CN110684818A - 实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用 - Google Patents

实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用 Download PDF

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陈金烟
韩俊永
王坤
金静君
薛士杰
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Abstract

本发明公开了一种实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，1)增殖实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至增殖检测板，增殖检测板中每孔接种若干个细胞，利用实时无标记细胞分析仪监测细胞增殖；2)迁移实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至实时无标记细胞分析仪的细胞迁移检测板的上室，上室培养液含0‑5％胎牛血清，细胞迁移检测板中每孔接种若干个细胞，下室培养液含5％‑10％胎牛血清，监测由上室迁移至下室的细胞数量。本发明无需对食管癌细胞标记、固定、染色或者其他处理步骤，操作简便；细胞密度和胞外基质浓度等实验条件快速优化，大大节省时间；非侵入方法，检测后的细胞均可用于后续的实验分析。

Description

实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中 的应用
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用。
背景技术
传统食管癌细胞增殖检测方法有两种：间接检测和直接检测。间接检测是检测细胞的代谢活性，通过检测某一个时间点活细胞相关物质的含量(如蛋白质)等间接测定活细胞的数量来评价细胞的增殖能力，反应的是细胞的活性而非是否在增殖，如：MTT法和CCK8法。直接检测是通过测定某个时间点细胞的DNA合成含量来评价细胞的增殖能力，如：BrdU掺入法和EdU法。
传统食管癌细胞迁移的检测方法主要是：Transwell小室法。 Transwell小室底层为一张有通透性的膜(一般为聚碳酸酯膜)，将其放置于孔板中，小室内称上室，培养板内称下室，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞生长、运动等。迁移实验：研究食管癌细胞细胞的迁移能力常用8.0μm膜，上室种食管癌细胞，培养液为不含FBS(胎牛血清)的培养液，下室培养液中加入FBS，细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映食管癌细胞的迁移能力。
传统的检测技术需要在固定的某一个时间点对食管癌细胞进行处理、染色之后才能检测；增殖实验通过酶标仪检测反应产物的吸光值而得到一个相对值，迁移实验则通过计数随机几个视野细胞数来说明，都无法提供客观、绝对定量的读数，更无法连续监测整个的增殖、迁移过程。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述问题，提供一种实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现：
一种实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，
1)增殖实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至增殖检测板，增殖检测板中每孔接种若干个细胞，利用xCELLigence RTCADPlus(实时无标记细胞分析仪)实时监测细胞增殖，每隔30-60min检测一次；
2)迁移实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至xCELLigence RTCADPlus的细胞迁移检测板的上室，上室培养液含0-5％胎牛血清，细胞迁移检测板中每孔接种若干个细胞，下室培养液含5％-10％胎牛血清，利用xCELLigence RTCADPlus实时监测由上室迁移至下室的细胞数量，每隔10-20min检测一次。
进一步地，上述增殖实验中，增殖检测板为E-Plate 96检测板。
进一步地，上述增殖实验中，增殖检测板中每孔接种(0.5-2)× 104个细胞。
进一步地，上述增殖实验中，所述增殖检测板中每孔接种1×104个细胞。
进一步地，上述增殖实验中，利用xCELLigence RTCADPlus实时监测细胞增殖，每隔45min检测一次。
进一步地，上述迁移实验中，细胞迁移检测板为CIM-Plate 16检测板。
进一步地，上述迁移实验中，细胞迁移检测板中每孔接种(0.5-2) ×105个细胞。
进一步地，上述迁移实验中，细胞迁移检测板中每孔接种1×105个细胞。
进一步地，上述迁移实验中，利用xCELLigence RTCADPlus实时监测细胞增殖，每隔15min检测一次。
进一步地，上述增殖实验和迁移实验中，食管癌细胞TE-1购自中国科学院细胞库，培养在含10％胎牛血清的1640培养液中，提前6个小时对细胞进行干预处理。
本发明的有益效果是：
1、不需要对食管癌细胞进行染料标记，可以实时检测细胞贴壁、伸展和增殖，不影响细胞的生长过程。
2、实现一边培养细胞一边连续检测，可以得到连续的检测数据。
3、实现定量评估细胞生理状态包括细胞数量、存活率及细胞形态变化等。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上的所有优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例中增殖实验的结果示意图；
图2为本发明实施例中迁移实验的结果示意图；
附图中，各标号所代表的部件列表如下：
a-干预组：为表达特异蛋白的腺病毒感染食管癌细胞组，
b-空白对照组：为未作任何处理的食管癌细胞组，
c-对照组：为空载体腺病毒感染食管癌细胞组。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本实施例为一种实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，食管癌细胞TE-1购自中国科学院细胞库，培养在含10％胎牛血清的1640培养液中，提前6个小时对细胞进行干预处理，按不同需要接种到检测板中。
1)增殖实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至E-Plate 96检测板，增殖检测板中每孔接种1×104个细胞，利用xCELLigence RTCA DPlus实时监测细胞增殖，每隔45min检测一次。
增殖实验结果如图1所示，在检测的100个小时前随着时间的延长细胞的数量是明显增加的，说明细胞在不断增殖中，增加的细胞多余死亡的细胞。在100个小时后，细胞增殖能力减弱，增加的细胞不断减少。
2)迁移实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至xCELLigence RTCADPlus的CIM-Plate 16细胞迁移检测板的上室，上室培养液含5％胎牛血清，细胞迁移检测板中每孔接种1×105个细胞，下室培养液含 10％胎牛血清，利用xCELLigence RTCADPlus实时监测由上室迁移至下室的细胞数量，每隔15min检测一次。
迁移实验结果如图2所示，随着时间的延长，由上室迁移至下室的细胞不断增加。
本实施例的一个具体应用为：本实施例无需对食管癌细胞标记、固定、染色或者其他处理步骤，操作简便；细胞密度和胞外基质浓度等实验条件快速优化，大大节省时间；非侵入方法，检测后的细胞均可用于后续的实验分析(如图像、RT-PCR等)。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (10)

