物碱，具有如下式Ⅰ所示化学结构：

除百合科秋水仙属植物中含有秋水仙碱外，百合科其他属植物，如安圭拉氏兰属Auguillaria、嘉兰属Gloriosa、益辟坚属Iphigenia和天南星属等植物中也含有秋水仙碱（Niel E, Scherrmann JM. Colchicine today [J]. Joint Bone Spine,2006, 73: 672-678）。 中国云南光菇子、丽江山慈菇、黄花菜中也含有秋水仙碱 （申利红,李雅.秋水仙碱的研究与应用进展[J]. 中国农学通报, 2009,25(21):185-187）。

秋水仙碱已作为治疗急性痛风性关节炎的一线用药被临床使用。此外，现代研究表明，秋水仙碱还具有其他广泛的药理作用，可用于肿瘤、心脑血管疾病、肝炎、肝纤维化、肺纤维化、家族地中海热、儿茶酚胺异常性周期热、慢性免疫性(特发性)血小板减少性紫癜、白塞综合征等疾病的治疗。

目前，秋水仙碱制备方面的文献报道主要集中在秋水仙碱的提取、分离、纯化及衍生物的合成研究方面，如：

中国专利CN20121008725公开了一种秋水仙碱的制备方法，采用超声波辅助双水相萃取秋水仙碱，通过大孔吸附树脂柱分离，洗脱、浓缩结晶后,干燥得到秋水仙碱；

中国专利CN200910264453公开了一种从新鲜百合中制备秋水仙碱的方法，以新鲜百合药材为原料，甲醇回流提取，经减压浓缩、酸碱纯化、氧化铝柱吸附、结晶得到秋水仙碱；

中国专利CN200910027244公开了一种秋水仙碱的制备方法，采用碱水浸泡、超临界萃取、大孔吸附树脂柱分离、丙酮重结晶，得到秋水仙碱；

此外，多篇文献也报道了秋水仙碱的提取、分离和纯化工作，如：姚红锐,尚靖,柳军.百合各株系中秋水仙碱提取方法优化及含量测定，中医药临床杂质, 2015,27(5):729-731.；刘倩芬,李昌高,邓丹雯.响应面法优化超声波辅助提取百合花秋水仙碱工艺. 食品工业科技, 2015, (10):284-289）；李新社,王志兴.溶剂提取和超临界流体萃取百合中的秋水仙碱，中南大学学报,2004, (02): 244-248；刘陈力为,刘雁,匡琼秀.超声波法提取黄花菜中秋水仙碱的研究，湖南城市学院学报, 2012, (01): 69-71；涂茂浰,王化远,陈庆党. 从川产“光菇子”中提取秋水仙碱，中药材科技, 1983, (02): 25-27；朱礼芳.黄花菜中秋水仙碱的提取及其抑菌性能研究.福建农林大学硕士论文，2013； Chuang-Chuang Li. [5+2]环加成:秋水仙碱的8步全合成（英文）. 中国化学会第30届学术年会会议论文，2016-07-01中国辽宁大连; 石继仙. 多取代杂环化合物的合成及生物活性研究. 天津大学博士论文，2005；何纯莲. 百合中秋水仙碱的分离应用研究. 湖南大学硕士论文，2003。

这些专利及文献报道，都涉及到了秋水仙碱的制备与结晶纯化，其产物经本申请人通过X-射线粉末衍射图进行分析，得到了基本上如图1所示的X-射线粉末衍射图谱，表明其具有一定的晶型结构。

由于固体药物的分子排列规律不同、分子构型或构象存在差异，一种药物可以形成多种固体物质形态，不同固体形态的理化性质如溶解度、溶出度、稳定性等往往不同，其生物有效性方面也存在差异。其中，药物的无定形态在改善药物的溶解度、稳定性和生物利用度方面具有明显的优势 （Yamamoto K，Nakano M，Arita T，et al． Dissolutionbehavior and bioavailability of phenytoin from a ground mixture withmicrocry-stalline cellulose． J Pharm Sci）。

与晶态物质相似，不同的制备方法或相同制备方法采用不同的工艺参数，也可使药物形成的无定形态存在不同的形式，即无定形多态(polyamorphism)，形成无定形多态的原因可能与化合物的构型、构象以及分子间作用力等相关(Lu Y, Du GH. PolymorphicDrugs［M］. Beijing:People's Medical Publishing House，2009:109-110) 。如Ohta 等采用两种进风温度喷雾干燥法制备头孢妥仑酯无定形物，结果表明由于表面局部有序的分子排列不同，造成了制得的两种无定形物具有不同的吸水和解吸能力（Ohta M，Buckton G．A study of the differences between two amor-phous spray-dried samples ofcefditoren pivoxil which exhibiteddifferent physical stabilities［J］． Int JPharm，2005，289）；王闪闪等采用旋蒸法、熔融法及冷冻干燥法制备得到了3种不同无定形态的盐酸西那卡塞， 它们在热力学行为、物理化学稳定性及晶体学上表现出明显差异（王闪闪,樊伟明,陈娟,等. 制备方法对无定形盐酸西那卡塞的影响［J］.中国药科大学学报，2016，47(3):317 -323）。

