CN110771428B - 一种富铬药用菌朱红栓菌的栽培方法 - Google Patents

Abstract

一种富铬药用菌朱红栓菌的栽培方法，富铬基础培养基配方：马铃薯、三氯化铬、琼脂、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、水；用富铬基础培养基培养朱红栓菌母种，菌丝生长性状优良的作为耐铬朱红栓菌菌种。将三氯化铬溶液加入到培养基中，在培养料中部打一通气孔，接入耐铬朱红栓菌菌种，进行培养，获得富铬朱红栓菌固体原种，然后，用富铬栽培料进行富铬朱红栓菌的人工栽培。优点是：以朱红栓菌为载体进行子实体富铬培养，将无机三价铬转化为生物源有机铬，结合朱红栓菌与有机铬二者，不仅提高了铬的生物利用率，同时避免了服用无机铬而带来的副作用，并且安全方便地使体内的微量元素铬得到补充。

Description

一种富铬药用菌朱红栓菌的栽培方法

技术领域

本发明涉及一种富铬药用菌朱红栓菌的栽培方法。

背景技术

朱红栓菌是一种药用蕈菌，始载于《新华本草纲要》，性味微辛、涩、温，具有清热除湿、消炎、解毒、止血作用的功效，用于治疗痈疽疮疖、咽喉肿痛、风湿性关节炎、气管炎、跌打损伤诸症。可内服，外用研末敷于伤口可止血。现代医学研究表明朱红栓菌内含有多种生物活性成分，如真菌多糖、朱红栓菌素、朱砂菌酸、生物酶等，朱红栓菌在抗肿瘤、提高免疫力方面有明显效果。朱红栓菌多糖能明显提高巨噬细胞的吞噬活力, 提高机体免疫能力，具有强烈抑制小鼠肉瘤s—180和艾氏癌的功效, 抑制率达90 %。红栓菌菌丝体多糖经临床验证, 对食管癌, 责门癌有治疗作用, 并且安全无毒。

铬（Chromium，Cr）是人体必需微量元素，是葡萄糖耐量因子(glucose tolerancefactor，GTF) 的重要组成部分，通过协同或增强胰岛素的作用来促进糖类、脂肪、蛋白质以及核酸的代谢。只有三价铬才是人和动物必需的，并且生物活性最高，毒性最小，在生物体内最稳定。 Cr³⁺是葡萄糖耐受因子（glucose tolerance factor，GTF）的活性组成部分,但是无机铬具有一定的毒性，吸收率低。

糖尿病是一种常见的慢性内分泌代谢障碍性疾病。是一种因部分或完全胰岛素缺失、或细胞胰岛素受体减少、或受体敏感性降低导致的疾病。近年来其发病率呈逐年增加趋势。国内外研究表明，糖尿病患者的临床表现与患者微量元素铬水平有关，糖尿病患者的铬含量显著低于正常人，铬水平与血糖水平、病情加重伴并发症呈负相关。人体只能从含铬的食物中摄取铬，含铬高的食物主要有高糠面包、谷物、花菜、青豆以及一些啤酒、葡萄酒，由于食物中含铬少，而对食物的精制加工又导致铬的大量损失、日常摄入不足以及排泄过多而造成现代人普遍性铬缺乏。同时高糖饮食、年龄的增长、剧烈体育运动、身体创伤、怀孕及哺乳过程也会增加铬的流失。铬离子是目前已知的唯一随着衰老而递减的金属离子，缺铬在老年人中非常普遍，糖尿病患者以中老年人居多。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种富铬药用菌朱红栓菌的栽培方法，以朱红栓菌为载体进行子实体富铬培养，将无机三价铬转化为生物源有机铬，结合朱红栓菌与有机铬二者，提高朱红栓菌子实体的使用价值。

本发明的技术方案是：

一种富铬药用菌朱红栓菌的栽培方法，包括以下步骤：

第一步：富铬朱红栓菌菌种培养

（1）富铬基础培养基配制

富铬基础培养基配方：马铃薯200g、三氯化铬10 mg～300mg、琼脂16g～20g、葡萄糖15g～25g、磷酸二氢钾1g～3g、硫酸镁0.5g～1.5g、水1000mL；

