CN110693934B - 治疗类风湿性关节炎的组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗类风湿性关节炎的组合物及其应用,所述组合物的活性成分包含有木犀草素和雷公藤多苷。本发明发现,该组合物相对于雷公藤多苷,在类风湿性关节炎动物模型上活性更好,并且对肝、肾及生殖系统的毒性更低。本发明为类风湿性关节炎治疗药雷公藤多苷的毒性问题,提供了一种解决方案;同时增强了雷公藤多苷的疗效。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及治疗类风湿性关节炎的组合物及其应用,该组合物的活性成分包含有由木犀草素与雷公藤多苷。
背景技术
类风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫性疾病。它的病程长,病因不明确。患者致残率较高。RA的特征是慢性的炎性关节病变,并伴有全身多个系统受累,严重危害患者的健康和生存质量,其被称为“不死的癌症”。近年来随着经济发展、人民生活水平的提高,人口老龄化,RA患病人数在世界各国迅速增长,已成为全球性的疾病。目前全球约1%~2%的人群患有RA,年均发病率为0.25%~0.5%。2010年,RA导致全球约4.9万人死亡。在中国,患者已达500万人以上,平均寿命缩短10年~15年,是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要病因之一。因此,开发低毒有效的RA治疗药具有重要的社会意义。
木犀草素是一种天然黄酮类化合物,存在于许多药用植物中,具有多种药理活性,如抗炎、抗氧化、免疫调节、血管生成及神经保护作用。动物实验显示,木犀草素具有较好的治疗RA的作用,且毒性较低。雷公藤多苷是从卫矛科物雷公藤的去皮根部提取的总苷。其疗效确切,已成为临床治疗RA的常用药物之一。但雷公藤多苷的治疗剂量和中毒剂量非常接近,长期使用会导致毒性蓄积,致肝、肾、生殖器官等脏器发生不可逆病变。雷公藤多苷联合其它中药活性成分形成组合药,以减少雷公藤多苷的剂量和/或降低雷公藤多苷毒性,是改善雷公藤多苷应用的方法之一。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗类风湿性关节炎的组合物,并提出其应用领域。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种治疗类风湿性关节炎的组合物,所述组合物的活性成分包含有木犀草素和雷公藤多苷。
在一个实施例中,所述木犀草素和雷公藤多苷的质量比为0.01~100:1。
在一个实施例中,所述木犀草素和雷公藤多苷的质量比为0.01~10:1。
在一个实施例中,所述木犀草素和雷公藤多苷的质量比0.5:1。
在一个实施例中,所述组合物用于治疗类风湿性关节炎动物。
在一个实施例中,一种治疗类风湿性关节炎的药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或膏剂。
依照上述木犀草素与雷公藤多苷的组成比例,本发明组合物可应用于制备治疗类风湿性关节炎的药物。所制成的药物可以是任何药剂学上的剂型,如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液,膏剂。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明发现,木犀草素与雷公藤多苷组合物,相对于类风湿性关节炎临床用药雷公藤多苷,在类风湿性关节炎动物模型上活性更好,并且对肝、肾及生殖系统的毒性更低。本发明为类风湿性关节炎治疗药雷公藤多苷的毒性问题,提供了一种解决方案;同时增强了雷公藤多苷的疗效。
附图说明
图1雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠关节炎病症的影响;与模型组比较,*p<0.05,**p<0.01。
图2雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠体重的影响;与模型组比较,*p<0.05,**p<0.01。
图3雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠摄食量的影响;与模型组比较,*p<0.05,**p<0.01。
图4雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠肝功能的影响;与雷公藤多苷组比较,*p<0.05。
图5雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠肾功能的影响;与雷公藤多苷组比较,*p<0.05;
图6雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠睾丸和附睾的影响;与雷公藤多苷组比较,*p<0.05,**p<0.01;
图7雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠精子的影响;与雷公藤多苷组比较,*p<0.05,**p<0.01。
