CN108018244A - 一种新型淋球菌液体培养基及其应用于淋球菌药物敏感性试验的方法 - Google Patents

一种新型淋球菌液体培养基及其应用于淋球菌药物敏感性试验的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种新型淋球菌液体培养基及其应用于淋球菌药物敏感性试验的方法，涉及药敏检测的技术领域，该新型淋球菌培养基包括牛肉浸液、胎牛血清、蛋白胨、琼脂、生长添加剂和基础肉汤，能够使淋球菌在该培养基中生长良好且不存在色素导致影响淋球菌的生长形成的菌落或浑浊现象的观察；该淋球菌药物敏感性检测方法将在上述的淋球菌培养基中培养后的淋球菌与不同浓度的药物共孵育，根据所述淋球菌培养基的浑浊程度判定所述药物的最小抑菌浓度，得到淋球菌的药物敏感性，检测速度快，缓解了现有技术中缺乏快速高效准确的检测淋球菌药物敏感性检测方法的技术问题。

Description

一种新型淋球菌液体培养基及其应用于淋球菌药物敏感性试 验的方法
技术领域
本发明涉及药敏检测领域，尤其是涉及一种新型淋球菌液体培养基及其应用于淋球菌药物敏感性试验的方法。
背景技术
淋病是由淋病奈瑟菌(简称淋球菌)引起的泌尿生殖系统化脓性感染，是全球最常见的具有较大危害的性传播疾病之一，治疗不当可导致不孕不育和异位妊娠等严重不良后果，同时可促进HIV感染的传播。全球流行病学研究结果表明，淋病发病率从上个世纪八十年代到九十年代早期有所下降，但自九十年代后期开始其发病率又有上升趋势。2016年11月全国报告淋病11470例，较上年同期增长20.8％，淋病依然是全球重要的公共卫生问题之一。
在目前的研究中，淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星的耐药性持续增高，美国CDC分别于1989年和2007年不再推荐青霉素和环丙沙星作为用于淋病治疗的药物。三代头孢菌素类抗生素，包括注射用药头孢曲松和口服的头孢克肟，也出现了敏感性下降的菌株，甚至出现了头孢曲松治疗淋病失败的病例。因此，淋球菌对抗生素的耐药性已引起全球的高度关注。
目前淋球菌的耐药性监测方法主要有WHO推荐的琼脂稀释法和E～test 法。WHO淋球菌的耐药性监测方案采用琼脂稀释方法测定最小抑菌浓度 (minimal inhibitoryconcentration，MIC)，然而该方法操作较繁琐，工作量较大、较为费时费力，无法对临床分离株实时检测，通常需将菌株储存集中后批量检测，这限制了琼脂稀释法在耐药监测中的广泛应用。E～test法是1988年由AB Biodisk公司发展的方法，该法虽可直接测定临床分离株的最低抑菌浓度，但结果受琼脂的厚度影响，且抗生素试纸条较昂贵而限制其广泛应用。
并且更为严重的问题是，不同淋球菌敏感性试验方法之间缺乏一致性，青霉素KB纸片法与琼脂稀释法的符合率约72.2～73.3％，头孢曲松的符合率约37.5％，E～Test试验方法与琼脂稀释法测定淋球菌对大观霉素的符合率也为65％，存在显著性差异。
微量肉汤稀释法检测方便、快速，但是淋球菌是苛养菌，对营养要求较高，由于淋球菌的生长特性，在液体培养基中生长不良，因此液体培养基需比固体培养基的营养要求更高，导致传统的微量肉汤稀释法由于液体培养基淋球菌的生长而无法应用于检测淋球菌的MIC。
因此，一种适合培养淋球菌的液体培养基和快速高效准确的检测淋球菌药物敏感性检测方法是目前有待解决的问题。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种淋球菌培养基，缓解了现有技术中存在的淋球菌在液体培养基中生长不良的技术问题。
本发明的第二目的在于提供一种淋球菌培养基在制备检测淋球菌药物敏感性产品中的应用，缓解了现有技术中存在的微量肉汤稀释法检测淋球菌最小抑菌浓度缺乏适合淋球菌生长的培养基的技术问题。
