CN110787175A - 安石榴苷在制备防治类风湿性关节炎药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种安石榴苷在制备防治类风湿性关节炎药物中的应用，同时公开了用于防治类风湿性关节炎的药物制剂。本发明通过应用小鼠胶原诱导性关节炎模型，观察安石榴苷对类风湿性关节炎小鼠的治疗作用，评估促炎细胞因子的改变，分析CIA小鼠的各项指标，从而阐明PUN对类风湿性关节炎的治疗作用机制。类风湿性关节炎中IL‑1，TNF‑α等细胞因子能促进滑膜细胞和淋巴细胞的增殖和分化，引起骨和软骨的侵蚀破坏，而PUN通过抑制促炎症细胞因子的表达，进而减轻滑膜浸润和骨破坏，从而起到防治类风湿性关节炎的作用，为类风湿性关节炎的治疗提供一种新途径。

Description

安石榴苷在制备防治类风湿性关节炎药物中的应用

技术领域

本发明属于药物新用途技术领域，具体涉及安石榴苷在制备防治类风湿性关节炎药物中的应用。

背景技术

类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）是不同病因导致的以慢性、进展性和侵蚀性关节炎为特点的一类自身免疫性疾病，发病率和致残率很高，其主要的病理特征是炎性细胞浸润、滑膜增生和骨质破坏。根据美国疾控中心的资料，RA 的发病率约为1～2%，在我国RA 的发病率为0.35～0.40%。RA的发病年龄主要集中在20～45岁人群中，其中女性为高发人群，约为男性发病率的2.3倍。早期发病时患者常表现出关节肿痛等临床症状，随着病情的加重，最终导致整个关节结构的损坏及功能的丧失，甚至死亡。

RA的发生不仅给患者造成极大的痛苦，同时也给家庭及社会造成严重负担，但临床上对于该病尚无有效的治疗方法，目前常使用非甾体类抗炎药、糖皮质激素类药物、改善病情类抗风湿药物（DMARD）及生物制剂类药物对该病进行治疗，其中非甾体类以及激素类药物主要是通过控制RA症状缓解病情，长期使用会产生免疫耐受性；改善病情类抗风湿药主要通过缓解对关节的损伤起到控制病情的作用，但这类药物起效慢，副作用大；生物制剂类抗风湿药品主要包括融合蛋白类（如恩利、强克、安百诺等）以及单克隆抗体类（如修美乐、类克等），此类药物价格十分昂贵，且存在潜在感染的可能性，因此有必要对新的治疗药物进行研究。

安石榴苷（Punicalagin，PUN），其分子式为C₄₈H₂₈O₃₀，相对分子质量是1084.72，CASNo.是65995-63-3，结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）

安石榴苷（PUN）是石榴皮多酚中的最主要的活性成分（约占60-70%），呈棕黄色不定型粉末状，极性强，易溶于水，可溶于乙醇等有机溶剂形成胶状溶液，能跟多种化学试剂发生显色反应，是逆没食子酸鞣质的一种，是石榴所特有的一种相对分子质量较大的可水解的多酚类化合物。PUN有许多重要的药理作用，如抗肿瘤，抗菌和抗氧化性能。近年来由于其广泛的生物活性而受到关注，并越来越多地应用到心血管疾病、糖尿病和脂肪肝等疾病的预防。

既往有文献报道用石榴果实的提取物在体内能减轻胶原诱导的关节炎大鼠的局部炎症，但是有文献也表明即便某一药物能局部抗炎，但是对类风湿性关节炎全身性骨质破坏的防治效果却并不理想。

目前对于类风湿性关节炎（RA）还尚无特效疗法，也尚无PUN对RA进行防治的报道，本发明也由此而来。

发明内容

本发明的目的在于提供一种安石榴苷（PUN）的新用途，特别是治疗RA的用途，为防治类风湿性关节炎提供了一种新途径。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

安石榴苷在制备防治类风湿性关节炎药物中的应用；所述的类风湿性关节炎是一种以慢性滑膜炎为主要特征的侵蚀性关节炎。

一种防治类风湿性关节炎的药物制剂，包括治疗有效量的安石榴苷和药学上可接受的辅料，辅料以不和本发明活性成分发生反应或不影响本发明药物的疗效为前提，

进一步的，所述安石榴苷的含量质量计为1～99%。

进一步的，所述的药物制剂适用于胃肠道或非胃肠道给药的药物制剂。

进一步的，所述药物制剂为冻干剂、针剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂，采用本领域常规的制备方法进行制备。其给药剂量根据给药对象及疾病时期不同而改变，选择局部给药为准。

