CN102190534B - 一种用生物残渣固态发酵生产生物药肥产品的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物农药技术领域，具体地，本发明提供一种用生物残渣固态发酵生产生物药肥产品的方法。根据本发明的方法包括以下步骤：1)前处理生物残渣；2)固态发酵，将苏云金芽孢杆菌种子液接种到无菌培养物料中，进行固态发酵，在发酵的8～11小时，采用降低初始发酵温度2～5℃的变温发酵；3)添加壳寡糖粉末，得生物药肥产品。根据本发明的方法具有成本低廉、工艺简单，设备投资少，生产过程绿色环保等优点，而且，根据本发明的方法将壳寡糖粉末添加到发酵产物中，得到的生物药肥既具有广谱杀虫、抑制病毒效果，又具有调节植物代谢、促进植物生长的功能，具有肥效一体化的功效，实现了生物农药、生物肥料的有机结合。

Description

一种用生物残渣固态发酵生产生物药肥产品的方法

技术领域

本发明涉及生物农药技术领域，具体地涉及一种用生物残渣固态发酵生产生物药肥产品的方法。

背景技术

我国已加入WTO，农业将面临新的挑战和发展机遇，农副产品药物残留问题越来越受到各国关注，提高我国农产品的国际市场竞争力的重要措施之一是降低农产品有毒物质的残留量，而生物农药、生物肥料(简称生物药肥)将为农产品优质安全生产和降低有毒物质残留量提供支撑。生物药肥是21世纪农药、肥料行业的新产业，代表着绿色农业、生态农业的新方向，其最大的优势在于能克服化学农药、化学肥料对生态环境的污染和减少在农副产品中有害物质残留量，同时推广使用生物农药、生物肥料也将大幅度提高农副产品的品质和经济效益。

苏云金杆菌属于芽孢杆菌属(Bacillus thuringiensis，简称Bt)，是目前世界上用途最广，开发时间最长，产量最大，应用最成功的生物农药，占生物防治剂总量的90％以上。苏云金杆菌杀虫谱很广，能防治稻苞虫、稻纵卷叶螟、玉米螟、棉铃虫、松毛虫、菜青虫、小菜蛾、茶卷叶螟、烟青虫、茶毛虫等上百种害虫，可用于蔬菜、水稻、玉米、棉花、果树、茶树及林区等众多植物。

目前，Bt杀虫剂生产主要采用液体和固体两种发酵方式。Bt杀虫剂的主流生产工艺是液体深层发酵，工艺复杂、设备投资大，发酵过程要求严格，发酵产品为液体，发酵完成后需要进一步离心、浓缩、干燥等处理，生产过程中产生大量废水。而且，苏云金芽孢杆菌制剂的发酵生产多采用玉米粉、黄豆粉、淀粉等农副产品，成本较高，限制了苏云金芽孢杆菌制剂的大量生产与推广应用。Bt杀虫剂固态发酵生产工艺是针对液体发酵过程中存在的问题发展起来的发酵生产工艺，其原料成本低，发酵过程不易大面积污染，发酵环境要求低，甚至可以是半开放式发酵，因此投资较少；发酵产物为固体，直接烘干、粉碎后即可成为产品，生产过程中有效成份流失少，产品中不需要再加大量的助剂，易于运输储存，尤其是生产过程中几乎没有废水排放，不需要进行污水处理，没有三废产生。目前，已有报道采用废水污泥固态发酵生产Bt杀虫剂(K.Lachhab，R.D.Tyagi a，J.R.Vale′ro.Production ofBacillus thuringiensis biopesticides using wastewater sludge as a raw material：effect ofinoculum and sludge solids concentration.Process Biochemistry 37(2001)197-208)，但是还未见有报道用生物残渣固态发酵生产Bt生物农药或生物肥料。