分组缩写注释如下:
正常组:Normal;模型组:AIA;雷公藤多苷组:Twp;木犀草素组:Lu;雷公藤多苷+木犀草素组:Twp+Lu。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将对本发明进行更全面的描述。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明实施例提供了一种治疗类风湿性关节炎的组合物,该组合物的活性成分包含有木犀草素和雷公藤多苷。
在一个实施例中,所述木犀草素和雷公藤多苷的质量比为0.01~100:1。
在一个实施例中,所述木犀草素和雷公藤多苷的质量比为0.01~10:1。
在一个实施例中,所述木犀草素和雷公藤多苷的质量比0.5:1。
在一个实施例中,所述组合物用于治疗类风湿性关节炎动物。
在一个实施例中,一种治疗类风湿性关节炎的药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或膏剂。
依照上述木犀草素与雷公藤多苷的组成比例,本发明组合物可应用于制备治疗类风湿性关节炎的药物。所制成的药物可以是任何药剂学上的剂型,如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液,膏剂。
可以理解的是,本发明实施例提供的组合物所制成的药物,可以是药剂学上的任何剂型,包括但不限于上述的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或膏剂。
具体实施例
1.实验材料
1.1药品与试剂
(1)雷公藤多苷片(Tripterygium wilfordii polyglycoside,Twp)。
(2)木犀草素(Luteolin,Lu):木犀草素≥98%。
(3)弗氏佐剂(CFA):美国Chondrex公司。
(4)天冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),肌酐(CRE),血尿素氮(BUN)试剂盒:南京建成生物工程研究所。
1.2实验动物
SD雄性大鼠,8周龄,购于香港中文大学。饲养于香港浸会大学中医药学院实验动物房内。
2.实验方法
2.1弗氏佐剂诱导大鼠关节炎模型(AIA)的建立
40只大鼠随机分为5组,分别为正常组(Normal),模型组(AIA),雷公藤多苷组(Twp),木犀草素组(Lu),雷公藤多苷+木犀草素组(Twp+Lu),每组8只。除正常组外,其余4组大鼠在第0天,于足爪皮内注射CFA0.1mL。
2.2动物饲养及给药
大鼠饲养于标准环境(25±2℃,湿度:60±10%,12h昼夜循环)。药物均由0.5%CMC-Na配制。于第7天至63天,4组造模大鼠分别灌胃:0.5%CMC-Na;雷公藤多苷片10mg/kg/天;木犀草素20mg/kg/天;联合使用雷公藤多苷片10mg/kg/天与木犀草素20mg/kg/天。同时,正常组大鼠灌胃0.5%CMC-Na。
2.3摄食量及体重的记录
于造模后,大鼠的体重增长程度及摄食量会下降。记录大鼠的体重与平均每日摄食量,以评价模型组大鼠疾病的进程以及本发明组合物是否有副作用。每周称量并记录一次体重。每天称量并记录粮食放置量与剩余量。
2.4关节肿胀度评价及计算增效作用方法
从给药第一天起,以排水法测量双后肢踝关节肿胀程度,每周2次,以判断大体发病程度和治疗效果。于第35天,各组大鼠后足拍照记录。比较各组肿胀度。
计算增效作用方法:
抑肿胀率=(1-给药组肿胀度/模型组肿胀度)×100%
用金式公式计算,q=E(A+B)/[EA+(1-EA)×EB],E(A+B)为两药合用时的抑肿胀率,EA、EB为各药单用时的抑肿胀率,当q<0.85表示两药相互拮抗;q>l.15表示两药作用增强,q=0.85~1.15表示两药作用相加。
2.5病变程度评价
AIA致类风湿性关节炎法,主要影响后肢。根据每一后肢的红斑及肿胀度,进行评分(0-4分)。评分标准:
0=正常,没有任何肉眼可见的关节炎症状;
1=轻微,脚踝/脚趾有可见的肿胀或不成片的红斑,不论红斑个数为几;
2=中等,趾关节、足趾或脚踝出现中等程度肿胀;
3=踝关节严重肿胀或踝关节以下全部肿胀;
4=整个脚爪全部肿胀或关节严重变形。两个后足的评分之和作为每只大鼠的关节炎评分,每只合计最高可得8分。
2.6肝、肾功能生化指标的检测
于第56天,10%水合氯醛麻醉后,腹主动脉取血,收集血清和血浆,根据ELISA试剂盒说明书测定血清中的天冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),肌酐(CRE)以及血浆中尿素氮(BUN)的含量。
2.7睾丸、附睾脏器指数的评价
于取血后,取双侧睾丸及附睾,称重。按照下列公式计算各脏器指数:
脏器指数=(脏器重量/体重)×100%。
2.8精子数、精子活率和精子畸形率的评价
附睾称重后,取单侧附睾置于1.5mL离心管中,加1mL预温37℃的PBS,充分剪碎,37℃恒温中震摇孵育15分钟,200目细胞筛过滤,取滤液20μL悬液置于载玻片上,盖上盖玻片,置于37℃恒温载物台,高倍镜下观察精子数,计算精子活力百分率(不少于200个精子中的活精子比率)。取一滴精子悬液在玻片上涂片,观察精子形态并计算精子畸形百分率。另取0.1mL精子悬液放入含1.9mL 5%碳酸氢钠试管内,摇匀,于计数板上计数精子数。
