CN110664946A - 一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法 - Google Patents

一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110664946A
CN110664946A CN201910974494.6A CN201910974494A CN110664946A CN 110664946 A CN110664946 A CN 110664946A CN 201910974494 A CN201910974494 A CN 201910974494A CN 110664946 A CN110664946 A CN 110664946A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ulva
powder
drying
extract
hours
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201910974494.6A
Other languages
English (en)
Inventor
赵超
吴德胜
林国鹏
刘丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian Agriculture and Forestry University
Original Assignee
Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian Agriculture and Forestry University filed Critical Fujian Agriculture and Forestry University
Priority to CN201910974494.6A priority Critical patent/CN110664946A/zh
Publication of CN110664946A publication Critical patent/CN110664946A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/04—Sulfur, selenium or tellurium; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/062—Ascomycota
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/074—Ganoderma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/42—Cucurbitaceae (Cucumber family)
    • A61K36/424—Gynostemma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/82—Theaceae (Tea family), e.g. camellia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/899—Poaceae or Gramineae (Grass family), e.g. bamboo, corn or sugar cane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法，其是将绿藻石莼利用超声波辅助提取及水提醇沉法分离获得粗制提取物后，经进一步纯化得到石莼活性多糖，再将其与制备的灵芝提取物、绞股蓝提取物、红曲米提取物，以及富硒酵母、茶多酚按比例调配制成。经动物药效学证实，所得石莼多糖组合物在KM小鼠体内对H22肝癌瘤具有显著的杀伤能力，且在免疫力不足的情况下依然能达到极佳的抑瘤效果，并无明显副作用，是一种无毒性、副作用小、十分安全的生物活性物质配方，这不仅为石莼作为海洋药物资源的进一步利用提供了新的途径，也为治疗或预防肿瘤药物的开发提供了新的选择。

Description

一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有辅助抗肿瘤作用的复方石莼多糖及其制备方法。
背景技术
肿瘤作为一种恶性疾病，其致死率较高，患者也深受其附带病痛的困扰，并且其患病率正逐年上升，社会对于抗肿瘤药物的需求也逐年上涨。传统上用于抗肿瘤的药物常伴有各种各样的副作用，或者价格十分昂贵，因而目前市场对于高效、低副作用、低成本、适用性广的新型抗肿瘤药物具有相当大的需求。
海藻中的天然高分子化合物如多糖等，具有一定的抗肿瘤作用，已成为开发新型抗肿瘤药物的重点方向。其中，石莼又称海白菜、岩头青等，分布广泛，价格低廉，作为食品的应用已有较长历史，且在传统医药记载上具有利水消肿、软坚化痰、清热解毒之功效，虽有关于其药用的研究，但其深入挖掘及广度开发则相对滞后，与其同科属的浒苔则已有较为完善的研究，因此开发石莼的药用潜力是非常有必要的。
同时，单纯使用多糖，并不容易完全发挥其功能活性，将多糖与其他活性物质搭配，达到比单用某一种物质更佳的功能效果，是十分有潜力的研究方向。因此系统地完成石莼多糖类物质制备、药理活性分析及复方搭配，开发出一种具有抗肿瘤活性且副作用小的复方石莼多糖是相当有必要的。而在目前所公开的海藻多糖相关专利中，尚未有复方石莼多糖及其抗肿瘤活性的研究报道。
发明内容
本发明为解决现有技术的不足，提供了一种抗肿瘤活性强、不良反应低的石莼多糖组合物及其制备方法。
为实现以上目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物，该组合物中各成分及其所占重量百分数为：石莼多糖50%、灵芝提取物15%、绞股蓝提取物12%、富硒酵母10%、茶多酚8%、红曲米提取物5%。
