CN110692638A - 一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，属于生物科技技术领域。由硅藻土、小桐子毒蛋白、氨基寡糖素、非离子型表面活性剂、羧甲基纤维素钠和保护剂组成。(1)将硅藻土、氨基寡糖素和保护剂分别在球磨机中粉碎1～3h，功率500～1000W，然后过400目筛；(2)将破碎过筛后的硅藻土、氨基寡糖素、保护剂与小桐子毒蛋白、非离子型表面活性剂和羧甲基纤维素钠在高搅机中混合15～30min，搅拌速度12000～18000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。所需主要原料来源于小桐子植株或生物质，生产成本低，具有生物可降解性，清洁环保；制备方法简单，生产效率高且可以连续批量生产。

Description

一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂及其制备方法
技术领域
本发明属于生物科技技术领域，具体涉及一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂及其制备方法。
背景技术
真菌病害是造成农作物减产的主要原因之一。利用丰富的植物资源,分离纯化具有抗真菌活性的蛋白质,将其基因导入植物,以提高受体植物的抗病性已被证明是一种实用而有效的方法。目前,已从多种植物中分离到许多不同类型的抗真菌蛋白,根据它们的作用机制、结构或与之类似的蛋白,可分为病程相关蛋白PR-1、β-1,3葡聚糖酶、几丁质酶、核糖体失活蛋白(RIPs)、几丁质结合蛋白、类甜味蛋白、防卫素、亲环蛋白以及脂类转运蛋白(LTPs)等。麻疯树(Jatropha curcas)为大戟科(Euphorbiaceae)油料植物，其种子含油量高达40％，在我国的西南地区分布广泛。麻疯树种仁中还含有丰富的蛋白质，这种蛋白质提取物对蛙粪霉属的B.Haptosporus和B.Ranarum有较强的抑制作用。研究者从麻疯树种仁中分离得到的麻疯树毒蛋白(curcin)已被证明是一种核糖体失活蛋白，真菌水稻稻瘟病菌(Pyricularia oryzae Cav.)、松赤枯病菌(Pestalotia funerea)、玉米纹枯病菌(Rhizoctoniasolani Kuha)、油菜菌核病菌等植物致病真菌有阻碍蛋白质合成和RNA转录的作用，因此极有望用于制备植物灭菌制剂。
现有可湿性粉剂(WP)是用农药原药、惰性填料(大部分是膨润土、高岭土等)和一定量的助剂，按比例经充分混合粉碎后，达到一定粉粒细度的剂型。从形状上看，与粉剂无区别，但是由于加入了表面活性剂、悬浮剂等助剂，加到水中后能被水湿润、分散、形成悬浮液，可喷洒施用。与乳液型杀菌剂相比，可湿性粉剂生产成本低，可用纸袋或塑料袋包装，储运方便、安全，包装成本低；更重要的是，可湿性粉剂不使用溶剂和乳化剂，对植物较安全，不易产生药害，对环境也十分，在果实套袋前使用，可避免有机溶剂对果面的刺激。我国生产可湿性粉剂农药已有几十年的历史，但是当前可湿性粉剂农药还存在易结块、悬浮率低、润湿时间长等有待解决的难题，导致大多数厂家生产的粉剂型农药稳定性差。有研究者尝试在配方中多加抗结块剂白炭黑，但效果并不理想，药效发挥不好，浪费了原药及助剂，增加了农业生产成本。
氨基寡糖素(壳寡糖)是指D－氨基葡萄糖以β－1.4糖苷键连接的低聚糖，由几丁质降解得壳聚糖后再降解制得，或由微生物发酵提取的一种中低分子量的植物多糖。壳寡糖可改变土壤微生物区系,促进有益微生物的生长而抑制一些植物病原菌。壳寡糖可刺激植物生长，使农作物和水果蔬菜增产丰收。壳寡糖可诱导植物的抗病性,对多种真菌、细菌和病毒产生免疫和杀灭作用，对小麦花叶病、棉花黄萎病、水稻稻瘟病、番茄疫病等病害具有良好的防治作用。同时，壳寡糖对多种植物病原菌具有一定程度的直接抑制作用。壳寡糖在应用上具有微量(PPM级)、高效、低成本、无公害等特点，对我国农业可持续性发展具有重要意义。目前，以氨基寡糖素作为载体来制备杀菌农药已经在我国有了初步运用应用，但将壳寡糖与小桐子籽仁中提取的毒蛋白复配来制备杀灭植物致病真菌可湿性粉剂的专利仍未见报道。
发明内容
