CN110702669A - 一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法 - Google Patents

一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，本发明具体包括以下步骤：S1、待测品的稀释，S2、首次电泳检测，S3、流动相检测预处理溶液的制备，S4、阿昔洛韦的氧化发光处理，S5、发光含量检测，S6、检测结果分析，本发明涉及医药测定技术领域。该快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，可实现通过采用高效毛细管电泳和流动相注射检测相结合的方法进行阿昔洛韦的检测测定，具有检测柱效高、分离速度快，样品量小和仪器简单的优点，专属性强，且快速准确，很好的达到了线性范围宽、灵敏度高和分析速度快的目的，无需检测人员花费大量的时间进行等待检测，很好的实现了既快速又准确的进行阿昔洛韦的测定。

Description

一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法
技术领域
本发明涉及医药测定技术领域，具体为一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法。
背景技术
阿昔洛韦为一种合成的嘌呤核苷类似物，主要用于单纯疱疹病毒所致的各种感染，可用于初发或复发性皮肤、粘膜，外生殖器感染及免疫缺陷者发生的HSV感染，为治疗HSV脑炎的首选药物，减少发病率及降低死亡率均优于阿糖腺苷，还可用于带状疱疹、EB病毒及免疫缺陷者并发水痘等感染，局部仅用于皮肤，阿昔洛韦的皮肤吸收较少，阿昔洛韦在制备或者安全检测的过程中都需要对阿昔洛韦的含量检测测定，以确保能够准确判断阿昔洛韦药品是否达到标准要求。
目前的测定方法有对照高效液相色谱法测定，且色谱条件与系统适用性试验详细方法为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水(10：90)为流动相；检测波长为254nm。取阿昔洛韦对照品溶液5ml，加入鸟嘌呤与其他有关物质项下的鸟嘌呤对照品贮备液1ml，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，阿昔洛韦峰与鸟嘌呤峰的分离度应符合要求，其测定法为：取本品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液5ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿昔洛韦对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
然而，现有的测定方法检测速度慢，且检测精度低，检测专属性弱，检测线性范围小、灵敏度低、分析慢，需要检测人员花费大量的时间进行等待检测，不能实现既快速又准确的进行阿昔洛韦的测定，从而给人们的阿昔洛韦的测定工作带来了极大的不便。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，解决了现有的测定方法检测速度慢，且检测精度低，检测专属性弱，检测线性范围小、灵敏度低、分析慢，需要检测人员花费大量的时间进行等待检测，不能实现既快速又准确的进行阿昔洛韦测定的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，具体包括以下步骤：
S1、待测品的稀释：首先将20-30ml的待检测的待测品加入50或100ml的试剂瓶中，然后加入相应重量的清水摇匀进行稀释；
S2、首次电泳检测：将步骤S1稀释后的待测品中加入8-13ml硼砂缓冲液，然后将用非涂层渍石英毛细管插入溶液中，启动液相色谱仪，同时施加检测电压，来进行检测，色谱仪的柱温为25-28℃，检测波长为230-240nm，之后通过分析色谱仪检测结果，即可得到阿昔洛韦含量；
S3、流动相检测预处理溶液的制备：将步骤S2电泳检测后的待测品中分别加入10-15ml的强氧化钠碱性溶液和2-6ml的过氧化氢溶液，然后通过搅拌设备进行搅拌5-10min，从而得到流动相检测预处理溶液；