可见，对药物的固体形态进行研究和改进，可以有效改善药物的理化性质和药学性能（如溶解性、稳定性、生物利用度等），这对改善药物的加工、保存性能,提高药物疗效具有重要的积极意义。目前，关于秋水仙碱无定形态的研究少见报道。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种秋水仙碱化合物；第二目的在于提供所述的秋水仙碱化合物的制备方法；第三目的在于提供所述的秋水仙碱化合物的制剂；第四目的在于提供所述的秋水仙碱化合物的应用；第五目的在于提供一种药物组合物；第六目的在于提供所述的药物组合物的制剂；第七目的在于提供所述的药物组合物的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，所述的秋水仙碱化合物为无定形态，使用Cu-Kα射线测量，具有如图2所示的X-射线粉末衍射图，其化学结构如下面式Ⅰ所示：

本发明的第二目的是这样实现的，包括以下步骤：

A、将秋水仙碱加热溶解于溶剂中，过滤得到滤液a；

B、将滤液a降温冷却至-40℃~-30℃预冻3~5h，然后经升华干燥和解析干燥得到目标物秋水仙碱化合物。

本发明的第三目的是这样实现的，所述的秋水仙碱的制剂由所述的秋水仙碱化合物加入药学上可接受的辅料制备而成。所述的药学上可接受的辅料包括药学可接受的pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种。所述的制剂包括片剂、胶囊、软胶囊、颗粒、丸剂、滴丸、针剂、贴剂、膏剂、巴布剂以及缓释制剂或控释制剂等。

本发明的第四目的是这样实现的，所述的秋水仙碱化合物在制备预防和/或治疗痛风、关节炎、肿瘤、纤维化和心脑血管疾病药物中的应用。

本发明的第五目的是这样实现的，所述的药物组合物由所述的秋水仙碱化合物和别嘌醇组成。

本发明的第六目的是这样实现的，所述的药物组合物的制剂由所述的秋水仙碱化合物加入药学上可接受的辅料制备而成。所述的药学上可接受的辅料包括药学可接受的pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种。所述的制剂包括片剂、胶囊、软胶囊、颗粒、丸剂、滴丸、针剂、贴剂、膏剂、巴布剂以及缓释制剂或控释制剂等。

本发明的第七目的是这样实现的，所述的药物组合物在制备预防和/或治疗痛风、关节炎、肿瘤、纤维化和心脑血管疾病药物中的应用。

本发明的发明人在对秋水仙碱进行了大量的研究后，发现了一种溶解度高、稳定性好、生物利用度高的无定形秋水仙碱，这对提高秋水仙碱药物的产品质量，提高其临床疗效性和用药安全性具有重要意义。

与现有技术的秋水仙碱产品相比，本发明的无定形态秋水仙碱具有更高的溶解度，溶解速度更快（见实验例3）。这一性质，有利于药物的快速吸收和利用，有助于药物生物利用度的提高，从而加强药物的临床疗效。

与现有技术的秋水仙碱产品相比，本发明的无定形态秋水仙碱具有好的抗热、抗湿性能，稳定性更高（见实验例5）。这一性质，有助于提高药物的安全性，降低药物使用中不良反应或事件的发生率，并有利于药物的贮存和制剂加工。

本发明提供的所述无定形秋水仙碱化合物的制备方法，操作简单，工艺条件温和，产品收率和纯度高，适于工业化规模生产。

本发明所述无定形秋水仙碱化合物在制备预防或治疗痛风、关节炎、肿瘤、纤维化和心脑血管疾病的药物中的用途，包括本发明所述无定形秋水仙碱化合物在制备预防或治疗急性痛风性关节炎的药物中的用途，以及本发明所述无定形秋水仙碱化合物在制备预防或治疗非小细胞肺癌的药物中的用途。

本发明申请人通过Wistar 大鼠模型实验，对比研究了本发明无定形秋水仙碱化合物与现有技术秋水仙碱治疗急性痛风性关节炎的疗效，结果表明，本发明所述无定形秋水仙碱化合物对急性痛风性关节炎具有良好的治疗效果，其效果优于现有技术的秋水仙碱对照品（见实验例6）。

本发明的发明人通过人非小细胞肺癌细胞株 A549研究了本发明无定形秋水仙碱化合物的抗肿瘤作用，结果表明，本发明的无定形秋水仙碱化合物具有明显的抗肿瘤效果，其疗效优于现有技术的秋水仙碱对照品（见实验例7）。