本发明的目的一在于提供一种以小桐子毒蛋白为活性成分的可湿性灭菌粉剂，本发明的另一个目的在于提供一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂的制备方法。毒蛋白提取自小桐子籽仁榨油后剩余饼粕，具有组织真菌RNA转录的作用，而另一活性成分壳寡糖为生物基大分子多糖，不仅能起到负载毒蛋白的作用，还能同时起到协同杀灭真菌的效用；所需主要原料来源于小桐子植株或生物质，生产成本低，具有生物可降解性，清洁环保；制备方法简单，生产效率高且可以连续批量生产。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，由硅藻土、小桐子毒蛋白、氨基寡糖素、非离子型表面活性剂、羧甲基纤维素钠和保护剂组成。
上述一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，它由如下重量份的原料配制：硅藻土10～60份，小桐子毒蛋白0.2～5份，氨基寡糖素0.2～5份，非离子型表面活性剂0.5～10份，保护剂0.1～1份。
进一步的，所述非离子型表面活性剂为茶皂素、辛基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚或山梨醇酐油酸酯中的一种或多种。
进一步的，所述氨基寡糖素的分子量在2000～5000g/mol之间。
进一步的，所述保护剂为β-环糊精、海藻酸钠或淀粉中的一种或多种。
本发明还提供了一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂的制备方法，制备过程如下：
(1)将硅藻土、氨基寡糖素和保护剂分别在球磨机中粉碎1～3h，功率500～1000W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的硅藻土、氨基寡糖素、保护剂与小桐子毒蛋白、非离子型表面活性剂和羧甲基纤维素钠在高搅机中混合15～30min，搅拌速度12000～18000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
同时，本发明还提供了所述小桐子毒蛋白的提取方法，具体步骤如下：
A.将小桐子籽仁饼粕加入磷酸盐缓冲液中，超声搅拌，搅拌速度3000～5000r/min，抽滤；
B.所得上清液中加入(NH4)2SO4溶液，在20～28℃下静置2～4h，然后在12000～15000r/min速度下离心15～30min，收集上清液；
C.所得上清液装入透析袋中，在去离子水中透析48～96h，然后冷冻干燥，得到小桐子毒蛋白提取物。
进一步的，步骤A中，小桐子籽仁饼粕和磷酸盐缓冲液的质量比为1:4～1:6，磷酸盐缓冲液的PH为7～7.4，超声搅拌3～5h。
进一步的，步骤B中，加入的(NH4)2SO4溶液的质量浓度为60～95％。
进一步的，步骤C中，在-80～-50℃下冷冻干燥12～48h。
本发明与现有技术相比具有的有益效果是：
(1)本发明提供的可湿性灭菌粉剂中的有效成分之一来源于小桐子籽仁中，其来源天然，含量大，同时杀菌效率高，能通过抑制蛋白质合成和RNA转录来有效杀灭真菌，具有极强的杀灭效果；
(2)本发明提供的可湿性灭菌粉剂中以壳寡糖作为防结块助剂，因其极大的吸湿能力，能吸附在硅藻土表面，减少硅藻土因吸湿性而导致的结块倾向。
(3)本发明提供的可湿性灭菌粉剂中壳寡糖本身能对多种真菌、细菌和病毒产生免疫和杀灭作用，此外它含有大量N元素，在环境中易于降解,完全不会对环境造成污染，兼有药效和肥效双重生物调节功能的特点。以壳寡糖来负载小桐子毒蛋白制备杀菌粉剂，不仅能起到协同杀灭真菌的作用，同时能起到增加土壤肥效的作用。
(4)本发明提供的可湿性灭菌粉剂中使用非离子型表面活性剂，其不仅用量小，还可以大幅缩短润湿时间，提高悬浮率。
附图说明
图1是本发明提供的可湿性灭菌粉剂的SEM图；
图2是本发明提供的这种可湿性灭菌粉剂的粒径分布图；
图3是本发明提供的可湿性灭菌粉剂随时间变化的润湿率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，并不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所用实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1-3中小桐子毒蛋白的提取方法如下：
小桐子籽仁饼粕按1:4的质量比加入PH为7的磷酸盐缓冲液中，超声搅拌3h，搅拌速度3000r/min；抽滤，所得上清液中加入质量浓度60％的(NH4)2SO4溶液，在20℃下静置2h，然后在12000r/min速度下离心15min，收集上清液；所得上清液装入透析袋中，在去离子水中透析48h，然后在-80℃下冷冻干燥12h，得到小桐子毒蛋白提取物。