1.实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：
1)增殖实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至增殖检测板，增殖检测板中每孔接种若干个细胞，利用xCELLigence RTCADPlus实时监测细胞增殖，每隔30-60min检测一次；
2)迁移实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至xCELLigence RTCADPlus的细胞迁移检测板的上室，上室培养液含0-5％胎牛血清，细胞迁移检测板中每孔接种若干个细胞，下室培养液含5％-10％胎牛血清，利用xCELLigence RTCADPlus实时监测由上室迁移至下室的细胞数量，每隔10-20min检测一次。
2.根据权利要求1所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：所述增殖实验中，增殖检测板为E-Plate 96检测板。
3.根据权利要求1所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：所述增殖实验中，增殖检测板中每孔接种(0.5-2)×104个细胞。
4.根据权利要求3所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：所述增殖检测板中每孔接种1×104个细胞。
5.根据权利要求1所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：所述增殖实验中，利用xCELLigence RTCADPlus实时监测细胞增殖，每隔45min检测一次。
6.根据权利要求1所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：所述迁移实验中，细胞迁移检测板为CIM-Plate 16检测板。
7.根据权利要求1所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：所述迁移实验中，细胞迁移检测板中每孔接种(0.5-2)×105个细胞。
8.根据权利要求7所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：所述迁移实验中，细胞迁移检测板中每孔接种1×105个细胞。
9.根据权利要求1所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：所述迁移实验中，利用xCELLigence RTCADPlus实时监测细胞增殖，每隔15min检测一次。
10.根据权利要求1所述的实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，其特征在于：食管癌细胞TE-1购自中国科学院细胞库，培养在含10％胎牛血清的1640培养液中，提前6个小时对细胞进行干预处理。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112342264A (zh) * 2020-11-16 2021-02-09 莆田学院 两次移位细胞迁移测定方法
CN114196614A (zh) * 2021-12-14 2022-03-18 福建省医学科学研究院 pAdM3C感染大鼠胰腺导管细胞促进转分化方法

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