CN103630535A - 定量测定人体血液白蛋白含量的干化学试纸 - Google Patents

Abstract

本发明属于体外临床诊断试剂技术领域，具体涉及一种定量测定人体血液白蛋白含量的干化学试纸。该干化学试纸为长形条，一端为测试区，另一端为手持端，其构成从上到下依次是上支持层、扩散层、反应层和下支持层；在上、下支持层上，与扩散层和反应层相对应区域分别开有圆孔，分别作为加样孔和测试孔；反应层包被有测定白蛋白所需要的试剂，所述试剂包括染料、缓冲液和表面活性剂。测试样本从加样孔处滴加到扩散层上，样本扩散至反应层后，样本中的白蛋白与反应层中的染料发生显色反应，通过使用反射式光度计从测试孔处测试反应层上的颜色。该试纸条用于定量测定人体血液中白蛋白的含量，为疾病的诊断提供依据，适合医院急诊室推广使用。

Description

定量测定人体血液白蛋白含量的干化学试纸

技术领域

本发明属于体外临床诊断试剂技术领域，具体涉及一种适用于快速测定人体白蛋白含量的试纸条。

背景技术

白蛋白分子量为66300，在人体由肝脏合成，是唯一一种不含碳水化合物的血浆蛋白质。白蛋白是血浆中多种物质重要的结合物与运输蛋白，并且是维持血浆渗透压的主要组分。在临床检验中，血液白蛋白通常作为肝功能异常、低蛋白饮食、肾病综合征等症状的诊断指标之一。血液中白蛋白浓度也可视为是个体健康和营养状态的指标，特别是对老年和慢性病患者。

经过多年的发展，已形成多种测定白蛋白的方法，如盐析法、色氨酸法、染料结合法等。其中染料结合法测定白蛋白操作更容易、方法特异性高，现今被大多数临床实验室所使用。

临床实验室所使用的白蛋白测定试剂类型可以分为两类，一类是液体试剂，另一类为干化学试剂。干化学试剂与液体试剂相比具有操作简便、测定快速等优点，在医院急诊检验科得到了比较广泛的应用。

目前国内医院使用的测定血液白蛋白干化学试剂均为进口产品，其中以美国强生和日本富士产品为主。强生和富士的干化学产品是将胶卷生产领域中的涂层技术运用到了临床诊断领域，其将测定反应中所需的各种试剂按照反应的先后次序自下向上分别均匀的分层涂布在透明塑料薄片上。一方面，这些产品生产工艺比较复杂，对生产设备要求高，生产成本较高，同时需配备大型的测试仪器，价格昂贵，致使一些中小医院，特别是社区医院难以接受。另一方面，由于此类干化学试剂所使用材料等原因，日常需要冷藏保存，使用时需要提前放置室温平衡半小时后才可以测试，导致使用不方便。另外，还存在测试速度较慢、测试样本量较大等缺陷，如强生白蛋白干化学试剂测试时间需要2.5分钟，富士白蛋白干化学试剂测试样本量需要10微升。 

本发明采用优选的试纸材料，优化反应配方，制作出一种生产工艺简单，可室温保存，测试样本量较小，测试速度更快的白蛋白干化学试纸条。

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用方便、测试样本量少、测试快速的白蛋白测定干化学试纸条。

本发明提供的定量测定人体血液白蛋白含量的干化学试纸，其为长形条，一端为测试区，另一端为手持端。其构成从上到下依次分别是上支持层、扩散层、反应层和下支持层；其中，在上支持层、下支持层中对应于扩散层和反应层的区域位置分别开有圆孔，上支持层上的圆孔为加样孔，下支持层上的圆孔为测试孔；所述的反应层包被有测定白蛋白所需要的试剂，所述试剂包括染料、缓冲液和表面活性剂等成分。

测试时，测试样本从加样孔处滴加到扩散层上，扩散层起到的作用是能够将样本快速均匀的分布到反应层，样本扩散至反应层后，样本中的白蛋白与反应层中的染料发生显色反应，颜色的深浅与样本中白蛋白的浓度成正比，通过使用反射式光度计从测试孔处测试反应层上的颜色，即可以到达定量测定样本中白蛋白浓度的目的。

本发明中，样本中的白蛋白与包被在反应层上的染料在酸性环境以及表面活性剂的作用下进行显示反应时，颜色逐渐由黄色变为蓝色，最终反应颜色的深浅取决于样本中白蛋白的浓度。研究表明，反应所需要的样本量和反应速度与反应层所使用的膜材料以及反应层试剂含量有关。本发明优选膜材料以及优化反应层试剂含量以达到测试快速和测试样本量小的目的。其中反应层膜材料优选聚砜、聚醚砜合成膜，孔径大小为0.2～15μm，厚度为50-250μm ；染料含量为0.05%～1%（W/V），所使用的缓冲液为丁二酸缓冲液，pH为4.2，浓度为0.1mol/L～1mol/L，表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚，表面活性剂含量为1%～5%(W/V)。

本发明中，所述的上、下支持层可采用聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚苯乙烯或聚氯乙烯等材料，其中以聚对苯二甲酸乙二醇酯材料为最佳。上、下支持层起到的主要是支撑作用，其可以通过胶水粘合在一起。支持层可以分为手持区和测试区，测试区为试纸条的主体部分。在测试区域，扩散层和反应层材料以上下叠合的方式夹在上、下支持层中间，并且上、下支持层在此区域开有圆孔，分别为加样孔和测试孔。