实施例1
(1)将硅藻土、氨基寡糖素和β-环糊精分别在球磨机中粉碎1h，功率500W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的25Kg硅藻土、20Kg氨基寡糖素(分子量2000)、10Kgβ-环糊精与20Kg小桐子毒蛋白、20Kg茶皂素和5Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合15min，搅拌速度12000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间75秒，悬浮率87.5％，水分小于3％，pH值7.2，平均粒径4-10微米，稳定性为50±2℃存放14天,72h后抑菌率95.3％。
图1是本发明提供的可湿性灭菌粉剂的SEM图，图1说明粉剂的尺寸处于微米级，且形态均匀；图2是本发明提供的这种可湿性灭菌粉剂的粒径分布图，图2说明粉剂的尺寸分布均匀，有利于润湿；图3是本发明提供的可湿性灭菌粉剂随时间变化的润湿率，图3说明粉剂润润湿率会比较快速提升，有利于使用。
本发明提供的可湿性灭菌粉剂中的有效成分之一来源于小桐子籽仁中，其来源天然，含量大，同时杀菌效率高，能通过抑制蛋白质合成和RNA转录来有效杀灭真菌，具有极强的杀灭效果；
本发明提供的可湿性灭菌粉剂中以壳寡糖作为防结块助剂，因其极大的吸湿能力，能吸附在硅藻土表面，减少硅藻土因吸湿性而导致的结块倾向。
实施例2
(1)将硅藻土、氨基寡糖素和海藻酸钠分别在球磨机中粉碎1.5h，功率750W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的68Kg硅藻土、10Kg氨基寡糖素(分子量3000)、1Kg海藻酸钠与10Kg小桐子毒蛋白、10Kg辛基酚聚氧乙烯醚和1Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合20min，搅拌速度14000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间88秒，悬浮率90.3％，水分小于4％，pH值7.0，平均粒径5-10微米，稳定性为50±2℃存放14天。72h后抑菌率94.2％。
实施例3
(1)将硅藻土、氨基寡糖素和海藻酸钠分别在球磨机中粉碎2h，功率800W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的50Kg硅藻土、15Kg氨基寡糖素(分子量2000)、3Kg水溶性淀粉与15Kg小桐子毒蛋白、15Kg脂肪醇聚氧乙烯醚和2Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合25min，搅拌速度15000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间105秒，悬浮率92.3％，水分小于3％，pH值7.1，平均粒径5-10微米，稳定性为50±2℃存放14天，72h后抑菌率96.0％。
实施例4-6中小桐子毒蛋白的提取方法如下：
小桐子籽仁饼粕按1:5的质量比加入PH为7.2的磷酸盐缓冲液中，超声搅拌4h，搅拌速度4000r/min；抽滤，所得上清液中加入质量浓度75％的(NH4)2SO4溶液，在24℃下静置3h，然后在14000r/min速度下离心25min，收集上清液；所得上清液装入透析袋中，在去离子水中透析72h，然后在-60℃下冷冻干燥24h，得到小桐子毒蛋白提取物。
实施例4
(1)将硅藻土、氨基寡糖素和海藻酸钠分别在球磨机中粉碎3h，功率1000W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的46Kg硅藻土、12Kg氨基寡糖素(分子量5000)、4Kg海藻酸钠与18Kg小桐子毒蛋白、16Kg山梨醇酐油酸酯和4Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合30min，搅拌速度16000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间110秒，悬浮率82.3％，水分小于3％，pH值6.8，平均粒径6-10微米，稳定性为50±2℃存放14天，72h后抑菌率93.4％。
