CN110637034B - Cxcr2抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及CXCR2、与CXCR2结合的抗体及其相关片段、以制备所述抗体和片段并将所述抗体和片段用于检测和治疗各种病症的用途。

Description

CXCR2抗体及其用途
相关申请的交叉引用
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背景技术
趋化因子或趋化物细胞因子包含一族小分子量的可诱导的分泌分子(～8-10KDa)，其通常对白细胞起活化剂和趋化物的作用，并可调节血管生成、伤口愈合和肿瘤发生。趋化因子功能的大多数知识由于其在调节免疫协调和炎症中的作用而因此源自对免疫系统的研究。正渐渐阐明涉及许多其他生物系统的作用。
根据趋化因子的氨基末端中保守的半胱氨酸残基的数量而通常将趋化因子分为四个亚家族。大多数趋化因子分在具有四个半胱氨酸残基的两个主要亚家族。这些亚家族通常根据两个氨基末端半胱氨酸残基之间是否存在氨基酸进行分类，且因此被称为CC和CXC趋化因子。通常限于高等脊椎动物的CXC趋化因子通常根据其氨基末端与第一个半胱氨酸残基相邻的谷氨酸-赖氨酸-精氨酸(ELR)基序的存在或不存在进行进一步分类。以前称为Gro-α的CXCL1是CXC趋化因子ELR家族的成员，其优选受体是CXCR2。
CXCR的N端结构域被认为对于确定配体结合特异性是重要的。CXCR2与CXCL1结合，该CXCL1是CXC趋化因子ELR阳性家族的一种可溶性分泌趋化性细胞因子，且它们的相互作用活化细胞内信号，该信号调节诸如增殖、分化和迁移等过程。迁移的变化被认为是通过调节肌动蛋白依赖性细胞过程和粘附分子表达来实现的。在脉管系统中结合到其配体后，CXCR2调节某些白细胞表面上的粘附分子表达，以允许其滚动粘附、骤停和针对组织渗透的血细胞渗出。这通常在表达趋化因子受体CXCR2的单核细胞和嗜中性粒细胞中观察到。一旦进入组织，这些细胞通常就被趋化因子通过趋化作用进一步引导至炎症部位。
尽管每个趋化因子受体通常结合单一类的趋化因子，但是它们可以高亲和力结合相同类别的几个成员。另外，一种趋化因子可以结合几种不同的趋化因子受体。例如，CXCR2可以结合CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7和CXCL8。
CXCR2是属于趋化因子受体家族的大小约为41kDa的A类GPCR。CXCR2是所有促血管生成趋化因子(CXCL1-3、CXCL5-8)的唯一高亲和力受体。CXCL6和CXCL8(IL-8)也通过与CXCR1相互作用引发其趋化作用。在生理上，CXCR2参与了白细胞(尤其是嗜中性白细胞)从骨髓到炎症部位的动员和募集以及血管生成中内皮细胞的迁移。
CXCR2在多种细胞和组织中表达，包括CD8+T细胞、NK、单核细胞、肥大细胞、上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞和中枢神经系统中的许多细胞类型，这表明该受体可能具有在许多急性和慢性疾病的构成性条件和病理生理中均具有广泛的功能作用。一旦活化，CXCR2就会被磷酸化，并通过抑制蛋白/动力蛋白依赖性机制迅速内在化，从而导致受体脱敏。据报道，CXCR2及其配体被多种肿瘤过度表达，并且过度表达通常与不良预后有关。
需要新的和/或改进的可用于治疗与CXCR2活化有关的疾病的CXCR2抑制剂。
在说明书中对任何现有技术的引用都不是对该现有技术形成任何司法管辖区域的公知常识的承认或暗示，或者可以合理地预期该现有技术被理解为、认为是相关的和/或由本领域技术人员与其他现有技术组合。
发明内容
本发明提供了结合或特异性结合CXCR2并抑制CXCR2活性的抗原结合位点(例如，抗体、抗体变体或其片段的互补位)。
优选地，抗原结合位点包含抗体的抗原结合域，该抗原结合域结合或特异性结合CXCR2并抑制CXCR2活性。
可被本发明的任何抗原结合位点抑制的CXCR2活性包括：配体与CXCR2的结合；配体诱导CXCR2的构象变化；CXCR2活化；G蛋白活化；CXCR2介导的细胞信号转导；CXCR2在体外或体内介导的细胞迁移、炎症、肿瘤生长、血管生成或转移反应；CXCR2介导的肿瘤细胞生长；和/或CXCR2介导的白细胞(例如，嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞或T细胞)迁移。
优选地，本发明的抗原结合位点与人CXCR2结合或特异性结合。优选地，抗原结合位点结合或特异性结合人CXCR2分子，所述人CXCR2分子包含SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列、基本上由SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列组成或由其组成。
优选地，抗原结合位点抑制或降低由包括CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5和/或CXCL6的任何配体诱导的CXCR2活性。例如，抗原结合位点可以抑制由CXCR2配体刺激的细胞迁移，优选免疫细胞的迁移。可以通过本文所述的任何方法(特别是实施例3)确定CXCR2活性的降低或抑制。
本发明的抗原结合位点可以结合CXCR2，并且不可检测地结合或显著结合CCR6、CXCR1、CXCR2和/或CXCR7。抗原结合位点与CXCR1、CXCR2和/或CXCR7的结合可以通过本文所述的任何方法，特别是如实施例2所述的流式细胞术来确定。
本发明的抗原结合位点可以结合CXCR2并且表现出小于2nM的EC50。优选地，如本文所述，特别是实施例2，使用流式细胞仪或ELISA测定法确定EC50。
本发明的抗原结合位点在与CXCL3的竞争结合测定中可以表现出具有小于约20、15、12、10、8、6、5、4、3、2或1nM的IC50。优选地，IC50是如本文所述的值。优选地，通过本文所述的任何方法，特别是实施例3进行竞争结合测定。
本发明的抗原结合位点可以在与CXCL1、CXCL2和/或CXCL5的迁移测定中表现出小于约20、15、12、10、8、6、5、4、3、2或1nM的EC50。优选地，EC50是如本文所述的值。优选地，通过本文所述的任何方法，特别是实施例3进行迁移测定。
本发明的抗原结合位点可以以10μg/ml、1μg/ml或更低的浓度抑制表达CXCR2的免疫细胞向CXCL6的迁移。优选地，通过本文所述的任何方法，特别是实施例3进行迁移测定。
本发明的抗原结合位点可在残基10至21(按人CXCR2编号或SEQ ID NO：52)内结合至CXCR2。优选地，残基10至21为SFEDFWKGEDLS(SEQ ID NO：60)。优选地，抗原结合位点在残基10至21内结合，并且在CXCR2的前46个残基内不结合其他残基(例如，SEQ ID NO：52)。
本发明的抗原结合位点可以结合SEQ ID NO：52的氨基酸序列组成的肽和SEQ IDNO：53的氨基酸序列组成的另外的肽，但是它不可检测地结合SEQ ID NO：54的氨基酸序列组成的肽。
本发明还提供了与CXCR2的N末端区域结合并抑制CXCL2、CXCL3和/或CXCL6与CXCR2的结合，或CXCL2、CXCL3和/或CXCL6介导的CXCR2活性的抗原结合位点。优选地，N-末端区域包含残基10至21、基本上由残基10至21(按人CXCR2编号)组成或由其组成。优选地，残基10至21为SFEDFWKGEDLS(SEQ ID NO：60)。优选地，抗原结合位点在残基10-21的范围内且无其他残基与CXCR2的前46个残基结合。优选地，CXCL2、CXCL3和/或CXCL6介导的活性是CXCL2、CXCL3和/或CXCL6介导的免疫细胞(例如，嗜中性粒细胞)的趋化性。优选地，抗原结合位点还抑制CXCL1与CXCR2的结合或CXCL1介导的CXCR2的活性。
本发明提供了用于结合CXCR2的抗原结合位点，该抗原结合位点包含：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-接头-FR1a-CDR1a-FR2a-CDR2a-FR3a-CDR3a-FR4a
其中：
FR1、FR2、FR3和FR4是每个框架区；
CDR1、CDR2和CDR3均为互补决定区；
FR1a、FR2a、FR3a和FR4a分别是框架区；
CDR1a、CDR2a和CDR3a每个都是互补决定区。
其中任何框架区或互补决定区的序列如本文所述。
本发明提供了用于结合CXCR2的抗原结合位点，该抗原结合位点包括：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-接头-FR1a-CDR1a-FR2a-CDR2a-FR3a-CDR3a-FR4a
其中：
FR1、FR2、FR3和FR4是每个框架区；
CDR1、CDR2和CDR3均为互补决定区；
FR1a、FR2a、FR3a和FR4a分别是框架区；
CDR1a、CDR2a和CDR3a每个都是互补决定区；
其中任何互补决定区的序列具有如下表1所述的氨基酸序列。优选地，框架区具有也如下表1所述的氨基酸序列，包括在特定残基处的氨基酸变异，其可以通过比对源自每种抗体的各框架区来确定。本发明还包括其中CDR1、CDR2和CDR3是来自VH的序列，CDR1a、CDR2a和CDR3a是来自VL的序列，或者其中CDR1、CDR2和CDR3是来自VL的序列，CDR1a、CDR2a和CDR3a是来自VH的序列。
本发明提供了一种抗原结合位点，其包含以下氨基酸序列，或基本上由其组成，或由其组成：(按N至C末端或C至N末端的顺序)：
-SEQ ID NO：7和8；
-SEQ ID NO：17和18；
-SEQ ID NO：27和28；和/或
-SEQ ID NO：31和32。
本发明还提供了包含抗体的抗原结合域的抗原结合位点，其中所述抗原结合域结合或特异性结合CXCR2，其中所述抗原结合域包含以下至少之一：
(i)VH，其包含含有与SEQ ID NO：4所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的互补决定区(CDR)1、含有与SEQ ID NO：5所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2和含有与SEQ ID NO：6所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(ii)VH，其包含与SEQ ID NO：8或32所示的序列具有至少约95％或96％或97％或98％或99％相同性的序列；
(iii)VL，其包含含有与SEQ ID NO：1所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR1、含有与SEQ ID NO：2所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2和含有与SEQ ID NO：3所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(iv)VL，其包含与SEQ ID NO：7或31所示的序列具有至少约95％相同性的序列；
(v)VH，其包含含有SEQ ID NO：4所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：5所示的序列的CDR2以及含有SEQ ID NO：6所示的序列的CDR3；
(vi)VH，其包含SEQ ID NO：8或32所示的序列；
(vii)VL，其包含含有SEQ ID NO：1所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：2所示的序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO：3所示的序列的CDR3。
(viii)VL，其包含SEQ ID NO：7或31所示的序列；
(ix)VH，其包含含有SEQ ID NO：4所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：5所示的序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO：6所示的序列的CDR3；和VL，其包含含有SEQ ID NO：1所示的序列的CDR1、含有序列SEQ ID NO：2所示的序列的CDR2和含有序列SEQ ID NO：3所示的序列的CDR3。
(x)VH，其包含SEQ ID NO：8所示的序列，以及VL，其包含SEQ ID NO：7所示的序列；或
(xi)VH，其包含SEQ ID NO：32所示的序列，以及VL，其包含SEQ ID NO：31所示的序列。
本发明还提供了包含抗体的抗原结合域的抗原结合位点，其中所述抗原结合域结合或特异性结合CXCR2，其中所述抗原结合域包括以下至少之一：
(i)VH，其包含含有与SEQ ID NO：14所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的互补决定区(CDR)1、含有与SEQ ID NO：15所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2和含有与SEQ ID NO：16所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(ii)VH，其包含与SEQ ID NO：18所示的序列具有至少约95％或96％或97％或98％或99％相同性的序列；
(iii)VL，其包含含有与SEQ ID NO：11所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR1、含有与SEQ ID NO：12所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2和含有与SEQ ID NO：13所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(iv)VL，其包含与SEQ ID NO：17所示的序列具有至少约95％相同性的序列；
(v)VH，其包含含有SEQ ID NO：14所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：15所示的序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO：16所示的序列的CDR3；
(vi)VH，其包含SEQ ID NO：18所示的序列；
(vii)VL，其包含含有SEQ ID NO：11所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：12所示的序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO：13所示的序列的CDR3；
(viii)VL，其包含SEQ ID NO：17所示的序列；
(ix)VH，其包含含有SEQ ID NO：14所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：15所示的序列的CDR2，以及含有SEQ ID NO：16所示的序列的CDR3；和VL，其包含含有SEQ ID NO：11所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：12所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：13所示的序列的CDR3；或
(x)VH，其包含SEQ ID NO：18所示的序列，以及VL，其包含SEQ ID NO：17所示的序列。
本发明还提供了包含抗体的抗原结合域的抗原结合位点，其中所述抗原结合域结合或特异性结合CXCR2，其中所述抗原结合域包括以下至少之一：
(i)VH，其包含含有与SEQ ID NO：24所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的互补决定区(CDR)、含有与SEQ ID NO：25所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2和含有与SEQ ID NO：26所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(ii)VH，其包含与SEQ ID NO：28所示的序列具有至少约95％或96％或97％或98％或99％相同性的序列；
(iii)VL，其包含含有与SEQ ID NO：21所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR1、含有与SEQ ID NO：22所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2和含有与SEQ ID NO：23所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(iv)VL，其包含与SEQ ID NO：27所示的序列具有至少约95％相同性的序列；
(v)VH，其包含含有SEQ ID NO：24所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：25所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：26所示的序列的CDR3；
(vi)VH，其包含SEQ ID NO：28所示的序列；
(vii)VL，其包含含有SEQ ID NO：21所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：22所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：23所示的序列的CDR3；
(viii)VL，其包含SEQ ID NO：27所示的序列；
(ix)VH，其包含含有SEQ ID NO：24所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：25所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：26所示的序列的CDR3；和VL，其包含含有SEQ ID NO：21所示的序列的CDR1，含有SEQ ID NO：22所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：23所示的序列的CDR3；或
(x)VH，其包含SEQ ID NO：28所示的序列，以及VL，其包含SEQ ID NO：27所示的序列。
在本发明的任何方面，抗原结合域还包含以下至少之一：
(i)VH，其包含含有与SEQ ID NO：40或48所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的框架区(FR)1、含有与SEQ ID NO：41或49所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR2、含有与SEQ ID NO：42或50所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR3和含有与SEQ ID NO：43或51所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR4；