本发明的第三个目的在于提供一种供检测淋球菌药物敏感性的产品，缓解了现有技术中存在的检测淋球菌药物敏感性产品成本高效率低的技术问题。
本发明的第四目的在于提供了一种淋球菌药物敏感性检测方法，缓解了现有技术中存在的检测淋球菌药物敏感性检测方法效率低，成本高，和其他检测方法缺乏一致性的技术问题。
本发明的第五目的在于提供了一种上述淋球菌药物敏感性检测方法在制备抗淋球菌药物中的应用，缓解了现有技术中由于缺乏一种快速、高通量的淋球菌药物敏感性检测方法导致的抗链球菌药物更新迭代滞后的技术问题。
为实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案。
一种淋球菌培养基，按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液5～15份、胎牛血清2～10份、蛋白胨0.5～2.5份、琼脂0.05～0.2份、生长添加剂0.5～2 份和基础肉汤50～100份。
进一步的，按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液8～12份、胎牛血清 4～8份、蛋白胨0.8～2份、琼脂0.05～0.15份、生长添加剂0.5～1.5份和基础肉汤70～100份。
进一步的，按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液10份、胎牛血清5 份、蛋白胨1.5份、琼脂0.1份、生长添加剂1份和基础肉汤82份。
一种所述淋球菌培养基在制备检测淋球菌药物敏感性的产品中的应用。
一种检测淋球菌药物敏感性的产品，包括所述淋球菌培养基。
一种淋球菌药物敏感性检测方法，将在所述淋球菌培养基中培养后的淋球菌与不同浓度的药物共孵育，根据所述淋球菌培养基的浑浊程度判定所述药物的最小抑菌浓度，得到淋球菌的药物敏感性。
进一步的，所述药物包括抗生素；
优选地，所述抗生素包括青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松、头孢克肟或阿奇霉素中的一种或多种。
进一步的，所述淋球菌与不同浓度的药物于反应板中共孵育；
优选地，所述反应板为微孔反应板。
进一步的，所述受试淋球菌浑浊程度通过检测菌液吸光度或肉眼观察确定。
一种所述淋球菌药物敏感性检测方法在制备抗淋球菌药物中的应用。
本发明提供的淋球菌培养基包括牛肉浸液、胎牛血清、蛋白胨、琼脂、生长添加剂和基础肉汤，能够使淋球菌在该培养基中生长良好，且该培养基不存在色素，如血红蛋白粉剂，影响淋球菌的生长形成的菌落或浑浊现象的观察。本发明提供的淋球菌培养基在制备检测淋球菌药物敏感性产品中的应用，使微量肉汤稀释法可以应用于淋球菌检测。本发明提供的检测淋球菌药物敏感性的产品包含上述淋球菌培养基，检测效率高，成本低。本发明提供的淋球菌药物敏感性检测方法，通过将在上述的淋球菌培养基中培养后的淋球菌与不同浓度的药物共孵育，根据所述淋球菌培养基的浑浊程度判定所述药物的最小抑菌浓度，得到淋球菌的药物敏感性。该方法速度快，和WHO的推荐方法琼脂稀释法一致性高并且效率更高。本发明提供的上述淋球菌药物敏感性检测方法在制备抗淋球菌药物中的应用速度快，通量大，可实时检测区域内的淋球菌药物敏感性的异变，为制备抗淋球菌的药物指明改进方向。
附图说明
为了更清楚地说明本附图具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本附图的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例6提供的淋球菌在药物敏感性检测实验中在微孔板的生长结果图；
图2为本发明实施例6提供的淋球菌在药物敏感性检测实验中肉眼判断的抗生素折点；
