CN110777161A - 一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法 - Google Patents

一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110777161A
CN110777161A CN201911060396.8A CN201911060396A CN110777161A CN 110777161 A CN110777161 A CN 110777161A CN 201911060396 A CN201911060396 A CN 201911060396A CN 110777161 A CN110777161 A CN 110777161A
Authority
CN
China
Prior art keywords
plant
atmet1
gene
expression vector
poplar
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201911060396.8A
Other languages
English (en)
Inventor
张冰玉
苏晓华
张伟溪
常英英
吴晓娟
武舒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
INSTITUTE OF FORESTRY CHINESE ACADEMY OF FORESTRY SCIENCES
Research Institute of Forestry of Chinese Academy of Forestry
Original Assignee
INSTITUTE OF FORESTRY CHINESE ACADEMY OF FORESTRY SCIENCES
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by INSTITUTE OF FORESTRY CHINESE ACADEMY OF FORESTRY SCIENCES filed Critical INSTITUTE OF FORESTRY CHINESE ACADEMY OF FORESTRY SCIENCES
Priority to CN201911060396.8A priority Critical patent/CN110777161A/zh
Publication of CN110777161A publication Critical patent/CN110777161A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1003—Transferases (2.) transferring one-carbon groups (2.1)
    • C12N9/1007—Methyltransferases (general) (2.1.1.)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明属于植物育种领域，尤其是植物生物技术育种领域，具体涉及一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法。本发明利用农杆菌介导法，将化学诱导启动子与拟南芥DNA甲基转移酶基因AtMET1导入84K杨基因组中，获得转AtMET1 84K杨植株，利用雌激素诱导转基因植株无菌离体叶片AtMET1表达3h、12h和24h后，诱导叶片再生获得表型变异植株。该研究利用化学诱导启动子人工启动外源基因表达，创造表型变异种质，丰富了植物育种资源。