综上所述，与现有产品和技术相比，本发明的无定形态秋水仙碱化合物具有如下优势和特点：

1、产品溶解度高，溶解速度更快。这有利于药物的吸收和利用，提高药物的生物利用度高，提高药物的临床疗效。

2、具有良好的抗热、抗湿性能，稳定性更高。这有利于药物的贮存和制剂加工，有助于提高药物的安全使用性能，降低药物的不良反应或事件的发生率。

3、临床疗效更好。本发明实验证明，本发明的无定形秋水仙碱化合物对急性痛风性关节炎、非小细胞肺癌的治疗效果，均优于现有技术的秋水仙碱对照品。

总之，本发明的无定形态秋水仙碱化合物具有溶解度高，溶解速度快，生物利用度好，稳定性强，临床疗效好的显著优点，能更好地满足临床应用要求。本发明提供的无定形秋水仙碱化合物的制备方法操作简单，工艺条件温和，产品收率和纯度高，适于工业化规模生产，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为秋水仙碱对照品的X-射线粉末衍射图，其中纵坐标表示用计数/秒(cps)表示的衍射强度，横坐标表示用度表示的衍射角2θ；

图2为本发明实施例1-10制得的无定形态秋水仙碱化合物的X-射线粉末衍射图，其中纵坐标 表示用计数/秒(cps)表示的衍射强度，横坐标表示用度表示的衍射角2θ；

图3为本发明实施例1-10制得的无定形态秋水仙碱化合物的差示扫描量热法(DSC)曲线图， 其中纵坐标为热流率，单位为卡/秒；横坐标为温度，单位为℃；

图4为秋水仙碱对照品在40 ℃，相对湿度75% 的条件下加速试验30 d后的X-射线粉末衍射图，其中纵坐标表示用计数/秒(cps)表示的衍射强度，横坐标表示用度表示的衍射角2θ。

具体实施方式

下面结实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的秋水仙碱为为无定形态，使用Cu-Kα射线测量，具有如图2所示的X-射线 粉末衍射图，其化学结构如下面式Ⅰ所示：

。

本发明所述的秋水仙碱，具有基本上如图3所示的差示扫描量热分析曲线。

所述秋水仙碱化合物的差式扫描量热分析曲线在118.6±2℃处有放热峰。

所述秋水仙碱化合物的差式扫描量热分析曲线在162.4±2℃处有吸热峰。

本发明所述的秋水仙碱化合物的制备方法，包括以下步骤：

A、将秋水仙碱加热溶解于溶剂中，过滤得到滤液a；

B、将滤液a降温冷却至-40℃~-30℃预冻3~5h，然后经升华干燥和解析干燥得到目标物秋水仙碱化合物。

A步骤中所述的秋水仙碱加热溶解的温度为60~80℃，加热时间为0.5~2h。

A步骤中秋水仙碱和溶剂的质量比为（0.01~50）:100。

所述的溶剂为水、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、丙酮、乙酸乙酯、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或几种。

B步骤中所述的升华干燥是控制温度-25℃~-20℃，压力10~20Pa条件下升华干燥3~5h。

B步骤中所述的解析干燥是控制温度30~50℃，压力1~10Pa条件下解析干燥4~6h。

本发明所述的秋水仙碱化合物的制剂为所述的秋水仙碱化合物加入药学上可接受的辅料制备而成。所述的药学上可接受的辅料包括药学可接受的pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种。所述的制剂包括片剂、胶囊、软胶囊、颗粒、丸剂、滴丸、针剂、贴剂、膏剂、巴布剂以及缓释制剂或控释制剂等。

本发明所述的秋水仙碱化合物的应用为所述的秋水仙碱化合物在制备预防和/或治疗痛风、关节炎、肿瘤、纤维化和心脑血管疾病药物中的应用。

本发明所述的秋水仙碱化合物的应用为所述的秋水仙碱化合物在制备预防和/或治疗急性痛风性关节炎药物中的应用。

本发明所述的秋水仙碱化合物的应用为所述的秋水仙碱化合物在制备预防和/或治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

本发明所述无定形秋水仙碱化合物在制备预防或治疗痛风、关节炎、肿瘤、纤维化和心脑血管疾病的药物中的用途，包括本发明所述无定形秋水仙碱化合物在制备预防或治疗急性痛风性关节炎的药物中的用途，以及本发明所述无定形秋水仙碱化合物在制备预防或治疗非小细胞肺癌的药物中的用途。

本发明申请人通过Wistar 大鼠模型实验，对比研究了本发明无定形秋水仙碱化合物与现有技术秋水仙碱治疗急性痛风性关节炎的疗效，结果表明，本发明所述无定形秋水仙碱化合物对急性痛风性关节炎具有良好的治疗效果，其效果优于现有技术的秋水仙碱对照品（见实验例6）。

本发明申请人通过人非小细胞肺癌细胞株 A549研究了本发明无定形秋水仙碱化合物的抗肿瘤作用，结果表明，本发明的无定形秋水仙碱化合物具有明显的抗肿瘤效果，其疗效优于现有技术的秋水仙碱对照品（见实验例7）。

本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物由本发明所述的无定形态秋水仙碱化合物与其它药物有效成分组成。

