CN110721197A - 促进毛发生长的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于促进毛发生长的组合物。所述组合物包含来自于间充质干细胞的培养物的上清液，例如来自于人类皮肤间充质干细胞的初代培养物的上清液。较佳为所述上清液被制备成冻干粉末的形式，储存于无菌容器中，于使用前再溶于水性载剂中。也可以在本申请组合物另外添加高浓度血小板血浆(PRP)，以增进刺激毛发生长的效果。

Description

促进毛发生长的组合物

技术领域

本申请涉及一种用于促进毛发生长的组合物，以及所述组合物在促进毛发生长上的用途。

背景技术

人类的毛发具有重要的生理和社交功能。毛发主要功能在于保暖、防晒、导流水液和蒸发汗水。毛发对于局部皮肤也提供物理性保护作用，可以缓冲外界的机械性刺激。经过修饰的头发更能够表现个性，衬托出个人脸型、头型、体型、气质及散发魅力。

毛发是由毛囊所制造。人类的毛囊位于真皮层，底部有血管提供养分，并与竖毛肌相连。正常时，毛发产生的过程会不断循环。然而，现代社会生活步调快速，工作环境竞争激烈，使人长期处于压力大，精神紧张，甚至长期熬夜的状态，容易因身体内分泌失调而严重损害毛囊的健康，进而引起脱发。

虽然市面上已经有众多号称有生发功用的洗发精、养发液等产品，但这些产品往往只有滋养头皮的功能，并没有明显的生发效果。因此，业界对于能够促进毛发生长且对于人体安全无刺激性的组成物，仍存在有殷切的需求。

发明内容

近年来，许多医学研究发现，干细胞有修复组织或器官的潜力，能应用于治疗癌症、修补器官、新药开发、制造人造器官等多种应用。尤其是，已经知道干细胞能够分泌出各式各样的生长因子、细胞激素和趋化激素，而这些小分子胜肽可以修复受损的细胞，从而增进其存活率、促进神经生长和抑制发炎反应。因此，干细胞所分泌出来的胞外泌出物是极具开发潜力的新兴医药材料。

本申请发明人发现，来自于间充质干细胞(mesenchymal stem cells；MSCs)的培养物的条件化培养基，例如来自于人类皮肤间充质干细胞(SMSCs)的初代培养物的条件化培养基，具有促进毛发生长的能力，也可以改善发质和头发丰厚度。

因此，依据本发明的第一方面，其提供一种用于促进毛发生长的组合物，其特征在于所述组合物包含：

一来自于间充质干细胞的培养物的上清液，其得自于将所述间充质干细胞培养于一培养基中，历时至少3小时，以获得所述培养物，接着将所述培养物予以加工，得到所述上清液；以及

一药学或化妆品可接受性载剂。

依据本发明的第二方面，其提供上述组合物用于制造供用以在个体中促进毛发生长的医药品的用途。

在一个优选的具体实施方案中，所述间充质干细胞为皮肤间充质干细胞。在一个更优选的具体实施方案中，所述间充质干细胞来自于人类。

在一个优选的具体实施方案中，所述培养基含有基础培养基。在一个更优选的具体实施方案中，所述基础培养基选自伊格尔基础培养基(Basal Medium Eagles；BME)、最低基础培养基(Minimum Essential Medium；MEM)、达伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco'sModified Eagle's Medium；DMEM)、营养混合培养基F-10(HAM's F-10)和营养混合培养基F-12(HAM's F-12)，或它们的组合。在一个最优选的具体实施方案中，所述基础培养基为DMEM。

在一个优选的具体实施方案中，所述上清液呈现冻干粉末的形式。

附图说明

图1A至图1D为柱状图，分别显示人类皮肤间质干细胞的上清液中，VEGF(图1A)、HGF(图1B)、KGF(图1C)和TGF-β(图1D)的含量；以及

图2显示将本申请组成物施加在一位男性受试者头部后所得到的头发生长效果，其中左图显示受试前情形，右图显示受试2个月的结果。

具体实施方式

在本说明书中，术语“间充质干细胞”或简称“MSCs”是指源自于成体基质组织的多能干细胞(multipotent stem cells)，这些成体基质组织包括但不限于骨髓、脐带、羊膜、羊水、脂肪组织、牙髓腔、骨骼肌和皮肤。MSCs具有自我更新的能力，且具有分化成间质细胞谱系的细胞的能力。在较佳的具体实施例中，本申请所使用的MSCs是源自于皮肤，即皮肤间充质干细胞(SMSCs)。相比于其他MSCs，SMSCs具有来源充沛，取材方便，分离细胞的数量和纯度高，以及多次继代后仍保有干细胞特性的优势。本申请所使用的MSCs可以收集自于人、大鼠、小鼠、绵羊、猪、狗、猫、马和非人灵长类动物，如猴、大猩猩和黑猩猩。在一优选具体实施方案中，所述MSCs来自于人。

