CN110687108B - 一种用于定量检测尿液丙二醛的多层膜干化学试剂条 - Google Patents

一种用于定量检测尿液丙二醛的多层膜干化学试剂条 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用于定量检测尿液丙二醛的多层膜干化学试剂条。该多层膜干化学试剂条，其为长方形条，其构成从上到下依此分别为上支撑层、扩散层、反应层、双面胶和下支撑层；其中，在上支撑层、下支撑层、双面胶中对应扩散层和反应层的区域位置分别开有圆孔，上支撑层上的圆孔为加样孔，下支撑层上的圆孔为测试孔；测试样本从加样孔处滴加到扩散层上，样本扩散至反应层后，发生显色反应，通过使用干化学分析仪进行测定其测试孔处反应层的颜色，即可以实现定量检测样本中丙二醛的浓度。该试剂条用于定量测定尿液中丙二醛的含量。检测结果准确，操作方便，测试样本少，检测时间短，成本低，适于大规模在家庭、医院中推广。

Description

一种用于定量检测尿液丙二醛的多层膜干化学试剂条
技术领域
本发明涉及一种用于定量检测尿液丙二醛的技术领域，具体而言，涉及丙二醛的检测试剂及检测多层膜干化学试剂条。
背景技术
人体机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：丙二醛（Malondialdehyde（MDA））、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。人体中少量的氧自由基对人体不构成威胁，而且可以帮助传递维持生命力的能量，增强免疫力、消除炎症、抑制肿瘤等。但体内氧自由基过多会加速人体衰老程度，并可能会引起中风、关节炎、肝病肾病、帕金森疾病、慢性肾脏疾病、心血管疾病、慢性阻塞性肺疾病、糖尿病、氧化应激脆弱胃肠道等疾病的发生。此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平，间接地反映出细胞损伤的程度，因而MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标，即氧自由基水平。
MDA检测方法众多，通常测定其方法有高效液相色谱法、液体生化试剂法以及干化学试剂法。其中高效液相色谱法和液体生化试剂法可以进行定量检测，但其存在设备价格较高、需要专业人员进行操作、测试时间较长、测试流程繁琐等问题，因此，无法得到广泛应用。而干化学试剂法具有可以定量检测、检测时间短、所需样本量小、成本低、操作简单、灵活、污染小等特点。
目前，采用干化学试剂法实现定量检测的产品多为国外公司产品（如爱科来、富士、强生、罗氏），其存在生产工艺复杂，对材料及设备要求较高，加样端容易产生一定的汽包、过量液体等问题。此外，中国专利CN201280053851.1公开了一种人体内氧自由基的检测方法，该方法检验时需要将试纸浸到尿液中并通过观察指示剂的颜色变化进行丙二醛的定性或半定量检测（如尿液分析试纸检测），这样就会存在交叉污染严重、所需样本量大、检测结果不准确、无法实现定量检测的问题，并且该试纸条制作方法是将配制好的测试液直接浸泡在滤纸上，然后粘合在支持层上，其吸附于滤纸中的试剂量无法确定，测试结果的重复性、准确性和精密性均不能充分保证。
发明内容
本发明的内容在于提供一种使用方便、测试成本低、无污染、检测样本量小，检测时间短、检测结果准确的定量测定尿液中丙二醛的多层膜干化学试剂条。
一种定量测定尿液丙二醛的多层膜干化学试剂条，述的试剂条分为试剂条外壳和内层试纸条；试剂条外壳包括上、下支撑层，上支撑层一端开设有加样孔，下支撑层对应位置开设测试孔；
两孔之间为内层试纸条，从上到下依次为，扩散层、反应层。
其中，所述反应层选用聚砜、聚醚砜合成膜，厚度为80-200um，面积略大于加样孔；合成膜上涂覆有颜色底物、缓冲液、稳定剂和表面活性剂。
其中，所述的颜色底物为硫代巴比妥酸，其含量为0.5-2%；所述缓冲溶液为盐酸三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液，pH为3.8，浓度为0.1-1mol/L；表面活性剂为聚乙二醇辛基苯基醚，含量为0.1-1.5%；稳定剂为丙三醇，浓度为5-30g/L；上述%为w/v%。
其中，所述的反应层制备方法：孔径直径为3.5mm，反应层4.5mm*4.5mm，将3.5ul配制好的反应试剂滴加在聚醚砜膜，将涂覆过试剂的反应层放入45度干燥箱中，90分钟后取出。
其中，所述扩散层为多孔尼龙、聚丙烯、聚酯纤维、棉织物或网布中的一种或几种制成，其孔径大小为20-150um，厚度为0.05-0.3mm，面积略大于反应层。
其中，所述的扩散层经过亲水性处理。
其中，所述的亲水性处理时采用表面活性剂，所述表面活性剂为非离子表面活性剂，具体为羟乙基纤维素、醋酸纤维素或聚乙烯吡咯烷酮，浓度为2%-10%，%为w/v%。