（2）菌种培养

用富铬基础培养基培养朱红栓菌母种，将接种的培养基放置在25℃～28℃恒温条件下培养7天～10天，菌丝生长性状优良的作为耐铬朱红栓菌菌种；

（3）富铬朱红栓菌固体原种的制备

（3.1）培养基配方

按照如下重量份数配制培养基：木屑45份～75份、麦麸10份～25份、米糠20份～45份，石膏粉1份～1.2份、磷酸二氢钾0.8份～1份、硫酸镁0.02份～0.04份、水150份、PH值为6.5～7.0；

（3.2）制作富铬固体培养基

将三氯化铬稀释配成三氯化铬溶液，按照每1kg培养基添加10mg～300mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到培养基中，获得富铬培养料作为固体富铬培养基；然后装入规格为750mL～1000mL的菌种瓶中，在富铬培养料中部打一通气孔，封严瓶口，在温度121～125℃条件下，保温灭菌1小时～1.5小时；

（3.3）固体菌种培养

在无菌条件下，在步骤（3.2）制作的固体富铬培养基内接入步骤（2）培养的耐铬朱红栓菌菌种，在25℃～28℃培养30天～50天至菌丝长满菌种瓶，菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体，即得富铬朱红栓菌固体原种；

第二步：富铬朱红栓菌的人工栽培方法

（1）配制栽培料

按照如下重量份数物料组成为，木屑35份～75份、麦麸10份～30份、米糠20份～45份、石膏粉0.8份～2.5份、磷酸二氢钾0.5份～1份、硫酸镁0.02份～0.04份、水150份，三氯化铬10 mg/kg～300mg/kg，pH值为7.5；

（2）将栽培料装入聚丙烯袋接种富铬朱红栓菌固体原种后，进行发菌管理，菌丝生长到整个培养基后，转入出菇棚，待菌丝转色成朱红色，进行出菇管理，获得成熟子实体，采收。

进一步的，步骤（3.2）和第二步中所述将三氯化铬溶液的质量浓度为10ppm～100ppm。

进一步的，富铬基础培养基按照重量份数组成为：木屑60份、麦麸15份，米糠20份、石膏粉1份、磷酸二氢钾0.8份、硫酸镁0.04份、水150份，三氯化铬100mg/kg，pH值为7.0。

进一步的，栽培料按照重量份数组成为：木屑65份、麦麸15份、米糠15份、石膏粉1.0份、磷酸二氢钾0.8份、硫酸镁0.04份、生石灰1.0份、水150份，三氯化铬150mg/kg，PH值为7.5。

进一步的，第二步，配制栽培料时，将磷酸二氢钾、硫酸镁加入水中溶解，按照每1克磷酸二氢钾和硫酸镁加10 mL -50mL水；将三氯化铬稀释成三氯化铬溶液；将木屑加入水浸泡4小时～6小时；浸泡结束后与其它物料混合搅拌均匀，装入聚丙烯袋中，所述聚丙烯袋规格为18 cm×35 cm×8cm；封严口，在121℃～125℃下保温灭菌1小时～2小时。

进一步的，第二步接种时，将灭菌完成的聚丙烯袋放置于无菌环境中降低料温，降至25℃以下时，放入经消毒灭菌的接菌箱内；从封口处接种已经培养好的富铬朱红栓菌固体原种，接菌完成后封口。

进一步的，第二步发菌管理时，将培养架用消毒水擦拭消毒，灭菌，将接菌后的聚丙烯袋转入培养架上进行发菌培养，整个发菌培养期间需要每天通风换气；控制室温在15℃～26℃，空气相对湿度低于70%，避光培养，聚丙烯袋中菌丝体伸入长至整个培养基的1/3～1/2时，把温度调至18℃～23℃，避免料温上升伤菌，培养室内保持60%～70%的空气相对湿度，经过30天～40天的培养，菌丝生长到整个培养基。

进一步的，转入出菇棚，使菌丝转色成朱红色的培养过程如下：将发菌结束的聚丙烯袋转入出菇棚，提供散射光促使聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色，形成均匀菌膜；菇棚每天需要通风换气，保持充足的氧气，控制出菇棚温度范围为12℃～28℃，空气相对湿度80%～95%，5天～10天聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色。

进一步的，第二步出菇管理时，控制菇棚空气相对湿度80%～95%，温度12℃～26℃，菇棚每天及时通风提供氧气，并保证有足够的散射光源，6天～10天菇蕾出现，15天～25天形成子实体，子实体成熟，采收；按照上述出菇管理方法，继续培养，25天～40天可继续出后潮菇，采收3～4茬子实体。