(ii)VL，其包含含有与SEQ ID NO：33、34、35或44所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR1、含有与SEQ ID NO：36或45所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR2、含有与SEQ ID NO：37、38或46所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR3和含有与SEQ ID NO：39或47所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR4；
(iii)VH，其包含含有SEQ ID NO：40或48所示的序列的FR1、含有SEQ ID NO：41或49所示的序列的FR2、含有SEQ ID NO：42或50所示的序列的FR3和含有SEQ ID NO：43或51所示的序列的FR4；
(iv)VL，其包含含有SEQ ID NO：33、34、35或44所示的序列的FR1、含有SEQ ID NO：36或45的序列的FR2、含有SEQ ID NO：37、38或46所示的序列的FR3，以及含有SEQ ID NO：39或47所示的序列的FR4；或
(v)VH，其包含含有SEQ ID NO：40或48所示的序列的FR1、含有SEQ ID NO：41或49所示的序列的FR2、含有SEQ ID NO：42或50所示的序列的FR3和含有SEQ ID NO：43或51所示的序列的FR4；以及VL，其包含含有SEQ ID NO：33、34、35或44所示的序列的FR1、含有SEQ IDNO：36或45所示的序列的FR2、含有SEQ ID NO：37、38或46所示的序列的FR3以及含有SEQ IDNO：39或47所示的序列的FR4。
如本文所述，抗原结合位点可以是以下形式：
(i)单链Fv片段(scFv)；
(ii)二聚体scFv(di-scFv)；
(iii)(i)或(ii)中的一个与抗体、Fc或重链恒定域(CH)2和/或CH3的恒定区连接；或
(iv)(i)或(ii)中的一个与结合至免疫效应细胞的蛋白质连接。
进一步地，如本文所述，抗原结合位点可以是以下形式：
(i)双特异抗体；
(ii)三抗体(triabody)；
(iii)四抗体(tetrabody)；
(iv)Fab
(v)F(ab’)2；
(vi)Fv；
(vii)(i)至(vi)中的一个与抗体、Fc或重链恒定域(CH)2和/或CH3的恒定区连接；或
(viii)(i)至(vi)中的一个与结合至免疫效应细胞的蛋白质连接。
前述抗原结合位点也可以被称为抗体的抗原结合域。
优选地，本文所述的抗原结合位点是抗体或其抗原结合片段。通常，抗原结合位点是抗体，例如，单克隆抗体。
如本文所用，抗原结合位点可以是可变结构域。
本发明还提供了CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区包含：SEQ ID NO：1所示的CDR L1、SEQ ID NO：2所示的CDR L2和SEQ ID NO：3所示的CDR L3；并且其中所述重链可变区包含：SEQ ID NO：4所示的CDR H1、SEQ ID NO：5所示的CDR H2和SEQ ID NO：6所示的CDR H3。
本发明还提供了包含轻链可变区和重链可变区的CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其中所述轻链可变区包含：SEQ ID NO：11所示的CDR L1、SEQ ID NO：12所示的CDR L2和SEQ ID NO：13所示的CDR L3；并且其中所述重链可变区包含：SEQ ID NO：14所示的CDRH1、SEQ ID NO：15所示的CDR H2和SEQ ID NO：16所示的CDR H3。
本发明还提供了包含轻链可变区和重链可变区的CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其中所述轻链可变区包含：SEQ ID NO：21所示的CDR L1、SEQ ID NO：22所示的CDR L2和SEQ ID NO：23所示的CDR L3；并且其中所述重链可变区包含：SEQ ID NO：24所示的CDRH1、SEQ ID NO：25所示的CDR H2和SEQ ID NO：26所示的CDR H3。
在本发明的任何方面，抗原结合位点或CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体包含轻链可变区，该轻链可变区在与Kabat位置1相对应的位置处的Val或Asp；在与Kabat位置2相对应的位置处的Ile、Val或Ala；在与Kabat位置7相对应的位置处的Thr、Ala或Ser；在与Kabat位置14相对应的位置处的Ser或Thr；在与Kabat位置15相对应的位置处的Leu或Pro；在与Kabat位置17相对应的位置处的Asp或Glu；在与Kabat位置18相对应的位置处的Gln或Pro；在与Kabat位置45相对应的位置处的Lys或Gln；在与Kabat位置67相对应的位置处的Ser或Ala；在与Kabat位置83相对应的位置处的Leu或Val；和/或在与Kabat位置100相对应的位置处的Gly或Gln。
在本发明的任何方面，抗原结合位点或CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：在与Kabat位置5相对应的位置处的Gln或Val；在与Kabat位置9相对应的位置处的Pro或Ala；在与Kabat位置11相对应的位置处的Leu或Val；在与Kabat位置12相对应的位置处的Val或Lys；在与Kabat位置20相对应的位置处的Ile或Val；在与Kabat位置38相对应的位置处的Lys或Arg；在与Kabat位置40相对应的位置处的Arg或Ala；在与Kabat位置43相对应的位置处的Lys或Gln；在与Kabat位置44相对应的位置处的Lys或Arg；在与Kabat位置75相对应的位置处的Ser或Ala；在与Kabat位置81相对应的位置处的Gln或Glu；在与Kabat位置83相对应的位置处的Thr或Arg；和/或在与Kabat位置87相对应的位置处的Ser或Thr。
在本发明的任何方面，CXCR2抗体包含轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：27或SEQ ID NO：31的序列。
在本发明的任何方面，CXCR2抗体包含重链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：32的序列。
在本发明的任何方面，CXCR2抗体包含轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO：33所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：37所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
在本发明的任何方面，CXCR2抗体包含轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO：34所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：37所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
在本发明的任何方面，CXCR2抗体包含轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO：35所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：38所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
在本发明的任何方面，CXCR2抗体包含轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO：44所示的FR L1、SEQ ID NO：45所示的FR L2、SEQ ID NO：46所示的FR L3和SEQ ID NO：47所示的FR L4。
在本发明的任何方面，CXCR2抗体包含重链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：40所示的FR H1、SEQ ID NO：41所示的FR H2、SEQ ID NO：42所示的FR H3和SEQ ID NO：43所示的FR H4。
在本发明的任何方面，CXCR2抗体包含重链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：48所示的FR H1、SEQ ID NO：49所示的FR H2、SEQ ID NO：50所示的FR H3和SEQ ID NO：51所示的FR H4。
在任何方面或实施方案中，抗体是裸抗体。具体而言，抗体为非缀合形式，并且不适合形成缀合物。
在实施方案中，CXCR2抗体是人源化抗体。在实施方案中，CXCR2抗体是嵌合抗体。在实施方案中，CXCR2抗体是Fab’片段。在实施方案中，CXCR2抗体是单链抗体(scFv)。
在实施方案中，本文提供的轻链可变区包括SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：17、SEQ IDNO：27或SEQ ID NO：31的序列。在实施方案中，本文提供的轻链可变区是SEQ ID NO：7、SEQID NO：17、SEQ ID NO：27或SEQ ID NO：31的序列。
在实施方案中，本文提供的重链可变区包括SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：18、SEQ IDNO：28或SEQ ID NO：32的序列。在实施方案中，本文提供的重链可变区是SEQ ID NO：8、SEQID NO：18、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：32的序列。
一方面，提供了CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体。该抗体包括轻链可变区和重链可变区，其中该轻链可变区包括：SEQ ID NO：1所示的CDR L1、SEQ ID NO：2所示的CDRL2，和SEQ ID NO：3所示的CDR L3；并且其中所述重链可变区包括：SEQ ID NO：58所示的CDRH1、SEQ ID NO：5所示的CDR H2和SEQ ID NO：6所示的CDR H3。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置1相对应的位置处的Val或Asp；在与Kabat位置2相对应的位置处的Ile、Val或Ala；在与Kabat位置7相对应的位置处的Thr、Ala或Ser；在与Kabat位置14相对应的位置处的Ser或Thr；在与Kabat位置15相对应的位置处的Leu或Pro；在与Kabat位置17相对应的位置处的Asp或Glu；在与Kabat位置18相对应的位置处的Gln或Pro；在与Kabat位置45相对应的位置处的Lys或Gln；在与Kabat位置47相对应的位置处的Glu或Gln；在与Kabat位置67相对应的位置处的Ser或Ala；在与Kabat位置83相对应的位置处的Leu或Val；和/或在与Kabat位置100相对应的位置处的Gly或Gln。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置1相对应的位置处的Val或Asp。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置1相对应的位置处的Val。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置1相对应的位置处的Asp。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置2相对应的位置处的Ile、Val或Ala。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置2相对应的位置处的Ile。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置2相对应的位置处的Val。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置2相对应的位置处的Ala。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置7相对应的位置处的Thr、Ala或Ser。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置7相对应的位置处的Thr。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置7相对应的位置处的Ala。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置7相对应的位置处的Ser。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置14相对应的位置处的Ser或Thr。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置14相对应的位置处的Ser。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置14相对应的位置处的Thr。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置15相对应的位置处的Leu或Pro。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置15相对应的位置处的Leu。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置15相对应的位置处的Pro。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置17相对应的位置处的Asp或Glu。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置17相对应的位置处的Glu。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置17相对应的位置处的Asp。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置18相对应的位置处的Gln或Pro。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置18相对应的位置处的Gln。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置18相对应的位置处的Pro。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置45相对应的位置处的Lys或Gln。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置45相对应的位置处的Lys。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置45相对应的位置处的Gln。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置47相对应的位置处的Glu或Gln。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置47相对应的位置处的Glu。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置47相对应的位置处的Gln。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置67相对应的位置处的Ser或Ala。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置67相对应的位置处的Ser。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置67相对应的位置处的Ala。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置83相对应的位置处的Leu或Val。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置83相对应的位置处的Leu。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置83相对应的位置处的Val。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置100相对应的位置处的Gly或Gln。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置100相对应的位置处的Gly。在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置100相对应的位置处的Gln。
在实施方案中，轻链可变区包括：在与Kabat位置5相对应的位置处的Gln或Val；在与Kabat位置9相对应的位置处的Pro或Ala；在与Kabat位置11相对应的位置处的Leu或Val；在与Kabat位置12相对应的位置处的Val或Lys；在与Kabat位置20相对应的位置处的Ile或Val；在与Kabat位置38相对应的位置处的Lys或Arg；在与Kabat位置40相对应的位置处的Arg或Ala；在与Kabat位置43相对应的位置处的Lys或Gln；在与Kabat位置44相对应的位置处的Lys或Arg；在与Kabat位置75相对应的位置处的Ser或Ala；在与Kabat位置81相对应的位置处的Gln或Glu；在与Kabat位置83相对应的位置处的Thr或Arg；和/或在与Kabat位置87相对应的位置处的Ser或Thr。
在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置5相对应的位置处的Gln或Val。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置9相对应的位置处的Pro或Ala。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置11相对应的位置处的Leu或Val。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置12相对应的位置处的Val或Lys。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置20相对应的位置处的Ile或Val。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置38相对应的位置处的Lys或Arg。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置40相对应的位置处的Arg或Ala。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置43相对应的位置处的Lys或Gln。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置44相对应的位置处的Lys或Arg。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置75相对应的位置处的Ser或Ala。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置81相对应的位置处的Gln或Glu。在实施方案中，重链可变区包括：在与Kabat位置83相对应的位置处的Thr或Arg。在实施方案中，重链可变区包括：和/或在与Kabat位置87相对应的位置处的Ser或Thr。