由于MSCs会随着继代次数增加而逐渐失去活力，所以通常使用第1至10代的MSCs，较佳为使用第2至6代的MSCs，来制造MSCs培养物的上清液。

MSCs培养物的上清液通常是通过从组织中分离出干细胞，随后在适当的培养基中将MSCs培育一段时间，再收集上清液而得。举例而言，在由SMSCs培养物取得上清液的具体实施例中，首先通过外科手术由提供者的皮肤获取皮肤组织，接着使用胶原蛋白酶消化组织，将离心后所沉淀出来的细胞团利用磷酸盐缓冲液进行清洗，再将细胞置入培养基中培养并且去除其他细胞以收集SMSCs。随后将所收集到的MSCs培养于适当的培养基中，历时至少3小时，优选为3至120小时，更佳为24至96小时，例如72至96小时。

上文所称“培养基”是指任何含有用于支持人类或动物细胞的活体外培养的液体培养基。在一优选具体实施方案中，所述培养基是含有无机盐类、氨基酸和维生素等基本营养成份且不含有生长因子的基础培养基。适用于本发明的基础培养基的例子包括不限于伊格尔基础培养基(Basal Medium Eagles；BME)、最低基础培养基(Minimum EssentialMedium；MEM)、达伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium；DMEM)、营养混合培养基F-10(HAM's F-10)和营养混合培养基F-12(HAM's F-12)，或它们的组合。这些培养基都可以容易地制得或由市面购得。在一更优选具体实施方案中，所述基础培养基为DMEM。在另一优选具体实施例中，所述培养基是补充有血清的基础培养基。此处所称“血清”意指来自于人类或动物的血液的液态制剂，其中血球、纤维蛋白原(fibrinogen)和纤维蛋白(fibrin)皆被移除，用于提供细胞生长所需养料，尤其是指由生活于非疫区的人类或动物所衍生而来的血清制剂，其包括但不限于人血清、胎牛血清(FBS)、小牛血清、成牛血清或是其他动物的血清，例如来自于马和骆驼的血清制剂。血清在培养基中的用量依据所述培养基的总体积为基准是位于约0.5至20体积％的范围。视需要，培养基可以进一步补充有抗生素、杀真菌剂、抗氧化剂等成份。

术语“培养”是指在有利于MSCs生长和存活的活体外条件下维持MSCs。培养MSCs的手段属于本申请所涉技术领域的常规例行手段。一般来说，培养的最适温度约为35至37℃。在一优选具体实施方案中，细胞是在二氧化碳培养箱内进行培养。所述二氧化碳培养箱通常设定于恒温(例如37℃)、稳定的CO₂水平(例如5％)、恒定的酸碱度(例如pH 7.2-7.4)和较高的相对饱和湿度(例如95％)，以仿真细胞在生物体内的生长环境。

培养后，通过离心或过滤等常用手段来加工MSCs培养物，以去除细胞和固体杂质，所收集到的水性部分即为MSCs培养物的上清液。可以使所述上清液接受进一步的纯化工序，以去除蛋白酶和有毒化学品等物质。上述MSCs培养物的上清液或其纯化产物可以进一步经过常用冷冻干燥制造方法而制作成为冻干粉末。

前述上清液能够展现出促进毛发生长的技术效果。此处所称“毛发”包含位于皮肤内的毛囊，以及由毛囊向皮肤外延伸而出的纤维状发干和毛干。术语“促进毛发生长”包含在给定的皮肤区域中刺激新生毛发的萌发、维持或增加毛囊及/或毛发的数量、维持或增进既有毛发的直径、厚度及/或长度，以及它们的组合。在特定皮肤区域内的毛发数量可以通过目视观察和计算而得知。虽然不希望被任何理论所拘束，但我们相信MSCs在体外培养过程中会在培养基中释放出某些能够促进毛发生长甚至于有助于毛囊再生的物质，能够改善毛发的质量和丰厚度。后文实施例1证实，SMSCs培养物的上清液中富含血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、角质细胞生长因子(KGF)和乙型转化生长因子(TGF-β)。现今已知VEGF能够提高局部血管通透性，改善皮肤微循环，有效于促进毛发生长和增加毛囊数量及毛发直径；HGF有利于组织的重整与再生，刺激毛囊增生；KGF促进上皮细胞增殖与分化，促进胶原蛋白生成，刺激毛囊增生；以及TGF-β刺激纤维母细胞增生和合成胶原蛋白。

前述上清液可以搭配药学或化妆品可接受性载剂共同调配，而制作成本申请的组合物。本申请所称“药学或化妆品可接受性载剂”意指被使用作为所述MSCs培养物的上清液的载体的惰性物质，其对于施用的部位(例如皮肤)不具有毒性、刺激性、热原性、抗原性及溶血性，而且无实质的药理活性，也不会妨碍所述MSCs培养物的上清液的有益效果的发挥。这些药学或化妆品可接受性载剂均为本领域技术人员所熟悉(请参见Remington:TheScience and Practice of Pharmacy,Nineteenth Ed(Easton,Pa.:Mack PublishingCompany,1995)；Hoover,John E.,Remington’s Pharmaceutical Sciences,MackPublishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.and Lachman,L.,Eds.,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Seventh Ed.(LippincottWilliams&Wilkins 1999))。一般来说，药学或化妆品可接受性载剂的用量是依据组合物的总重量为基准为约1％至约99.9％，优选为约50％至约99％。药学或化妆品可接受性载剂的适用种类视组合物的形式而定。