本发明还提供了一种药物制剂，所述药物组合物由本发明所述的无定形态秋水仙碱化合物与一种或多种药学上可接受辅料或助剂制成。所述的药物制剂为可为片剂、舌下片、崩解片、肠溶片、胶囊、软胶囊、定向胶囊、速溶胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸、口服液等口服制剂，也可以为注射液、冻干粉针剂、大输液、脂质体注射液、微球射液等注射制剂，也可为贴剂、膏剂、巴布剂、搽剂、微针等经皮或透皮给药制剂；可以是普通制剂，也可以是缓释制剂、控释制剂、定向制剂、靶向制剂、纳米制剂等新型或特殊制剂。

为了将本发明所述的无定形态秋水仙碱化合物制成片剂或舌下片、崩解片、肠溶片等特殊片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。 还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将本发明的无定形态秋水仙碱化合物制成胶囊或软胶囊、定向胶囊、速溶胶囊剂等特殊胶囊制剂，可以将本发明的无定形态秋水仙碱化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊、软胶囊或特殊胶囊中。也可将本发明的无定形态秋水仙碱化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒、微丸、微球、脂质体等，再置于硬胶囊、软胶囊或特殊胶囊中。

为将本发明的无定形态秋水仙碱化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇、聚乙二醇或它们的混合物作溶剂，并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调节剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是乙醇、异丙醇、丙二醇、聚乙二醇、泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化物等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的无定形态秋水仙碱化合物的药物组合物、药物制剂可用任何公知的给药方法给药。

本发明的无定形态秋水仙碱化合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明药物组合物的每天的合适剂量范围为0.0001~1000mg/Kg体重，优选为0.001~500mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。

本发明的无定形态秋水仙碱药物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的无定形态秋水仙碱药物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。

本发明所述的秋水仙碱化合物为有效成分的药物组合物由所述的秋水仙碱化合物和别嘌醇组成。

所述的秋水仙碱化合物和别嘌醇的质量配比为（10~95）：（5~90）。

本发明所述的秋水仙碱化合物的制剂为所述的药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸、注射液、冻干粉针剂、口服液贴剂、膏剂、巴布剂、缓释制剂或控释制剂。

本发所述的秋水仙碱化合物的应用为所述的药物组合物在制备预防和/或治疗痛风、关节炎、肿瘤、纤维化和心脑血管疾病药物中的应用。

本发明所述的秋水仙碱化合物的应用为所述的药物组合物在制备预防和/或治疗急性痛风性关节炎药物中的应用。

本发明所述的秋水仙碱化合物的应用为所述的药物组合物在制备预防和/或治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：

其中，如无特殊说明，实施例中所涉及的秋水仙碱为中国食品药品检定研究院提供，纯度为99.16%。

本发明中采用的X- 射线粉末衍射检测仪器设备为RIGAKU TTR Ⅲ型X-射线粉末衍射仪，测定条件与方法为：Cu/K-alpha1（靶），40KV-200mA（工作电压与电流），I（max）=2244，2θ=5-50度（扫描范围），0.005/0.06sec.(扫描速度)，=1.54056。

本发明中，采用的差示扫描量热分析的仪器为DSC 204(德国) 差示扫描量热仪，测定条件与方法为：仪器：样品重量为5.65mg；升温速率：2℃/min；最高温250℃；氮气流速：20mL/ min。

实施例1 无定形态秋水仙碱化合物1#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于溶解于100 g水中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例2 无定形态秋水仙碱化合物2#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于溶解于10 g甲醇中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例3 无定形态秋水仙碱化合物3#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于溶解于20 g乙醇中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例4 无定形态秋水仙碱化合物4#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于30 g丙酮中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例5 无定形态秋水仙碱化合物5#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于由50 g水、50乙醇组成的混合溶剂g中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例6 无定形态秋水仙碱化合物6#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于由50 g水、25 g乙醇组成的混合溶剂g中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例7 无定形态秋水仙碱化合物7#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于由50 g水、10 g乙醇组成的混合溶剂g中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例8 无定形态秋水仙碱化合物8#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于由50 g水、5 g乙醇组成的混合溶剂g中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例9 无定形态秋水仙碱化合物9#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于由50 g水、3 g甲醇组成的混合溶剂g中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例10 无定形态秋水仙碱化合物10#样品的制备

称取秋水仙碱0.5 g，置于由50 g水、2 g正丙醇组成的混合溶剂g中，于70-80℃加热溶解1h，过滤，滤液置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，最后控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