具体使用时，将尿液滴加在加样孔，经扩散层的尿液与反应层反应后颜色和吸光率发生变化，相应仪器通过测试孔可测尿液中丙二醇含量。
本发明中，测试时样本首先从加样孔处滴加到扩散层上，扩散层起到的作用是使得样本能够适量均匀快速地扩散至反应层，然后与反应层中的试剂发生显色反应，颜色的深浅与样本中丙二醛的浓度和反应层中的颜色底物浓度成正比，通过使用干化学分析仪从测试孔处测试反应层的颜色，即可以实现定量检测样本中丙二醛的浓度。
本发明中，涂覆在聚砜膜上的定量的硫代巴比妥酸在酸性环境下进行显色反应时，且随着丙二醛的浓度增加，颜色由黄色变色紫粉色。
为了定量检测尿液样本中丙二醛的含量，可使用于本发明多层膜干化学试纸条配套的干化学分析仪进行测试，该仪器测定波长为531nm，10-20ul样本滴加于试剂条的加样孔上，测试时间为2-3分钟，达到设定反应时间后，仪器自动读取反射率，并通过内置的标准曲线将光信号转为丙二醛浓度，自动报告和储存测试结果，并可打印。
本发明有益效果：
1. 能够快速、定量、准确地检测丙二醛；
2. 试剂条制备方法简单；
3. 使用方法容易。
附图说明
图1为本发明的多层膜干化学试剂条结构图示。
图2为本发明的多层膜干化学试剂条结构解析图。
图中：1为手持端，2为测试端，3为加样孔，4为上支撑层，5为双面胶，6为扩散层，7为反应层，8为下支撑层，9为测试孔。
具体实施方式
下面通过实施例进一步描述发明。
实施例1
上、下支撑层材质采用聚苯乙烯材料，厚度为0.4mm，长度为40mm，宽度为6mm，可通过双面胶粘合在一起，在测试区域端，其上、下支撑层及双面胶在此区域设有圆孔，分别设有加样孔和测试孔，孔径直径为3.5mm。
扩散层的制备：扩散层材质采用聚酯纤维膜材料，孔径大小为75um，厚度为0.1mm。将聚酯纤维膜材料浸在5%的聚乙烯吡咯烷酮水溶液中，浸渍时间为8分钟，取出放在50度烘箱中干燥60分钟，将处理好的聚酯纤维膜材料裁成5.5mm*5.5mm的正方形小块，将其粘合在上支撑层的加样孔位置。
反应层的制备：反应层采用聚醚砜膜材料，孔径大小为0.8um，厚度为110um，将聚醚砜膜材料黏合在下支撑层的测试孔位置。将配制好的反应试剂滴加在聚醚砜膜，3.5ul/孔。将涂覆过试剂的反应层放入45度干燥箱中，90分钟后取出，裁成4.5mm*4.5mm的正方形小块，将其与制备好的扩散层对齐粘合在一起，放入铝箔袋中密封。
反应试剂的配方如下：盐酸三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液0.5mol/L，聚乙二醇辛基苯基醚1%，丙三醇15g/L，乙醇10%，颜色底物硫代巴比妥酸1.2%。
测试不同浓度的丙二醛样本，将15ul测试样本滴加于加样孔，采用干化学分析仪进行测定，测试时间为3分钟。其测试结果如下表1所示。
表1
Figure 1
实施例2
上、下支撑层材质采用聚苯乙烯材料，厚度为0.4mm，长度为40mm，宽度为6mm，可通过双面胶粘合在一起，在测试区域端，其上、下支撑层及双面胶在此区域设有圆孔，分别设有加样孔和测试孔，孔径直径为3.0mm。
扩散层的制备：扩散层材质采用聚酯纤维膜材料，孔径大小为100um，厚度为0.2mm。将聚酯纤维膜材料浸在3%的聚乙烯吡咯烷酮水溶液中，浸渍时间为5分钟，取出放在45度烘箱中干燥90分钟，将处理好的聚酯纤维膜材料裁成5.0mm*5.0mm的正方形小块，将其粘合在上支撑层的加样孔位置。
反应层的制备：反应层采用聚砜膜材料，孔径大小为0.5um，厚度为110um，将聚醚砜膜材料黏合在下支撑层的测试孔位置。将配制好的反应试剂滴加在聚醚砜膜，4.0ul/孔。将涂覆过试剂的反应层放入45度干燥箱中，120分钟后取出，裁成4.0mm*4.0mm的正方形小块，将其与制备好的扩散层对齐粘合在一起，放入铝箔袋中密封。
反应试剂的配方如下：盐酸三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液1.0mol/L，聚乙二醇辛基苯基醚0.5%，丙三醇20g/L，乙醇15%，颜色底物硫代巴比妥酸0.6%。
测试不同浓度的丙二醛样本，将15ul测试样本滴加于加样孔，采用干化学分析仪进行测定，测试时间为3分钟。其测试结果如下表2所示。
表2
Figure 2
对比例1
将实施例1中反应层试剂替换为：盐酸三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液0.5mol/L，羟甲基纤维素钠0.5%，丙三醇15g/L，乙醇10%，颜色底物硫代巴比妥酸1.2%，其它均同实施例1。
其测试结果如下表3所示。
表3
Figure 3
。
对比例2
将实施例1中的聚砜膜改为whatman滤纸，孔径大小为0.8-107um，厚度为40-150um，其他同实施例1. 其测试结果如表4所示。
表4
Figure 4
。