Description

一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法
技术领域
本发明属于植物育种领域，尤其是植物生物技术育种领域，具体涉及一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法。
背景技术
杨树属于杨柳科(Salicacae)杨属(Populus L.)植物，为多年生木本乔木。杨树不仅是重要的造林绿化树种和工业用材树种，而且还是多年生林木基因工程的模式树种。
我国自20世纪40年代开展杨树杂交育种以来，选育出了一批生长表现优良的杨树品种，并在国内各大栽培区推广种植，取得了良好的社会和经济效益。随着经济的发展，社会对杨树良种的需求日益增长，但受育种资源缺乏的限制，杨树良种选育效果和速度难以满足现代经济社会发展的需求。
杨树育种工作首先要具备包含足够丰富遗传变异的育种资源。作为育种工作的物质基础，育种资源的丰富度直接决定良种选育的效率。当前，除深入挖掘我国特有杨树种质资源、规模化引进国外优良基因资源外，利用人工方法(辐射诱变技术、转基因技术等)创造新的种质资源是解决杨树育种资源短缺的又一有效手段。
DNA甲基化是重要的表观遗传学改变之一，DNA甲基化水平的变化会引起植物表观遗传特征的变化，并且这种表观变异可传递给后代。研究表明，杂交、环境胁迫、甲基化抑制剂处理、遗传转化等方法都能够改变植物基因组甲基化状态，从而获得新的可遗传的表型变异。最终，通过对这种可遗传的表型变异的选择，可以达到植物改良的目标。
拟南芥AtMET1基因是在植物中最早分离出来的甲基化相关基因，编码DNA甲基化转移酶1(MET1，Methytransferase 1)，该酶主要负责保持植物基因组CG位点的甲基化，植物通过MET1基因调控基因组CG位点的DNA甲基化状态，从而影响植物的基因组结构、发育和进化。
发明内容
为了解决植物育种种质资源匮乏的问题，本发明提供了一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法，利用该方法能够获得大量表型发生改变的植物新种质。
为此，本发明一方面提供了一种利用拟南芥AtMET1基因创造表型变异转基因植物的方法，其包括以下步骤：
1、获得拟南芥AtMET1基因；
2、构建含有化学诱导启动子和拟南芥AtMET1基因的化学诱导型植物表达载体；
3、采用步骤2构建的植物表达载体转化宿主细胞；
4、采用步骤3获得的宿主细胞遗传转化植物细胞，获得转AtMET1基因的植株；
5、采用化学试剂处理转基因植株，获得转AtMET1基因的表型变异的植株；
所述植物为能进行遗传转化的植物，优选为杨树，更加优选为84K杨。
在本发明进一步优选的实施方案中，所述的化学诱导型植物表达载体为植物表达载体pER8-AtMET1。
在本发明进一步优选的实施方案中，所述的宿主细胞为农杆菌，更加优选为农杆菌GV3101。
在本发明进一步优选的实施方案中，步骤4为采用获得的宿主细胞对植物的离体叶片进行遗传转化，诱导再生不定芽，获得转AtMET1基因的植株。
在本发明进一步优选的实施方案中，步骤5为采用100μM的17-β-雌二醇，对植物的离体叶片进行处理，处理时间为3h、12h或24h，诱导再生不定芽，获得转AtMET1基因的表型变异的植株。
在本发明进一步优选的实施方案中，还包括对表型变异的植株进行表型变异的测定。
在本发明更加优选的实施方案中，测定的指标包括植株株高、叶片的长宽、植株地径、功能叶片叶绿素含量、光合参数、叶片可溶性糖含量、叶片可溶性蛋白含量、POD活性和SOD活性。
本发明另一方面提供了一种含有拟南芥AtMET1基因的化学诱导型植物表达载体，其为植物表达载体pER8-AtMET1。
本发明另一方面提供了所述植物表达载体的制备方法，包括以下步骤：
1、根据拟南芥AtMET1基因序列设计扩增引物，以带有AtMET1基因的质粒为模板，扩增出全长AtMET1基因；
2、将扩增得到的全长AtMET1基因，连接到克隆载体pMDTM19-T中，获得pMDTM19-T-AtMET1重组质粒；
3、分别酶切pMDTM19-T-MET1和pER8-GFP，回收AtMET1片段和pER8线性片段，连接获得pER8-AtMET1植物表达载体。
本发明再一方面提供了所述植物表达载体转化的宿主细胞，优选为农杆菌，更加优选为农杆菌GV3101。
由上述分析可知，本发明创造了一种利用甲基转移酶基因获得植物变异种质的基因工程方法，该方法将对我国的作物及林木育种和生产产生积极的推动作用。
附图说明
图1：植物表达载体pER8-AtMET1结构示意图。
图2：中间载体pMDTM19-T-AtMET1的双酶切验证(A)及重组质粒pER8-AtMET1的PCR检测(B)
M：1kb Marker；T-M：MDTM19-T-AtMET1质粒；pM：pER8-AtMET1质粒。
图3：转AtMET1基因84K杨潮霉素抗性芽(A)及抗性植株(B)。