图3为本发明实施例8提供的各城市间淋球菌耐药率、PPNG和TRNG 流行率比较。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供的一种淋球菌培养基，按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液5～15份、胎牛血清2～10份、蛋白胨0.5～2.5份、琼脂0.05～0.2份、生长添加剂0.5～2份和基础肉汤50～100份。
该淋球菌培养基中通过添加生长添加剂，使淋球菌在液体培养基中能够良好生长；该培养基不存在色素，如血红蛋白粉剂，影响淋球菌的生长形成的菌落或浑浊现象的观察；该淋球菌培养基使肉眼观察或者使用仪器检测淋球菌菌液的浑浊象限更精确，使检测淋球菌的药物敏感性不受培养基的限制。
作为本发明可选的实施方式，牛肉浸液的重量份数例如可以为但不限制于5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份或者15份。
作为本发明可选的实施方式，胎牛血清的重量份数例如可以为但不限制于2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份或者10份。
作为本发明可选的实施方式，蛋白胨的重量份数例如可以为但不限制于0.5份、0.8份、1份、1.2份、1.5份、1.7份、2.0份、2.2份或者2.5份。
作为本发明可选的实施方式，琼脂的重量份数例如可以为但不限制于 0.05份、0.07份、0.08份、0.1份、0.12份、0.15份、0.18份或者0.2份。
作为本发明可选的实施方式，生长添加剂的重量份数例如可以为但不限制于0.5份、0.7份、0.8份、1份、1.2份、1.5份、1.8份或者2份。
作为本发明可选的实施方式，基础肉汤的重量份数例如可以为但不限制于50份、55份、60份、65份、70份、75份、80份、85份、90份、95 份或者100份。
在一个优选的实施方式中，按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液10 份、胎牛血清5份、蛋白胨1.5份、琼脂0.1份、生长添加剂1份和基础肉汤82份。通过进一步优选各组分的配比，可实现在保证淋球菌培养基使淋球菌良好生长的同时，最低限度的干扰淋球菌浑浊度的观察。
本发明提供的上述淋球菌培养基在制备检测淋球菌药物敏感性产品中的应用。该培养基使微量肉汤稀释法可以应用于淋球菌检测。
一种检测淋球菌药物敏感性的产品，包括上述的淋球菌培养基。检测效率高，成本低。
本发明提供的淋球菌药物敏感性检测方法，将在上述的淋球菌培养基中培养后的淋球菌与不同浓度的药物共孵育，根据所述淋球菌培养基的浑浊程度判定所述药物的最小抑菌浓度，得到淋球菌的药物敏感性。
该检测方法速度快，通量高，和WHO的推荐方法琼脂稀释法一致性高并且效率更高。该方法可以预先将药物添加进反应板，冷冻干燥后密封保存，待检测时随时取用，方便高效，并且可预先制备大量反应板，适合高通量检测。
在一个可选的实施方式中，所述淋球菌与不同浓度的药物于反应板中共孵育；其中，反应板优选为微孔反应板，微孔反应板可减少淋球菌和药物的用量，同时具有高通量的有益效果，可同时检测多株淋球菌和多种待测药物。
在一个可选的实施方式中，受试淋球菌浑浊程度通过检测菌液吸光度或肉眼观察确定。优选地，淋球菌菌液吸光度使用酶标仪读取值。使用酶标仪读取值速度快，精确度高，通量大。
可以理解的是，上述药物只要是淋球菌耐药性的待检测药物即可，本发明不限制药物的种类，可选地，上述药物包括：青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松、头孢克肟或阿奇霉素中的一种或多种。
