CN110731911A - 一种用于提升角质层含水量的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用于提升角质层含水量的组合物,所述组合物包含二十二碳六烯酸、蛋白质和作为活性物载体的卵磷脂。本发明还提供所述用于提升角质层含水量的组合物的用途。
Description
技术领域
本发明涉及包含二十二碳六烯酸和蛋白质以及作为活性物载体的卵磷脂的组合物,该组合物可促进天然保湿因子的产生,增加天然保湿因子含量,从而改善皮肤屏障。
背景技术
正常健康的皮肤角质层中,含有10%-20%的水分,以维护皮肤的湿润和弹性。当由于年龄、寒冷和干燥等气候环境的变化,使得角质层中水分的含量降低到10%以下时,皮肤就会显得干燥,起皱以至于渐渐老化。现代化妆品的开发重点已转到保护皮肤、延缓皮肤衰老。因此研究皮肤角质层的水分能够保持的原因具有重要意义。
天然保湿因子(natural moisturizing factor,NMF)是角质层的重要组成部分,既能维持角质层健康,也是控制角质层水分含量的重要因素,可使角质层保持水分对抗环境的干燥。NMF还对维持角质层的物理性质很重要,NMF保持的水分可以使角质层具有塑性,保持皮肤弹性来抵抗由于外界机械压力引起的开裂和剥落。NMF的主要来源是丝聚蛋白(FLG)的衍生物。半胱氨酸蛋白酶14(Caspase-14)在角质细胞的终末分化过程中,可作用于丝聚蛋白原使之水解成游离氨基酸并形成保湿因子,从而调节角质层水合功能,因此半胱氨酸蛋白酶14的基因水平相对表达量与皮肤的渗透屏障密切相关。
角质形成细胞是上皮的主要细胞,角质层是角质形成细胞分化的最后阶段,是防止外界物质进入人体和体内水分丢失的主要屏障。在其分化过程中可表达丝聚蛋白、兜甲蛋白(LOR)、内披蛋白(IVL)等,这些蛋白相交叉连接形成角质化包膜,在维持细胞皮肤上皮屏屏障中发挥着重要作用。
丝聚蛋白又称为微丝凝聚蛋白,是一种广泛存在于皮肤表皮的碱性蛋白质。主要功能是与角蛋白中间丝相互作用,协同角蛋白的聚集,从而起到维护皮肤的屏障的功能。近几年来,随着对丝聚合蛋白基因(FLG)的研究的不断深入,越来越多的证据显示,该基因的突变与多种皮肤疾病的发生相关。明确FLG基因与其相关疾病的关系,不仅能够加深对该疾病的认识,而且还可以从基因水平改变FLG基因的表达来改善皮肤的屏障功能。
脂肪酸作为PPAR激动剂的一种,能够刺激细胞脂质的代谢,丝聚蛋白作为一种能被PPAR激动剂所激活并表达上调蛋白的同时对肌肤屏障的完整性、皮肤pH调节、UV抵抗能力和特应性皮炎发病起着举足轻重的作用。据文献报道,丝聚蛋白(FLG)蛋白表达异常引起皮肤屏障功能的破坏可能是引起婴儿皮肤病发病机制之一,脂肪酸可以从基因水平上促进屏障蛋白的表达,从而可能在改善异常的皮肤屏障功能中发挥着重要的作用。Martina S的研究显示在没有炎症的情况下FLG的损失足以改变与特应性皮炎发病机理相关的蛋白的表达水平。这些包括调节炎症,蛋白水解和细胞骨架功能的蛋白质。
然而,仍然需要进一步提供可促进天然保湿因子的产生,增加天然保湿因子含量,从而改善皮肤屏障的组合物。
发明内容
本申请的发明人意外发现卵磷脂作为活性物载体具有提高半胱氨酸蛋白酶14的表达的作用。不愿被任何理论束缚,据信卵磷脂在化妆品中应用时,可以作为渗透促进剂改进皮肤水合作用,有效促进化妆品中的活性成分的透皮吸收,从而实现化妆品中的活性成分的高度有效的递送。因此,发明人研发出一种其中卵磷脂作为活性物载体的包含二十二碳六烯酸和蛋白质的组合物,并证实该组合物能够在较大程度地提升半胱氨酸蛋白酶14的表达、提升皮肤中天然保湿因子含量,从而改善皮肤屏障。