实施例11 药物组合物

药物组方（质量百分比）：

无定形态秋水仙碱化合物 1#样品 10%

别嘌醇 90%

共计 100%

制备方法：按上述组方配比，称取本发明实施例1的无定形态秋水仙碱化合物1#样品与别嘌醇混合均匀，即得。

实施例12 药物组合物

药物组方（质量百分比）：

无定形态秋水仙碱化合物 2#样品 20%

别嘌醇 80%

共计 100%

制备方法：按上述组方配比，称取本发明实施例2的无定形态秋水仙碱化合物2#样品与别嘌醇混合均匀，即得。

实施例13 药物组合物

药物组方（质量百分比）：

无定形态秋水仙碱化合物 3#样品 50%

别嘌醇 50%

共计 100%

制备方法：按上述组方配比，称取本发明实施例3的无定形态秋水仙碱化合物3#样品与别嘌醇混合均匀，即得。

实施例14 药物组合物

药物组方（质量百分比）：

无定形态秋水仙碱化合物 4#样品 70%

别嘌醇 30%

共计 100%

制备方法：按上述组方配比，称取本发明实施例4的无定形态秋水仙碱化合物4#样品与别嘌醇混合均匀，即得。

实施例15 药物组合物

药物组方（质量百分比）：

无定形态秋水仙碱化合物 5#样品 95%

别嘌醇 5%

共计 100%

制备方法：按上述组方配比，称取本发明实施例5的无定形态秋水仙碱化合物5#样品与别嘌醇混合均匀，即得。

实施例16 片剂

药物处方(质量百分比)：

无定形态秋水仙碱化合物 1#样品 15.0%

淀粉 62.1.0%

乳糖 0.4%

微晶纤维素 3.2%

羧甲基淀粉钠 9.3%

共计 100%

制备方法：按上述处方配比，将本发明实施例1的无定形态秋水仙碱化合物1#样品与淀粉、乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合后于压片机上压片，即得。

实施例17 胶囊

药物处方(质量百分比)：

无定形态秋水仙碱化合物 2#样品 10.0%

淀粉 69.0%

微晶纤维素 12.5%

硬脂酸镁 3.2%

羧甲基淀粉钠 5.3 %

共计 100%

制备方法：按上述处方配比，将本发明实施例2的无定形态秋水仙碱化合物2#样品与淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁混合后填充入硬明胶胶囊中，即得。

实施例18 口服液体

药物处方(质量百分比)：

无定形态秋水仙碱化合物 3#样品 5.2%

蔗糖 12.3%

乙醇 0.5%

蒸馏水 82.0 %

共计 100%

制备方法：按上述处方配比，将本发明实施例3的无定形态秋水仙碱化合物3#样品与蔗糖、乙醇、蒸馏水混合溶解后，过滤，按10mL/支灌封于口服液中，100℃湿热灭菌30min，即得。

实施例19 注射液

药物处方：

无定形态秋水仙碱化合物 4#样品 55g

氯化钠 90g

注射用水 适量

制成 1000ml

制备方法：按上述处方，将本发明实施例4的无定形态秋水仙碱化合物4#样品，加氯化钠及适量注射用水，搅拌均匀，加入0.1% 针用活性碳，吸附，过滤脱碳，补加注射用水至规定量，微孔过滤膜过滤，按5mL/支灌封，100℃湿热灭菌30min，经灯检合格，即得。

实施例20 冻干粉针剂

药物处方：

无定形态秋水仙碱化合物 5#样品 100g

氯化钠 90g

甘露醇 75g

注射用水 适量

制成 1000ml

制备方法：按上述处方，将本发明实施例5的无定形态秋水仙碱化合物5#样品加氯化钠、甘露醇及适量注射用水，搅拌均匀，加入0.1% 针用活性碳，吸附，过滤脱碳，补加注射用水至规定量，微孔过滤膜过滤，按2mL/支分装，冷冻干燥，封装，经检验合格，即得。

实施例21 软胶囊

药物处方：

无定形态秋水仙碱化合物 6#样品 100g

水 250 g

乙二醇 51 g

共制成 1000粒软胶囊

制备方法：称取本发明实施例6的定形态秋水仙碱化合物6#样品100g，加入水250g、乙二醇51g，搅拌均匀，置于压丸机中，与胶囊皮压丸，干燥，即得每粒含有效成分100mg的软胶囊。

实验例1 X射线粉末衍射检测

1.实验样品：

无定形态秋水仙碱化合物1-10#样品：按实施例1-10制备；

秋水仙碱对照品：中国食品药品检定研究院提供，纯度为99.16%。

2. 检测仪器与测定方法：

检测仪器：RIGAKU TTR Ⅲ型X-射线粉末衍射仪。

测定条件与方法：Cu/K-alpha1（靶），40KV-200mA（工作电压与电流），I（max）=2244，2θ=5-50度（扫描范围），0.005/0.06sec.(扫描速度)，=1.54056。

3. 检测结果：

对秋水仙碱对照品进行X射线衍射检测，其图谱见图1所示。

对本发明实施例1制备的无定形态秋水仙碱化合物1#样品进行X射线衍射检测，其图谱见图2所示。

对本发明实施例2-10制备的无定形态秋水仙碱化合物2-10#样品进行X射线衍射检测，其图谱见与图2相似。

秋水仙碱对照品的 PXＲD 图谱在2θ = 6. 88°，10. 36°，13. 80°，18. 94°，20.74°，21. 22°，24. 22°，25. 40°处具有特征衍射峰，表明其具有高度的结晶形态，而本发明实施例1-10制备的无定形态秋水仙碱化合物1-10#样品的 PXＲD 图谱与之相比，上述特征衍射峰消失，仅能观察到衍射环，衍射图谱呈弥散状，表明本发明实施例1-10制备得到的秋水仙碱为无定形态。