图4：转AtMET1基因84K杨抗性植株潮霉素基因PCR检测。
M：DL2000 Marker；1：阴性对照；2：阳性对照；3～20：转AtMET1基因抗性植株。
图5：转AtMET1基因84K杨抗性植株HM引物PCR检测。
M：DL2000 Marker；1：阴性对照；2：阳性对照；3～20：转AtMET1基因抗性植株。
图6：转基因84K杨离体叶盘外源基因AtMET1的雌二醇诱导表达情况。
图7：转AtMET1 84K杨雌二醇诱导后再生植株生长性状及光合参数变化情况。
图8：AtMET1 84K杨雌二醇诱导后再生植株的生化指标变化情况。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定本发明。应当指出，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。
实施例1：转AtMET1基因84K杨及表型变异转基因植株的获得
1、拟南芥甲基化基因AtMET1的化学诱导型植物表达载体构建
根据GenBank中AtMET1序列设计带有Xho I和Spe I酶切位点全长引物MET1-F(5’-CCGCTCGAGATGGTGGAAAATGGGGCTA-3’)和MET1-R(5’-CTAGACTAGTCTAGGGTTGGTGTTGAGGAG-3’)，以带有AtMET1基因的质粒为模板，进行PCR扩增，扩增出全长AtMET1基因，经1％琼脂糖凝胶电泳检测后，用Axygen公司琼脂糖凝胶回收试剂盒回收纯化目的片段，连接到克隆载体pMDTM19-T Vector(Takara公司，日本)，转化E.coli DH5α，获得pMDTM19-T-AtMET1重组质粒，经过PCR、双酶切证实插入片段大小正确，为4,605bp，测序结果表明，核酸序列与GenBank中AT5G49160.1的碱基序列发生一个同义突变，密码子GTT→GTC，并不影响蛋白的正常表达。用限制性内切酶Xho I和Spe I(NEB公司，美国)分别酶切pMDTM19-T-MET1和pER8-GFP，回收AtMET1片段和pER8线性片段，用T4 DAN酶(NEB公司，美国)连接，获得pER8-AtMET1植物表达载体。采用引物F和R(F:5’-CGCTGAAGCTAGTCGACT-3’，R:5’-AGGCCTGGATCGACTAGT-3’)进行PCR扩增，扩增片段大小约为4605bp+36bp，与预测长度、插入位点相符，说明已成功构建了AtMET1基因的植物化学诱导表达载体。将构建的pER8-MET1载体转入农杆菌后用于84K杨的遗传转化。
2、农杆菌介导的84K杨遗传转化
电击转化法将pER8-AtMET1植物表达载体转入农杆菌GV3101中。取84K杨无菌苗叶片，采用叶盘法进行遗传转化:(1)用添加抗生素的液体LB培养基(50mg L-1Rif+50mg L- 1Spectinomycin)过夜培养阳性农杆菌GV3101至OD值达到0.6～0.8；(2)超净台内除去叶缘，主叶脉切口2-3个，放入农杆菌菌液内，轻轻摇晃12-15分钟；(3)取出叶片，滤纸吸干后，转移到分化培养基(MS+0.5mg L-1 6-BA+0.05mg L-1NAA)上，25℃暗培养3～4天；(4)转移叶盘至含有200mg L-1Timentin的选择分化培养基上(MS+0.5mg L-1 6-BA+0.05mg L-1NAA+潮霉素3mg L-1)，诱导再生不定芽(参见附图3A)；(5)切取潮霉素抗性芽(1.0～1.5cm)，转移至生根选择培养基(1/2MS+0.05mg L-1IBA+0.02mg L-1NAA+潮霉素3mg L-1)中诱导生根，获得潮霉素抗性植株(参见附图3B)。(f)提取抗性植株叶片DNA，以抗性植株总DNA为模板，用HP及HM基因特异引物(参见表1)进行PCR检测，获得的18株潮霉素抗性植株的DNA均可扩增出与预期目的条带大小相符的目的条带，说明诱导表达系统及目的基因已成功导入84K杨(参见附图4和附图5)。
表1 PCR检测引物序列
Figure BDA0002257774910000051
3、离体叶片17-β-雌二醇处理及外源基因表达检测
将转基因84K杨及未转化野生型对照无菌苗叶片(第3～5片叶子)，切成1.0cm×1.0cm大小的叶盘，垂直主脉切2-3个伤口，平铺于添加100μmol·L-1 17-β雌二醇的不定芽分化培养基上，野生型对照处理0h、12h，转基因植株处理0h、3h、6h、12h、24h、48h、96h和144h。处理后随机各取5个叶盘，提取RNA并反转录成cDNA后，以cDNA为模板，采用qRT-PCR检测转基因植株离体叶盘中外源基因AtMET1在雌二醇诱导下的表达情况。结果显示，野生型植株处理12h与处理前一样，都没有目的基因的表达；转基因植株未经诱导时目的基因没有表达，诱导3h时目的基因的表达量即达到最大值，处理6h后表达下降，12h有所回升，24h以后表达量降低至不足12h时的一半(参见附图6)。以上结果说明，雌激素能够有效诱导转基因杨树中XVE系统诱导启动子的启动，使下游基因表达，且处理3h时表达量最高，但随着处理时间的延长，诱导表达效果减弱。