3.实验结果
3.1雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠关节炎病症的影响(参见图1)
根据图1A可见,模型组大鼠足肿胀明显,雷公藤多苷+木犀草素对AIA大鼠足肿胀的抑制作用最强,雷公藤多苷组和木犀草素组亦能明显的降低AIA关节炎大鼠的足肿胀。结果表明,本发明组合物能非常显著地减轻AIA关节炎大鼠的足肿胀程度,且优于雷公藤多苷组。
计算增效作用结果:
通过计算,在第21天,q=0.961;在第28天,q=0.987;在第35天,q=0.993。均在0.85~1.15范围内,既两药作用相加。
根据图1B关节病变评分可见:模型组病变程度最高;雷公藤多苷+木犀草素组效果最好,能非常显著地减轻AIA大鼠关节炎病变程度;雷公藤多苷组和木犀草素组亦非常显著地减轻AIA大鼠关节炎病变程度,且两组评分接近。结果表明,本发明组合物非常显著地减轻AIA关节炎大鼠的病变程度,且优于雷公藤多苷组。
3.2雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠体重增长及摄食量的影响(参见图2、图3)
根据图2,体重增长依次为正常组最多,雷公藤多苷+木犀草素组与其接近,木犀草素组第三,其后为模型组,雷公藤多苷组体重增长最少。
不同药物对大鼠摄食量影响的结果见图3,正常组和雷公藤多苷+木犀草素组大鼠平均每日摄食量明显高于模型组大鼠,且十分接近,雷公藤多苷组和木犀草素组大鼠摄食量也高于模型组大鼠,有统计性差异。
结果表明,本发明组合物能减轻AIA关节炎大鼠体重增长缓慢及摄食量降低的情况。从体重增长情况来看,雷公藤多苷组体重增长低于模型组,表明有毒副作用;而本发明组合物对大鼠的体重增长无明显影响,即无表现出毒副作用。
3.3雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠肝功能的影响(参见图4)
由图4可见,雷公藤多苷组的AST和ALT明显高于正常组,表明雷公藤多苷会引起肝毒性。雷公藤多苷+木犀草素组AST和ALT的含量明显低于雷公藤多苷组,且与正常组相当。木犀草素组和模型组也与正常组相当。结果表明,本发明组合物无可检测到的肝毒性。
3.4雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠肾功能的影响(参见图5)
由图5可见,雷公藤多苷组的CRE和BUN明显高于正常组,表明雷公藤多苷引起肾毒性。雷公藤多苷+木犀草素组CRE和BUN的含量明显低于雷公藤多苷组,且与正常组相当。木犀草素组和模型组也与正常组相当。结果表明,本发明组合物无可检测到的肾毒性。
3.5雷公藤多苷、木犀草素和本发明组合物对AIA大鼠生殖功能的影响(参见图6、图7)
与正常组相比:雷公藤多苷组的睾丸指数、附睾指数明显较低(图6),精子数和精子活率明显较低、精子畸形率明显较高(图7)。表明雷公藤多苷引起生殖毒性。雷公藤多苷+木犀草素组的睾丸指数、附睾指数非常明显地高于雷公藤多苷组(图6),精子数和精子活率明显提升、精子畸形率非常明显地低于雷公藤多苷组(图7)。木犀草素组和模型组的睾丸指数和附睾指数(图6),精子数、精子活率和精子畸形率(图7)均与正常组相近。结果表明,本发明组合物对雄性大鼠的生殖毒性非常明显地低于雷公藤多苷。
总结:1)木犀草素和雷公藤多苷组合物能有效的治疗AIA关节炎大鼠,组合物效果优于雷公藤多苷;2)雷公藤多苷有明显肝肾毒性,而组合物无可检测到的肝肾毒性;3)组合物对雄性大鼠的生殖毒性非常明显地低于雷公藤多苷。以上实验结果表明,用木犀草素和雷公藤多苷组合物可制成有效、低毒的抗类风湿性关节炎药物。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (7)
1.组合物在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用;所述组合物的活性成分由木犀草素和雷公藤多苷组成。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物包含有所述的组合物以及药学上可以接受的辅料。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述药物的剂型为片剂。
4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述药物的剂型为胶囊剂。
5.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述药物的剂型为颗粒剂。
6.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述药物的剂型为口服液。
7.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述药物的剂型为膏剂。
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