本发明技术方案通过腹腔注射给药法来研究PUN能否对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎（CIA）模型有治疗作用，同时测定白介素（IL）-1，IL-6，TNF-α等指标来研究这种作用与促炎症细胞因子的关系，探讨PUN治疗类风湿性关节炎的机制及理论依据。

本发明将40只6-8周DBA/1雄性小鼠被随机分为空白对照组（Control组）、CIA模型组（Model组）、低剂量PUN治疗组（5 mg/kg/d）和高剂量PUN治疗组（10 mg/kg/d），每组10只。按照以往方法建立CIA模型后，PUN治疗组从第22天起，每天通过腹腔注射给药法注射200µl含有PUN的无菌PBS溶液（其中低剂量组和高剂量治疗组给药剂量分别为5 mg/kg/d和10mg/kg/d），Control组和模型组每天通过腹腔注射给200µl无菌PBS溶液。各组于给药后28天处死动物取膝关节等行Micro-CT及组织学检测，评估骨侵蚀程度，测定骨密度、骨体积分数以及炎症因子的表达等分析类风湿性关节炎的炎性骨破坏程度。采用单因素方差分析对各组数据进行统计学分析。

有益效果：本发明提供了安石榴苷在制备防治类风湿性关节炎药物中的应用。

本发明通过应用小鼠胶原诱导性关节炎模型，观察安石榴苷（PUN）对类风湿性关节炎小鼠的治疗作用，评估远端小关节、股骨、脊柱等部位骨量的改变，检测炎症因子的表达，分析CIA小鼠的各项指标，从而阐明PUN对类风湿性关节炎的治疗作用机制。类风湿性关节炎中慢性滑膜炎引起骨和软骨的侵蚀破坏，进一步引起全身的骨破坏，目前被公认为类风湿性关节炎发病过程中的重要机制，而PUN通过减轻滑膜炎，进而减轻关节局部和全身的骨破坏，从而起到防治类风湿性关节炎的作用，为类风湿性关节炎的治疗提供一种新途径。

附图说明

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述。

图1为各实验组小鼠足爪大体拍照图。

图2为各实验组小鼠关节炎评分的检测值。

图3为micro-CT扫描各实验组小鼠后肢足爪的三维模型。A为Control组，B为Model组，C为PUN低剂量治疗组，D为PUN高剂量治疗组。

图4为micro-CT扫描各实验组小鼠后肢长骨及椎体的三维模型。A为Control组，B为Model组，C为PUN低剂量治疗组，D为PUN高剂量治疗组。

图5为各实验组小鼠后足骨密度（BMD）的检测值。

图6为各实验组小鼠后足骨体积分数（BV/TV）的检测值。

图7为各实验组小鼠椎体骨小梁厚度（Tb.Th）的检测值。

图8为各实验组小鼠后足骨损伤评分的检测值。

图9为各实验组小鼠膝关节HE染色结果。A为Control组，B为Model组，C为PUN低剂量治疗组，D为PUN高剂量治疗组。

图10为各实验组小鼠膝关节炎细胞浸润分数检测值。

图11为各实验组小鼠膝关节番红O-固绿染色结果。A为Control组，B为Model组，C为PUN低剂量治疗组，D为PUN高剂量治疗组。

图12为各实验组小鼠软骨破坏评分的检测值。

图13为各实验组小鼠IL-1免疫组化染色检测结果。A为Control组，B为Model组，C为PUN低剂量治疗组，D为PUN高剂量治疗组。

图14为各实验组小鼠TNF-α免疫组化染色检测结果。A为Control组，B为Model组，C为PUN低剂量治疗组，D为PUN高剂量治疗组。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

一、材料与方法

1、 材料

1.1 试剂及实验设备

1.1.1 主要药品及试剂

安石榴苷（PUN），购自Sigma-Aldrich公司，美国；多聚甲醛、无菌PBS、DAB显色剂、苏木素、伊红、番红、快绿、无水乙醇、蒸馏水、10%水合氯醛。IL-1、TNF-α抗体购自Abcam公司，英国。

1.1.2 主要仪器

Micro-CT（SkyScan 1176，比利时）、石蜡切片机（Leica 2135，德国）、烤片机（Leica1120，德国）、石蜡包埋机（Leica 1150，德国）、Axiovert 40C光学显微镜（Zeiss，德国）、手术器械一套等。