本发明的有益效果：

（1）、采用含有一定浓度三氯化铬的培养基筛选菌种，使菌株适应含有无机铬基质的生长条件，筛选出耐铬栽培的原始母种；朱红栓菌母种及原种培养在适宜的铬浓度范围内进行，保证了从原始菌株到栽培的耐铬及富铬特性。

（2）、以朱红栓菌为载体进行子实体富铬培养，将无机三价铬转化为生物源有机铬，结合朱红栓菌与有机铬二者，提高朱红栓菌子实体的药用价值及营养价值；本富铬朱红栓菌不仅提高了铬的生物利用率,同时避免了服用无机铬而带来的副作用,并且安全方便地使体内的微量元素铬得到补充,从而有效的预防或减缓糖尿病、冠心病等病症的发生,对提高整个人群的健康水平具有十分重要的意义。

具体实施方式

实施例1

第一步：富铬朱红栓菌菌种培养

（1）富铬基础培养基配制

富铬基础培养基配方：马铃薯200g、三氯化铬10 mg、琼脂20g、葡萄糖15g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁0.5g、水1000mL；

（2）菌种培养

用富铬基础培养基培养朱红栓菌母种，将接种的培养基放置在25℃～26℃恒温条件下培养7天，菌丝生长初期白色，后期表面生长朱红色菌体，菌丝致密、生长速度快的菌株作为生长性状优良的耐铬朱红栓菌菌种；采用ISSR分子标记技术对筛选的菌株进行序列分析，结果表明鉴定菌株隶属于红密孔菌属，经鉴定为鲜红密孔菌，亦称朱红栓菌。

（3）富铬朱红栓菌固体原种的制备

（3.1）培养基配方

按照如下重量份数配制培养基：木屑600g、麦麸150g，米糠200g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g、水1500g、pH值为7.0；

（3.2）制作富铬固体培养基

将三氯化铬稀释配成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g培养基添加100mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到培养基中，获得富铬培养料作为固体富铬培养基；然后装入规格为750mL的菌种瓶中，在富铬培养料中部打一通气孔，封严瓶口，在温度121～125℃条件下，保温灭菌1小时；

（3.3）固体菌种培养

在无菌条件下，在步骤（3.2）制作的固体富铬培养基内接入步骤（2）培养的耐铬朱红栓菌菌种，在25℃～26℃培养30天至菌丝长满菌种瓶，菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体，即得富铬朱红栓菌固体原种；

第二步：富铬朱红栓菌的人工栽培方法

（1）栽培料配方

木屑650g、麦麸150g、米糠150g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g、生石灰10g、水1500g、PH值为7.5；

（2）配料灭菌

磷酸二氢钾、硫酸镁加入少量水预先溶解（按照每克加30g水的比例预先溶解）；木屑先加入水浸泡4小时，浸泡结束后与其它物料按配比混合搅拌均匀；将三氯化铬稀释成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g栽培料添加150mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到栽培料中，获得富铬栽培料，装入规格为18cm×35cm×8cm的聚丙烯袋中，封严口，在121℃～125℃下保温灭菌1.5小时；

（3）接菌

将灭菌完成的聚丙烯袋放置于无菌环境中降低料温，降至25℃以下时，放入经消毒灭菌的接菌箱内；按照无菌操作规程从封口处接种已经培养好的富铬朱红栓菌固体原种，接菌完成后封口；

（4）发菌管理

将培养架用消毒水擦拭消毒，灭菌，将接菌后的聚丙烯袋转入培养架上进行发菌培养，整个发菌培养期间需要每天通风换气；控制室温在25℃～26℃，空气相对湿度低于70%，避光培养，聚丙烯袋中菌丝体伸入长至整个培养基的1/2时，把温度调至21℃，避免料温上升伤菌，培养室内保持60%～70%的空气相对湿度，经过35天的培养，菌丝扩散生长到整个培养基；

（5）适时转场转色

将发菌结束的聚丙烯袋转入出菇棚，提供散射光促使聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色，形成均匀菌膜，菇棚每天需要通风换气，保持充足的氧气，控制出菇棚温度范围为21℃，空气相对湿度90%，7天聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色；

（6）促进出菇及采收

聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色后，控制菇棚空气相对湿度95%，温度21℃，菇棚继续每天及时通风提供氧气，保证有足够的散射光源；6天～8天菇蕾出现，15天形成子实体，成熟的子实体呈扁半球形、扁平，新鲜时肉质从外到内都是鲜艳的橙色至红色，采收子实体；按照步骤（6）同样的出菇方法，25～40天可继续出后潮菇，采收4茬子实体；