另外，壳寡糖(chitosan oligosaccharide)，又称葡萄糖胺寡糖(glucosamineoligosaccharide)，是壳聚糖降解以后，氨基葡萄糖通过β-(1，4)-糖苷键连接而成聚合度为2～10的产物，是自然界中迄今为止发现的唯一带正电荷的动物纤维，具有良好的水溶性和独特的生理活性和功能。在农业应用上，壳寡糖对多种真菌、细菌和病毒具有拮抗作用(Hiranso S，Nagao N.Effects of chitosan，pectic acid，lysozme，andchitinase on the growth of several phytopathogen.Agric Bio Chem，1989，53(11)：3065-3066)，能增强植物对病虫害的防御能力(Roby D，Gadelle A，Toppan A.Chitinoligosaccha rides as elicitors of chitinase activity in melon plants.Biochem Biophy ResCommun，1987，143(3)：885；U sov A I.Oligosaccharins a new class of signalingmolecules in plants.Uspekhi Khimii，1993，62(11)：1119-1144)，增殖土壤中的有益菌，刺激植物生长，使农作物和瓜果蔬菜增产，并且具有高效、低成本、无公害等特点。壳寡糖不但可以诱导植物的抗病性(Inui H，Yamaguchi Y，Hirano S.Elicitor actions ofN-acetylchitooligosaccha rides and laminarioligosaccha rides for chitinase and L-phenylalanine ammonia-lyase induction in rice suspension culture.Biosci，Biotech and B iochem，1997，61(6)：975-978)，抑制多种病原微生物的生长，其施用后可被土壤中的微生物降解，对土壤环境不造成影响，它还能提高农作物的产量，改善作物品质、提高食品营养和经济价值，壳寡糖作为一种新型绿色农药和生物肥料在农业生产中发挥越来越重要的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种用生物残渣固态发酵生产生物药肥产品的方法。

根据本发明的方法，包括以下步骤：

1)前处理生物残渣，得无菌培养物料；

2)固态发酵，将苏云金芽孢杆菌种子液接种到无菌培养物料中，进行固态发酵，在发酵的8～11小时，采用降低初始发酵温度2～5℃的变温发酵，发酵时间35～50小时，采用变温发酵的原因是Bt菌固态发酵在进入对数生长期时，极易产热，引起物料局部温度的急速升高，而固态发酵本身的传热速度较慢，因此，过高的温度一方面会造成营养体的死亡，抑制苏云金杆菌的生长，另一方面会使菌体产生Cry-的突变体，从而导致没有晶体蛋白的芽孢产生，所以采用变温发酵可以有效避免过高温度造成的不利影响，提高发酵效率；

3)发酵物料经干燥、粉碎后，添加壳寡糖粉末，混合均匀，得生物药肥产品。

根据本发明提供的方法，所述的生物残渣包括果蔬残渣(工厂榨取果蔬汁后的残渣)、芦笋下脚料(芦笋加工过程中产生的笋茎、笋根或笋皮)、芦笋渣(芦笋下加料提取芦笋皂苷后的残渣)、海带渣(提取海带多糖后的残渣)、银杏叶(银杏叶提取有效成分后的残渣)。

根据本发明提供的方法，优选所述壳寡糖粉末的添加比例是1～5％。

根据本发明提供的方法，优选所述的壳寡糖粉末为聚合度为2～10的水溶性壳寡糖。

根据本发明的方法，其特征中，在步骤1)中，生物残渣经粉碎，过筛，调节物料的初始含水量，添加无机盐，充分搅拌混匀，调节pH，经湿热灭菌，冷却备用，其粉碎粒度为20～40目，初始含水量为45％～85％，初始pH为7.0～7.4，固态发酵过程中物料pH值难于在线监测与控制，因此，物料的初始pH值调节至7.0～7.4，以满足Bt菌的生长需求。优选地，所述无机盐为选自KH₂PO₄ 0.075～0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.075～0.2％；MnSO₄·H₂O 0.002％；FeSO₄·H₂O 0.002％；ZnSO₄·H₂O0.002％、CaCO₃ 0.5～1.0％中的一种或多种。