1.2 实验动物

健康DBA/1小鼠40只，雄性，体重20～25g，6～8周龄，SPF级，由苏州大学动物实验中心提供。饲养条件如下：五只一笼，室温18～20℃，湿度50～60%，通风良好，自由摄食进水。

2、 实验方法

2.1 实验动物分组

DBA/1小鼠40只，随机分为以下4组：

（1）Control组：10只，空白对照组，从第22天起，每日腹腔注射200µl无菌PBS溶液，连续注射4周后处死；

（2）Model组：10只，为CIA模型组，将小鼠用特制固定器固定好后，尾巴露在外面，在距离小鼠尾巴根部1.5-2.0cm 处皮内注射乳化剂0.1mL。初次免疫注射采用完全弗氏佐剂与胶原混合而成的乳化剂，21天后使用不完全弗式佐剂与胶原混合而成的乳化剂加强免疫一次。第22天起，每日腹腔注射200µl无菌PBS溶液术，连续注射4周后处死；

（3）Low-PUN组：10只，为PUN低剂量治疗组，与模型组造模方式相同，从第22天起，每天通过腹腔注射200µl含5mg/kg的PUN的无菌PBS溶液，连续注射4周后处死；

（4）High-PUN组：10只，为PUN高剂量治疗组，与模型组造模方式相同，从第22天起，每天通过腹腔注射200µl含10mg/kg的PUN的无菌PBS溶液，连续注射4周后处死。

2.2 小鼠胶原诱导的关节炎（CIA）模型的制备

本发明采用牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠CIA 模型来模拟RA发生的病理过程（Targetingrheumatoid inflammation and joint destruction in the mouse. J Clin Invest.2002; 110(5):611-2）。将小鼠放入特制的鼠笼中，小鼠尾巴可以露在外面，实验助手持特制固定器固定小鼠尾巴根部，实验者左手捏小鼠尾巴，右手持Hamilton 微量注射器在距离小鼠尾巴根部1.5-2.0cm 处进针，皮内注射乳化剂0.1mL。在推注过程中，应避免乳化剂溢出，如有溢出应重新补足。初次免疫注射采用完全弗氏佐剂与胶原混合而成的乳化剂，3 周后使用不完全弗式佐剂与胶原混合而成的乳化剂。两次注射的乳化剂剂量相同。加强免疫之后4-5天小鼠会出现关节炎症状，具体表现为不同程度的足爪红肿，一般在初次免疫35-38天时症状最重，初次免疫后45天时CIA 成模型率可达到95%左右。

2.3小鼠胶原诱导性关节炎模型的评分

从初次免疫后21 天起，对各组小鼠关节肿胀程度进行评分，每周评测2 次，每次重复测量3 次，所有测量由实验者和实验助手独立完成，最终结果取其平均值。采用关节炎评分法（0~4 分），0 分：无关节炎；1 分；有红色斑点或轻度肿胀；2 分：关节部位中度肿胀；3分：严重肿胀；4 分：严重肿胀且不能负重，四肢评分的和即为关节炎指数（最大分数16）。

2.4 标本采集

给药4周后处死小鼠，保留双侧后肢及脊柱，具体操作步骤如下：

整体分离小鼠双侧膝关节、足爪及脊柱，剔去表面软组织后，右侧后肢浸泡于10%多聚甲醛溶液固定48h 后，行Micro-CT 扫描，再以10% EDTA 脱钙，进行组织病理学检测；左侧后肢液氮冻存。

2.5 Micro-CT检测

使用比利时SkyScan 公司生产的高分辨显微CT SkyScan 1076 对小鼠后肢进行扫描分析。扫描前将标本从固定液中取出，晾干。将每个标本放置在Micro-CT 测试试管杯中，每次5 只，每个标本间用泡沫塑料片隔开；标本要摆放整齐，避免碰到试管壁。扫描参数设置为：电压70 kV，电流141 μA，扫描时间1750ms，空间分辨率9μm，扫描完成后，采用SkyScan1076 自带软件进行小鼠踝关节，下肢长骨及同一节段椎体三维重建。使用CT Analyzer 分析软件（CT An, SkyScan）分析以下参数：骨密度（BMD），以mg/cm3表示；骨体积分数（BV/TV;%）；骨小梁厚度（Tb.Th）；以mm 表示。