优选地，青霉素和环丙沙星浓度梯度范围为32μg/ml～0.015μg/ml，头孢曲松和头孢克肟浓度范围为1μg/ml～0.002μg/ml，大观霉素浓度范围为 128μg/ml～4μg/ml，阿奇霉素浓度范围为8μg/ml～～0.03μg/ml，四环素浓度范围为32μg/ml～0.25μg/ml。
本发明提供一种上述淋球菌药物敏感性检测方法在制备抗淋球菌药物中的应用，由于该方法检测速度快，通量高，因此不仅适用于实验室检测，更适用于大范围的流行性淋球菌菌株的监测，可实时观测到地区的淋球菌耐药性变化，为制备抗淋球菌的药物提供了方向。
为了更清楚的说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。
试验试剂、菌株及仪器如下：
质控菌株：6株世界卫生组织(WHO)淋球菌标准菌株D、G、J、L、 K、P株由中国疾病预防控制中心性病控制中心赠送，ATCC49226购自中国药品生物制品检定所。
抗生素：青霉素(批号130427～201306)、四环素(批号130488～～200403)、环丙沙星(批号130451～201203)、阿奇霉素(批号130352～201007)、头孢曲松(批号130480～～200903)由中国药品生物制品检定所提供，大观霉素(批号A0728AS)和头孢克肟(批号O0320AS)由美伦生物技术有限公司提供。
主要试剂和培养基：GC基础培养基(英国OXOID公司产品，批号 1745003)、生长添加剂(英国OXOID公司产品，批号1865022)，基础肉汤(英国OXOID公司产品，批号1661556)，蛋白胨、牛肉浸液(美华生物公司，批号20161101)，胎牛血清(蕊特生物公司，批号20161021)，脱纤维绵羊血等(蕊特生物公司，批号20161225)。
器材：浊度仪(美华生物公司产品，MT-06型)，微孔反应板(美华生物公司产品，批号20161201)，多头点种仪、二氧化碳培养箱(日本三洋公司产品，型号MCO-18AIC)，酶标读数仪(Thermo Scientific公司产品，型号Multiskan MK3)。
下面将结合实施例和对比例对本发明做进一步详细的说明。
实施例1
本实施例提供的淋球菌培养基按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液5 份、胎牛血清10份、蛋白胨0.5份、琼脂0.2份、生长添加剂0.2份和基础肉汤100份。
实施例2
本实施例提供的淋球菌培养基按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液 15份、胎牛血清2份、蛋白胨2.5份、琼脂0.05份、生长添加剂2份和基础肉汤50份。
实施例3
本实施例提供的淋球菌培养基按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液8 份、胎牛血清8份、蛋白胨0.8份、琼脂0.15份、生长添加剂0.5份和基础肉汤100份。
实施例4
本实施例提供的淋球菌培养基按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液 12份、胎牛血清4份、蛋白胨2份、琼脂0.05份、生长添加剂1.5份和基础肉汤70份。
实施例5
本实施例提供的淋球菌培养基按重量份数计包括如下原料：牛肉浸液 10份、胎牛血清5份、蛋白胨1.5份、琼脂0.1份、生长添加剂1份和基础肉汤82份。
对比例1
本实施例提供的淋球菌培养基按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液1 份、胎牛血清15份、蛋白胨0.5份、琼脂0.5份、生长添加剂0.2份、和基础肉汤150份。
对比例2
本实施例提供的淋球菌培养基按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液 12份、胎牛血清4份、蛋白胨2份、琼脂0.05份和基础肉汤70份。