（7）采收管理

将成熟的子实体及时采收，低于60℃烘干或自然风干至含水量13%以下，25℃以下避光或暗光保存。

实施例2

第一步：富铬朱红栓菌菌种培养

（1）富铬基础培养基配制

富铬基础培养基配方：马铃薯200g、三氯化铬300mg、琼脂20g、葡萄糖25g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1.5g、水1000mL；

（2）菌种培养

用富铬基础培养基培养朱红栓菌母种，将接种的培养基放置在25℃～26℃恒温条件下培养7天，菌丝生长初期白色，后期表面生长朱红色菌体，菌丝致密、生长速度快的菌株作为生长性状优良的耐铬朱红栓菌菌种；采用ISSR分子标记技术对筛选的菌株进行序列分析，结果表明鉴定菌株隶属于红密孔菌属，经鉴定为鲜红密孔菌，亦称朱红栓菌。

（3）富铬朱红栓菌固体原种的制备

（3.1）培养基配方

按照如下重量份数配制培养基：木屑600g、麦麸150g，米糠200g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g、水1500g、pH值为7.0；

（3.2）制作富铬固体培养基

将三氯化铬稀释配成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g培养基添加100mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到培养基中，获得富铬培养料作为固体富铬培养基；然后装入规格为750mL的菌种瓶中，在富铬培养料中部打一通气孔，封严瓶口，在温度121～125℃条件下，保温灭菌1小时；

（3.3）固体菌种培养

在无菌条件下，在步骤（3.2）制作的固体富铬培养基内接入步骤（2）培养的耐铬朱红栓菌菌种，在25℃～26℃培养30天至菌丝长满菌种瓶，菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体，即得富铬朱红栓菌固体原种；

第二步：富铬朱红栓菌的人工栽培方法

（1）栽培料配方

木屑650g、麦麸150g、米糠150g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g、生石灰10g、水1500g、PH值为7.5；

（2）配料灭菌

磷酸二氢钾、硫酸镁加入少量水预先溶解（按照每克加30g水的比例预先溶解）；木屑先加入水浸泡4小时，浸泡结束后与其它物料按配比混合搅拌均匀；将三氯化铬稀释成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g栽培料添加150mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到栽培料中，获得富铬栽培料，装入规格为18cm×35cm×8cm的聚丙烯袋中，封严口，在121℃～125℃下保温灭菌1.5小时；

（3）接菌

将灭菌完成的聚丙烯袋放置于无菌环境中降低料温，降至25℃以下时，放入经消毒灭菌的接菌箱内；按照无菌操作规程从封口处接种已经培养好的富铬朱红栓菌固体原种，接菌完成后封口；

（4）发菌管理

将培养架用消毒水擦拭消毒，灭菌，将接菌后的聚丙烯袋转入培养架上进行发菌培养，整个发菌培养期间需要每天通风换气；控制室温在25℃～26℃，空气相对湿度低于70%，避光培养，聚丙烯袋中菌丝体伸入长至整个培养基的1/2时，把温度调至21℃，避免料温上升伤菌，培养室内保持60%～70%的空气相对湿度，经过35天的培养，菌丝扩散生长到整个培养基；

（5）适时转场转色

将发菌结束的聚丙烯袋转入出菇棚，提供散射光促使聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色，形成均匀菌膜，菇棚每天需要通风换气，保持充足的氧气，控制出菇棚温度范围为21℃，空气相对湿度90%，7天聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色；

（6）促进出菇及采收

聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色后，控制菇棚空气相对湿度95%，温度21℃，菇棚继续每天及时通风提供氧气，保证有足够的散射光源；6天～8天菇蕾出现，15天形成子实体，成熟的子实体呈扁半球形、扁平，新鲜时肉质从外到内都是鲜艳的橙色至红色，采收子实体；按照步骤（6）同样的出菇方法，25～40天可继续出后潮菇，采收4茬子实体；

（7）采收管理

将成熟的子实体及时采收，低于60℃烘干或自然风干至含水量13%以下，25℃以下避光或暗光保存。

实施例3

第一步：富铬朱红栓菌菌种培养

（1）富铬基础培养基配制

富铬基础培养基配方：马铃薯200g、三氯化铬100mg、琼脂 20g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1.0g、水1000mL；