2.6组织学染色

膝关节标本由EDTA脱钙液脱钙完成后，对标本进行修剪，保留膝关节周围滑膜组织；最后使用组织切片机对石蜡包埋标本进行切片，最终制作成层厚是5μm石蜡切片。

2.5.1 HE染色步骤：

（1）石蜡切片经二甲苯（10min×3次）脱蜡后，依次经过100%、100%、95%、90%，85%的乙醇至水，每道5min；

（2）蒸馏水冲洗3min，苏木素溶液染色5min，自来水冲洗5min；

（3）1％盐酸酒精溶液分化60s，自来水冲洗1min；

（4）10％氨水溶液中返蓝60s，自来水冲洗1min；

（5）l％伊红溶液复染3min，自来水冲洗1min；

（6）常规脱水、透明、封片。

光镜下观察膝关节滑膜及软骨的形态学变化。用显微镜计算机图像分析系统（Image-Proplus 6.0），参照Hwang的方法（Hwang JK, et al. Emodin suppressesinflammatory responses and joint destruction in collagen-induced arthriticmice. Rheumatology (Oxford). 2013 Sep;52(9):1583-91），评估滑膜浸润（Infiltratescore）及骨质破坏（Erosion score）情况。

2.5.2 番红O-固绿染色

（1）石蜡切片经二甲苯（10min×3次）脱蜡后，依次经过100%、100%、95%、90%，85%的乙醇至水，每道5min；

（2）蒸馏水冲洗3min，苏木素溶液染色5min，自来水冲洗5min；

（3）0.02％固绿染液浸泡2min；

（4）1％冰醋酸浸片，反复几次去除载玻片上残留固绿染料；

（5）l％番红O染液染色2min；

（6）常规脱水、透明、封片、显微镜下采集图像。

2.6 免疫组化检测IL-1、TNF-α

1、脱蜡和水化

脱蜡前，将切片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤30分钟。

1）切片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟；

2）无水乙醇中浸泡5分钟；

3）95%乙醇中浸泡5分钟；

4）70%乙醇中浸泡5分钟；

2、抗原修复

酶消化方法：常用0.1%胰蛋白酶，胰蛋白酶使用前预热至37℃，切片也预热至37℃，每张切片滴加0.2ml消化液覆盖完全组织，于37℃温箱内消化约5~30分钟，避光。

3、免疫组织化学染色

1）PBS洗2～3次各5分钟；

2）滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。

3）滴加Ⅰ抗100μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。

4）4℃过夜后需在37℃复温45分钟。

5）PBS洗3次各5分钟；

6）滴加Ⅱ抗40～50μl，室温静置，或37℃1小时；

7）PBS洗3次各5分钟；

8）DAB显色5～10分钟，在显微镜下掌握染色程度；

9）PBS或自来水冲洗10分钟；

10）苏木精复染3分钟，盐酸酒精分化；

11）自来水冲洗10～15分钟；

12）脱水、透明、封片、镜检。

2.7统计学分析

结果数据采用SPSS11.0统计软件分析，数据用均数±标准差（）表示，多组比较选用单因素方差分析（one-way ANOVA 检验），两两比较在总体方差齐的条件下，选用LSD及Dunnett-t法进行分析。p<0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1.小鼠整体情况的变化

1.1 实验动物一般情况及足爪肿胀程度

在整个实验过程中，空白对照组（Control组）小鼠精神状态好，能正常爬行，无关节红肿；CIA模型组在二次免疫后，所有小鼠均出现典型的关节炎症状，具体表现为足爪红肿，毛色无光泽、杂乱稀疏，步态异常，精神状态差，易激惹，足部存在不同程度肿胀，关节增粗，粘膜红肿有渗出；PUN治疗组小鼠的饮食情况明显好于模型组，精神状态较好，关节稍有红肿，无明显活动障碍。造模期间，实验各组小鼠无1 例死亡。其中，A为Control组，B为CIA模型组，C为Low-PUN治疗组（5mg/kg PUN），D为High-PUN治疗组组（10mg/kg PUN）见图1。

1.2 小鼠关节炎评分

结果显示，模型组小鼠关节炎评分于D42 达到高峰，其中有6 只关节炎评分为16 分，平均13.8±1.65，与Control组（0）相比，差异有统计学意义（**p<0.01）；PUN治疗组组D42时无关节炎评分为16 分的小鼠出现，与模型组比较，差异有统计学意义（p<0.05）。见图2。