4、17-β-雌二醇处理叶片的分化及植株再生
将17-β-雌二醇处理0h、3h、12h和24h的叶盘转入无17-β-雌二醇的分化培养基中诱导分化，再生出不定芽，当不定芽生长到1.5cm左右时，切下转入生根培养基中，各处理获得雌二醇处理后的再生植株分别为35株、17株、9株和7株。
5、温室移栽
从转AtMET1 84K杨植株诱导处理3h、12h、24h的再生植株中，每个处理随机取3个株系，以未诱导的转基因(0h)、非转基因野生型为对照，每个株系4个重复，洗去小苗根部的残留培养基，放入0.5％多菌灵水溶液中浸泡10分钟，移栽到用1.0％的多菌灵水溶液消毒24h后的扦插土壤中，塑料薄膜保湿，加盖单层遮阳网，放入全自动日光温室，3天后去除遮阳网，5天后逐渐揭开薄膜，之后进行常规水肥及病虫害防治管理。
6、再生植株表型变异测定
用不锈钢刻度尺测植株株高及叶片的长宽，用游标卡尺测植株地径，用手持式SPAD-502叶绿素仪测定功能叶片叶绿素含量，用Li-6400 XT便携式光合测定仪(LI-COR，USA)测定光合参数，用苏州科铭公司相应的试剂盒测定叶片可溶性糖含量、可溶性蛋白含量，用南京建成公司试剂盒测定POD活性，用北京Solarbio公司试剂盒测定SOD活性。
与非转基因84K杨及转AtMET1基因诱导0h的84K杨相比，离体叶片雌激素诱导处理3h、12h、24h后的再生株系叶长宽比极显著低于对照，诱导12h所得株系的苗高显著低于对照，说明转AtMET1基因84K杨离体叶片雌激素诱导时间不同，对其再生植株高度及叶片长宽比的影响显著不同，而诱导时间对再生植株地径无显著影响。在光合能力上，转AtMET1基因84K杨叶片经雌激素诱导后的再生植株光合能力下降，WUE升高，而相对叶绿素含量的变化差异不显著。另外，转AtMET1基因诱导12h叶片再生植株株系1的可溶性糖含量极显著升高，株系2的可溶性糖含量显著升高，诱导24h叶片再生植株株系3的可溶性糖含量极显著升高；除诱导3h叶片再生植株的株系1、诱导12h叶片再生植株的株系3以外，诱导3、12、24h的其他株系的可溶性蛋白含量均呈现极显著下降。与转AtMET1基因诱导0h再生植株对照相比，转AtMET1基因诱导0、3、24h叶片再生植株均有株系的SOD酶活性显著升高；诱导3h叶片再生植株的株系2、诱导24h叶片再生植株的株系1和株系3的POD酶活性显著升高。
表2转AtMET1基因84K杨雌二醇诱导后离体叶片再生植株的生长性状
Figure BDA0002257774910000071
注：*在0.05水平上差异显著，**在0.01上差异极显著。
由上述描述可知，为进一步扩大我国杨树育种资源的丰富度，本发明采用转基因的方法，将拟南芥甲基化重要基因(甲基转移酶基因AtMET1)转入84K杨(Populus alba×P.glandulosa‘84K’)基因组，获得转基因植株；通过诱导启动子调控转基因植株离体叶片中外源基因的定时表达，之后诱导叶片分化及植株再生，获得表型变异的转基因84K杨新种质。
序列表
<110> 中国林业科学研究院林业研究所
<120> 一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法
<160> 8
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ccgctcgaga tggtggaaaa tggggcta 28
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ctagactagt ctagggttgg tgttgaggag 30
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
cgctgaagct agtcgact 18
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
aggcctggat cgactagt 18
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
taaatagctg cgccgatggt 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ggtttccact atcggcgagt 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
ctgtcgggcg tacacaaatc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
acatcagttt ccagagccgt 20

