CN110719920A - 蛋白质异二聚体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了蛋白质异二聚体、包含蛋白质异二聚体的药物组合物、药物和/或试剂盒、生产蛋白质异二聚体的方法及其用途。

Description

蛋白质异二聚体及其用途
背景技术
尽管针对肿瘤抗原的免疫应答(Disis等人(1997)J.Clin.Oncol.15:3363-3367)可被检测，但引起疾病的恶性细胞通常不能引起导致排斥反应的免疫应答。研究表明，可以通过向细胞内引入免疫调节分子(诸如细胞因子和共刺激分子)来增强肿瘤细胞的免疫原性。然而，根除残留癌细胞可能需要靶向广泛散布的微转移性肿瘤沉积物，而这些微转移性肿瘤沉积物无法直接进行基因转移。此外，所引入的免疫调节分子的表达和稳定性常常远远不能令人满意。免疫系统细胞产生的免疫调节剂(诸如细胞因子)可以直接或间接激活适应性免疫反应的细胞，并在引发保护性抗肿瘤免疫方面起重要作用。先天免疫系统可由导致促炎性细胞因子(诸如IFN-α、TNF-α和白介素)释放的细菌产物或“危险”信号触发。
多项研究表明，免疫调节剂可在动物模型和癌症患者中发挥抗肿瘤作用。然而，与免疫调节剂的应用有关的短半衰期和系统性毒性极大地限制了它们的使用。在CN200880117225.8中，已经描述了包含连接至靶向肿瘤相关抗原的抗体的c末端的干扰素的嵌合构建体。然而，这种嵌合构建体表达的融合蛋白在体内通常非常不稳定，并且其表达产量通常不足以用于工业规模生产。
近来，已开发出异二聚体蛋白质(诸如双特异性抗体)以允许两个不同靶标的共接合。传统上，双特异性抗体是通过融合两个各自产生单个单克隆抗体(mAb)的细胞系而产生的。然而，在此类过程中，双特异性抗体(或异二聚体蛋白质)数量较少，并且需要大量纯化才能分离出所需的产物。
在1990年代，Carter等人开发了一种“节孔(knob-and-hole)”模型，该模型通过在两个单特异性起始蛋白的CH3区引入不对称修饰来提高双特异性抗体的产量(Ridgway,Presta等人，1996；Carter等人，2001)。然而，即使进行了“节孔”修饰，仍不能非常有效地控制或消除蛋白质同二聚体的形成，并且异二聚体蛋白质的产率难以进一步提高。
发明内容
因此，非常需要免疫调节剂的靶向表达，该免疫调节剂可在工业规模上以相对高的产率生产，并且在体内具有相对长的半衰期，以用于治疗与细胞和/或组织的过度增殖(例如各种赘生物、不同类型的癌症和/或肿瘤)有关的病症或疾病。此外，此类产物的产率应足够高，以避免复杂的纯化过程和/或降低与不期望的杂质有关的风险。
本申请满足了这种需求并且还提供了相关的优势。本申请包括可用于抑制肿瘤生长的蛋白质异二聚体，以及包含该蛋白质异二聚体的组合物、药物和/或试剂盒。此外，本申请提供了包含所述蛋白质异二聚体并且具有极少(如果有的话)不期望的杂质(诸如不期望的蛋白质同二聚体)的蛋白质混合物。本申请还提供了产生蛋白质异二聚体或蛋白质混合物的方法，以及蛋白质异二聚体和/或蛋白质混合物在抑制肿瘤生长中的药物用途，包括但不限于癌症的治疗。
在一些方面，本申请的蛋白质异二聚体具有显著的抗肿瘤活性。在一些方面，本申请的蛋白质异二聚体具有高的表达产量。在一些方面，本申请的蛋白质异二聚体具有长的体内半衰期。在一些方面，本申请的蛋白质异二聚体特别适合于大规模工业生产。在一些方面，包含所述蛋白质异二聚体的本申请的蛋白质混合物含有极少或基本上不含有不期望的杂质。
一方面，本申请提供了蛋白质异二聚体。所述蛋白质异二聚体可包含第一成员和不同于第一成员的第二成员，第一成员可包含轻链和包含第一Fc区的重链，轻链可与重链复合以形成表现出对肿瘤抗原的结合特异性的靶向部分；第二成员可以包含多肽，该多肽包含与第二Fc区融合的免疫调节剂；第一成员可与第二成员通过第一Fc区与第二Fc区的复合而缔合，以形成异二聚体；并且第一Fc区可包含第一修饰和/或第二Fc区可包含第二修饰，其中与包含节修饰和孔修饰的节孔修饰相比，第一修饰和/或第二修饰可更有效地促进第一成员和第二成员之间的异二聚化。对于包含节修饰和孔修饰的节孔修饰，第一Fc区可包含节修饰，并且第二Fc区可包含孔修饰。可替代地，第一Fc区可包含孔修饰，并且第二Fc区可包含节修饰。
在一些实施方案中，第一修饰不同于节修饰或孔修饰，和/或第二修饰不同于节修饰或孔修饰。
在一些实施方案中，当在哺乳动物细胞中表达时，蛋白质异二聚体的产率比对照蛋白质的产率高至少10％，并且对照蛋白质与蛋白质异二聚体的不同之处在于对照蛋白质：i)在第一Fc区中包含节修饰，ii)在第二Fc区中包含孔修饰，并且iii)不同时包含本申请的蛋白质异二聚体的所述第一修饰和所述第二修饰。哺乳动物细胞可以选自HEK293细胞、CHO细胞、COS-1细胞和NS0细胞。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，并且第一修饰和第二修饰均与节修饰或孔修饰不相同。
在一些实施方案中，包含在第二成员中的多肽是融合蛋白，并且将免疫调节剂的C端直接或间接地融合到第二Fc区的N端以形成融合蛋白。
在一些实施方案中，肿瘤抗原选自EGFR、EGFR突变体、HER2/neu、GPC3、FAP、Muc1、MUC5AC和间皮素。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链包含CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链包含可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的重链包含CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的重链包含可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的重链包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链包含CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；并且靶向部分的重链包含CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链包含可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；并且靶向部分的重链包含可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；并且靶向部分的重链含有与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，特异性针对肿瘤抗原的抗体选自抗EGFR、抗EGFR突变体、抗HER2/neu、抗GPC3、抗FAP、抗Muc1、抗MUC5AC和抗间皮素。
在一些实施方案中，免疫调节剂增强免疫应答。在一些实施方案中，免疫调节剂降低免疫应答。
在一些实施方案中，免疫调节剂是细胞因子。例如，免疫调节剂可以是选自干扰素、白介素、趋化因子、淋巴因子和肿瘤坏死因子的细胞因子。
在一些实施方案中，免疫调节剂是选自干扰素α、干扰素λ和干扰素β的干扰素。
在一些实施方案中，免疫调节剂是白介素，并且白介素包含白介素10、白介素2和/或超白介素2。
在一些实施方案中，第一Fc区和第二Fc区来自免疫球蛋白的Fc区。
例如，免疫球蛋白可以选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
在一些实施方案中，第一Fc区和第二Fc区来自免疫球蛋白的Fc区，并且免疫球蛋白是人IgG1。
在一些实施方案中，第二Fc区与免疫调节剂框内融合。
在一些实施方案中，第二Fc区通过接头与免疫调节剂框内融合。
在一些实施方案中，包含在第二成员中的多肽包含两种或更多种免疫调节剂，该两种或更多种免疫调节剂彼此框内融合并且与第二Fc区融合，并且其中该两种或更多种免疫调节剂位于第二Fc区的N末端。例如，该两种或更多种免疫调节剂可以相同。
在一些实施方案中，第一修饰在位置T366处包含氨基酸取代，以及在选自以下的一个或多个位置处的氨基酸取代：Y349、F405、K409、D399、K360、Q347、K392和S354，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第一修饰包含选自Y349C、Y349D、D399S、F405K、K360E、K409A、K409E、Q347E、Q347R、S354D、K392D和T366W的氨基酸取代。
在一些实施方案中，第一修饰包含2至5个氨基酸取代。
在一些实施方案中，第一修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)Y349和T366；2)Y349、T366和F405；3)Y349、T366和K409；4)Y349、T366、F405、K360和Q347；5)Y349、T366、F405和Q347；6)Y349、T366、K409、K360和Q347；7)Y349、T366、K409和Q347；8)T366、K409和K392；9)T366和K409；10)T366、K409、Y349和S354；11)T366和F405；12)T366、F405和D399；13)T366、F405、Y349和S354。
在一些实施方案中，第一修饰包含选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)Y349C和T366W；2)Y349C、T366W和F405K；3)Y349C、T366W和K409E；4)Y349C、T366W和K409A；5)Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；6)Y349C、T366W、F405K和Q347R；7)Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；8)Y349C、T366W、K409A和Q347R；9)T366W、K409A和K392D；10)T366W和K409A；11)T366W、K409A和Y349D；12)T366W、K409A、Y349D和S354D；13)T366W和F405K；14)T366W、F405K和D399S；15)T366W、F405K和Y349D；和16)T366W、F405K、Y349D和S354D。
在在一些实施方案中，第二修饰包含在位置T366、L368和Y407处的氨基酸取代，以及在在选自D356、D399、E357、F405、K360、K392、K409和Q347中的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第二修饰所包含的氨基酸取代选自D356C、D399S、E357A、F405K、K360E、K392D、K409A、L368A、L368G、Q347E、Q347R、T366S、Y407A和Y407V。
在一些实施方案中，第二修饰包含在4至6个位置的氨基酸取代。
在一些实施方案中，第二修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)D356、T366、L368、Y407和F405；2)D356、T366、L368和Y407；3)D356、T366、L368、Y407和Q347；4)D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；5)D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；6)D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；7)T366、L368、Y407、D399和F405；8)T366、L368、Y407和F405；9)T366、L368、Y407、F405和E357；10)T366、L368、Y407和K409；11)T366、L368、Y407、K409和K392；12)T366、L368、Y407、K409和E357。
在一些实施方案中，第二个修饰包含选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；2)D356C、T366S、L368A和Y407V；3)D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；4)D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E和Q347E；5)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；6)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；7)T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；8)T366S、L368G、Y407A和F405K；9)T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；10)T366S、L368A、Y407V和K409A；11)T366S、L368A、F409K Y407V、K409A和K392D；12)T366S、L368G、Y407A和K409A；13)T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，并且第二Fc区包含第二修饰。第一修饰包含在位置T366的氨基酸取代和在选自以下的一个或多个位置的氨基酸取代：Y349、F405、K409、D399、K360、Q347、K392和S354，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定；第二修饰包含在位置T366、L368和Y407处的氨基酸取代，以及在选自D356、D399、E357、F405、K360、K392、K409和Q347中的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。第一修饰和第二修饰可以如本申请中所定义。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，并且第一修饰和第二修饰在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)第一修饰：Y349和T366；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；2)第一修饰：Y349、T366和F405；第二修饰：D356、T366、L368和Y407；3)第一修饰：Y349、T366和K409；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；4)第一修饰：Y349、T366、F405、K360和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和Q347；5)第一修饰：Y349、T366、F405和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；6)第一修饰：Y349、T366、K409、K360和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；7)第一修饰：Y349、T366、K409和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；8)第一修饰：T366、K409和K392；第二修饰：T366、L368、Y407、D399和F405；9)第一修饰：T366和K409；第二修饰：T366、L368、Y407和F405；10)第一修饰：T366、K409和Y349；第二修饰：T366、L368、Y407、F405和E357；11)第一修饰：T366、K409、Y349和S354；第二修饰：T366、L368、Y407、F405和E357；12)第一修饰：T366和F405；以及第二修饰：T366、L368、Y407和K409；13)第一修饰：T366、F405和D399；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和K392；14)第一修饰：T366、F405和Y349；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和E357；15)第一修饰：T366、F405、Y349和S354；第二种修饰：T366、L368、Y407、K409和E357；其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰、其中第一修饰和第二修饰包含选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)第一修饰：Y349C和T366W；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；2)第一修饰：Y349C、T366W和F405K；第二修饰：D356C、T366S、L368A和Y407V；3)第一修饰：Y349C、T366W和K409E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；4)第一修饰：Y349C、T366W和K409A；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；5)第一修饰：Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；6)第一修饰：Y349C、T366W、F405K和Q347R；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E和Q347E；7)第一修饰：Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；8)第一修饰：Y349C、T366W、K409A和Q347R；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；9)第一修饰：T366W、K409A和K392D；第二种修饰：T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；10)第一种修饰：T366W和K409A；第二修饰：T366S、L368G、Y407A和F405K；11)第一修饰：T366W、K409A和Y349D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；12)第一修饰：T366W、K409A、Y349D和S354D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；13)第一修饰：T366W和F405K；第二修饰：T366S、L368A、Y407V和K409A；14)第一修饰：T366W、F405K和D399S；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和K392D；15)第一修饰：T366W和F405K；第二修饰：T366S、L368G、Y407A和K409A；16)第一修饰：T366W、F405K和Y349D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；17)第一修饰：T366W、F405K、Y349D和S354D；第二种修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，第一修饰包含氨基酸取代T366W和K409A，并且第二修饰包含氨基酸取代T366S、L368G、Y407A和F405K，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR特异性结合，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：101所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：102所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：103所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链包含轻链可变区，并且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：104所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，并且第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：37所示。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR特异性结合，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：105所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：106所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：107所示。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR特异性结合，第一成员的重链包含重链可变区，并且该重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：108所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，并且第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：39所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：109所示，CDR2如SEQ ID NO：110所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：111所示。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR突变体特异性结合，第一成员的轻链包含轻链可变区，并且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：112所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，并且第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：53所示。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR突变体特异性结合，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：113所示，CDR2如SEQ ID NO：114所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：115所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的重链包含重链可变区，并且该重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：116所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，并且第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：55所示。
在一些实施方案中，靶向部分与HER2/neu特异性结合，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：117和SEQ ID NO：125，氨基CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：118和SEQ ID NO：126，并且CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：119和SEQ IDNO：127。
在一些实施方案中，靶向部分与HER2/neu特异性结合，第一成员的轻链包含轻链可变区，并且该轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：120和SEQ ID NO：128。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，并且第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：45和SEQ ID NO：49。
在一些实施方案中，靶向部分与HER2/neu特异性结合，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：121和SEQ ID NO：129，氨基CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：122和SEQ ID NO：130，并且CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：123和SEQ IDNO：131。
在一些实施方案中，靶向部分与HER2/neu特异性结合，第一成员的重链包含重链可变区，并且该重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：124和SEQ ID NO：132
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，并且第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：47和SEQ ID NO：51。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的抗体轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：133所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：134所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：135所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的轻链包含轻链可变区，并且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：136所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，并且第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：57所示。
在一些实施方案中，靶向部分与GPC3特异性结合，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：137所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：138所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：139所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的抗体重链包含重链可变区，并且该重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：140所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，并且第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：59所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：141所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：142所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：143所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链包含轻链可变区，并且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：144所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，并且第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：61所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：145所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：146所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：147所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的重链包含重链可变区，并且该重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：148所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，并且第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：63所示。
在一些实施方案中，靶向部分与Muc1特异性结合，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：149所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：150所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：151所示。
在一些实施方案中，靶向部分与Muc1特异性结合，第一成员的轻链包含轻链可变区，并且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：152所示。
在一些实施方案中，靶向部分与Muc1特异性结合，并且第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：65所示。
在一些实施方案中，靶向部分与Muc1特异性结合，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：153所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：154所示，并且CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：155所示。
在一些实施方案中，靶向部分与Muc1特异性结合，第一成员的重链包含重链可变区，并且该重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：156所示。
在一些实施方案中，靶向部分与Muc1特异性结合，并且第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：67所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：165所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：166所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：167所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链包含轻链可变区，并且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：168所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，并且第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：73所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：169所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：170所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：171所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的重链包含重链可变区，并且该重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：172所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，并且第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：75所示。
在一些实施方案中，靶向部分与MUC5AC特异性结合，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：157所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：158所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：159所示。
在一些实施方案中，靶向部分与MUC5AC特异性结合，第一成员的轻链包含轻链可变区，并且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：160所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，并且第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：69所示。
在一些实施方案中，靶向部分与MUC5AC特异性结合，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：161所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：162所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：163所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的重链包含重链可变区，并且该重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：164所示。
在一些实施方案中，靶向部分与MUC5AC特异性结合，并且第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：71所示。
在一些实施方案中，在第一成员的重链中，第一Fc区的氨基酸序列选自SEQ IDNO：1、4、5、6、7、9、11、13、15、17、19，21、22、24、26、27和29。
在一些实施方案中，第二成员中包含的免疫调节剂的氨基酸序列选自SEQ ID NO：173-180。
在一些实施方案中，第二成员中包含的第二Fc区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：2、3、8、10、12、14、16、18、20、23、25和28。
在一些实施方案中，第二成员中包含的多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO：77、80、82、84、86、89、91和97。
在一些实施方案中，第一成员中包含的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：37、45、49、53、57、61、65、69和73，第一成员中包含的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：39、47、51、55、59、63、67、71和75，第二成员中包含的多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO：77、80、82、84、86、89、91和97。
在一些实施方案中，节孔修饰包含节修饰和孔修饰，其中节修饰包含氨基酸取代Y349C和T366W，并且孔修饰包含氨基酸取代D356C、T366S、L368A和Y407V，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。在一些情况下，节修饰包含在第一Fc区中，而孔修饰包含在第二Fc区中。在一些情况下，节修饰包含在第二Fc区中，而孔修饰包含在第一Fc区中。
在另一方面，本申请提供了一种分离的多核苷酸，其编码根据本申请的蛋白质异二聚体。在一些实施方案中，分离的多核苷酸编码根据本申请的蛋白质异二聚体的亚基(例如成员)或片段。
在另一方面，本申请提供了一种载体，其包含本申请的分离的多核苷酸。
在另一方面，本申请提供了一种分离的宿主细胞，其包含本申请的分离的多核苷酸或载体。
在另一方面，本申请内容提供了一种蛋白质混合物，其包含：1)根据本申请的蛋白质异二聚体；2)由两个该蛋白质异二聚体的第一成员形成的第一同二聚体；以及3)由两个该蛋白质异二聚体的第二成员形成的第二同二聚体；其中蛋白质异二聚体在蛋白质混合物中的百分比至少为50％。在一些实施方案中，第二同二聚体的百分比小于第一同二聚体的百分比。在一些实施方案中，第二同二聚体的百分比至多为10％。在一些实施方案中，蛋白质混合物基本上不包含第二同二聚体。例如，蛋白质混合物可以直接从表达它的细胞获得。例如，蛋白质混合物中的蛋白质异二聚体尚未在表达后纯化。例如，蛋白质表达后没有从混合物中除去不期望的蛋白质二聚体或多聚体(例如蛋白质同二聚体)。
在另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含本申请的蛋白质异二聚体；或本申请的蛋白质混合物，以及任选地药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，将药物组合物配制成用于口服施用、静脉内施用、肌内施用、在肿瘤部位的原位施用、吸入、直肠施用、阴道施用、透皮施用或经由皮下贮存库施用。
在另一方面，本申请提供了蛋白质异二聚体或本申请的蛋白质混合物在制备用于抑制肿瘤或肿瘤细胞生长的药物和/或试剂盒中的用途。
在另一方面，本申请提供了抑制肿瘤或肿瘤细胞生长的方法，其包含使肿瘤或肿瘤细胞与有效量的本申请的蛋白质异二聚体或本申请的蛋白质混合物接触。在一些实施方案中，接触发生在体外或体内。
例如，本申请提供了一种在有此需要的受试者中治疗肿瘤/癌症的方法，该方法包含向受试者施用有效量的本申请的蛋白质异二聚体或本申请的蛋白质混合物。
在另一方面，本申请提供了产生蛋白质异二聚体或包含蛋白质异二聚体的蛋白质混合物的方法，该方法包含(i)在影响蛋白质异二聚体表达的条件下培养本申请的宿主细胞，以及(ii)收获表达的蛋白质异二聚体或包含表达的蛋白质异二聚体的蛋白质混合物。
通过下面的详细描述，本申请的其他方面和优势对于本领域技术人员将变得明显，其中，仅示出和描述了本申请的说明性实施方案。将会认识到，本申请能够具有其他以及不同的实施方案，并且其若干细节能够在各种明显的方面进行修改，所有这些都不脱离本申请。因此，附图和描述本质上应被认为是说明性的，而非限制性的。
通过引用并入
本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本文，其程度如同每份单独的出版物、专利或专利申请被明确地并单独地指出通过引用并入一样。
附图说明
本申请的新颖特征在所附权利要求书中具体阐述。通过参考下面的详细描述并结合附图，可以更好地理解本申请的特征和优势，所述详细描述阐述了说明性实施方案，在其中利用了本申请的原理：
图1示出了本申请的蛋白质异二聚体的实例。
图2A至图2G示出了通过SDS-PAGE分析的本申请的蛋白质异二聚体的形成结果。
图3示出了不同蛋白质异二聚体形成的比较结果。
图4示出了与融合至不同Fc区的免疫调节剂的蛋白质表达结果的比较。
图5示出了本申请的蛋白质异二聚体的特异性靶标结合亲和力。
图6示出了本申请的蛋白质异二聚体的靶标结合亲和力。
图7示出了本申请的蛋白质异二聚体的特异性靶标结合亲和力。
图8示出了本申请的蛋白质异二聚体的特异性靶标结合亲和力。
图9示出了本申请的蛋白质异二聚体的特异性靶标结合亲和力。
图10示出了本申请的蛋白质异二聚体的特异性靶标结合亲和力。
图11示出了本申请的蛋白质异二聚体中免疫调节剂的存在。
图12示出了本申请的蛋白质异二聚体中免疫调节剂的存在。
图13示出了本申请的蛋白质异二聚体的抗病毒活性。
图14示出了本申请的蛋白质异二聚体的白介素活性。
图15示出了本申请的蛋白质异二聚体的体内抗肿瘤活性。
图16示出了本申请的蛋白质异二聚体的体内抗肿瘤活性。
图17示出了本申请的蛋白质异二聚体的体内抗肿瘤活性。
图18示出了本申请的蛋白质异二聚体的体内抗肿瘤活性。
图19示出了本申请的蛋白质异二聚体的体内靶向活性。
图20示出了本申请的蛋白质异二聚体的ADCC活性。
图21示出了本申请的蛋白质异二聚体的特异性靶标结合亲和力。
图22示出了本申请的蛋白质异二聚体的特异性靶标结合亲和力。
图23示出了本申请的蛋白质异二聚体的特异性靶标结合亲和力。
图24示出了本申请的蛋白质异二聚体的体内抗肿瘤活性。
图25示出了本申请的蛋白质异二聚体的体内抗肿瘤活性。
具体实施方式
在描述本申请的实施方案之前，应当理解，仅以示例的方式提供了此类实施方案，并且在实践本申请时可以采用本文描述的本申请的实施方案的各种替代方案。在不脱离本申请的情况下，本领域技术人员将想到许多变型、改变和替代。
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管类似于或等同于本文描述的方法和材料可以用于本申请的实践或测试中，但是下面描述了合适的方法和材料。在有冲突的情况下，以专利说明书及其定义为准。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的，并不意图限制。在不脱离本申请的情况下，本领域技术人员将想到多种变型、改变和替代。
除非上下文另外明确指出，否则本文所用的单数形式“一个、一种(a、an)”和“该(the)”通常包括复数形式。
如本文所用，术语“蛋白质的”通常是指与多肽或蛋白质有关、类似或为多肽或蛋白质的物质或分子。例如，本申请的蛋白质异二聚体可以是异二聚体蛋白，或包含两个或更多个多肽的异二聚体。
如本文所用，术语“异二聚体”通常是指由两个不同成员组成的分子(例如蛋白质分子)。异二聚体的两个成员可以在结构、功能、活性和/或组成上不同。例如，两个不同的成员可以包含在形成这些多肽的氨基酸残基的顺序、数量或种类方面不同的多肽。异二聚体的两个不同成员中的每一个可以独立地包含一个、两个或多个单元、多肽链或部分。
如本文所用，术语“靶向部分(targeting moiety)”通常是指分子、复合物或聚集体，其特异性地、选择性地或优先地结合至靶分子、细胞、颗粒、组织或聚集体。例如，靶向部分可以是抗体、抗原结合抗体片段、双特异性抗体或其他基于抗体的分子或化合物。靶向部分的其他实例可包括但不限于适体、高亲和性多聚体(avimers)、受体结合配体、核酸、生物素-亲和素结合对、结合肽或蛋白质等。术语“靶向部分”和“结合部分”本文可互换使用。
如本文所用，术语“肿瘤抗原”通常是指在肿瘤细胞中或由肿瘤细胞产生的抗原性物质，其可具有在宿主中触发免疫应答的能力。例如，肿瘤抗原可以是蛋白质、多肽、肽或其片段，其构成肿瘤细胞的一部分并且能够诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞。肿瘤抗原肽可以是由于肿瘤抗原在肿瘤细胞中降解而产生的肽，并且可以通过与HLA分子结合而在细胞表面表达后诱导或激活肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞。在一些实施方案中，术语“肿瘤抗原”还可以指在癌细胞上专门或优先或差异表达和/或发现与癌细胞相关的生物分子(例如蛋白质、碳水化合物、糖蛋白等)，从而提供对癌症优先或特异的靶标。例如，优先表达可以是与生物中的任何其他细胞相比优先表达，或者可以在生物的特定区域内(例如在特定器官或组织内)优先表达。
术语“肿瘤抗原表位(tumor antigen epitope)”和“肿瘤抗原决定簇(tumorantigen determinant)”在本文可互换使用，并且通常是指存在于肿瘤抗原中的可诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的氨基酸序列的位点。
术语“免疫调节剂(immunoregulator)”和“免疫调制剂(immunomodulator)”在本文可互换使用，并且通常是指影响免疫系统功能的物质。免疫调节剂可以增强或减少免疫反应。例如，免疫调节剂可以是免疫疗法的活性剂，包括但不限于例如来自细菌、趋化因子、白介素、胞嘧啶磷酸-鸟苷(CpG)寡脱氧核苷酸和葡聚糖的细胞因子、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、干扰素、咪喹莫特、细胞膜级分的重组、合成和/或天然制剂。在一些实例中，免疫调节剂是细胞因子。在某些情况下，免疫调节剂不是抗体或其抗原结合片段。在某些情况下，免疫调节剂不是免疫球蛋白分子或其片段(例如抗原结合片段)。
在一些实施方案中，免疫调节剂选自干扰素、白介素、趋化因子、淋巴因子和肿瘤坏死因子。例如，免疫调节剂可以选自干扰素α、干扰素λ、干扰素β、白介素10、白介素2和超白介素2。
在本文的蛋白质异二聚体的上下文中使用的术语“表达产量”通常是指在表达时，例如当由宿主细胞表达时以功能形式产生的蛋白质异二聚体的量。
如本文所用，术语“二聚序列”通常是指能够形成二聚体或经历二聚化的氨基酸序列。在一些实施方案中，二聚体是由两个不同成员形成的异二聚体。在某些情况下，异二聚体的两个不同成员可以包含不同的二聚序列。
如本文所用，术语“异二聚化”通常是指在两个不同成员(例如，两个不同多肽)之间形成异二聚体的过程，例如通过络合、缔合或聚集，在所述两个或多个成员之间形成或不形成共价键。
如本文所用，术语“共价键”通常是指通过电子共享在原子之间形成的化学键。例如，共价键可以是极性或非极性的。在一些实施方案中，共价键是二硫键。
如本文所用，术语“非共价成对亲和力”通常是指能够通过非共价相互作用，例如经由离子对、氢键、偶极-偶极相互作用、电荷转移相互作用、π-π相互作用、阳离子-π电子相互作用、范德华相互作用和分散相互作用、疏水性(亲脂性)相互作用、复合物形成(例如过渡金属阳离子的复合物形成)或这些相互作用的组合而彼此结合的二聚化序列或异二聚化序列。
如本文所用，术语“接头”通常是指连接(connect)或连接(link)两个多肽序列，例如连接两个多肽结构域的合成氨基酸序列。接头可通过肽键连接两个氨基酸序列。在一些实施方案中，本申请的接头以线性序列将生物活性部分连接至第二部分。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可以是直链或支链的，它可以包含修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。该术语还涵盖已经例如通过二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作(诸如与标记组分缀合)修饰的氨基酸聚合物。该术语可适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学类似物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物。该术语还可以包括传统的肽键上的变体，该变体连接构成多肽的氨基酸。例如，“肽”、“多肽”和“蛋白质”可以是氨基酸的链，其α碳通过肽键连接。因此，在链的一个末端(氨基末端)上的末端氨基酸可以具有游离氨基，而在链的另一末端(羧基末端)上的末端氨基酸可以具有游离羧基。如本文所用，术语“氨基末端”(缩写为N末端)通常是指在肽的氨基末端的氨基酸上的游离α-氨基或肽内任何其他位置的氨基酸的α-氨基(当参与α末端时，亚氨基)。类似地，术语“羧基末端”通常是指肽的羧基末端上的游离羧基或肽内任何其他位置上的氨基酸的羧基。肽也可基本上包括任何聚氨基酸，包括但不限于肽模拟物，诸如通过醚而非酰胺键连接的氨基酸。
如本文所用，术语“氨基酸”通常是指天然和/或非天然或合成的氨基酸，包括但不限于D或L旋光异构体或两者、氨基酸类似物和模拟肽。标准的单字母或三字母代码用于指定氨基酸。
如本文所用，术语“天然L-氨基酸”通常是指甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)、组氨酸(H)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、天冬酰胺(N)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
如本文所用，术语“非天然存在的”通常是指与野生型或天然存在的序列(例如，在受试者中发现的序列)不对应、不互补或不具有高度同源性的多肽或多核苷酸序列。例如，与天然序列相比，当适当对齐时，非天然存在的多肽或片段可以共享少于99％、98％、95％、90％、80％、70％、60％、50％或甚至更少的氨基酸序列同一性。可替代地，与天然序列相比，当适当对齐时，非天然存在的多肽或片段可以共享超过99％、98％、95％、90％、80％、70％、60％、50％或甚至更多的氨基酸序列同一性。