2.Micro-CT检测

运用Micro-CT扫描实验小鼠足爪、踝关节并进行三维图像重建及定量分析，可以较为准确的描述骨量和骨微结构，从而判定关节炎破坏的程度。其中，A为Control组，B为CIA模型组，C为Low-PUN治疗组（5mg/kg PUN），D为High-PUN治疗组组（10mg/kg PUN）。足爪三维图像显示，Control组小鼠骨质表面光滑，关节间隙正常，关节结构完整；与Control组比较，CIA组小鼠关节间隙明显变窄甚至消失，骨质表面粗糙，有明显的虫蚀样改变，关节结构破坏较严重；予PUN给药后，其关节间隙明显变宽，骨表面破坏明显改善。见图3。

下肢长骨及相同节段椎体三维重建图像显示，Control组小鼠长骨及椎体骨小梁较多，骨小梁厚度正常，下肢长骨骨皮质较厚；与Control组比较，CIA模型组小鼠下肢长骨及椎体骨小梁稀疏，骨小梁厚度减小，下肢长骨骨皮质变薄；予PUN给药后，其长骨及椎体骨丢失症状明显好转。见图4。

骨密度（BMD）：模型组骨密度明显减少，与Control组比较，**p<0.01。经PUN注射治疗后，其骨密度随着PUN治疗量的提高逐渐回增，其中，高剂量PUN治疗组与模型组比较，**p<0.01，低剂量PUN治疗组与模型组相比较，*p<0.05。见图5。

骨体积分数（BV/TV）：模型组骨体积分数明显降低，与Control组比较，**p<0.01。而PUN治疗后，骨体积分数明显增加，其中，高剂量PUN治疗组与模型组比较，**p<0.01，低剂量PUN治疗组与模型组相比较，*p<0.05。见图6。

骨小梁厚度（Tb.Th）: 模型组长骨及椎体骨小梁厚度明显减小，与Control组比较，**p<0.01。而PUN治疗后，骨小梁厚度明显增加，其中，高剂量PUN治疗组与模型组比较，**p<0.01，低剂量PUN治疗组与模型组相比较，*p<0.05。见图7。

骨损伤评分：模型组骨质破坏严重，骨损伤评分显著升高，与Control组比较，**p<0.01。PUN治疗后，治疗组骨损伤评分降低，其中，高剂量PUN治疗组与模型组比较，**p<0.01，低剂量PUN治疗组与模型组相比较，*p<0.05。见图8。

3．组织学检测

3.1 HE染色结果：

光镜下，Control组小鼠膝关节的关节面完整，关节间隙存在，无炎性细胞浸润，未见滑膜增生变厚现象；模拟组小鼠膝关节的关节面被破坏，关节间隙变窄甚至消失，滑膜增生严重，有大量炎性细胞浸润；PUN治疗组滑膜组织轻度炎症，少量炎症细胞浸润，未见血管翳形成，关节间隙略有狭窄。其中，A为Control组，B为CIA模型组，C为Low-PUN治疗组（5mg/kgPUN），D为High-PUN治疗组组（10mg/kg PUN）。见图9。

炎细胞浸润评分（Infiltration score）：与Control组比较，CIA模型组（3.0±0.6mm）浸润分数明显变大，差异有统计学意义（**p<0.01）。PUN治疗后，骨侵蚀评分分别为1.6±0.3mm（L组），1.0±0.25mm（H组），与CIA模型组相比，差异有统计学意义（*p<0.05，**p<0.01）。见图10。

3.2番红O-固绿染色

Control组小鼠膝关节表面完整，关节间隙正常，番红O 着色明显；模型组关节间隙明显变窄，番红O 染色丢失，提示关节面有大量的软骨破坏，滑膜增生及炎性细胞浸润明显；PUN治疗组关节间隙存在，有较多的番红O 着色，关节面软骨较完整，局部软骨层厚度变薄，滑膜轻度增生，有少量炎性细胞浸润。其中，A为Control组，B为CIA模型组，C为Low-PUN治疗组（5mg/kg PUN），D为High-PUN治疗组组（10mg/kg PUN）。见图11。

软骨破坏评分：光镜下模型组软骨破坏评分与Control组相比， **p<0.01；而PUN低浓度和高浓度治疗组软骨破坏评分分别为1.5±0.4，1.0±0.3。PUN高剂量治疗组与模型组相比，差异有统计学意义（**p<0.01），PUN低剂量治疗组与模型组相比，差异有统计学意义（*p<0.05）。见图12。