实施例5
(1)将硅藻土、氨基寡糖素(分子量4000)和β-环糊精分别在球磨机中粉碎2h，功率1000W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的45Kg硅藻土、12Kg氨基寡糖素(分子量4000)、4Kgβ-环糊精与18Kg小桐子毒蛋白、8Kg山梨醇酐油酸酯、8Kg辛基酚聚氧乙烯醚和5Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合25min，搅拌速度18000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间90秒，悬浮率85.6％，水分小于3％，pH值7.2，平均粒径6-10微米，稳定性为50±2℃存放14天，72h后抑菌率95.1％。
实施例6
(1)将硅藻土、氨基寡糖素(分子量5000)和水溶性淀粉分别在球磨机中粉碎3h，功率900W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的68Kg硅藻土、10Kg氨基寡糖素(分子量5000)、0.5Kg水溶性淀粉、0.5Kgβ-环糊精与10Kg小桐子毒蛋白、1Kg辛基酚聚氧乙烯醚、9Kg茶皂素和1Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合30min，搅拌速度17000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间128秒，悬浮率88.3％，水分小于3％，pH值7.4，平均粒径3-8微米，稳定性为50±2℃存放14天，72h后抑菌率95.5％。
实施例7-9中小桐子毒蛋白的提取方法如下：
小桐子籽仁饼粕按1:6的质量比加入PH为7.4的磷酸盐缓冲液中，超声搅拌5h，搅拌速度5000r/min；抽滤，所得上清液中加入质量浓度95％的(NH4)2SO4溶液，在28℃下静置4h，然后在15000r/min速度下离心30min，收集上清液；所得上清液装入透析袋中，在去离子水中透析96h，然后在-50℃下冷冻干燥48h，得到小桐子毒蛋白提取物。
实施例7
(1)将硅藻土、氨基寡糖素和海藻酸钠分别在球磨机中粉碎2h，功率800W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的50Kg硅藻土、15Kg氨基寡糖素(分子量2000)、1Kg水溶性淀粉、2Kg海藻酸钠与15Kg小桐子毒蛋白、15Kg脂肪醇聚氧乙烯醚和2Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合25min，搅拌速度15000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间96秒，悬浮率79.3％，水分小于3％，pH值7.2，平均粒径3-6微米，稳定性为50±2℃存放14天，72h后抑菌率93.5％。
实施例8
(1)将硅藻土、氨基寡糖素(分子量4000)和β-环糊精分别在球磨机中粉碎3h，功率900W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的38Kg硅藻土、15Kg氨基寡糖素(分子量4000)、4Kgβ-环糊精与20Kg小桐子毒蛋白、8Kg山梨醇酐油酸酯、10Kg辛基酚聚氧乙烯醚和5Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合25min，搅拌速度18000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间101秒，悬浮率94.4％，水分小于3％，pH值6.8，平均粒径3-6微米，稳定性为50±2℃存放14天，72h后抑菌率96.2％。
实施例9
(1)将硅藻土、氨基寡糖素和β-环糊精分别在球磨机中粉碎2h，功率500W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的25Kg硅藻土、20Kg氨基寡糖素(分子量2000)、10Kgβ-环糊精与20Kg小桐子毒蛋白、10Kg茶皂素、10Kg山梨醇酐油酸酯和5Kg羧甲基纤维素钠在高搅机中混合15min，搅拌速度12000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