对比例3
本实施例提供的淋球菌培养基每升包括如下原料：蛋白胨15g、磷酸二钾4g、磷酸二氢钾1g、氯化钠5g、可溶性淀粉1g、碳酸氢钠420mg和1％ IsoVitaleX，溶于蒸馏水，调节pH至7.2。
淋球菌培养基培养淋球菌效果验证
取高压灭菌后的实施例1～6和对比例1～3的培养基50ml，各实施例和对比例接种等量的和相同生长状态的淋球菌，35℃，5％CO2培养12h后检测每组菌液的菌液浓度，各组设5个平行试验。淋球菌培养基培养淋球菌效果验证结果如表1所示：
表1 淋球菌培养基培养淋球菌效果验证结果
由上表数据可知，本发明提供的淋球菌培养基可以使淋球菌良好生长。同时，由实施例淋球菌培养基和对比例淋球菌培养基对比可知本发明实施例淋球菌培养基适于淋球菌的生长。尤其从实施例与对比例2的对比可以看出生长添加剂对淋球菌的生长十分必要。同时，由各实施例效果对比可知，不同的原料配比对于淋球菌培养基的效果也有着一定的影响，而按照实施例5的配比最适于淋球菌生长，实施例1、实施例2、实施例3和实施例4的配比也适于淋球菌生长。
实施例6淋球菌药物敏感性检测方法建立
(a)配制抗生素存储液分别为：青霉素、四环素和环丙沙星均为3200 μg/ml，大观霉素12800μg/ml，头孢曲松和头孢克肟为100μg/ml，阿奇霉素800μg/ml。
(b)微孔反应板制备：将7种抗生素按倍比稀释的工作液加入无菌96 孔微孔反应板，使抗生素最终的浓度系列在微孔反应板分别为：
A1～A12孔、B1～B12孔分别为青霉素、环丙沙星，浓度范围为32μ g/ml～0.015μg/ml；
C1～C12孔、D1～D12孔头孢曲松和头孢克肟，浓度范围为1μ g/ml～0.002μg/ml；
E1～E6孔为大观霉素，浓度范围为128μg/m1～4μg/ml；
F1～F8孔为阿奇霉素，浓度范围为8μg/ml～0.03μg/ml；
G1～G8孔为四环素，浓度范围为32μg/ml～0.25μg/ml；
H1、H2孔为生长对照，不含抗生素；
H3、H4为试剂空白对照，不含抗生素；
冷冻干燥后，密封保存。
(c)检测淋球菌最小抑菌浓度(MIC)：将调整至0.5麦氏浊度的淋球菌悬液加入抗生素微孔反应孔，每孔加入100μl，H1和H2孔为作为生长对照组，H3和H4加入100μl淋球菌培养基作为空白对照组。35℃，5％CO2，孵育24h，采用酶标读数仪读取吸光度，波长为525nm。
(d)结果判定：根据EP12-A2《定性试验评价方法用户协议：提议指南》原则，读取试剂空白对照孔H3、H4孔的OD均值。最佳筛查阳性界值 cut-off＝(H3+H4)/2×2，试验孔的OD值小于cut-off值时认为该孔内淋球菌未生长，则该孔的药物浓度为该药的MIC，或者肉眼人工观察MIC。每批试验均由标准菌株作质控，而且质控菌株的MIC值与用酶标读数仪判断的cut-off相符合。双盲法记录各种抗生素的MIC。通过肉眼人工观察淋球菌菌液浊度判断抗生素折点的结果如图1和图2所示。
实施例7淋球菌药物敏感性检测方法与琼脂稀释法一致性比较
本实施例淋球菌药物敏感性检测方法采用实施例6提供的方法。
(一)琼脂稀释法的实验步骤如下：
(a)抗生素琼脂平皿的制备：采用WHO西太区淋球菌耐药监测规划协作组推荐的琼脂稀释法制备抗生素平皿。配制含36g/L GC基础培养基， 121℃高压灭菌15min，冷却至45℃加入10％脱纤维绵羊血，每个平皿加入 14ml培养基和配备好的各种抗生素的系列稀释度14μl，各平皿最终药物浓度分别为青霉素和环丙沙星0.015μg/ml～32μg/ml，头孢曲松和头孢克肟 0.002μg/ml～1μg/ml和0.008μg/ml～1μg/ml，大观霉素4μg/ml～128μ g/ml，四环素0.25μg/ml～32μg/ml，阿奇霉素0.03μg/ml～8μg/ml。