（2）菌种培养

用富铬基础培养基培养朱红栓菌母种，将接种的培养基放置在25℃～26℃恒温条件下培养7天，菌丝生长初期白色，后期表面生长朱红色菌体，菌丝致密、生长速度快的菌株作为生长性状优良的耐铬朱红栓菌菌种；采用ISSR分子标记技术对筛选的菌株进行序列分析，结果表明鉴定菌株隶属于红密孔菌属，经鉴定为鲜红密孔菌，亦称朱红栓菌。

（3）富铬朱红栓菌固体原种的制备

（3.1）培养基配方

按照如下重量份数配制培养基：木屑600g、麦麸150g，米糠200g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g、水1500g、pH值为7.0；

（3.2）制作富铬固体培养基

将三氯化铬稀释配成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g培养基添加100mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到培养基中，获得富铬培养料作为固体富铬培养基；然后装入规格为750mL的菌种瓶中，在富铬培养料中部打一通气孔，封严瓶口，在温度121～125℃条件下，保温灭菌1小时；

（3.3）固体菌种培养

在无菌条件下，在步骤（3.2）制作的固体富铬培养基内接入步骤（2）培养的耐铬朱红栓菌菌种，在25℃～26℃培养30天至菌丝长满菌种瓶，菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体，即得富铬朱红栓菌固体原种；

第二步：富铬朱红栓菌的人工栽培方法

（1）栽培料配方

木屑650g、麦麸150g、米糠150g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g、生石灰10g、水1500g、PH值为7.5；

（2）配料灭菌

磷酸二氢钾、硫酸镁加入少量水预先溶解（按照每克加30g水的比例预先溶解）；木屑先加入水浸泡4小时，浸泡结束后与其它物料按配比混合搅拌均匀；将三氯化铬稀释成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g栽培料添加150mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到栽培料中，获得富铬栽培料，装入规格为18cm×35cm×8cm的聚丙烯袋中，封严口，在121℃～125℃下保温灭菌1.5小时；

（3）接菌

将灭菌完成的聚丙烯袋放置于无菌环境中降低料温，降至25℃以下时，放入经消毒灭菌的接菌箱内；按照无菌操作规程从封口处接种已经培养好的富铬朱红栓菌固体原种，接菌完成后封口；

（4）发菌管理

将培养架用消毒水擦拭消毒，灭菌，将接菌后的聚丙烯袋转入培养架上进行发菌培养，整个发菌培养期间需要每天通风换气；控制室温在25℃～26℃，空气相对湿度低于70%，避光培养，聚丙烯袋中菌丝体伸入长至整个培养基的1/2时，把温度调至21℃，避免料温上升伤菌，培养室内保持60%～70%的空气相对湿度，经过35天的培养，菌丝扩散生长到整个培养基；

（5）适时转场转色

将发菌结束的聚丙烯袋转入出菇棚，提供散射光促使聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色，形成均匀菌膜，菇棚每天需要通风换气，保持充足的氧气，控制出菇棚温度范围为21℃，空气相对湿度90%，7天聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色；

（6）促进出菇及采收

聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色后，控制菇棚空气相对湿度95%，温度21℃，菇棚继续每天及时通风提供氧气，保证有足够的散射光源；6天～8天菇蕾出现，15天形成子实体，成熟的子实体呈扁半球形、扁平，新鲜时肉质从外到内都是鲜艳的橙色至红色，采收子实体；按照步骤（6）同样的出菇方法，25～40天可继续出后潮菇，采收4茬子实体；

（7）采收管理

将成熟的子实体及时采收，低于60℃烘干或自然风干至含水量13%以下，25℃以下避光或暗光保存。

实施例4

（1）将实施例3筛选的耐铬朱红栓菌菌种进行原种制备

（2）按照如下重量份数配制培养基：木屑450g、麦麸100g，米糠380g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g份、水1500g、PH值为7.5；

（3）制作富铬固体培养基

将三氯化铬稀释配成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g培养基添加10mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到培养基中，获得富铬培养料作为固体富铬培养基；然后装入规格为750mL的菌种瓶中，在富铬培养料中部打一通气孔，封严瓶口，在温度121～125℃条件下，保温灭菌1小时；

（4）固体菌种培养

在无菌条件下，在步骤（3）制作的固体富铬培养基内接入步骤（1）的耐铬朱红栓菌菌种，在25℃～26℃培养30天至菌丝长满菌种瓶，菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体，即得富铬朱红栓菌固体原种；

