CN110699474A - 一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法 - Google Patents

一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分型方法，属于食品微生物检验技术领域。本发明的操作步骤分为两个阶段，1.第一阶段，通过克罗诺杆菌特异性引物扩增得到克罗诺菌属六种不同菌的gluA基因片段，2.第二阶段，采用RsaI酶切第一阶段扩增的克罗诺杆菌特异性gluA基因片段，获得克罗诺菌属六种不同菌的差异性PCR‑RFLP指纹图谱，进而区分克罗诺菌属不同菌种。通过大量克罗诺杆菌属的菌株事例验证，该分子分型方法能有效获得不同种差异性的酶切多态性图谱，快速、准确区分克罗诺菌杆属六个不同菌种。本发明适用于区分克罗诺杆菌属的菌种，对食品中克罗诺杆菌污染的精准溯源具有重要实际意义。

Description

一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分 子分型方法
技术领域
本发明属于食品微生物检验技术领域，具体涉及基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法。
背景技术
克罗诺杆菌属（Cronobacter），是能引起严重感染的食源性致病菌。食品污染数据调查表明婴幼儿配方奶粉是其感染的主要传播媒介。目前，克罗诺杆菌属的分型技术主要包括抗生素分型、噬菌体分型、Enterobabcterial Repetitive Intergenic Consensus-PCR（ERIC-PCR）, 脉冲场凝胶电泳（Pulsed Field Gel Electrophoresis, PFGE）、随机扩增多态性（Random Applied Polymorphic DNA-PCR）等技术，这些方法无法有效区分克罗诺菌属不同的菌种，而多位点序列分析 (Multil℃us Sequenching Typing, MLST) 能对克罗诺菌属的不同种进行区分，但操作繁琐且技术操作要求高（核酸纯化、测序与序列比较分析），耗时较长（普通实验室需至少2天以上），不利于食品加工过程中该菌污染源头的快速鉴定。因而，操作方便、快速地区分克罗诺菌属不同种的分子分型方法对食品中克罗诺杆菌污染的精准溯源显得极为迫切。
发明内容
为了方便、准确、快速鉴定克罗诺杆菌属的不同菌种，达到对食品中克罗诺杆菌污染源头的快速鉴定，本发明提供一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法。
一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法操作步骤如下：
（1）扩增基因片段
选用克罗诺杆菌特异性gluA基因，所述gluA基因为克罗诺杆菌α-葡萄糖苷酶基因；
用一对扩增引物F:5’- AGGGATCCTGAAAGCAATCGACAAGAA -3’；
R：5’- CCGAAGCTTACTCATTACCCCTCCTGATG -3’；
对克罗诺杆菌特异性gluA基因扩增，得到克罗诺菌属六种不同菌的gluA基因片段，
（2）酶切扩增产物
采用RsaI限制性内切酶对扩增得到的六种不同菌的gluA基因片段的扩增产物分别进行酶切，获得克罗诺菌属六种不同菌的差异性PCR-RFLP指纹图谱，克罗诺菌属六种不同菌分别为：1.阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii），2.苏黎世克罗诺杆菌（Cronobacterturicensis）；3莫金斯克罗诺杆菌（Cronobacter muytjensii），4.柏林克罗诺杆菌（Cronobacter dublinnensis），5.丙二酸盐克罗诺杆菌（Cronobacter malonaticus），6.康帝蒙提克罗诺杆菌（Cronobacter condimenti）。
进一步限定的技术方案如下：
步骤（1）的具体操作如下：克罗诺杆菌特异性gluA基因扩增片段大小为1680 bp，扩增条件是：PCR扩增在PCR仪上进行，反应体系：终浓度为10 mmol/L引物0.25-1.0 µL，DNA模板4-10 ng，15-30mmol/L Tris-HCl、60-120 mmol/L KCl、2.0-3.0 mmol/L MgCl2，加无菌双蒸水至50 µL；反应条件： 94℃预变性2 min；94℃变性30 s，54-58℃退火45-60 s，72℃延伸50-60 s，30个循环；72℃ 10 min。
步骤（2）中，酶切条件：gluA基因PCR 扩增产物10-15 µL，无核酸酶无菌水10-15 µL，1×buffer 2.5 µL：33 mM Tris-acetate，10 mM magnesium acetate，66 mM potassiumacetate，0.1mg/ml BSA； RsaI限制性内切酶1-2µL, 37℃ 孵育0.5-3.0 h。