如本文所用，术语“亲水的”和“疏水的”通常是指物质与水的亲和度。亲水性物质对水具有很强的亲和力，倾向于与水溶解、混合或被水润湿，而疏水性物质基本上对水缺乏亲和力，倾向于排斥和不吸收水，并且倾向于不溶于水或与水混合或被水润湿。氨基酸可基于其疏水性进行表征。已经开发出许多规模。一个实例是由Levitt,M等人，J Mol Biol(1976)104:59开发的量表，其在Hopp,TP等人，Proc Natl Acad Sci U S A(1981)78:3824中列出。“亲水性氨基酸”的实例是精氨酸、赖氨酸、苏氨酸、丙氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。特别令人关注的是亲水性氨基酸天冬氨酸、谷氨酸和丝氨酸以及甘氨酸。“疏水氨基酸”的实例是色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸。
当在蛋白质分子(例如多肽或蛋白质)的上下文中使用时，术语“片段”通常是指天然生物活性蛋白质的截短形式，其可以保留或可以不保留治疗和/或生物活性的一部分。
当在蛋白质分子(例如，多肽或蛋白质)的上下文中使用时，术语“变体”通常是指与天然生物活性蛋白质具有序列同源性的蛋白质分子，其保留了生物活性蛋白的至少一部分治疗/或生物活性。例如，与对照生物活性蛋白相比，变体蛋白质可以共享至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，“变体”可包括故意修饰的蛋白，例如通过定点诱变、编码基因的合成、插入或偶然地通过突变修饰的蛋白。
术语“缀合的(conjugated)”、“连接的(linked)”、“融合的(fused)”和“融合”在本文可互换使用，并且通常是指例如通过包括化学缀合或重组的方式将两个或更多个化学元素、序列或组分结合在一起。例如，如果启动子或增强子影响序列的转录，则将其与编码序列可操作地连接。通常，“可操作地连接”是指被连接的DNA序列是连续的，并且处于阅读段或阅读框内。“框内融合(in-frame fusion)”是指以维持原始ORF正确阅读框的方式，将两个或多个开放阅读框(ORF)连接起来以形成连续的较长ORF。因此，所得的“融合多肽”是包含两个或更多个片段的单一蛋白质，所述两个或更多个片段对应于原始ORF编码的多肽(该片段通常在自然界中不是这样连接的)。“融合位点”是指两个或更多个片段连接在一起的序列。在某些情况下，融合位点可以是与两个或更多个要连接的片段中的序列相同的序列。在一些情况下，融合位点可以进一步包含与被连接的两个或更多个片段的序列中的任一个都不相同的空位片段。
在多肽的上下文中，“线性序列”或“序列”是多肽中氨基酸从氨基到羧基末端方向的顺序，其中序列中彼此相邻的残基在多肽的一级结构中是连续的。“部分序列”是形成多肽的一部分的线性序列，已知该线性序列在一个或两个方向上包含额外的残基。
术语“多核苷酸”、“核酸”、“核苷酸”和“寡核苷酸”在本文可互换使用，并且它们通常是指任何长度的核苷酸的聚合形式，即脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其类似物。多核苷酸可以具有任何三维结构，并且可以执行任何已知或未知的功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段的编码或非编码区、根据连锁分析定义的基因座(loci或locus)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离DNA、任何序列的分离RNA、核酸探针和引物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，诸如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。如果存在的话，可以在聚合物组装之前或之后对核苷酸结构进行修饰。核苷酸的序列可以被非核苷酸成分打断。多核苷酸可在聚合后进一步修饰，诸如通过与标记组分缀合。
术语“基因”和“基因片段”在本文可互换使用，并且通常是指包含至少一个开放阅读框的多核苷酸，该转录框能够在转录和翻译后编码特定蛋白质。基因或基因片段可以是基因组或cDNA，只要多核苷酸包含至少一个开放阅读框，其可以覆盖整个编码区或其片段。“融合基因”是由连接在一起的至少两个异源多核苷酸组成的基因。
如本文所用，术语“抗体”通常是指包含基本上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因的片段编码的一个或多个多肽的蛋白质。免疫球蛋白基因可包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数免疫球蛋白可变区基因。如本文所用，轻链可以分类为κ或λ。重链可分类为γ、μ、α、δ或ε，其依次分别定义免疫球蛋白类别，IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。如本申请中使用的抗体可以具有包含四聚体的结构单元。每个四聚体可以由两对相同的多肽链组成，每对具有一条“轻”链(约25KD)和一条“重”链(约50-70KD)。每条链的N端可限定约100至110或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。如本文所用，术语“轻链可变区”(VL)和“重链可变区”(VH)通常分别指轻链和重链的这些区域。抗体可以以完整的免疫球蛋白形式存在，也可以以许多由各种肽酶消化产生或从头表达的特征清晰的片段形式存在。因此，例如，胃蛋白酶可以消化铰链区中二硫键下方的抗体以产生F(ab)'2(Fab的二聚体，其本身是一条通过二硫键与VH-CH1连接的轻链)。F(ab)'2可以在温和条件下还原，以破坏铰链区中的二硫键，从而将(Fab')2二聚体转化为Fab'单体。Fab'单体本质上是具有部分铰链区的Fab(参见《基础免疫学(Fundamental Immunology)》，W.E.Paul编辑，Raven出版社，纽约(1993)，以获得其他抗体片段的更详细描述)。尽管根据完整抗体的消化来定义各种抗体片段，但是本领域普通技术人员将理解，可以通过化学或利用重组DNA方法从头合成此类Fab’片段。因此，本文所用的术语抗体也可包括通过修饰完整抗体或使用重组DNA方法从头合成的抗体片段，包括但不限于Fab'2、IgG、IgM、IgA、IgE、scFv、dAb、纳米抗体、单抗体和双抗体。在一些实施方案中，抗体包括但不限于Fab'2、IgG、IgM、IgA、IgE和单链抗体，例如，其中可变重链和可变轻链(直接或通过肽接头)连接在一起以形成连续多肽的单链Fv(scFv)抗体。
如本文所用，术语“抗原结合位点”或“结合部分”通常是指参与抗原结合的抗体的一部分。抗原结合位点可以由重(“H”)链和/或轻(“L”)链的N末端可变(“V”)区的氨基酸残基形成。在重链和轻链的V区域内的三个高度发散的拉伸片段称为“高变区”，它们位于更为保守的侧翼片段之间，称为“框架区域”或“FR”。因此，本文所用的术语“FR”通常是指天然存在于免疫球蛋白中的高变区之间和附近的氨基酸序列。在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中彼此相对布置，以形成抗原结合的“表面”。该表面可以介导靶抗原的识别和结合。重链和轻链中的每一个的三个高变区被称为“互补决定区”或“CDR”，并且被表征，例如Kabat等人《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences ofproteins of immunological interest)》第4版，美国卫生与公共服务部，公共卫生服务，马里兰州贝塞斯达(1987)。
在一些实施方案中，本文使用的抗体及其片段可以是双特异性的。双特异性抗体或其片段可以具有各种构型。例如，双特异性抗体可以类似于单个抗体(或抗体片段)，但是具有两个不同的抗原结合位点(可变区)。在各种实施方案中，双特异性抗体可以通过化学技术(Kranz等人(1981)Proc.Natl.Acad.Sci，美国，78:5807)，通过“多瘤(polyoma)”技术(参见例如美国专利号4,474,893)，或通过重组DNA技术。在一些实施方案中，本文所用的双特异性抗体可具有针对至少两个不同表位的结合特异性，其中至少一个是肿瘤抗原。在一些实施方案中，抗体及其片段也可以是异抗体。异种抗体是两个或多个抗体或连接在一起的抗体结合片段(例如Fab)，每种抗体或片段具有不同的特异性。
如本文所用，术语“同源性”、“同源的”或“序列同一性”通常是指两个或更多个多核苷酸序列之间或两个或更多个多肽序列之间的序列相似性或互换性。使用程序(例如Emboss Needle或BestFit)确定两个不同氨基酸序列之间的序列同一性、相似性或同源性时，可以使用默认设置，也可以选择适当的评分矩阵(诸如blosum45或blosum80)进行优化同一性，相似性或同源性得分。在一些实施方案中，同源的多核苷酸是在严格条件下杂交并且与这些序列相比具有至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％甚至100％的序列同一性的那些多核苷酸。当具有相当长度的序列最优对齐时，同源的多肽具有至少80％或至少90％或至少95％或至少97％或至少98％或至少99％的序列同一性。
在多核苷酸序列的上下文中使用的术语“同一性百分比”和“同一性％”通常是指使用标准化算法比对的至少两个多核苷酸序列之间残基匹配的百分比。这样的算法可以以标准化且可再现的方式在被比较的序列中插入空位，以优化两个序列之间的比对，从而实现两个序列的更有意义的比较。同一性百分比可以在整个限定的多核苷酸序列的长度上测量，或者可以在较短的长度上，例如在从较大的限定的多核苷酸序列中获得的片段的长度上测量。应当理解，本文、表、附图或序列表中所示的序列所支持的任何片段长度都可以用于描述可以测量百分比同一性的长度。
在本文所鉴定的多肽序列的上下文中使用的术语“序列同一性百分比(％)”通常是指查询序列中与第二个参考多肽序列的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比在比对序列并引入空位之后，如果需要，可实现部分序列或其一部分，以实现最大百分比序列同一性，并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以以本领域技术范围内的各种方式来实现，例如，使用公开可用的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN、NEEDLE或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的合适参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。同一性百分比可以在整个确定的多肽序列的长度上测量，或者可以在较短的长度上，例如，在从较大的确定的多肽序列中获得的片段的长度上测量。应当理解，本文、表、附图或序列表中所示的序列所支持的任何片段长度都可以用于描述可以测量百分比同一性的长度。
如本文所用，术语“宿主细胞”通常包括个体细胞、细胞系或细胞培养物，其可以是或已经是本申请质粒或载体的受体、包含本申请的多核苷酸、表达本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白)。宿主细胞可以包括单个宿主细胞的后代。由于自然、偶然或故意的突变，后代不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态上或在总DNA补体的基因组上)。宿主细胞可包括在体外用本申请的载体转染的细胞。宿主细胞可以是细菌细胞(例如大肠杆菌)、酵母细胞或其他真核细胞，例如COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、HEK293细胞、COS-1细胞、NS0细胞或骨髓瘤细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是HEK293细胞。
如本文所用，术语“载体(vector)”通常是指能够在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移至宿主细胞内和/或之间。该术语可以包括主要用于将DNA或RNA插入细胞的功能的载体，主要用于DNA或RNA的复制的功能的载体的复制，以及用于DNA或RNA的转录和/或翻译的功能的表达载体。还包括提供以上一种功能的载体。“表达载体”是多核苷酸，当引入合适的宿主细胞中时，其可以被转录并翻译成多肽。“表达系统”通常是指包含表达载体的合适宿主细胞，所述表达载体可以起作用以产生期望的表达产物。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以实现预期应用，包括但不限于疾病治疗的组合物(例如，本文所述的蛋白质异二聚体)的量。治疗有效量可以根据预期应用(例如，体外或体内)或受试者和所治疗的疾病状况(例如受试者的体重和年龄、疾病状况的严重程度、治疗方式)而变化。本领域普通技术人员可以容易地确定施用方式等。该术语还可以适用于将在靶细胞中诱导特定应答的剂量，例如靶向基因诱导、增殖和/或凋亡。具体剂量将根据所选择的特定化合物、要遵循的施用方案、是否与其他化合物组合施用、施用时间、施用组织以及施用所在的物理递送系统而变化。
术语“治疗(treatment或treating)”或“减轻(palliating)”或“改善(ameliorating)”在本文可互换使用，并且是指获得有益或期望结果的方法，包括但不限于治疗益处和/或预防益处。如本文所用，治疗益处通常是指根除或降低所治疗的潜在疾病的严重性。同样，通过消除、降低与潜在疾病有关的一种或多种生理症状的严重性或降低其发病率而获得治疗益处，从而尽管受试者可能仍患有潜在病症，但在受试者中观察到了改善。为了预防益处，可以将组合物施用于有患特定疾病风险的受试者，或施用于报告疾病的一种或多种生理症状的受试者，即使可能尚未对该疾病进行诊断。
如本文所用，术语“治疗效果”通常包括如上所述的治疗益处和/或预防益处。预防作用包括延迟或消除疾病或病症的出现、延迟或消除疾病或病症的症状的发作、减慢、停止或逆转疾病或病情的进展或其任何组合。
如本文所用，术语“共同施用”、“与……联合施用”及其语法等同物通常包括向动物施用两种或更多种药剂，使得该药剂和/或其代谢物同一时间均存在于受试者体内。共同施用包括以分开的组合物同时施用、以分开的组合物在不同时间施用或以两种试剂都存在的组合物施用。
术语“拮抗剂”和“抑制剂”在本文可互换使用，它们通常是指具有通过抑制靶蛋白的活性或表达而抑制靶蛋白的生物学功能的化合物。因此，术语“拮抗剂”和“抑制剂”是在靶蛋白的生物学作用的背景下定义的。尽管本文中优选的拮抗剂与靶标特异性相互作用(例如结合)，但通过与靶标蛋白为其成员的信号转导途径的其他成员相互作用而抑制靶标蛋白生物学活性的化合物也明确地包括在该定义内。被拮抗剂抑制的优选的生物活性与肿瘤的发生、生长或扩散有关。
如本文所用，术语“激动剂”通常是指具有通过抑制或增强靶蛋白的活性或表达来启动或增强靶蛋白的生物学功能的能力的化合物。因此，术语“激动剂”是在靶多肽的生物学作用的背景下定义的。尽管本文中优选的激动剂与靶标特异性相互作用(例如结合)，但通过与靶标多肽为成员的信号转导途径的其他成员相互作用而引发或增强靶标多肽的生物学活性的化合物也被特别地包括在这个定义中。
如本文所用，术语“试剂”或“生物活性剂”通常是指生物、药物或化学化合物或其他部分。非限制性实例包括简单或复杂的有机或无机分子、肽、蛋白质、寡核苷酸、抗体、抗体衍生物、抗体片段、维生素衍生物、碳水化合物、毒素或化学治疗化合物。可以合成各种化合物，例如小分子和寡聚物(例如寡肽和寡核苷酸)，以及基于各种核心结构的合成有机化合物。另外，各种天然来源可以提供用于筛选的化合物，诸如植物或动物提取物等。
如本文所用，术语“抗癌剂”、“抗肿瘤剂”或“化学治疗剂”通常是指可用于治疗赘生性疾病的任何药剂。一类抗癌剂包括化学治疗剂。
如本文所用，术语“化学疗法”通常是指通过各种方法向癌症患者施用一种或多种化学治疗药物和/或其他试剂，所述方法包括静脉内、口服、肌内、腹膜内、膀胱内、皮下、经皮、经颊、或吸入或栓剂形式。
如本文所用，术语“细胞增殖”通常是指细胞数目由于分裂而改变的现象。例如，细胞增殖可导致细胞数量增加。该术语还包括细胞生长，通过该细胞生长，细胞形态已与增殖信号一致地改变(例如，大小增加)。
如本文所用，术语“体内”通常是指在受试者体内发生的事件。
如本文所用，术语“体外”通常是指发生在受试者体外的事件。例如，体外测定法涵盖在受试者外部进行的任何测定法。体外测定法包括使用死细胞或活细胞的基于细胞的测定法。体外测定法还包括无细胞测定法，其中不使用完整细胞。
如本文所用，术语“干扰素”(IFN)通常是指宿主细胞响应病原体诸如病毒、细菌、寄生虫或肿瘤细胞的存在而产生和释放的信号蛋白。干扰素有三种主要类型，即I型、II型和III型，其中I型干扰素可包括IFN-α和IFN-β，而IFN-α可进一步包含IFN-α亚型，例如IFN-α2、IFN-α4等。I型干扰素可以抑制病毒复制，具有抗寄生虫活性，抑制细胞增殖，刺激免疫细胞的细胞毒活性，参与免疫调节并表现出抗肿瘤作用。II型和III型干扰素可包括IFN-γ、IFN-λ1(IL-29)、IFN-λ2(IL-28a)和IFN-λ3(IL-28b)。如本文所用，术语“干扰素”可包括全长干扰素或其片段(例如截短形式)或其变异体，基本上维持相应野生型干扰素的生物活性(例如具有相应野生型干扰素的生物活性的至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、甚至至少100％)。如本文所用，干扰素可以来自任何哺乳动物。在一些实施方案中，干扰素选自人、马、牛、鼠、猪、兔、猫、狗、大鼠、山羊、绵羊和非人灵长类动物。
如本文所用，术语“白介素”通常是指能够促进T和/或B淋巴细胞和/或造血细胞的发育和分化的分泌蛋白或信号传导分子。白细胞介素可以通过辅助CD4 T淋巴细胞以及单核细胞、巨噬细胞和内皮细胞合成。如本文所用，白介素(IL)可以包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、IL-34、IL-35和/或IL-36。如本文所用，术语“白介素”可以包括全长白介素，或基本上维持相应野生型白介素的生物学活性(例如，具有相应野生型白介素生物活性至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或甚至至少100％的生物活性)的片段(例如，截短形式)或其变体。本文所用的白介素可以来自任何哺乳动物。在一些实施方案中，白介素选自人、马、牛、鼠、猪、兔、猫、狗、大鼠、山羊、绵羊和非人灵长类动物。在一些实施方案中，白介素可以是突变形式，例如对其受体的亲和力增加或降低。在特定的实施方案中，白介素可以是超级IL-2(也称为sIL2，参见Nature 484，529-533，2012年4月26日)，可以通过修饰IL-2以增加其对IL-2Rβ的结合亲和力获得。sIL-2的突变主要位于细胞因子的核心，分子动力学模拟表明，进化的突变使IL-2稳定下来，从而降低了IL-2Rβ结合位点螺旋的柔韧性，成为类似于受体的最佳构象。当绑定到CD25时。与IL-2相比，sIL-2诱导了细胞毒性T细胞的优异扩增，从而提高了体内抗肿瘤反应，并按比例减少了T调节细胞的扩增并减少了肺水肿。
如本文所用，术语“抗HER2/neu抗体”通常是指特异性或优先结合HER2/neu受体的抗体。例如，抗HER2/neu抗体或抗HER2抗体可以是曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“抗EGFR抗体”通常是指特异性或优先结合EGFR的抗体。在某些情况下，抗EGFR抗体可以与EGFR的突变形式结合(例如EGFR变体III(也称为EGFRvIII)，这是EGFR最常见的细胞外结构域突变，这种突变会导致EGFR基因的外显子2–7缺失，其特征是具有不依赖配体的组成活性的截短的胞外域。例如，抗EGFR抗体可以是西妥昔单抗、Mab806或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“受试者”通常是指人类或非人类动物，包括但不限于猫、狗、马、猪、牛、绵羊、山羊、兔、小鼠、大鼠或猴。
如本文所用，术语“抗EGFR家族抗体”通常是指特异性结合表皮生长因子受体家族成员的抗体。例如，它可以是与ErbB-1(也称为表皮生长因子受体(EGFR))、ErbB-2(在人类中也称为HER2和在啮齿动物中为neu)、ErbB-3(也称为(例如HER3)和/或ErbB-4(也称为HER4)。抗EGFR家族抗体的实例包括但不限于以下抗体中的一种或多种：C6.5、C6mL3-9、C6MH3-B1、C6-B1D2、F5、HER3.A5、HER3.F4、HER3。H1、HER3.H3、HER3.E12、HER3.B12、EGFR.E12、EGFR.C10、EGFR.B11、EGFR.E8、HER4.B4、HER4.G4、HER4.F4、HER4.A8、HER4.B6、HER4.D4、HER4.D7、HER4.D11、HER4.D12、HER4.E3、HER4.E7、HER4.F8和HER4.C7等，也参见例如美国专利公开US 2006/0099205 A1和US 2004/0071696 A1，其通过引用并入本文。
如本文所用，术语“单链Fv”(“sFv”或“scFv”)多肽通常是指共价连接的VH(重链可变区)：VL(轻链可变区)异二聚体，其可以表达为包括直接连接或通过肽编码接头连接的VH和VL编码序列的核酸。(参见Huston等人，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，85:5879-5883(1988))。
当与癌细胞一起使用时，术语“抑制生长和/或增殖”通常是指癌细胞的生长速率和/或增殖速率的降低。例如，这可以包括癌细胞的死亡(例如，通过凋亡)。在一些实施方案中，该术语还可以指抑制实体瘤的生长和/或增殖和/或诱导肿瘤尺寸减小或消除。
如本文所用，术语“癌细胞表面标志物”或“与癌细胞相关的标志物”通常是指在癌细胞上排他地或优先或差异表达和/或被发现与癌细胞相关并从而提供对癌症优先或特异的靶标的生物分子，诸如蛋白质、碳水化合物、糖蛋白等。在一些实施方案中，与生物中的任何其他细胞相比，优先表达可以是优先表达，或在生物的特定区域内(例如在特定器官或组织内)的优先表达。
如本文所用，术语“成员”通常是指作为蛋白质异二聚体的一种组分的多肽、亚基或部分。
如本文所用，术语“Fc区”通常是指免疫球蛋白重链恒定区的羧基末端部分或其类似物或能够结合Fc受体的部分。众所周知，每个免疫球蛋白重链恒定区包含四个或五个结构域。域的命名顺序如下：CH1-铰链-CH2-CH3(-CH4)。CH4存在于没有铰链区的IgM中。可用于本申请的免疫球蛋白重链恒定区可包含免疫球蛋白铰链区，并且还可包含CH3结构域。例如，免疫球蛋白重链恒定区可以包含免疫球蛋白铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施方案中，根据本申请的Fc区由铰链-CH2-CH3结构域组成。
如本文所用，术语“与...复合”通常是指一个成员/亚基与分子(例如抗体)的另一成员/亚基的缔合(例如结合)。例如，轻链可以与重链复合以形成靶向部分。
如本文所用的术语“结合特异性”通常是指与给定靶标特异性结合(例如，与之免疫反应)的能力(同时不结合或基本上不结合非靶标)。本申请的靶向部分可以是单特异性的，并且包含一个或多个特异性结合靶标的结合位点，或者可以是多特异性的(例如，双特异性或三特异性的)，并且包含两个或多个特异性结合相同或不同靶标的结合位点。
如本文所用，术语“与……缔合(associates with或associated with)”通常是指一个实体与另一实体物理缔合或接触。例如，蛋白质异二聚体的第一成员可以与第二成员共价或非共价“缔合”。在一些实施方案中，蛋白质异二聚体的第一成员通过界面与第二成员缔合，并且该界面分别由来自第一成员和第二成员的氨基酸残基(即界面残基)形成。
本文所用的术语“修饰”通常是指对多肽骨架的任何操纵(例如氨基酸序列)或多肽的任何翻译后修饰(例如糖基化)。例如，修饰是与相应野生型多肽的序列相比。修饰可以是一个或多个氨基酸的取代、添加和/或缺失(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)。
如本文所用，术语“节孔修饰(knob-and-hole modification)”通常是指在多肽的界面处引入修饰以形成凸起(节修饰)，并且在另一多肽的相应位置处引入修饰以形成空腔(孔修饰)，并且凸出的大小与空腔的大小相同或相似。例如，节孔修饰使得能够形成异二聚体，同时抑制同二聚体的形成。参见美国专利号5,731,168；美国专利号7,695,936；Ridgway等人，Prot Eng 9，617-621(1996)和Carter，J Immunol Meth 248，7-15(2001)。因此，本文所用的术语“节修饰”通常是指在多肽界面处的修饰，以用具有较大侧链的氨基酸(例如丙氨酸或苏氨酸)替换具有较小侧链的氨基酸(例如酪氨酸或色氨酸)形成凸起。如本文所用，术语“孔修饰”通常是指在另一多肽的相应位置进行的修饰，以用具有较小侧链的氨基酸(例如酪氨酸或色氨酸)替换具有较大侧链的氨基酸(例如丙氨酸或苏氨酸)形成空腔。节修饰和孔修饰可以通过改变编码多肽的核酸来进行，例如通过改变核酸。通过位点特异性诱变，或通过肽合成。在一个具体的实施方案中，节修饰在Fc区的两个亚基之一中包含氨基酸取代Y349C和T366W，而孔修饰在二者的另一个中包含氨基酸取代D356C、T366S、L368A和Y407V Fc区的亚基。
如本文所用，术语“HEK293细胞”通常是指衍生自转化的人胚肾(HEK)细胞的克隆分离物。HEK293菌株是293细胞系的一种变体，在单层培养中表现出更好的粘附性，并易于用于噬斑测定和其他锚定依赖性应用。它们已经适应于在无血清培养基，例如293SFM II中悬浮培养。
如本文所用，术语“CHO细胞”通常是指中国仓鼠卵巢细胞，其是非分泌的、永生的成纤维细胞。CHO细胞很少分泌CHO内源蛋白，因此有利于靶蛋白的分离和纯化。
如本文所用，术语“COS-1细胞”通常是指衍生自猴肾组织的成纤维细胞样细胞系。COS细胞是通过用某种SV40病毒永生化CV-1细胞而获得的，该病毒可以产生较大的T抗原，但在基因组复制方面存在缺陷。常用的COS细胞系的一种形式是COS-1。
如本文所用，术语“NS0细胞”通常是指源自非分泌型鼠骨髓瘤的模型细胞系。该细胞系是由NSI/1的亚系产生的胆固醇依赖性细胞系。
如本文所用，术语“融合蛋白”通常是指包含直接或间接(例如，经由接头)融合至异源多肽的氨基酸序列的多肽的氨基酸序列或由其组成的多肽(即与前一个多肽或其结构域无关的多肽)。
如本文所用，术语“C末端”通常是指多肽的羧基末端。
如本文所用，术语“N末端”通常是指多肽的氨基末端。
如本文所用，术语“EGFR”通常是指表皮生长因子受体。例如，参见Carpenter等人，Ann.Rev.Biochem.56:881-914(1987)，包括其天然存在的突变体形式。
如本文所用，术语“EGFR突变体”通常是指EGFR的突变形式(例如EGFR变体III(也称为EGFRvIII)，其是EGFR的最常见的细胞外结构域突变，该突变导致EGFR基因的外显子2-7的缺失，其特征是具有不依赖配体的组成活性的截短的胞外域。
如本文所用，术语“HER2/neu”通常是指人HER2蛋白，例如在Semba等人，PNAS(USA)82:6497-6501(1985)和Yamamoto等人，Nature 319:230-234(1986)(GenBank登录号X03363)。
如本文所用，术语“GPC3”通常是指由基因glypican 3(NCBI数据库基因ID：2719)编码的蛋白质，其是肝癌的早期标记。GPC3在肝细胞癌中高表达，并在早期肝细胞癌患者的组织中检测到。
如本文所用，术语“抗GPC3抗体”通常是指特异性或优先结合GPC3的抗体。例如，抗GPC3抗体可以是codrituzumab或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“FAP”通常是指成纤维细胞活化蛋白(FAP)。FAP存在于肿瘤基质成纤维细胞中，并在细胞表面起作用。FAP是膜丝氨酸肽酶，膜丝氨酸肽酶是II型丝氨酸蛋白酶家族的成员，具有二肽基肽酶和胶原酶活性。
如本文所用，术语“抗FAP抗体”通常是指特异性或优先结合FAP的抗体。例如，抗FAP抗体可以是抗体28H1或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“Muc1”通常是指由muc1基因编码的糖蛋白。Muc1主要存在于乳腺、胰腺、卵巢等的上皮组织和器官中。它在癌症上皮细胞表面上高表达，因此成为免疫应答的靶标。
如本文所用，术语“抗Muc1抗体”通常是指特异性或优先结合Muc1的抗体。例如，抗Muc1抗体可以是抗体5E5，抗体5E5的人源化形式或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“MUC5AC”通常是指粘蛋白MUC5AC。MUC5AC在结直肠癌、胃印戒细胞癌、结肠癌、直肠癌和胰腺癌中高表达。
如本文所用，术语“抗MUC5AC抗体”通常是指特异性或优先结合MUC5AC的抗体。例如，抗MUC5AC抗体可以是抗体恩斯妥昔单抗或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“间皮素”通常是指分子量为40KD的细胞表面糖蛋白。间皮素在各种肿瘤组织(例如早期胰腺肿瘤)中高表达，并且可以在正常胸膜、心包和腹膜间皮细胞中表达。
如本文所用，术语“抗间皮素抗体”通常是指特异性或优先结合间皮素的抗体。例如，抗间皮素抗体可以是抗体阿马妥昔单抗、抗体阿马妥昔单抗的人源化形式或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“趋化因子”通常是指一些能够将白细胞吸引到感染部位的低分子量(大多数为8-10KD)蛋白质。例如，趋化因子蛋白的共同结构特征可以包括小分子量和在确保三级结构的保守位置的四个半胱氨酸残基。一些趋化因子参与促进炎症反应，而一些趋化因子则参与正常修复或发育过程中的细胞迁移控制。
如本文所用，术语“淋巴因子”通常是指由活化的淋巴细胞产生的激素样多肽，其可以作用于相应的靶细胞，从而引起靶细胞的特征或功能的改变。淋巴细胞通过淋巴因子作用于邻近或远处的靶细胞，以实现免疫调节和免疫作用。常见的淋巴因子包括但不限于单核细胞-巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、白细胞运动抑制因子(LIF)、自然杀伤细胞细胞毒素(NKCF)和淋巴毒素(LB)。
如本文所用，术语“肿瘤坏死因子”通常是指由活化的巨噬细胞、NK细胞和T淋巴细胞产生的肿瘤坏死因子。其中，由巨噬细胞产生的TNF称为TNF-α，由淋巴毒素产生的T淋巴细胞(lymphotoxin，LT)称为TNF-β。
如本文所用，术语“免疫球蛋白”通常是指由基本上由免疫球蛋白基因编码的一种或多种多肽组成的蛋白质。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数个免疫球蛋白可变区基因。免疫球蛋白的一种形式构成抗体的基本结构单元。这种形式是四聚体，由两对相同的免疫球蛋白链组成，每对具有一条轻链和一条重链。在每对中，轻链和重链可变区共同负责与抗原的结合，恒定区负责抗体效应子的功能。除抗体之外，免疫球蛋白可以多种其他形式存在，包括例如Fv、Fab、Fab'和(Fab')2。
如本文中所使用的，术语“框内融合”通常是指以维持原始ORF的正确阅读框的方式，两个或更多个开放阅读框(ORF)的连接以形成连续的更长的ORF。
如本文所用，术语“接头”通常是指连接或连接两个多肽序列，例如连接两个多肽结构域的合成氨基酸序列。接头可通过肽键连接两个氨基酸序列。在一些实施方案中，本申请的接头将免疫调节剂以线性序列连接至第二Fc区。
如本文所用，术语“位于其N末端”通常是指位于另一分子(例如另一多肽)的N末端位置。例如，根据本申请，两个或更多个免疫调节剂可以位于第二Fc区的N末端。
如本文所用，术语“氨基酸取代”通常是指多肽的特定位置上的一个氨基酸被另一种氨基酸取代。
如本文所用，术语“KABAT号的EU索引”通常是指对应于根据Kaba t等人，Ann.NYAcad,Sci.190:382-391和Kabat,E.A.等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of proteins of immunological interest)》第五版，美国卫生和人类服务部，NIH出版号91-3242。
如本文所用，术语“分离的多核苷酸”通常是指从天然环境分离或人工合成的任意长度的核苷酸的聚合形式，该核苷酸是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。
如本文所用，术语“蛋白质混合物”通常是指两种或更多种蛋白质的混合物。
如本文所用，术语“同二聚体”通常是指由两个相同的单体(例如两个相同的成员或亚基)形成的分子。两种单体可以通过共价和/或非共价相互作用彼此聚集、络合或缔合。例如，蛋白质同二聚体的两个单体可以通过来自所述两个单体中的每一个的界面氨基酸残基之间的相互作用而彼此缔合。
本文所用的术语“基本上不包含”通常是指组合物(例如混合物)几乎不包含或几乎不包含任何物质。例如，所述物质以例如小于10％、小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％、小于1％、小于0.5％、小于0.1％或小于0.01％的百分比存在。
如本文所用，术语“药学上可接受的赋形剂”通常是指与药物施用相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、等渗剂和吸收延迟剂等。
蛋白质异二聚体、蛋白质混合物、分离的多核苷酸、载体和宿主细胞
一方面，本申请提供了蛋白质异二聚体。蛋白质异二聚体可包含第一成员和不同于第一成员的第二成员。第一成员可包含轻链和包含第一Fc区的重链，并且轻链可与重链复合以形成表现出对肿瘤抗原的结合特异性的靶向部分。第二成员可包含多肽，并且多肽包含与第二Fc区融合的免疫调节剂。第一成员可以与第二成员可以通过第一Fc区与第二Fc区的复合而缔合，以形成异二聚体。
在一些情况下，本申请的蛋白质异二聚体可以是蛋白质复合物。该复合物可包含至少三个多肽链，例如第一多肽链、第二多肽链和第三多肽链。在一些实施方案中，复合物由三个多肽链组成或基本上由三个多肽链组成。例如，第一多肽链可包含特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链，第二多肽链可包含特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链。重链可包含第一Fc区。重链(即第一多肽链的重链)和轻链(即第二多肽链的轻链)可复合形成蛋白质异二聚体的第一成员。第三多肽链可以包含(例如从N端至C端)一种或多种任选地经由一个或多个接头与第二Fc区融合的免疫调节剂。第三多肽链可以是蛋白质异二聚体的第二成员。第一成员可与第二成员可以通过第一Fc区与第二Fc区的复合而缔合，以形成异二聚体。
例如，本申请的蛋白质异二聚体可以是蛋白质复合物，该复合物可以包含(1)对肿瘤抗原具有特异性的抗体的重链和轻链；(2)融合蛋白，其从N末端到C末端包含一种或多种任选地经由一个或多个接头与抗体Fc区融合的免疫调节剂。
第一Fc区可包含第一修饰，和/或第二Fc区可包含第二修饰，其中第一修饰和/或第二修饰可比包含节修饰和孔修饰的节孔修饰更有效地促进第一成员和第二成员之间的异二聚化。例如，第一修饰可以在第一Fc区的CH3域中，并且第二修饰可以在第二Fc区的CH3域中。例如，第一修饰和/或第二修饰分别与其相应的野生型Fc区的序列相比。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，而第二Fc区不包含任何修饰，并且所述第一修饰比包含节修饰和孔修饰的节孔修饰更有效地促进第一成员和第二成员之间的异二聚化。
在一些实施方案中，第二Fc区包含第二修饰，而第一Fc区不包含任何修饰，并且所述第二修饰比包含节修饰和孔修饰的节孔修饰更有效地促进第一成员和第二成员之间的异二聚化。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，其中所述第一修饰和所述第二修饰比包含节修饰和孔修饰的节孔修饰更有效地促进第一成员和第二成员之间的异二聚化。
在一些实施方案中，第一修饰不同于节修饰或孔修饰，和/或第二修饰不同于节修饰或孔修饰。例如，第一修饰可以与节修饰或孔修饰不同，而第二修饰与孔修饰相同。在某些情况下，第一修饰与节修饰相同，而第二修饰与节修饰或孔修饰不同。在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，并且第一修饰和第二修饰均与节修饰或孔修饰相同。
在一些实施方案中，第一修饰包含在位置T366处的氨基酸取代，并且在选自以下的一个或多个位置处的氨基酸取代：Y349、F405、K409、D399、K360、Q347、K392和S354，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第一修饰包含选自Y349C、Y349D、D399S、F405K、K360E、K409A、K409E、Q347E、Q347R、S354D、K392D和T366W的氨基酸取代，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第一修饰包含2-5个氨基酸取代。
在一些实施方案中，第一修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)Y349和T366；2)Y349、T366和F405；3)Y349、T366和K409；4)Y349、T366、F405、K360和Q347；5)Y349、T366、F405和Q347；6)Y349、T366、K409、K360和Q347；7)Y349、T366、K409和Q347；8)T366、K409和K392；9)T366和K409；10)T366、K409、Y349和S354；11)T366和F405；12)T366、F405和D399；13)T366、F405、Y349和S354，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第一修饰包含选自以下组中任意一组氨基酸取代：1)Y349C和T366W；2)Y349C、T366W和F405K；3)Y349C、T366W和K409E；4)Y349C、T366W和K409A；5)Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；6)Y349C、T366W、F405K和Q347R；7)Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；8)Y349C、T366W、K409A和Q347R；9)T366W、K409A和K392D；10)T366W和K409A；11)T366W、K409A和Y349D；12)T366W、K409A、Y349D和S354D；13)T366W和F405K；14)T366W、F405K和D399S；15)T366W、F405K和Y349D；16)T366W、F405K、Y349D和S354D，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第二修饰包括在位置T366、L368和Y407处的氨基酸取代，以及在一个或多个选自D356、D399、E357、F405、K360、K392、K409和Q347的位置的氨基酸取代，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第二修饰所包含的氨基酸取代选自D356C、D399S、E357A、F405K、K360E、K392D、K409A、L368A、L368G、Q347E、Q347R、T366S、Y407A和Y407V，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第二修饰包含在4-6个位置处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，第二修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)D356、T366、L368、Y407和F405；2)D356、T366、L368和Y407；3)D356、T366、L368、Y407和Q347；4)D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；5)D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；6)D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；7)T366、L368、Y407、D399和F405；8)T366、L368、Y407和F405；9)T366、L368、Y407、F405和E357；10)T366、L368、Y407和K409；11)T366、L368、Y407、K409和K392；12)T366、L368、Y407、K409和E357，其中氨基酸的位置根据KABAT值的EU索引确定。
在一些实施方案中，第二修饰包含选自以下组中任意一组氨基酸取代：1)D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；2)D356C、T366S、L368A和Y407V；3)D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；4)D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E和Q347E；5)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；6)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；7)T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；8)T366S、L368G、Y407A和F405K；9)T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；10)T366S、L368A、Y407V和K409A；11)T366S、L368A、Y407V、K409A和K392D；12)T366S、L368G、Y407A和K409A；13)T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A，其中氨基酸的位置根据KABAT值的EU索引确定。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，并且第一修饰和第二修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：第一修饰：Y349和T366；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；2)第一修饰：Y349、T366和F405；第二修饰：D356、T366、L368和Y407；3)第一修饰：Y349、T366和K409；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；4)第一修饰：Y349、T366、F405、K360和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和Q347；5)第一修饰：Y349、T366、F405和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；6)第一修饰：Y349、T366、K409、K360和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；7)第一修饰：Y349、T366、K409和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；8)第一修饰：T366、K409和K392；第二修饰：T366、L368、Y407、D399和F405；9)第一修饰：T366和K409；第二修饰：T366、L368、Y407和F405；10)第一修饰：T366、K409和Y349；第二修饰：T366、L368、Y407、F405和E357；11)第一修饰：T366、K409、Y349和S354；第二修饰：T366、L368、Y407、F405和E357；12)第一个修饰：T366和F405；第二修饰：T366、L368、Y407和K409；13)第一修饰：T366、F405和D399；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和K392；14)第一修饰：T366、F405和Y349；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和E357；15)第一修饰：T366、F405、Y349和S354；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和E357；其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中、第一Fc区包含第一修饰、第二Fc区包含第二修饰、其中第一修饰和第二修饰包含选自以下组中任意一组氨基酸取代：1)第一修饰：Y349C和T366W；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；2)第一修饰：Y349C、T366W和F405K；第二修饰：D356C、T366S、L368A和Y407V；3)第一修饰：Y349C、T366W和K409E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；4)第一修饰：Y349C、T366W和K409A；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；5)第一修饰：Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；6)第一修饰：Y349C、T366W、F405K和Q347R；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E和Q347E；7)第一修饰：Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；8)第一修饰：Y349C、T366W、K409A和Q347R；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；9)第一修饰：T366W、K409A和K392D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；10)第一修饰：T366W和K409A；第二修饰：T366S、L368G、Y407A和F405K；11)第一修饰：T366W、K409A和Y349D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；12)第一修饰：T366W、K409A、Y349D和S354D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；13)第一修饰：T366W和F405K；第二修饰：T366S、L368A、Y407V和K409A；14)第一修饰：T366W、F405K和D399S；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和K392D；15)第一修饰：T366W和F405K；第二修饰：T366S、L368G、Y407A和K409A；16)第一修饰：T366W、F405K和Y349D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；17)第一修饰：T366W、F405K、Y349D和S354D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，第一修饰包含氨基酸取代T366W和K409A，并且第二修饰包含氨基酸取代T366S、L368G、Y407A和F405K，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，节孔修饰包含节修饰和孔修饰，其中节修饰包含氨基酸取代Y349C和T366W，并且孔修饰包含氨基酸取代D356C、T366S、L368A和Y407V，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，当在哺乳动物细胞中表达时，本申请的蛋白质异二聚体的产率比对照蛋白质高至少10％(例如至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％或更高)。对照蛋白与蛋白质异二聚体的不同之处在于，对照蛋白：i)在第一Fc区中包含节修饰，ii)在第二Fc区中包含孔修饰，并且iii)不同时包含第一修饰和第二修饰。哺乳动物细胞可以选自HEK293细胞、CHO细胞、COS-1细胞和NS0细胞。在一些实施方案中，节修饰包含氨基酸取代Y349C和T366W，并且孔修饰包含氨基酸取代D356C、T366S、L368A和Y407V，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
在一些实施方案中，包含在第二成员中的多肽是融合蛋白，并且将免疫调节剂的C端直接或间接地融合到第二Fc区的N端以形成融合蛋白。在一些实施方案中，免疫调节剂的C末端间接地融合至第二Fc区的N末端。例如，第二Fc区可以通过接头在框内与免疫调节剂融合。接头可以是例如通过肽键连接或连接两个多肽序列的合成氨基酸序列。在一些实施方案中，接头是包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20，21、22、23、24、25个或更多个氨基酸的肽。例如，接头可包含1-10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)、1-15个氨基酸(例如1-11、12、13、14、15个氨基酸)、1-20个氨基酸、1-30个氨基酸或更多。在一些实施方案中，接头包含如SEQ ID NO：79或88所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头对蛋白水解具有抗性或对蛋白水解基本具有抗性。
在一些实施方案中，肿瘤抗原选自EGFR、EGFR突变体、HER2/neu、GPC3、FAP、Muc1、MUC5AC和间皮素。