所述具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物的制备方法包括以下步骤：
1）将石莼利用清水浸泡脱盐后干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得石莼干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的石莼粉末，回收的乙醇可循环使用；
2）按30-40mL/g的量向步骤1）制得的石莼粉末中加入蒸馏水，并在60-70℃的萃取温度下以350-400W超声波辅助提取120分钟，而后于80-90℃热水中浸提2-3小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在65-70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得石莼粗多糖；
3）将步骤2）制备得到的石莼粗多糖按体积比1:100-1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.1%-0.2%的中性蛋白酶，于40℃下静置2-3小时后，于100℃煮沸20-30分钟，再于4000-5000rpm离心10-15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的粗制多糖溶液；
4）将步骤3）所得粗制多糖溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按35-50mL洗脱液加入1g非极性吸附剂活性炭吸附去除色素，再以60-80rpm摇床震荡1-2小时，而后以6000-8000rpm离心20-30分钟，收集上清液；
5）利用截留分子量为8000D以上的透析袋透析去除步骤4）所得上清液中的小分子及色素，再将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到精制的石莼多糖粉末；
6）将灵芝子实体干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得灵芝干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的灵芝粉末，回收的乙醇可循环使用；
7）按15-20mL/g的量向步骤6）所得灵芝粉末中加入蒸馏水，并在70-80℃的萃取温度下以400-450W超声波辅助提取120分钟，而后于70-80℃热水中浸提1-2小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在65-70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得灵芝粗提取物；
8）取步骤7）制备得到的灵芝粗提取物按体积比1:100-1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.1%-0.2%的中性蛋白酶，于40℃下静置2-3小时后，于100℃煮沸20-30分钟，再于4000-5000rpm离心10-15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的灵芝粗提取物溶液；
9）将步骤8）所得灵芝粗提取物溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按35-50mL洗脱液加入1g活性炭吸附去除色素，再以60-80rpm摇床震荡1-2小时，而后以6000-8000rpm离心20-30分钟，收集上清液；
10）利用截留分子量为8000D以上的透析袋对步骤9）所得上清液进行透析，收集透析液，并将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到灵芝多糖粉末；
11）将步骤10）收集到的透析液采用截留分子量为1000D的透析袋进行处理，收集透析液，再采用截留分子量为400D的透析袋进行处理，将截留液冷冻干燥，制备得到灵芝三萜粉末；
12）将步骤10）所得灵芝多糖粉末及步骤11）所得灵芝三萜粉末混合，即为灵芝提取物；
13）将绞股蓝干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得绞股蓝干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的绞股蓝粉末，回收的乙醇可循环使用；
14）按15-25mL/g的量向步骤13）制得的绞股蓝粉末中加入蒸馏水，并在60-70℃的萃取温度下以350-400W超声波辅助提取120分钟，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在55-60℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得绞股蓝提取物；
15）将红曲米干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得红曲米干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的红曲米粉末，回收的乙醇可循环使用；
16）按15-25mL/g的量向步骤15）制得的红曲米粉末中加入蒸馏水，并在70-80℃的萃取温度下以550-600W超声波辅助提取60分钟，而后于70℃热水中浸提1小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在55-60℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得红曲米提取物；