S4、阿昔洛韦的氧化发光处理：向步骤S3得到的流动相检测预处理溶液中加入5-7ml的氢氧化钴，然后通过混合搅拌设备进行充分搅拌5-10min，使二价钴离子催化过氧化氢氧化待测品中的阿昔洛韦，并使待测液化学发光，之后加入1-3ml的罗丹明B溶液进行发光增强处理；
S5、发光含量检测：之后将步骤S4处理后的待测液通过流动注射设备注入检测试剂瓶中，并且控制检测压力为5-8Pa，且增敏效果与阿昔洛韦浓度呈线性关系，然后通过检测显示设备显示出阿昔洛韦的浓度；
S6、检测结果分析：最好将步骤S2和步骤S5得到的阿昔洛韦含量进行综合分析处理，从而得到阿昔洛韦的最终测定含量。
优选的，所述步骤S2中所加入的硼砂缓冲液浓度为20-30mmol/L，且其pH为9-10。
优选的，所述步骤S2中施加的检测电压为20-25KV，且液相色谱仪的型号为WATERS2478-2695。
优选的，所述步骤S1中加入清水的量为40-50ml。
优选的，所述步骤S3中氢氧化钠溶液的浓度为0.5-0.8mpl/L，且过氧化氢溶液的浓度为0.2-0.4mpl/L。
优选的，所述步骤S3和步骤S4中搅拌设备是选取型号为S93AM的磁力震荡搅拌机。
优选的，所述步骤S4中所加入的氢氧化钴浓度为0.3-1.3mol/L，且罗丹明B的浓度为0.4-0.8mol/L。
(三)有益效果
本发明提供了一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，通过在具体包括以下步骤：S1、待测品的稀释：首先将20-30ml的待检测的待测品加入50或100ml的试剂瓶中，然后加入相应重量的清水摇匀进行稀释，S2、首次电泳检测：将步骤S1稀释后的待测品中加入8-13ml硼砂缓冲液，然后将用非涂层渍石英毛细管插入溶液中，启动液相色谱仪，同时施加检测电压，来进行检测，色谱仪的柱温为25-28℃，检测波长为230-240nm，之后通过分析色谱仪检测结果，即可得到阿昔洛韦含量，S3、流动相检测预处理溶液的制备：将步骤S2电泳检测后的待测品中分别加入10-15ml的强氧化钠碱性溶液和2-6ml的过氧化氢溶液，然后通过搅拌设备进行搅拌5-10min，从而得到流动相检测预处理溶液，S4、阿昔洛韦的氧化发光处理：向步骤S3得到的流动相检测预处理溶液中加入5-7ml的氢氧化钴，然后通过混合搅拌设备进行充分搅拌5-10min，使二价钴离子催化过氧化氢氧化待测品中的阿昔洛韦，并使待测液化学发光，之后加入1-3ml的罗丹明B溶液进行发光增强处理，S5、发光含量检测：之后将步骤S4处理后的待测液通过流动注射设备注入检测试剂瓶中，并且控制检测压力为5-8Pa，且增敏效果与阿昔洛韦浓度呈线性关系，然后通过检测显示设备显示出阿昔洛韦的浓度，S6、检测结果分析：最好将步骤S2和步骤S5得到的阿昔洛韦含量进行综合分析处理，从而得到阿昔洛韦的最终测定含量，可实现通过采用高效毛细管电泳和流动相注射检测相结合的方法进行阿昔洛韦的检测测定，具有检测柱效高、分离速度快，样品量小和仪器简单的优点，专属性强，且快速准确，很好的达到了线性范围宽、灵敏度高和分析速度快的目的，无需检测人员花费大量的时间进行等待检测，很好的实现了既快速又准确的进行阿昔洛韦的测定，从而大大方便了人们的阿昔洛韦的测定工作。
附图说明
图1为本发明的流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，本发明实施例提供三种技术方案：一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，具体包括以下实施例：
实施例1
S1、待测品的稀释：首先将25ml的待检测的待测品加入100ml的试剂瓶中，然后加入相应重量的清水摇匀进行稀释，清水的量为45ml；
S2、首次电泳检测：将步骤S1稀释后的待测品中加入10ml硼砂缓冲液，然后将用非涂层渍石英毛细管插入溶液中，启动液相色谱仪，同时施加检测电压，来进行检测，色谱仪的柱温为27℃，检测波长为235nm，施加的检测电压为23KV，且液相色谱仪的型号为WATERS2478-2695，之后通过分析色谱仪检测结果，即可得到阿昔洛韦含量，所加入的硼砂缓冲液浓度为25mmol/L，且其pH为9.5；
S3、流动相检测预处理溶液的制备：将步骤S2电泳检测后的待测品中分别加入13ml的强氧化钠碱性溶液和4ml的过氧化氢溶液，然后通过搅拌设备进行搅拌7min，从而得到流动相检测预处理溶液，氢氧化钠溶液的浓度为0.7mpl/L，且过氧化氢溶液的浓度为0.3mpl/L，搅拌设备是选取型号为S93AM的磁力震荡搅拌机；