Claims (10)

1.一种利用拟南芥AtMET1基因创造表型变异转基因植物的方法，其包括以下步骤：
(1)获得拟南芥AtMET1基因；
(2)构建含有化学诱导启动子和拟南芥AtMET1基因的化学诱导型植物表达载体；
(3)采用步骤(2)构建的植物表达载体转化宿主细胞；
(4)采用步骤(3)获得的宿主细胞遗传转化植物细胞，获得转AtMET1基因的植株；
(5)采用化学试剂处理转基因植株，获得转AtMET1基因的表型变异的植株；
所述植物为能进行遗传转化的植物，优选为杨树，更加优选为84K杨。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的化学诱导型植物表达载体为植物表达载体pER8-AtMET1。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述的宿主细胞为农杆菌，优选为农杆菌GV3101。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中步骤(4)为采用获得的宿主细胞对植物的离体叶片进行遗传转化，诱导再生不定芽，获得转AtMET1基因的植株。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中步骤(5)为采用100μM的17-β-雌二醇，对植物的离体叶片进行处理，处理时间为3h、12h或24h，诱导再生不定芽，获得转AtMET1基因的表型变异的植株。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中还包括对表型变异的植株进行表型变异的测定。
7.根据权利要求6所述的方法，其中测定的指标包括植株株高、叶片的长宽、植株地径、功能叶片叶绿素含量、光合参数、叶片可溶性糖含量、叶片可溶性蛋白含量、POD活性和SOD活性。
8.一种含有拟南芥AtMET1基因的化学诱导型植物表达载体，其为植物表达载体pER8-AtMET1。
9.权利要求8所述的植物表达载体的制备方法，包括以下步骤：
(1)根据拟南芥AtMET1基因序列设计扩增引物，以带有AtMET1基因的质粒为模板，扩增出全长AtMET1基因；
(2)将扩增得到的全长AtMET1基因，连接到克隆载体pMDTM19-T中，获得pMDTM19-T-AtMET1重组质粒；
(3)分别酶切pMDTM19-T-MET1和pER8-GFP，回收AtMET1片段和pER8线性片段，连接获得pER8-AtMET1植物表达载体。
10.采用权利要求8所述植物表达载体转化的宿主细胞，优选为农杆菌，更加优选为农杆菌GV3101。
CN201911060396.8A 2019-11-01 2019-11-01 一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法 Pending CN110777161A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911060396.8A CN110777161A (zh) 2019-11-01 2019-11-01 一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911060396.8A CN110777161A (zh) 2019-11-01 2019-11-01 一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110777161A true CN110777161A (zh) 2020-02-11

Family

ID=69388451

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911060396.8A Pending CN110777161A (zh) 2019-11-01 2019-11-01 一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110777161A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111755072A (zh) * 2020-08-04 2020-10-09 深圳吉因加医学检验实验室 一种同时检测甲基化水平、基因组变异和插入片段的方法及装置

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170016017A1 (en) * 2014-07-31 2017-01-19 Michael E Fromm Method for increasing plant yields
CN107114235A (zh) * 2017-04-10 2017-09-01 中国林业科学研究院林业研究所 一种利用dna甲基化抑制剂构建植物群体的方法
CN109554502A (zh) * 2019-01-03 2019-04-02 北京林业大学 一种检测dna甲基化位点对数量性状加性和显性遗传效应的方法及其应用技术