17）将步骤5）所得石莼多糖粉末、步骤12）所得灵芝提取物、步骤14）所得绞股蓝提取物、步骤16）所得红曲米提取物与富硒酵母、茶多酚按比例混合，得到所述石莼多糖组合物。
本发明石莼多糖组合物具有抗肿瘤活性，可用于制备防治H22肝癌等肿瘤的药物。
所述药物是将石莼多糖组合物与药学上可接受的载体制成片剂、颗粒剂、胶囊剂等剂型。
本发明的显著优点在于：
（1）本发明利用超声波辅助提取、水提醇沉法分离出石莼多糖粗提取物，经纯化后得到高纯度的石莼活性多糖，再制备灵芝提取物、绞股蓝提取物、红曲米提取物，然后将石莼多糖与灵芝提取物、绞股蓝提取物、富硒酵母、茶多酚、红曲米提取物按照一定比例加工成具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物。
（2）经动物药效学证实，所得石莼多糖组合物在KM小鼠体内对H22肝癌瘤具有确切的杀伤能力，且在免疫力不足的情况下依然能达到极佳的抑瘤效果，并无明显副作用。
（3）本发明所提供的石莼多糖组合物是一种无毒性、副作用小、十分安全的生物活性物质配方，可以方便和药学上可接受的载体制备成各种剂型的药物，其不仅为石莼作为海洋药物资源的进一步利用提供了新的途径，也为治疗或预防肿瘤的药物开发提供了新的选择。
（4）目前研究尚未有关于相似石莼多糖组合物及其抗肿瘤活性的报道。
附图说明
图1为给药前后H22肝癌瘤模型小鼠血清中TNF-α含量的对比结果。
图2为模型组（A）和给药组（B）的肿瘤切片的HE染色镜检图。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
1）将石莼利用清水浸泡脱盐后干燥并粉碎，然后按20mL/g的量向所得石莼干粉中加入体积浓度为60%的乙醇溶液，回流提取1小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的石莼粉末，回收的乙醇可循环使用；
2）按30mL/g的量向步骤1）制得的石莼粉末中加入蒸馏水，并在60℃的萃取温度下以350W超声波辅助提取120分钟，而后于80℃热水中浸提2小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2次，合并滤液，4000rpm离心10分钟，所得上清液在65℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置8小时，滤取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得石莼粗多糖；
3）将步骤2）制备得到的石莼粗多糖按体积比1:100完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.1%的中性蛋白酶，于40℃下静置2小时后，于100℃煮沸20分钟，再于4000rpm离心10分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的粗制多糖溶液；
4）将步骤3）所得粗制多糖溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按35mL洗脱液加入1g非极性吸附剂活性炭吸附去除色素，再以60rpm摇床震荡1小时，而后以6000rpm离心20分钟，收集上清液；
5）利用截留分子量为8000D以上的透析袋透析去除步骤4）所得上清液中的小分子及色素，再将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到精制的石莼多糖粉末；
6）将灵芝子实体干燥并粉碎，然后按20mL/g的量向所得灵芝干粉中加入体积浓度为60%的乙醇溶液，回流提取1小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的灵芝粉末，回收的乙醇可循环使用；
7）按15mL/g的量向步骤6）所得灵芝粉末中加入蒸馏水，并在70℃的萃取温度下以400W超声波辅助提取120分钟，而后于70℃热水中浸提1小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2次，合并滤液，4000rpm离心10分钟，所得上清液在65℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置8小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得灵芝粗提取物；
8）取步骤7）制备得到的灵芝粗提取物按体积比1:100完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.1%的中性蛋白酶，于40℃下静置2小时后，于100℃煮沸20分钟，再于4000rpm离心10分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的灵芝粗提取物溶液；
9）将步骤8）所得灵芝粗提取物溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按35mL洗脱液加入1g活性炭吸附去除色素，再以60rpm摇床震荡1小时，而后以6000rpm离心20分钟，收集上清液；
10）利用截留分子量为8000D以上的透析袋对步骤9）所得上清液进行透析，收集透析液，并将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到灵芝多糖粉末；
11）将步骤10）收集到的透析液采用截留分子量为1000D的透析袋进行处理，收集透析液，再采用截留分子量为400D的透析袋进行处理，将截留液冷冻干燥，制备得到灵芝三萜粉末；
12）将步骤10）所得灵芝多糖粉末及步骤11）所得灵芝三萜粉末混合，即为灵芝提取物；