在实施方案中，轻链可变区包括SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：27、SEQID NO：31和SEQ ID NO：57的序列。在实施方案中，轻链可变区包括SEQ ID NO：7的序列。在实施方案中，轻链可变区包括SEQ ID NO：17的序列。在实施方案中，轻链可变区包括SEQ IDNO：27的序列。在实施方案中，轻链可变区包括SEQ ID NO：31的序列。在实施方案中，轻链可变区包括SEQ ID NO：57的序列。
在实施方案中，重链可变区包括SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：28、SEQID NO：32和SEQ ID NO：56的序列。在实施方案中，重链可变区包括SEQ ID NO：8的序列。在实施方案中，重链可变区包括SEQ ID NO：18的序列。在实施方案中，重链可变区包括SEQ IDNO：28的序列。在实施方案中，重链可变区包括SEQ ID NO：32的序列。在实施方案中，重链可变区包括SEQ ID NO：56的序列。
在实施方案中，轻链可变区包含SEQ ID NO：44所示的FR L1，SEQ ID NO：59所示的FR L2，SEQ ID NO：46所示的FR L3和SEQ ID NO：47所示的FR L4。
在实施方案中，CXCR2抗体是IgG。在实施方案中，CXCR2抗体是IgG4。
在一个方面，提供了分离的抗体，其与CXCR2抗体结合相同的表位，其中所述CXCR2抗体的重链可变区由SEQ ID NO：10编码，并且CXCR2抗体的轻链可变区由SEQ ID NO：9编码。
在一个方面，提供了分离的抗体，其与CXCR2抗体结合相同的表位，其中所述CXCR2抗体的重链可变区由SEQ ID NO：20编码，并且CXCR2抗体的轻链可变区由SEQ ID NO：19编码。
在一个方面，提供了分离的抗体，其与CXCR2抗体结合相同的表位，其中所述CXCR2抗体的重链可变区由SEQ ID NO：30编码，并且CXCR2抗体的轻链可变区由SEQ ID NO：29编码。
在一个方面，提供了编码如本文包括的实施方案提供的CXCR2抗体的分离的核酸。
在一个方面，提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的如本文包括的实施方案提供的CXCR2抗体和药学上可接受的赋形剂。
在一个方面，提供了一种细胞，该细胞包括如本文包括的实施方案提供的CXCR2抗体。
在一个方面，提供了一种在有此需要的对象中治疗炎性疾病或癌症的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的如本文包括的实施方案提供的CXCR2抗体，从而治疗对象的炎性疾病或癌症。在实施方案中，该疾病是癌症。在实施方案中，该疾病是炎性疾病。
在一个实施例中，根据Kabat编号系统定义本发明的抗原结合位点的互补决定区(CDR)序列。
在另一个实施例中，根据IMGT编号系统定义CDR。
本文所提及的“结合”CXCR2的蛋白质或抗体为“特异性结合”或“特异性结合至”CXCR2的蛋白质或抗体提供了文字支持。
本发明还提供了前述抗体的抗原结合域或抗原结合片段。
本发明还提供了一种融合蛋白，其包含如本文所述的抗原结合位点、免疫球蛋白可变域、抗体、dab(单域抗体)、di-scFv、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、双特异抗体、三抗体、四抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体。
本发明还提供了与标记物或细胞毒性剂缀合的本文所述的抗原结合位点、免疫球蛋白可变结构域、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、双特异抗体、三抗体、四抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体或融合蛋白。
本发明还提供了如本文所述的一种结合抗原结合位点、免疫球蛋白可变域、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、双特异抗体、三抗体、四抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体、融合蛋白或缀合物的抗体。
本发明还提供了如本文所述的编码抗原结合位点、免疫球蛋白可变结构域、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、双特异抗体、三抗体、四抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体、融合蛋白或缀合物的核酸。
在一个实施例中，这样的核酸包括在表达构建体中，其中该核酸可操作地连接至启动子。这样的表达构建体可以在载体，例如，质粒中。
在针对单个多肽链抗原结合位点的本发明的实施例中，表达构建体可以包含与编码该多肽链的核酸连接的启动子。
在针对形成抗原结合位点的多个多肽链的实施例中，表达构建体包含编码包含例如，与启动子可操作地连接的VH的多肽的核酸，和编码包含例如，与启动子可操作地连接的VL的多肽的核酸。
在另一个实施例中，表达构建体是双顺反子表达构建体，例如，包含以下5’至3’顺序的可操作连接的组分：
(i)启动子
(ii)编码第一多肽的核酸；
(iii)内部核糖体进入位点；以及
(iv)编码第二多肽的核酸，
其中第一多肽包含VH，且第二多肽包含VL，或反之亦然。
本发明还考虑了分开的表达构建体，其中一个编码包含VH的第一多肽，且另一个编码包含VL的第二多肽。例如，本发明还提供了一种组合物，其包含：
(i)第一表达构建体，其包含编码包含与启动子可操作地连接的VH的多肽的核酸；以及
(ii)第二表达构建体，其包含编码包含与启动子可操作地连接的VL的多肽的核酸。
本发明提供了包含本文所述的载体或核酸的细胞。优选地，细胞是分离的、基本上纯化的或重组的。在一个实施例中，细胞包含本发明的表达构建体或：
(i)第一表达构建体，其包含编码包含与启动子可操作地连接的VH的多肽的核酸；和
(ii)第二表达构建体，其包含编码包含与启动子可操作地连接的VL的多肽的核酸，
其中第一和第二多肽缔合形成本发明的抗原结合位点。
本发明的细胞的实例包括细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。
本发明还提供了药物组合物，其包含抗原结合位点、或包含如本文所述的CDR和/或FR序列，或如本文所述的免疫球蛋白可变域、抗体、dab(单域抗体)、di-scFv、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、双特异抗体、三抗体、四抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体、融合蛋白或缀合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明还提供了诊断组合物，其包含抗原结合位点，或包含本文所述的CDR和/或FR序列，或如本文所述的抗原结合位点、免疫球蛋白可变结构域、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、双特异抗体、三抗体、四抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体、融合蛋白或缀合物，稀释剂和可选的标记。
本发明还提供了试剂盒或制品，其包含抗原结合位点，或包含如本文所述的CDR和/或FR序列或如本文所述的免疫球蛋白可变域、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、双特异抗体、三抗体、四抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体、融合蛋白或缀合物。
如本文所述的抗原结合位点、蛋白质或抗体可以包含人恒定区，例如，IgG恒定区，例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区或其混合物。在包含VH和VL的抗体或蛋白质的情况下，VH可以连接至重链恒定区，且VL可以连接至轻链恒定区。
在一个实施例中，本文所述的蛋白质或抗体包含IgG4抗体的恒定区或IgG4抗体的稳定的恒定区。在一个实施例中，蛋白质或抗体包含IgG4恒定区，在241位具有脯氨酸(根据Kabat的编号系统，(Kabat等人，《免疫学意义的蛋白质序列》(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)，华盛顿特区，美国卫生与公共服务部，1987和/或1991))。
在一个实施例中，如本文所述的蛋白质或抗体或如本文所述的蛋白质或抗体的组合物包含重链恒定区，所述重链恒定区包含稳定的重链恒定区，其包含具有或不具有C端赖氨酸残基的部分或全部序列的混合物。
在一个实施例中，本发明的抗体包含与IgG4恒定区或稳定的IgG4恒定区(例如，如上所述)连接或融合的本文公开的VH，并且VL与κ轻链恒定区连接或融合。
将本发明的抗原结合位点的功能特性用于对本发明的抗体在细节上作必要的修改。
如本文所述的抗原结合位点可以被纯化、基本上纯化、分离和/或重组。
本发明的抗原结合位点可以是上清液的一部分，所述上清液取自表达本发明的抗原结合位点的杂交瘤在其中生长的培养基。
本发明还提供了一种用于治疗或预防对象的炎性疾病或癌症的方法，该方法包括施用本发明的抗原结合位点。就这一点而言，抗原结合位点可用于预防病症的复发，并且这被认为是预防病症。
示例性癌症包括血液系统癌症、上皮来源的癌症、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨肉瘤、子宫内膜癌和卵巢癌。
本发明还提供了包含本文所述的载体或核酸分子的细胞。
本发明还提供了由其衍生的动物或组织，其包含本文所述的细胞。
如本文所用，除非上下文另有要求，否则术语“包含”和术语的变体，比如“包括”和“含有”，并不意图排除其他添加剂、组分、技术特征或步骤。
本发明的其他方面以及在前面的段落中描述的方面的进一步的实施方案将在以下通过实施例的方式并参考附图的描述中变得明白。
附图说明
图1.抗体的受体结合特异性。图1示出了流式细胞术实验的结果。所有抗体3H9(图A)、CM2(图B)和6G7(图C)都与表达人CXCR2的细胞结合，然而，由于流式细胞仪染色与观察到的不表达任何趋化因子受体的细胞相同，因此没有一种抗体显示与人CCR6、CXCR1、CXCR3或CXCR7的显著结合。组图A、B和C中分别显示的每个直方图从左到右依次为hCCR6、hCXCR1、hCXCR2、hCXCR3、hCXCR7和未转染任何趋化因子受体的L1.2细胞。
图2.CXCR2受体结合分析。从流式细胞仪(图A)或ELISA实验(图B)衍生的每种抗体结合L1.2 hCXCR2细胞的EC50。每种结合测定的EC50值都很好地关联，并使用流式细胞仪的3H9、CM2和6G7的EC50值分别为1.05nM、1.35nM和1.28nM，而使用ELISA的3H9、CM2和6G7的EC50值分别为1.2nM、1.4nM和1.46nM。
图3.抗体与配体竞争结合或活化CXCR2。图3的图A显示所有抗体与CXCL3(Gro-γ；Gro-gamma)竞争结合人嗜中性粒细胞上的CXCR2。3H9、6G7和CM2的IC50值分别为0.7nM、3.4nM和11.1nM。图3的图B显示了所有抗体均显著抑制嗜中性粒细胞向CXCR2配体CXCL6(GCP-2)的迁移，并且测试了所有浓度。该实验的结果清楚地表明，所有抗体都可以有效抑制CXCR2介导的功能。
图4.表位作图。然后合成了跨越人CXCR2整个N端区域的三个重叠的生物素化肽，并将其用于更明确的抗CXCR2 mAb表位作图研究。肽1/Nter-1(MEDFNMESDSFEDFWKGEDLS)(SEQ ID NO：53)对应于人CXCR2的氨基酸位置1-21；肽2/Nter-2(SFEDFWKGEDLSNYSYSSTLPP)(SEQ ID NO：55)对应于氨基酸位置10-31，而肽3/Nter-3(LSNYSYSSTLPPFLLDAAPCEPESLEINK)(SEQ ID NO：54)对应于人CXCR2的氨基酸20-46位置。没有观察到同种型对照与任何肽的结合，也没有观察到测试的任何抗体与肽3或2环的结合。对于肽1和2，观察到3H9、CM2和6G7的结合。
图5.人源化抗体的CXCR2受体结合分析。人源化3H9和嵌合3H9流式细胞术结合分析的结果。两种抗体均以相同程度结合至表达CXCR2的细胞，这表明人源化不太可能导致对CXCR2的任何亲和力可察觉的降低。
图6.通过流式细胞术测量纯化的小鼠3H9和人源化3H9与人CXCR2 L1.2转染的细胞结合的剂量反应。
图7.纯化的小鼠3H9 mAb抑制CXCL1诱导的人嗜中性粒细胞迁移。
图8.纯化的小鼠3H9 mAb抑制CXCL2诱导的人嗜中性粒细胞迁移。
图9.纯化的小鼠3H9 mAb抑制hCXCL5诱导的人嗜中性粒细胞迁移。
图10.纯化的小鼠3H9 mAb抑制CXCL6诱导的人嗜中性粒细胞迁移。
具体实施方式
定义
虽然在此示出和描述了本发明的各种实施方案和方面，但是对于本领域技术人员显而易见的是，这些实施方案和方面仅以实施例的方式提供。在不偏离本发明精神的情况下，本领域技术人员将可进行多种变型、改变和替换。应该明白的是，本文描述的本发明实施方案的各种备选方案都可被用来实施本发明。
本文中使用的段落标题仅仅是为了编排的目的，而不应被理解为限制所描述的主题。本申请中引用的所有文件或文件的一部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、手册和条约，出于任何目的在此将其明确地全文引入作为参考。
应当理解，在本说明书中公开和限定的本发明可以延伸到两个或者多个独立特征的所有可替代的结合，所述的独立特征是文字记载的或者从文字或附图中明显得出的。所有的这些不同的结合构成了本发明的多个可替代的方面。
本发明的其他方面以及在前面的段落中描述的方面的进一步的实施方案将从以下通过实施例的方式并参考附图的描述中变得明白。
下面将详细参考本发明的一些实施方案。尽管将结合实施方案来描述本发明，但是将理解，其意图不是将本发明限制于那些实施方案。相反，本发明意在涵盖落入根据权利要求书定义的本发明范围之内的所有变型、修饰、和等同替换。
本发明人已经开发了与CXCR2结合并抑制或降低其活性的抗原结合位点，例如，抗体。如本文所述的抗原结合位点具有抑制或减少由CXCR2介导的炎症、肿瘤生长和转移活性中的一个或多个方面的能力。
I.概述
在整个说明书中，除非另有明确说明或上下文另外要求，否则对单个步骤、物质组成、步骤组或物质组合的组的引用应视为包含一个或复数个(即一个或多个)步骤、物质组合、步骤组或物质组合的组。因此，除非上下文另外明确指出，否则如本文中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括多个方面，且反之亦然。例如，对“一个”的引用包括单个以及两个或多个；对“一种”的引用包括单种以及两种或多种；对“该”的引用包括单个以及两个或多个，且依此类推。
本领域技术人员将理解本发明以不同于上述具体描述的那些方式的容易的改进和修饰来实施。应该理解，本发明包括所有这样的改进和修饰。本发明还单独或共同包括本说明书中提及或指出的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及所述步骤或特征的任何和所有组合或任何两个或多个。
本领域技术人员将认识到与文中所描述的可以在本发明的实践中使用的那些方法和材料相似或等同的许多方法和材料。本发明绝不限于所描述的方法和物质。
本文所涉及的所有专利和出版物均通过引用整体并入本文。
本发明不限于本文所述的具体实施例的范围，这些具体实施例仅用于举例目的。功能等效的产品、组合物和方法显然在本发明的范围内。
除非另有明确说明，否则本文中的本发明的任何实施例或实施方案均应作必要的变通而应用于本发明的任何其他实施例或实施方案。
除非另外特别定义，否则本文所用的所有技术和科学术语应具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义(例如，在细胞培养、分子遗传学、免疫学、免疫组织化学、蛋白质化学和生物化学中)。
除非另外指出，否则本公开内容中使用的重组蛋白、细胞培养物和免疫学技术是本领域技术人员所熟知的标准程序。在诸如J.Perbal,A Practical Guide to MolecularCloning,John Wiley and Sons(1984),J.Sambrook et al.Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbour Laboratory Press(1989),T.A.Brown(editor),Essential Molecular Biology:A Practical Approach,Volumes 1and 2,IRLPress(1991),D.M.Glover and B.D.Hames(editors),DNA Cloning:A PracticalApproach,Volumes 1-4,IRL Press(1995and 1996),and F.M.Ausubel et al.(editors),Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience(1988,including all updates until present),Ed Harlow and DavidLane(editors)Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbour Laboratory,(1988),and J.E.Coligan et al.(editors)Current Protocols in Immunology,JohnWiley&Sons(包括到目前为止的所有更新)的来源的文献中描述和解释了这种技术。