靶向部分的轻链可含有CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向部分的轻链包含可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向部分的轻链包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应氨基酸序列所包含的序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
靶向部分的重链可含有CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体重链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向部分的重链包含可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体重链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向部分的重链含有与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应氨基酸序列中所包含的序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链含有CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；靶向部分的重链含有CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链含有可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；靶向部分的重链含有可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向部分的轻链含有氨基酸序列，该氨基酸序列包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；靶向部分的重链含有氨基酸序列，该氨基酸序列包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
特异性针对肿瘤抗原的抗体可以选自抗EGFR、抗EGFR突变体、抗HER2/neu、抗GPC3、抗FAP、抗Muc1、抗MUC5AC和抗间皮素。在一些实施方案中，抗EGFR抗体是西妥昔单抗。在一些实施方案中，抗EGFR突变体抗体是抗EGFR变体III抗体，例如Mab806。在一些实施方案中，抗HER2/neu抗体是曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。在一些实施方案中，抗GPC3抗体是抗体曲妥珠单抗。在一些实施方案中，抗FAP抗体是抗体28H1。在一些实施方案中，抗Muc1抗体是抗体5E5、或抗体5E5的人源化形式。在一些实施方案中，抗MUC5AC抗体是抗体恩斯妥昔单抗。在一些实施方案中，抗间皮素抗体是抗体阿马妥昔单抗、或抗体阿马妥昔单抗的人源化形式。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：101所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：102所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：103所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：104所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：37所示。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR特异性结合，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：105所示，CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO：106所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：107所示。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR特异性结合，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：108所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：39所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链包含轻链CDR1-3，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：101所示，轻链CDR2如SEQ ID NO：102所示，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：103所示；第一成员的重链包含重链CDR1-3，重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：105所示，重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：106所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：107所示。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR特异性结合，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：104所示；第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：108所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：37所示；第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：39所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：109所示，CDR2如SEQ ID NO：110所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：111所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：112所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：53所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：113所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：114所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：115所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：116所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：55所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链包含轻链CDR1-3，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：109所示，氨基轻链CDR2的氨基酸序列如SEQID NO：110所示，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：111所示；第一成员的重链包含重链CDR1-3，重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：113所示，重链CDR2的氨基酸序列如SEQ IDNO：114所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：115所示。
在一些实施方案中，靶向部分与EGFR突变体特异性结合，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：112所示；第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：116所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：53所示；第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：55所示。
在一些实施方案中，靶向部分与HER2/neu特异性结合，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：117和125，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：118和126，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：119和127。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：120和128。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：45和49。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：121和129，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：122和130，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：123和131。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的抗体重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：124和132。。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：47和51。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的轻链包含轻链CDR1-3，轻链CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：117和125，氨基轻链CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：118和126，轻链CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：119和127；第一成员的重链包含重链CDR1-3，重链CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：121和129，重链CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：122和130，重链CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：123和131。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：120和128；第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：124和132。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：45和49；第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：47和51。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：133所示，CDR2的氨基酸序列为如SEQ ID NO：134所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：135所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：136所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：57所示。
在一些实施方案中，靶向部分与GPC3特异性结合，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：137所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：138所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：139所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：140所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：59所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的轻链包含轻链CDR1-3，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：133所示，轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：134所示，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：135所示；第一成员的重链包含重链CDR1-3，重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：137所示，重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：138所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：139所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：136所示；第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：140所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：57所示；第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：59所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：141所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：142所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：143所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：144所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：61所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：145所示，CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO：146所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：147所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：148所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：63所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链包含轻链CDR1-3，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：141所示，轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：142所示，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：143所示；第一成员的重链包含重链CDR1-3，重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：145所示，重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：146所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：147所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：148所示；第一成员的链包括重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：152所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：61中所示；第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：63所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的抗体轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：149所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：150所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：151所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的抗体轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：152所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：65所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：153所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：154所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：155所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：156所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：67所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的轻链包含轻链CDR1-3，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：149所示，轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：150所示，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：151所示；第一成员的重链包含重链CDR1-3，重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：153所示，重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：154所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：155所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：152所示；第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：156所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合Muc1，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：65所示；第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：67所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：165所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：166所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：167所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：168所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：73所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：169所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：170所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：171所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：172所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：75所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链包含轻链CDR1-3，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：165所示，轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：166所示，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：167所示；第一成员的重链包含重链CDR1-3，重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：169所示，重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：170所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：171所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：168所示；第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：172所示。
在一些实施方案中，所述靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：73所示；第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：75所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：157所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：158所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：159所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：160所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：69所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：161所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：162所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：163所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：164所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：71所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的轻链包含轻链CDR1-3，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：157所示，轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：158所示，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：159所示；第一成员的重链包含重链CDR1-3，重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：161所示，重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：162所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：163所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：160所示；第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：164所示。
在一些实施方案中，靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：69所示；第一成员的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：71所示。
在一些实施方案中，免疫调节剂增强免疫应答。能够增强免疫应答的免疫调节剂的实例包括但不限于IL-2、IFNα、IFNβ、IFNγ、IFNλ、肿瘤坏死因子(TNF)α、IL-12和IL-10。
在一些实施方案中，免疫调节剂降低免疫应答。能够降低免疫应答的免疫调节剂的非限制性实例包括IL-10和转化生长因子(TGF)-β。
在一些实施方案中，免疫调节剂是细胞因子。例如，免疫调节剂可以是选自干扰素、白介素、趋化因子、淋巴因子和肿瘤坏死因子的细胞因子。
在一些实施方案中，免疫调节剂是选自干扰素α、干扰素λ和干扰素β的干扰素。
在一些实施方案中，免疫调节剂是白介素，并且白介素包含白介素10、白介素2和/或超级白介素2。
在一些实施方案中，第一Fc区和第二Fc区来自免疫球蛋白的Fc区。例如，免疫球蛋白可以选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一些实施方案中，第一Fc区和第二Fc区来自免疫球蛋白的Fc区，并且免疫球蛋白是人IgG1。
在一些实施方案中，第一修饰和/或第二修饰与人IgG1的Fc区的野生型氨基酸序列相比。
在一些实施方案中，第二Fc区与免疫调节剂框内融合。
在一些实施方案中，包含在第二成员中的多肽包含两种或更多种免疫调节剂，该两种或更多种免疫调节剂彼此框内融合并且与第二Fc区融合，并且其中该两种或更多种免疫调节剂位于第二Fc区的N末端。在一些实施方案中，该两种或更多种免疫调节剂可以通过接头彼此框内融合和/或与第二Fc区融合。接头可以是例如通过肽键连接或链接两个多肽序列的合成氨基酸序列。在一些实施方案中，接头是包含例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19，20、21、22、23、24、25个或更多个氨基酸。该两种或更多种免疫调节剂可以是相同类型或可以是不同类型。例如，该两种或更多种免疫调节剂可以相同。在一些实施方案中，该两种或更多种免疫调节剂是白介素10。
在一些实施方案中，在第一成员的重链中，第一Fc区的氨基酸序列选自SEQ IDNO：1、4、5、6、7、9、11、13、15、17、19，21、22、24、26、27和29。
在一些实施方案中，第二成员中包含的免疫调节剂的氨基酸序列选自SEQ ID NO：173-180。
在一些实施方案中，第二成员中包含的第二Fc区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：2、3、8、10、12、14、16、18、20、23、25和28。
在一些实施方案中，第二成员中包含的多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO：77、80、82、84、86、89、91和97。
在一些实施方案中，第一成员中包含的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：37、45、49、53、57、61、65、69和73，。第一成员中包含的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：39、47、51、55、59、63、67、71和75，第二成员中包含的多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO：77、80、82、84、86、89、91和97。
在另一方面，本申请提供了一种蛋白质混合物，其包括：1)根据本申请的蛋白质异二聚体；和2)由蛋白质异二聚体的两个第一成员形成的第一同二聚体；3)由蛋白质异二聚体的第二成员中的两个形成的第二同二聚体。蛋白质混合物中蛋白质异二聚体的百分比可以为至少50％(例如至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％或更高)。
在一些实施方案中，在蛋白质混合物中，第二同二聚体的百分比小于第一同二聚体的百分比。例如，第一同二聚体的百分比可以比第二同二聚体的百分比高至少1.1倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.2倍、至少2.3倍、至少2.4倍、至少2.5倍、至少2.6倍、至少2.7倍、至少2.8倍至少2.9倍、至少3.0倍、至少3.1倍、至少3.2倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少7.0倍、至少8.0倍或更多。
在一些实施方案中，第二同二聚体在蛋白质混合物中的百分比为至多10％(例如至多0.0％、至多0.01％、至多0.1％、至多0.5％、至多1％、至多1.5％、至多2％、至多3％、至多4％、至多5％、至多6％、至多7％、至多8％、至多9％)。在一些实施方案中，蛋白质混合物基本上不包含第二同二聚体。
在另一方面，本申请提供了编码根据本申请的蛋白质异二聚体的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，分离的多核苷酸编码根据本申请的蛋白质异二聚体的亚基(例如成员)或片段。
可以使用本领域熟知的重组技术合成多核苷酸。例如，可通过使用自动化DNA合成仪合成多核苷酸。
标准的重组DNA和分子克隆技术包括以下描述的那些：Sambrook,J.、Fritsch,E.F.和Maniatis,T.《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)；冷泉港实验室出版社：冷泉港，(1989)(Maniatis)以及T.J.Silhavy、M.L.Bennan和L.W.Enquist，《基因融合实验(Experiments with Gene Fusions)》，冷泉港实验室，纽约冷泉港(1984)以及Ausubel,F.M.等人，《分子生物学的当前方案(Current Protocols inMolecular Biology)》，格林(Greene)出版协会和Wiley-Interscience出版(1987)。简而言之，可以由基因组DNA片段、cDNA和RNA制备本申请的核酸，所有这些都可以直接从细胞中提取或通过各种扩增方法重组产生，包括但不限于PCR和RT-PCR。
核酸的直接化学合成通常涉及将3'-封闭和5'-封闭的核苷酸单体按顺序添加到生长的核苷酸聚合物链的末端5'羟基上，其中每次添加均受生长链的末端5'羟基基团对添加单体的3'位置的亲核攻击的影响，添加单体通常是磷衍生物，例如磷酸三酯、亚磷酰胺等。参见，例如Matteuci等人，四面体通讯(Tet.Lett.)521:719(1980)；Caruthers等人的美国专利号4,500,707；以及Southern等人的美国专利号5,436,327和5,700,637。
在另一方面，本申请提供了包含本申请的分离的多核苷酸的载体。
载体可以是任何线性核酸、质粒、噬菌粒、粘粒、RNA载体、病毒载体等。病毒载体的非限制性实例可包括逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒。在一些实施方案中，载体是表达载体，例如噬菌体展示载体。
表达载体可适用于特定类型的宿主细胞而不适用于其他类型。例如，可以将表达载体引入宿主生物中，然后监测其存活力和载体中所含任何基因/多核苷酸的表达。
表达载体还可含有一种或多种选择标记基因，其在表达后赋予一种或多种表型性状，可用于选择或以其他方式鉴定携带表达载体的宿主细胞。真核细胞的合适选择标记的非限制性实例包括二氢叶酸还原酶和新霉素抗性。
可以通过多种已建立的技术将对象载体稳定地或瞬时地引入宿主细胞。例如，一种方法涉及氯化钙处理，其中通过钙沉淀物引入表达载体。也可以按照类似的步骤使用其他盐，例如磷酸钙。另外，可以使用电穿孔(即，施加电流以增加细胞对核酸的渗透性)。转化方法的其他实例包括显微注射、DEAE葡聚糖介导的转化和在乙酸锂存在下的热激。脂质复合物、脂质体和树状聚合物也可以用于转染宿主细胞。
在将异源序列引入宿主细胞后，可以实践多种方法来鉴定已将主题载体引入其中的宿主细胞。一种示例性的选择方法涉及传代培养单个细胞以形成单个菌落，然后测试所需蛋白质产物的表达。另一方法需要基于通过表达载体中包含的选择标记基因的表达所赋予的表型性状，选择含有异源序列的宿主细胞。
例如，可以通过诸如PCR、Southern印迹或Northern印迹杂交的方法来确认将本申请的各种异源序列引入宿主细胞。例如，可以从所得宿主细胞制备核酸，并且可以使用对目标序列具有特异性的引物通过PCR来扩增目标特异性序列。将扩增的产物进行琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳或毛细管电泳，然后用溴化乙锭、SYBR Green溶液等染色，或用UV检测法检测DNA。可替代地，可以在杂交反应中使用对目的序列具有特异性的核酸探针。特定基因序列的表达可以通过与PCR结合的反转录、Northern印迹杂交或使用与编码的基因产物具有反应性的抗体进行免疫测定来检测相应的mRNA来确定。示例性的免疫测定法包括但不限于ELISA、放射免疫测定法和夹心免疫测定法。
此外，可以通过异源序列编码的酶(例如酶标记)的酶促活性来证实将本申请的各种异源序列引入宿主细胞。可以通过本领域已知的多种方法来测定该酶。通常，可以通过所研究的酶反应的产物的形成或底物的转化来确定酶活性。该反应可以在体外或体内进行。
在另一方面，本申请提供了分离的宿主细胞，其包含本申请的分离的多核苷酸或载体，和/或能够表达蛋白质异二聚体，和/或编码蛋白质异二聚体的分离的多核苷酸，和/或本申请的蛋白质混合物。
在一些实施方案中，细胞表达本申请的异二聚体蛋白，分离的多核苷酸编码本申请的异二聚体蛋白和/或蛋白混合物。该细胞可以是真核细胞或原核细胞。可以用本申请的多核苷酸或载体转化或转染合适的细胞，并将其用于异二聚体蛋白和/或蛋白混合物的表达和/或分泌。例如，细胞可以是大肠杆菌细胞、其他细菌宿主细胞、酵母细胞或各种高等真核细胞(例如永生杂交瘤细胞、NS0骨髓瘤细胞、HEK293细胞、中国仓鼠卵巢细胞、HeLa细胞、COS细胞等)。在一些实施方案中，将编码蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白)的多核苷酸可操作地连接至适于在特定宿主细胞中表达的表达控制序列。
药物组合物
在另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含根据本申请的蛋白质异二聚体或根据本申请的蛋白质混合物。药物组合物可以进一步包含药学上可接受的赋形剂。
药学上可接受的赋形剂的实例包括但不限于惰性固体稀释剂和填充剂、稀释剂、无菌水溶液和各种有机溶剂、渗透促进剂、增溶剂和助剂。
在一些实施方案中，将药物组合物配制成用于口服施用、静脉内施用、肌内施用、在肿瘤部位的原位施用、吸入、直肠施用、阴道施用、透皮施用或经由皮下储存库施用。
该药物组合物可用于抑制肿瘤生长。例如，药物组合物可以抑制或延迟疾病的发展或进程，可以减小肿瘤大小(甚至基本上消除肿瘤)，并且可以缓解和/或稳定疾病状况。
以下描述的是非限制性的示例性药物组合物及其制备方法。
所述药物组合物可以是例如适于口服施用的形式，如片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、缓释制剂、溶液剂、混悬剂、用于肠胃外注射的无菌溶液剂、混悬剂或乳剂、用于局部施用、作为软膏或乳膏、或作为栓剂经直肠施用。药物组合物可以是适合于单次施用精确剂量的单位剂型。药物组合物可以进一步包含根据本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白质)或蛋白质混合物作为活性成分，并且可以包含常规的药物载体或赋形剂。此外，它可以包括其他药物或药剂、载体、佐剂等。
示例性的肠胃外施用形式包括但不限于活性蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白质)在无菌水溶液例如丙二醇水溶液或右旋糖溶液中的溶液或悬浮液。如果需要，这些剂型可以适当地用盐诸如组氨酸和/或磷酸盐缓冲。
在一些实施方案中，本申请提供了用于注射的药物组合物，其包含本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白质)或蛋白质混合物和适合于注射的药物赋形剂。组合物中试剂的成分和量如本文所述。
可以掺入本发明的药物组合物以通过注射施用的形式包括水性或油性混悬剂或乳化剂，使用芝麻油、玉米油、棉籽油或花生油、以及酏剂、甘露醇、右旋糖、或无菌水溶液和类似药物媒介。
盐水中的水溶液也可以用于注射。也可以使用乙醇、甘油、丙二醇、液态聚乙二醇等(及其合适的混合物)、环糊精衍生物和植物油。可以例如通过使用诸如卵磷脂的涂层来维持适当的流动性，以及通过使用表面活性剂，以在分散的情况下维持所需的粒径。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等，来预防微生物的作用。
可以通过将适量的本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白)或本申请的蛋白质混合物在合适的溶剂中与如上列举的各种其他成分掺入，根据需要，然后过滤灭菌来制备无菌注射溶液。通常，通过将各种灭菌的活性成分掺入无菌载体中来制备分散体，该无菌载体含有基本分散介质和根据需要或期望的上述列举的其他成分。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，某些期望的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其从先前的无菌过滤溶液中产生活性成分和任何其他期望成分的粉末。
在一些实施方案中，本申请提供了用于口服施用的药物组合物，其包含本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白质)或蛋白质混合物，以及适合于口服施用的药物赋形剂。
在一些实施方案中，本申请提供了用于口服施用的固体药物组合物，其包含：(i)一定量的本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白质)或蛋白质混合物；任选地(ii)一定量的第二药剂；(iii)适于口服的药物赋形剂。在一些实施方案中，该组合物还包含：(iv)一定量的第三试剂。在一些实施方案中，蛋白质异二聚体或蛋白质混合物、第二试剂和任选的第三试剂的量是单独或组合为有效治疗受试者病症的量。
在一些实施方案中，药物组合物可以是适合口服的液体药物组合物。适用于口服施用的本申请的药物组合物可以以离散剂型存在，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂，或分别含有预定量的活性成分的粉末或颗粒、溶液，或在水性或非水性液体中的悬浮液、水包油型乳剂或油包水型液体乳剂。此类剂型可以通过任何药学方法制备，但是所有方法通常包括使活性成分与构成一种或多种其他成分的载体结合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体或细分的固体载体或两者均匀且紧密地混合，然后，如果需要，将产品成型为期望的外观，来制备组合物。
由于水可以促进某些多肽的降解，所以本申请还涵盖了包含活性成分(例如本申请的蛋白质异二聚体或异二聚体蛋白质)的无水药物组合物和剂型。例如，在制药领域中，可以添加水(例如5％)作为模拟长期储存的手段，以确定诸如保存期限或制剂随时间的稳定性的特征。可以制备和储存无水药物组合物，从而保持其无水性质。因此，无水组合物可以使用已知的防止暴露于水的材料包装，使得它们可以被包括在合适的配方药盒中。合适包装的例子包括但不限于气密箔、塑料等、单位剂量容器、泡罩包装和条状包装。
根据常规的药物混合技术，本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白质或复合物)或蛋白质混合物可以与药物载体紧密混合。载体可以采取多种形式，这取决于施用所期望的制剂形式。在制备用于口服剂型的组合物时，可以将任何常用的药物介质用作载体，在口服液体制剂(诸如混悬剂、溶液剂和酏剂)或气雾剂的情况下，诸如，例如水、乙二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等；或者，在一些实施方案中，不使用乳糖，在口服固体制剂的情况下，可以使用诸如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂等载体或崩解剂。例如，合适的载体包括散剂、胶囊剂和片剂、以及固体口服制剂。如果需要，可以通过标准的水性或非水性技术将片剂包衣。
当需要水性混悬剂和/或酏剂用于口服施用时，其中的活性成分可以与各种甜味剂或调味剂、色素或染料、以及乳化剂和/或助悬剂(如果需要的话)以及诸如水、乙醇、丙二醇、甘油及其各种组合的稀释剂一起混合。
可以通过已知技术对片剂进行未包衣或包衣，以延迟其在胃肠道中的崩解和吸收，从而在更长的时间内提供持续的作用。
可用于形成本申请的药物组合物和剂型的表面活性剂包括但不限于亲水性表面活性剂、亲脂性表面活性剂及其混合物。可以使用亲水性表面活性剂的混合物，可以使用亲脂性表面活性剂的混合物，或者可以使用至少一种亲水性表面活性剂和至少一种亲脂性表面活性剂的混合物。
在一些实施方案中，组合物包括增溶剂，以确保本申请的蛋白质异二聚体或蛋白质混合物的良好溶解和/或分散，并使本申请的蛋白质异二聚体或蛋白质混合物的沉淀最小化。对于非口服使用的组合物，例如注射用组合物，这尤其重要。也可以添加增溶剂以增加亲水性药物和/或其他组分诸如表面活性剂的溶解度，或将组合物保持为稳定或均匀的溶液或分散体。
该组合物可以进一步包含一种或多种药学上可接受的添加剂和赋形剂。此类添加剂和赋形剂包括但不限于去粘剂、消泡剂、缓冲剂、聚合物、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、增生剂、调味剂、着色剂、增香剂、遮光剂、助悬剂、粘合剂、填充剂、增塑剂、润滑剂及其混合物。
另外，可将酸或碱掺入组合物中以促进加工，增强稳定性或出于其他原因。
本申请的药物组合物可以包含治疗有效量的活性剂(例如本申请的蛋白质异二聚体或蛋白质混合物)。治疗有效量是能够(至少部分地)预防和/或治愈患有或具有发展所述病情或病症风险的受试者的病情或病症(例如癌症)和/或其任何并发症的量的本申请药物组合物。所述疾病或障碍。所包含的活性剂的具体量/浓度可以根据施用方法和患者的需要而变化，并且可以基于例如患者的体积、粘度和/或体重等来确定。例如，合适的剂量可以是约0.1mg或1mg/kg/天至约50mg/kg/天；有时，剂量甚至可以更高。在一些实施方案中，所施用的剂量可以是约3mg/kg/天至约3.5mg/kg/天、3.5mg/kg/天至约7.2mg/kg/天、约7.2mg/kg/天至约11.0mg/kg/天、约11.0mg/kg/天至约15.0mg/kg/天。在一些实施方案中，施用的剂量为约10mg/kg/天至约50mg/kg/天，例如每天约20mg至约50mg，每天施用两次。应当理解，本领域技术人员(例如医生或药剂师)可以基于特定患者、制剂和/或疾病的状况方便地调节这些特定剂量。
本申请的蛋白质异二聚体或药物组合物还可包含一种或多种另外的治疗活性组分。这样的另外的治疗活性组分可以单独存在于组合物中，或者可以附着、缀合或与本申请的蛋白质异二聚体缔合。
医疗用途和治疗方法
在另一方面，本申请提供了蛋白质异二聚体或根据本申请的蛋白质混合物在制备用于抑制肿瘤或肿瘤细胞生长的药物和/或试剂盒中的用途。在一些实施方案中，药物和/或试剂盒用于特异性和/或优先抑制靶细胞(例如癌细胞)的生长或分化或杀死靶细胞(例如癌细胞)。
在另一方面，本申请提供了用于抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长的方法。该方法可以包括使肿瘤或肿瘤细胞与有效量的根据本申请的蛋白质异二聚体或根据本申请的蛋白质混合物接触。在一些实施方案中，接触在体外发生。在一些实施方案中，接触在体内发生。
在一些实施方案中，所述接触包括向受试者(例如哺乳动物)全身或局部施用本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白质)、蛋白质混合物、药物组合物或药物。在一些实施方案中，所述接触包括直接在肿瘤部位施用本申请的蛋白质异二聚体(例如异二聚体蛋白质)、蛋白质混合物、药物组合物或药物。在一些实施方案中，施用是通过口服施用、静脉内施用、肌内施用、在肿瘤部位原位施用、吸入、直肠施用、阴道施用、经皮施用或经由皮下储存库施用来进行的。
在一些实施方案中，肿瘤(例如癌症)或肿瘤细胞(例如癌细胞)是或来自实体瘤。例如，癌症可以选自B细胞淋巴瘤、肺癌、支气管癌、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、脑或中枢神经系统癌、外周神经系统癌、食道癌、宫颈癌、黑素瘤、子宫或子宫内膜癌、口腔或咽部癌、肝癌、肾癌、胆道癌、小肠或阑尾癌、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、脂肪肉瘤、睾丸癌和恶性纤维组织细胞瘤。
在一些实施方案中，癌细胞或癌细胞位于受试者体内，例如人或非人动物(例如哺乳动物)内的癌细胞或癌细胞。
在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，哺乳动物是小鼠、大鼠、猫、狗、兔子、猪、绵羊、马、牛、山羊、沙鼠、仓鼠、豚鼠、猴子或任何其他哺乳动物。许多此类哺乳动物可以是本领域已知的某些疾病或病症(包括实体瘤和/或其他癌症)的临床前模型的受试者(例如Talmadge等人，2007 Am.J.Pathol.170:793；Kerbel，Canc.Biol.Therap.2(4Suppl 1):S134；Man等人，2007 Canc.Met.Rev.26:737；Cespedes等人，2006Clin.TransL Oncol.8:318)。
蛋白质异二聚体或蛋白质混合物的制备方法
在另一方面，本申请提供了产生蛋白质异二聚体或包含蛋白质异二聚体的蛋白质混合物的方法，该方法包含(i)在影响蛋白质异二聚体表达的条件下培养本申请的宿主细胞，和(ii)收获表达的蛋白质异二聚体或包含表达的蛋白质异二聚体的蛋白质混合物(诸如本申请的蛋白质混合物)。
在一些实施方案中，产生蛋白质异二聚体的方法包含以下步骤：
(1)提供异二聚体的第一成员，其中第一成员包含轻链和重链，重链包含第一Fc区，其中轻链与重链复合以形成表现出对肿瘤抗原的结合特异性的靶向部分；
(2)提供所述异二聚体的第二成员，第二成员不同于第一成员，其中第二成员包含多肽，该多肽包含与第二Fc区融合的免疫调节剂；第一成员与第二成员缔合，通过第一Fc区与第二Fc区的复合形成异二聚体；并且第一Fc区包含第一修饰和/或第二Fc区包含第二修饰，其中第一修饰和/或第二修饰比包含节修饰和孔修饰的节孔更有效地促进第一成员和第二成员之间的异二聚化；以及
(3)获得蛋白质异二聚体。
在一些实施方案中，该方法进一步包含分离和/或纯化蛋白质异二聚体或蛋白质混合物的步骤。
在一些实施方案中，该方法进一步包含用编码/表达本申请的异二聚体，其一个或多个成员或其片段的多核苷酸/载体转染/转化宿主细胞的步骤。
在一些实施方案中，本申请的蛋白质异二聚体或蛋白质混合物通过在适合蛋白质表达的条件下在细胞中表达载体来产生。在一些实施方案中，本申请的蛋白质异二聚体或蛋白质混合物在单个细胞克隆中产生。
在蛋白质表达的合适条件之间可以变化的因素包括诸如孵育时间、温度和培养基的因素，并且可以取决于细胞类型并且可以由本领域普通技术人员容易地确定。
在一些实施方案中，在产生本申请的蛋白质异二聚体或蛋白质混合物的过程中，宿主细胞在培养物中以及在可用于生长培养物的任何装置(包括发酵罐)中生长。细胞可以单层生长或附着在表面上。可替代地，宿主细胞可以悬浮生长。细胞可以在无血清的培养基中生长。培养基可以是市售的培养基，例如但不限于补充有谷氨酰胺例如8mM L-谷氨酰胺的Opti-CHO(Invitrogen，目录号12681)；以及RPMI 1640培养基，补充10％牛犊血清，10.5ng/ml mIL-3和L-谷氨酰胺；或5％FCS培养基。