13）将绞股蓝干燥并粉碎，然后按20mL/g的量向所得绞股蓝干粉中加入体积浓度为60%的乙醇溶液，回流提取1小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的绞股蓝粉末，回收的乙醇可循环使用；
14）按15mL/g的量向步骤13）制得的绞股蓝粉末中加入蒸馏水，并在60℃的萃取温度下以350W超声波辅助提取120分钟，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2次，合并滤液，4000rpm离心10分钟，所得上清液在55℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置8小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得绞股蓝提取物；
15）将红曲米干燥并粉碎，然后按20mL/g的量向所得红曲米干粉中加入体积浓度为60%的乙醇溶液，回流提取1小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的红曲米粉末，回收的乙醇可循环使用；
16）按15mL/g的量向步骤15）制得的红曲米粉末中加入蒸馏水，并在70℃的萃取温度下以550W超声波辅助提取60分钟，而后于70℃热水中浸提1小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2次，合并滤液，4000rpm离心10分钟，所得上清液在55℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置8小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得红曲米提取物；
17）将步骤5）所得石莼多糖粉末、步骤12）所得灵芝提取物、步骤14）所得绞股蓝提取物、富硒酵母、茶多酚与步骤16）所得红曲米提取物按重量比50:15:12:10:8:5混合，得到石莼多糖组合物。
实施例2
1）将石莼利用清水浸泡脱盐后干燥并粉碎，然后按25mL/g的量向所得石莼干粉中加入体积浓度为70%的乙醇溶液，回流提取2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的石莼粉末，回收的乙醇可循环使用；
2）按35mL/g的量向步骤1）制得的石莼粉末中加入蒸馏水，并在65℃的萃取温度下以400W超声波辅助提取120分钟，而后于85℃热水中浸提3小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液，4500rpm离心15分钟，所得上清液在65℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置12小时，滤取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得石莼粗多糖；
3）将步骤2）制备得到的石莼粗多糖按体积比1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.15%的中性蛋白酶，于40℃下静置3小时后，于100℃煮沸25分钟，再于4500rpm离心15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的粗制多糖溶液；
4）将步骤3）所得粗制多糖溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按45mL洗脱液加入1g非极性吸附剂活性炭吸附去除色素，再以70rpm摇床震荡2小时，而后以7000rpm离心25分钟，收集上清液；
5）利用截留分子量为8000D以上的透析袋透析去除步骤4）所得上清液中的小分子及色素，再将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到精制的石莼多糖粉末；
6）将灵芝子实体干燥并粉碎，然后按25mL/g的量向所得灵芝干粉中加入体积浓度为70%的乙醇溶液，回流提取2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的灵芝粉末，回收的乙醇可循环使用；
7）按20mL/g的量向步骤6）所得灵芝粉末中加入蒸馏水，并在75℃的萃取温度下以425W超声波辅助提取120分钟，而后于75℃热水中浸提2小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液，4500rpm离心15分钟，所得上清液在70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置10小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得灵芝粗提取物；
8）取步骤7）制备得到的灵芝粗提取物按体积比1:110完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.15%的中性蛋白酶，于40℃下静置3小时后，于100℃煮沸25分钟，再于4500rpm离心15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的灵芝粗提取物溶液；
9）将步骤8）所得灵芝粗提取物溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按45mL洗脱液加入1g活性炭吸附去除色素，再以70rpm摇床震荡2小时，而后以7000rpm离心25分钟，收集上清液；
10）利用截留分子量为8000D以上的透析袋对步骤9）所得上清液进行透析，收集透析液，并将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到灵芝多糖粉末；