1844年法国人Gohley从蛋黄中发现卵磷脂,并以希腊文命名为Lecithos(卵磷脂)。卵磷脂属于一种混合物,是存在于动植物组织以及卵黄之中的一组黄褐色的油脂性物质,其构成成分包括磷酸、胆碱、脂肪酸、甘油、糖脂、甘油三酸酯以及磷脂。卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。卵磷脂还是纯磷脂酰胆碱的同义词。卵磷脂是一种混合物,主要包含磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)等。由于卵磷脂具有双疏水结构的尾巴,直接在水中分散可以形成囊泡,为有序的磷脂双分子层结构,因此符合表面活性剂中乳化剂的条件,可在一定程度上充当乳化剂。
然而,当将磷脂作为乳化剂乳化油脂时,由于卵磷脂混合物中的磷脂酰胆碱有利于促进O/W型乳液的形成,磷脂酰乙醇胺有利于促进W/O型乳液的形成,二者相互抑制,导致卵磷脂的亲水亲油平衡值(HLB值)低,乳化能力不强,极大的限制了卵磷脂在化妆品中的应用。因此,将卵磷脂作为主乳化剂时,为了弥补其较弱的乳化能力,一般需复配其他普通乳化剂。
发明人意外发现,本发明包含二十二碳六烯酸和蛋白质作为活性成分的组合物可以采用卵磷脂作为载体,通过中继乳化法较好维持组合物的稳定性,而不需要复配其他乳化剂。
贻贝粘蛋白是一种海洋贻贝的分泌足丝,也称为贻贝足丝蛋白,是海洋贝类紫贻贝、厚壳贻贝、翡翠贻贝等分泌的一种特殊的蛋白质,具有高强度、高韧性和高防水性。虽然贻贝粘蛋白具有以上性能,但其产品应用领域非常有限,目前主要以贻贝粘蛋白溶液或冻干粉制剂应用于微观的细胞粘附和组织粘合剂。
本发明中使用的贻贝粘蛋白为其提取物形式。
因此,一方面,本发明提供一种用于提升角质层含水量的组合物,所述组合物包含二十二碳六烯酸和蛋白质作为活性成分,并包含卵磷脂作为活性物载体。
根据一个优选的实施方式,所述卵磷脂的含量为0.01%至10%(W/W),所述二十二碳六烯酸的含量为0.0001%至10%(W/W),和其中所述蛋白质的含量为0.0001%至10%(W/W)。
根据另一个优选的实施方式,所述卵磷脂的含量为0.1%至8%(W/W),所述二十二碳六烯酸的含量为0.001%至5%(W/W),和其中所述蛋白质的含量为0.001%至5%(W/W)。
根据一个优选的实施方式,所述卵磷脂的含量为0.2%至5%(W/W),所述二十二碳六烯酸的含量为0.005%至1%(W/W),和其中所述蛋白质的含量为0.005%至1%(W/W)。
根据另一个优选的实施方式,所述卵磷脂的含量为0.5%至3%(W/W),所述二十二碳六烯酸的含量为0.01%至0.1%(W/W),和其中所述蛋白质的含量为0.005%至0.1%(W/W)。
根据一个优选的实施方式,所述卵磷脂是氢化磷脂酰胆碱。
根据另一个优选的实施方式,所述蛋白质选自贻贝粘蛋白提取物。
根据一个优选的实施方式,所述蛋白质选自贻贝粘蛋白或贻贝粘蛋白提取物。所述贻贝粘蛋白提取物包含贻贝粘蛋白水解多肽和其他水解产物。
根据一个优选的实施方式,所述组合物还包括保湿剂、植物油脂、抗炎舒缓剂、抗氧化剂和pH调节剂中的至少一种。
本发明组合物中的保湿剂能够在皮肤表面形成一层薄膜,将水份密封在皮肤内以防止水份蒸发,同时不妨碍皮肤对于空气中水份的吸收,从而保持皮肤适当的湿度。
本发明组合物中的植物油脂可保留在皮肤表面,在角质层内起润滑作用,填充皮肤表面的空间,代替在角质层内损失的脂质,保持皮肤柔软、柔韧、平滑,减少鳞片状皮肤,改善皮肤外观。
本发明组合物中的抗炎舒缓剂具有抗炎、杀菌、舒缓神经的作用。
本发明组合物中的抗氧化剂能够阻止氧气不良影响,从而能够帮助捕获并中和自由基,从而祛除自由基对人体皮肤的损害。