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170016017A1 (en) * 2014-07-31 2017-01-19 Michael E Fromm Method for increasing plant yields
CN107114235A (zh) * 2017-04-10 2017-09-01 中国林业科学研究院林业研究所 一种利用dna甲基化抑制剂构建植物群体的方法
CN109554502A (zh) * 2019-01-03 2019-04-02 北京林业大学 一种检测dna甲基化位点对数量性状加性和显性遗传效应的方法及其应用技术

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘永哲等: "DNA 甲基化与表型效应及环境因素相互关系", 《中国公共卫生》 *
吴晓娟等: "转AtDME1 基因‘84K’杨的获得及目的基因诱导表达分析", 《北京林业大学学报》 *
梁立雄等: "AtMET1基因克隆及化学诱导表达分析", 《林业科学研究》 *
高亚南等: "欧洲黑杨圆叶突变株系生理生化及DNA甲基化分析", 《分子植物育种》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111755072A (zh) * 2020-08-04 2020-10-09 深圳吉因加医学检验实验室 一种同时检测甲基化水平、基因组变异和插入片段的方法及装置

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102286481A (zh) 用于在植物繁殖组织中表达基因产物的调控序列
CN109384837B (zh) 一种杨树抗旱基因及其应用
CN104004070A (zh) 一种具有锌指蛋白结构bbx24的基因及其应用
CN110128514A (zh) 水稻孕穗期耐冷性相关蛋白CTB4b及编码基因与应用
CN100471953C (zh) 新的CkNHX基因及其剪切修饰基因CkNHXn,以及培育耐逆植物的方法
CN104725495A (zh) 棉花GhWRKY51转录因子及其编码基因与应用
CN104388433B (zh) 一种植物渗透胁迫诱导型启动子及其应用
CN110777161A (zh) 一种利用甲基转移酶基因创造表型变异转基因植物的方法
CN103044534B (zh) 紫花苜蓿抗旱相关基因及其编码的蛋白和应用
Gittins et al. The Brassica napus extA promoter: a novel alternative promoter to CaMV 35S for directing transgene expression to young stem tissues and load bearing regions of transgenic apple trees (Malus pumila Mill.)
CN109628475B (zh) 油菜素内酯合成基因PaCYP724B1在调控植物分枝中的用途
CN113717265B (zh) 一种提高植物非生物胁迫耐受性的基因PalZAT10-1及其应用
CN115772212A (zh) 紫花苜蓿叶绿体MsSAP22基因及在提高植物抗旱性中的应用
CN106148345B (zh) 象草维管组织特异性启动子及其应用
Du et al. Overexpression of the MhTGA2 gene from crab apple (Malus hupehensis) confers increased tolerance to salt stress in transgenic apple (Malus domestica)
JP2007312635A (ja) クエン酸分泌能が強化された樹木およびその作出方法
CN103266112B (zh) 控制水稻开花的OsAGP13基因及其RNA干扰片段的应用
CN109293758B (zh) 抗黄萎病相关蛋白GbVIP1及其编码基因与应用
Zhang et al. An efficient regeneration protocol for Agrobacterium-mediated transformation of melon (Cucumis melo L.)
CN113528535A (zh) 一种提高植物抵抗逆境胁迫能力的孤基因PpDRO及应用
CN110747205A (zh) 一种利用dna去甲基化酶基因创造表型变异转基因植物的方法
Diouf et al. Casuarinaceae
Xu et al. High-efficiency agrobacterium-mediated transformation of chrysanthemum via vacuum infiltration of internode
CN111567399B (zh) 耐淹柳树新品种快速育种方法
CN116103306B (zh) OsAC37基因及编码蛋白在调控水稻直播适宜性中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200211

RJ01 Rejection of invention patent application after publication