11）将步骤10）收集到的透析液采用截留分子量为1000D的透析袋进行处理，收集透析液，再采用截留分子量为400D的透析袋进行处理，将截留液冷冻干燥，制备得到灵芝三萜粉末；
12）将步骤10）所得灵芝多糖粉末及步骤11）所得灵芝三萜粉末混合，即为灵芝提取物；
13）将绞股蓝干燥并粉碎，然后按25mL/g的量向所得绞股蓝干粉中加入体积浓度为70%的乙醇溶液，回流提取2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的绞股蓝粉末，回收的乙醇可循环使用；
14）按20mL/g的量向步骤13）制得的绞股蓝粉末中加入蒸馏水，并在65℃的萃取温度下以400W超声波辅助提取120分钟，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液，4500rpm离心15分钟，所得上清液在60℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置10小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得绞股蓝提取物；
15）将红曲米干燥并粉碎，然后按25mL/g的量向所得红曲米干粉中加入体积浓度为70%的乙醇溶液，回流提取2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的红曲米粉末，回收的乙醇可循环使用；
16）按20mL/g的量向步骤15）制得的红曲米粉末中加入蒸馏水，并在75℃的萃取温度下以550W超声波辅助提取60分钟，而后于70℃热水中浸提1小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液，4500rpm离心15分钟，所得上清液在60℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置10小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得红曲米提取物；
17）将步骤5）所得石莼多糖粉末、步骤12）所得灵芝提取物、步骤14）所得绞股蓝提取物、富硒酵母、茶多酚与步骤16）所得红曲米提取物按重量比50:15:12:10:8:5混合，得到石莼多糖组合物。
实施例3
1）将石莼利用清水浸泡脱盐后干燥并粉碎，然后按30mL/g的量向所得石莼干粉中加入体积浓度为80%的乙醇溶液，回流提取2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的石莼粉末，回收的乙醇可循环使用；
2）按40mL/g的量向步骤1）制得的石莼粉末中加入蒸馏水，并在70℃的萃取温度下以400W超声波辅助提取120分钟，而后于90℃热水中浸提3小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液，5000rpm离心20分钟，所得上清液在70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置12小时，滤取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得石莼粗多糖；
3）将步骤2）制备得到的石莼粗多糖按体积比1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.2%的中性蛋白酶，于40℃下静置3小时后，于100℃煮沸30分钟，再于5000rpm离心15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的粗制多糖溶液；
4）将步骤3）所得粗制多糖溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按50mL洗脱液加入1g非极性吸附剂活性炭吸附去除色素，再以80rpm摇床震荡2小时，而后以8000rpm离心30分钟，收集上清液；
5）利用截留分子量为8000D以上的透析袋透析去除步骤4）所得上清液中的小分子及色素，再将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到精制的石莼多糖粉末；
6）将灵芝子实体干燥并粉碎，然后按30mL/g的量向所得灵芝干粉中加入体积浓度为80%的乙醇溶液，回流提取2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的灵芝粉末，回收的乙醇可循环使用；
7）按20mL/g的量向步骤6）所得灵芝粉末中加入蒸馏水，并在80℃的萃取温度下以450W超声波辅助提取120分钟，而后于80℃热水中浸提2小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液，5000rpm离心20分钟，所得上清液在70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得灵芝粗提取物；
8）取步骤7）制备得到的灵芝粗提取物按体积比1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.2%的中性蛋白酶，于40℃下静置3小时后，于100℃煮沸30分钟，再于5000rpm离心15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的灵芝粗提取物溶液；
9）将步骤8）所得灵芝粗提取物溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按50mL洗脱液加入1g活性炭吸附去除色素，再以80rpm摇床震荡2小时，而后8000rpm离心30分钟，收集上清液；