“核酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物，及其互补物。术语“多核苷酸”是指核苷酸的线性序列。术语“核苷酸”通常是指多核苷酸的单个单元，即单体。核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其修饰形式。本文考虑的多核苷酸的实例包括单链和双链DNA、单链和双链RNA(包括siRNA)，以及具有单链和双链DNA和RNA的混合物的杂种分子。本文所用的核酸还指具有与天然发生的核酸具有相同基本化学结构的核酸。这样的类似物具有修饰的糖和/或修饰的环取代基，但是保留了与天然核酸相同的基本化学结构。核酸模拟物是指结构与核酸的一般化学结构不同，但以与天然核酸相似的方式起作用的化合物。此类类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸和肽核酸(PNA)。
术语“氨基酸”指天然发生和合成的氨基酸，以及以与天然发生的氨基酸相似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然发生的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及后来被修饰的那些氨基酸，例如，羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然氨基酸相同基本化学结构的化合物，即结合到氢、羧基、氨基和R基团的α-碳，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这样的类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽主链，但是保留与天然发生的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指其结构与氨基酸一般化学结构不同，但其作用方式类似于天然发生的氨基酸的一些化合物。
氨基酸在本发明中可参照熟知的三字母符号或参照IUPAC-IUB生化命名委员会建议的单字母符号。同样，核苷酸也可以参照普遍接受的单字母密码表示。
氨基酸或核苷酸碱基的“位置”由数字表示，该数字基于其相对于N末端(或5’末端)的位置顺序地识别参考序列中的每个氨基酸(或核苷酸碱基)。由于在确定最佳比对时可能会考虑到缺失、插入、截短、融合等，并因此通过简单地从N端开始计数而确定的测试序列中的氨基酸残基数目通常不一定是与参考序列中其对应位置的编号相同。例如，在变体相对于比对的参考序列具有缺失的情况下，变体中将不存在与参考序列中缺失位点的位置相对应的氨基酸。在比对的参考序列中有插入的情况下，该插入将不对应于参考序列中的编号的氨基酸位置。在截短或融合的情况下，参考序列或比对序列中可能存在不对应于相应序列中任何氨基酸的氨基酸段。
当在给定氨基酸或多核苷酸序列编号的上下文中使用时，术语“参考......编号”或“对应于......”是指将给定的氨基酸或多核苷酸序列与参考序列进行比较时，指定参考序列的残基编号。当蛋白质中的氨基酸残基在蛋白质中与给定残基占据相同的基本结构位置时，它“对应”给定残基。
当抗体中的氨基酸残基在抗体中与给定残基占据相同的基本结构位置时，其“对应”给定残基。例如，当选定的残基与使用本领域适用方法评估的Kabat位置1占据相同的基本空间或结构关系时，比较抗体中选定的残基对应于本文提供的抗体中的位置1(根据本文所述的Kabat编号系统)。例如，可以将比较抗体与本文提供的抗体进行比对以获得最大序列同源性，并且可以确定对齐的比较抗体中在与Kabat位置1对齐的位置与之对应。或者，代替(或除了)如上所述的一级序列比对，还可以使用三维结构比对，例如，将比较抗体的结构与本文提供的抗体进行最大对应的比对，并比较整体结构。在这种情况下，在结构模型中在与Kabat位置1占据相同基本位置的氨基酸可以说是对应的。
可变区及其部分、免疫球蛋白、抗体及其片段的描述和定义可通过《具有免疫学意义的蛋白质的Kabat序列》(Kabat Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest)，美国国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达，1987和1991，Bork等人，JMol.Biol.242，309-320，1994，Chothia和Lesk J.Mol Biol.196:901-917，1987，Chothiaet al.Nature 342，877-883，1989和/或Al-Lazikani等人，J Mol Biol 273，927-948，1997的讨论来进一步阐明。
术语“和/或”，例如，“X和/或Y”应理解为是指“X和Y”或“X或Y”，并且应被理解为对这两种含义或任意含义提供明确的支持。
如本文中所使用的，术语“源自”应被认为指示可以从特定来源获得指定的技术特征，尽管不一定直接从该来源获得。
本文中提及的(例如，残基的)范围将被理解为包括端值。例如，提及“包含氨基酸56至65的区域”将以包含方式理解，即该区域包含氨基酸序列，按指定顺序编号为56、57、58、59、60、61、62、63、64和65。
II.选定的定义
CXCR2也称为C-X-C基序趋化因子受体2(CD182；IL8R2；IL8RA；IL8RB；CMKAR2；CDw128b)。CXCR2是一种G蛋白偶联受体(GPCR)，在许多不同的细胞和组织，包括嗜中性粒细胞、肥大细胞、CD8+T细胞、上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞和中枢神经系统的多种细胞类型中表达。已鉴定出几种高亲和力配体，CXCL1(与生长相关的癌基因α[GRO-α])、CXCL8(白介素8)和CXCL5(ENA-78)，以及低亲和力配体CXCL2(GRO-β)、CXCL3(GRO-γ)、CXCL6(GCP-2)和CXCL7(NAP-2)。
如本文所提供的术语“CXCR2”包括保持CXCR2活性(例如，在与天然蛋白质相比的至少50％、80％，90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％内)的任何C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)天然发生的形式的蛋白质、同源物或变体。在一些实施方案中，变体或同源物与天然发生形式相比在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200连续氨基酸部分)中具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列相同性。在实施方案中，CXCR2蛋白是由UniProt序列参考P25025鉴定的蛋白质、其同源物或其功能片段。
仅出于命名而非限制的目的，人CXCR2的示例性氨基酸序列为SEQ ID NO：52。
如本文所用，提及CXCR2是指具有CXCR2的至少一种生化或生物物理活性的分子；CXCR2生化或生物物理活性包括对抗原刺激细胞表面受体信号传导途径的急性炎症反应、细胞防御反应、趋化性、树突状细胞趋化性、炎症反应、后肾小管形态发生、中脑发育、中性粒细胞凋亡过程的负调控、中性粒细胞活化、中性粒细胞趋化性、磷脂酶C活化G蛋白偶联受体信号传导途径、血管新生的正调控、心肌细胞凋亡过程的正调控、细胞增殖的正调控、细胞溶质钙离子浓度的正调控、中性粒细胞趋化性的正调控、血管通透性的正调节、受体内在化和信号转导。
短语“抑制CXCR2活性”应理解为是指本发明的抗原结合位点抑制或降低CXCR2的任何一种或多种活性，包括但不限于配体与CXCR2的结合；配体诱导的CXCR2构象变化；CXCR2活化；G蛋白活化；CXCR2介导的细胞信号传导；CXCR2在体外或体内介导的细胞迁移、炎症、肿瘤生长、血管生成或转移反应；CXCR2介导的肿瘤细胞生长；和/或CXCR2介导的白细胞(例如，嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞或T细胞)迁移。“抑制CXCL2、CXCL3和/或CXCL6介导的CXCR2活性”应理解为是指本发明的抗原结合位点抑制或降低了由CXCL2、CXCL3和/或CXCL6介导或诱导的上述一种或多种活性。此外，在相同条件下，但没有抗原结合位点的相同测定中，与CXCR2活性相比，使用合适的体外、细胞或体内测定法测量活性，并且该活性被阻断或降低了至少1％、5％、10％、25％、50％、60％、70％、80％、90％或90％以上。优选地，CXCR2活性是由任何一种或多种配体介导或诱导的，例如，高亲和力配体CXCL1(生长相关癌基因α[GRO-α])、CXCL8(白介素8)和CXCL5(ENA-78)或较低亲和力的配体CXCL2(GRO-β)、CXCL3(GRO-γ)、CXCL6(GCP-2)和CXCL7(NAP-2)。最优选地，CXCR2活性是由CXCL2、3和/或6介导或诱导的。
术语“分离的蛋白质”或“分离的多肽”是由于蛋白质或多肽与其起源或来源在天然状态下伴随的天然相关成分不相关；基本上不含来自同一来源的其他蛋白质。使用本领域已知的蛋白质纯化技术，可以使蛋白质基本上不含天然缔合的成分或通过分离基本上纯化。“基本上纯化”是指蛋白质基本上不含污染物，例如，至少约70％或75％或80％或85％或90％或95％或96％或97％或98％或99％不含污染物。
如本文所用，“细胞”是指进行足以维持或复制其基因组DNA的代谢或其他功能的细胞。可以通过本领域所熟知的方法来鉴定细胞，包括例如，完整膜的存在、特定染料的染色、产生子代的能力，或者在配子的情况下与第二配子结合产生一个有活力的后代的能力。细胞可包括原核细胞和真核细胞。原核细胞包括但不限于细菌。真核细胞包括但不限于酵母细胞和源自植物和动物的细胞，例如，哺乳动物、昆虫(例如，斜纹夜蛾属(spodoptera))和人细胞。
术语“重组”应理解为是指人工遗传重组的产物。因此，在包含抗体抗原结合域的重组蛋白的上下文中，该术语不包括在对象体内天然发生的抗体，天然发生的抗体是在B细胞成熟期间发生的天然重组的产物。但是，如果分离出这样的抗体，则可以认为是包含抗体抗原结合域的分离蛋白。类似地，如果使用重组方式分离并表达编码该蛋白质的核酸，则所得蛋白质是包含抗体抗原结合域的重组蛋白。当重组蛋白在例如，表达其的细胞、组织或对象体内时，其还包括通过人工重组方式表达的蛋白质。
术语“蛋白质”应被认为包括单个多肽链，即，通过肽键连接的一系列连续氨基酸或彼此共价或非共价连接的一系列多肽链(即，多肽复合物)。例如，可以使用合适的化学键或二硫键将一系列多肽链共价连接。非共价键的实施例包括氢键、离子键、范德华力和疏水相互作用。
术语“多肽”或“多肽链”将从前述段落中理解为是指通过肽键连接的一系列连续氨基酸。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在这里可互换地用来表示氨基酸残基的聚合物。这些术语适用于这样的氨基酸多聚体，即其中一个或多个氨基酸残基是对应的天然发生的氨基酸的人工化学模拟物，以及适用于天然发生的氨基酸多聚体和非天然发生的氨基酸多聚体。
如本文所用，术语“抗原结合位点”与“抗原结合域”可互换使用，并且应理解为是指能够与抗原特异性结合的抗体区域，即VH或VL或同时包含VH和VL的Fv。抗原结合域不必在完整抗体的上下文中，例如，它可以是分离的(例如，结构域抗体)或呈另一种形式，例如，如本文所述，比如scFv。
本文提供的术语“抗原”是指能够结合本文提供的抗体结合域的分子。如本文提供的“抗原结合域”是与抗原(表位)结合的抗体的区域。如上所述，抗原结合域通常由重链和轻链中的每一个的一个恒定域和一个可变域(分别为VL、VH、CL和CH1)组成。互补位或抗原结合位点在抗原结合域的N-末端形成。抗原结合域的两个可变结构域通常结合抗原上的表位。
为了本公开的目的，术语“抗体”包括能够通过包含在Fv内的抗原结合域与一种或几种紧密相关的抗原(例如，CXCR2)特异性结合的蛋白质。该术语包括四链抗体(例如，两条轻链和两条重链)、重组或修饰的抗体(例如，嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、CDR移植抗体、灵长类抗体、去免疫抗体、合人源化抗体、半抗体、双特异性抗体)。抗体通常包含恒定结构域，其可以排列成恒定区或恒定片段或可结晶片段(Fc)。抗体的示例性形式包含四链结构作为其基本单位。全长抗体包含两条共价连接的重链(约50至70kD)和两条轻链(各约23kDa)。轻链通常包含可变区(如果存在)和恒定结构域，并且在哺乳动物中是κ轻链或λ轻链。重链通常包含可变区和通过铰链区域与另外的恒定域连接的一个或两个恒定域。哺乳动物的重链为以下类型之一：α、δ、ε、γ或μ。每条轻链也共价连接至重链之一。例如，两条重链以及重链和轻链通过链间二硫键和非共价相互作用结合在一起。链间二硫键的数目可以在不同类型的抗体之间变化。每条链具有N端可变区(VH或VL，其中每个长约110个氨基酸)和在C末端的一个或多个恒定结构域。轻链的恒定结构域(长度约为110个氨基酸的CL)与重链的第一个恒定结构域(长度为330至440个氨基酸的CH1)对齐并二硫键合。轻链可变区与重链可变区对齐。抗体重链可包含2个或更多个额外的CH结构域(例如，CH2、CH3等)，并可包含CH1和CH2恒定结构域之间的铰链区域。抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。在一个实施例中，抗体是鼠(小鼠或大鼠)抗体或灵长类(比如人)抗体。在一个实施例中，抗体重链缺失C端赖氨酸残基。在一个实施例中，抗体是人源化的、合成人源化的(synhumanized)、嵌合的、CDR移植的或去免疫的。
术语“全长抗体”、“完整抗体”或“整个抗体”可互换使用，与抗体的抗原结合片段相反，是指基本上完整形式的抗体。具体而言，完整抗体包括具有包括Fc区域的重链和轻链的抗体。恒定结构域可以是野生型序列恒定结构域(例如，人野生型序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。
如本文所提供的“抗体变体”是指能够与抗原结合并且包括抗体或其片段的一个或多个结构域(例如，轻链可变域、重链可变域)的多肽。抗体变体的非限制性实例包括单结构域抗体或纳米抗体、单特异性Fab2、双特异性Fab2、三特异性Fab3、单价IgG、scFv、双特异性抗体、双特异性双抗体、三特异性三抗体、scFv-Fc、小抗体、IgNAR、V-NAR、hcIgG、VhH或肽体。如本文所提供的“肽体”是指(通过共价或非共价接头)连接至抗体的Fc结构域的肽部分。本领域已知的抗体变体的其他非限制性实例包括软骨鱼或骆驼科动物产生的抗体。来自骆驼科动物的抗体及其可变区的一般描述及其生产、分离和使用的方法可以在参考文献WO97/49805和WO 97/49805中找到，出于所有目的在此将其全文并入以供参考。同样地，来自软骨鱼的抗体及其可变区及其生产、分离和使用的方法可以在WO2005/118629中找到，其全文并出于所有目的通过引用并入本文。
如本文所用，“可变区”是指本文定义的抗体的轻链和/或重链的能够与抗原特异性结合并且包括互补决定区(CDR)(即CDR1、CDR2和CDR3)以及框架区(FR)的氨基酸序列的部分。例如，可变区包含三个或四个FR(例如，FR1、FR2、FR3和任选地FR4)以及三个CDR。VH是指重链的可变区。VL是指轻链的可变区。
如本文所用，术语“互补决定区”(CDR；即CDR1、CDR2和CDR3)是指抗体可变区的氨基酸残基，其存在是特异性抗原结合的主要贡献者。每个可变区结构域(VH或VL)通常具有三个CDR，分别标识为CDR1、CDR2和CDR3。VH的CDR在本文中也分别称为CDR H1、CDR H2和CDRH3，其中CDR H1对应于VH的CDR 1、CDR H2对应于VH的CDR 2，而CDR H3对应于VH的CDR 3。同样，VL的CDR在本文中分别称为CDR L1、CDR L2和CDR L3，其中CDR L1对应于VL的CDR 1、CDRL2对应于VL的CDR 2，而CDR L3对应于VL的CDR 3。
轻链可变区的CDR在本文中还分别称为LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中LCDR1对应于VL的CDR 1、LCDR 2对应于VL的CDR 2、LCDR 3对应于VL的CDR 3(例如，表1)。同样，重链可变区的CDR在本文中进一步分别称为HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中HCDR1对应于VH的CDR 1、HCDR 2对应于VH的CDR 2、HCDR 3对应于VH的CDR 3。
在一个实施例中，分配给CDR和FR的氨基酸位置是根据马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院，1987年和1991年的免疫学目的蛋白质的Kabat序列定义的(本文也称为“Kabat”编号系统”)。在另一个实施例中，根据增强型Chothia编号方案(http://www.bioinfo.org.uk/mdex.html)定义了分配给CDR和FR的氨基酸位置。本发明不限于由Kabat编号系统定义的FR和CDR，而是包括所有编号系统，包括规范编号系统或Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917,1987；Chothia等人,Nature 342:877-883,1989；和/或Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.273:927-948,1997；Honnegher and Plükthun的编号系统，J.Mol.Biol.309:657-670,2001；或Giudicelli等人,Nucleic Acids Res.25:206-2111997中讨论的IMGT系统。在一个实施例中，根据Kabat编号系统定义CDR。任选地，根据Kabat编号系统的重链CDR2不包含本文所列的五个C末端氨基酸，或者那些氨基酸中的任何一个或多个被另一种天然发生的氨基酸取代。在这方面，Padlan等人，FASEB J.，9：133-139，1995确定了重链CDR2的五个C末端氨基酸通常不参与抗原结合。
“框架区”(FR)是除CDR残基外的那些可变区残基。VH的FR在本文中也分别称为FRH1、FR H2、FR H3和FR H4，其中FR H1对应于VH的FR 1、FR H2对应于VH的FR 2、FR H3对应于VH的FR 3VH和FR H4对应于VH的FR 4。同样，重链可变区的FR在本文中进一步分别称为HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，其中HFR1对应于VH的FR 1、HFR 2对应于VH的FR 2、HFR 3对应于VH的FR 3和HFR 4对应于VH的FR 4。
同样，VL的FR在本文中分别称为FR L1、FR L2、FR L3和FR L4，其中FR L1对应于VL的FR 1、FR L2对应于VL的FR 2、FR L3对应VL的FR 3和FR L4对应于VL的FR 4。同样，轻链可变区的FR在本文中进一步分别称为LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其中LFR1对应于VL的FR 1、LFR2对应于VL的FR 2、LFR 3对应于VL的FFR 3和LFR 4对应于VL的FR 4。