本发明组合物中的pH调节剂能与组合物中的酸性物质相互作用,从而调节组合物的pH值。
所述保湿剂选自甘油、1,3-丙二醇、蔗糖月桂酸酯、水解透明质酸钠和透明质酸钠中的至少一种;所述植物油脂选自角鲨烷;所述抗炎舒缓剂选自甘草酸二钾、所述抗氧化剂选自生育酚或生育酚乙酸酯;所述pH调节剂选自柠檬酸钠和柠檬酸中的至少一种。
根据最优选的实施方式,所述组合物由以下成分组成:
成分 | 含量(g) |
水 | 至100 |
甘油 | 30.00 |
水解透明质酸钠 | 0.001 |
二十二碳六烯酸 | 0.05 |
生育酚(维生素E) | 0.000115 |
贻贝黏蛋白提取物 | 1.00 |
柠檬酸 | 0.001 |
角鲨烷 | 4.00 |
蔗糖月桂酸酯 | 1.00 |
氢化磷脂酰胆碱 | 1.05 |
1,3-丙二醇 | 1.20 |
甘草酸二钾 | 0.50 |
本发明所述的包含二十二碳六烯酸和蛋白质以及作为活性物载体的卵磷脂的组合物可提高半胱氨酸蛋白酶14的表达水平,促进天然保湿因子PCA的产生,增加天然保湿因子含量,从而改善皮肤屏障。本发明组合物中的卵磷脂作为活性物载体。根据一个优选的实施方式,所述卵磷脂是氢化磷脂酰胆碱。氢化磷脂酰胆碱是提取自大豆并进行氢化的卵磷脂。氢化磷脂酰胆碱相对于其他卵磷脂,纯度高且稳定性好。
本发明组合物可根据不同需要制备成不同剂型,优选皮肤外用制剂,包括液体剂、凝胶剂、乳剂、霜剂、泡沫剂、贴剂等。然而,本领域技术人员理解,本发明所述组合物可以根据组合物的各种剂型添加各种所需添加剂,包括但不限于包括保湿剂、植物油脂、抗炎舒缓剂、抗氧化剂和pH调节剂等。本发明组合物还可以根据组合物的各种剂型添加各种所需的赋形剂。例如,当本发明组合物制备成液体剂时,所述赋形剂可以选自水、生理盐水等;当本发明组合物制备成凝胶剂时,所述赋形剂可以选自纤维素衍生物、淀粉、明胶、琼脂、多糖等;当本发明组合物制备成霜剂时,所述赋形剂可以选自甘油、凡士林、石蜡等;当本发明组合物制备成泡沫剂时,所述赋形剂可以选自羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇十二烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚磺酸钠等;当本发明组合物制备成贴剂时,所述赋形剂可以选自纤维素衍生物、淀粉、明胶、琼脂、多糖等。
本发明的用于提升角质层含水量的组合物以及各种剂型可根据本领域技术人员已知的常规方法进行制备。
第二方面,本发明提供包含卵磷脂、二十二碳六烯酸和蛋白质的组合物用于改善皮肤屏障的用途。
第三方面,本发明提供包含卵磷脂、二十二碳六烯酸和蛋白质的组合物用于增加天然保湿因子含量的用途。
第四方面,本发明提供包含卵磷脂、二十二碳六烯酸和蛋白质的组合物用于皮肤保湿的用途。
第五方面,本发明提供根据本发明制备方法获得的用于提升角质层含水量的组合物,所述组合物包含二十二碳六烯酸和蛋白质作为活性成分,并包含卵磷脂作为活性物载体。
出乎意料地,发明人意外发现在使用卵磷脂作为活性物载体的组合物中,蛋白质尤其是贻贝粘蛋白提取物能够与二十二碳六烯酸协同增效,从而提高半胱氨酸蛋白酶14的表达,促进天然保湿因子PCA的产生,增加天然保湿因子含量,从而可以提升角质层含水量。
本发明用于提升角质层含水量的组合物的优点在于:
卵磷脂作为化妆品组合物中的活性物载体具有提高半胱氨酸蛋白酶14的表达的作用。卵磷脂在化妆品中应用时,可以作为渗透促进剂改进皮肤水合作用,有效促进有效化妆品中的活性成分的透皮吸收,从而实现化妆品中的活性成分的高度有效的递送。