10）利用截留分子量为8000D以上的透析袋对步骤9）所得上清液进行透析，收集透析液，并将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到灵芝多糖粉末；
11）将步骤10）收集到的透析液采用截留分子量为1000D的透析袋进行处理，收集透析液，再采用截留分子量为400D的透析袋进行处理，将截留液冷冻干燥，制备得到灵芝三萜粉末；
12）将步骤10）所得灵芝多糖粉末及步骤11）所得灵芝三萜粉末混合，即为灵芝提取物；
13）将绞股蓝干燥并粉碎，然后按30mL/g的量向所得绞股蓝干粉中加入体积浓度为80%的乙醇溶液，回流提取2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的绞股蓝粉末，回收的乙醇可循环使用；
14）按25mL/g的量向步骤13）制得的绞股蓝粉末中加入蒸馏水，并在70℃的萃取温度下以400W超声波辅助提取120分钟，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液， 5000rpm离心20分钟，所得上清液在60℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得绞股蓝提取物；
15）将红曲米干燥并粉碎，然后按30mL/g的量向所得红曲米干粉中加入体积浓度为80%的乙醇溶液，回流提取2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的红曲米粉末，回收的乙醇可循环使用；
16）按25mL/g的量向步骤15）制得的红曲米粉末中加入蒸馏水，并在80℃的萃取温度下以600W超声波辅助提取60分钟，而后于70℃热水中浸提1小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液，5000rpm离心20分钟，所得上清液在60℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得红曲米提取物；
17）将步骤5）所得石莼多糖粉末、步骤12）所得灵芝提取物、步骤14）所得绞股蓝提取物、富硒酵母、茶多酚与步骤16）所得红曲米提取物按重量比50:15:12:10:8:5混合，得到石莼多糖组合物。
实施例4 H22肝癌瘤模型小鼠抗肿瘤试验
用健康成年雄性KM小鼠建立H22肝癌瘤模型。造模前将培养的H22肝癌瘤细胞于1000rpm离心10分钟，以PBS重悬，计数后调整细胞浓度至108/mL，作为接种瘤液。以皮下注射将瘤液注射到小鼠左前腋下，接种量为2×107/mouse，接种体积0.2mL。将接种小鼠随机分为正常组（Normal）、模型组（Model）、阳性组（Control）、给药组（ULPF）、多糖对照组（ULPC）五组，每组5只，正常组和模型组给予0.3mL生理盐水灌胃，阳性组给予0.3mL 20mg/kg环磷酰胺溶液腹腔注射，给药组给予0.3mL 300 mg/kg石莼多糖组合物水溶液（采用实施例2所得石莼多糖组合物配制），多糖对照组给予0.3mL 300 mg/kg石莼多糖水溶液（采用实施例2步骤5所得石莼多糖粉末配制），连续给药10天，剥离小鼠身上肿瘤并称重，对比模型组瘤重计算抑瘤率，观察复方石莼多糖对H22肝癌瘤模型小鼠抗肿瘤能力的影响。剥取的肿瘤进行石蜡切片并HE染色，观察组织形态。同时，在动物实验的第0天取血，并在给药结束后取血，分离血清，测试血清中肿瘤坏死因子TNF-α的水平，核定其抗肿瘤性质。另于普通肿瘤实验同时，设立一同样肿瘤实验，在给药第6天以绵羊血细胞进行足垫超敏反应(DTH)攻击，测试DTH免疫攻击对抑瘤率的影响，并测量足垫部位肿胀度，根据标准DTH阳性计算法确认是否出现DTH阳性。
结果显示，正常组未发现肿瘤，以模型组的瘤重为基准，并将其抑瘤率(%)设定为0，则环磷酰胺阳性组的抑瘤率(%)为70.08±10.65，给药组的抑瘤率(%)为74.33±4.31，多糖对照组的抑瘤率(%)为70.41±2.83，相比模型组均有显著差异性（p<0.01），说明石莼多糖组合物对H22肝癌瘤模型小鼠具有显著的抗肿瘤作用。同时，在经过DTH攻击后，环磷酰胺阳性组的抑瘤率(%)为68.10±4.38，给药组的抑瘤率(%)为70.43±2.77，多糖对照组的抑瘤率(%)为54.87±4.89，且给药组的DTH结果为阳性，多糖对照组为非阳性，说明石莼多糖组合物明显改善了石莼多糖在免疫系统调节能力上的不足，在免疫力不足的情况下依然能达到极佳的抑瘤效果。
图1为给药前后H22肝癌瘤模型小鼠血清中TNF-α含量的对比结果。由图中可见，石莼多糖组合物可以显著降低TNF-α含量，有效抑制肿瘤的成长与扩散。
图2为模型组（A）及给药组（B）的肿瘤切片的HE染色镜检图。由图中可见，给药后，相比于模型组的无序堆叠及分界混乱，给药组部分肿瘤区细胞染色体紊乱得到抑制，细胞核成型，形态往正常细胞趋近，并呈渐进变化趋势，说明药物可以激活免疫力，修复肿瘤导致的病变区域，促使病变组织恢复正常。
经综合分析，本发明石莼多糖组合物的抑瘤能力高于传统抗肿瘤药物环磷酰胺，并能抑制肿瘤的生长扩散，同时对病变组织有一定的修复效果，还能提高免疫能力，并且实验过程中无明显毒副作用，未发现小鼠有器官病变、死亡率增高、畸变等现象。
同时，根据已有文献报道，针对H22瘤，灵芝提取物的抑瘤率为59.3%（李鹏, 魏晓霞. 灵芝提取物抗肿瘤作用的实验研究[J]. 中国现代应用药学, 2011, 28(9):789-792），茶多酚的抑瘤率为62.7%（袁太宁. 湖北土家族绿茶抗肿瘤作用实验研究[J]. 中国民族医药杂志, 2009, 15(9):52-53），红曲提取物的抑瘤率为62.95%（张秀媛, 何扩, 石后, et al. 响应面法优化小米红曲制备工艺及其抗肿瘤活性研究[J]. 中国粮油学报,2015, 30(3)），绞股蓝及富硒酵母无抗H22瘤相关报道，本发明石莼多糖组合物的抑瘤率高于任何单一成分，并弥补了单一使用石莼多糖时在免疫系统维护上的不足。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (4)