如本文所用，术语“Fv”应理解为是指无论由多个多肽还是单个多肽组成，由VL和VH缔合并形成具有抗原结合域的复合物的任何蛋白质，即能够特异性结合抗原。形成抗原结合域的VH和VL可以在单个多肽链中或在不同的多肽链中。此外，本发明的Fv(以及本发明的任何蛋白质)可以具有多个抗原结合域，其可以结合或可以不结合相同的抗原。该术语应理解为包括直接源自抗体以及与这种片段相对应的使用重组方法产生的蛋白质的片段。在一些示例中，VH不与重链恒定域(CH)1连接和/或VL不与轻链恒定域(CL)连接。包含Fv的示例性多肽或蛋白质包括Fab片段、Fab’片段、F(ab’)片段、scFv、双抗体、三抗体、四抗体或更高级的复合物或与恒定区相连的任何前述物质或其结构域，例如，CH2或CH3结构域，例如，微型抗体。“Fab片段”由免疫球蛋白的单价抗原结合片段组成，并且可以通过用木瓜蛋白酶消化整个抗体而产生，以产生由完整的轻链和一部分重链组成的片段，或者可以使用重组方法生产。可以通过用胃蛋白酶处理完整的抗体，然后还原得到由完整的轻链和包含VH和单个恒定结构域的部分重链组成的分子而获得的抗体的“Fab’片段”。以这种方式处理的每个抗体获得两个Fab’片段。也可以通过重组方式产生Fab’片段。抗体的“F(ab’)2片段”由通过两个二硫键结合在一起的两个Fab’片段的二聚体组成，并且通过用胃蛋白酶处理整个抗体分子而无需随后还原而获得。“Fab2”片段是包含使用例如，亮氨酸拉链或CH3结构域连接的两个Fab片段的重组片段。“单链Fv”或”scFv”是包含抗体的可变区片段(Fv)的重组分子，其中所述轻链的可变区和重链的可变区通过合适的、柔性的多肽接头共价连接。
如本文所用，术语“结合”是指抗原结合位点或其抗原结合域与抗原的相互作用，相互作用取决于抗原上特定结构的存在(例如，抗原决定簇)。例如，抗体识别并结合特定的蛋白质结构，而不是一般的蛋白质。如果抗体与表位“A”结合，则在包含标记的“A”和蛋白质的反应中，包含表位“A”(或游离的未标记“A”)的分子的存在将减少结合至抗体的标记的“A”的量。
如本文所用，术语“特异性结合”或“特异结合”应被理解为是指与其他抗原或细胞相比，本发明的抗原结合位点与表达该抗原的特定抗原或细胞更频繁地、更快速地、以更大的持续时间和/或更大的亲和力反应或缔合。例如，抗原结合位点以比其与其他CXCR实质性更大的亲和力(例如，1.5倍或2倍或5倍或10倍或20倍或40倍或60倍或80倍至100倍或150倍或200倍)与CXCR2(例如，hCXCR2)结合。在本发明的一个实施例中，抗原结合位点“特异性地”结合至CXCR2(优选人)，其亲和力至少是其与另一种趋化因子受体例如，CXCR1、CXCR3、CXCR7或CCR6的亲和力的至少1.5倍或2倍或更大(例如，5倍或10倍或20倍或50倍或100倍或200倍)。通常，但并非必须，对结合的引用是指特定的结合，且每个术语应理解为为另一个术语提供明确的支持。
如本文所用，术语“不可检测地结合”应理解为是指抗原结合位点，例如，抗体，以小于10％或8％的水平或比背景高6％或5％的水平结合候选抗原。背景可以是在不存在蛋白质和/或存在阴性对照蛋白质(例如，同种型对照抗体)的情况下检测到的结合信号的水平和/或在存在阴性对照抗原的情况下检测到的结合水平。使用生物传感器分析(例如，Biacore)检测结合水平，其中将抗原结合位点固定化并与抗原接触。
如本文所用，术语“不显著结合”应理解为是指本发明的抗原结合位点与多肽的结合水平在统计学上不显著高于背景，例如，在没有抗原结合位点和/或在阴性对照蛋白(例如，同种型对照抗体)存在下检测到的结合信号的水平和/或在阴性对照多肽存在下检测到的结合信号的水平。使用生物传感器分析(例如，Biacore)检测结合水平，其中将抗原结合位点固定化并与抗原接触。
“配体”是指能够结合受体或抗体、抗体变体、抗体区域或其片段的试剂，例如，多肽或其他分子。
如本文所用，术语“表位”(同义“抗原决定簇”)应理解为是指CXCR2的一个区域，包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合位点与之结合。除非另有定义，否则该术语不必限于抗原结合位点所接触的特定残基或结构。例如，该术语包括跨越与抗原结合位点接触的氨基酸的区域以及该区域之外的5-10(或更多)或2-5或1-3个氨基酸。在一些实施例中，表位包含一系列不连续的氨基酸，当抗原结合位点折叠时，它们的定位彼此靠近，即“构象性表位”。技术人员还将意识到，术语“表位”不限于肽或多肽。例如，术语“表位”包括分子的化学活性表面基团，例如，糖侧链、磷酰基侧链或磺酰基侧链，并且在某些示例中，可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。在实施方案中，表位包括SEQ ID NO：53。在实施方案中，表位包括SEQ ID NO：55。
“标记”或“可检测部分”是可通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其他物理手段检测的组合物。例如，有用的标记包括32P、荧光染料、电子致密试剂、酶(例如，通常在ELISA中使用的酶)、生物素、洋地黄毒苷或半抗原和蛋白质或可以通过例如，将放射性标记掺入与靶肽特异性反应的肽或抗体中来检测的其他实体。可以使用本领域已知的用于将抗体与标记缀合的任何合适的方法，例如，使用在Hermanson，《生物共轭技术》(Bioconjugate Techniques)，1996，学术出版社，圣地亚哥中描述的方法。
“接触”是按照其普通的通常含义使用的，并且是指使至少两种不同的物种(例如，抗体和抗原)足够近以反应、相互作用或物理接触的过程。应注意；然而，所得反应产物可以直接由添加的试剂之间的反应产生，或由一种或多种可以在反应混合物中产生的添加的试剂的中间体产生。
术语“接触”可以包括允许两种物种反应、相互作用或物理接触，其中所述两种物种可以是例如，本文提供的药物组合物和细胞。在实施方案中，接触包括例如，允许本文所述的药物组合物与细胞相互作用。
如本文所用，术语“病症”是指正常功能的破坏或干扰，并且不限于任何特定病症，并且将包括疾病或紊乱。
如本文所定义，关于细胞增殖(例如，癌细胞增殖)的术语“抑制”是指负面影响(例如，降低增殖)或杀死细胞。在一些实施方案中，抑制是指疾病或疾病症状(例如，癌症、癌细胞增殖)的减轻。因此，抑制包括至少部分、局部或全部阻断刺激，减少、防止或延迟活化，或使信号转导或酶活性或蛋白质的量失活、失敏或下调。类似地，“抑制剂”是抑制受体或另一种蛋白质的化合物或蛋白质，例如，通过结合、部分或完全阻断、降低、预防、延迟、失活、失敏或下调活性(例如，受体活性或蛋白质活性)。
如本文所用，术语“预防”或“防止”包括施用本发明的抗原结合位点，从而停止或阻碍病症的至少一种症状的发展。该术语还涵盖治疗缓解的对象以预防或阻碍复发。
如本文所用，术语“治疗”包括给予本文所述的抗原结合位点，从而减轻或消除特定疾病或病症的至少一种病状。有益或理想的临床结果可包括但不限于减轻或改善一种或多种征状或病状、减轻病状、紊乱或疾病的程度、稳定病状、紊乱或疾病的状态、预防病状、紊乱或疾病的发展、预防病状、紊乱或疾病的传播、延迟或减慢病状、紊乱或疾病的进展或延迟或减慢病状、紊乱或疾病的发作，减缓或缓和病状、紊乱或疾病状态，以及缓解，无论是部分还是全部。“治疗”也可意味着延长对象的生存期，使其超出未进行治疗时的预期寿命。“治疗”还可指抑制病状、紊乱或疾病的进展、暂时减缓病状、紊乱或疾病的进展，尽管在某些情况下，它涉及永久停止病状、紊乱或疾病的进展。如本文所用，术语“治疗”是指减轻以蛋白酶表达为特征的疾病或病状的一种或多种征状或以蛋白酶表达为特征的疾病或病状的征状的效果的方法。因此，在所公开的方法中，治疗可以指已确定疾病、病状或疾病或病状的征状的严重性降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。例如，如果与对照相比，对象的疾病的一种或多种征状减少了10％，则一种治疗疾病的方法被认为是一种治疗方法。因此，与天然或对照水平相比，减少可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或在10％和100％之间的任何百分比减少。应当理解，治疗不一定是指疾病、病状或疾病或病状的征状的治愈或完全消融。此外，如本文所使用的，与对照水平相比，降低、减少或抑制包括10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大的变化，并且这些术语可以包括但不一定包括完全消除。
如本文所用，术语“对象”应理解为是指包括人类在内的任何动物，例如，哺乳动物。示例性对象包括但不限于人类和非人类灵长类动物。例如，对象是人类。
抗体
术语“抗体”是根据其在本领域中熟知的含义使用的。抗体以例如完整的免疫球蛋白形式存在，或以各种肽酶消化产生的许多良好表征的片段形式存在。因此，例如，胃蛋白酶消化铰链区域中二硫键下方的抗体以产生F(ab)’2，该F(ab)’2是Fab的二聚体，其本身是通过二硫键与VH-CH1连接的轻链。在温和的条件下可以还原F(ab’)2以断裂铰链区的二硫键由此将F(ab’)2二聚体转变为Fab’单体。Fab’单体基本上是具有部分铰链区域的Fab(参见《基础免疫学》(Fundamental Immunology)Paul编辑，第3版，1993年)。虽然就完整抗体的消化而言定义了各种抗体片段，但是本领域技术人员将理解，可以化学地或通过使用重组DNA方法从头合成此类片段。因此，本文所用的术语抗体还包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段，或使用重组DNA方法从头合成的抗体片段(例如，单链Fv)或使用噬菌体展示文库鉴定的片段(参见例如，McCafferty等人，Nature348：552-554(1990))。
示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每对具有一条“轻”(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每一链的N-末端定义约100-110个或者更多个主要担负抗原识别的氨基酸的可变区。术语可变轻链(VL)、可变轻链(VL)结构域或轻链可变区和可变重链(VH)、可变重链(VH)结构域或重链可变区分别是指这些轻链和重链区域。本文所指的术语可变轻链(VL)、可变轻链(VL)结构域和轻链可变区可以互换使用。本文所指的术语可变重链(VH)、可变重链(VH)结构域和重链可变区可以互换使用。Fc(即，可结晶片段的区域)是免疫球蛋白的“基底”或“尾部”，并且通常由两条重链组成，所述两条重链根据抗体的种类贡献两个或三个恒定域。通过结合特定蛋白质，Fc区域可确保每种抗体针对给定抗原产生适当的免疫应答。Fc区域还结合各种细胞受体，例如，Fc受体，和其他免疫分子，例如，补体蛋白质。
在一个实施例中，根据任何实施例的本文所述的抗原结合位点或CXCR2结合蛋白是抗体。
产生抗体的方法是本领域已知的和/或在Harlow和Lane(编辑)《抗体：实验室手册》(Antibodies：A Laboratory Manual)，冷泉港实验室(1988)中描述的。通常，在这样的方法中，任选地与任何合适或所需的载体、佐剂或药学上可接受的赋形剂一起配制的CXCR2(例如，hCXCR2)或其区域(例如，细胞外区域)或其免疫原性片段或其表位或表达和展示其的细胞(即，免疫原)被施用于非人类动物，例如，小鼠、鸡、大鼠、兔子、豚鼠、狗、马、牛、山羊或猪。可以通过鼻内、肌内、皮下、静脉内、皮内、腹膜内或其他已知途径施用免疫原。
为了制备本发明的合适抗体并根据本发明使用，例如，重组、单克隆或多克隆抗体，可以使用本领域中已知的许多技术(参见例如Kohler&Milstein,Nature256:495-497(1975)；Kozbor et al.,Immunology Today 4:72(1983)；Cole et al.,pp.77-96inMonoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.(1985)；Coligan,Current Protocols in Immunology(1991)；Harlow&Lane,Antibodies,A LaboratoryManual(1988)；and Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice(2ded.1986))。可从细胞中克隆编码感兴趣抗体的重链和轻链的基因，例如，可从杂交瘤中克隆编码单克隆抗体的基因，并用于产生重组单克隆抗体。可从杂交瘤或浆细胞中制备编码单克隆抗体的重链和轻链的基因文库。重链和轻链基因产物的随机组合产生了大量具有不同抗原特异性的抗体(参见例如，Kuby，《免疫学》(第3版1997))。产生单链抗体或重组抗体的技术(美国专利4,946,778、美国专利4,816,567)可以适应性改变以产生针对本发明多肽的抗体。
同样，转基因小鼠或其他生物，比如其他哺乳动物，可用于表达人源化的或人抗体(参见，例如，U.S.Patent Nos.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016,Marks et al.,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg et al.,Nature368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-13(1994)；Fishwild et al.,NatureBiotechnology 14:845-51(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology 14:826(1996)；andLonberg&Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。或者，噬菌体展示技术可用于鉴定特异性结合所选抗原的抗体和异源Fab片段(参见，例如，McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Marks等人，《生物技术》10：779-783(1992))。也可以将抗体制成双特异性的，即能够识别两种不同的抗原(参见，例如，WO 93/08829，Traunecker等人，EMBO J.10：3655-3659(1991)；和Suresh等人，《酶学方法》(Methods in Enzymology)121：210(1986))。抗体也可以是异源缀合物(heteroconjugate)，例如，两种共价连接的抗体或免疫毒素(参见，例如，美国专利号4,676,980、WO 91/00360；WO 92/200373和EP 03089)。
多克隆抗体的产生可以通过在免疫后各个点对免疫动物的血液进行采样来进行监测。如果需要达到期望的抗体效价，可以进行一种或多种进一步的免疫。在达到适当的滴度前，重复进行加强和滴定。当获得所需水平的免疫原性时，对被免疫的动物放血、并分离血清和储存，和/或将动物用于产生单克隆抗体(mAb)。
用于使非人抗体人源化或灵长化的方法是本领域熟知的(例如，美国专利号4,816,567；5,530,101；5,859,205；5,585,089；5,693,761；5,693,762；5,777,085；6,180,370；6,210,671；和6,329,511；WO87/02671；EP专利申请0173494；Jones等人(1986)Nature321：522；和Verhoyen等人(1988)Science 239：1534)。人源化抗体进一步描述于例如，Winter和Milstein(1991)Nature 349：293。通常，人源化抗体具有从非人源引入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为输入残基，其通常取自输入可变域。人源化可以基本上按照Winter及其同事的方法用啮齿动物CDR或CDR序列代替人抗体的相应序列来进行(参见，例如，Morrison等人，PNAS USA，81：6851-6855(1984)，Jones等人，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323-327(1988)；Morrison和Oi，Adv.Immunol.44：65-92(1988)，Verhoeyen等人，Science 239：1534-1536(1988)和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992)，Padlan，Molec.Immun.28：489-498(1991)；Padlan，Molec.Immun.，31(3)：169-217(1994)。因此，这样的人源化抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上少于完整的人可变结构域已被来自非人物种的相应序列取代。在实践中，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能的某些FR残基被啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。例如，可以通过合成或组合适当的cDNA和基因组DNA片段来产生包含编码人源化免疫球蛋白框架区的第一序列和编码所需免疫球蛋白互补性决定区的第二序列组的多核苷酸。可以根据熟知的方法从各种人细胞中分离人恒定区DNA序列。
单克隆抗体是本发明考虑的抗体的一种示例性形式。术语“单克隆抗体”或”mAb”是指能够结合相同抗原，例如，抗原内相同表位的同质抗体群体。该术语无意就抗体的来源或制备方式进行限制。
为了产生mAb，可以使用许多已知技术中的任何一种，例如，在上文中US4196265或Harlow和Lane(1988)举例说明的程序。
例如，在足以刺激产生抗体的细胞的条件下用免疫原免疫合适的动物。啮齿动物，例如，兔子、小鼠和大鼠是示例性动物。经基因工程化的小鼠以表达人抗体，例如其不表达鼠抗体，也可以用于产生本发明的抗体(例如，如WO2002/066630中所述)。
在免疫之后，筛选有产生抗体潜力的体细胞，尤其是B淋巴细胞(B细胞)，用在产生单克隆抗体的方法中。这些细胞可从脾、扁桃体或淋巴结活检或外周血样品中获得。然后将来自被免疫动物的B细胞与永生性骨髓瘤细胞的细胞融合，所述永生性骨髓瘤细胞通常源自与被免疫原免疫的动物相同的物种。
通过在包含阻止组织培养基中核苷酸从头合成的试剂的选择性培养基中培养来扩增杂交体。示例性的药剂是氨基蝶呤、甲氨蝶呤和偶氮丝氨酸。
对扩增的杂交瘤进行抗体特异性和/或效价的功能选择，例如，通过流式细胞术和/或免疫组织化学和/或免疫测定(例如，放射免疫测定、酶免疫测定、细胞毒性测定、噬菌斑测定、点酶免疫测定等)。
或者，使用ABL-MYC技术(NeoClone，Madison WI 53713，USA)产生分泌MAb的细胞系(例如，如在Largaespada等人，J.Immunol.Methods.197：85-95，1996中所述)。
人源化抗体是基因工程化的抗体，其中来自小鼠抗体(“供体抗体”，也可以是大鼠、仓鼠或其他非人类物种)的至少一个CDR(或其功能片段)被移植到人抗体(“受体抗体”)。人抗体是一种非天然(例如，不是人类天然发生或非天然产生的)不会在人体内引发免疫反应的抗体，它在人体内不会引发显著的免疫反应，或者所产生的免疫反应小于在小鼠中引发的免疫反应。在实施方案中，移植了多于一个小鼠CDR(例如，移植了所有六个小鼠CDR)。受体抗体的序列可以是例如，成熟的人抗体序列(或其片段)、人抗体序列的共有序列(或其片段)或种系区域序列(或其片段)。因此，人源化抗体可以是具有来自供体抗体的一个或多个CDR和可变区框架(FR)的抗体。FR可以形成人抗体内恒定区和/或可变区的一部分。另外，为了保持高结合亲和力，人受体序列中的氨基酸可以被供体序列中的相应氨基酸代替，例如：(1)该氨基酸在CDR中；(2)氨基酸在人框架区中(例如，氨基酸紧邻CDR之一)。参见美国专利号5,530,101和5,585,089，其通过引用并入本文，其提供了构建人源化抗体的详细说明。尽管人源化抗体通常会从小鼠抗体中整合所有六个CDR(例如，Kabat所定义，但通常还包括Chothia所定义的高变环H1)，但是它们也可以用更少的小鼠CDR和/或少于完整的小鼠CDR序列(例如，CDR的功能片段)制备(例如，Pascalis等人，J.Immunol.169：3076，2002；Vajdos等人，分子生物学杂志，320：415-428，2002；Iwahashi等人，Mol.Immunol.36：1079-1091，1999；Tamura等人，免疫学杂志，164：1432-1441，2000)。