本申请包括以下实施方案：
1.一种蛋白质异二聚体，其包含第一成员和第二成员，所述第二成员不同于所述第一成员，其中：所述第一成员包含轻链和重链，所述重链包含第一Fc区，所述轻链与所述重链复合以形成表现出对肿瘤抗原的结合特异性的靶向部分；所述第二成员包含多肽，所述多肽包含与第二Fc区融合的免疫调节剂；所述第一成员与所述第二成员通过所述第一Fc区与所述第二Fc区的复合而缔合，以形成所述异二聚体；所述第一Fc区包含第一修饰和/或所述第二Fc区包含第二修饰，其中所述第一修饰和/或所述第二修饰比包含节修饰和孔修饰的节孔修饰更有效地促进所述第一成员和所述第二成员之间的异二聚化。
2.根据实施方案1的蛋白质异二聚体，其中所述第一修饰与所述节修饰或所述孔修饰不同，和/或所述第二修饰与所述节修饰或所述孔修饰不同。
3.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中当在哺乳动物细胞中表达时，该蛋白质异二聚体的产率比对照蛋白质的产率高至少10％，并且该对照蛋白质不同于该蛋白质异二聚体，区别在于对照蛋白质：i)在所述第一Fc区中包含节修饰，ii)在所述第二Fc区中包含孔修饰，并且iii)不同时包含所述第一修饰和所述第二修饰。
4.根据实施方案3的蛋白质异二聚体，其中所述哺乳动物细胞选自HEK293细胞、CHO细胞、COS-1细胞和NS0细胞。
5.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中所述第一Fc区包含第一修饰，所述第二Fc区包含第二修饰，并且第一修饰和第二修饰均不同于节修饰或孔修饰。
6.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二成员中包含的多肽是融合蛋白，并且免疫调节剂的C端直接或间接地融合至第二Fc区的N端以形成融合蛋白。
7.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中肿瘤抗原选自EGFR、EGFR突变体、HER2/neu、GPC3、FAP、Muc1、MUC5AC和间皮素。
8.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的轻链含有CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应CDR中所包含的氨基酸至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
9.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的轻链含有可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
10.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的轻链含有氨基酸序列，该氨基酸序列与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
11.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的重链含有CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
12.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的重链含有可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
13.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的重链含有氨基酸序列，该氨基酸序列与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
14.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的轻链包含CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应CDR中所包含的氨基酸至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；靶向部分的重链包含CDR，该CDR包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应CDR中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
15.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的轻链包含可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；靶向部分的重链包含可变区，该可变区包含与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应可变区中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
16.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分的轻链含有氨基酸序列，该氨基酸序列与特异性针对肿瘤抗原的抗体的轻链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同；靶向部分的重链含有氨基酸序列，该氨基酸序列与特异性针对肿瘤抗原的抗体的重链的相应氨基酸序列中所包含的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。
17.实施方案8-16中任一项的蛋白质异二聚体，其中特异性针对肿瘤抗原的抗体选自抗EGFR、抗EGFR突变体、抗HER2/neu、抗GPC3、抗FAP、抗Muc1、抗MUC5AC和抗间皮素。
18.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中免疫调节剂增强免疫应答。
19.根据实施方案1-17中任一项的蛋白质异二聚体，其中免疫调节剂降低免疫应答。
20.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中免疫调节剂是细胞因子。
21.根据实施方案20的蛋白质异二聚体，其中免疫调节剂是选自干扰素、白介素、趋化因子、淋巴因子和肿瘤坏死因子的细胞因子。
22.根据实施方案21的蛋白质异二聚体，其中免疫调节剂是选自干扰素α、干扰素λ和干扰素β的干扰素。
23.根据实施方案21的蛋白质异二聚体，其中免疫调节剂是白介素，该白介素包含白介素10、白介素2和/或超级白介素2。
24.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第一Fc区和第二Fc区来自免疫球蛋白的Fc区，所述免疫球蛋白选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
25.根据实施方案24的蛋白质异二聚体，其中第一Fc区和第二Fc区来自免疫球蛋白的Fc区，免疫球蛋白是人IgG1。
26.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二Fc区框内融合至免疫调节剂。
27.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二Fc区通过接头与免疫调节剂框内融合。
28.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二成员中包含的多肽包含两种或更多种免疫调节剂，所述两种或更多种免疫调节剂彼此框内融合并且融合到第二Fc区，其中所述两种或更多种免疫调节剂位于第二Fc区的N末端。
29.根据实施方案28的蛋白质异二聚体，其中所述两种或更多种免疫调节剂是相同的。
30.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第一修饰包含在位置T366处的氨基酸取代，并且在选自以下的一个或多个位置处的氨基酸取代：Y349、F405、K409、D399、K360、Q347、K392和S354，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
31.根据实施方案30的蛋白质异二聚体，其中第一修饰包含选自Y349C、Y349D、D399S、F405K、K360E、K409A、K409E、Q347E、Q347R、S354D、K392D和T366W的氨基酸取代。
32.根据实施方案30或31的蛋白质异二聚体，其中第一修饰包含2至5个氨基酸取代。
33.根据实施方案30-32中任一项的蛋白质异二聚体，其中第一修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)Y349和T366；2)Y349、T366和F405；3)Y349、T366和K409；4)Y349、T366、F405、K360和Q347；5)Y349、T366、F405和Q347；6)Y349、T366、K409、K360和Q347；7)Y349、T366、K409和Q347；8)T366、K409和K392；9)T366和K409；10)T366、K409、Y349和S354；11)T366和F405；12)T366、F405和D399；13)T366、F405、Y349和S354。
34.根据实施方案30-33中任一项的蛋白质异二聚体，其中第一修饰包含选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)Y349C和T366W；2)Y349C、T366W和F405K；3)Y349C、T366W和K409E；4)Y349C、T366W和K409A；5)Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；6)Y349C、T366W、F405K和Q347R；7)Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；8)Y349C、T366W、K409A和Q347R；9)T366W、K409A和K392D；10)T366W和K409A；11)T366W、K409A和Y349D；12)T366W、K409A、Y349D和S354D；13)T366W和F405K；14)T366W、F405K和D399S；15)T366W、F405K和Y349D；和16)T366W、F405K、Y349D和S354D。
35.根据实施方式30-34中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中第二修饰包含在位置T366、L368和Y407处的氨基酸取代，以及在选自D356、D399、E357、F405、K360、K392、K409和Q347中的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
36.根据实施方案35的蛋白质异二聚体，其中第二修饰所包含的氨基酸取代选自D356C、D399S、E357A、F405K、K360E、K392D、K409A、L368A、L368G、Q347E、Q347R、T366S、Y407A和Y407V。
37.根据实施方案35或36的蛋白质异二聚体，其中第二修饰包含4至6个氨基酸取代。
38.根据实施方案35-37中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)D356、T366、L368、Y407和F405；2)D356、T366、L368和Y407；3)D356、T366、L368、Y407和Q347；4)D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；5)D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；6)D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；7)T366、L368、Y407、D399和F405；8)T366、L368、Y407和F405；9)T366、L368、Y407、F405和E357；10)T366、L368、Y407和K409；11)T366、L368、Y407、K409和K392；12)T366、L368、Y407、K409和E357。
39.根据实施方案35-38中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二修饰包含选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；2)D356C、T366S、L368A和Y407V；3)D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；4)D356C、T366S、L368A、Y407V、360E和Q347E；5)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；6)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；7)T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；8)T366S、L368G、Y407A和F405K；9)T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；10)T366S、L368A、Y407V和K409A；11)T366S、L368A、Y407V、K409A和K392D；12)T366S、L368G、Y407A和K409A；13)T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A。
40.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，并且第一修饰和第二修饰包含选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)第一修饰：Y349和T366；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；2)第一修饰：Y349、T366和F405；第二修饰：D356、T366、L368和Y407；3)第一修饰：Y349、T366和K409；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；4)第一修饰：Y349、T366、F405、K360和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和Q347；5)第一修饰：Y349、T366、F405和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；6)第一修饰：Y349、T366、K409、K360和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；7)第一修饰：Y349、T366、K409和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；8)第一修饰：T366、K409和K392；第二修饰：T366、L368、Y407、D399和F405；9)第一修饰：T366和K409；第二修饰：T366、L368、Y407和F405；10)第一修饰：T366、K409和Y349；第二修饰：T366、L368、Y407、F405和E357；11)第一修饰：T366、K409、Y349和S354；第二修饰：T366、L368、Y407、F405和E357；12)第一修饰：T366和F405；第二修饰：T366、L368、Y407和K409；13)第一修饰：T366、F405和D399；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和K392；14)第一修饰：T366、F405和Y349；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和E357；15)第一修饰：T366、F405、Y349和S354；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和E357；其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
41.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，其中第一修饰和第二修饰包含选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：1)第一修饰：Y349C和T366W；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；2)第一修饰：Y349C、T366W和F405K；第二修饰：D356C、T366S、L368A和Y407V；3)第一修饰：Y349C、T366W和K409E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；4)第一修饰：Y349C、T366W和K409A；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；5)第一修饰：Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；6)第一修饰：Y349C、T366W、F405K和Q347R；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E和Q347E；7)第一修饰：Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；8)第一修饰：Y349C、T366W、K409A和Q347R；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；9)第一修饰：T366W、K409A和K392D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；10)第一修饰：T366W和K409A；第二修饰：T366S、L368G、Y407A和F405K；11)第一修饰：T366W、K409A和Y349D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；12)第一修饰：T366W、K409A、Y349D和S354D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；13)第一修饰：T366W和F405K；第二修饰：T366S、L368A、Y407V和K409A；14)第一修饰：T366W、F405K和D399S；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和K392D；15)第一修饰：T366W和F405K；第二修饰：T366S、L368G、Y407A和K409A；16)第一修饰：T366W、F405K和Y349D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；17)第一修饰：T366W、F405K、Y349D和S354D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
42.根据实施方案41的蛋白质异二聚体，其中第一Fc区包含第一修饰，第二Fc区包含第二修饰，第一修饰包含氨基酸取代T366W和K409A，第二修饰包含氨基酸取代T366S、L368G、Y407A和F405K，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
43.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：101，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：102，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：103。
44.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：104。
45.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：37。
46.根据实施方案43-45中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：105，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：106，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：107。
47.根据实施方案43-45中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列是选自SEQ ID NO：108。
48.根据实施方案43-45中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：39。
49.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：1NO：109，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：110，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：111。
50.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列区域选自SEQ IDNO：112。
51.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：53。
52.根据实施方案49-51中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：1NO：113，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：114，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：115。
53.根据实施方案49-51中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列区域选自SEQ IDNO：116。
54.根据实施方案49-51中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合EGFR突变体，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：55。
55.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：117和125，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：118和126，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：119和127。
56.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列区域选自SEQ IDNO：120和128。
57.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：45和49。
58.根据实施方案55-57中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：1NO：121和129，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：122和130，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：123和131。
59.根据实施方案55-57中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的抗体重链包含重链可变区，重链的氨基酸序列可变区选自SEQ IDNO：124和132。
60.根据实施方案55-57中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合HER2/neu，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：47和51。
61.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的抗体轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：133，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：134，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：135。
62.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的抗体轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：136。
63.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：57。
64.根据实施方案61-63中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的抗体重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：137，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：138，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：139。
65.根据实施方案61-63中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的抗体重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：140。
66.根据实施方案61-63中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合GPC3，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：59。
67.根据实施方式1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合FAP，第一成员的抗体轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：141，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：142，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：143。
68.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合FAP，第一成员的抗体轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：144。
69.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合FAP，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：61。
70.根据实施方案67-69中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合FAP，第一成员的抗体重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：145，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：146，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：147。
71.根据实施方案67-69中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合FAP，第一成员的抗体重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：148。
72.根据实施方案67-69中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合FAP，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：63。
73.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合至Muc1，第一成员的抗体轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：149，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：150，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：151。
74.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合Mucl，第一成员的抗体轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：152。
75.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合至Mucl，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：65。
76.根据实施方案73-75中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合于Muc1，第一成员的抗体重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：153：CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：154，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：155。
77.根据实施方案73-75中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合至Muc1，第一成员的抗体重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：156。
78.根据实施方案73-75中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性地结合至Muc1，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：67。
79.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的抗体轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：165，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：166，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：167。
80.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的抗体轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：168。
81.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：73。
82.根据实施方案79-81中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的抗体重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：169，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：170，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：171。
83.根据实施方案79-81中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的抗体重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：172。
84.根据实施方案79-81中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合间皮素，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：75。
85.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的抗体轻链包含CDR1-3，所述CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：157：CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：158，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：159。
86.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的抗体轻链包含轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：160。
87.根据实施方案1-42中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：69。
88.根据实施方案85-87中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的抗体重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：161，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：162，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：163。
89.根据实施方案85-87中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的抗体重链包含重链可变区，重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：164。
90.根据实施方案85-87中任一项的蛋白质异二聚体，其中靶向部分特异性结合MUC5AC，第一成员的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：71。
91.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中在第一成员的重链中，第一Fc区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：1、4、5、6、7。9、11、13、15、17、19、21、22、24、26、27和29。
92.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二成员中包含的免疫调节剂的氨基酸序列选自SEQ ID NO：173-180。
93.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二成员中包含的第二Fc区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：2、3、8、10、12、14、16 18、20、23、25和28。
94.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第二成员中包含的多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO：77、80、82、84、86、89、91和97。
95.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中第一成员中包含的轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO：37、45、49、53、57、61、65、69和73，第一成员中包含的重链的氨基酸序列是SEQ ID NO：39、47、51、55、59、63、67、71和75，第二成员中包含的多肽的氨基酸序列是SEQ ID NO：77、80、82、84、86、89、91和97。
96.根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体，其中所述节孔修饰包含节修饰和孔修饰，其中节修饰包含氨基酸取代Y349C和T366W，并且孔修饰包含氨基酸取代D356C、T366S、L368A和Y407V，其中氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
97.一种分离的多核苷酸，其编码根据前述实施方案中任一项的蛋白质异二聚体。
98.一种载体，其包含根据实施方案97的分离的多核苷酸。
99.一种分离的宿主细胞，其包含根据实施方案97的分离的多核苷酸或根据实施方案98的载体。
100.一种蛋白质混合物，其包含：1)根据实施方案1-96中任一项的蛋白质异二聚体；和2)由所述蛋白质异二聚体的两个所述第一成员形成的第一同二聚体；3)由所述蛋白质异二聚体中的两个所述第二成员形成的第二同二聚体；其中所述蛋白质异二聚体在所述蛋白质混合物中的百分比为至少50％。
101.根据实施方案100的蛋白质混合物，其中第二同二聚体的百分比小于第一同二聚体的百分比。
102.根据实施方案100或101的蛋白质混合物，其中第二同二聚体的百分比为至多10％。
103.根据实施方案102的蛋白质混合物，其中蛋白质混合物基本上不包含所述第二同二聚体。
104.一种药物组合物，其包含根据实施方案1-96中任一项的蛋白质异二聚体；根据实施方案100-103中任一项的蛋白质混合物或药学上可接受的赋形剂。
105.根据实施方案104的药物组合物，其中组合物被配制成用于口服施用、静脉内施用、肌肉内施用、在肿瘤部位原位施用、吸入、直肠施用、阴道施用、经皮施用或经由皮下储存库施用。
106.根据实施方案1-96中任一项的蛋白质异二聚体或根据实施方案100-103中任一项的蛋白质混合物在制备用于抑制肿瘤或肿瘤细胞生长的药物和/或试剂盒中的用途。
107.一种抑制肿瘤或肿瘤细胞生长的方法，其包含使所述肿瘤或肿瘤细胞与有效量的根据实施方案1-96中任一项的蛋白质异二聚体或根据实施方案100-103中任一项的蛋白质混合物接触。
108.根据实施方案107的方法，其中所述接触在体外或体内发生。
109.一种产生蛋白质异二聚体或包含蛋白质异二聚体的蛋白质混合物的方法，其包含(i)在实现蛋白质异二聚体表达的条件下培养根据权利要求99的宿主细胞，以及(ii)收获表达的蛋白质异二聚体或包含所述蛋白质异二聚体的蛋白质混合物。
尽管已经在本文中示出并描述了本申请的优选实施方案，但是对于本领域技术人员显而易见的是，这些实施方案仅通过示例的方式提供。在不脱离本申请的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变型、改变和替代。应当理解，在实践本申请中可以采用本文所述的本申请的实施方案的各种替代方案。意图是，以下权利要求限定本申请的范围，并且由此涵盖这些权利要求的范围内的方法和结构及其等同物。
实施例
以下提供的实施例和制剂进一步说明并举例阐述本申请的蛋白质异二聚体及其使用和制备方法。应当理解，本申请的范围不以任何方式受到以下实施例和制备范围的限制。
实施例1：多肽的修饰和制备
1.1确定Fc区中的氨基酸修饰
测定人IgG1的CH3-CH3结构域界面氨基酸残基。野生型人IgG1包含第一重链(链A)和第二重链(链B)，链A和链B各自的界面氨基酸如下表1所示，氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定：
Figure BDA0002301423540000641
Figure BDA0002301423540000651
表1.野生型人IgG1抗体Fc区(PDB编号1DN2)中的CH3-CH3界面残基
然后，对界面残基进行氨基酸修饰(例如氨基酸取代)以获得以下修饰组(如下表2所示，参考KH指节孔修饰)，在本申请中，链A也称为Fc9或第一Fc区，链B也称为Fc6或第二Fc区：
Figure BDA0002301423540000661
表2.氨基酸修饰组
随后，使用ScFv-Fc/Fc系统检查包含以上表2所列修饰组的异二聚体蛋白质的形成，如下文详细解释。
首先，从数据库Uniprot(P01857)获得人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区氨基酸序列，得到野生型人IgG1-Fc区氨基酸序列(SEQ ID NO：30)。通过RT-PCR从人PBMC总RNA(SEQID NO：31，称为Fc基因片段)获得编码野生型人IgG1-Fc的多核苷酸片段。通过重叠PCR将编码小鼠κIII信号肽(SEQ ID NO：32)的多核苷酸片段添加至Fc基因的5'末端，然后亚克隆至载体pcDNA4(Invitrogen，货号V86220)中，以获得重组表达。在哺乳动物细胞中表达人IgG1-Fc的载体。
在一些情况下，将编码骆驼单结构域抗体的可变区(VhH)的多肽融合至Fc基因片段的N末端以获得编码融合蛋白VhH-Fc(如SEQ ID NO：34所示)的融合基因片段(如SEQ IDNO：33所示)。然后将其亚克隆到载体pcDNA4(Invitrogen，货号V86220)中，以获得用于在哺乳动物细胞中表达融合蛋白VhH-Fc的重组表达载体。
合成编码ScFv-Fc融合蛋白的核酸分子(SEQ ID NO：35)，其中ScFv是指抗Her2单链抗体，ScFv-Fc融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：36所示。然后将ScFv-Fc基因片段亚克隆到载体pcDNA4(Invitrogen，货号V86220)中，以获得用于在哺乳动物细胞中表达ScFv-Fc融合蛋白的重组表达载体。
然后，将上文表2中列出的氨基酸修饰通过重叠PCR分别引入ScFv-Fc(KH和1-17组)、VhH-Fc(9-12、14、15和17组)和Fc基因片段(KH和1-8组)中，其中链A是指ScFv-Fc中的Fc区，链B是指独立的Fc区或VhH-Fc中的Fc区。将具有氨基酸修饰的基因片段分别亚克隆到载体pcDNA4(Invitrogen，货号V86220)中，以获得用于在哺乳动物细胞中表达修饰的ScFv-Fc融合蛋白、修饰的Fc蛋白和修饰的VhH-Fc融合蛋白的重组表达载体。
然后，用构建的带有PEI的表达载体转染悬浮培养的HEK293细胞(ATCC CRL-1573TM)。对于每个组，将表达A链的表达载体(ScFv-Fc融合蛋白)和表达B链的表达载体(Fc蛋白或VhH-Fc融合蛋白)以1：1的比例共转染。培养5-6天后，收集瞬时表达产物的上清液，并使用蛋白A亲和色谱法初步纯化包含相应蛋白质异二聚体的表达产物。每个初步纯化的表达产物均包含分别以不同的百分比存在的同二聚体蛋白ScFv-Fc/ScFv-Fc、同二聚体蛋白Fc/Fc(或同二聚体蛋白VhH-Fc/VhH-Fc)和异二聚体蛋白ScFv-Fc/Fc(或异二聚体蛋白ScFv-Fc/VhH-Fc)。由于这些蛋白质(即同二聚体和异二聚体)的分子量不同，因此可以根据未还原的SDS-PAGE凝胶上反映的相应条带强度来确定它们的相应百分比。定量强度，结果总结在下表3-6中。
Figure BDA0002301423540000681
表3表达产物中同二聚体蛋白质和异二聚体蛋白质的百分比
Figure BDA0002301423540000682
表4表达产物中同二聚体蛋白质和异二聚体蛋白质的百分比
Figure BDA0002301423540000683
表5表达产物中同二聚体蛋白质和异二聚体蛋白质的百分比
Figure BDA0002301423540000684
Figure BDA0002301423540000691
表6表达产物中同二聚体蛋白质和异二聚体蛋白质的百分比
从以上表3-6可以看出，所有的修饰组都比参考修饰节孔更有效地促进了异二聚体的形成。为了说明的目的，在以下实施例中使用第10组中的修饰(链A中的修饰：T366W+K409A；链B中的修饰：T366S+L368G+Y407A+F405K)以产生本申请的蛋白质异二聚体或蛋白质混合物。
1.2抗EGFR(西妥昔单抗)的制备
获得西妥昔单抗重链和轻链的全长氨基酸序列(也称为爱必妥(Erbitux)或Erb，这是一种针对表皮生长因子受体EGFR的抗体)，并使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后，合成编码西妥昔单抗轻链的核酸分子(Erb-LC)。Erb-LC的氨基酸序列如SEQ ID NO：37所示，编码它的相应多核苷酸序列如SEQ ID NO：38所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入到编码西妥昔单抗重链基因的Fc区的多核苷酸序列，合成编码修饰的西妥昔单抗重链的核酸分子(在本文中称为erb-Fc9)，将编码它的相应多肽称为Erb-Fc9。Erb-Fc9的氨基酸序列如SEQID NO：39所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：40所示。
在另一个实验中，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入编码西妥昔单抗重链基因Fc区的多核苷酸序列中，并合成编码修饰的西妥昔单抗重链的核酸分子(在本文中称为erb-Fc6)，编码它的相应多肽被称为Erb-Fc6。Erb-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：41所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：42所示。
在另一实验中，为了制备参考蛋白，将点突变(Y349C和T366W)引入编码西妥昔单抗重链基因的Fc区的多核苷酸序列中，并合成编码修饰的西妥昔单抗重链的核酸分子(本文称为erb-knob)，将编码它的相应多肽命名为Erb-Knob。Erb-Knob的氨基酸序列如SEQ IDNO：43所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：44所示。
1.3抗HER2(曲妥珠单抗)的制备
根据美国专利US7879325B2(通过引用并入本文)获得曲妥珠单抗的重链和轻链的全长氨基酸序列。然后，使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后合成编码曲妥珠单抗(T-LC)的轻链的核酸分子。T-LC的氨基酸序列如SEQ ID NO：45所示，编码该T-LC的相应多核苷酸序列如SEQ ID NO：46所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入到T-LC中。合成编码曲妥珠单抗重链基因的Fc区的多核苷酸序列，以及编码修饰的曲妥珠单抗重链的核酸分子(在本文中称为t-Fc9)，将编码它的相应多肽命名为T-Fc9。T-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：47所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：48所示。
1.4抗HER2(帕妥珠单抗)的制备
根据US7879325B2(通过引用并入本文)获得帕妥珠单抗的重链和轻链的全长氨基酸序列。然后，使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后合成编码帕妥珠单抗(P-LC)的轻链的核酸分子。P-LC的氨基酸序列如SEQ ID NO：49所示，编码它的相应多核苷酸序列如SEQ ID NO：50所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入到P-LC中。合成编码帕妥珠单抗重链基因的Fc区的多核苷酸序列，以及编码修饰的帕妥珠单抗重链的核酸分子(在本文中称为p-Fc9)，将编码它的相应多肽被称为P-Fc9。P-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：51所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ IDNO：52所示。
1.5抗EGFR突变体(Mab806)的制备