1.一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物，其特征在于：该组合物中各成分及其所占重量百分数为：石莼多糖50%、灵芝提取物15%、绞股蓝提取物12%、富硒酵母10%、茶多酚8%、红曲米提取物5%。
2.一种如权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）将石莼利用清水浸泡脱盐后干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得石莼干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的石莼粉末；
2）按30-40mL/g的量向步骤1）制得的石莼粉末中加入蒸馏水，并在60-70℃的萃取温度下以350-400W超声波辅助提取120分钟，而后于80-90℃热水中浸提2-3小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在65-70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得石莼粗多糖；
3）将步骤2）制备得到的石莼粗多糖按体积比1:100-1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.1%-0.2%的中性蛋白酶，于40℃下静置2-3小时后，于100℃煮沸20-30分钟，再于4000-5000rpm离心10-15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的粗制多糖溶液；
4）将步骤3）所得粗制多糖溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按35-50mL洗脱液加入1g活性炭吸附去除色素，再以60-80rpm摇床震荡1-2小时，而后以6000-8000rpm离心20-30分钟，收集上清液；
5）利用截留分子量为8000D以上的透析袋透析去除步骤4）所得上清液中的小分子及色素，再将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到精制的石莼多糖粉末；
6）将灵芝子实体干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得灵芝干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的灵芝粉末；
7）按15-20mL/g的量向步骤6）所得灵芝粉末中加入蒸馏水，并在70-80℃的萃取温度下以400-450W超声波辅助提取120分钟，而后于70-80℃热水中浸提1-2小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在65-70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得灵芝粗提取物；
8）取步骤7）制备得到的灵芝粗提取物按体积比1:100-1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.1%-0.2%的中性蛋白酶，于40℃下静置2-3小时后，于100℃煮沸20-30分钟，再于4000-5000rpm离心10-15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的灵芝粗提取物溶液；
9）将步骤8）所得灵芝粗提取物溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按35-50mL洗脱液加入1g活性炭吸附去除色素，再以60-80rpm摇床震荡1-2小时，而后以6000-8000rpm离心20-30分钟，收集上清液；
10）利用截留分子量为8000D以上的透析袋对步骤9）所得上清液进行透析，收集透析液，并将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到灵芝多糖粉末；
11）将步骤10）收集到的透析液采用截留分子量为1000D的透析袋进行处理，收集透析液，再采用截留分子量为400D的透析袋进行处理，将截留液冷冻干燥，制备得到灵芝三萜粉末；
12）将步骤10）所得灵芝多糖粉末及步骤11）所得灵芝三萜粉末混合，即为灵芝提取物；
13）将绞股蓝干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得绞股蓝干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的绞股蓝粉末；
14）按15-25mL/g的量向步骤13）制得的绞股蓝粉末中加入蒸馏水，并在60-70℃的萃取温度下以350-400W超声波辅助提取120分钟，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在55-60℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得绞股蓝提取物；
15）将红曲米干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得红曲米干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的红曲米粉末；