本发明的有益技术效果体现在以下方面：
1.本发明实现快速、稳定鉴定克罗诺杆菌属的六种不同菌种，只需要3 h-4 h；现有RAPD-PCR和ERIC-PCR技术不稳定、重复性差；PFGE技术操作极为繁琐，耗时至少10 h以上；MLST技术操作繁琐且技术要求高，耗时在2天以上。
2.本发明通过对gluA基因的序列分析及限制性核酸内切酶的在线筛选（RsaI准确切断序列中GT AC），只需要使用一种限制性内切酶RsaI对gluA基因进行酶切，避免基于其他基因的RFLP分型技术中双酶切甚至多酶切带来的酶切条件差异导致酶活性减弱及相互干扰等问题。
3.采用RsaI单酶切反应，只需要通过发明中的一对特异性引物对克罗诺杆菌进行PCR扩增，然后对扩增产物进行RsaI单酶切，不仅实验操作方便、快速，而且酶切反应具有彻底、干扰少，酶切条带清晰等优点。
附图说明
图1为克罗诺杆菌属六种不同种的gluA基因片段图。
图2为克罗诺杆菌属六种不同种的RsaI酶切gluA基因的RFLP多态性图谱。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地详细说明。
实施例
一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法为两个实验阶段，第一阶段如图1所示，扩增克罗诺杆菌特异性gluA基因片段，第二阶段如图2所示，采用RsaI酶切第一阶段扩增的克罗诺杆菌特异性gluA基因片段，获得不同的酶切图谱，进而区分克罗诺杆菌属六种不同菌种。
具体操作步骤如下：
（1）选用gluA基因
gluA基编码克罗诺杆菌α-葡萄糖苷酶。
（2）对gluA基因扩增
用扩增引物F:5’- AGGGATCCTGAAAGCAATCGACAAGAA -3’；R：5’-CCGAAGCTTACTCATTACCCCTCCTGATG -3’对gluA基因扩增，得到克罗杆菌属六种不同菌的gluA基因片段，见图1：克罗诺杆菌属六种不同菌种的菌株gluA扩增结果；图1中M（孔道M）：DL2000分子量标记物（100bp，250bp，500bp，750bp，1000bp，2000bp）；lane1（孔道1）: C. sakazakii ATCC29544（阪崎克罗诺杆菌ATCC29544）; lane 2，11（孔道2,11）：苏黎世克罗诺杆菌（C.turicensis）；lane3（孔道3）: C.muytjensii （莫金斯克罗诺杆菌）ATCC51329;lane4（孔道4）: C. dublinnensis（都柏林克罗诺杆菌）; lane5, 6（孔道5，6）:C.malonaticus（丙二酸盐克罗诺杆菌）；lane 12（孔道12）：C.condimenti（康帝蒙提克罗诺杆菌）；Other lanes（其他孔道）: C. sakazakii（阪崎克罗诺杆菌）。
扩增片段大小为1680 bp，gluA基因的扩增条件是：PCR扩增在PCR仪上进行，反应体系：引物（10 mmol/L）0.5-1 µL，DNA模板5-10 ng，20-25 mmol/L Tris-HCl、80-100mmol/L KCl、2.5-3.0 mmol/L MgCl2），加无菌双蒸水至50 µL。反应条件： 94℃预变性5min；94℃变性30 s，56-58℃退火45-60 s，72℃延伸50-60 s，35个循环；72℃10 min。
（3）RsaI单酶切gluA基因扩增产物反应
采用RsaI限制性内切酶对扩增的四种不同菌的gluA基因片段分别进行单酶切，
区分克罗诺杆菌属六种不同种RFLP酶切多态性的RsaI酶切条件：gluA基因PCR 扩增产物10 µL，1×buffer 3 µL（33 mM Tris-acetate，10 mM magnesium acetate，66 mMpotassium acetate，0.1 mg/ml BSA）, RsaI限制性内切酶1-2 µL，无核酸酶无菌水14-16µL，37℃孵育0.5-3.0 h。
获得克罗诺菌属六种不同菌的差异性分子指纹图谱，进而为比对区分克罗杆菌属的不同菌种提供技术基础。见图2：克罗诺杆菌属六种不同菌种gluA基因的RsaI酶切结果，图2中：图1中M（孔道M）：DL2000分子量标记物（100 bp，250 bp，500 bp，750 bp，1000 bp，2000 bp）；lane1（孔道1）：C. sakazakii ATCC29544（阪崎克罗诺杆菌ATCC29544）； lane2，11（孔道2,11）：苏黎世克罗诺杆菌（C.turicensis）；lane3（孔道3）: C.muytjensiiATCC51329（莫金斯克罗诺杆菌ATCC51329）； lane4（孔道4）: C. dublinnensis（都柏林克罗诺杆菌）； lane5, 6（孔道5，6）： C.malonaticus（丙二酸盐克罗诺杆菌）；lane 12（孔道12）：C.condimenti（康帝蒙提克罗诺杆菌）；Other lanes（其他孔道）: C. sakazakii（阪崎克罗诺杆菌）。

Claims (3)