本发明所述用于提升角质层含水量的组合物通过促进分解FLG的半胱氨酸蛋白酶14的表达,来增加PCA含量。本发明用于提升角质层含水量的组合物能够提高皮肤自身合成NMF的能力,增强皮肤自身的水合能力,提升皮肤屏障功能。
附图说明
图1显示本发明组合物1和对比例1的组合物4对于3D皮肤模型的半胱氨酸蛋白酶14(Capase14)的相对表达水平的影响。图1表明,和对比例1的组合物4比较,本发明组合物1的处理明显提升3D皮肤模型的Caspase14的相对表达水平。
图2显示本发明组合物1和对比例1的组合物4对于3D皮肤模型的PCA含量的影响。图2表明,和对比例1的组合物4比较,用本发明组合物1处理后3D皮肤模型的PCA含量有明显提升
具体实施方式
实施例1:制备本发明用于提升角质层含水量的组合物
制备方法:将蔗糖月桂酸酯、氢化磷脂酰胆碱、甘油、1,3-丙二醇、水解透明质酸钠加入水中,用搅拌器搅拌至溶解,获得水溶液,加热至75-80℃;将角鲨烷、二十二碳六烯酸、生育酚(维生素E)加热至75-80℃并用搅拌器搅拌均匀,获得油相;将上述油相加入上述水溶液中,用乳化均质机乳化,获得乳剂;降温至40℃以下,将甘草酸二钾、柠檬酸、贻贝粘蛋白提取物加入上述乳剂,混合均匀,添加去离子水至100g,获得所述组合物1。
实施例2:制备本发明用于提升角质层含水量的组合物
制备方法:将蔗糖月桂酸酯、氢化磷脂酰胆碱、甘油、1,3-丙二醇、水解透明质酸钠加入水中,用搅拌器搅拌至溶解,获得水溶液,加热至75-80℃;将角鲨烷、二十二碳六烯酸、生育酚(维生素E)加热至75-80℃并用搅拌器搅拌均匀,获得油相;将上述油相加入上述水溶液中,用乳化均质机乳化,获得乳剂;降温至40℃以下,将甘草酸二钾、柠檬酸、贻贝粘蛋白提取物加入上述乳剂,混合均匀,添加去离子水至100g,获得所述组合物2。
实施例3:制备本发明用于提升角质层含水量的组合物
制备方法:将蔗糖月桂酸酯、氢化磷脂酰胆碱、甘油、1,3-丙二醇、水解透明质酸钠加入水中,用搅拌器搅拌至溶解,获得水溶液,加热至75-80℃;将角鲨烷、二十二碳六烯酸、生育酚(维生素E)加热至75-80℃并用搅拌器搅拌均匀,获得油相;将上述油相加入上述水溶液中,用乳化均质机乳化,获得乳剂;降温至40℃以下,将甘草酸二钾、柠檬酸、贻贝粘蛋白提取物加入上述乳剂,混合均匀,添加去离子水至100g,获得所述组合物3。
对比例1:制备不含氢化磷脂酰胆碱的组合物
制备方法:将蔗糖月桂酸酯、甘油、1,3-丙二醇、水解透明质酸钠加入水中,用搅拌器搅拌至溶解,获得水溶液,加热至75-80℃;将角鲨烷、二十二碳六烯酸、加热至75-80℃并用搅拌器搅拌均匀,获得油相;将上述油相加入上述水溶液中,用乳化均质机乳化,获得乳剂;降温至40℃以下,将甘草酸二钾、柠檬酸和贻贝粘蛋白提取物加入上述乳剂,混合均匀,添加去离子水至100g,获得所述组合物4。
实验例1:本发明实施例1制备得到的组合物1和对比例1制备得到的组合物4对3D皮肤模型的胱氨酸蛋白酶14(Capase14)和PCA表达的影响将实施例1制备得到的组合物1和对比例1制备得到的组合物4涂抹在3D皮肤模型表面,测定并分析半胱氨酸蛋白酶14(Capase14)和PCA(天然保湿因子)的提升效果。本实验以表皮模型(广东博溪生物科技有限公司)为研究对象,采用表面给药的方式,将样品模拟人体使用过程,均匀涂布于表皮模型表面,同时使用qPCR测定半胱氨酸蛋白酶14(Capase14)结果,HPLC法测定PCA结果。
Caspase-14检测方法(qRT-PCR):