典型地，本文提供的人源化抗体可包括(i)轻链，其包含来自小鼠抗体(本文也称为小鼠CDR)的至少一个CDR(通常三个CDR)和人可变区框架；和(ii)重链，其包含来自小鼠抗体的至少一个CDR(通常三个CDR)和人可变区框架(FR)。轻链和重链可变区框架(FR)可以各自是成熟的人抗体可变区框架序列(或其片段)、种系可变区框架序列(与J区域序列结合)(或其片段)或人抗体可变区框架序列的共有序列(或其片段)。
“嵌合抗体”是这样的抗体分子，其中(a)恒定区或其一部分被改变、替换或交换，从而使抗原结合位点(可变区)与种类、效应子功能和/或物种的恒定区相连，或与完全不同的赋予嵌合抗体新的特性，例如，酶、毒素、激素、生长因子、药物等的分子相连。(b)可变区或其一部分被具有不同或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。根据本发明使用的优选抗体包括人源化的和/或嵌合的单克隆抗体。
设计人源化抗体的其他方法也可用于获得与上述美国专利号5,530,101和5,585,089中所述方法相同的结果，例如，“超人源化”(请参见Tan等人，J.Immunol.169：1119，2002以及美国专利号6,881,557)或Studnicak等人的方法，Protein Eng.7:805,1994。此外，产生基因工程改造的、免疫原性降低的mAb的其他方法包括如在Vaswami等人在《过敏、哮喘和免疫学年鉴》(Annals of Allergy,Asthma and Immunology)81：105，1998；Roguska等人，Protein Eng.9：895，1996；美国专利号6,072,035和5,639,641中描述的“重塑”、“过度嵌合”和饰面/表面重涂。
使治疗剂与抗体缀合的技术是熟知的(参见，例如Arnon et al.,"MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy",in MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy,Reisfeld et al.(eds.),pp.243-56(Alan R.Liss,Inc.1985)；Hellstrom et al.,“Antibodies For Drug Delivery”in Controlled DrugDelivery(2nd Ed.),Robinson et al.(eds.),pp.623-53(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review"inMonoclonal Antibodies‘84:Biological And Clinical Applications,Pinchera et al.(eds.),pp.475-506(1985)；and Thorpe et al.,"The Preparation And CytotoxicProperties Of Antibody-Toxin Conjugates",Immunol.Rev.,62:119-58(1982))。如本文所用，术语“抗体-药物缀合物”或“ADC”是指缀合的或以其他方式共价结合至抗体的治疗剂。
本文所指的“治疗剂”是可用于治疗或预防疾病例如，癌症(例如，白血病)的组合物。在实施方案中，所述治疗剂是抗癌剂。“抗癌剂”按照其普通的普通含义使用，并且是指具有抗新生物性质或抑制细胞生长或增殖能力的组合物(例如，化合物、药物、拮抗剂、抑制剂、调节剂)。在实施方案中，抗癌剂是化学治疗剂。在实施方案中，抗癌剂是本文鉴定的在治疗癌症的方法中有用的药物。在实施方案中，抗癌剂是经美国以外的国家的FDA或类似监管机构批准的用于治疗癌症的药剂。
抗体也可以通过筛选展示库例如，噬菌体展示库来产生或分离，例如，如US6300064和/或US5885793中所述。例如，本发明人已经从噬菌体展示文库分离出完全人抗体。
本发明的抗体可以是合成抗体。例如，该抗体是嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、合成人源化抗体、灵长类抗体或去免疫抗体。
含蛋白质的抗体结合域
单域抗体
在一些实施例中，本发明的蛋白质是或包含单结构域抗体(其与术语“结构域抗体”或”dAb”互换使用)。单结构域抗体是包含全部或部分抗体重链可变区的单多肽链。在某些实施例中，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis，Inc.，Waltham，MA；参见例如，US6248516)。
双抗体、三抗体、四抗体
在一些实施例中，本发明的蛋白质是或包含双抗体、三抗体、四抗体或更高阶的蛋白质复合物，例如，WO98/044001和/或WO94/007921中描述的那些。
例如，双抗体是包含两条缔合多肽链的蛋白质，每条多肽链包含结构VL-X-VH或VH-X-VL，其中VL是抗体轻链可变区、VH是抗体重链可变区、X是一个接头，其包含的残基不足以使单个多肽链中的VH和VL缔合(或形成Fv)或不存在，并且其中一条多肽链的VH与另一条多肽链的VL结合以形成抗原结合域，即形成能够特异性结合一种或多种抗原的Fv分子。每个多肽链中的VL和VH可以相同，或者每个多肽链中的VL和VH可以不同，以形成双特异性双抗体(即，包含两个具有不同特异性的Fv)。
单链Fv(scFv)
技术人员将意识到，scFv在单个多肽链中包含VH和VL区域，以及在VH和VL之间的多肽接头，其使得scFv能够形成所需的抗原结合结构(即，使单个多肽链的VH和VL相互缔合形成Fv)。例如，接头包含超过12个氨基酸残基，其中(Gly4Ser)3(SEQ ID NO：61)是scFv的更优选接头之一。
本发明还考虑了二硫键稳定的Fv(或diFv或dsFv)，其中将单个半胱氨酸残基引入VH的FR和VL的FR中，并且半胱氨酸残基通过二硫键连接以产生稳定的Fv。
替代地或另外，本发明涵盖二聚体scFv，即包含通过非共价或共价键连接的两个scFv分子的蛋白质，例如，通过亮氨酸拉链结构域连接的蛋白质(例如，衍生自Fos或Jun)。或者，两个scFv通过足够长的肽接头连接，以允许两个scFv形成并结合抗原，例如，如US20060263367中所述。
重链抗体
重链抗体在结构上不同于许多其他形式的抗体，它们只包含重链但不包含轻链。因此，这些抗体也被称为“仅重链抗体”。重链抗体存在于例如，骆驼科动物和软骨鱼(也称为IgNAR)中。
天然发生的重链抗体中存在的可变区通常被称为骆驼科动物抗体中的”VHH结构域”，而在IgNAR中被称为V-NAR，以便将它们与常规4-链抗体(称为”VH结构域”)和来自常规4-链抗体中存在的轻链可变区(称为”VL结构域”)进行区分。
来自骆驼科动物的重链抗体及其可变区的一般描述及其产生和/或分离的方法和/或用途尤其在以下参考文献WO94/04678，WO97/49805和WO97/49805中找到。
尤其在WO2005/118629中找到了来自软骨鱼的重链抗体及其可变区的一般描述及其产生和/或分离的方法和/或用途。
包含其抗原结合域的其他抗体和蛋白质
本发明还涉及包含其抗原结合域的其他抗体和蛋白质，比如：
(i)如US5731168中描述的“钥匙孔”双特异性蛋白质；
(ii)杂合缀合蛋白质，例如，如US4676980中所述；
(iii)使用化学交联剂产生的杂合缀合蛋白质，例如，如US4676980中所述；以及
(iv)Fab3(例如，如EP19930302894中所述)。
蛋白质突变
本发明还提供了与本文公开的序列具有至少80％相同性的抗原结合位点或编码其的核酸。在一个实施例中，本发明的抗原结合位点或核酸包含与本文公开的序列具有至少约85％或90％或95％或97％或98％或99％相同性的序列。
替代地或另外地，抗原结合位点包含与根据本文所述的任何实施例的VH或VL的一个或多个CDR至少具有约80％或85％或90％或95％或97％或98％或99％相同性的CDR(例如，三个CDR)。
在另一个实施例中，本发明的核酸包含与编码具有根据本文中描述的任何实施例的功能的抗原结合位点的序列具有至少约80％或85％或90％或95％或97％或98％或99％相同性的序列。本发明还包括编码本发明的抗原结合位点的核酸，其由于遗传密码的简并性而不同于本文举例说明的序列。
核酸或多肽的％相同性通过GAP(Needleman和Wunsch.Mol.Biol.48，443-453，1970)分析(GCG程序)确定，缺口产生罚分＝5，缺口延伸罚分＝0.3。查询序列的长度为至少50个残基，并且GAP分析在至少50个残基的区域上比对两个序列。例如，查询序列的长度为至少100个残基，并且GAP分析在至少100个残基的区域上比对两个序列。例如，两个序列在其整个长度上比对。
本发明还涉及在严格杂交条件下与编码本文所述抗原结合位点的核酸杂交的核酸。“中度严格”在本文中定义为在2×SSC缓冲液，0.1％(w/v)SDS中在45℃至65℃范围内的温度或等同条件下进行的杂交和/或洗涤。“高度严格”在本文中定义为在0.1X SSC缓冲液，0.1％(w/v)SDS或较低盐浓度中，且在至少65℃的温度或等效条件下进行的杂交和/或洗涤。这里提到的特定严格程度包括使用洗涤/杂交溶液而不是本领域技术人员已知SSC。例如，计算双链核酸链解离的温度(也称为解链温度或Tm)的方法是本领域已知的。类似于(例如，在5℃或10℃内)或等于核酸的Tm的温度被认为是高度严格的。中度严格应被认为在所计算的核酸Tm的10℃至20℃或10℃至15℃之内。
本发明还考虑了与本文示出的序列相比，包含一个或多个保守氨基酸取代的本发明的抗原结合位点的突变形式。在一些实施例中，抗原结合位点包含10个或更少，例如，9或8或7或6或5或4或3或2或1个保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链和/或疏水性和/或亲水性的氨基酸残基取代。
关于氨基酸序列，本领域技术人员将认识到当其中的改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代时，在编码序列中改变、添加或缺失单个氨基酸或小百分比的氨基酸的单个取代、缺失或添加的核酸、肽、多肽或蛋白质序列是“保守修饰变体”。保守修饰表提供了为本领域所熟知的功能相似的氨基酸。这些保守修饰变体除上述之外，不排除本发明的多态变体、种内同系物以及等位基因。
以下八个基团各自包含彼此保守取代的氨基酸：
1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；
2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；
3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；
5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；
6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；
7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；以及
8)半胱氨酸(C)、蛋氨酸(M)
(参见，例如，Creighton、Proteins(1984))。
在两个或多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“相同”或百分比“相同性”是指两个或多个序列或亚序列相同或具有指定百分比的氨基酸残基或核苷酸是相同的(即，在例如，本发明的整个多肽序列或本发明多肽的单个结构域的特定区域上具有60％的相同性，任选地具有65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的相同性)，在比较窗口或指定区域针对最大对应进行比较和比对时，使用以下序列比较算法之一或通过手动比对和目视检查进行测量。这样的序列随后被称为“基本上相同”。该定义也指测试序列的互补。任选地,该相同性在至少约50个核苷酸长度的区域内，或者更优选地在100到500或1000或更多核苷酸长度的区域内存在。
通过在比较窗口中比较两个最佳比对的序列来确定“序列相同性的百分比”，其中与参考序列(不包括添加或缺失)相比，比较窗口中的多核苷酸或多肽序列的部分可以包括添加或缺失(即缺口)以实现两个序列的最佳比对。通过下述方法计算百分比：测定两条序列中存在相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数量而产生匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以比较窗口中位置的总数，并将结果乘以100以产生序列相同性的百分比。
对于序列比较，通常一条序列作为参考序列，被检测的序列与之比较。当利用序列比较算法时，将测试和标准序列都输入计算机，如果需要，设定亚序列座标，并然后设定序列算法程序参数。可使用默认的程序参数，或设定替换参数。然后，序列比较算法根据程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列相同性百分数。
两条核酸序列或者多肽基本上相同的一个指示是第一条核酸编码的多肽与针对第二条核酸编码的多肽产生的抗体具有免疫交叉反应，如下所述。所以，这个多肽通常与第二多肽基本相同，例如，两个肽只有保守取代的区别。两条核酸序列基本上相同的另一指示是两个分子或者它们的互补序列在严格条件下相互杂交，如下所述。两个核酸序列基本相同的另一个指示是可以利用相同的引物扩增序列。
本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。疏水指数描述于例如，Kyte和Doolittle J.Mol.Biol.215：403-10，1982中，且亲水指数描述于例如，US4554101中。
本发明还考虑了非保守的氨基酸变化。例如，特别感兴趣的是用另一个带电荷的氨基酸以及中性或带正电荷的氨基酸取代带电荷的氨基酸。在一些实施例中，抗原结合位点包含10个或更少，例如，9或8或7或6或5或4或3或2或1个非保守氨基酸取代。
在一个实施例中，突变发生在本发明的抗原结合位点的抗原结合域的FR内。在另一个实施例中，突变发生在本发明的抗原结合位点的CDR内。
用于产生抗原结合位点的突变形式的示例性方法包括：
·DNA的突变形成(Thie等人，Methods Mol.Biol.525：309-322，2009)或RNA(Kopsidas等人，Immunol.Lett.107：163-168，2006；Kopsidas等人,BMC Biotechnology，7：18，2007；和WO1999/058661)；
·将编码多肽的核酸引入突变细胞，例如，XL-1Red、XL-mutS和XL-mutS-Kanr细菌细胞(Stratagene)；
·DNA重排，例如，如Stemmer，Nature 370：389-91，1994中所公开；和
·定点突变，例如，如在Dieffenbach(编辑)和Dveksler(编辑)(In:PCR Primer：ALaboratory Manual,冷泉港实验室，NY，1995)中所述的。
用于确定本发明的突变体抗原结合位点的生物学活性的示例性方法对于本领域技术人员而言是显见的和/或在本文中描述，例如，抗原结合。例如，本文描述了确定抗原结合、竞争性抑制结合、亲和力、缔合、解离和治疗有效性的方法。
恒定区
本发明涵盖本文所述的包含抗体恒定区的抗原结合位点和/或抗体。这包括与Fc融合的抗体的抗原结合片段。
可用于生产本发明的蛋白质的恒定区的序列可以从许多不同的来源获得。在一些实施例中，蛋白质的恒定区或其部分衍生自人抗体。恒定区或其部分可以衍生自任何抗体类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何抗体同种型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一个实施例中，恒定区是人同种型IgG4或稳定的IgG4恒定区。
在一个实施例中，例如，与天然或野生型人IgGl或IgG3 Fc区域相比，恒定区的Fc区域具有降低的诱导效应子功能的能力。在一个实施例中，效应子功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。评估含Fc区域的蛋白质的效应子功能水平的方法是本领域已知的和/或在本文所述的。
在一个实施例中，Fc区域是IgG4 Fc区域(即来自IgG4恒定区)，例如，人IgG4Fc区域。合适的IgG4Fc区域的序列对技术人员而言是显见的和/或可在公众可获得的数据库中获得(例如，可从美国国家生物技术信息中心获得)。
在一个实施例中，恒定区是稳定的IgG4恒定区。术语“稳定的IgG4恒定区”应理解为意指已被修饰以减少Fab臂交换或有经历Fab臂交换的倾向或形成半抗体或有形成半抗体的倾向的IgG4恒定区。“Fab臂交换”是指人IgG4的一种蛋白质修饰，其中IgG4重链和连接的轻链(半分子)被交换为来自另一个IgG4分子的重轻链对。因此，IgG4分子可能获得识别两个不同抗原的两个不同Fab臂(导致双特异性分子)。Fab臂交换在体内自然发生，并且可以通过纯化的血细胞或还原剂(例如，还原型谷胱甘肽)在体外诱导。当IgG4抗体解离形成两个分子，每个分子包含一条重链和一条轻链时，就会形成“半抗体”。
在一个实施例中，根据Kabat的系统，稳定的IgG4恒定区在铰链区域的位置241处包含脯氨酸(Kabat等人，《免疫学意义的蛋白质序列》(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)，华盛顿特区，美国卫生与公共服务部，1987和/或1991))。该位置对应于根据EU编号系统的铰链区的位置228(Kabat等人，《免疫学目的蛋白质序列》，华盛顿特区美国卫生与公共服务部，2001年；Edelman等人，Proc.Natl.Acad.USA，63，78-85，1969)。在人IgG4中，该残基通常是丝氨酸。用丝氨酸替代脯氨酸后，IgG4铰链区域包含序列CPPC(SEQ ID NO：62)。在这方面，技术人员将意识到“铰链区域”是抗体重链恒定区的富含脯氨酸的部分，其连接Fc和Fab区域赋予抗体的两个Fab臂上以运动性。铰链区域包括参与重链间二硫键的半胱氨酸残基。根据Kabat的编号系统，通常将其定义为从人IgG1的Glu226至Pro243的区段。通过将形成重链间二硫键(SS)的第一个和最后一个半胱氨酸残基置于相同位置，可以将其他IgG同种型的铰链区域与IgG1序列比对(参见例如，WO2010/080538)。