4 免疫组化检测

免疫组化结果显示，IL-1的表达量在光学显微镜下观察，见图10。与Control组（12±4mm-2）比较，模型组（52±7mm-2）IL-1表达量明显增加，差异有统计学意义（**p<0.01）。PUN治疗后，IL-1表达量分别为32±6mmˉ²（Low-PUN组），21±5mm-2（High-PUN组），PUN高剂量治疗组与模型组相比，差异有统计学意义（**p<0.01），PUN低剂量治疗组与模型组相比，差异有统计学意义（*p<0.05）。见图13。

进一步进行TNF-α表达量的测定，见图12，与Control组（9±2mmˉ²）比较，模型组（50±5mmˉ²）TNF-α表达量明显增加，差异有统计学意义（**p<0.01）。PUN治疗后，TNF-α表达量分别为31±5mmˉ²（Low-PUN组），21±3mmˉ²（High-PUN组），PUN高剂量治疗组与模型组相比，差异有统计学意义（**p<0.01），PUN低剂量治疗组与模型组相比，差异有统计学意义（*p<0.05）。见图14。

综上所述，经以上测试结果得出以下结论：

本发明结果表明，CIA模型组与Control组相比，小鼠足爪逐渐出现红斑、肿胀、畸形、行动受限等关节炎表现，足掌厚度和关节炎评分明显增大，与Control组相比，差异有统计学意义（**p<0.01）；在PUN治疗后，小鼠足爪肿胀、畸形等关节炎表现明显减弱，足掌厚度和关节炎评分随着PUN浓度的增加显著下降，与CIA模型组相比，**p<0.01。

Micro-CT三维重建结果显示，模型组与Control组相比，足爪骨密度、骨体积分数明显减少（**p<0.01）；骨损伤评分明显增大（**p<0.01）；下肢长骨及同一节段椎体骨量减少，骨皮质变薄，骨小梁厚度降低（**p<0.01）；PUN治疗组中足爪骨密度、骨体积分数明显增加，骨损伤评分明显减小，下肢长骨及同一节段椎体骨量相对增加，骨皮质增厚，骨小梁厚度增大；与CIA模型组比较，**p<0.01，尤其在高剂量治疗组作用更明显。

免疫组化结果显示，在Control组IL-1，TNF-α的阳性表达较低；在CIA模型组，IL-1，TNF-α的阳性表达急剧增加，与Control组相比，**p<0.01；在PUN治疗组，IL-1，TNF-α的阳性表达随着PUN浓度的增加显著下降。

该动物实验证实安石榴苷（PUN）对胶原诱导的关节炎全身性骨质破坏有一定的防治作用，可显著改善慢性滑膜炎引起的全身性骨质破坏，也可使单核细胞、巨噬细胞和滑膜成纤维细胞等分泌的促炎细胞因子得到抑制，可作为对类风湿性关节炎进行药物干预的一种新手段。

综上所述，本发明通过安石榴苷（PUN）腹腔注射给药的方式干预CIA小鼠模型，结果表明治疗组关节肿胀程度减轻，远端足爪及全身性的股骨、椎体骨破坏减轻，骨和软骨破坏评分减小，血清中促炎细胞因子IL-1、TNF-α表达量减低，尤以高剂量组作用更为明显，可以明改善骨侵蚀，抑制胶原诱导性关节炎。证明PUN对类风湿性关节炎有一定的治疗作用，且高剂量的作用较为明显。故通过减轻关节局部和全身性的骨质破坏是PUN治疗类风湿性关节炎的机制之一，因此PUN对类风湿性关节炎起到治疗作用。

Claims (5)

1.安石榴苷在制备防治类风湿性关节炎药物中的应用，所述安石榴苷的结构式如式（Ⅰ）所示，

式（Ⅰ）。

2.一种防治类风湿性关节炎的药物制剂，其特征在于，包括治疗有效量的安石榴苷和药学上可接受的辅料。

3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于，所述安石榴苷的含量质量计为1～99%。

4.根据权利要求2或3所述的药物制剂，其特征在于，所述的药物制剂适用于胃肠道或非胃肠道给药的药物制剂。

5.根据权利要求2或3所述的药物制剂，其特征在于，所述的药物制剂为冻干剂、针剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂。

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