16）按15-25mL/g的量向步骤15）制得的红曲米粉末中加入蒸馏水，并在70-80℃的萃取温度下以550-600W超声波辅助提取60分钟，而后于70℃热水中浸提1小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在55-60℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，冷冻干燥，得红曲米提取物；
17）将步骤5）所得石莼多糖粉末、步骤12）所得灵芝提取物、步骤14）所得绞股蓝提取物、步骤16）所得红曲米提取物与富硒酵母、茶多酚按比例混合，得到所述石莼多糖组合物。
3.一种如权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物在制备防治肿瘤药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物在制备防治肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述肿瘤为H22肝癌。
CN201910974494.6A 2019-10-14 2019-10-14 一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法 Withdrawn CN110664946A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910974494.6A CN110664946A (zh) 2019-10-14 2019-10-14 一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910974494.6A CN110664946A (zh) 2019-10-14 2019-10-14 一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110664946A true CN110664946A (zh) 2020-01-10

Family

ID=69082081

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910974494.6A Withdrawn CN110664946A (zh) 2019-10-14 2019-10-14 一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110664946A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112552423A (zh) * 2020-12-25 2021-03-26 正大制药（青岛）有限公司 一种海藻复合多糖组合物及其制备方法和应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112552423A (zh) * 2020-12-25 2021-03-26 正大制药（青岛）有限公司 一种海藻复合多糖组合物及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102585029B (zh) 一种生理活性三七多糖的制备方法及其应用
CN109276576A (zh) 白肉灵芝多糖在制备抗肿瘤药物中的用途
CN107541533A (zh) 一种药食真菌菌丝多糖多肽免疫增强剂的制备方法
CN113151389A (zh) 一种人参糖肽及制备方法和医药用途
CN112870236A (zh) 一种黄蜀葵花黄酮类有效部位及其制备方法与应用
CN101306077B (zh) 一种治疗癌症的中药注射制剂及其制备方法
CN101904974B (zh) 一种治疗恶性肿瘤疾病的中药组合物及其制备方法
CN110105461A (zh) 一种辅助抗肿瘤复方石莼提取物及其制备技术
CN110664946A (zh) 一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法
CN104042623A (zh) 一种黑根霉胞外多糖在制备治疗或预防消化道肿瘤药物中的应用
CN110713626B (zh) 一种具有辅助抗肿瘤作用的石莼寡糖复合物的制备方法
CN108904521B (zh) 一种含百尾参多糖的抗肿瘤药物及其使用方法
CN109628523A (zh) 枸杞多糖提取分离和纯化方法、枸杞糖肽及降血糖药物
CN105111323A (zh) 一种具有抗肿瘤活性的龙葵精制多糖的提取纯化方法
CN102078368B (zh) 一种治疗癌症的中药提取物制剂及其制备方法
CN112237588B (zh) 一种平菇多糖硒苷-ⅲ抗癌活性成分在制备抗前列腺癌的药物中的应用
CN1283462A (zh) 黄芪甲苷在制备药物组合物中的应用
CN111363058B (zh) 一种红毛藻多糖及其制备方法与应用
CN104558242A (zh) 一种厚壳贻贝多糖部分酸水解化合物及其制备方法与应用
CN110627918A (zh) 一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖及其制备方法
CN101357212B (zh) 一种复方斑蝥注射制剂及其制备方法
WO2022141957A1 (zh) 一种香菇寡肽的制备方法及用途
CN1303099C (zh) 松杉灵芝蛋白多糖混合物及其制备方法与应用
CN102579476B (zh) 一种含天冬脱蛋白多糖的抗肿瘤血管栓塞剂及其制备方法
CN111437287A (zh) 榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20200110

WW01 Invention patent application withdrawn after publication