根据US7589180B2(通过引用并入本文)获得Mab806的重链和轻链的全长氨基酸序列。然后，使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后合成编码Mab806(Mab806-LC)轻链的核酸分子。Mab806-LC的氨基酸序列如SEQ ID NO：53所示，编码它的相应多核苷酸序列如SEQ ID NO：54所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入编码Mab806重链基因Fc区的多核苷酸序列中，并合成编码修饰的Mab806重链的核酸分子(在本文中称为mab806-Fc9)，编码它的相应多肽被称为Mab806-Fc9。Mab806-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：55所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：56所示。
1.6抗GPC3(codrituzumab)的制备
根据US7919086B2(通过引用并入本文)获得codrituzumab的重链和轻链的全长氨基酸序列。然后，使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后合成编码codrituzumab(C-mab-LC)轻链的核酸分子。C-mab-LC的氨基酸序列如SEQ ID NO：57所示，编码它的相应多核苷酸序列如SEQ ID NO：58所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入编码codrituzumab重链基因的Fc区的多核苷酸序列中，并合成编码修饰的codrituzumab重链的核酸分子(在本文中称为C-mab-Fc9)，将编码它的相应多肽被称为C-mab-Fc9。C-mab-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：59所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：60所示。
1.7抗FAP(28H1)的制备
根据US20120128591A1(通过引用并入本文)获得28H1的重链和轻链的全长氨基酸序列。然后，使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后合成编码28H1(28H1-LC)轻链的核酸分子。28H1-LC的氨基酸序列如SEQ ID NO：61所示，相应的编码其的多核苷酸序列如SEQ ID NO：62所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入到编码28H1重链基因的Fc区的多核苷酸序列，并合成编码修饰的28H1重链的核酸分子(在本文中称为28H1-Fc9)，将编码它的相应多肽命名为28H1-Fc9。28H1-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：63所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：64所示。
1.8抗Muc1(5E5)的制备
根据US8440798B2(通过引用并入本文)获得5E5的重链和轻链的全长氨基酸序列。然后，使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后合成编码5E5轻链的核酸分子(5E5-LC)。5E5-LC的氨基酸序列如SEQ IDNO：65所示，编码它的相应多核苷酸序列如SEQ ID NO：66所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入编码5E5重链基因的Fc区的多核苷酸序列中，并合成编码修饰的5E5重链的核酸分子(本文称为5E5-Fc9)，将编码它的相应多肽被称为5E5-Fc9。5E5-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：67所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：68所示。
1.9抗MUC5AC(恩斯妥昔单抗)的制备
根据WO2006113546A2(通过引用并入本文)获得恩斯妥昔单抗的重链和轻链的全长氨基酸序列。然后，使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后合成编码恩斯妥昔单抗(E-mab-LC)轻链的核酸分子。E-mab-LC的氨基酸序列如SEQ ID NO：69所示，编码它的相应多核苷酸序列如SEQ ID NO：70所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入到编码恩斯妥昔单抗重链基因的Fc区的多核苷酸序列中，并合成编码修饰的恩斯妥昔单抗重链的核酸分子(在本文中称为E-mab-Fc9)，编码它的相应多肽被称为E-mab-FC9。E-mab-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：71所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：72所示。
1.10抗间皮素(阿马妥昔单抗)的制备
从http://www.imgt.org/mAb-DB/index获得阿马妥昔单抗的重链和轻链的全长氨基酸序列。然后，使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的相应DNA序列。然后合成编码阿马妥昔单抗(A-mab-LC)轻链的核酸分子。A-mab-LC的氨基酸序列如SEQ ID NO：73所示，编码它的相应多核苷酸序列如SEQ ID NO：74所示。然后，将点突变(T366W和K409A)引入到编码阿马妥昔单抗重链基因Fc区的多核苷酸序列，并合成编码修饰的xxx重链的核酸分子(在本文中称为A-mab-Fc9)，编码它的相应多肽被称为A-mab-FC9。A-mab-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：75所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：76所示。
1.11 muIFNa4-Fc6的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得小鼠干扰素α4(IFNa4)(NM_010504.2)的序列信息，并获得编码该序列的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的
Figure BDA0002301423540000721
)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入到IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc6。然后，将接头序列“GSGGG”(SEQ ID NO：79)添加至Fc6的N末端，以获得接头-Fc6。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。将编码小鼠IFNa4的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc6的多核苷酸序列的5'末端，从而获得并合成编码融合蛋白muIFNa4-Fc6的多核苷酸序列。muIFNa4-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：77所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ IDNO：78所示。
1.12 huIFNa2-Fc6的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得人干扰素α2(IFNa2)(NM_000605.3)的序列信息，并获得编码它的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的
Figure BDA0002301423540000731
)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入IgG1-Fc片段，并将由此获得的多肽称为Fc6。然后，将接头序列“GSGGG”(SEQ ID NO：79)添加至Fc6的N末端，以获得接头-Fc6。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。将编码人IFNa2的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc6的多核苷酸序列的5’末端，从而获得并合成编码融合蛋白huIFNa2-Fc6的多核苷酸序列。huIFNa2-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：80所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：81所示。
1.13 muIFNb-Fc6的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得小鼠干扰素β(IFNβ)(NM_005018.2)的序列信息，并获得编码它的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc6。然后，将接头序列“GSGGG”(SEQ ID NO：79)添加至Fc6的N末端，以获得接头-Fc6。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。将编码小鼠IFNβ的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc6的多核苷酸序列的5'末端，从而获得并合成编码融合蛋白muIFNb-Fc6的多核苷酸序列。muIFNb-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：82所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：83所示。
1.14 huIFNb-Fc6的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得干扰素β(IFNβ)(EF064725.1)的序列信息，并获得编码它的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的
Figure BDA0002301423540000741
)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc6。然后，将接头序列“GSGGG”(SEQ ID NO：79)添加至Fc6的N末端，以获得接头-Fc6。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。将编码人IFNβ的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc6的多核苷酸序列的5’末端，从而获得并合成编码融合蛋白huIFNb-Fc6的多核苷酸序列。huIFNb-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：84所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：85所示。
1.15 huIFNL-Fc6的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得人干扰素λ(IFNL)(BC117482.1)的序列信息，并获得编码它的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的
Figure BDA0002301423540000742
)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc6。然后，将接头序列“GSGGG”(SEQ ID NO：79)添加至Fc6的N末端，以获得接头-Fc6。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。将编码人IFNL的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc6的多核苷酸序列的5’末端，从而获得并合成编码融合蛋白huIFNL-Fc6的多核苷酸序列。huIFNL-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：86所示，编码其的多核苷酸序列如SEQ ID NO：87所示。
1.16 huIL10-Fc6的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得人白介素10(huIL10)(P22301)的序列信息，并获得编码它的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的
Figure BDA0002301423540000743
)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc6。然后，将接头序列“(GGGGS)3”(SEQ ID NO：88)添加至Fc6的N末端，以获得接头-Fc6。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。将编码huIL10的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc6的多核苷酸序列的5’末端，从而获得并合成编码融合蛋白huIL10-Fc6的多核苷酸序列。huIL10-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：89所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：90所示。
1.17(huIL10)2-Fc6的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得人白介素10(huIL10)(P22301)的序列信息，并获得编码它的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的
Figure BDA0002301423540000751
)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc6。然后，将接头序列“(GGGGS)3”(SEQ ID NO：88)添加至Fc6的N末端，以获得接头-Fc6。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。然后，在两个拷贝的huIL10之间添加接头序列“(GGGGS)3”(SEQID NO：88)，以获得(huIL10)2。然后将编码(huIL10)2的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc6的多核苷酸序列的5'末端，从而获得并合成编码融合蛋白(huIL10)2-Fc6的多核苷酸序列。(huIL10)2-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：91所示，而编码它的多核苷酸序列如SEQ IDNO：92所示。
1.18(huIL10)2-Fc9的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得人白介素10(huIL10)(P22301)的序列信息，并获得编码它的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的
Figure BDA0002301423540000752
)。之后，将点突变(T366W和K409A)引入IgG1-Fc片段，并且由此获得的多肽被称为Fc9。然后，将接头序列“(GGGGS)3”(SEQ ID NO：88)添加至Fc9的N末端，以获得接头-Fc9。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。然后，在两个拷贝的huIL10之间添加接头序列“(GGGGS)3”(SEQ ID NO：88)，以获得(huIL10)2。然后将编码(huIL10)2的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc9的多核苷酸序列的5’末端，从而获得并合成编码融合蛋白(huIL10)2-Fc9的多核苷酸序列。(huIL10)2-Fc9的氨基酸序列如SEQ ID NO：93所示，并且编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：94所示。
1.19(huIL10)2-Fc-孔的制备
首先，从国家生物技术信息中心(NCBI)获得人白介素10(huIL10)(P22301)的序列信息，并获得编码它的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc孔。然后，将接头序列“(GGGGS)3”(SEQ ID NO：88)添加至Fc-孔的N末端，以获得接头-Fc-孔。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。然后，在两个拷贝的huIL10之间添加接头序列“(GGGGS)3”(SEQ ID NO：88)，以获得(huIL10)2。然后将编码(huIL10)2的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc-孔的多核苷酸序列的5’末端，从而获得并合成编码融合蛋白(huIL10)2-Fc-孔的多核苷酸序列。(huIL10)2-Fc-孔的氨基酸序列如SEQ ID NO：95所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：96所示。
1.20 husIL2-Fc6的制备
首先，根据自然(Nature)484,529-533(2012年4月26日)(通过引用并入本文)获得人超级白介素2(husIL2)的序列信息，并获得编码该序列的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的)。之后，将点突变(T366S、L368G、Y407A和F405K)引入IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc6。然后，将接头序列“GGGGS”(SEQ ID NO：79)添加至Fc6的N末端，以获得接头-Fc6。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。将编码husIL2的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc6的多核苷酸序列的5’末端，从而获得并合成编码融合蛋白husIL2-Fc6的多核苷酸序列。husIL2-Fc6的氨基酸序列如SEQ ID NO：97所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：98所示。
1.21 husIL2孔的制备
首先，根据自然(Nature)484,529-533(2012年4月26日)(通过引用并入本文)获得了人超级白介素2(husIL2)的序列信息，并获得编码该序列的全长多核苷酸序列。然后，根据人免疫球蛋白γ1(IgG1)恒定区(P01857)的氨基酸序列，从蛋白质数据库Uniprot获得人IgG1-Fc的氨基酸序列(即P01857的
Figure BDA0002301423540000763
)。之后，将点突变(D356C、T366S、L368A和Y407V)引入IgG1-Fc片段中，并将由此获得的多肽称为Fc孔。然后，将接头序列“GGGGS”(SEQ ID NO：79)添加至Fc-孔的N末端，以获得接头-Fc-孔。然后使用在线工具DNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码它的相应DNA序列。将编码husIL2的多核苷酸序列添加到编码接头-Fc-孔的多核苷酸序列的5’末端，从而获得并合成编码融合蛋白husIL2-Fc-孔的多核苷酸序列。husIL2-Fc-孔的氨基酸序列如SEQ ID NO：99所示，编码它的多核苷酸序列如SEQ ID NO：100所示。
实施例2：重组质粒的构建
核酸分子(编码Erb-Fc9、Erb-Fc6、Erb-Knob、T-Fc9、P-Fc9、Mab806-Fc9、C-mab-Fc9、28H1-Fc9、5E5-Fc9、E-mab-Fc9、A-mab-Fc9、T-LC(曲妥珠单抗轻链)、P-LC(帕妥珠单抗轻链)、Erb-LC(西妥昔单抗轻链)、Mab806-LC(Mab806轻链)，C-mab-LC(codrituzumab轻链))、28H1-LC(28H1轻链)、5E5-LC(5E5轻链)、E-mab-LC(恩斯妥昔单抗轻链)、A-mab-LC(阿马妥昔单抗轻链)、muIFNa4-Fc6、huIFNa2-Fc6、muIFNb-Fc6、huIFNb-Fc6、huIFNL-Fc6、huIL10-Fc6、(huIL10)2-Fc6、(huIL10)2-Fc9、(huIL10)2-Fc-孔、husIL2-Fc6和husIL2-孔)用HindIII和EcoRI(Takara)消化根据实施例1获得的产物，然后分别亚克隆到载体pcDNA4/myc-HisA(Invitrogen，V863-20)中。通过测序验证获得的质粒，正确的重组质粒分别命名为：pcDNA4-Erb-Fc9、pcDNA4-Erb-Fc6、pcDNA4-Erb-Knob、pcDNA4-T-Fc9、pcDNA4-P-Fc9、pcDNA4-Mab806-Fc9、pcDNA4-C-mab-Fc9、pcDNA4-28H1-Fc9、pcDNA4-5E5-Fc9、pcDNA4-E-mab-Fc9、pcDNA4-A-mab-Fc9、pcDNA4-T-LC、pcDNA4-P-LC、pcDNA4-Erb-LC、pcDNA4-Mab806-LC、pcDNA4-C-mab-LC、pcDNA4-28H1-LC、pcDNA4-5E5-LC、pcDNA4-E-mab-LC、pcDNA4-A-mab-LC、pcDNA4-muIFNa4-Fc6、pcDNA4-huIFNa2-Fc6、pcDNA4-muIFNb-Fc6、pcDNA4-huIFNb-Fc6、pcDNA4-huIFNL-Fc6、pcDNA4-huIL10-Fc6、pcDNA4-(huIL10)2-Fc6、pcDNA4-(huIL10)2-Fc9、pcDNA4-(huIL10)2-Fc-孔、pcDNA4-husIL2-Fc6和pcDNA4-husIL2-孔。
实施例3蛋白质异二聚体的表达和纯化
转染前两天，准备12×600mL悬浮驯化的HEK293(ATCC，CRL-1573TM)细胞用于瞬时转染，并以0.8×106细胞/ml的密度接种细胞。两天后，将三份细胞悬液离心，然后重悬于600mL Freestyle293培养基中。
由实施例2获得的重组表达载体分为以下几组：
组1：pcDNA4-Erb-Knob(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc-hole(200μg)
组2：pcDNA4-Erb-Fc6(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc9(200μg)
组3：pcDNA4-Erb-Fc9(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组4：pcDNA4-Erb-Fc9(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组5：pcDNA4-Erb-Fc9(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组6：pcDNA4-Erb-Fc9(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组7：pcDNA4-Erb-Fc9(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组8：pcDNA4-Erb-Fc9(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组9：pcDNA4-Erb-Fc9(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组10：pcDNA4-Erb-Knob(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-hole(200μg)
组11：pcDNA4-Erb-Fc9(200μg)+pcDNA4-Erb-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
组12：pcDNA4-Mab806-Fc9(200μg)+pcDNA4-Mab806-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组13：pcDNA4-Mab806-Fc9(200μg)+pcDNA4-Mab806-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组14：pcDNA4-Mab806-Fc9(200μg)+pcDNA4-Mab806-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组15：pcDNA4-Mab806-Fc9(200μg)+pcDNA4-Mab806-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组16：pcDNA4-Mab806-Fc9(200μg)+pcDNA4-Mab806-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组17：pcDNA4-Mab806-Fc9(200μg)+pcDNA4-Mab806-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组18：pcDNA4-Mab806-Fc9(200μg)+pcDNA4-Mab806-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组19：pcDNA4-Mab806-Fc9(200μg)+pcDNA4-Mab806-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
组20：pcDNA4-T-Fc9(200μg)+pcDNA4-T-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组21：pcDNA4-T-Fc9(200μg)+pcDNA4-T-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组22：pcDNA4-T-Fc9(200μg)+pcDNA4-T-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组23：pcDNA4-T-Fc9(200μg)+pcDNA4-T-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组24：pcDNA4-T-Fc9(200μg)+pcDNA4-T-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组25：pcDNA4-T-Fc9(200μg)+pcDNA4-T-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组26：pcDNA4-T-Fc9(200μg)+pcDNA4-T-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组27：pcDNA4-T-Fc9(200μg)+pcDNA4-T-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
组28：pcDNA4-P-Fc9(200μg)+pcDNA4-P-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组29：pcDNA4-P-Fc9(200μg)+pcDNA4-P-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组30：pcDNA4-P-Fc9(200μg)+pcDNA4-P-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组31：pcDNA4-P-Fc9(200μg)+pcDNA4-P-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组32：pcDNA4-P-Fc9(200μg)+pcDNA4-P-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组33：pcDNA4-P-Fc9(200μg)+pcDNA4-P-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组34：pcDNA4-P-Fc9(200μg)+pcDNA4-P-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组35：pcDNA4-P-Fc9(200μg)+pcDNA4-P-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
组36：pcDNA4-C-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-C-mab-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组37：pcDNA4-C-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-C-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组38：pcDNA4-C-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-C-mab-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组39：pcDNA4-C-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-C-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组40：pcDNA4-C-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-C-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组41：pcDNA4-C-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-C-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组42：pcDNA4-C-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-C-mab-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组43：pcDNA4-C-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-C-mab-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
组44：pcDNA4-28H1-Fc9(200μg)+pcDNA4-28H1-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组45：pcDNA4-28H1-Fc9(200μg)+pcDNA4-28H1-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组46：pcDNA4-28H1-Fc9(200μg)+pcDNA4-28H1-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组47：pcDNA4-28H1-Fc9(200μg)+pcDNA4-28H1-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组48：pcDNA4-28H1-Fc9(200μg)+pcDNA4-28H1-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组49：pcDNA4-28H1-Fc9(200μg)+pcDNA4-28H1-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组50：pcDNA4-28H1-Fc9(200μg)+pcDNA4-28H1-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组51：pcDNA4-28H1-Fc9(200μg)+pcDNA4-28H1-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
组52：pcDNA4-5E5-Fc9(200μg)+pcDNA4-5E5-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组53：pcDNA4-5E5-Fc9(200μg)+pcDNA4-5E5-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组54：pcDNA4-5E5-Fc9(200μg)+pcDNA4-5E5-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组55：pcDNA4-5E5-Fc9(200μg)+pcDNA4-5E5-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组56：pcDNA4-5E5-Fc9(200μg)+pcDNA4-5E5-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组57：pcDNA4-5E5-Fc9(200μg)+pcDNA4-5E5-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组58：pcDNA4-5E5-Fc9(200μg)+pcDNA4-5E5-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组59：pcDNA4-5E5-Fc9(200μg)+pcDNA4-5E5-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
组60：pcDNA4-E-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-E-mab-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组61：pcDNA4-E-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-E-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组62：pcDNA4-E-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-E-mab-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组63：pcDNA4-E-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-E-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组64：pcDNA4-E-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-E-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组65：pcDNA4-E-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-E-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组66：pcDNA4-E-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-E-mab-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组67：pcDNA4-E-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-E-mab-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
组68：pcDNA4-A-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-A-mab-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNa4-Fc6(200μg)
组69：pcDNA4-A-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-A-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNa2-Fc6(200μg)
组70：pcDNA4-A-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-A-mab-LC(200μg)+pcDNA4-muIFNb-Fc6(200μg)
组71：pcDNA4-A-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-A-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNb-Fc6(200μg)
组72：pcDNA4-A-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-A-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIFNL-Fc6(200μg)
组73：pcDNA4-A-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-A-mab-LC(200μg)+pcDNA4-huIL10-Fc6(200μg)
组74：pcDNA4-A-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-A-mab-LC(200μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(200μg)
组75：pcDNA4-A-mab-Fc9(200μg)+pcDNA4-A-mab-LC(200μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(200μg)
每组质粒混合物用6mL Freestyle293培养基稀释，并加入PEI(聚乙烯亚胺)溶液进行转染。将每组质粒/PEI混合物分别添加到600mL细胞悬液中，然后在37℃、10％CO2、90rpm下培养，向培养基中添加50μg/L IGF-1(胰岛素样生长因子I)。4小时后，在培养物中补充600mL EX293培养基、2mM谷氨酰胺和50μg/L IGF-1，并在135rpm下培养。24小时后，添加了3.8mM VPA。5-6天后，收集5×1200mL细胞的上清液，并通过蛋白A亲和层析纯化粗蛋白质异二聚体样品。首先用SDS-PAGE检测获得的样品，并清晰看到目标条带，实施例例如图2所示。
图2A显示了Tmab-(huIL10)2-6-9的SDS-PAGE测定结果，泳道2负载有蛋白质标记(MW标记26619)，泳道1负载有还原的Tmab-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质，泳道3负载有未还原的Tmab-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质，T-LC的MW约为25KD，T-Fc9的MW约为50KD，(huIL10)2-Fc6的MW约为65KD，Tmab-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质的MW约为140KD。
图2B显示了Mab806-(huIL10)2-6-9的SDS-PAGE测定结果，泳道2负载有蛋白质标记(MW标记26619)，泳道1负载有还原的Mab806-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白，泳道3负载有未还原的Mab806-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质，Mab806-LC的MW约为25KD，Mab806-Fc9的MW约为50KD，(huIL10)2-Fc6的MW约为65KD，Mab806-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质的MW约为140KD。
图2C显示了Erb-muIFNa4-6-9的SDS-PAGE测定结果，泳道2负载有蛋白质标记(MW标记26619)，泳道1负载有还原的Erb-muIFNa4-6-9异二聚体蛋白质，泳道3负载有未还原的Erb-muIFNa4-6-9异二聚体蛋白质，Erb-LC的MW约为25KD，Erb-Fc9的MW约为50KD，muIFNa4-Fc6的MW约为45KD，Erb-muIFNa4-6-9异二聚体蛋白质的MW约为120KD。
图2D显示了Erb-husIL2-6-9的SDS-PAGE测定结果，泳道2负载有蛋白质标记(MW标记26619)，泳道1负载有还原的Erb-husIL2-6-9异二聚体蛋白质，泳道3负载有未还原的Erb-husIL2-6-9异二聚体蛋白质，Erb-LC的分子量约为25KD，Erb-Fc9的分子量约为50KD，husIL2-Fc6的分子量约为41KD，Erb-husIL2-6-9异二聚体蛋白质的分子量约为120KD。
图2E显示了Erb-(huIL10)2-6-9的SDS-PAGE测定结果，泳道2负载有蛋白质标记(MW标记26619)，泳道1负载有还原的Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质，泳道3负载有未还原的Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质，Erb-LC的MW约为25KD，Erb-Fc9的MW约为50KD，(huIL10)2-Fc6的MW约为65KD，Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质的MW约为140KD。
图2F显示了Tmab-husIL2-6-9的SDS-PAGE测定结果，泳道2负载有蛋白质标记(MW标记26619)，泳道1负载有还原的Tmab-husIL2-6-9异二聚体蛋白质，泳道3负载有未还原的Tmab-husIL2-6-9异二聚体蛋白，T-LC的分子量约为25KD，T-Fc9的分子量约为50KD，husIL2-Fc6的分子量约为41KD，Tmab-husIL2-6-9异二聚体蛋白质的分子量约为116KD。
图2G显示了Erb-huIFNa2-6-9的SDS-PAGE测定结果，泳道2负载有蛋白质标记(MW标记26619)，泳道1负载有还原的Erb-huIFNa2-6-9异二聚体蛋白质，泳道3负载有未还原的Erb-huIFNa2-6-9异二聚体蛋白质，Erb-LC的分子量约为25KD，Erb-Fc9的分子量约为50KD，huIFNa2-Fc6的分子量约为45KD，Erb-huIFNa2-6-9异二聚体蛋白质的MW约为120KD。
类似地，本申请的其他蛋白质异二聚体的表达和纯化结果用SDS-PAGE验证并确认。
由此获得的蛋白质异二聚体被命名为(分别从第1组到第75组)：Erb-(huIL10)2-KH、Erb-(huIL10)2-6-9、Erb-(huIL10)2-9-6、Erb-muIFNa4-6-9、Erb-huIFNa2-6-9、Erb-muIFNb-6-9、Erb-huIFNb-6-9、Erb-huIFNL-6-9、Erb-huIL10-6-9、Erb-husIL2-6-9、Erb-husIL2-KH、Mab806-muIFNa4-6-9、Mab806-huIFNa2-6-9、Mab806-muIFNb-6-9、Mab806-huIFNb-6-9、Mab806-huIFNL-6-9、Mab806-huIL10-6-9、Mab806-husIL2-6-9、Mab806-(huIL10)2-6-9、Tmab-muIFNa4-6-9、Tmab-huIFNa2-6-9、Tmab-muIFNb-6-9、Tmab-huIFNb-6-9、Tmab-huIFNL-6-9、Tmab-huIL10-6-9、Tmab-husIL2-6-9、Tmab-(huIL10)2-6-9、Pmab-muIFNa4-6-9、Pmab-huIFNa2-6-9、Pmab-muIFNb-6-9、Pmab-huIFNb-6-9、Pmab-huIFNL-6-9、Pmab-huIL10-6-9、Pmab-husIL2-6-9、Pmab-(huIL10)2-6-9、C-mab-muIFNa4-6-9、C-mab-huIFNa2-6-9、C-mab-muIFNb-6-9、C-mab-huIFNb-6-9、C-mab-huIFNL-6-9、C-mab-huIL10-6-9、C-mab-husIL2-6-9、C-mab-(huIL10)2-6-9、28H1-muIFNa4-6-9、28H1-huIFNa2-6-9、28H1-muIFNb-6-9、28H1-huIFNb-6-9、28H1-huIFNL-6-9、28H1-huIL10-6-9、28H1-husIL2-6-9、28H1-(huIL10)2-6-9、5E5-muIFNa4-6-9、5E5-huIFNa2-6-9、5E5-muIFNb-6-9、5E5-huIFNb-6-9、5E5-huIFNL-6-9、5E5-huIL10-6-9、5E5-husIL2-6-9、5E5-(huIL10)2-6-9、E-mab-muIFNa4-6-9、E-mab-huIFNa2-6-9、E-mab-muIFNb-6-9、E-mab-huIFNb-6-9、E-mab-huIFNL-6-9、E-mab-huIL10-6-9、E-mab-husIL2-6-9、E-mab-(huIL10)2-6-9、A-mab-muIFNa4-6-9、A-mab-huIFNa2-6-9、A-mab-muIFNb-6-9、A-mab-huIFNb-6-9、A-mab-huIFNL-6-9、A-mab-huIL10-6-9、A-mab-husIL2-6-9和A-mab-(huIL10)2-6-9。
实施例4：蛋白质异二聚体的形成
4.1异二聚体Erb-(huIL10)2-6-9与参考蛋白Erb-(huIL10)2-KH异二聚体形成的比较
转染前两天，制备2×100mL悬浮驯化的HEK293(ATCC，CRL-1573TM)细胞用于瞬时转染，并以0.8×106细胞/mL的密度接种细胞。两天后，将细胞悬浮液离心，然后重悬于100mLFreestyle293培养基中。表达质粒分为“Erb-(huIL10)2-6-9组”和“Erb-(huIL10)2-KH组”，其中Erb-(huIL10)2-6-9组包含：pcDNA4-Erb-Fc9(33μg)+pcDNA4-Erb-LC(33μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6(33μg)；Erb-(huIL10)2-KH组包含：pcDNA4-Erb-Knob(33μg)+pcDNA4-Erb-LC(33μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc-孔(33μg)。每组质粒混合物均用1mL Freestyle293培养基稀释，并加入PEI(聚乙烯亚胺)溶液进行转染。将每组质粒/PEI混合物分别加入100mL细胞悬液中，然后在37℃、10％CO2、90rpm下培养，并向培养基中添加50μg/L IGF-1。4小时后，在培养物中补充100mL EX293培养基，2mM谷氨酰胺和50μg/L IGF-1，并在135rpm下培养。24小时后，添加3.8mM VPA。5-6天后，收集瞬时表达的培养上清液，并使用蛋白A亲和色谱法初步纯化包含相应蛋白质异二聚体的表达产物。来自Erb-(huIL10)2-6-9组的初步纯化的表达产物包含分别以不同百分比存在的同二聚体蛋白质Erb-Fc9/Erb-Fc9、同二聚体蛋白质(huIL10)2-Fc6/(huIL10)2-Fc6和异二聚体蛋白质Erb-Fc9/(huIL10)2-Fc6。来自Erb-(huIL10)2-KH组的初步纯化表达产物包含分别以不同百分比存在的同二聚体蛋白质Erb-Knob/Erb-Knob、同二聚体蛋白质(huIL10)2-Hole/(huIL10)2-Hole和异二聚体蛋白质Erb-节/(huIL10)2-孔。由于这些蛋白质(即同二聚体和异二聚体)的分子量不同，因此可以根据未还原的SDS-PAGE凝胶上反映的相应条带强度确定其相应百分比，如图3所示。泳道1负载有抗体对照(爱必妥)，泳道2负载有Erb-(huIL10)2-KH组的表达产物，泳道3负载有Erb-(huIL10)2-的表达产物6-9组。泳道4和泳道6为空白，泳道5负载有标准蛋白质标记。定量相对谱带强度，结果总结在下表7中，爱必妥对照的强度为90.9％。
组 异二聚体(％) 同二聚体(％)
Erb-(huIL10)2-KH 73.7 7.6
Erb-(huIL10)2-6-9 96.7 N.A.