（5）按照实施例3的方法进行富铬朱红栓菌的人工栽培。

实施例5

（1）将实施例3筛选的耐铬朱红栓菌菌种进行原种制备

（2）按照如下重量份数配制培养基：木屑750g、麦麸250g、米糠450g、石膏粉12g、磷酸二氢钾10g、硫酸镁0.2g、水1500g、PH值为6.5；

（3）制作富铬固体培养基

将三氯化铬稀释配成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g培养基添加300mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到培养基中，获得富铬培养料作为固体富铬培养基；然后装入规格为750mL的菌种瓶中，在富铬培养料中部打一通气孔，封严瓶口，在温度121～125℃条件下，保温灭菌1小时；

（4）固体菌种培养

在无菌条件下，在步骤（3）制作的固体富铬培养基内接入步骤（1）的耐铬朱红栓菌菌种，在25℃～26℃培养30天至菌丝长满菌种瓶，菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体，即得富铬朱红栓菌固体原种；

（5）按照实施例3的方法进行富铬朱红栓菌的人工栽培。

表1 本发明实施例1-实施例3不同配方对朱红栓菌原种固体发酵的影响表

实施例	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
						生长速度	+++	+++	+++	+	++
菌体生长情况	菌丝整体浓密洁白，表面散布朱红色菌体	菌丝整体浓密洁白，表面散布朱红色菌体	菌丝整体浓密洁白，表面散布朱红色菌体	菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体	菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体

注:生长速度目测记载：+表示生长相对慢；++表示生长较快，；+++表示生长相对最快，（加号越多，生长越好，其中1号、2号、3号配方+++的生长最好）

实施例6

（1）采用实施例3的富铬朱红栓菌固体原种；

（2）富铬朱红栓菌的人工栽培方法

（2.1）栽培料配方

木屑500g、麦麸100g、米糠350g、石膏粉8g、磷酸二氢钾5g、硫酸镁0.2g、糖6g、生石灰6gg、水150g、PH值为7.5；

（2.2）配料灭菌

磷酸二氢钾、硫酸镁加入少量水预先溶解（按照每克加30g水的比例预先溶解）；木屑先加入水浸泡4小时，浸泡结束后与其它物料按配比混合搅拌均匀；将三氯化铬稀释成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g栽培料添加10mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到栽培料中，获得富铬栽培料，装入规格为18cm×35cm×8cm的聚丙烯袋中，封严口，在121℃～125℃下保温灭菌1.5小时；

（2.3）采用实施例3的方法进行富铬朱红栓菌的人工栽培。

实施例7

（1）采用实施例3的富铬朱红栓菌固体原种；

（2）富铬朱红栓菌的人工栽培方法

（2.1）栽培料配方

木屑700g、麦麸50g、米糠200g、石膏粉12g、磷酸二氢钾10g、硫酸镁0.3g、生石灰10g、水1500g、PH值为7.5；

PH值为7.0；

（2.2）配料灭菌

磷酸二氢钾、硫酸镁加入少量水预先溶解（按照每克加30g水的比例预先溶解）；木屑先加入水浸泡4小时，浸泡结束后与其它物料按配比混合搅拌均匀；将三氯化铬稀释成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g栽培料添加300mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到栽培料中，获得富铬栽培料，装入规格为18cm×35cm×8cm的聚丙烯袋中，封严口，在121℃～125℃下保温灭菌1.5小时；

（2.3）采用实施例3的方法进行富铬朱红栓菌的人工栽培。

表2实施例3、实施例6和实施例7不同配方对朱红栓菌栽培的影响表

注:生长速度目测记载：+表示生长相对慢；++表示生长较快，；+++表示生长相对最快，（加号越多，生长越好， 3号配方+++的生长最好，其中子实体多糖含量、蛋白含量、有机铬含量均较高。）

表2结果表明，栽培料中添加的三氯化铬浓度对子实体的生长情况及子实体的有机铬含量有较大的影响。实施例7每1000g栽培料添加高浓度三氯化铬300mg时，子实体有机铬含量最高，可达2.14mg/kg，但子实体生长情况较差，出菇数量少；实施例6每1000g栽培料添加10mg三氯化铬浓度时，子实体生长较好，出菇较多，但子实体有机铬含量低；实施例3每1000g栽培料添加三氯化铬100mg浓度时，子实体生长最好，出菇多而整齐，子实体有机铬含量较高。说明高浓度的三氯化铬对朱红栓菌子实体的生长有抑制作用，较低浓度时子实体有机铬含量较低。