稳定的IgG4抗体的另外的实施例是这样的抗体，其中人IgG4的重链恒定区(根据EU编号系统)在409位的精氨酸被赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸或亮氨酸取代(例如，如在WO2006/033386中所述)。恒定区的Fc区域可额外地或可替代地在对应于405的位置处(根据EU编号系统)包含选自以下的残基：丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、异亮氨酸和亮氨酸。任选地，铰链区域在位置241处包含脯氨酸(即，CPPC序列)(SEQ ID NO：62)(如上所述)。
在另一个实施例中，Fc区域是修饰为具有降低的效应子功能的区域，即“非免疫刺激性Fc区域”。例如，Fc区域是在一个或多个选自268、309、330和331的位置上包含取代的IgG1 Fc区域。在另一个实例中，Fc区是包含以下一个或多个变化的IgG1 Fc区域：E233P、L234V、L235A和G236的缺失，和/或以下一个或多个以下变化的IgG1 Fc区域：A327G、A330S和P331S(Armour等人，Eur J Immunol.29：2613-2624，1999；Shields等人，J BiolChem.276(9)：6591-604，2001)。非免疫刺激性Fc区的其他实例描述于，例如，Dall’Acqua等人，J Immunol.177：1129-1138 2006；和/或Hezareh J Virol；75：12161-12168，2001)。
在另一个实施例中，Fc区域是嵌合Fc区域，例如，其包含来自IgG4抗体的至少一个CH2结构域和来自IgG1抗体的至少一个CH3结构域，其中Fc区域在一个或多个选自以下的氨基酸处包含取代：240、262、264、266、297、299、307、309、323、399、409和427(EU编号)(例如，如WO2010/085682中所述)。示例性取代包括240F、262L、264T、266F、297Q、299A、299K、307P、309K、309M、309P、323F、399S和427F。
其他修饰
本发明还考虑对包含Fc区域或恒定区的抗体或抗原结合位点的其他修饰。
例如，抗体包含一个或多个增加蛋白质半衰期的氨基酸取代。例如，抗体包含含有一个或多个氨基酸取代的Fc区域，所述氨基酸取代增加了Fc区域对新生Fc区域(FcRn)的亲和力。例如，Fc区域在较低pH(例如，约pH 6.0)下对FcRn具有增加的亲和力，以促进Fc/FcRn在内核体中的结合。在一实施例中，与在约pH 7.4时的Fc区域相比，在约pH 6时，Fc区域对FcRn的亲和力增加，这促进了Fc在细胞再循环后重新释放到血液中。这些氨基酸取代对于通过减少在血液中的清除来延长蛋白质的半衰期是有用的。
根据EU编号系统，示例性的氨基酸取代包括T250Q和/或M428L或T252A、T254S和T266F或M252Y，S254T和T256E或H433K和N434F。另外的或替代的氨基酸取代描述于例如，US20070135620或US7083784中。
蛋白质生产
在一个实施例中，通过在足以产生蛋白质的条件下培养杂交瘤来产生本文所述的根据任何实施例的抗原结合位点，例如，如本文所述和/或本领域已知的。
重组表达
在另一个实施例中，根据本文所述的任何实施例的抗原结合位点是重组的。
在重组蛋白的情况下，可以将编码该蛋白质的核酸克隆到表达构建体或载体中，然后将其转染到宿主细胞中，例如，大肠杆菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞，例如，猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾(HEK)细胞或骨髓瘤细胞，否则它们不会产生该蛋白质。用于表达蛋白质的示例性细胞是CHO细胞、骨髓瘤细胞或HEK细胞。实现这些目的的分子克隆技术是本领域已知的，并且例如，在Ausubel等人，(编辑)CurrentProtocols in Molecular Biology，Green Pub.Associates and Wiley-Interscience(1988，包括到目前为止的所有更新)或Sambrook等人，Molecular Cloning:A LaboratoryManual，冷泉港实验室出版社(1989)中描述。各种克隆和体外扩增方法适用于重组核酸的构建。产生重组抗体的方法也是本领域已知的，参见例如，US4816567或US5530101。
分离后，将核酸插入可操作地连接至表达构建体或表达载体中的启动子以用于进一步克隆(DNA的扩增)或在无细胞系统或细胞中表达。
如本文所用，术语“启动子”应在其最广泛的上下文中使用，并且包括基因组基因的转录调控序列，包括TATA盒或起始子元件，无论是否有改变核酸表达(例如，响应于发育和/或外部刺激,或以组织特异性方式)的其他调节元件(例如，上游活化序列、转录因子结合位点、增强子和沉默子)其对于准确的转录起始是必须的。在本文中，术语“启动子”还用于描述赋予、活化或增强与其可操作连接的核酸的表达的重组、合成或融合核酸或衍生物。示例性启动子可以包含一种或多种特定调节元件的额外拷贝，以进一步增强所述核酸的表达和/或改变所述核酸的空间表达和/或时间表达。
如本文所用，术语“可操作地连接至”是指相对于核酸定位启动子，使得核酸的表达受启动子控制。
许多在细胞中表达的载体是可用的。载体组分通常包括但不限于以下一种或多种：信号序列、编码蛋白质的序列(例如，源自本文提供的信息)、增强子元件、启动子和转录终止序列。技术人员将知道用于表达蛋白质的合适序列。示例性信号序列包括原核生物分泌信号(例如，pelB、碱性磷酸酶、青霉素酶、Ipp或热稳定肠毒素II)、酵母菌分泌信号(例如，转化酶前导、α因子前导或酸性磷酸酶前导)或哺乳动物分泌信号(例如，单纯疱疹gD信号)。
在哺乳动物细胞中有活性的示例性启动子包括巨细胞病毒立即早期启动子(CMV-IE)、人延伸因子1-α启动子(EF1)、小核RNA启动子(U1a和U1b)、α-肌球蛋白重链启动子、猿猴病毒40启动子(SV40)、劳斯肉瘤病毒启动子(RSV)、腺病毒主要晚期启动子、β-肌动蛋白启动子；包含CMV增强子/β-肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子或其活性片段的杂合调控元件。有用的哺乳动物宿主细胞系的实例是通过SV40(COS-7，ATCC CRL 1651)转化的猴肾CV1系；人胚肾细胞系(293或293细胞亚克隆，用于在悬浮培养基中生长；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；或中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。
适用于在酵母细胞，比如选自巴斯德毕赤酵母、酿酒酵母和粟酒裂殖酵母的酵母细胞中表达的典型启动子包括但不限于ADH1启动子、GAL1启动子、GAL4启动子、CUP1启动子、PHO5启动子、nmt启动子、RPR1启动子或TEF1启动子。
用于将分离的核酸或包含其的表达构建体引入细胞中进行表达的手段是本领域技术人员已知的。用于给定细胞的技术取决于已知的成功技术。将重组DNA导入细胞的方法包括显微注射、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质体介导的转染，比如使用lipofectamine(Gibco，MD，美国)和/或cellfectin(Gibco，MD，美国)、PEG介导的DNA摄取、电穿孔和微粒轰击，比如通过使用涂有DNA的钨或金颗粒(美国威斯康星州Agracetus Inc.)进行。
根据所用细胞的类型，可以在多种培养基中培养用于产生蛋白质的宿主细胞。可商购的培养基，比如Ham’s F10(Sigma)、最小必需培养基(MEM)(Sigma)、RPMl-1640(Sigma)和Dulbecco’s Modified Eagle’s培养基((DMEM)、Sigma))适用于培养哺乳动物细胞。用于培养本文讨论的其他细胞类型的培养基是本领域已知的。
蛋白质的分离
分离蛋白质的方法是本领域已知的和/或本文描述的。
当抗原结合位点被分泌到培养基中时，来自这种表达系统的上清液可以首先使用可商购的蛋白质浓缩过滤器，例如，Amicon或Millipore Pellicon超滤单元进行浓缩。在任何先前的步骤中可以包括蛋白酶抑制剂(例如PMSF)来抑制蛋白质水解，且也可以包括抗生素来防止意外污染物的生长。替代地，或另外地，可以例如使用连续离心将上清液从表达蛋白质的细胞中过滤和/或分离。
由细胞制备的抗原结合位点可以使用例如离子交换、羟基磷灰石色谱、疏水相互作用色谱、凝胶电泳、透析、亲和色谱(例如，蛋白质A亲和层析或蛋白质G层析)或前述的任意组合来纯化。这些方法是本领域已知的，并且描述于例如，WO99/57134或Harlow andDavid Lane(编辑),Antibodies：A Laboratory Manual，冷泉港实验室(1988)。
技术人员还将意识到，可以修饰蛋白质以包括有助于纯化或检测的标签，例如，多组氨酸标签，例如，六组氨酸标签，或流感病毒血凝素(HA)标签或Simian Virus5(V5)标签或FLAG标签或谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签。然后使用本领域已知的方法(例如亲和纯化)来纯化所得蛋白质。例如，通过使包含蛋白质的样品与亚硝酸三乙酸镍(Ni-NTA)接触来纯化包含hexa-his标签的蛋白质，固定在固体或半固体支持物上的Ni-NTA特异性结合hexa-his标签，洗涤样品以去除未结合的蛋白质，然后洗脱结合的蛋白质。替代地，或另外地，在亲和纯化方法中使用与标签结合的配体或抗体。
抗原结合位点的活性测定
与CXCR2及其突变体的结合
根据本文的公开内容，对于本领域技术人员而言明显的是，本发明的抗原结合位点与CXCR2结合。评估与蛋白质结合的方法是本领域已知的，例如，如Scopes所述(In：Protein purification:principles and practice，第三版，Springer Verlag，1994)。这种方法通常涉及固定抗原结合位点并使之与标记的抗原(CXCR2)接触。然后洗涤以除去非特异性结合蛋白后，检测标记的量，并因此检测结合的抗原。当然，抗原结合位点可以被标记并且抗原被固定。也可以使用淘选型测定。替代地或另外地，可以使用表面等离子体共振分析。
任选地，确定固定的CXCR2的抗原结合位点或其表位的解离常数(Kd)、缔合常数(Ka)和/或亲和常数(KD)。在一个实施例中，通过放射性标记或荧光标记的CXCR2配体结合测定法测量CXCR2结合蛋白的”Kd”或”Ka”或”KD”。在”Kd”的情况下，在存在一系列未标记的CXCR2滴定的情况下，该测定法平衡具有标记的CXCR2的最小浓度或其表位的抗原结合位点。然后洗涤以除去未结合的CXCR2或其表位后，确定标记的量，其指示蛋白质的Kd。
根据另一个实施例，通过使用表面等离振子共振测定法，例如，使用具有固定的CXCR2或其区域或固定的抗原结合位点的BIAcore表面等离振子共振(BIAcore，Inc.，Piscataway，NJ)来测量Kd、Ka或KD。
测定抑制活性
在本发明的一些实施例中，蛋白质能够抑制CXCR2活性。
本领域已知用于评估蛋白质抑制或减少配体通过导致功能反应的受体的信号传导的能力的各种测定法。
在一个实施例中，抗原结合位点抑制表达CXCR2的免疫细胞(例如，嗜中性粒细胞)的迁移，所述免疫细胞在CXCR2配体(例如，CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5或CXCL6)的存在下培养。评估迁移的方法是本领域已知的并在此描述。与没有抗原结合位点时观察到的水平相比，抑制迁移的抗原结合位点被认为抑制或降低CXCR2活性，特别是CXCR2介导的信号传导和迁移。测定抗CXCR2抗体抑制活性的其它测定法包括钙通量测定法、放射性配体结合测定法、cAMP测定法和β抑制蛋白(arrestin)募集测定法。本文所述的任何测定法可包括一种或多种CXCR2配体，包括CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5或CXCL6。
评估治疗有效性
上文描述了评估治疗有效性的测定法，其涉及测定抗原结合位点的中和。
测试本文所述抗体的CXCR2抑制活性的示例性体内试验包括咪喹莫特诱导的皮肤炎症模型、K/BxN血清转移诱导的关节炎和B16黑素瘤同基因模型。
例如，可以在癌症模型，例如，胃癌中测试抗原结合位点。例如，与gp130的Y757F突变体同源的小鼠(gp130Y757F/Y757F)(发展为胃肿瘤Jenkins等人，Blood109：2380-2388，2007)。用抗原结合位点处理小鼠(例如，8周龄小鼠)并评估胃息肉的数量和/或重量。降低息肉大小和/或重量的抗原结合位点被认为可用于治疗癌症。类似的测定可用于测试对结肠癌的作用，其中gp130Y757F/Y757F小鼠用氧化偶氮甲烷(AOM)处理，随后用葡聚糖硫酸钠(DSS)处理，基本上如Greten等人，Cell，118：285-296，2004中所述，以在用抗原结合位点处理之前诱导结肠癌。
抗原结合位点可以另外地或替代地在癌症转移或癌症相关骨疾病的模型中测试，例如，如Li等人，Oncol.Lett.3：802-806，2012中所述。
“生物样品”或“样品”是指从对象或患者获得或衍生的材料。生物样品包括组织切片，如活组织检查和尸检样品，以及为组织学目的而采集的冷冻切片。这些样品包括体液例如，血液和血液级分或产物(例如，血清、血浆、血小板、红细胞等)、痰、组织、培养细胞(例如，原代培养物、外植体和转化细胞)、粪便、尿液、滑液、关节组织、滑膜组织、滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞、巨噬细胞样滑膜细胞、免疫细胞、造血细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、T细胞等。生物样品通常获自真核生物、例如，哺乳动物、例如，灵长类动物、例如，黑猩猩或人；奶牛；狗；猫；啮齿动物、例如，豚鼠、大鼠、小鼠；兔子；或鸟；爬行动物；或鱼。
“对照”或“标准对照”是指作为用于与测试样品、测量结果或值进行比较的参考(通常是已知的参考)的样品、测量结果或值。例如，测试样品可以取自怀疑患有给定疾病(例如，癌症、炎性疾病)的患者，并与已知的正常(非患病)个体(例如，标准对照对象)进行比较。标准对照还可以代表从没患有给定疾病的相似个体(例如，标准对照对象)的群体(即标准对照群体)，例如，具有相似医学背景、相同年龄、体重等的健康个体收集的平均测量值或平均值。标准对照值也可获得自相同的个体，例如，来自疾病发作前患者的较早获得的样品。例如，可以设计对照以基于药理学数据(例如，半衰期)或治疗措施(例如，副作用的比较)比较治疗益处。对照对于确定数据的显著性也是有价值的。例如，如果给定参数的值在对照中是广泛变化的，则测试样品的变化将不被认为是显著的。本领域技术人员将认识到，标准对照可以被设计用于评估任何数目的参数(例如，RNA水平、蛋白质水平、特定细胞类型、特定体液、特定组织、滑膜细胞、滑膜液、滑膜组织、成纤维细胞样滑膜细胞、巨噬细胞样滑膜细胞等。
本领域技术人员将理解哪些标准对照在给定情况下是最合适的，并且能够基于与标准对照值的比较来分析数据。标准对照对于确定数据的显著性(例如，统计显著性)也是有价值的。例如，如果给定参数的值在标准对照中是广泛变化的，则测试样品的变化将不被认为是显著的。
待治疗的病症
本发明的抗原结合位点可用于治疗或预防与CXCR2的存在或过度表达相关或由CXCR2的存在或过度表达引起的任何病症。病症的实施例是癌症。示例性的癌症包括囊性和实体肿瘤、骨和软组织肿瘤、包括肛门组织、胆管、膀胱、血细胞、肠、脑、乳腺、类癌、子宫颈、眼、食道、头和颈、肾、喉、白血病、肝、肺、淋巴结、淋巴瘤、黑素瘤、间皮瘤、骨髓瘤、卵巢、胰腺、阴茎、前列腺、皮肤(例如，鳞状细胞癌)、肉瘤、胃、睾丸、甲状腺、阴道、外阴的肿瘤。软组织肿瘤包括良性单体神经鞘瘤(benign schwannoma mobosomy)、类结缔织瘤、脂肪母细胞瘤、脂肪瘤、子宫平滑肌瘤、透明细胞肉瘤、皮肤纤维肉瘤、尤因氏肉瘤、骨外粘液样软骨肉瘤、脂肪肉瘤粘液样(liposarcooma myxoid)、肺泡横纹肌肉瘤和滑膜肉瘤。具体的骨肿瘤包括非骨化性纤维瘤、单房性骨囊肿、内生软骨瘤、动脉瘤性骨囊肿、成骨细胞瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液纤维瘤(chondromyxofibroma)、骨化性纤维瘤和金刚烷瘤、巨细胞瘤、纤维发育异常、尤因氏肉瘤嗜酸性肉芽肿、骨肉瘤、软骨瘤、软骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤和转移性癌。白血病包括急性成淋巴细胞性、急性成髓性、慢性淋巴细胞性和慢性髓样白血病。
其它实施例包括乳腺肿瘤、结肠直肠肿瘤、腺癌、间皮瘤、膀胱肿瘤、前列腺肿瘤、生殖细胞肿瘤、肝细胞瘤/胆脂瘤(cholongio)、癌、神经内分泌肿瘤、垂体肿瘤、小圆细胞肿瘤、鳞状细胞癌、黑素瘤、非典型纤维黄瘤、精原细胞瘤、非精原细胞瘤、间质莱迪希细胞瘤、足细胞肿瘤、皮肤肿瘤、肾肿瘤、睾丸肿瘤、脑肿瘤、卵巢肿瘤、胃肿瘤、口腔肿瘤、膀胱肿瘤、骨肿瘤、颈部肿瘤、食管肿瘤、喉肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、阴道肿瘤和肾母细胞瘤。
本发明的抗原结合位点可用于治疗或预防与急性或慢性炎症相关或由急性或慢性炎症引起的任何病症，例如，慢性阻塞性肺病、哮喘、纤维化、牛皮癣、结肠炎、1型糖尿病、多发性硬化、败血病、囊性纤维化、关节炎、类风湿性关节炎、炎性肠病、膀胱炎和移植排斥。抗原结合位点优选用于治疗或预防自身免疫性炎性病症。
本发明的抗原结合位点还可用作治疗例如，过敏性鼻炎、花粉症和支气管哮喘的过敏性免疫治疗。
CXCL3和CXCL6在炎症期间是嗜中性粒细胞的化学引诱物，因此它们强烈涉及广泛的炎性疾病。CXCL3在乳腺癌转移和前列腺癌中过度表达。CXCL6参与囊性纤维化、促进肝癌细胞增殖和肺纤维化。因此，本发明的抗原结合位点可用于治疗这些疾病。
“患者”或“有此需要的对象”是指患有或易患可通过施用本文提供的组合物或药物组合物治疗的疾病或病症的活生物体。非限制性实施例包括人、其它哺乳动物、牛、大鼠、小鼠、狗、猴、山羊、绵羊、奶牛、鹿和其它非哺乳动物。在一些实施方案中，患者是人。
术语“疾病”或“病症”是指能够用本文提供的化合物或方法治疗的患者或对象的状态或健康状况。所述疾病可以是癌症。在一些另外的实施例中，“癌症”是指人类癌症和癌、肉瘤、腺癌、淋巴瘤、白血病(包括实体和淋巴样癌症)、肾癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、脑癌、头颈癌、皮肤癌、子宫癌、睾丸癌、神经胶质瘤、食道癌和肝癌(包括肝癌)、淋巴瘤(包括B-急性成淋巴细胞性淋巴瘤)、非霍奇金氏淋巴瘤(例如，伯基特氏淋巴瘤、小细胞淋巴瘤和大细胞淋巴瘤)、霍奇金氏淋巴瘤、白血病(包括急性髓样白血病(AML)、ALL和CML)或多发性骨髓瘤。
如本文所用，术语“癌症”是指在哺乳动物(例如，人)中发现的所有类型的癌症、新生物或恶性肿瘤，包括白血病、癌和肉瘤。可用本文提供的化合物或方法治疗的示例性癌症包括乳腺癌、结肠癌、肾癌、白血病、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑癌、肝癌、胃癌或肉瘤。