表7蛋白质同二聚体和异二聚体的百分比
因此，与包含节孔修饰的相应蛋白质异二聚体相比，本申请的蛋白质异二聚体所包含的修饰更有效地促进了异二聚体的形成。
4.2异二聚体Erb-husIL2-6-9与参考蛋白Erb-husIL2-KH异二聚体形成的比较
转染前两天，制备2×100mL悬浮驯化的HEK293(ATCC，CRL-1573TM)细胞用于瞬时转染，并以0.8×106细胞/mL的密度接种细胞。两天后，将细胞悬浮液离心，然后重悬于100mLFreestyle293培养基中。表达质粒分为“Erb-husIL2-6-9组”和“Erb-husIL2-KH组”，其中Erb-husIL2-6-9组包含：pcDNA4-Erb-Fc9(33μg)+pcDNA4-Erb-LC(33μg)+pcDNA4-husIL2-Fc6(33μg)；Erb-husIL2-KH组包括：pcDNA4-Erb-Knob(33μg)+pcDNA4-Erb-LC(33μg)+pcDNA4-husIL2-Fc-孔(33μg)。每组质粒混合物均用1mL Freestyle293培养基稀释，并加入PEI(聚乙烯亚胺)溶液进行转染。将每组质粒/PEI混合物分别加入100mL细胞悬液中，然后在37℃、10％CO2、90rpm下培养，并向培养基中添加50μg/L IGF-1。4小时后，在培养物中补充100mL EX293培养基，2mM谷氨酰胺和50μg/L IGF-1，并在135rpm下培养。24小时后，添加了3.8mM VPA。5-6天后，收集瞬时表达的培养上清液，并使用蛋白A亲和色谱法初步纯化包含相应蛋白质异二聚体的表达产物。来自Erb-husIL2-6-9组的初步纯化的表达产物包含分别以不同百分比存在的同二聚体蛋白质Erb-Fc9/Erb-Fc9、同二聚体蛋白质husIL2-Fc6/husIL2-Fc6和异二聚体蛋白质Erb-Fc9/husIL2-Fc6。来自Erb-husIL2-KH组的初步纯化表达产物包含以不同百分比存在的同二聚体蛋白质Erb-节/Erb-节、同二聚体蛋白质husIL2-孔/husIL2-孔和异二聚体蛋白Erb-节/husIL2-孔。由于这些蛋白质(即同二聚体和异二聚体)的分子量不同，因此可以根据未还原的SDS-PAGE凝胶上反映的相应条带强度确定其相应百分比，如图3所示。泳道7负载有抗体对照(爱必妥)，泳道8负载有Erb-husIL2-KH组的表达产物，泳道9负载有Erb-husIL2-6-9组的表达产物。泳道4和泳道6为空白，泳道5负载有标准蛋白质标记。定量相对谱带强度，结果总结在下表8中，爱必妥对照的强度为90.3％。
Figure BDA0002301423540000861
8蛋白质同二聚体和异二聚体的百分比
因此，与包含节孔修饰的相应蛋白质异二聚体相比，本申请的蛋白质异二聚体所包含的修饰更有效地促进了异二聚体的形成。
实施例5：具有不同修饰的表达产物的比较
如实施例4中所示，与包含节孔修饰的相应蛋白质异二聚体相比，本申请的蛋白质异二聚体所包含的修饰更有效地促进了异二聚体的形成。
为了进一步检查第一修饰和第二修饰的作用，我们比较了以下表达产物：
组2：pcDNA4-Erb-Fc6+pcDNA4-Erb-LC+pcDNA4-(huIL10)2-Fc9；和
组3：pcDNA4-Erb-Fc9+pcDNA4-Erb-LC+pcDNA4-(huIL10)2-Fc6
如上文实施例3中所述。
简而言之，在转染前两天，制备2×100mL悬浮驯化的HEK293(ATCC，CRL-1573TM)细胞用于瞬时转染，并以0.8×106细胞/mL的密度接种细胞。两天后，将细胞悬浮液离心，然后重悬于100mL Freestyle293培养基中。表达质粒分为“Erb-(huIL10)2-6-9组”和“Erb-(huIL10)2-9-6组”，其中Erb-(huIL10)2-6-9组包含：pcDNA4-Erb-FC9(33μg)+pcDNA4-ERB-LC(33μg)+pcDNA4-(huIL10)2-FC6(33μg)；Erb-(huIL10)2-9-6组包含：pcDNA4-Erb-Fc6(33μg)+pcDNA4-Erb-LC(33μg)+pcDNA4-(huIL10)2-Fc9(33μg)。每组质粒混合物均用1mLFreestyle293培养基稀释，并加入PEI(聚乙烯亚胺)溶液进行转染。将每组质粒/PEI混合物分别加入100mL细胞悬液中，然后在37℃、10％CO2、90rpm下培养，并向培养基中添加50μg/LIGF-1。4小时后，在培养物中补充100mL EX293培养基、2mM谷氨酰胺和50μg/L IGF-1，并在135rpm下培养。24小时后，添加了3.8mM VPA。5-6天后，收集瞬时表达的培养上清液，并使用蛋白A亲和色谱法初步纯化包含相应蛋白质异二聚体的表达产物。来自Erb-(huIL10)2-6-9组的初步纯化的表达产物包含分别以不同的百分比存在的同二聚体蛋白质Erb-Fc9/Erb-Fc9(即Fc9同二聚体)、同二聚体蛋白质(huIL10)2-Fc6/(huIL10)2-Fc6(即Fc6同二聚体)和异二聚体蛋白质Erb-Fc9/(huIL10)2-Fc6。来自Erb-(huIL10)2-9-6组的初步纯化的表达产物包括分别以不同的百分比存在的同二聚体蛋白质Erb-Fc6/Erb-Fc6(即Fc6同二聚体)、同二聚体蛋白质(huIL10)2-Fc9/(huIL10)2-Fc9(即Fc9同二聚体)和异二聚体蛋白质Erb-Fc6/(huIL10)2-Fc9。由于这些蛋白质(即同二聚体和异二聚体)的分子量不同，因此可以根据未还原的SDS-PAGE凝胶上反映的相应条带强度确定其相应百分比，如图4所示。泳道1负载有标准蛋白标记，泳道2负载有Erb-(huIL10)2-6-9组的表达产物，泳道3负载有Erb-(huIL10)2-9-6组的表达产物。从图4可以看出，在泳道2中，形成的大多数同二聚体(即蛋白质混合物中不希望的杂质)是Erb-Fc9/Erb-Fc9同二聚体(即Fc9同二聚体)，如85KD条带所示(Erb-Fc9/Erb-Fc9同二聚体非常不稳定，容易解离成分子量约为85KD的单体)。有趣且令人惊讶的是，在泳道3中，形成的大多数同二聚体(即蛋白质混合物中不期望的杂质)是(huIL10)2-Fc9/(huIL10)2-Fc9同二聚体(即Fc9同二聚体)，如在50KD至85KD之间的带所示((huIL10)2-Fc9/(huIL10)2-Fc9同二聚体非常不稳定并且容易解离成分子量在50KD至85KD之间的单体)。因此，形成Erb-Fc9/Erb-Fc9同二聚体的趋势不是由于Erb部分，而是由于Fc9部分。
因此，包含Fc9区的蛋白质异二聚体的成员意图引起不期望的同二聚体杂质的形成。因此，在本申请的蛋白质异二聚体中，将免疫调节剂(诸如细胞因子)融合至Fc6结构域(即第二Fc区)而非Fc9结构域(即第一Fc区)更为有利。
实施例6：蛋白质异二聚体与相应靶标的结合
6.1 Erb-干扰素蛋白质异二聚体与EGFR的结合
使用人鳞状细胞癌A431细胞系检查Erb-干扰素蛋白质异二聚体与EGFR的结合。使用流式细胞仪分析，其中依次添加本申请的系列稀释的Erb-干扰素蛋白质异二聚体(或对照Erb抗体(爱必妥，Merck))和抗人IgG Fc特异性PE(eBioscience：12-4998-82)二抗进入细胞。然后，进行流式细胞术分析，并以蛋白浓度和来自PE通道的中等荧光强度(MFI)绘制剂量-效应曲线。如图5所示，蛋白质异二聚体Erb-huIFNa2-6-9以类似于对照抗体西妥昔单抗(爱必妥)的方式特异性结合至靶EGFR。由于蛋白质异二聚体仅包含一个EGFR结合部分，因此其EC50高于包含两个EGFR结合部分的对照抗体西妥昔单抗的EC50。
与对照抗体西妥昔单抗相比，还通过生物层干涉法(BLI)检测Erb-huIFNa2-6-9对它的靶标EGFR的结合亲和力。实验使用Octect K2进行。使用蛋白A生物传感器和EGFR-His蛋白。图6显示了Erb-huIFNa2-6-9和西妥昔单抗与EGFR-His的结合亲和力。结果表明，Erb-huIFNa2-6-9对EGFR-His的结合亲和力与对照抗体西妥昔单抗的结合亲和力没有显著差异。
6.2 Erb-白介素蛋白质异二聚体与EGFR的结合
使用人鳞状细胞癌A431细胞系检查Erb-白介素蛋白质异二聚体与EGFR的结合。使用流式细胞术分析，其中依次添加本申请的系列稀释的Erb-白介素蛋白质异二聚体(或对照Erb抗体(爱必妥，Merck))和抗人IgG Fc特异性PE(eBioscience：12-4998-82)二抗进入细胞。然后，进行流式细胞术分析，并以蛋白浓度和来自PE通道的中等荧光强度(MFI)绘制剂量-效应曲线。如图5所示，蛋白质异二聚体Erb-(huIL10)2-6-9以与对照抗体西妥昔单抗类似的方式特异性结合至靶EGFR。由于蛋白质异二聚体仅包含一个EGFR结合部分，因此其EC50高于包含两个EGFR结合部分的对照抗体西妥昔单抗的EC50。
与对照抗体西妥昔单抗相比，还用生物层干涉法(BLI)检测Erb-(huIL10)2-6-9对它的靶EGFR的结合亲和力。实验使用Octect K2进行。使用蛋白A生物传感器和EGFR-His蛋白。Erb-(huIL10)2-6-9和西妥昔单抗对EGFR-His的各自结合亲和力显示在图6中。结果表明，Erb-(huIL10)2-6-9-9对EGFR-His的结合亲和力与对照西妥昔单抗的结合亲和力无显著差异。
6.3 Mab806-干扰素和Mab806-白介素蛋白质异二聚体与EGFR的结合
使用稳定表达人EGFRvIII的小鼠结肠癌细胞系(即MC38细胞系)检测Mab806-huIFNa2-6-9和Mab806-(huIL10)2-6-9与EGFRVIII的结合。Mab806是与EGFRvIII突变体结合的抗体，但是，它也可以以低亲和力与野生型EGFR结合。进行流式细胞术，结果示于图7。从图7可以看出，Mab806-huIFNa2-6-9和Mab806-(huIL10)2-6-9与MC38细胞上表达的EGFRvIII结合。
6.4 Tmab-白介素蛋白质异二聚体与Her2的结合
类似地，还检测Tmab-(huIL10)2-6-9异二聚体与Her2的结合，使用稳定表达人Her2的小鼠结肠癌细胞系(即MC38细胞系)和稳定表达人Her2的黑色素瘤细胞系(即B16细胞系)进行实验。结果分别显示在图8的组(A)(MC38细胞)和组(B)(B16细胞)中。从图8可以看出，Tmab-(huIL10)2-6-9与MC38或B16细胞上表达的Her2结合。对于Pmab-白介素蛋白质异二聚体(例如Pmab-(huIL10)2-6-9)也获得了相似的结果。
6.5 C-mab-干扰素和C-mab-白介素蛋白质异二聚体与GPC3的结合
使用稳定表达人GPC3的小鼠结肠癌细胞系(MC38细胞系)检测C-mab-huIFNa2-6-9和C-mab-(huIL10)2-6-9与GPC3的结合。进行流式细胞术，结果示于图9中。从图9可以看出，C-mab-huIFNa2-6-9和C-mab-(huIL10)2-6-9与MC38细胞上表达的GPC3结合。
6.6 28H1干扰素和28H1白介素蛋白质异二聚体与FAP的结合
使用表达人FAP的小鼠结肠癌细胞系(MC38细胞系)检测28H1-huIFNa2-6-9和28H1-(huIL10)2-6-9与FAP的结合。进行流式细胞术，结果示于图10中。从图10可以看出，28H1-huIFNa2-6-9和28H1-(huIL10)2-6-9与在MC38细胞上表达的FAP结合。
6.7 5E5-干扰素和5E5-白介素蛋白质异二聚体与MUC1的结合
使用表达人MUC1的人乳腺癌细胞系(T-47D细胞系)检测5E5-huIFNa2-6-9和5E5-(huIL10)2-6-9与MUC1的结合。进行流式细胞术，结果示于图21中。从图21可以看出，5E5-huIFNa2-6-9和5E5-(huIL10)2-6-9与在T-47D细胞上表达的MUC1结合。
6.8恩斯妥昔单抗-干扰素和恩斯妥昔单抗-白介素蛋白质异二聚体与MUC5AC的结合
使用表达人MUC5AC的人胰腺癌细胞系(CFPAC-1细胞系)，检测E-mab-huIFNa2-6-9和E-mab-(huIL10)2-6-9与MUC5AC的结合。进行流式细胞术，结果示于图22中。从图22可以看出，E-mab-huIFNa2-6-9和E-mab-(huIL10)2-6-9与CFPAC-1细胞上表达的MUC5AC的结合不是很强。这可能是由于在肿瘤组织中原位发现的特定蛋白质糖型的潜在表达不足所致，并且已知E-mab与特定蛋白质糖型强烈结合。
6.9阿马妥昔单抗-干扰素和阿马妥昔单抗-白介素蛋白质异二聚体与间皮素的结合
使用表达人间皮素的人胃癌细胞系(NCI-N87细胞系)来检查A-mab-huIFNa2-6-9和A-mab-(huIL10)2-6-9与间皮素的结合。进行流式细胞术，结果如图23所示。从图23可以看出，A-mab-huIFNa2-6-9和A-mab-(huIL10)2-6-9与NCI-N87细胞上表达的间皮素结合。
实施例7蛋白质异二聚体中包含的免疫调节剂的存在和生物学活性
7.1本申请的蛋白质异二聚体中干扰素的存在和生物学活性
通过ELISA确认异二聚体Erb-huIFNa2-6-9中huIFNa2的存在，如图11所示。简而言之，用溶于缓冲液(50mM Na2CO3/NaHCO3；pH9.6)中的2μg/ml的EGFR-huFc包被ELISA板，在4℃下过夜。用含有0.05％(V/V)Tween-20的PBST(PH7.4)洗涤板3次，并用3％BSA的PBS封闭1h，然后加入系列稀释的Erb-huIFNa2-6-9并在37℃下孵育2小时。然后加入1μg/ml抗-huIFNα-生物素并在37℃下孵育1小时。随后，加入1：1000稀释的SA-HRP，并在37℃下孵育40分钟。用(TMB，TIANGEN货号PA107-01；批号1614)底物检测结合，并用2M H2SO4终止。在Molecular Devices SpectraMax Plus-384酶标仪中检测450nm-650nm处的吸光度。使用计算机程序SoftMax Pro 5.4确定浓度。
将小鼠成纤维细胞L929系或人肝癌细胞系HepG2用标记为水泡性口炎病毒(VSV)的EGFP(增强型绿色荧光蛋白)感染，以检查干扰素在增强细胞抗病毒能力中的活性。分别检测了muIFNa4、muIFNb和huIFNa2的活性。简而言之，在本申请的系列稀释的蛋白质异二聚体的存在下将细胞培养8小时，然后，添加适当数量的被VSV-EGFP感染的细胞。24小时后，通过流式细胞术分析确定感染细胞的百分比，并计算蛋白质异二聚体对病毒感染的保护率。然后根据保护率和蛋白质异二聚体浓度的剂量-效应曲线获得EC50。如图13所示，异二聚体Erb-muIFNa4-6-9(A)、Erb-muIFNb-6-9(B)和Erb-huIFNa2-6-9(C)保护细胞免受病毒感染。
7.2本申请的蛋白质异二聚体中白介素的存在和生物学活性
通过ELISA确认异二聚体Erb-(huIL10)2-6-9中的huIL10的存在，如图12所示。简言之，将ELISA板用5μg/ml的溶于缓冲液(50mM Na2CO3/NaHCO3；pH9.6)的抗人IL10(BioLegend，批号：B179948)包被，在4℃过夜。将板用含有0.05％(V/V)Tween-20的PBST(PH7.4)洗涤3次，并用3％BSA的PBS封闭1h，然后加入从2000ng/ml稀释的2倍系列的Erb-(huIL10)2-6-9并在37℃温育2小时。然后加入2μg/ml EGFR-Fc-生物素并在37℃下孵育1小时。之后，加入1：1000稀释的SA-HRP，并在37℃下孵育40分钟。用(TMB，TIANGEN货号PA107-01；批号1614)底物检测结合，并用2M H2SO4终止。在Molecular Devices SpectraMax Plus-384酶标仪中检测到450nm-650nm处的吸光度。使用计算机程序SoftMax Pro 5.4确定浓度。
白介素可以抑制脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞TNF-α的释放(David F.等人，1991，免疫学杂志(The Journal of Immunology)，第147卷3815-3822)。为了测试本申请的蛋白质异二聚体中白介素的这种活性，将人外周血单核细胞(PBMC)接种在96孔板中，在3-4小时后将悬浮的细胞洗掉。然后，加入各种浓度的本申请的Erb-(huIL10)2-6-9、Mab806-(huIL10)2-6-9和Tmab-(huIL10)2-6-9，并在2小时后加入2μg/ml LPS以刺激24小时。收集上清液，并使用ELISA检查TNF-α的释放。根据TNF-α试剂盒(eBioscience，88-7346)中包括的说明进行ELISA。简而言之，用包被缓冲液稀释捕获抗体，然后包被Costar 9018ELISA板。然后，加入标准品和一些适当稀释的样品。之后，使用检测抗体检测反应，并用TMB显影。结果显示在图14中。如图14A所示，Erb-(huIL10)2-6-9以剂量依赖性方式抑制TNF-α的释放。图14B还显示，本申请的Mab806-(huIL10)2-6-9和Tmab-(huIL10)2-6-9也以剂量依赖的方式有效地抑制TNF-α的释放。
实施例8：蛋白质异二聚体的抗肿瘤活性
8.1本申请的Erb-干扰素异二聚体的抗肿瘤活性
使用C57 BL/6野生型小鼠模型测试Erb-muIFNa4-6-9异二聚体的体内抗肿瘤活性。简而言之，向8周龄的雌性C57 BL/6小鼠皮下注射7×105B16-EGFR(图15A)或1×106MC38-EGFR(图15B)细胞。7天后，测得肿瘤体积为约70mm3。腹膜内(腹膜内)注射Erb-muIFNa4-6-9异二聚体或对照抗体西妥昔单抗(爱必妥，Merck)。分别以2mg/kg和0.5mg/kg注射Erb-muIFNa4-6-9异二聚体，西妥昔单抗的剂量为2mg/kg。每周两次测量肿瘤大小，并计算肿瘤体积以获得肿瘤生长曲线。结果显示在图15中，对于每个剂量，Erb-muIFNa4-6-9异二聚体均有效地减少了体内肿瘤的体积。
8.2本申请的Erb-白介素异二聚体的抗肿瘤活性
与实施例8.1相似，使用C57BL/6小鼠模型测试Erb-(huIL10)2-6-9的体内抗肿瘤活性。简而言之，向8周龄的雌性C57 BL/6小鼠皮下注射7×105B16-EGFR细胞(图16A)或1×106MC38-EGFR细胞(图16B)。7天后，测得肿瘤体积为约70mm3。腹膜内(腹膜内)注射一次Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体或对照抗体西妥昔单抗(爱必妥，Merck)。分别以两种不同剂量(分别为1mg/kg和4mg/kg)注射Erb-(huIL10)2-6-9Erb-(huIL10)2-6-9Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体，西妥昔单抗的剂量为4mg/kg。每周两次测量肿瘤大小，并计算肿瘤体积以获得肿瘤生长曲线。结果显示在图16A和16B中。
类似地，在右侧腹中皮下接种Balb/c小鼠5×105Tubo-EGFR。在第7天、第10天、第14天以两种不同的剂量(分别为1mg/kg和4mg/kg)用Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体腹膜内注射治疗小鼠3次。Erb-(huIL10)2-6-9以剂量依赖性方式有效地降低了体内肿瘤体积，如图16C所示。
8.3本申请的其他蛋白质异二聚体的抗肿瘤活性
与实施例8.1相似，使用C57BL/6小鼠模型测试Erb-husIL2-6-9的体内抗肿瘤活性。简而言之，向8周龄的雌性C57 BL/6小鼠皮下注射7×105B16-EGFR。7天后，测得肿瘤体积为约70mm3。每三天腹膜内(i.p.)注射2mg/kg的Erb-husIL2-6-9异二聚体或PBS，共五剂。每周两次测量肿瘤大小，并计算肿瘤体积以获得肿瘤生长曲线。结果显示在图17中，可以看出Erb-husIL2-6-9异二聚体有效地减少了体内肿瘤体积。
还使用C57 BL/6小鼠模型测试Tmab-(huIL10)2-6-9异二聚体的体内抗肿瘤活性。简而言之，对8周龄的雌性C57 BL/6小鼠皮下注射5×105B16-Her2(图18A)或5×105MC38-Her2细胞(图18B)。7天后，测得肿瘤体积为约70mm3。在第7、10和14天以不同剂量(分别为8mg/kg、4mg/kg、2mg/kg和1mg/kg)腹膜内(ip)注射Tmab-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质或PBS。每周两次测量肿瘤大小，并计算肿瘤的体积以获得肿瘤生长曲线。结果显示在图18A和18B中，对于每个给药剂量，Tmab-(huIL10)2-6-9异二聚体有效地减少了体内肿瘤体积。
类似地，还在MC38-GPC3、MC38-FAP、B16-GPC3和B16-FAP同基因肿瘤模型中测试C-mab-(huIL10)2-6-9、28H1-(huIL10)2-6-9和28H1-huIFNa2-6-9异二聚体的抗肿瘤活性，并观察到显著的抗肿瘤作用。
具体地，在胰腺癌模型(体外微器官培养系统)中测试28H1-huIFNa2-6-9的抗肿瘤活性，并且观察到肿瘤生长的抑制。
还使用B16-FAP同基因肿瘤模型检测28H1-(huIL10)2-6-9异二聚体的体内抗肿瘤活性。简而言之，向8周龄的雌性C57 BL/6小鼠皮下注射7×105B16-FAP-5细胞。7天后，测得肿瘤体积为约70-100mm3。在第7、10和13天以4mg/kg腹膜内(ip)注射28H1-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质、28H1抗体对照或IgG1同型对照。每五天测量肿瘤大小，并计算肿瘤的体积以获得肿瘤生长曲线。结果显示在图24中，可以看出28H1-(huIL10)2-6-9异二聚体在体内有效地减少了肿瘤体积，并且比IgG1同型对照或28H1抗体对照更有效。
此外，还在相应的人源化PDX小鼠模型中测试Erb-(huIL10)2-6-9、Erb-muIFNa4-6-9、C-mab-(huIL10)2-6-9、28H1-(huIL10)2-6-9、28H1-huIFNa2-6-9和E-mab-(huIL10)2-6-9的体内抗肿瘤活性，并观察到体内抗肿瘤作用。
具体地，还使用PDX小鼠模型测试Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体的体内抗肿瘤活性。简而言之，向8周龄的雌性Hu-CD34 NSG小鼠植入胰腺癌A15668 P4 PDX肿瘤细胞。当测量到的肿瘤体积为100mm3左右时，通过腹膜内(i.p.)注射Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体蛋白质(0.2mpk)或同型对照(批号20170816，Crownbio，1mpk)。第0天(第一次给药的日期)、第3天、第6天、第9天、第12天和第15天。每两天测量一次肿瘤大小，并计算肿瘤体积以获得肿瘤生长曲线。结果显示在图25中，可以看出，在PDX小鼠模型中，Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体有效地减少了体内肿瘤体积。
实施例9：蛋白质异二聚体在体内的靶向行为
与实施例8.1中所示的程序相似，使用C57BL/6 B16-EGFR小鼠模型检测Erb-(huIL10)2-6-9的体内分布。简而言之，向8周龄的雌性C57 BL/6小鼠皮下注射7×105B16-EGFR-SIY细胞。7天后，测得肿瘤体积为约45mm3。腹膜内(i.p)注射用Alexa Fluor 750(AF750)标记的Erb-(huIL10)2-6-9异二聚体或对照异二聚体Tmab-(huIL10)2-6-9。注射后24小时，使用IVIS光谱体内成像系统(Perkin Elmer)在体内筛选或在去除肿瘤后体外筛选AF750免疫荧光信号。结果(如图19所示)证明在EGFR阳性肿瘤中，Erb-(huIL10)2-6-9的浓度比Tmab-(huIL10)2-6-9的浓度高得多。因此，本申请的蛋白质异二聚体可以有效地体内靶向靶组织(例如肿瘤)。
实施例10蛋白质异二聚体的ADCC作用
还针对本申请的蛋白质异二聚体测试抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。使用LDH释放来测试本申请的蛋白质异二聚体(例如Erb-huIFNa2-6-9和Erb-(huIL10)2-6-9)的ADCC效果。简而言之，通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心从健康供体的肝素化外周血样品中获得PBMC，然后在37℃下于1*10E7细胞/培养皿中与含有30ng/ml IL-2和10％FBS的1640培养基一起培养24h。在96孔板接种PBMC细胞和A431细胞，密度为2.25*105/孔和1.5*104/孔，并加入含有15ng/ml IL-2和2％FBS的1640培养基。从9nM(最终浓度为3nM)开始，将爱必妥、Erb-huIFNa2-6-9和Erb-(huIL10)2-6-9稀释5倍以获得8种不同剂量，然后添加到96孔板中。5小时后，在每个孔中检测到LDH。
如图20中所示，蛋白质异二聚体显示出与对照爱必妥相当的ADCC活性，尽管稍低，表明Fc区中的修饰(即本申请的蛋白质异二聚体的第一修饰和/或第二修饰)不破坏ADCC活性。
序列表
<110> 苏州丁孚靶点生物技术有限公司
<120> 蛋白质异二聚体及其用途
<130> 0027-PA-015CN
<160> 180
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<400> 1
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Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
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Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
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Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
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His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
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Pro Gly Lys
225
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85 90 95
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Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val
115 120 125
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130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
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Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
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Pro Gly Lys
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Pro Gly Lys
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<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
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Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 15
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A T366W+K409A+K392D
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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 16
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B T366S+L368A+Y407V+D399S+F405K
<400> 16
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Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
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50 55 60
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65 70 75 80
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Val Leu Ser Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
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210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 17
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
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Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val
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Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
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Pro Gly Lys
225
<210> 18
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B T366S+L368G+Y407A+F405K
<400> 18
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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Ala Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 19
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A T366W+K409A+Y349D
<400> 19
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
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100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
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Asp Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
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Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
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Pro Gly Lys
225
<210> 20
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B T366S+L368A+Y407V+F405K+E357A
<400> 20
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Ala Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 21
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A T366W+K409A+Y349D+S354D
<400> 21
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
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35 40 45
Glu Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
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65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Asp Thr Leu Pro Pro Asp Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 22
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A T366W+F405K
<400> 22
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 23
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B T366S+L368A+Y407V+K409A
<400> 23
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 24
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A T366W+F405K+D399S
<400> 24
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Ser Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 25
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B T366S+L368A+Y407V+K409A+K392D
<400> 25
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 26
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A T366S+L368G+Y407A+K409A
<400> 26
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Gly Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Ala Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 27
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A T366W +F405K +Y349D
<400> 27
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Asp Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 28
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B T366S+L368A+Y407V +K409A +E357A
<400> 28
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Ala Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Ala Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 29
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A T366W+F405K+Y349D+S354D
<400> 29
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Asp Thr Leu Pro Pro Asp Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 30
<211> 227
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 30
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 31
<211> 681
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 31
gacaagaccc acacctgccc cccctgcccc gcccccgagc tgctgggcgg ccccagcgtg 60
ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gccgcacccc cgaggtgacc 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgagaac cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag ccccgcgagg agcagtacaa cagcacctac 240
cgcgtggtga gcgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc cccatcgaga agaccatcag caaggccaag 360
ggccagcccc gcgagcccca ggtgtacacc ctgcccccca gccgcgacga gctgaccaag 420
aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccgt gctggacagc 540
gacggcagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagccgctg gcagcagggc 600
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagagc 660
ctgagcctga gccccggcaa g 681
<210> 32
<211> 741
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 32
atggagaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgcccgg cagcaccggc 60
gacaagaccc acacctgccc cccctgcccc gcccccgagc tgctgggcgg ccccagcgtg 120
ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gccgcacccc cgaggtgacc 180
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgagaac cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac 240
ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag ccccgcgagg agcagtacaa cagcacctac 300
cgcgtggtga gcgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 360
tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc cccatcgaga agaccatcag caaggccaag 420
ggccagcccc gcgagcccca ggtgtacacc ctgcccccca gccgcgacga gctgaccaag 480
aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 540
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccgt gctggacagc 600
gacggcagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagccgctg gcagcagggc 660
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagagc 720
ctgagcctga gccccggcaa g 741
<210> 33
<211> 1121
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> fusion gene fragment
<400> 33
atggagaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgcccgg cagcaccggc 60
caggtgcagc tgcaggagtc tgggggaggc tcggtgcagg ctggagggtc tctgagactc 120
tcctgtgcag cctctgaata catctacagt agctactgca tggcctggtt ccgccaggct 180
ccagggaagg agcgcgaggg ggtcgcagtt attgggagtg atggtagcac aagctacgca 240
gactccgtga aaggccgatt caccatctcc aaagacaacg ccaagaacac tctgtatctg 300
caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacact gccatgtact actgtgcggc catcggtggt 360
tactgctacc aaccacccta tgagtaccag tactggggcc aggggaccca ggtcaccgtc 420
tcccagaacc gaaaagcagc gacaagaccc acacctgccc cccctgcccc gcccccgagc 480
tgctgggcgg ccccagcgtg ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca 540
gccgcacccc cgaggtgacc tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgagaac cccgaggtga 600
agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag ccccgcgagg 660
agcagtacaa cagcacctac cgcgtggtga gcgtgctgac cgtgctgcac caggactggc 720
tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc cccatcgaga 780
agaccatcag caaggccaag ggccagcccc gcgagcccca ggtgtacacc ctgcccccca 840
gccgcgacga gctgaccaag aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaag ggcttctacc 900
ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca 960
ccccccccgt gctggacagc gacggcagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca 1020
agagccgctg gcagcagggc aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca 1080
accactacac ccagaagagc ctgagcctga gccccggcaa g 1121
<210> 34
<211> 354
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> fusion protein VhH-Fc
<400> 34
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Ile Tyr Ser Ser Tyr
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Val Ile Gly Ser Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ala Ile Gly Gly Tyr Cys Tyr Gln Pro Pro Tyr Glu Tyr Gln Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp
115 120 125
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
130 135 140
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
145 150 155 160
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
165 170 175
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
180 185 190
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
195 200 205
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
210 215 220
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
225 230 235 240
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
245 250 255
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
260 265 270
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
275 280 285
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
290 295 300
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
305 310 315 320
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
325 330 335
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
340 345 350
Gly Lys
<210> 35
<211> 1473
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> gene for anti-Her2 single chain ScFv-Fc fusion protein
<400> 35
atggagaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgcccgg cagcaccggc 60
gaggtgcagc tgctggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggccgcag cctgcgcctg 120
agctgcatcg ccagcggctt caccttcagc agctacccca tgacctgggt gcgccaggcc 180
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccagc atcagctacg acggcagcta caagtacaag 240
gccgacagca tgaagggccg cctgaccatc agccgcgaca acagcaagaa caccctgtac 300
ctggagatga acagcctgac cgccgaggac accgccgtgt actactgcgc ccgcaccgcc 360
ttcttcaacg cctacgactt ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag cagcgccagc 420
accaagggcc ccagcgtggg cggcggcggc agcggcggcg gcggcagcga gatcgtgatg 480
acccagagcc ccgccaccct gagcgtgagc cccggcgagc gcgccaccct gagctgccgc 540
gccagccaga gcgtgcgcag caacctggcc tggtaccagc agaagcccgg ccaggccccc 600
cgcctgctga tctacgccgc cagcacccgc gccaccggca tccccgcccg cttcagcggc 660
agcggcagcg gcaccgagtt caccctgacc atcagcagcc tgcagagcga ggacttcgcc 720
gtgtactact gccagcagta caacgagtgg ttccgcacca gcggccaggg caccaaggtg 780
gagatcaagc gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ccgcccccga gctgctgggc 840
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagccgcacc 900
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgaga accccgaggt gaagttcaac 960
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccgcga ggagcagtac 1020
aacagcacct accgcgtggt gagcgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 1080
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcccg cccccatcga gaagaccatc 1140
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgcgac 1200
gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 1260
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac cacccccccc 1320
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagccgc 1380
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1440
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1473
<210> 36
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> anti-Her2 single chain ScFv -Fc fusion protein
<400> 36
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ile Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Lys Ala Asp Ser Met
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Ala Phe Phe Asn Ala Tyr Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
145 150 155 160
Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Ala Thr
180 185 190
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asn Glu Trp Phe Arg Thr Ser Gly Gln Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
245 250 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
305 310 315 320
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
340 345 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 37
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Erb-LC
<400> 37
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 38
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding Erb-LC
<400> 38
gacatcctgc tgacccagag ccccgtgatc ctgagcgtga gccccggcga gcgcgtgagc 60
ttcagctgcc gcgccagcca gagcatcggc accaacatcc actggtacca gcagcgcacc 120
aacggcagcc cccgcctgct gatcaagtac gccagcgaga gcatcagcgg catccccagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga gcatcaacag cgtggagagc 240
gaggacatcg ccgactacta ctgccagcag aacaacaact ggcccaccac cttcggcgcc 300
ggcaccaagc tggagctgaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
<210> 39
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> erb-Fc9
<400> 39
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 40
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding erb-Fc9
<400> 40
caggtgcagc tgaagcagag cggccccggc ctggtgcagc ccagccagag cctgagcatc 60
acctgcaccg tgagcggctt cagcctgacc aactacggcg tgcactgggt gcgccagagc 120
cccggcaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctggagcg gcggcaacac cgactacaac 180
acccccttca ccagccgcct gagcatcaac aaggacaaca gcaagagcca ggtgttcttc 240
aagatgaaca gcctgcagag caacgacacc gccatctact actgcgcccg cgccctgacc 300
tactacgact acgagttcgc ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gagcgccgcc 360
agcactaagg ggccctctgt gtttccactc gccccttcta gcaaaagcac ttccggagga 420
actgccgctc tgggctgtct ggtgaaagat tacttccccg aaccagtcac tgtgtcatgg 480
aactctggag cactgacatc tggagttcac acctttcctg ctgtgctgca gagttctgga 540
ctgtactccc tgtcatctgt ggtcaccgtg ccatcttcat ctctggggac ccagacctac 600
atctgtaacg tgaaccacaa accctccaac acaaaagtgg acaaacgagt cgaaccaaaa 660
tcttgtgaca aaacccacac atgcccaccg tgcccagctc cggaactcct gggcggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccaagtcg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct gtggtgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgttg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc gcgctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 41
<211> 346
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Erb-Fc6
<400> 41
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115 120 125
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
130 135 140
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
145 150 155 160
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
165 170 175
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
180 185 190
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
195 200 205
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
210 215 220
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
225 230 235 240
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
245 250 255
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Gly Val Lys Gly Phe Tyr
260 265 270
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
275 280 285
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys
290 295 300
Leu Ala Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
305 310 315 320
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
325 330 335
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 42
<211> 1038
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding Erb-Fc6
<400> 42
caggtgcagc tgaagcagag cggccccggc ctggtgcagc ccagccagag cctgagcatc 60
acctgcaccg tgagcggctt cagcctgacc aactacggcg tgcactgggt gcgccagagc 120
cccggcaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctggagcg gcggcaacac cgactacaac 180
acccccttca ccagccgcct gagcatcaac aaggacaaca gcaagagcca ggtgttcttc 240
aagatgaaca gcctgcagag caacgacacc gccatctact actgcgcccg cgccctgacc 300
tactacgact acgagttcgc ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gagcgccgac 360
aagacccaca cttgcccccc ttgtcccgct ccggaactcc tgggcggacc gtcagtcttc 420
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 480
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 540
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 600
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 660
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 720
cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 780
caggtcagcc tgagttgcgg ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 840
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgtt ggactccgac 900
ggctccttca agctcgccag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 960
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1020
tccctgtctc cgggtaaa 1038
<210> 43
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Erb-Knob
<400> 43
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 44
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding Erb-Knob
<400> 44
caggtgcagc tgaagcagag cggccccggc ctggtgcagc ccagccagag cctgagcatc 60
acctgcaccg tgagcggctt cagcctgacc aactacggcg tgcactgggt gcgccagagc 120
cccggcaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctggagcg gcggcaacac cgactacaac 180
acccccttca ccagccgcct gagcatcaac aaggacaaca gcaagagcca ggtgttcttc 240
aagatgaaca gcctgcagag caacgacacc gccatctact actgcgcccg cgccctgacc 300
tactacgact acgagttcgc ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gagcgccgcc 360
agcaccaagg gccccagcgt gttccccctg gcccccagca gcaagagcac cagcggcggc 420
accgccgccc tgggctgcct ggtgaaggac tacttccccg agcccgtgac cgtgagctgg 480
aacagcggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540
ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgaccgtg cccagcagca gcctgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagcgcgt ggagcccaag 660
agctgcgaca agacccacac ctgccccccc tgccccgccc ccgagctgct gggcggcccc 720
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagccg cacccccgag 780
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gcgaggagca gtacaacagc 900
acctaccgcg tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960
tacaagtgca aggtgagcaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catcagcaag 1020
gccaagggcc agccccgcga gccccaggtg tacaccctgc ccccctgccg cgacgagctg 1080
accaagaacc aggtgagcct gtggtgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag ccgctggcag 1260
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagagcctga gcctgagccc cggcaag 1347
<210> 45
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> T-LC
<400> 45
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 46
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding T-LC
<400> 46
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac accgccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca ccccccccac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa atactactgc cagcagaaca acaactggcc caccaccttc 360
ggcgccggca ccaagctgga gctgaagcgc accgtggccg cccccagcgt gttcatcttc 420
ccccccagcg acgagcagct gaagagcggc accgccagcg tggtgtgcct gctgaacaac 480
ttctaccccc gcgaggccaa ggtgcagtgg aaggtggaca acgccctgca gagcggcaac 540
agccaggaga gcgtgaccga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct gagcagcacc 600
ctgaccctga gcaaggccga ctacgagaag cacaaggtgt acgcctgcga ggtgacccac 660
cagggcctga gcagccccgt gaccaagagc ttcaaccgcg gcgagtgc 708
<210> 47
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> T-Fc9
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 48
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding T-Fc9
<400> 48
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcgccaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgc atctacccca ccaacggcta cacccgctac 180
gccgacagcg tgaagggccg cttcaccatc agcgccgaca ccagcaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgccgtgt actactgcag ccgctggggc 300
ggcgacggct tctacgccat ggactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
gccagcacta aggggccctc tgtgtttcca ctcgcccctt ctagcaaaag cacttccgga 420
ggaactgccg ctctgggctg tctggtgaaa gattacttcc ccgaaccagt cactgtgtca 480
tggaactctg gagcactgac atctggagtt cacacctttc ctgctgtgct gcagagttct 540
ggactgtact ccctgtcatc tgtggtcacc gtgccatctt catctctggg gacccagacc 600
tacatctgta acgtgaacca caaaccctcc aacacaaaag tggacaaacg agtcgaacca 660
aaatcttgtg acaaaaccca cacatgccca ccgtgcccag ctccggaact cctgggcgga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccaag tcgggatgag 1080
ctgaccaaga accaggtcag cctgtggtgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ttggactccg acggctcctt cttcctctac agcgcgctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 49
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P-LC
<400> 49
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 50
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding P-LC
<400> 50
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc atcggcgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
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cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tactacatct acccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gtactactgc cagcagaaca acaactggcc caccaccttc 360
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ctgaccctga gcaaggccga ctacgagaag cacaaggtgt acgcctgcga ggtgacccac 660