称取上述可湿性灭菌粉剂0.8g，再用蒸馏水溶解，定容至100mL，制成8g/L的处理液，以相同体积的清水做对照样。取制备的提取物1ml倒入灭菌培养皿中，再加入9ml培养基(葡萄糖4％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，琼脂2％,水92.5％)制备含药培养基，取直径为5mm小麦赤霉病菌菌饼置于上述培养基中。对照和处理各重复4次。25℃恒温培养，72h后用十字交叉法测量菌落直径，按以下公式计算菌丝生长抑菌率:
抑菌率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)]*100％
经检测，本实施例中所制备的可湿性粉剂的各项性能如下：润湿时间114秒，悬浮率83.5％，水分小于4％，pH值7.2，平均粒径4-8微米，稳定性为50±2℃存放14天，72h后抑菌率92.8％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，其特征在于，由硅藻土、小桐子毒蛋白、氨基寡糖素、非离子型表面活性剂、羧甲基纤维素钠和保护剂组成。
2.根据权利要求1所述的一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，其特征在于，它由如下重量份的原料配制：硅藻土10～60份，小桐子毒蛋白0.2～5份，氨基寡糖素0.2～5份，非离子型表面活性剂0.5～10份，保护剂0.1～1份。
3.根据权利要求1所述的一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，其特征在于，所述非离子型表面活性剂为茶皂素、辛基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚或山梨醇酐油酸酯中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，其特征在于，所述氨基寡糖素的分子量在2000～5000g/mol之间。
5.根据权利要求1所述的一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，其特征在于，所述保护剂为β-环糊精、海藻酸钠或淀粉中的一种或多种。
6.一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂的制备方法，包括权1-权5中任一所述的小桐子提取物可湿性灭菌粉剂，其特征在于，制备过程如下：
(1)将硅藻土、氨基寡糖素和保护剂分别在球磨机中粉碎1～3h，功率500～1000W，然后过400目筛；
(2)将破碎过筛后的硅藻土、氨基寡糖素、保护剂与小桐子毒蛋白、非离子型表面活性剂和羧甲基纤维素钠在高搅机中混合15～30min，搅拌速度12000～18000r/min，得到小桐子提取物可湿性灭菌粉剂。
7.根据权利要求6所述的一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂的制备方法，其特征在于，所述小桐子毒蛋白的提取方法如下：
A.将小桐子籽仁饼粕加入磷酸盐缓冲液中，超声搅拌，搅拌速度3000～5000r/min，抽滤；
B.所得上清液中加入(NH4)2SO4溶液，在20～28℃下静置2～4h，然后在12000～15000r/min速度下离心15～30min，收集上清液；
C.所得上清液装入透析袋中，在去离子水中透析48～96h，然后冷冻干燥，得到小桐子毒蛋白提取物。
8.根据权利要求7所述的一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂的制备方法，其特征在于，步骤A中，小桐子籽仁饼粕和磷酸盐缓冲液的质量比为1:4～1:6，磷酸盐缓冲液的PH为7～7.4，超声搅拌3～5h。
9.根据权利要求7所述的一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂的制备方法，其特征在于，步骤B中，加入的(NH4)2SO4溶液的质量浓度为60～95％。
10.根据权利要求7所述的一种小桐子提取物可湿性灭菌粉剂的制备方法，其特征在于，步骤C中，在-80～-50℃下冷冻干燥12～48h。
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