S4、阿昔洛韦的氧化发光处理：向步骤S3得到的流动相检测预处理溶液中加入6ml的氢氧化钴，然后通过混合搅拌设备进行充分搅拌7min，使二价钴离子催化过氧化氢氧化待测品中的阿昔洛韦，并使待测液化学发光，之后加入2ml的罗丹明B溶液进行发光增强处理，搅拌设备是选取型号为S93AM的磁力震荡搅拌机，所加入的氢氧化钴浓度为0.7mol/L，且罗丹明B的浓度为0.6mol/L；
S5、发光含量检测：之后将步骤S4处理后的待测液通过流动注射设备注入检测试剂瓶中，并且控制检测压力为7Pa，且增敏效果与阿昔洛韦浓度呈线性关系，然后通过检测显示设备显示出阿昔洛韦的浓度；
S6、检测结果分析：最好将步骤S2和步骤S5得到的阿昔洛韦含量进行综合分析处理，从而得到阿昔洛韦的最终测定含量。
实施例2
S1、待测品的稀释：首先将20ml的待检测的待测品加入50ml的试剂瓶中，然后加入相应重量的清水摇匀进行稀释，清水的量为40ml；
S2、首次电泳检测：将步骤S1稀释后的待测品中加入8ml硼砂缓冲液，然后将用非涂层渍石英毛细管插入溶液中，启动液相色谱仪，同时施加检测电压，来进行检测，色谱仪的柱温为25℃，检测波长为230nm，施加的检测电压为20KV，且液相色谱仪的型号为WATERS2478-2695，之后通过分析色谱仪检测结果，即可得到阿昔洛韦含量，所加入的硼砂缓冲液浓度为20mmol/L，且其pH为9；
S3、流动相检测预处理溶液的制备：将步骤S2电泳检测后的待测品中分别加入10ml的强氧化钠碱性溶液和2ml的过氧化氢溶液，然后通过搅拌设备进行搅拌5min，从而得到流动相检测预处理溶液，氢氧化钠溶液的浓度为0.5mpl/L，且过氧化氢溶液的浓度为0.2mpl/L，搅拌设备是选取型号为S93AM的磁力震荡搅拌机；
S4、阿昔洛韦的氧化发光处理：向步骤S3得到的流动相检测预处理溶液中加入5ml的氢氧化钴，然后通过混合搅拌设备进行充分搅拌5min，使二价钴离子催化过氧化氢氧化待测品中的阿昔洛韦，并使待测液化学发光，之后加入1ml的罗丹明B溶液进行发光增强处理，搅拌设备是选取型号为S93AM的磁力震荡搅拌机，所加入的氢氧化钴浓度为0.3mol/L，且罗丹明B的浓度为0.4mol/L；
S5、发光含量检测：之后将步骤S4处理后的待测液通过流动注射设备注入检测试剂瓶中，并且控制检测压力为5Pa，且增敏效果与阿昔洛韦浓度呈线性关系，然后通过检测显示设备显示出阿昔洛韦的浓度；
S6、检测结果分析：最好将步骤S2和步骤S5得到的阿昔洛韦含量进行综合分析处理，从而得到阿昔洛韦的最终测定含量。
实施例3
S1、待测品的稀释：首先将30ml的待检测的待测品加入100ml的试剂瓶中，然后加入相应重量的清水摇匀进行稀释，清水的量为50ml；
S2、首次电泳检测：将步骤S1稀释后的待测品中加入13ml硼砂缓冲液，然后将用非涂层渍石英毛细管插入溶液中，启动液相色谱仪，同时施加检测电压，来进行检测，色谱仪的柱温为28℃，检测波长为240nm，施加的检测电压为25KV，且液相色谱仪的型号为WATERS2478-2695，之后通过分析色谱仪检测结果，即可得到阿昔洛韦含量，所加入的硼砂缓冲液浓度为30mmol/L，且其pH为10；
S3、流动相检测预处理溶液的制备：将步骤S2电泳检测后的待测品中分别加入15ml的强氧化钠碱性溶液和6ml的过氧化氢溶液，然后通过搅拌设备进行搅拌10min，从而得到流动相检测预处理溶液，氢氧化钠溶液的浓度为0.8mpl/L，且过氧化氢溶液的浓度为0.4mpl/L，搅拌设备是选取型号为S93AM的磁力震荡搅拌机；
S4、阿昔洛韦的氧化发光处理：向步骤S3得到的流动相检测预处理溶液中加入7ml的氢氧化钴，然后通过混合搅拌设备进行充分搅拌10min，使二价钴离子催化过氧化氢氧化待测品中的阿昔洛韦，并使待测液化学发光，之后加入3ml的罗丹明B溶液进行发光增强处理，搅拌设备是选取型号为S93AM的磁力震荡搅拌机，所加入的氢氧化钴浓度为1.3mol/L，且罗丹明B的浓度为0.8mol/L；
S5、发光含量检测：之后将步骤S4处理后的待测液通过流动注射设备注入检测试剂瓶中，并且控制检测压力为8Pa，且增敏效果与阿昔洛韦浓度呈线性关系，然后通过检测显示设备显示出阿昔洛韦的浓度；