1.一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法，其特征在于操作步骤如下：
（1）扩增基因片段
选用克罗诺杆菌特异性gluA基因，所述gluA基因为克罗诺杆菌α-葡萄糖苷酶基因；
用一对扩增引物F:5’- AGGGATCCTGAAAGCAATCGACAAGAA -3’；
R：5’- CCGAAGCTTACTCATTACCCCTCCTGATG -3’；
对克罗诺杆菌特异性gluA基因扩增，得到克罗诺菌属六种不同菌的gluA基因片段，
（2）酶切扩增产物
采用RsaI限制性内切酶对扩增得到的六种不同菌的gluA基因片段的扩增产物分别进行酶切，获得克罗诺菌属六种不同菌的差异性PCR-RFLP指纹图谱，克罗诺菌属六种不同菌分别为：1.阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii），2.苏黎世克罗诺杆菌（Cronobacterturicensis）；3莫金斯克罗诺杆菌（Cronobacter muytjensii），4.柏林克罗诺杆菌（Cronobacter dublinnensis），5.丙二酸盐克罗诺杆菌（Cronobacter malonaticus），6.康帝蒙提克罗诺杆菌（Cronobacter condimenti）。
2.根据权利要求1所述的一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法，其特征在于：步骤（1）的具体操作如下：
克罗诺杆菌特异性gluA基因扩增片段大小为1680 bp，扩增条件是：PCR扩增在PCR仪上进行，反应体系：终浓度为10 mmol/L引物0.25-1.0 µL，DNA模板4-10 ng，15-30mmol/LTris-HCl、60-120 mmol/L KCl、2.0-3.0 mmol/L MgCl2，加无菌双蒸水至50 µL；反应条件：94℃预变性2 min；94℃变性30 s，54-58℃退火45-60 s，72℃延伸50-60 s，30个循环；72℃10 min。
3.根据权利要求1所述的一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法，其特征在于：步骤（2）中，酶切条件：gluA基因PCR 扩增产物10-15 µL，无核酸酶无菌水10-15 µL，1×buffer 2.5 µL：33 mM Tris-acetate，10 mM magnesium acetate，66 mM potassium acetate，0.1mg/ml BSA； RsaI限制性内切酶1-2µL, 37℃ 孵育0.5-3.0h。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021115077A1 (zh) * 2019-12-09 2021-06-17 合肥工业大学 一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102010895A (zh) * 2010-04-23 2011-04-13 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 动物饲料中4种细菌16s rDNA PCR-RFLP指纹图谱分析方法
US20120190028A1 (en) * 2009-08-07 2012-07-26 Biotecon Diagnostics Gmbh Nucleic acids and methods for the detection of enterobacter sakazakii (cronobacter spp.)
CN103409535A (zh) * 2013-08-16 2013-11-27 中国检验检疫科学研究院 检测克罗诺杆菌的引物对、探针和方法
CN104593487A (zh) * 2014-12-15 2015-05-06 合肥工业大学 一种区分克罗诺杆菌属不同种的pcr-rflp分子分型方法
CN109295184A (zh) * 2018-08-28 2019-02-01 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 一种阪崎克罗诺杆菌crispr分型方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105950744A (zh) * 2016-06-01 2016-09-21 东北农业大学 一种婴儿配方奶粉中克罗诺杆菌的溯源方法
CN109797232B (zh) * 2019-01-31 2020-10-09 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 一种丙二酸盐克罗诺杆菌crispr分型方法
CN110699474A (zh) * 2019-12-09 2020-01-17 合肥工业大学 一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120190028A1 (en) * 2009-08-07 2012-07-26 Biotecon Diagnostics Gmbh Nucleic acids and methods for the detection of enterobacter sakazakii (cronobacter spp.)
CN102010895A (zh) * 2010-04-23 2011-04-13 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 动物饲料中4种细菌16s rDNA PCR-RFLP指纹图谱分析方法
CN103409535A (zh) * 2013-08-16 2013-11-27 中国检验检疫科学研究院 检测克罗诺杆菌的引物对、探针和方法
CN104593487A (zh) * 2014-12-15 2015-05-06 合肥工业大学 一种区分克罗诺杆菌属不同种的pcr-rflp分子分型方法
CN109295184A (zh) * 2018-08-28 2019-02-01 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 一种阪崎克罗诺杆菌crispr分型方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AMY STRYDOM ET AL.: "PCR-RFLP analysis of the rpoB gene to distinguish the five species of Cronobacter", 《FOOD MICROBIOLOGY》 *
JIRÍ VLACH ET AL.: "Novel PCR-RFLP system based on rpoB gene for differentiation of Cronobacter species", 《FOOD MICROBIOLOGY》 *
凌娜: "阪崎克罗诺杆菌的检测及耐酸机制研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士) 工程科技Ⅰ辑》 *
王健等: "阪崎克罗诺杆菌PCR-RFLP分型方法的建立", 《中国食品学报》 *
费鹏等: "克罗诺杆菌分型技术研究进展", 《食品科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021115077A1 (zh) * 2019-12-09 2021-06-17 合肥工业大学 一种基于RsaI单酶切gluA基因区分克罗诺杆菌属不同种的分子分型方法

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