(b)淋球菌菌悬液制备：用生理盐水制备淋球菌临床株和质控株菌悬液调整淋球菌菌液至0.5麦氏浊度，浊度仪比浊。
(c)琼脂稀释法药物敏感性试验：采用WHO西太区淋球菌耐药监测规划协作组推荐的琼脂稀释法。用多头点接种器蘸取淋球菌菌悬液接种于各抗生素琼脂平皿，35℃，5％CO2，孵育24h，观察结果，以能抑制淋球菌生长的最小药物浓度为该药的MIC。每批试验均由标准菌株作质控，双盲法记录各种抗生素的MIC。
(d)淋球菌药敏试验判断标准按照WHO西太区淋球菌耐药性监测项目判定。
(二)淋球菌药物敏感性检测方法与琼脂稀释法一致性比较：
比较两种方法的基本符合率(essential agreement，EA)、药敏符合率(categorical agreement，CA)、极重大误差率(very major errors，VME)和重大误差率(majo errors，ME)，以及比较两种方法检测MIC的几何平均数。
EA：实施例6提供的淋球菌药物敏感性检测方法和琼脂稀释法两方法试验结果相差不超过2个浓度梯度的淋球菌株数占受试淋球菌株数的百分比；CA：实施例6提供的淋球菌药物敏感性检测方法和琼脂稀释法两方法试验药敏程度(耐药/中敏/敏感)相同的淋球菌株数占受试淋球菌株数的百分比；VME：实施例6提供的淋球菌药物敏感性检测方法和琼脂稀释法两方法试验结果有一方为耐药或敏感，而另一方为敏感或耐药；ME：实施例 6提供的淋球菌药物敏感性检测方法和琼脂稀释法两方法试验结果有一方为中介，而另一方为敏感或耐药；
如果比较两种方法结果EA≥90％，CA≥95％，VME≤1.5％以及ME ≤3％，认为两方法检测结果具有一致性。
统计学方法：统计学采用SPSS 20.0软件统计。百分率比较(阳性率、流行率、检出率)采用χ2。
本发明提供的淋球菌药物敏感性检测方法和琼脂稀释法同时检测质控标准株，检测的MIC值均在参考范围，不超过±1稀释度。同时用两种方法检测100株淋球菌MIC，本发明提供的方法与琼脂稀释法具有良好的一致性。7种抗生素MIC的几何均数较接近；青霉素、头孢曲松和阿奇霉素±1稀释度的基本符合率分别为99％、96％和99％，其它药物基本符合率完全一致；头孢曲松MIC50和大观霉素MIC90为±1稀释度的差异外，其余各抗生素的MIC50和MIC90均一致。结果如表2和表3所示：
表2 标准株参考值范围、本发明提供的淋球菌药物敏感性检测方法和琼脂稀释法比对结果(μg/ml)
注：MIC1为本发明提供的淋球菌药物敏感性检测方法检测得到的MIC 值，MIC2为琼脂稀释法得到的MIC值。
表3 本发明提供的淋球菌药物敏感性检测方法与琼脂稀释法检测100 株淋球菌对7种抗生素的符合率比较
注：MD为本发明提供的淋球菌药物敏感性检测方法，AD为琼脂稀释法。
检测100株淋球菌对7种抗生素的敏感性，两种方法的符合率95％至 100％。2种方法极重大误差均为0，青霉素、四环素、头孢曲松、头孢克肟和阿奇霉素的重大误差分别为3％、2％、1％、2％和2％。结果如表4所示：
表4 淋球菌药物敏感性检测方法与琼脂稀释法检测100株淋球菌对7种抗生素的敏感性符合率
实施例8淋球菌药物敏感性检测方法的应用
本实施例采用实施例6提供的淋球菌药物敏感性检测方法检测分析广东省8个城市淋球菌流行株对抗生素敏感性。
应用本发明提供的检测方法检测广东省634株淋球菌流行株对7种抗生素敏感性。监测网络：淋球菌耐药性监测点选取广东省中部、东部、北部和西部的广州市、深圳市、东莞市、珠海市、江门市、汕头市、韶关市和茂名市等8个代表性的地区级城市，其中广州、深圳、东莞、珠海和江门位于广东省中部珠江三角洲地区，经济发达，人口稠密，汕头、韶关和茂名地理位置分别位于广东省的东部、北部和西部。