根据本发明的方法，其中，苏云金芽孢杆菌液体培养基为：牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，NaCl 0.2％，pH值7.0～7.2；培养条件为：温度30℃、转速200转/分钟。

根据本发明的方法，其中，在步骤2)中，发酵条件为：温度30～32℃、湿度85～95％、发酵物料体积与每分钟通入空气的体积比为1∶1～1∶2，采用往复式滚动搅拌桨对发酵物料进行搅拌，搅拌桨对发酵物料进行搅拌，使物料搅拌均匀，利于传质传热。

根据本发明的方法，其中，在步骤2)中，按照10～15％V/W的接种量将种子液接种到无菌培养物料中，种子液与物料的混合过程中，将物料干燥或半干燥状态高温高压灭菌，然后将培养7～8小时的Bt种子液添加无菌水稀释，再与无菌的干燥或半干燥物料充分混匀，以达到Bt菌在物料中均匀分布的效果。

根据本发明的方法，物料的颗粒大小与形状既影响传质、传热也影响Bt对营养物的充分利用，因此，生物残渣的粉碎粒度达到20～40目，耦合通气、搅拌、调节湿度可达到最佳发酵效果。

因此，根据本发明的具体实施例的用生物残渣固态发酵生产生物药肥产品的方法可包括以下步骤：

1)生物残渣的前处理：生物残渣(芦笋下脚料、芦笋渣、海带渣、果蔬残渣等)粉碎至20～40目，加水调节物料的初始含水量为45％～85％，添加无机盐，充分搅拌混匀，调节pH为7.0～7.4，经湿热灭菌20～30分钟后，冷却至30℃左右备用；

2)菌种扩大培养：从苏云金芽孢杆菌斜面培养基上挑取一环Bt菌苔，接种到100mL灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基中(牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，NaCl 0.2％，pH7.0～7.2)，进行摇瓶培养，培养条件为：温度30℃、转速200转/分钟，培养7～8小时，作为Bt菌种子液；

3)固态发酵：按照10～15％(V/W)的接种量将种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度30～32℃、湿度85～95％、通气量1∶1～1∶2，在发酵的8～11小时，采用降低初始发酵温度2～5℃的变温发酵，发酵时间35～50小时；

4)发酵物料后处理：发酵物料经50～60℃通风干燥、粉碎至200目、添加1～5％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

我国是一个农业大国，每年有10亿吨左右的农业废弃物产生，过量的农业废弃物以及果蔬加工过程产生的残渣，已经造成严重的环境污染和资源浪费，生物残渣的资源化利用一直是我国可持续发展战略的需要。果蔬残渣、芦笋下脚料、芦笋渣以及海带渣和银杏叶残渣等生物残渣含有大量的氨基酸、蛋白质、维生素以及矿物元素等，可满足苏云金芽孢杆菌的生长，应用于发酵苏云金芽孢杆菌具有成本低廉、工艺简单等优势，设备投资少，生产过程无“三废”产生，发酵原料自身也可作为绿色肥料，不污染环境，利于苏云金芽孢杆菌制剂的大量生产与应用。

另外，壳寡糖具有独特的调节植物代谢、提高植物抗病虫害以及改善作物品质等优良特性，在Bt固体发酵产物中添加壳寡糖，使其药效、肥效都大幅提高，所以，本发明提供的以生物残渣为原料制备生物药肥的方法，既具有广谱杀虫、抑制病毒效果，又具有调节植物代谢、促进植物生长的功能，具有肥效一体化的功效，实现了生物农药、生物肥料的有机结合。