cagggcctga gcagccccgt gaccaagagc ttcaaccgcg gcgagtgc 708
<210> 51
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P-Fc9
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 52
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding P-Fc9
<400> 52
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcacc gactacacca tggactgggt gcgccaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccgac gtgaacccca acagcggcgg cagcatctac 180
aaccagcgct tcaagggccg cttcaccctg agcgtggacc gcagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgccgtgt actactgcgc ccgcaacctg 300
ggccccagct tctacttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gagcagcgcc 360
agcactaagg ggccctctgt gtttccactc gccccttcta gcaaaagcac ttccggagga 420
actgccgctc tgggctgtct ggtgaaagat tacttccccg aaccagtcac tgtgtcatgg 480
aactctggag cactgacatc tggagttcac acctttcctg ctgtgctgca gagttctgga 540
ctgtactccc tgtcatctgt ggtcaccgtg ccatcttcat ctctggggac ccagacctac 600
atctgtaacg tgaaccacaa accctccaac acaaaagtgg acaaacgagt cgaaccaaaa 660
tcttgtgaca aaacccacac atgcccaccg tgcccagctc cggaactcct gggcggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
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tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccaagtcg ggatgagctg 1080
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aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 53
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806-LC
<400> 53
Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys His Ser Ser Gln Asp Ile Asn Ser Asn
20 25 30
Ile Gly Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ser Phe Lys Gly Leu Ile
35 40 45
Tyr His Gly Thr Asn Leu Asp Asp Glu Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Gln Tyr Ala Gln Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 54
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding Mab806-LC
<400> 54
gacatcctga tgacccagag ccccagcagc atgagcgtga gcctgggcga caccgtgagc 60
atcacctgcc acagcagcca ggacatcaac agcaacatcg gctggctgca gcagcgcccc 120
ggcaagagct tcaagggcct gatctaccac ggcaccaacc tggacgacga ggtgcccagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcgccgac tacagcctga ccatcagcag cctggagagc 240
gaggacttcg ccgactacta ctgcgtgcag tacgcccagt tcccctggac cttcggcggc 300
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ccccccagcg acgagcagct gaagagcggc accgccagcg tggtgtgcct gctgaacaac 480
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agccaggaga gcgtgaccga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct gagcagcacc 600
ctgaccctga gcaaggccga ctacgagaag cacaaggtgt acgcctgcga ggtgacccac 660
cagggcctga gcagccccgt gaccaagagc ttcaaccgcg gcgagtgc 708
<210> 55
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806-Fc9
<400> 55
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ile Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Thr Ala Gly Arg Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 56
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding Mab806-Fc9
<400> 56
gacgtgcagc tgcaggagag cggccccagc ctggtgaagc ccagccagag cctgagcctg 60
acctgcaccg tgaccggcta cagcatcacc agcgacttcg cctggaactg gatccgccag 120
ttccccggca acaagctgga gtggatgggc tacatcagct acagcggcaa cacccgctac 180
aaccccagcc tgaagagccg catcagcatc acccgcgaca ccagcaagaa ccagttcttc 240
ctgcagctga acagcgtgac catcgaggac accgccacct actactgcgt gaccgccggc 300
cgcggcttcc cctactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcgccgc cagcactaag 360
gggccctctg tgtttccact cgccccttct agcaaaagca cttccggagg aactgccgct 420
ctgggctgtc tggtgaaaga ttacttcccc gaaccagtca ctgtgtcatg gaactctgga 480
gcactgacat ctggagttca cacctttcct gctgtgctgc agagttctgg actgtactcc 540
ctgtcatctg tggtcaccgt gccatcttca tctctgggga cccagaccta catctgtaac 600
gtgaaccaca aaccctccaa cacaaaagtg gacaaacgag tcgaaccaaa atcttgtgac 660
aaaacccaca catgcccacc gtgcccagct ccggaactcc tgggcggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccaagtc gggatgagct gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgtggtgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgtt ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag cgcgctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtaaa 1338
<210> 57
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB-LC
<400> 57
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Asn
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 58
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding C-MAB-LC
<400> 58
gacgtggtga tgacccagag ccccctgagc ctgcctgtga cacctggcga gcctgccagc 60
atcagctgca gaagcagcca gtccctggtg cacagcaaca ggaacaccta cctgcactgg 120
tatttacaga agcccggaca gagcccccag ctgctgatct acaaggtgag caacaggttc 180
agcggcgtgc ctgacaggtt ttccggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240
agcagggtgg aggccgagga tgtgggcgtg tactactgca gccagaacac ccacgtgccc 300
cctacctttg gccagggcac caagctggag atcaagcgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggta ccgctagcgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tttatccacg ggaggctaag gtgcagtgga aagtggacaa tgccctccag 480
agcggaaata gccaagagtc cgttaccgaa caggactcta aagactctac atactccctg 540
tcctccacac tgaccctctc caaggccgac tatgagaaac acaaggttta cgcatgcgag 600
gtcacacacc agggactctc ctctcccgtg accaagagct tcaaccgggg agaatgc 657
<210> 59
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB-Fc9
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Leu Asp Pro Lys Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 60
<211> 1335
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding C-MAB-Fc9
<400> 60
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg cctccggcta caccttcacc gactacgaga tgcactgggt gaggcaggcc 120
cctggacaag gactggagtg gatgggcgcc ttagatccta agacaggcga caccgcctac 180
tcccagaagt tcaagggcag ggtgaccctg accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgac cagcgaggac accgccgtgt actattgcac caggttctac 300
agctacacct actggggcca gggcacactg gtgaccgtga gcagcgccag cactaagggg 360
ccctctgtgt ttccactcgc cccttctagc aaaagcactt ccggaggaac tgccgctctg 420
ggctgtctgg tgaaagatta cttccccgaa ccagtcactg tgtcatggaa ctctggagca 480
ctgacatctg gagttcacac ctttcctgct gtgctgcaga gttctggact gtactccctg 540
tcatctgtgg tcaccgtgcc atcttcatct ctggggaccc agacctacat ctgtaacgtg 600
aaccacaaac cctccaacac aaaagtggac aaacgagtcg aaccaaaatc ttgtgacaaa 660
acccacacat gcccaccgtg cccagctccg gaactcctgg gcggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccaagtcggg atgagctgac caagaaccag 1080
gtcagcctgt ggtgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgttgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctacagcgc gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaa 1335
<210> 61
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1-LC
<400> 61
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Ile Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 62
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding 28H1-LC
<400> 62
gagatcgtgc tgacacagtc tccaggcacc ctgtctctgt ctccaggaga gagagccacc 60
ctgtcttgca gagcctctca gagcgtgtcc aggagctacc tggcttggta tcagcagaag 120
ccaggacagg cccctagact gctgatcatc ggagcctcta caagagccac aggcatccca 180
gacagattca gcggcagcgg aagcggcaca gacttcaccc tgaccatcag caggctggag 240
ccagaggact tcgccgtgta ctattgccag cagggccagg tcatccctcc tacctttgga 300
cagggcacca aggtggagat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggtacc gctagcgttg tgtgcctgct gaataacttt 420
tatccacggg aggctaaggt gcagtggaaa gtggacaatg ccctccagag cggaaatagc 480
caagagtccg ttaccgaaca ggactctaaa gactctacat actccctgtc ctccacactg 540
accctctcca aggccgacta tgagaaacac aaggtttacg catgcgaggt cacacaccag 600
ggactctcct ctcccgtgac caagagcttc aaccggggag aatgc 645
<210> 63
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1-Fc9
<400> 63
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gln Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 64
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding 28H1-Fc9
<400> 64
gaggtgcagc tgctggaatc aggaggagga ctggtgcagc caggaggatc tctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt tacattcagc tctcacgcca tgtcttgggt ccgacaggct 120
ccaggcaaag gactggaatg ggtgtccgct atttgggcca gcggagagca gtactacgcc 180
gacagcgtga agggacggtt caccatcagc cgggacaaca gcaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaaca gcctgagggc ccaggatacc gccgtgtact attgcgccaa gggttggctg 300
ggcaacttcg actattgggg ccagggaacc ctggtgacag tgtccagcgc cagcactaag 360
gggccctctg tgtttccact cgccccttct agcaaaagca cttccggagg aactgccgct 420
ctgggctgtc tggtgaaaga ttacttcccc gaaccagtca ctgtgtcatg gaactctgga 480
gcactgacat ctggagttca cacctttcct gctgtgctgc agagttctgg actgtactcc 540
ctgtcatctg tggtcaccgt gccatcttca tctctgggga cccagaccta catctgtaac 600
gtgaaccaca aaccctccaa cacaaaagtg gacaaacgag tcgaaccaaa atcttgtgac 660
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ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
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ggctccttct tcctctacag cgcgctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
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tccctgtctc cgggtaaa 1338
<210> 65
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5-LC
<400> 65
Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ile Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asp Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 66
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding 5E5-LC
<400> 66
gaactcgtga tgacccagag ccccagctct ctgacagtga cagccggcga gaaagtgacc 60
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tggtatcagc agaaacccgg ccagcccccc aagctgctga tcttttgggc cagcacccgg 180
gaaagcggcg tgcccgatag attcacaggc agcggctccg gcaccgactt taccctgacc 240
atcagctccg tgcaggccga ggacctggcc gtgtattact gccagaacga ctacagctac 300
cccctgacct tcggagccgg caccaagctg gaactgaagc gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gtaccgctag cgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttttatcc acgggaggct aaggtgcagt ggaaagtgga caatgccctc 480
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ctgtcctcca cactgaccct ctccaaggcc gactatgaga aacacaaggt ttacgcatgc 600
gaggtcacac accagggact ctcctctccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggagaatgc 660
<210> 67
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5-Fc9
<400> 67
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly His Phe Ser Pro Gly Asn Thr Asp Ile Lys Tyr Asn Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Lys Thr Ser Thr Phe Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 68
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding 5E5-Fc9
<400> 68
caggtgcagc tgcagcagtc tgatgccgag ctcgtgaagc ctggcagcag cgtgaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gaccacgcca tccactgggt caagcagaag 120
cctgagcagg gcctggaatg gatcggccac ttcagccccg gcaacaccga catcaagtac 180
aacgacaagt tcaagggcaa ggccaccctg accgtggaca gaagcagcag caccgcctac 240
atgcagctga acagcctgac cagcgaggac agcgccgtgt acttctgcaa gaccagcacc 300
ttctttttcg actactgggg ccagggcaca accctgacag tgtctagcgc cagcactaag 360
gggccctctg tgtttccact cgccccttct agcaaaagca cttccggagg aactgccgct 420
ctgggctgtc tggtgaaaga ttacttcccc gaaccagtca ctgtgtcatg gaactctgga 480
gcactgacat ctggagttca cacctttcct gctgtgctgc agagttctgg actgtactcc 540
ctgtcatctg tggtcaccgt gccatcttca tctctgggga cccagaccta catctgtaac 600
gtgaaccaca aaccctccaa cacaaaagtg gacaaacgag tcgaaccaaa atcttgtgac 660
aaaacccaca catgcccacc gtgcccagct ccggaactcc tgggcggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccaagtc gggatgagct gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgtggtgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgtt ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag cgcgctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtaaa 1338
<210> 69
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab-LC
<400> 69
Gln Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Met Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Asp Ser Tyr Pro Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 70
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding E-mab-LC
<400> 70
caggtggtgc tgacccagag ccccgtgatc atgtccgcca gccctggcga gaaggtgacc 60
atgacctgca gcgccagcag cagcatcagc tacatgtact ggtatcaaca gaagcccggc 120
accagcccca agaggtggat ctacgacacc agcaagctgg ctagcggcgt gcctgccaga 180
ttcagcggaa gcggcagcgg caccagctac agcctgacca tcagcaacat ggaggccggc 240
gacgccgcca catactactg ccaccagagg gactcctacc cctggacctt cggcggaggc 300
accaacctgg agatcaagcg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg taccgctagc gttgtgtgcc tgctgaataa cttttatcca 420
cgggaggcta aggtgcagtg gaaagtggac aatgccctcc agagcggaaa tagccaagag 480
tccgttaccg aacaggactc taaagactct acatactccc tgtcctccac actgaccctc 540
tccaaggccg actatgagaa acacaaggtt tacgcatgcg aggtcacaca ccagggactc 600
tcctctcccg tgaccaagag cttcaaccgg ggagaatgc 639
<210> 71
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab-Fc9
<400> 71
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Asp Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Lys Phe
20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Gly Leu Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Glu Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Lys Pro Gly Gly Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
115 120 125
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
180 185 190
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
340 345 350
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 72
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding E-mab-Fc9
<400> 72
caggtgcagc tgaaggagag cggacctgac ctggtggccc ctagccagag cctgagcatc 60
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gattactggg gccacggaac cagcgtgacc gtgagcagcg ccagcactaa ggggccctct 360
gtgtttccac tcgccccttc tagcaaaagc acttccggag gaactgccgc tctgggctgt 420
ctggtgaaag attacttccc cgaaccagtc actgtgtcat ggaactctgg agcactgaca 480
tctggagttc acacctttcc tgctgtgctg cagagttctg gactgtactc cctgtcatct 540
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aaaccctcca acacaaaagt ggacaaacga gtcgaaccaa aatcttgtga caaaacccac 660
acatgcccac cgtgcccagc tccggaactc ctgggcggac cgtcagtctt cctcttcccc 720
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 780
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 840
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ccgggtaaa 1329
<210> 73
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab-LC
<400> 73
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
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130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 74
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding A-mab-LC
<400> 74
gacatcgagc tgacacagag ccctgccatc atgtctgcta gccctggcga gaaagtgacc 60
atgacctgta gcgccagcag cagcgtgtcc tacatgcact ggtatcagca gaagtccggc 120
acaagcccca agcggtggat ctacgataca agcaagctgg cctctggcgt gcccggcaga 180
ttttctggtt ctggcagcgg caacagctac agcctgacaa tcagctccgt ggaagccgag 240
gacgacgcca cctactattg ccagcagtgg tctaagcacc ctctgacctt tggctccggc 300
accaaggtgg aaatcaagcg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg taccgctagc gttgtgtgcc tgctgaataa cttttatcca 420
cgggaggcta aggtgcagtg gaaagtggac aatgccctcc agagcggaaa tagccaagag 480
tccgttaccg aacaggactc taaagactct acatactccc tgtcctccac actgaccctc 540
tccaaggccg actatgagaa acacaaggtt tacgcatgcg aggtcacaca ccagggactc 600
tcctctcccg tgaccaagag cttcaaccgg ggagaatgc 639
<210> 75
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab-Fc9
<400> 75
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
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Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
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275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ala Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 76
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding A-mab-Fc9
<400> 76
caggttcagc tgcagcagtc tggacccgag ctggaaaaac ctggcgcctc cgtgaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc ggctacacca tgaactgggt caagcagagc 120
cacggcaaga gcctggaatg gatcggcctg atcacccctt acaatggcgc cagcagctac 180
aaccagaagt tcagaggcaa ggccacactg accgtggaca agagcagcag caccgcctac 240
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actgccgctc tgggctgtct ggtgaaagat tacttccccg aaccagtcac tgtgtcatgg 480
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<210> 77
<211> 423
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> muIFNa4-Fc6
<400> 77
Met Ala Arg Leu Cys Ala Phe Leu Met Ile Leu Val Met Met Ser Tyr
1 5 10 15
Tyr Trp Ser Ala Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro His Thr Tyr Asn
20 25 30
Leu Gly Asn Lys Arg Ala Leu Thr Val Leu Glu Glu Met Arg Arg Leu
35 40 45
Pro Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp Arg Lys Asp Phe Gly Phe Pro Leu
50 55 60
Glu Lys Val Asp Asn Gln Gln Ile Gln Lys Ala Gln Ala Ile Leu Val
65 70 75 80
Leu Arg Asp Leu Thr Gln Gln Ile Leu Asn Leu Phe Thr Ser Lys Asp
85 90 95
Leu Ser Ala Thr Trp Asn Ala Thr Leu Leu Asp Ser Phe Cys Asn Asp
100 105 110
Leu His Gln Gln Leu Asn Asp Leu Lys Ala Cys Val Met Gln Glu Pro
115 120 125
Pro Leu Thr Gln Glu Asp Ser Leu Leu Ala Val Arg Thr Tyr Phe His
130 135 140
Arg Ile Thr Val Tyr Leu Arg Lys Lys Lys His Ser Leu Cys Ala Trp
145 150 155 160
Glu Val Ile Arg Ala Glu Val Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Thr Asn
165 170 175
Leu Leu Ala Arg Leu Ser Glu Glu Lys Glu Gly Gly Gly Gly Ser Glu
180 185 190
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
195 200 205
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
210 215 220
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
225 230 235 240
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
245 250 255
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
260 265 270
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
275 280 285
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
290 295 300
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
305 310 315 320
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
325 330 335
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Gly Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
340 345 350
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
355 360 365
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Ala Ser
370 375 380
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
385 390 395 400
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
405 410 415
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
420
<210> 78
<211> 1269
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding muIFNa4-Fc6
<400> 78
atggctaggc tctgtgcttt cctcatgatc ctggtaatga tgagctacta ctggtcagcc 60
tgttctctag gatgtgacct gcctcacact tataacctcg ggaacaagag ggccttgaca 120
gtcctggaag aaatgagaag actcccccct ctttcctgcc tgaaggacag gaaggatttt 180
ggattcccct tggagaaggt ggataaccaa cagatccaga aggctcaagc catccttgtg 240
ctaagagatc ttacccagca gattttgaac ctcttcacat caaaagactt gtctgctact 300
tggaatgcaa ctctactaga ctcattctgc aatgacctcc atcagcagct caatgacctc 360
aaagcctgtg tgatgcagga acctcctctg acccaggaag actccctgct ggctgtgagg 420
acatacttcc acaggatcac tgtgtacctg agaaagaaga aacacagcct ctgtgcctgg 480
gaggtgatca gagcagaagt ctggagagcc ctctcttcct caaccaactt gctggcaaga 540
ctgagtgagg agaaggaggg aggaggagga agcgaaccta agagcagcga caagacccac 600
acttgccccc cttgtcccgc tccggaactc ctgggcggac cgtcagtctt cctcttcccc 660
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 720
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 780
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 840
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 900
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 960
gaaccacagg tgtataccct gcccccatcc cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc 1020
ctgagttgcg gggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1080
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgt tggactccga cggctccttc 1140
aagctcgcca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1200
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1260
ccgggtaaa 1269
<210> 79
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> linker sequence
<400> 79
Gly Ser Gly Gly Gly
1 5
<210> 80
<211> 425
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIFNa2-Fc6
<400> 80
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu
20 25 30
Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser
35 40 45
Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His
65 70 75 80
Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser
85 90 95
Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr
100 105 110
Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val
115 120 125
Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys
130 135 140
Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro
145 150 155 160
Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu
165 170 175
Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Gly Gly Gly Gly
180 185 190
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
195 200 205
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
210 215 220
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
225 230 235 240
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
245 250 255
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
260 265 270
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
275 280 285
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
290 295 300
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
305 310 315 320
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
325 330 335
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Gly Val Lys Gly Phe Tyr Pro
340 345 350
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
355 360 365
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu
370 375 380
Ala Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
385 390 395 400
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
405 410 415
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
420 425
<210> 81
<211> 1275
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding huIFNa2-Fc6
<400> 81
atggccttga cctttgcttt actggtggcc ctcctggtgc tcagctgcaa gtcaagctgc 60
tctgtgggct gtgatctgcc tcaaacccac agcctgggta gcaggaggac cttgatgctc 120
ctggcacaga tgaggagaat ctctcttttc tcctgcttga aggacagaca tgactttgga 180
tttccccagg aggagtttgg caaccagttc caaaaggctg aaaccatccc tgtcctccat 240
gagatgatcc agcagatctt caatctcttc agcacaaagg actcatctgc tgcttgggat 300
gagaccctcc tagacaaatt ctacactgaa ctctaccagc agctgaatga cctggaagcc 360
tgtgtgatac agggggtggg ggtgacagag actcccctga tgaaggagga ctccattctg 420
gctgtgagga aatacttcca aagaatcact ctctatctga aagagaagaa atacagccct 480
tgtgcctggg aggttgtcag agcagaaatc atgagatctt tttctttgtc aacaaacttg 540
caagaaagtt taagaagtaa ggaaggagga ggaggaagcg aacctaagag cagcgacaag 600
acccacactt gccccccttg tcccgctccg gaactcctgg gcggaccgtc agtcttcctc 660
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 720
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 780
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 840
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 900
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 960
ccccgagaac cacaggtgta taccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1020
gtcagcctga gttgcggggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1080
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgttgga ctccgacggc 1140
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ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1260
ctgtctccgg gtaaa 1275
<210> 82
<211> 419
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> muIFNb-Fc6
<400> 82
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50 55 60
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210 215 220
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225 230 235 240
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
245 250 255
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
260 265 270
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
275 280 285
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Leu Ser Cys Gly Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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355 360 365
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Ala Ser Lys Leu Thr Val
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Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
385 390 395 400
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
405 410 415
Pro Gly Lys
<210> 83
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding muIFNb-Fc6
<400> 83
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caaaacggag gaggaggaag cgaacctaag agcagcgaca agacccacac ttgcccccct 600
tgtcccgctc cggaactcct gggcggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 660
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 720
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 780
acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 840
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tataccctgc ccccatcccg ggatgagctg accaagaacc aggtcagcct gagttgcggg 1020
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIFNb-Fc6
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420
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<220>
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<400> 85
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<210> 86
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIFNL-Fc6
<400> 86
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Ala Val Ala Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys
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Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala
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Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys
50 55 60
Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg
65 70 75 80
Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala
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Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp
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Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
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130 135 140
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
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Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
165 170 175
Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg
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Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys
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Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
225 230 235 240
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
245 250 255
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
260 265 270
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
275 280 285
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
290 295 300
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
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Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
325 330 335
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
340 345 350
Val Ser Leu Ser Cys Gly Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
355 360 365
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
370 375 380
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Ala Ser Lys Leu
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Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
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Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
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Leu Ser Pro Gly Lys
435
<210> 87
<211> 1311
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding huIFNL-Fc6
<400> 87
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aggccccggg gccgcctcca ccactggctg caccggctcc aggaggcccc caaaaaggag 480
tccgctggct gcctggaggc atctgtcacc ttcaacctct tccgcctcct cacgcgagac 540
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<210> 88
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> linker sequence
<400> 88
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 89
<211> 407
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIL10-Fc6
<400> 89
Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro
1 5 10 15
Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
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Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu
35 40 45
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu
85 90 95
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
100 105 110
Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe
115 120 125
Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp
130 135 140
Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
165 170 175
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
180 185 190
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
195 200 205
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
210 215 220
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
225 230 235 240
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
245 250 255
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
260 265 270
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
275 280 285
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
290 295 300
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
305 310 315 320
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Gly Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
325 330 335
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
340 345 350
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Ala Ser
355 360 365
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
370 375 380
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
385 390 395 400
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
405
<210> 90
<211> 1221
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding huIL10-Fc6
<400> 90
agccccggcc agggcacaca gtccgagaac agctgcaccc actttcccgg caacctgcct 60
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ctgaggctga ggctgaggag gtgccacagg ttcctgccct gtgagaacaa atccaaggcc 360
gtggagcagg tgaagaacgc cttcaacaag ctgcaggaaa agggcatcta caaggccatg 420
agcgagttcg acatctttat caactatatc gaggcctaca tgacaatgaa gatcaggaac 480
ggcggcggcg gcagcggggg cggcggcagc ggaggaggcg gcagcgaacc taagagcagc 540
gacaagaccc acacttgccc cccttgtccc gctccggaac tcctgggcgg accgtcagtc 600
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 660
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 720
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 780
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 840
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 900
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtatacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 960
aaccaggtca gcctgagttg cggggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1020
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gttggactcc 1080
gacggctcct tcaagctcgc cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1140
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1200
ctctccctgt ctccgggtaa a 1221
<210> 91
<211> 582
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> (huIL10)2-Fc6
<400> 91
Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro
1 5 10 15
Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
20 25 30
Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu
35 40 45
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu
85 90 95
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
100 105 110
Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe
115 120 125
Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp
130 135 140
Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn
145 150 155 160
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser
165 170 175
Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly
180 185 190
Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val
195 200 205
Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys
210 215 220
Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu
225 230 235 240
Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu
245 250 255
Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn
260 265 270
Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro
275 280 285
Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn
290 295 300
Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile
305 310 315 320
Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Gly
325 330 335
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro
340 345 350
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
355 360 365
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
370 375 380
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385 390 395 400
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
405 410 415
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
420 425 430
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
435 440 445
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
450 455 460
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
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Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
485 490 495
Gln Val Ser Leu Ser Cys Gly Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
500 505 510
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
515 520 525