本发明中，所述的扩散层的作用在于能够将测试样本快速均匀的扩散至反应层上。为了减小测试样本的用量，扩散层的材料不适合使用对测试样本有吸附作用的材料，如滤纸、无纺布、合成膜等，要能够保证测试样本几乎全部扩散至反应层而不被扩散层吸附。合适的扩散层材料可以选用尼龙、聚乙烯或聚丙烯等，其中以网布形式最佳。为了使样本能快速均匀的扩散至反应层，扩散层材料可以使用表面活性剂或亲水物质进行亲水性处理，表面活性剂为非离子表明活性剂，如聚山梨酯或聚乙二醇辛基苯基醚等，亲水物质如羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或醋酸纤维素等，其中优选非离子表面活性剂。可采用浸泡的方式对扩散层进行处理。

为定量测定血液中白蛋白含量，可使用与本发明干化学试纸条配套的反射式光度计进行测试。该仪器可以将反应温度控制在37±0.5℃，测定波长为630nm，达到设定反应时间后，仪器自动读取反射光密度，并通过内置的标准曲线将光信号转化为白蛋白浓度，自动报告和储存测试结果，并可打印。

附图说明

图1为本发明的干化学试纸结构图示。

图2为本发明的干化学试纸结构解析图。

图中标号：1为测试区，2为手持区， 3为上支持层， 4为下支持层，5为扩散层，6为反应层，7为加样孔，8为测试孔。

具体实施方式

下面通过实施例进一步描述本发明。

实施例1：

上、下支持层材料采用聚对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.18mm，长度为20cm，宽度为20cm。其中上下支持层单面附有粘胶。分别在一端打出加样孔和测试孔，孔直径为4 mm，孔距8mm。

扩散层的制备：扩散层采用尼龙网布，将网布在1%的聚乙二醇辛基苯基醚水溶液中浸泡5分钟，在45度烘箱中干燥30分钟，将处理好的网布黏贴在上支持层的加样孔位置。

反应层的制备：反应层采用聚砜膜，将聚砜膜黏贴在下支持层的测试孔位置。将配制好的反应液滴加到聚砜膜上，5μl/孔。将包被过试剂的反应层放入45度干燥箱中，60分钟后取出，将其与制备好的扩散层对齐边缘粘合在一起。用滚刀机其切割成8mm宽的试纸条，放入干燥筒。

反应液试剂的配方如下：

丁二酸缓冲液             0.5mol/l

溴甲酚绿                 0.2%

聚氧乙烯月桂醚           3% 。

测试不同浓度的白蛋白样本，将5μl测试样本滴加于加样孔，用反射式光度计进行测定，测试时间为1分钟。

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实施例2：

上、下支持层材料采用聚苯乙烯材质，厚度分别为0.11mm和0.18mm，长度为20cm，宽度为20cm。其中上下支持层单面附有粘胶。分别在一端打出加样孔和测试孔，孔直径为5mm，孔距8mm。

扩散层的制备：扩散层采用聚乙烯网布，将网布在0.5%的聚山梨酯水溶液中浸泡10分钟，在45度烘箱中干燥30分钟，将处理好的网布黏贴在上支持层的加样孔位置。

反应层的制备：反应层采用聚醚砜合成膜，将聚醚砜合成膜黏贴在下支持层的测试孔位置。将配制好的反应液滴加到聚醚砜合成膜上，5μl/孔。将包被过试剂的反应层放入45度干燥箱中，60分钟后取出，将其与制备好的扩散层对齐边缘粘合在一起。用滚刀机其切割成8mm宽的试纸条，放入干燥筒。

反应液试剂的配方如下：

丁二酸缓冲液             0.2mol/l

溴甲酚绿                 0.15%

聚氧乙烯月桂醚           2% 。

测试不同浓度的白蛋白样本，将5μl样本滴加于加样孔，用反射式光度计进行测定，测试时间为1分钟。

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Claims (5)

1. 一种定量测定人体血液白蛋白含量的干化学试纸，其特征在于为长形条，一端为测试区，另一端为手持端；其构成从上到下依次是上支持层、扩散层、反应层和下支持层；其中，在上支持层、下支持层中对应于扩散层和反应层的区域位置分别开有圆孔，上支持层上的圆孔为加样孔，下支持层上的圆孔为测试孔；所述的反应层包被有测定白蛋白所需要的试剂，所述试剂包括染料、缓冲液和表面活性剂。

2. 根据权利要求1所述的干化学试纸，其特征在于所述反应层膜材料选用聚砜或聚醚砜合成膜，孔径大小为0.2～15μm，厚度为50-250μm ；所述染料为溴甲酚绿或溴甲酚紫， 

染料含量为0.05%～1%（W/V），所使用的缓冲液为丁二酸缓冲液，pH为4.2，浓度为0.1mol/L～1mol/L，表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚，表面活性剂含量为1%～5%(W/V)。

3. 根据权利要求1所述的干化学试纸，其特征在于所述的扩散层材料为尼龙、聚乙烯或聚丙烯的网布。

4. 根据权利要求1所述的干化学试纸，其特征在于所述的扩散层经过亲水性处理。

5. 根据权利要求4所述的干化学试纸，其特征在于所述的亲水性处理是采用表面活性剂或亲水物质进行，所述表面活性剂为非离子表明活性剂，所述亲水物质为羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或醋酸纤维素。

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