综上，本发明提供的一种以生物残渣为原料制备生物药肥的方法，具有以下优点：

1、提供的生产原料为生物残渣，原料来源丰富，成本较低，可大幅度降低Bt杀虫剂的生产成本；

2、果蔬残渣、芦笋下脚料、芦笋渣以及海带渣中仍然含有大量的氨基酸、蛋白质、维生素以及矿物元素等，能够满足苏云金芽孢杆菌的生长需求；

3、利用果蔬残渣、芦笋下脚料、芦笋渣以及海带渣为原料固态发酵Bt生物农药，工艺简单、发酵物料得到全利用；

4、果蔬残渣、芦笋下脚料、芦笋渣以及海带渣等残渣自身可作为绿色肥料、发酵后兼得杀虫效果，添加壳寡糖后，产品的药效、肥效都将大幅提高；

5、工艺流程简单、设备投资少，生产过程无“三废”产生，既节能节水，又不污染环境；

6、生产的生物药肥既具有广谱杀虫、抑制病毒效果，又具有调节植物代谢、促进植物生长的功能，实现了生物农药、生物肥料的有机结合。

附图说明

图1根据本发明的方法的流程图。

具体实施方式

以下实施例中所使用的壳寡糖的聚合度为2-10。

实施例1、以芦笋下脚料为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：芦笋下脚料经过粉碎至20目，调节芦笋下脚料的初始含水量为65％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.2％、MgSO₄·7H₂O 0.1％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.0，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：从苏云金芽孢杆菌斜面培养基上挑取一环Bt菌苔，接种到100mL灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基中(牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，NaCl 0.2％，pH7.0～7.2)，进行摇瓶培养，培养条件为：温度30℃、转速200转/分钟，培养7～8小时，作为Bt菌种子液；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度30℃、湿度90％、通气量1∶1，在发酵的8小时，降低发酵温度至28℃，发酵时间45小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经55℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加2％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例2、以芦笋下脚料为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：芦笋下脚料经过粉碎至40目，调节芦笋下脚料的初始含水量为70％，添加KH₂PO₄ 0.075％、MgSO₄·7H₂O 0.2％、CaCO₃ 0.5％充分搅拌混匀，调节pH为7.2，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度32℃、湿度85％、通气量1∶2，在发酵的11小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间40小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经60℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加5％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例3、以芦笋残渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：芦笋渣经过粉碎至40目，调节芦笋残渣的初始含水量为75％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.2％；MnSO₄·H₂O 0.002％；FeSO₄·H₂O0.002％；ZnSO₄·H₂O 0.002％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.4，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度30℃、湿度95％、通气量1∶1.2，在发酵的10小时，降低发酵温度至26℃，发酵时间40小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经55℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加4％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例4、以芦笋残渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：芦笋渣经过粉碎至40目，调节芦笋残渣的初始含水量为70％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.075％；MgSO₄·7H₂O 0.075％；MnSO₄·H₂O 0.002％；FeSO₄·H₂O0.002％；ZnSO₄·H₂O 0.002％、CaCO₃ 0.5％，充分搅拌混匀，调节pH为7.0，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度30℃、湿度85％、通气量1∶1.5，在发酵的9小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间37小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经60℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加5％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例5、以海带残渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：海带渣经过粉碎至40目，初始含水量调节至80％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.1％、MgSO₄·7H₂O 0.1％、MnSO₄·H₂O 0.002％；FeSO₄·H₂O 0.002％；ZnSO₄·H₂O 0.002％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.0，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵。发酵条件为：温度30℃、湿度95％、通气量1∶2，在发酵的8小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间50小时；

(4)发酵基质后处理：发酵物料经50℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加2.5％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例6、以海带残渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：海带渣经过粉碎至20目，初始含水量调节至70％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.2％；MnSO₄·H₂O 0.002％；FeSO₄·H₂O 0.002％；ZnSO₄·H₂O 0.002％、CaCO₃ 0.5％，充分搅拌混匀，调节pH为7.4，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度32℃、湿度95％、通气量1∶2，在发酵的9小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间50小时；