S6、检测结果分析：最好将步骤S2和步骤S5得到的阿昔洛韦含量进行综合分析处理，从而得到阿昔洛韦的最终测定含量。
测试实验
某医药生产企业采用本发明实施例1-3的测定方法分别对同种含有阿昔洛韦的待测品中的阿昔洛韦含量进行检测，同时采用相应常规测定方法进行同种含有阿昔洛韦的待测品中的阿昔洛韦含量进行检测，并作为对照组，在测定过程中分别记录测定完成所有的全部时间。
表1测试实验数据统计表
Figure BDA0002207023240000081
由表1可知，采用实施例1的测定时间最短，而采用实施例2和实施例3所完成的测定时间均比对照组的测定时间短，因此，本发明可实现通过采用高效毛细管电泳和流动相注射检测相结合的方法进行阿昔洛韦的检测测定，具有检测柱效高、分离速度快，样品量小和仪器简单的优点，专属性强，且快速准确，很好的达到了线性范围宽、灵敏度高和分析速度快的目的，无需检测人员花费大量的时间进行等待检测，很好的实现了既快速又准确的进行阿昔洛韦的测定，从而大大方便了人们的阿昔洛韦的测定工作。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (7)

1.一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1、待测品的稀释：首先将20-30ml的待检测的待测品加入50或100ml的试剂瓶中，然后加入相应重量的清水摇匀进行稀释；
S2、首次电泳检测：将步骤S1稀释后的待测品中加入8-13ml硼砂缓冲液，然后将用非涂层渍石英毛细管插入溶液中，启动液相色谱仪，同时施加检测电压，来进行检测，色谱仪的柱温为25-28℃，检测波长为230-240nm，之后通过分析色谱仪检测结果，即可得到阿昔洛韦含量；
S3、流动相检测预处理溶液的制备：将步骤S2电泳检测后的待测品中分别加入10-15ml的强氧化钠碱性溶液和2-6ml的过氧化氢溶液，然后通过搅拌设备进行搅拌5-10min，从而得到流动相检测预处理溶液；
S4、阿昔洛韦的氧化发光处理：向步骤S3得到的流动相检测预处理溶液中加入5-7ml的氢氧化钴，然后通过混合搅拌设备进行充分搅拌5-10min，使二价钴离子催化过氧化氢氧化待测品中的阿昔洛韦，并使待测液化学发光，之后加入1-3ml的罗丹明B溶液进行发光增强处理；
S5、发光含量检测：之后将步骤S4处理后的待测液通过流动注射设备注入检测试剂瓶中，并且控制检测压力为5-8Pa，且增敏效果与阿昔洛韦浓度呈线性关系，然后通过检测显示设备显示出阿昔洛韦的浓度；
S6、检测结果分析：最好将步骤S2和步骤S5得到的阿昔洛韦含量进行综合分析处理，从而得到阿昔洛韦的最终测定含量。
2.根据权利要求1所述的一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，其特征在于：所述步骤S2中所加入的硼砂缓冲液浓度为20-30mmol/L，且其pH为9-10。
3.根据权利要求1所述的一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，其特征在于：所述步骤S2中施加的检测电压为20-25KV，且液相色谱仪的型号为WATERS2478-2695。
4.根据权利要求1所述的一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，其特征在于：所述步骤S1中加入清水的量为40-50ml。
5.根据权利要求1所述的一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，其特征在于：所述步骤S3中氢氧化钠溶液的浓度为0.5-0.8mpl/L，且过氧化氢溶液的浓度为0.2-0.4mpl/L。
6.根据权利要求1所述的一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，其特征在于：所述步骤S3和步骤S4中搅拌设备是选取型号为S93AM的磁力震荡搅拌机。
7.根据权利要求1所述的一种快速阿昔洛韦凝胶含量测定的方法，其特征在于：所述步骤S4中所加入的氢氧化钴浓度为0.3-1.3mol/L，且罗丹明B的浓度为0.4-0.8mol/L。
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