临床菌株：2016年1月1日起至2016年12月31止全年全省8个监测点共收集淋球菌流行株742株，所有菌株均来自于上述8个城市8家性病门诊患者的泌尿生殖道分泌物中分离得到。男性标本自尿道口内3-4cm处，女性由宫颈口内1-2cm处取材，接种于选择性培养基(TM)，所有菌株经革兰染色、氧化酶和过氧化氢酶试验及糖发酵试验确证后冻存备用，并于年底将样本集中在广东省皮肤性病防治中心实验室测定。8个监测点收集的淋球菌临床菌株数和试验菌株数如表5所示：
表5 广东省8城市淋球菌流行株收集情况
共计检测634株淋球菌流行株对7种抗生素的敏感性，环丙沙星、四环素、青霉素和阿奇霉素的耐药率分别为99.84％、88.17％、53.94％和 11.04％，头孢曲松和头孢克肟的敏感性下降的菌株百分率分别为1.58％和 11.83％，出现了1株头孢克肟MIC＝1μg/ml的菌株，未见大观霉素耐药株。详见表5和表6。634株淋球菌流行株中PPNG占12.78％(81/634)，TRNG 占32.65％(207/634)。
表5 测定634株淋球菌对7种抗生素的敏感性(μg/ml)
表6 检测634株淋球菌对7种抗生素敏感性检测结果
注：※，※※为敏感性下降的菌株。
深圳市分离的淋球菌对青霉素、四环素和头孢曲松的耐药率和低敏率分别为76.6％、95.74％和5.32％，均高于总体水平(χ2＝17.31，P＜0.01；χ2＝4.85，P＜0.05和χ2＝3.98，P＜0.05)；珠海市分离的淋球菌对头孢克肟的低敏率30.11％，高于总体水平(χ2＝21.72，P＜0.01)；阿奇霉素耐药株在江门市流行率最高(17％)；结果如图3所示。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种淋球菌培养基，其特征在于，按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液5～15份、胎牛血清2～10份、蛋白胨0.5～2.5份、琼脂0.05～0.2份、生长添加剂0.5～2份和基础肉汤50～100份。
2.根据权利要求1所述的淋球菌培养基，其特征在于，按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液8～12份、胎牛血清4～8份、蛋白胨0.8～2份、琼脂0.05～0.15份、生长添加剂0.5～1.5份和基础肉汤70～100份。
3.根据权利要求2所述的淋球菌培养基，其特征在于，按重量份数计包括如下组分：牛肉浸液10份、胎牛血清5份、蛋白胨1.5份、琼脂0.1份、生长添加剂1份和基础肉汤82份。
4.如权利要求1-3任一项所述的淋球菌培养基在制备检测淋球菌药物敏感性的产品中的应用。
5.一种检测淋球菌药物敏感性的产品，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的淋球菌培养基。
6.一种淋球菌药物敏感性检测方法，其特征在于，
将在权利要求1-3任一项所述的淋球菌培养基中培养后的淋球菌与不同浓度的药物共孵育，根据所述淋球菌培养基的浑浊程度判定所述药物的最小抑菌浓度，得到淋球菌的药物敏感性。
7.根据权利要求6所述的淋球菌药物敏感性检测方法，其特征在于，所述药物包括抗生素；
优选地，所述抗生素包括青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松、头孢克肟或阿奇霉素中的一种或多种。
8.根据权利要求6所述的淋球菌药物敏感性检测方法，其特征在于，所述淋球菌与不同浓度的药物于反应板中共孵育；
优选地，所述反应板为微孔反应板。
9.根据权利要求6所述的淋球菌药物敏感性检测方法，其特征在于，所述受试淋球菌浑浊程度通过检测菌液吸光度或肉眼观察确定。
10.如权利要求6-9任一项所述的淋球菌药物敏感性检测方法在制备抗淋球菌药物中的应用。
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