(4)发酵基质后处理：发酵物料经50℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加3.5％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例7、以银杏叶残渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：银杏叶渣经过粉碎至40目，调节初始含水量为65％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.2％、MgSO₄·7H₂O 0.1％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.0，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度30℃、湿度90％、通气量1∶1，在发酵的8小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间40小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经55℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加3％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例8、以苹果渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：苹果渣经过粉碎至40目，调节初始含水量为45％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.2％、MgSO₄·7H₂O 0.1％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.0，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵。发酵条件为：温度30℃、湿度95％、通气量1∶1，在发酵的8小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间35小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经55℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加3％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例9、以橙渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：橙渣经过粉碎至20目，调节初始含水量为50％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.15％、MgSO₄·7H₂O 0.15％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.0，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵。发酵条件为：温度30℃、湿度85％、通气量1∶1，在发酵的10小时，降低发酵温度至28℃，发酵时间35小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经55℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加2.5％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例10、以桔渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：桔渣经过粉碎至20目，调节初始含水量为45％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.15％、MgSO₄·7H₂O 0.15％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.2，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度30℃、湿度85％、通气量1∶1，在发酵的9小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间35小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经55℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加2.5％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例11、以西红柿渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：西红柿渣经过粉碎至40目，调节初始含水量为55％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.2％、MgSO₄·7H₂O 0.1％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.0，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度30℃、湿度95％、通气量1∶1.8，在发酵的9小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间40小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经55℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加1％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

实施例12、以胡萝卜渣为原料制备生物药肥

(1)原料的前处理：胡萝卜渣经过粉碎至20目，调节初始含水量为65％，添加无机盐KH₂PO₄ 0.2％、MgSO₄·7H₂O 0.1％、CaCO₃ 1.0％，充分搅拌混匀，调节pH为7.0，湿热灭菌20～30分钟后，得无菌培养物料，冷却至30℃左右备用；

(2)菌种扩大培养：同实施例1；

(3)固态发酵：将Bt种子液接种到无菌培养物料中，搅拌混匀，进行固态发酵，发酵条件为：温度30℃、湿度90％、通气量1∶1，在发酵的9小时，降低发酵温度至27℃，发酵时间35小时；

(4)发酵物料后处理：发酵物料经55℃通风干燥、气流粉碎，过200目标准筛、添加5％壳寡糖粉末，充分混匀，得产品。

Claims (3)

1.一种用生物残渣固态发酵生产生物药肥产品的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)前处理生物残渣，得无菌培养物料；

2)固态发酵，将苏云金芽孢杆菌种子液接种到无菌培养物料中，进行固态发酵，发酵条件为：温度30～32℃，湿度85～95%，在发酵的8～11小时，采用降低初始发酵温度2～5℃的变温发酵，发酵时间为35～50小时；

3)发酵物料经干燥、粉碎后，添加壳寡糖粉末，混合均匀，得生物药肥产品；

在步骤1)中，生物残渣经粉碎，过筛，调节物料的初始含水量，添加无机盐，充分搅拌混匀，调节pH，经湿热灭菌，冷却备用，其粉碎粒度为20～40目，初始含水量为45%～85%，初始pH为7.0～7.4；

在步骤2)中，种子液与物料混合时，先将物料在干燥或半干燥状态高温高压灭菌，然后将培养7～8小时的Bt种子液添加无菌水稀释，再按照10～15%V/W的接种量将种子液与无菌的干燥或半干燥物料充分混匀；

在步骤2)中，发酵物料体积与每分钟通入空气的体积比为1：1～1：2，采用往复式滚动搅拌桨对发酵物料进行搅拌；

所述壳寡糖的添加比例是1～5%；

所述的生物残渣为果蔬残渣、银杏叶渣中的一种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的壳寡糖粉末是聚合度为2～10的水溶性壳寡糖粉末。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无机盐为选自KH₂PO₄0.075～0.2%；MgSO₄·7H₂O0.075～0.2%；MnSO₄·H₂O0.002%；FeSO₄·H₂O0.002%；ZnSO₄·H₂O0.002%；CaCO₃0.5～1.0%中的一种或多种。