实验例2 差示扫描量热检测（DSC）

对本发明实施例1制备的无定形态秋水仙碱化合物1#样品进行DSC检测，其DSC曲线如图3所示，在约118.6℃处有放热峰，在约162.4℃处有吸热峰。

对本发明实施例2-10制备的无定形态秋水仙碱化合物2-10#样品进行DSC检测，结果与图3相似。

实验例3 溶解度和溶解速度检测

1.实验样品：

1-5#样品：无定形态秋水仙碱化合物，分别按实施例1-5制备；

对照品：秋水仙碱，中国食品药品检定研究院提供，纯度为99.16%。

2.测定方法：

按 2015年版《中国药典》要求，配制 pH为 4.0，6.8的缓冲水溶液作为溶剂。分别取溶剂 50 mL，置 100 mL具塞锥形瓶中，加入过量的固体样品，密封，置25 ℃ 控温磁力搅拌器上搅拌，转速 200 r/min，每隔10分钟取样一次，每次取样1 mL，用HPLC法测量含量，计算平衡溶解度和达到平衡的大致溶解时间。

3. 检测结果：

表1、药物溶解度和溶解速度对比检测结果

由表1结果可见：在PH4.0水溶液中，本发明无定形态秋水仙碱的溶解度在19.14-19.52mg/mL之间（19.33±0.19mg/mL），达到饱和时的溶解时间大约40分钟，而此条件下秋水仙碱对照品的溶解度为12.16mg/mL，溶解时间大约90分钟；在PH6.8水溶液中，本发明无定形态秋水仙碱的溶解度在38.20-38.67mg/mL左右（38.435±0.235mg/mL），达到饱和时的溶解时间大约30分钟，而此条件下秋水仙碱对照品的溶解度为22.78mg/mL，溶解时间大约70分钟。上述实验表明，与现有技术的秋水仙碱产品相比，本发明的无定形态秋水仙碱具有更高的溶解度，溶解速度更快。这一性质，有利于药物的快速吸收和利用，有助于药物生物利用度的提高，这对提高药物的临床疗效具有重要意义。

实验例4 纯度检测实验

1.实验样品：

1-5#样品：无定形态秋水仙碱化合物，分别按实施例1-5制备；

对照品：秋水仙碱，中国食品药品检定研究院提供。

2.检测仪器与方法：

仪器：Agilent1260高效液相色谱仪。

色谱柱：Cosmosil Cholester 250×4.6mm。

甲醇为色谱级、HPLC用水为重蒸蒸馏水。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水40∶60为流动相；检测波长为254 nm。理论板数 按秋水仙碱峰计算应不低于5000。

测定：取样品约25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。结果见表2。

3. 检测结果

表2 纯度检测结果

由表2结果可见，本发明实施例1-5制备的无定形态秋水仙碱纯度在98.85-99.95％之间，具有很高的纯度。

对本发明实施例6-10制备的无定形态秋水仙碱6-10#样品进行同样检测，结果与此相似。

实验例5 高温高湿加速试验条件下的化学稳定性和晶体学稳定性对比研究

1.实验样品：

1-5#样品：无定形态秋水仙碱化合物，分别按实施例1-5制备；

对照品：秋水仙碱，中国食品药品检定研究院提供。

2.实验方法：

将实验样品分别过 100 目筛，取粉末置40 ℃ 、75% ＲH 条件下加速试验30 d，测定样品在 30 d 内的药物含量变化，考察其化学稳定性，并将第 30 d 的样品进行 PXＲD 分析，考察样品的晶体学稳定性能。

3.实验结果

3.1化学稳定性

表3 高温高湿下的化学稳定性

样品	温度	相对湿度	0天含量	30后天含量	降解率（%）
						1#样品	40 ℃	75%	99.95	98.52	1.43
2#样品	40 ℃	75%	99.31	98.14	1.18
						3#样品	40 ℃	75%	98.89	97.26	1.65
4#样品	40 ℃	75%	98.85	97.18	1.69
						5#样品	40 ℃	75%	99.17	97.38	1.80
对照品	40 ℃	75%	99.16	92.36	6.86

由表3可见，在40 ℃，相对湿度75% 的高温高湿条件下加速试验30 d，本发明无定形态秋水仙碱的降解率在1.18-1.80%之间（1.49±0.31%），远远低于秋水仙碱对照品的降解率6.86%。这表明，与现有技术的秋水仙碱产品相比，本发明的无定形态秋水仙碱具有更好的抗热、抗湿性能，化学稳定性更高。

3.2晶体学稳定性

本发明实施例1-5制备的无定形态秋水仙碱样品在40 ℃，相对湿度75% 的条件下加速试验30 d后，进行x-射线检测，其PXＲD 图谱与 0 d无差异（见图1），说明本发明的无定形秋水仙碱在此条件下的固体形态未发生变化，仍为无定形态；秋水仙碱对照品在40 ℃，相对湿度75% 的条件下加速试验30 d后，进行x-射线检测，其PXＲD 图谱见图4，与实验前的PXＲD 图谱（图1）相比，出现明显不同的衍射峰，说明已经发生了一定的晶体学变化。这表明，与现有技术的秋水仙碱产品相比，本发明的无定形态秋水仙碱具有更好的晶体学稳定性。