以上仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种富铬药用菌朱红栓菌的栽培方法，其特征是：

第一步：富铬朱红栓菌菌种培养

（1）富铬基础培养基配制

富铬基础培养基配方：马铃薯200g、三氯化铬100mg、琼脂20g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1.0g、水1000mL；

（2）菌种培养

用富铬基础培养基培养朱红栓菌母种，将接种的培养基放置在25℃～26℃恒温条件下培养7天，菌丝生长初期白色，后期表面生长朱红色菌体，菌丝致密、生长速度快的菌株作为生长性状优良的耐铬朱红栓菌菌种；采用ISSR分子标记技术对筛选的菌株进行序列分析，结果表明鉴定菌株隶属于红密孔菌属，经鉴定为鲜红密孔菌，亦称朱红栓菌；

（3）富铬朱红栓菌固体原种的制备

（3.1）培养基配方

按照如下重量份数配制培养基：木屑600g、麦麸150g，米糠200g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g、水1500g、pH值为7.0；

（3.2）制作富铬固体培养基

将三氯化铬稀释配成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g培养基添加100mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到培养基中，获得富铬培养料作为固体富铬培养基；然后装入规格为750mL的菌种瓶中，在富铬培养料中部打一通气孔，封严瓶口，在温度121～125℃条件下，保温灭菌1小时；

（3.3）固体菌种培养

在无菌条件下，在步骤（3.2）制作的固体富铬培养基内接入步骤（2）培养的耐铬朱红栓菌菌种，在25℃～26℃培养30天至菌丝长满菌种瓶，菌丝整体浓密洁白，表面稍带散布的朱红色菌体，即得富铬朱红栓菌固体原种；

第二步：富铬朱红栓菌的人工栽培方法

（1）栽培料配方

木屑650g、麦麸150g、米糠150g、石膏粉10g、磷酸二氢钾8g、硫酸镁0.4g、生石灰10g、水1500g、PH值为7.5；

（2）配料灭菌

磷酸二氢钾、硫酸镁加入少量水预先溶解，按照每克加30g水的比例预先溶解；木屑先加入水浸泡4小时，浸泡结束后与其它物料按配比混合搅拌均匀；将三氯化铬稀释成质量浓度为50ppm三氯化铬溶液，按照每1000g栽培料添加150mg三氯化铬的比例，将三氯化铬溶液加入到栽培料中，获得富铬栽培料，装入规格为18cm×35cm×8cm的聚丙烯袋中，封严口，在121℃～125℃下保温灭菌1.5小时；

（3）接菌

将灭菌完成的聚丙烯袋放置于无菌环境中降低料温，降至25℃以下时，放入经消毒灭菌的接菌箱内；按照无菌操作规程从封口处接种已经培养好的富铬朱红栓菌固体原种，接菌完成后封口；

（4）发菌管理

将培养架用消毒水擦拭消毒，灭菌，将接菌后的聚丙烯袋转入培养架上进行发菌培养，整个发菌培养期间需要每天通风换气；控制室温在25℃～26℃，空气相对湿度低于70%，避光培养，聚丙烯袋中菌丝体伸入长至整个培养基的1/2时，把温度调至21℃，避免料温上升伤菌，培养室内保持60%～70%的空气相对湿度，经过35天的培养，菌丝扩散生长到整个培养基；

（5）适时转场转色

将发菌结束的聚丙烯袋转入出菇棚，提供散射光促使聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色，形成均匀菌膜，菇棚每天需要通风换气，保持充足的氧气，控制出菇棚温度范围为21℃，空气相对湿度90%，7天聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色；

（6）促进出菇及采收

聚丙烯袋内菌丝转色成朱红色后，控制菇棚空气相对湿度95%，温度21℃，菇棚继续每天及时通风提供氧气，保证有足够的散射光源；6天～8天菇蕾出现，15天形成子实体，成熟的子实体呈扁半球形、扁平，新鲜时肉质从外到内都是鲜艳的橙色至红色，采收子实体；按照步骤（6）同样的出菇方法，25～40天可继续出后潮菇，采收4茬子实体；

（7）采收管理

将成熟的子实体及时采收，低于60℃烘干或自然风干至含水量13%以下，25℃以下避光或暗光保存。