RNA提取:收集模型后,使用RNA isoPlus(TaKaRa)裂解细胞,每孔加入1mL裂解液。室温放置5min,使其充分裂解,转移至1.5mL RNase-free Eppendorf管中,按照操作规程提取RNA。反转录:按照反转录试剂盒(TaKaRa)产品说明书,合成cDNA。定量检测:根据SYBRPremix Ex TaqTM II荧光染料(TaKaRa)产品说明书进行相关基因表达检测。计算:采用2-△△CT方法进行结果计算,结果如图1所示。
HPLC测定PCA参数设置:
PCA浓度计算方法:以峰面积为X轴、浓度为Y轴,绘制标曲,得到标准曲线方程,将样品所得峰面积带入曲线方程,计算得出组合物1-4中PCA的含量,结果如下表和图2所示:
PCA | 数据1 | 数据2 | 数据3 | AVE | Std | |
组合物4 | 6.81 | 7.07 | 7.52 | 7.13 | 0.36 | 0.067 |
组合物1 | 19.52 | 16.24 | 17.86 | 17.87 | 1.64 | 0.022* |
结论:含有二十二碳六烯酸、蛋白质、卵磷脂的上述实施例1制备的组合物1对半胱氨酸蛋白酶14(Capase14)和PCA有提升作用,且效果均明显好于不含氢化磷脂酰胆碱的对比例1制得的组合物4,说明本发明用于提升角质层含水量的组合物可以通过促进活性成分的透皮吸收并实现活性成分的高度有效的递送从而提升半胱氨酸蛋白酶14(Capase14)并提升皮肤中天然保湿因子的含量(PCA),达到保湿皮肤的效果。
Claims (13)
1.一种用于提升角质层含水量的组合物,所述组合物包含二十二碳六烯酸、蛋白质和作为活性物载体的卵磷脂。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述卵磷脂的含量为0.01%至10%(W/W),所述二十二碳六烯酸的含量为0.0001%至10%(W/W),和其中所述蛋白质的含量为0.0001%至10%(W/W)。
3.根据权利要求2所述的组合物,其中所述卵磷脂的含量为0.1%至8%(W/W),所述二十二碳六烯酸的含量为0.001%至5%(W/W),和其中所述蛋白质的含量为0.001%至5%(W/W)。
4.根据权利要求3所述的组合物,其中所述卵磷脂的含量为0.2%至5%(W/W),所述二十二碳六烯酸的含量为0.005%至1%(W/W),和其中所述蛋白质的含量为0.005%至1%(W/W)。
5.根据权利要求4所述的组合物,其中所述卵磷脂的含量为0.5%至3%(W/W),所述二十二碳六烯酸的含量为0.01%至0.1%(W/W),和其中所述蛋白质的含量为0.005%至0.1%(W/W)。
6.根据权利要求1-5任一项所述的组合物,其中所述卵磷脂是氢化磷脂酰胆碱。
7.根据权利要求1-5任一项所述的组合物,其中所述蛋白质选自贻贝粘蛋白提取物。
8.根据权利要求1-5任一项所述的组合物,其中所述组合物还包括保湿剂、植物油脂、抗炎舒缓剂、抗氧化剂和pH调节剂中的至少一种。
9.根据权利要求8所述的组合物,其中所述保湿剂选自甘油、二醇、蔗糖月桂酸酯、水解透明质酸钠和透明质酸钠中的至少一种;所述植物油脂选自角鲨烷;所述抗炎舒缓剂选自甘草酸二钾、所述抗氧化剂选自生育酚或生育酚乙酸酯;所述pH调节剂选自柠檬酸钠和柠檬酸中的至少一种。
10.根据权利要求9所述的组合物,其中所述二醇选自1,3-丙二醇。
11.包含卵磷脂、二十二碳六烯酸和蛋白质的组合物用于改善皮肤屏障的用途。
12.包含卵磷脂、二十二碳六烯酸和蛋白质的组合物用于增加天然保湿因子含量的用途。
13.包含卵磷脂、二十二碳六烯酸和蛋白质的组合物用于皮肤保湿的用途。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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