对本发明实施例6-10制备的无定形态秋水仙碱6-10#样品进行同样检测，结果与此相似。

上述实验表明，与现有技术的秋水仙碱产品相比，本发明的无定形态秋水仙碱具有更好的抗热、抗湿性能，化学稳定性和晶体学稳定性更高。这一性质，有助于提高药物贮存和制剂加工过程中的质量稳定性，有助于提高药物的安全性，降低药物使用中不良反应或事件的发生率。

实验例6 抗急性痛风性关节炎的实验研究

1.实验样品：

1-5#样品：无定形态秋水仙碱化合物，分别按实施例1-5制备；

对照品：秋水仙碱，中国食品药品检定研究院提供。

2.实验方法

取SPF 级雄性 Wistar 大鼠40只，随机分为4组：正常对照组、模型组、无定形秋水仙碱组( 本发明实施例1样品)、 秋水仙碱对照品组，每组 10 只。适应性喂养 7 d后开始给药。给药组每天灌胃给药 1 次，正常对照组和模型组给予等体积生理盐水，连续7 d。给药后第5 天测量右踝关节的初始直径，模型组和各给药组大鼠右后踝关节注射 25 mg/mL 尿酸钠混悬液0. 1 mL 制备急性痛风性关节炎模型，正常对照组注射等体积生理盐水。

造模后 48 h 用缚线法测量大鼠右侧后肢踝关节同一部位周径，按下式计算肿胀率。

肿胀率 = （致炎后踝关节周径 －致炎前踝关节周径）/致炎前踝关节周径×100%

第 7天末次给药后 2 h，麻醉大鼠，股沟动脉取血，室温静置2 h，3 000 r/min离心25min，采用 ELISA 法测定血清 TNF-α、IL-1β 和 IL-18 含量。

3.实验结果：

3.1 药物对急性痛风性关节炎大鼠关节肿胀率的影响

表4 药物对急性痛风性关节炎大鼠关节肿胀率的影响

分组	剂量/(mg/kg)	关节肿胀率（%）
			正常对照组	-	6. 7 ±9.2
模型组	-	38. 5 ±11. 7
			1#样品组	0.5	19. 3 ±7. 3
对照品组	0.5	23. 5 ±8.6

上述实验表明，本发明无定形秋水仙碱化合物能有效降低尿酸钠所致急性痛风性关节炎大鼠的关节肿胀度，对急性痛风性关节炎有明显治疗效果，其效果明显优于现有技术的秋水仙碱对照品。

3.2对大鼠血清中IL-1β 及 IL-18 含量的影响

表5 对急性痛风性关节炎大鼠血清中IL-1β 及 IL-18 含量的影响

分组	剂量(mg/kg)	IL-1β/( ng/L)	IL-18/( ng/L)
				正常对照组	-	91. 26 ±8.08	126.33 ±13.19
模型组	-	128.32 ±14. 08	182. 33 ±25. 27
				1#样品组	0.5	95. 45 ±8. 59	135. 92 ±18. 62
对照品组	0.5	99. 17 ±8. 23	141. 16 ±19. 42

单核巨噬细胞产生的 IL-1β 是急性痛风性炎症发病的关键炎性因子〔武东，赵金霞，孙琳，等 . 痛风炎症机制的研究进展［J］． 中华风湿病学杂志，2014，18( 2) : 128-130〕。痛风发生过程中尿酸钠晶体激活 NLRP3 炎性小体，通过活化的 Caspase-1的切割作用，将 pro-IL-1β、pro-IL-18 转化为成熟的IL-1β、IL-18〔Martinon F，Pétrilli V，Mayor A，et al． Gout-associated uricacid crystals activate the NALP3 inflammasome［J］．Na-ture，2006，440( 7081) : 237-241.〕 。本实验发现，本发明的无定形秋水仙碱能显著降低 IL-1β、IL-18的含量，能有效抑制尿酸钠所致的大鼠急性痛风性关节炎，其作用效果优于现有的秋水仙碱对照产品。

对本发明其它实施例制得的无定形秋水仙碱样品也进行了上述相同的试验，实验结果与此相似。

实验例 7 药物的抗肿瘤作用实验研究

1.实验样品：

1-5#样品：无定形态秋水仙碱化合物，分别按实施例1-5制备；

对照品：秋水仙碱，中国食品药品检定研究院提供。

2.实验方法

将人非小细胞肺癌细胞株 A549悬液接种于 96 孔板，每孔 100μl，分别设空白组(加入未加新生牛血清的1640 培养基)、无定形秋水仙碱组、秋水仙碱对照组，每组设 6 个复孔，置于 37℃、饱和湿度、5% CO 2 恒温培养箱中培养 36 h，于培养结束前4 h 每孔加入5mg/ml MTT 10 μl。培养结束后每孔加入 100 μl DMSO，置于恒温摇床上振摇 10 min。用酶标仪检测各孔吸光度(OD)值，测定波长 λ =492 nm，参考波长 λ =630 nm，并计算抑制率。计算公式为:

抑制率(%) = (空白组 OD 值 － 药物组 OD 值) /空白组 OD 值 ×100%。

3.实验结果：

表6 不同浓度药物对肿瘤细胞增殖的抑制作用

分组	药物剂量μg/ml	OD	抑制率(%)
				空白组	-	0.895 ±0.103	0
1#样品组	50	0.225 ±0.051	74.9
				对照品组	50	0.417 ±0.068	53.4

上述实验表明，本发明无定形秋水仙碱化合物能有效抑制肿瘤细胞的增殖，说明其具有抗肿瘤作用，且其效果明显优于现有技术的秋水仙碱对照品。

对本发明其它实施例2-10制得的无定形秋水仙碱样品也进行了上述相同的试验，实验结果与此相似。

以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本发明的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许变动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。

Claims (24)

1.一种秋水仙碱化合物，其特征在于所述的秋水仙碱化合物为无定形态，具有如图2所示的X-射线粉末衍射图，其化学结构如下面式Ⅰ所示：

。

2.一种秋水仙碱化合物，其特征在于，其具有基本上如图3所示的差示扫描量热分析曲线。

3.根据权利要求1或2所述的秋水仙碱化合物，其特征在于所述秋水仙碱化合物的差式扫描量热分析曲线在118.6±2℃处有放热峰。

4.根据权利要求1或2所述的秋水仙碱化合物，其特征在于所述秋水仙碱化合物的差式扫描量热分析曲线在162.4±2℃处有吸热峰。

5.一种权利要求1~4任一所述的秋水仙碱化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A、将秋水仙碱加热溶解于溶剂中，过滤得到滤液a；

B、将滤液a降温冷却至-40℃~-30℃预冻3~5h，然后经升华干燥和解析干燥得到目标物秋水仙碱化合物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的秋水仙碱加热溶解的温度为60~80℃，加热时间为0.5~2h。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于A步骤中秋水仙碱和溶剂的质量比为（0.01~50）:100。

8.根据权利要求5或7所述的制备方法，其特征在于所述的溶剂为水、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、丙酮、乙酸乙酯、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或几种。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于B步骤中所述的升华干燥是控制温度-25℃~-20℃，压力10~20Pa条件下升华干燥3~5h。

10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于B步骤中所述的解析干燥是控制温度30~50℃，压力1~10Pa条件下解析干燥4~6h。

11.一种权利要求1~4任一所述的秋水仙碱的制剂，其特征在于由所述的秋水仙碱化合物加入药学上可接受的辅料制备而成。

12.根据权利要求11所述的秋水仙碱的制剂，其特征在于所述的药学上可接受的辅料包括药学可接受的pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种。

13.根据权利要求11或12所述的秋水仙碱的制剂，其特征在于所述的制剂包括片剂、胶囊、软胶囊、颗粒、丸剂、滴丸、针剂、贴剂、膏剂、巴布剂以及缓释制剂或控释制剂。

14.一种权利要求1~4任一所述的秋水仙碱化合物的应用，其特征在于所述的秋水仙碱化合物在制备预防和/或治疗痛风、关节炎、肿瘤、纤维化和心脑血管疾病药物中的应用。

15.一种权利要求1~4任一所述的秋水仙碱化合物的应用，其特征在于所述的秋水仙碱化合物在制备预防和/或治疗急性痛风性关节炎药物中的应用。

16.一种权利要求1~4任一所述的秋水仙碱化合物的应用，其特征在于所述的秋水仙碱化合物在制备预防和/或治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

17.一种以权利要求1~4任一所述的秋水仙碱化合物为有效成分的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物由所述的秋水仙碱化合物和别嘌醇组成。

18.根据权利要求17所述的药物组合物，其特征在于所述的秋水仙碱化合物和别嘌醇的质量配比为（10~95）：（5~90）。

19.一种秋水仙碱药物组合物的制剂，其特征在于由权利要求17或18所述的药物组合物加入药学上可接受的辅料制备而成。

20.根据权利要求19所述的秋水仙碱药物组合物的制剂，其特征在于所述的药学上可接受的辅料包括药学可接受的pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种。

21.根据权利要求19所述的秋水仙碱药物组合物的制剂，其特征在于所述的制剂包括片剂、胶囊、软胶囊、颗粒、丸剂、滴丸、针剂、贴剂、膏剂、巴布剂以及缓释制剂或控释制剂。

22.一种权利要求17或18所述的秋水仙碱药物组合物的应用，其特征在于所述的药物组合物在制备预防和/或治疗痛风、关节炎、肿瘤、纤维化和心脑血管疾病药物中的应用。

23.一种权利要求17或18所述的秋水仙碱药物组合物的应用，其特征在于所述的药物组合物在制备预防和/或治疗急性痛风性关节炎药物中的应用。

24.一种权利要求17或18所述的秋水仙碱药物组合物的应用，其特征在于所述的药物组合物在制备预防和/或治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

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