Claims (6)

1.一种定量测定尿液丙二醛的多层膜干化学试剂条，其特征在于，所述的试剂条分为试剂条外壳和内层试纸条；试剂条外壳包括上、下支撑层，上支撑层一端开设有加样孔，下支撑层对应位置开设测试孔；
两孔之间为内层试纸条，从上到下依次为，扩散层、反应层；
所述反应层选用聚砜、聚醚砜合成膜，厚度为80-200um，面积略大于加样孔；合成膜上涂覆有颜色底物、缓冲液、稳定剂和表面活性剂；
所述的颜色底物为硫代巴比妥酸，其含量为0.5-2%；所述缓冲液为盐酸三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液，pH为3.8，浓度为0.1-1mol/L；表面活性剂为聚乙二醇辛基苯基醚，含量为0.1-1.5%；稳定剂为丙三醇，浓度为5-30g/L；上述%为w/v%。
2.根据权利要求1所述的多层膜干化学试剂条，其特征在于，所述的反应层制备方法：孔径直径为3.5mm，反应层4.5mm*4.5mm，将3.5ul配制好的反应试剂滴加在聚醚砜膜，将涂覆过试剂的反应层放入45度干燥箱中，90分钟后取出。
3.根据权利要求1所述的多层膜干化学试剂条，其特征在于所述扩散层为多孔尼龙、聚丙烯、聚酯纤维、棉织物或网布中的一种或几种制成，其孔径大小为20-150um，厚度为0.05-0.3mm，面积略大于反应层。
4.根据权利要求3所述的多层膜干化学试剂条，其特征在于，所述的扩散层经过亲水性处理。
5.根据权利要求4所述的多层膜干化学试剂条，其特征在于，所述的亲水性处理时采用表面活性剂，所述表面活性剂为非离子表面活性剂，具体为羟乙基纤维素、醋酸纤维素或聚乙烯吡咯烷酮，浓度为2%-10%，%为w/v%。
6.根据权利要求1所述的多层膜干化学试剂条，其特征在于，使用时，将尿液滴加在加样孔，经扩散层的尿液与反应层反应后颜色和吸光率发生变化，相应仪器通过测试孔可测尿液中丙二醇含量。
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