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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
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Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
565 570 575
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
580
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<211> 1746
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<211> 577
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<220>
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Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu
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260 265 270
Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro
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Lys
<210> 94
<211> 1731
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding (huIL10)2-Fc9
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<211> 577
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> (huIL10)2-Fc-hole
<400> 95
Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro
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<210> 96
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding (huIL10)2-Fc-hole
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275 280 285
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<212> DNA
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<220>
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
260 265 270
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Cys Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
275 280 285
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
290 295 300
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
305 310 315 320
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
325 330 335
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
340 345 350
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
355 360 365
Gly Lys
370
<210> 100
<211> 1110
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> nucleic acid molecules encoding husIL2-Fc-hole
<400> 100
gcccctacaa gcagcagcac caagaagacc cagctgcagc tggaacacct gctgctggat 60
ctgcagatga tcctgaacgg catcaacaac tacaagaacc ccaagctgac ccggatgctg 120
accttcaagt tctacatgcc caagaaggcc accgagctga agcacctcca gtgtctggag 180
gaggagctga agcctctgga ggaagtgctg aacctggccc agagcaagaa cttccacttc 240
gaccccaggg acgtggtgtc caacatcaac gtgttcgtgc tggaactgaa gggcagcgag 300
accaccttca tgtgcgagta cgccgacgag accgctacca tcgtggagtt cctgaaccgc 360
tggatcacct tttgccagag catcatcagc acactgaccg gaggaggagg aagcgagcct 420
aagtccagcg acaagaccca cacctgcccc ccttgccccg ctccggaact cctgggcgga 480
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 540
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 600
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 660
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 720
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 780
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtataccc tgcccccatc ccggtgtgag 840
ctgaccaaga accaggtcag cctgagttgc gcggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 900
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 960
ttggactccg acggctcctt cttcctcgtc agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1020
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1080
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1110
<210> 101
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Cetuximab light chain CDR1
<400> 101
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn Ile His
1 5 10
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Cetuximab light chain CDR2
<400> 102
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Cetuximab light chain CDR3
<400> 103
Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr Thr
1 5
<210> 104
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Cetuximab light chain variable region
<400> 104
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 105
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Cetuximab heavy chain CDR1
<400> 105
Asn Tyr Gly Val His
1 5
<210> 106
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Cetuximab heavy chain CDR2
<400> 106
Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr Ser
1 5 10 15
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Cetuximab heavy chain CDR3
<400> 107
Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 108
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Cetuximab heavy chain variable region
<400> 108
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 109
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806 light chain CDR1
<400> 109
His Ser Ser Gln Asp Ile Asn Ser Asn Ile Gly
1 5 10
<210> 110
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806 light chain CDR2
<400> 110
His Gly Thr Asn Leu Asp Asp
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806 light chain CDR3
<400> 111
Val Gln Tyr Ala Gln Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 112
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806 light chain variable region
<400> 112
Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys His Ser Ser Gln Asp Ile Asn Ser Asn
20 25 30
Ile Gly Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ser Phe Lys Gly Leu Ile
35 40 45
Tyr His Gly Thr Asn Leu Asp Asp Glu Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Gln Tyr Ala Gln Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 113
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806 heavy chain CDR1
<400> 113
Ser Asp Phe Ala Trp Asn
1 5
<210> 114
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806 heavy chain CDR2
<400> 114
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 115
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806 heavy chain CDR3
<400> 115
Ala Gly Arg Gly Phe Pro Tyr
1 5
<210> 116
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Mab806 heavy chain variable region
<400> 116
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ile Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Thr Ala Gly Arg Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ala
115
<210> 117
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Trastuzumab light chain CDR1
<400> 117
Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 118
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Trastuzumab light chain CDR2
<400> 118
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
1 5
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Trastuzumab light chain CDR3
<400> 119
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 120
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Trastuzumab light chain variable region
<400> 120
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 121
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Trastuzumab heavy chain CDR1
<400> 121
Asp Thr Tyr Ile His
1 5
<210> 122
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Trastuzumab heavy chain CDR2
<400> 122
Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 123
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Trastuzumab heavy chain CDR3
<400> 123
Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 124
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Trastuzumab heavy chain variable region
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pertuzumab light chain CDR1
<400> 125
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly Val Ala
1 5 10
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pertuzumab light chain CDR2
<400> 126
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 127
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pertuzumab light chain CDR3
<400> 127
Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 128
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pertuzumab light chain variable region
<400> 128
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 129
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pertuzumab heavy chain CDR1
<400> 129
Asp Tyr Thr Met Asp
1 5
<210> 130
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pertuzumab heavy chain CDR2
<400> 130
Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 131
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pertuzumab heavy chain CDR3
<400> 131
Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 132
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pertuzumab heavy chain variable region
<400> 132
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 133
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB light chain CDR1
<400> 133
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 134
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB light chain CDR2
<400> 134
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 135
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB light chain CDR3
<400> 135
Ser Gln Asn Thr His Val Pro Pro Thr
1 5
<210> 136
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB light chain variable region
<400> 136
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Asn
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 137
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB heavy chain CDR1
<400> 137
Asp Tyr Glu Met His
1 5
<210> 138
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB heavy chain CDR2
<400> 138
Ala Leu Asp Pro Lys Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Ser Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 139
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB heavy chain CDR3
<400> 139
Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr
1 5
<210> 140
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> C-MAB heavy chain variable region
<400> 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Leu Asp Pro Lys Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 141
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1 light chain CDR1
<400> 141
Ser Arg Ser Tyr Leu Ala
1 5
<210> 142
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1 light chain CDR2
<400> 142
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 143
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1 light chain CDR3
<400> 143
Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro Pro Thr
1 5
<210> 144
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1 light chain variable region
<400> 144
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Ile Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 145
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1 heavy chain CDR1
<400> 145
Ser His Ala Met Ser
1 5
<210> 146
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1 heavy chain CDR2
<400> 146
Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 147
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1 heavy chain CDR3
<400> 147
Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr
1 5
<210> 148
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 28H1 heavy chain variable region
<400> 148
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gln Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 149
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5 light chain CDR1
<400> 149
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asp Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 150
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5 light chain CDR2
<400> 150
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 151
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5 light chain CDR3
<400> 151
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 152
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5 light chain variable region
<400> 152
Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ile Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asp Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 153
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5 heavy chain CDR1
<400> 153
Asp His Ala Ile His
1 5
<210> 154
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5 heavy chain CDR2
<400> 154
His Phe Ser Pro Gly Asn Thr Asp Ile Lys Tyr Asn Asp Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 155
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5 heavy chain CDR3
<400> 155
Ser Thr Phe Phe Phe Asp Tyr
1 5
<210> 156
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5E5 heavy chain variable region
<400> 156
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly His Phe Ser Pro Gly Asn Thr Asp Ile Lys Tyr Asn Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Lys Thr Ser Thr Phe Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 157
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab light chain CDR1
<400> 157
Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 158
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab light chain CDR2
<400> 158
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 159
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab light chain CDR3
<400> 159
His Gln Arg Asp Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 160
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab light chain variable region
<400> 160
Gln Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Met Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Asp Ser Tyr Pro Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 161
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab heavy chain CDR1
<400> 161
Lys Phe Gly Val Asn
1 5
<210> 162
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab heavy chain CDR2
<400> 162
Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Gly Leu Ile Ser
1 5 10 15
<210> 163
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab heavy chain CDR3
<400> 163
Pro Gly Gly Asp Tyr
1 5
<210> 164
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E-mab heavy chain variable region
<400> 164
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Asp Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Lys Phe
20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Gly Leu Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Glu Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Lys Pro Gly Gly Asp Tyr Trp Gly His Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 165
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab light chain CDR1
<400> 165
Ser Tyr Met His Trp
1 5
<210> 166
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab light chain CDR2
<400> 166
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 167
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab light chain CDR3
<400> 167
Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
1 5
<210> 168
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab light chain variable region
<400> 168
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 169
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab heavy chain CDR1
<400> 169
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 170
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab heavy chain CDR2
<400> 170
Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 171
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab heavy chain CDR3
<400> 171
Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 172
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A-mab heavy chain variable region
<400> 172
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 173
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> husIL2
<400> 173
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Phe
65 70 75 80
Asp Pro Arg Asp Val Val Ser Asn Ile Asn Val Phe Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 174
<211> 186
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> muIFNa4
<400> 174
Met Ala Arg Leu Cys Ala Phe Leu Met Ile Leu Val Met Met Ser Tyr
1 5 10 15
Tyr Trp Ser Ala Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro His Thr Tyr Asn
20 25 30
Leu Gly Asn Lys Arg Ala Leu Thr Val Leu Glu Glu Met Arg Arg Leu
35 40 45
Pro Pro Leu Ser Cys Leu Lys Asp Arg Lys Asp Phe Gly Phe Pro Leu
50 55 60
Glu Lys Val Asp Asn Gln Gln Ile Gln Lys Ala Gln Ala Ile Leu Val
65 70 75 80
Leu Arg Asp Leu Thr Gln Gln Ile Leu Asn Leu Phe Thr Ser Lys Asp
85 90 95
Leu Ser Ala Thr Trp Asn Ala Thr Leu Leu Asp Ser Phe Cys Asn Asp
100 105 110
Leu His Gln Gln Leu Asn Asp Leu Lys Ala Cys Val Met Gln Glu Pro
115 120 125
Pro Leu Thr Gln Glu Asp Ser Leu Leu Ala Val Arg Thr Tyr Phe His
130 135 140
Arg Ile Thr Val Tyr Leu Arg Lys Lys Lys His Ser Leu Cys Ala Trp
145 150 155 160
Glu Val Ile Arg Ala Glu Val Trp Arg Ala Leu Ser Ser Ser Thr Asn
165 170 175
Leu Leu Ala Arg Leu Ser Glu Glu Lys Glu
180 185
<210> 175
<211> 188
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIFNa2
<400> 175
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu
20 25 30
Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser
35 40 45
Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His
65 70 75 80
Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser
85 90 95
Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr
100 105 110
Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val
115 120 125
Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys
130 135 140
Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro
145 150 155 160
Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu
165 170 175
Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu
180 185
<210> 176
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> muIFNb
<400> 176
Met Asn Asn Arg Trp Ile Leu His Ala Ala Phe Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Ile Asn Tyr Lys Gln Leu Gln Leu Gln Glu Arg
20 25 30
Thr Asn Ile Arg Lys Cys Gln Glu Leu Leu Glu Gln Leu Asn Gly Lys
35 40 45
Ile Asn Leu Thr Tyr Arg Ala Asp Phe Lys Ile Pro Met Glu Met Thr
50 55 60
Glu Lys Met Gln Lys Ser Tyr Thr Ala Phe Ala Ile Gln Glu Met Leu
65 70 75 80
Gln Asn Val Phe Leu Val Phe Arg Asn Asn Phe Ser Ser Thr Gly Trp
85 90 95
Asn Glu Thr Ile Val Val Arg Leu Leu Asp Glu Leu His Gln Gln Thr
100 105 110
Val Phe Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Gln Glu Glu Arg Leu Thr
115 120 125
Trp Glu Met Ser Ser Thr Ala Leu His Leu Lys Ser Tyr Tyr Trp Arg
130 135 140
Val Gln Arg Tyr Leu Lys Leu Met Lys Tyr Asn Ser Tyr Ala Trp Met
145 150 155 160
Val Val Arg Ala Glu Ile Phe Arg Asn Phe Leu Ile Ile Arg Arg Leu
165 170 175
Thr Arg Asn Phe Gln Asn
180
<210> 177
<211> 187
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIFNb
<400> 177
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu
50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
115 120 125
Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys
130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
180 185
<210> 178
<211> 200
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIFNL
<400> 178
Met Ala Ala Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu
1 5 10 15
Ala Val Ala Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys
20 25 30
Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala
35 40 45
Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys
50 55 60
Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg
65 70 75 80
Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala
85 90 95
Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp
100 105 110
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
115 120 125
Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly
130 135 140
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
145 150 155 160
Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
165 170 175
Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg
180 185 190
Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
195 200
<210> 179
<211> 160
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIL10
<400> 179
Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro
1 5 10 15
Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
20 25 30
Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu
35 40 45
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu
85 90 95
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
100 105 110
Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe
115 120 125
Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp
130 135 140
Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn
145 150 155 160
<210> 180
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> (huIL10)2
<400> 180
Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro
1 5 10 15
Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
20 25 30
Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu
35 40 45
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu
85 90 95
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
100 105 110
Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe
115 120 125
Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp
130 135 140
Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn
145 150 155 160
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser
165 170 175
Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly
180 185 190
Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val
195 200 205
Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys
210 215 220
Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu
225 230 235 240
Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu
245 250 255
Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn
260 265 270
Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro
275 280 285
Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn
290 295 300
Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile
305 310 315 320
Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn
325 330 335

Claims (39)

1.一种蛋白质异二聚体，其包含第一成员和不同于所述第一成员的第二成员，其中：
所述第一成员包含轻链和重链，所述重链包含第一Fc区，所述轻链与所述重链复合以形成表现出对肿瘤抗原的结合特异性的靶向部分；
所述第二成员包含多肽，所述多肽包含与第二Fc区融合的免疫调节剂；
所述第一成员与所述第二成员通过所述第一Fc区与所述第二Fc区的复合而缔合，以形成所述异二聚体；并且
所述第一Fc区包含第一修饰和/或所述第二Fc区包含第二修饰，其中，与包含节修饰和孔修饰的节孔修饰相比，所述第一修饰和/或所述第二修饰更有效地促进所述第一成员和所述第二成员之间的异二聚化。
2.根据权利要求1所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二成员中包含的所述多肽是融合蛋白，并且所述免疫调节剂的C端与所述第二Fc区的N端融合以形成所述融合蛋白，任选地通过接头融合。
3.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述肿瘤抗原选自EGFR、EGFR突变体、HER2/neu、GPC3、FAP、Muc1、MUC5AC和间皮素。
4.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述免疫调节剂是选自干扰素、白介素、趋化因子、淋巴因子和肿瘤坏死因子的细胞因子。
5.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述免疫调节剂是选自干扰素α、干扰素λ和干扰素β的干扰素。
6.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述免疫调节剂是白介素，所述白介素包含白介素10、白介素2和/或超级白介素2。
7.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一Fc区和所述第二Fc区来自免疫球蛋白的Fc区，所述免疫球蛋白是人IgG1。
8.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二成员中包含的所述多肽包含两种或更多种免疫调节剂，所述两种或更多种免疫调节剂彼此框内融合并与所述第二Fc区融合，其中所述两种或更多种免疫调节剂位于所述第二Fc区的N末端。
9.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一修饰包含在位置T366处的氨基酸取代，以及在选自Y349、F405、K409、D399、K360、Q347、K392和S354中的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
10.根据权利要求9所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一修饰包含的氨基酸取代选自Y349C、Y349D、D399S、F405K、K360E、K409A、K409E、Q347E、Q347R、S354D、K392D和T366W。
11.根据权利要求9-10中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：
1)Y349和T366；
2)Y349、T366和F405；
3)Y349、T366和K409；
4)Y349、T366、F405、K360和Q347；
5)Y349、T366、F405和Q347；
6)Y349、T366、K409、K360和Q347；
7)Y349、T366、K409和Q347；
8)T366、K409和K392；
9)T366和K409；
10)T366、K409、Y349和S354；
11)T366和F405；
12)T366、F405和D399；以及
13)T366、F405、Y349和S354。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一修饰包含选自以下组中任意一组氨基酸取代：
1)Y349C和T366W；
2)Y349C、T366W和F405K；
3)Y349C、T366W和K409E；
4)Y349C、T366W和K409A；
5)Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；
6)Y349C、T366W、F405K和Q347R；
7)Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；
8)Y349C、T366W、K409A和Q347R；
9)T366W、K409A和K392D；
10)T366W和K409A；
11)T366W、K409A和Y349D；
12)T366W、K409A、Y349D和S354D；
13)T366W和F405K；
14)T366W、F405K和D399S；
15)T366W、F405K和Y349D；以及
16)T366W、F405K、Y349D和S354D。
13.根据权利要求9至12中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二修饰包含在位置T366、L368和Y407处的氨基酸取代，以及在选自D356、D399、E357、F405、K360、K392、K409和Q347中的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
14.根据权利要求13所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二修饰包含的所述氨基酸取代选自D356C、D399S、E357A、F405K、K360E、K392D、K409A、L368A、L368G、Q347E、Q347R、T366S、Y407A和Y407V。
15.根据权利要求13至14中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：
1)D356、T366、L368、Y407和F405；
2)D356、T366、L368和Y407；
3)D356、T366、L368、Y407和Q347；
4)D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；
5)D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；
6)D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；
7)T366、L368、Y407、D399和F405；
8)T366、L368、Y407和F405；
9)T366、L368、Y407、F405和E357；
10)T366、L368、Y407和K409；
11)T366、L368、Y407、K409和K392；以及
12)T366、L368、Y407、K409和E357。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二修饰包含选自以下组中的任意一组氨基酸取代：
1)D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；
2)D356C、T366S、L368A和Y407V；
3)D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；
4)D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E和Q347E；
5)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；
6)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；
7)T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；
8)T366S、L368G、Y407A和F405K；
9)T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；
10)T366S、L368A、Y407V和K409A；
11)T366S、L368A、Y407V、K409A和K392D；
12)T366S、L368G、Y407A和K409A；
13)T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A。
17.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一Fc区包含所述第一修饰，所述第二Fc区包含所述第二修饰，并且所述第一修饰和所述第二修饰包含在选自以下组中任意一组位置处的氨基酸取代：
1)第一修饰：Y349和T366；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；
2)第一修饰：Y349、T366和F405；第二修饰：D356、T366、L368和Y407；
3)第一修饰：Y349、T366和K409；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；
4)第一修饰：Y349、T366、F405、K360和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407和Q347；
5)第一修饰：Y349、T366、F405和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；
6)第一修饰：Y349、T366、K409、K360和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；
7)第一修饰：Y349、T366、K409和Q347；第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；
8)第一修饰：T366、K409和K392；第二修饰：T366、L368、Y407、D399和F405；
9)第一修饰：T366和K409；第二修饰：T366、L368、Y407和F405；
10)第一修饰：T366、K409和Y349；第二修饰：T366、L368、Y407、F405和E357；
11)第一修饰：T366、K409、Y349和S354；第二修饰：T366、L368、Y407、F405和E357；
12)第一修饰：T366和F405；第二修饰：T366、L368、Y407和K409；
13)第一修饰：T366、F405和D399；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和K392；
14)第一修饰：T366、F405和Y349；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和E357；
15)第一修饰：T366、F405、Y349和S354；第二修饰：T366、L368、Y407、K409和E357；
其中所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
18.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一Fc区包含所述第一修饰，所述第二Fc区包含所述第二修饰，其中所述第一修饰和所述第二修饰包含选自以下组中任意一组氨基酸取代：
1)第一修饰：Y349C和T366W；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；
2)第一修饰：Y349C、T366W和F405K；第二修饰：D356C、T366S、L368A和Y407V；
3)第一修饰：Y349C、T366W和K409E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；
4)第一修饰：Y349C、T366W和K409A；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；
5)第一修饰：Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；
6)第一修饰：Y349C、T366W、F405K和Q347R；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E和Q347E；
7)第一修饰：Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；
8)第一修饰：Y349C、T366W、K409A和Q347R；第二修饰：D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；
9)第一修饰：T366W、K409A和K392D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；
10)第一修饰：T366W和K409A；第二修饰：T366S、L368G、Y407A和F405K；
11)第一修饰：T366W、K409A和Y349D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；
12)第一修饰：T366W、K409A、Y349D和S354D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；
13)第一修饰：T366W和F405K；第二修饰：T366S、L368A、Y407V和K409A；
14)第一修饰：T366W、F405K和D399S；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和K392D；
15)第一修饰：T366W和F405K；第二修饰：T366S、L368G、Y407A和K409A；
16)第一修饰：T366W、F405K和Y349D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；
17)第一修饰：T366W、F405K、Y349D和S354D；第二修饰：T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；
其中所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
19.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一Fc区包含所述第一修饰，所述第二Fc区包含所述第二修饰，所述第一修饰包含氨基酸取代T366W和K409A，所述第二修饰包含氨基酸取代T366S、L368G、Y407A和F405K，其中所述氨基酸的位置根据KABAT号的EU索引确定。
20.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述靶向部分特异性结合EGFR，所述第一成员的所述轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：101所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：102所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：103所示；所述第一成员的所述重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：105所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：106所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：107所示。
21.根据权利要求1-19中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述靶向部分特异性结合EGFR突变体，所述第一成员的所述轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：109所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：110所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：111所示；所述第一成员的所述重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：113所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：114所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：115所示。
22.根据权利要求1-19中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述靶向部分特异性结合HER2/neu，所述第一成员的所述轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：117和125，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：118和126，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：119和127；所述第一成员的所述重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：121和129，CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：122和130，CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：123和131。
23.根据权利要求1-19中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述靶向部分特异性结合GPC3，所述第一成员的所述轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：133所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：134所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：135所示；所述第一成员的所述重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：137所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：138所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：139所示。
24.根据权利要求1-19中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述靶向部分特异性结合FAP，所述第一成员的所述轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：141所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：142所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：143所示；所述第一成员的所述重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：145所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：146所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：147所示。
25.根据权利要求1-19中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述靶向部分特异性结合Muc1，所述第一成员的所述轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：149所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：150所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：151所示；所述第一成员的所述重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：153所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：154所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：155所示。
26.根据权利要求1-19中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述靶向部分特异性结合间皮素，所述第一成员的所述轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：165所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：166所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：167所示；所述第一成员的所述重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：169所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：170所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：171所示。
27.根据权利要求1-19中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述靶向部分特异性结合MUC5AC，所述第一成员的所述轻链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：157所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：158所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：159所示；所述第一成员的所述重链包含CDR1-3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：161所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：162所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：163所示。
28.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中在所述第一成员的所述重链中，所述第一Fc区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：1、4、5、6、7、9、11、13、15、17、19、21、22、24、26、27和29。
29.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二成员中包含的所述免疫调节剂的氨基酸序列选自SEQ ID NO：173-180。
30.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二成员中包含的所述第二Fc区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：2、3、8、10、12、14、16、18、20、23、25和28。
31.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第二成员中包含的所述多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO：77、80、82、84、86、89、91和97。
32.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中所述第一成员中包含的所述轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：37、45、49、53、57、61、65、69和73，所述第一成员中包含的所述重链的氨基酸序列选自SEQ ID NO：39、47、51、55、59、63、67、71和75，所述第二成员中包含的所述多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO：77、80、82、84、86、89、91和97。
33.一种分离的多核苷酸，其编码根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质异二聚体。
34.一种载体，其包含根据权利要求33所述的分离的多核苷酸。
35.一种分离的宿主细胞，其包含根据权利要求33所述的分离的多核苷酸或根据权利要求34所述的载体。
36.一种蛋白质混合物，其包含：
1)根据权利要求1-32中任一项所述的蛋白质异二聚体；
2)由两个所述蛋白质异二聚体的所述第一成员形成的第一同二聚体；以及
3)由两个所述蛋白质异二聚体的所述第二成员形成的第二同二聚体；
其中所述蛋白质异二聚体在所述蛋白质混合物中的百分比为至少50％。
37.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-32中任一项所述的蛋白质异二聚体；或根据权利要求36所述的蛋白质混合物，以及任选地药学上可接受的赋形剂。
38.根据权利要求1-32中任一项所述的蛋白质异二聚体或根据权利要求36所述的蛋白质混合物在制备用于抑制肿瘤或肿瘤细胞生长的药物和/或试剂盒中的用途。
39.一种生产根据权利要求1-32中任一项所述的蛋白质异二聚体或根据权利要求36所述的蛋白质混合物的方法，其包含：(i)在影响所述蛋白质异二聚体表达的条件下培养根据权利要求35所述的宿主细胞，以及ii)收获表达的所述蛋白质异二聚体或包含所述蛋白质异二聚体的所述蛋白质混合物。
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