本申请所公开的组合物可以经由任何适宜途径施用至个体。本申请所称“个体”意欲涵盖人类或非人类哺乳动物。非人类哺乳动物包括家畜动物、陪伴动物、实验室动物和非人类灵长动物。非人类个体包括而不限于马、牛、猪、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、天竺鼠、沙鼠、仓鼠、兔、黑猩猩和恒河猴。在一个优选的具体实施方案中，所述个体为人类，尤其是已发生毛发脱落或具有毛发脱落风险的人类，例如患有圆秃(alopecia areata)、雄性秃(androgenetic alopecia)、女性型脱发(female pattern hair loss)，瘢痕性掉发(scarring alopecia)、早秃(premature alopecia)或全身性脱毛症(alopeciauniversalis)的病人。在一优选具体实施方案中，本申请组合物是呈现供局部施用的溶液、乳液、乳霜、凝胶、油膏、泡沫剂、洗发精、润丝精、喷雾剂等形式，其可以经由涂敷于带有毛囊组织的皮肤部位，以使本申请组成物与毛囊和其周边组织相接触。在更优选的具体实施方案中，MSCs培养物的上清液或其纯化产物是呈现冻干粉末的形式，储存于无菌容器中。使用前，再添加储存于另一无菌容器中的水性载剂进行复水。

在一个具体实施方案中，本申请的组合物中可以另外包含对于促进毛发生长有帮助的其他活性成份，从而调配成适合施用于个体且能兼顾安全性及有效性的制剂和医药品。例如，如果个体适合提供血液，则可以在本申请的组合物再添加由个体采得的高浓度血小板血浆(platelet-rich plasma；PRP)，使毛发再生能力更快速。在另一具体实施方案中，本申请的组合物主要由如前所述的上清液及前述药学或化妆品可接受性载剂所组成。此处所称“主要由…所组成”意指所记载的成分组合中不排除另外含有实质上不会影响前述上清液的性质和功能的其他未记载组成分。在另一具体实施方案中，本申请的组合物仅由前述上清液及前述药学或化妆品可接受性载剂所组成。

下列实施例仅供用于例示本发明，而非限制本发明的范围。

制备例1：组合物的制备

取定量的人类皮肤间充质干细胞(SMSCs)，种入150mL细胞培养瓶中，培养于补充有适量血清的杜氏改良伊格尔培养基(DMEM；美国密苏里州圣路易市Sigma ChemicalCo.)，历时1至3天。每日收取细胞培养物，经由过滤得到上清液。

实施例1：组合物生长因子

运用市售分析试剂盒并且参照试剂盒指南来分析制备例1所得上清液中的生长因子含量。

图1A至图1D显示上清液中含有多种类型的生长因子，且含量随着培养天数的增加而增加。特别是，相比于仅含有培养基的控制组，上清液中含有更高量的VEGF、HGF、KGF和TGF-β，这指出不论是上清液具有促进毛发生长的潜力。

实施例2：上清液对于头发生长的效应

将制备例1所得上清液涂抹在一位男性受试者的头部，每日一次。如图2所示，经过约2个月后可以观察到，这位男性的发量明显增加。持续施用上清液，新生的头发能持续生长而变粗变长，不会提早脱落。

以上各实施例仅供说明本发明，而并非对本发明的限制，相关领域的技术人员，在不脱离本发明的技术范围做出的各种变换或变化也应属于本发明的保护范畴。

Claims (8)

1.一种用于促进毛发生长的组合物，其特征在于：

所述组合物包含一来自于间充质干细胞的培养物的上清液，其得自于将所述间充质干细胞培养于一培养基中，历时至少3小时，以获得所述培养物，接着将所述培养物予以加工，得到所述上清液；以及一药学或化妆品可接受性载剂。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述间充质干细胞为皮肤间充质干细胞。

3.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述间充质干细胞来自于人类。

4.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述培养基含有基础培养基。

5.如权利要求4所述的组合物，其中所述基础培养基选自伊格尔基础培养基、最低基础培养基、达伯克氏改良伊格尔培养基、营养混合培养基F-10和营养混合培养基F-12，或它们的组合。

6.如权利要求5所述的组合物，其中所述基础培养基为达伯克氏改良伊格尔培养基。

7.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述上清液呈现冻干粉末的形式。

8.一种组合物用于制造供用以在个体中促进毛发生长的医药品的用途，其特征在于：

所述组合物包含一来自于间充质干细胞的培养物的上清液，其得自于将所述间充质干细胞培养于一培养基中，历时至少3小时，以获得所述培养物，接着将所述培养物予以加工，得到所述上清液；以及一药学或化妆品可接受性载剂。

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