术语“白血病”泛指血液形成器官的进行性恶性疾病，且其特征通常在于血液和骨髓中白细胞及其前体的异常增殖和发育。白血病通常在临床上根据(1)急性或慢性-疾病的持续时间和特征进行分类；(2)涉及的细胞类型；髓样(骨髓内产生的)、淋巴样(成淋巴的)或单核细胞性；和(3)血液白血病或白血病(亚白血病)中异常细胞数目的增加或不增加。可用本文提供的化合物或方法治疗的示例性白血病包括例如，急性髓样白血病、急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、成人T细胞白血病、白细胞缺乏症、白细胞性白血病(leukocythemicleukemia)、基底细胞性白血病(basophylic leukemia)、干细胞性白血病(blast cellleukemia)、牛白血病、慢性粒细胞性白血病、皮肤白血病、干细胞性白血病(embryonalleukemia)、嗜酸性粒细胞性白血病、格罗斯白血病、毛细胞白血病、成血细胞白血病(hemoblastic leukemia)、成血细胞性白血病(hemocytoblastic leukemia)；组织细胞白血病、干细胞白血病、急性单核细胞白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病、成淋巴细胞白血病、淋巴细胞白血病、成淋巴白血病、淋巴样白血病、淋巴肉瘤细胞白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞白血病、小髓细胞白血病、单核细胞白血病、成髓细胞白血病、髓细胞白血病、髓样粒细胞白血病、髓单核细胞白血病、内格利白血病、浆细胞白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、前髓细胞白血病、李德尔氏细胞性白血病、希林氏白血病、干细胞白血病、亚白血病或未分化细胞白血病。
术语“肉瘤”通常指肿瘤，其由类似胚胎结缔组织的物质组成，并且通常由包埋在纤维状或同质物质中的紧密堆积的细胞组成。可用本文提供的化合物或方法治疗的肉瘤包括软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑素瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、阿贝马氏肉瘤、脂肪肉瘤、脂肪肉瘤、肺泡软组织肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄状肉瘤、绿色瘤肉瘤、绒毛膜癌、胚胎肉瘤、威尔姆氏肿瘤肉瘤、子宫内膜肉瘤、间质肉瘤、尤因氏肉瘤、筋膜肉瘤、成纤维细胞肉瘤、巨细胞肉瘤、粒细胞肉瘤、霍奇金氏肉瘤、特发性多色性出血性肉瘤细胞肉瘤、B细胞免疫母细胞肉瘤、淋巴瘤、T细胞免疫母细胞肉瘤、詹森氏肉瘤、卡波西氏肉瘤、库普弗细胞肉瘤、血管肉瘤、白细胞肉瘤、恶性间皮瘤肉瘤、骨周肉瘤、网状细胞肉瘤、劳斯肉瘤、浆液囊性肉瘤、滑膜肉瘤或细管扩张性肉瘤(telangiectaltic sarcoma)。
术语“黑素瘤”是指由皮肤和其它器官的黑素细胞系统产生的肿瘤。可用本文提供的化合物或方法治疗的黑素瘤包括例如，肢端黑色素瘤、无黑色素黑色素瘤、良性幼年黑色素瘤、克劳曼氏黑色素瘤、S91黑色素瘤、哈-帕二氏黑素瘤、幼年黑色素瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤、恶性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、舌下黑色素瘤或浅表扩散性黑素瘤。
术语“癌”是指由倾向于浸润周围组织并引起转移的上皮细胞组成的恶性新生长。可以用本文提供的化合物或方法治疗的示例性癌包括例如，甲状腺髓样癌、家族性甲状腺髓样癌、腺泡癌、腺泡状癌(acinous carcinoma)、囊性腺样癌、囊性腺样癌、腺瘤癌、肾上腺皮质癌、肺泡癌、肺泡细胞癌、基底细胞癌、基底细胞癌、基底膜癌、基底鳞细胞癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管癌、脑样癌、胆管细胞癌、绒毛膜癌、胶体癌、粉刺癌、子宫体癌、筛状癌、胸廓癌、皮肤癌、圆柱状癌、圆柱状细胞癌、导管癌、硬癌、胚胎癌、髓样癌、表皮样癌、癌上皮腺癌、外生性癌、溃疡性癌、纤维瘤、胶状癌(gelatiniforni carcinoma)、胶样癌、巨大细胞癌、巨细胞癌、腺癌、颗粒细胞癌、头发基质癌、多血癌、肝细胞癌、许特莱氏细胞腺癌、透明膜癌、肾上腺样癌、婴儿胚胎癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、克罗姆普赫氏癌、库尔奇基奇细胞癌、大细胞癌、豆状癌、豆状癌、脂瘤样癌、淋巴上皮癌、髓样癌、髓样癌、黑色素癌、软癌、粘液癌、粘液癌、粘液细胞癌、粘液表皮样癌、粘液癌、粘液癌、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化癌、类骨样癌、乳头状癌、门静脉周癌、浸润前癌、棘细胞癌、胸膜癌、肾脏的肾细胞癌、储备细胞癌、肉瘤样癌、施奈德氏癌、硬癌、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、马铃薯状癌、球状细胞癌、梭形细胞癌、髓样癌、鳞状癌、鳞状细胞癌、绳捆癌、血管扩张癌、血管扩张癌、移行细胞癌、结节性皮癌、结节性皮癌、疣状癌或绒毛状癌。
如本文所用、术语“转移”和“转移性癌症”可互换使用，并且是指增殖性疾病或病症(例如，癌症)从一个器官或另一非相邻器官或身体部分的扩散。癌症发生在起始位点，例如，乳腺，该位点称为原发性肿瘤，例如，原发性乳腺癌。原发肿瘤或起源部位中的一些癌细胞获得穿透和浸润局部区域中周围正常组织的能力和/或穿透淋巴系统或脉管系统的壁的能力，通过所述系统循环到身体中的其它部位和组织。由原发性肿瘤的癌细胞形成的第二种临床上可检测的肿瘤称为转移性或继发性肿瘤。当癌细胞转移时，认为转移性肿瘤及其细胞与原始肿瘤相似。因此，如果肺癌转移至乳房，则乳房部位的继发性肿瘤由异常肺细胞而非异常乳腺细胞组成。乳房中的继发性肿瘤称为转移性肺癌。因此，短语转移性癌症是指对象患有或具有原发性肿瘤并且具有一种或多种继发性肿瘤的疾病。短语非转移性癌症或患有非转移性癌症的对象是指对象患有原发性肿瘤但不患有一种或多种继发性肿瘤的疾病。例如，转移性肺癌是指患有原发性肺肿瘤或具有原发性肺肿瘤病史且在第二位置或多个位置(例如，在乳腺中)具有一个或多个继发性肿瘤的对象中的疾病。
如本文所用，术语“炎性疾病”是指特征在于异常炎症(例如，与对照如未患有疾病的健康人相比炎症水平增加)的疾病或病症。炎性疾病的实施例包括自身免疫性疾病、关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、幼年特发性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力、幼年发作糖尿病、1型糖尿病、格林-巴利综合征、桥本脑炎、桥本甲状腺炎、强直性脊柱炎、牛皮癣、舍格伦综合征、血管炎、肾小球肾炎、自身免疫性甲状腺炎、贝切特氏病、克隆氏症、溃疡性结肠炎、大疱性类天疱疮、结节病、鱼鳞病、格雷夫斯眼病(Gravesophthalmopathy)、炎性肠病、艾迪生氏病、白癜风、哮喘、过敏性哮喘、寻常痤疮、乳糜泻、慢性前列腺炎、炎性肠病、盆腔炎性疾病、再灌注损伤、局部缺血再灌注损伤、中风、结节病、移植排斥、间质性膀胱炎、动脉粥样硬化、硬皮病和特应性皮炎。
在与疾病(例如，癌症(例如，白血病、急性髓样白血病))相关的物质或物质活性或功能的上下文中，术语“相关”或“与……相关”是指所述疾病(例如，癌症(例如，白血病、急性髓样白血病)由(全部或部分)引起、或疾病的症状由(全部或部分)物质或物质活性或功能引起。或者，物质(例如，IL1RAP)可以是疾病(例如，癌症(例如，白血病、急性髓样白血病))的指标。因此，相关物质可用作靶向疾病组织(例如，癌细胞(例如，白血病干细胞、急性髓样白血病细胞))的手段。
组合物
在一些实施例中，本文所述的抗原结合位点可以口服、肠胃外、通过吸入喷雾、吸附、吸收、表面、直肠、鼻、颊、阴道、心室内施用，经由含有常规、无毒、药学上可接受的载体的剂型中的植入储库施用，或通过任何其它方便的剂型施用。本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内和颅内注射或输注技术。
将抗原结合位点制备成适合施用于对象(例如，药物组合物)的形式的方法是本领域已知的，并且包括例如，Remington的《药物科学》(Pharmaceutical Sciences)(第18版，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1990)和《美国药典：国家处方集》(U.S.Pharmacopeia:National Formulary)(Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1984)。
本发明的药物组合物特别适用于肠胃外施用，例如，静脉内施用或施用到器官或关节的体腔或内腔中。用于给药的组合物通常包含溶解在药学上可接受的载体(例如，水性载体)中的抗原结合位点的溶液。可以使用各种水性载体，例如，缓冲盐水等。组合物可根据需要含有药学上可接受的辅助物质以接近生理条件，例如，pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如，乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。本发明的抗原结合位点在这些制剂中的浓度可以广泛变化，并且将主要根据流体体积、粘度、体重等根据所选择的特定给药方式和患者的需要进行选择。示例性的载体包括水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。也可以使用非水载体如混合油和油酸乙酯。脂质体也可用作载体。载体可以含有少量增强等渗性和化学稳定性的添加剂，例如，缓冲剂和防腐剂。
在配制时，本发明的抗原结合位点将以与剂型相容的方式并且以治疗/预防有效的量施用。制剂易于以各种剂型给药，例如，上述可注射溶液的类型，但也考虑其它药学上可接受的形式，例如，片剂、丸剂、胶囊或用于口服给药的其它固体、栓剂、阴道栓剂、鼻用溶液或喷雾剂、气雾剂、吸入剂、脂质体形式等。也可以使用药物“缓释”胶囊或组合物。缓释制剂通常设计成在延长的时间内提供恒定的药物水平，并可用于递送本发明的抗原结合位点。
WO2002/080967描述了用于施用雾化组合物的组合物和方法，所述雾化组合物包含用于治疗例如，哮喘的抗体，其也适于施用本发明的抗原结合位点。
本发明的组合物可另外包括提供持续释放和/或舒适的组分。这些组分包括高分子量阴离子伪粘膜聚合物、胶凝多糖和细分的药物载体底物。这些组分在美国专利号4,911,920；5,403,841；5,212,162和4,861,760中更详细地讨论。出于所有目的，这些专利的全部内容通过引用整体并入本文。本发明的组合物还可以作为微球递送以在体内缓慢释放。例如，微球可通过皮内注射缓慢皮下释放的含药物微球给药(参见Rao,J.BiomaterSci.Polym.Ed.7:623-645,1995；作为可生物降解和可注射的凝胶制剂(参见例如，GaoPharm.Res.12：857-863，1995)；或者，作为口服给药的微球(参见例如，Eyles,J.Pharm.Pharmacol.49：669-674，1997)。在实施方案中，本发明组合物的制剂可以通过使用与细胞膜融合或被内吞的脂质体递送，即通过使用附着于脂质体的受体配体，其结合细胞的表面膜蛋白受体导致内吞。通过使用脂质体，特别是当脂质体表面携带对靶细胞特异的受体配体，或以其它方式优先针对特定器官时，可以集中将本发明的组合物体内递送到靶细胞中。(参见例如，Al-Muhammed,J.Microencapsul.13:293-306,1996；Chonn,Curr.Opin.Biotechnol.6:698-708,1995；Ostro,Am.J.Hosp.Pharm.46:1576-1587,1989)。本发明的组合物也可作为纳米颗粒递送。
如本文所用，术语“药学上可接受的”与“生理学上可接受的”和“药理学上可接受的”同义使用。药物组合物通常包含用于在储存中缓冲和保存的试剂，并且可以包括用于适当递送的缓冲剂和载体，这取决于给药途径。
“药学上可接受的赋形剂”和“药学上可接受的载体”是指有助于向对象施用活性剂和由对象吸收的物质，并且可以包括在本发明的组合物中而不对患者造成显著的不良毒理作用。药学上可接受的赋形剂的非限制性实施例包括水、NaCl、生理盐水溶液、乳酸盐林格氏溶液、正常蔗糖、正常葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣、甜味剂、调味剂、盐溶液(如林格氏溶液)、醇、油、明胶、碳水化合物如乳糖、直链淀粉或淀粉、脂肪酸酯、羟甲基纤维素(hydroxymethycellulose)、聚乙烯吡咯烷和色素等等。这样的制剂可以被灭菌，并且如果需要，与辅助试剂混合，所述辅助试剂例如，润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂和/或芳族物质等，它们不会有害地与本发明的化合物反应。本领域技术人员将认识到其它药物赋形剂可用于本发明。
术语“药学上可接受的盐”是指衍生自本领域熟知的各种有机和无机抗衡离子的盐，并且仅作为实施例包括钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵等；以及当分子含有碱性官能团时，有机或无机酸的盐、例如，盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等。
剂量和给药时间
本发明的抗原结合位点的合适剂量将根据抗原结合位点的特异性、待治疗的病症和/或待治疗的对象而变化。熟练医师能够确定合适的剂量，例如，通过以次最佳剂量开始并递增地改变剂量以确定最佳或有用的剂量。或者，为了确定治疗/预防的合适剂量，使用来自细胞培养测定或动物研究的数据，其中合适的剂量在包括活性化合物的ED50的循环浓度范围内，几乎没有或没有毒性。根据使用的剂型和使用的给药途径，剂量可以在该范围内变化。治疗/预防有效剂量可以从细胞培养试验开始估计。可以在动物模型中配制剂量以实现循环血浆浓度范围，所述循环血浆浓度范围包括细胞培养物中测定的IC50(即，实现症状的半数最大抑制的化合物的浓度或量)。这些信息可用于更准确地确定人的有用剂量。血浆中的水平可以例如，通过高效液相色谱法测量。
在一些实施例中，本发明的方法包括施用预防或治疗有效量的本文所述的蛋白质。
术语“治疗有效剂量或量”是当施用于需要治疗的对象时，改善对象的预后和/或状态和/或将本文所述的临床病症的一种或多种症状降低或抑制至低于作为该病症的临床诊断或临床特征观察和接受的水平的量。施用于对象的量将取决于待治疗病症的具体特征、待治疗病症的类型和阶段、施用方式和对象的特征，例如，一般健康、其他疾病、年龄、性别、基因型和体重，并且是本领域技术人员使用已知技术可以确定的(参见，例如，Lieberman，《药物剂型》(Pharmaceutical Dosage Forms)(Vols.1-3,1992)；Lloyd，《药物复配的艺术、科学与技术》(The Art，Science and Technology of PharmaceuticalCompounding)(1999)；Remington：《药学科学与实践》(The Science and Practice ofPharmacy)，第20版，Gennaro，编辑(2003)和Pickar，《剂量计算》(Dosage Calculations)(1999))。本领域技术人员将能够根据这些和其它因素确定合适的剂量。因此，该术语不应被解释为将本发明限于特定量，例如，蛋白质的重量或量，而是本发明包括足以在对象中实现所述结果的任何量的抗原结合位点。例如，对于给定参数，治疗有效量将显示至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％的增加或减少。治疗有效性也可以表示为“几倍”增加或减少。例如，与标准对照相比，治疗有效量可具有至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多的效果。治疗有效剂量或量可以改善疾病的一种或多种症状。当给药的效果是治疗处于疾病发展风险中的人时，治疗有效剂量或量可以预防或延迟疾病或疾病的一种或多种症状的发作。
本文所用的术语“预防有效量”是指足以预防或抑制或延迟临床病症的一种或多种可检测症状发作的蛋白质的量。本领域技术人员将意识到这样的量将根据例如，施用的特异性抗原结合位点和/或特定对象和/或病症的类型或严重程度或水平和/或病症的易感性(遗传的或其它)而变化。因此，该术语不应被解释为将本发明限于特定量，例如，抗原结合位点的重量或量，而是本发明包括足以在对象中实现所述结果的任何量的抗原结合位点。
术语“制剂”旨在包括活性化合物与作为载体的包封材料的制剂，所述包封材料提供胶囊，其中具有或不具有其它载体的活性组分被载体包围，所述载体因此与其结合。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可用作适于口服给药的固体剂型。
药物制剂任选为单位剂型。在这种形式中，制剂被细分为含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装含有离散量的制剂，例如，包装的片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉末。而且，单位剂型本身可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂，或者它可以是包装形式的适当数量的这些剂型中的任何一种。单位剂型可以是冷冻分散体。
试剂盒
本发明另外包含试剂盒，所述试剂盒包含以下中的一种或多种：
(i)本发明的抗原结合位点或编码其的表达构建体；
(ii)本发明的细胞；
(iii)本发明的复合物；或者
(iii)本发明的药物组合物。
在用于检测CXCR2的试剂盒的情况下，该试剂盒可以另外包含检测手段，例如，连接到本发明的抗原结合位点。
在用于治疗/预防用途的试剂盒的情况下，该试剂盒可以另外包含药学上可接受的载体。
任选地，本发明的试剂盒包装有用于根据任何实施例的本文所述方法的说明书。
表1：氨基酸和核苷酸序列概述
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本发明包括以下非限制性实施例。
实施例
实施例1
通过用2×107L1.2/hCXCR2转染的细胞免疫C57BL/6小鼠产生与人CXCR2(hCXCR2)反应的单克隆抗体，所述细胞在收获前用5mM丁酸刺激20小时并在完全弗氏佐剂(第一次腹膜内免疫)或不完全弗氏佐剂(第二次-第六次腹膜内免疫)中乳化，以2-wk间隔总共5-6次。最后的免疫接种在PBS中静脉内注射。4天后，取出脾并用标准方法将细胞与SP2/0细胞系融合。杂交瘤在含有10％胎牛血清替代品(fetalclone)(HyClone)、1xHAT补充剂(SigmaAldrich)加小鼠IL-6的DMEM(Gibco/lnvitrogen)中生长。10-14天后，取生长培养物上清液进行初步筛选。
使用人CXCR2转染的L1.2细胞和未转染的L1.2细胞，或使用FACSCalibur(BDBiosciences)的免疫荧光染色和分析，使用不相关或紧密受体如hCXCR1、hCCR5或hCXCR3转染的L1.2细胞，鉴定与CXCR2反应的单克隆抗体。使用如前所述的标准方法进行细胞的单克隆抗体染色(Lee等人，2006,Nat.Biotech.24:1279-1284)。
抗体的产生涉及在组织培养瓶中生长杂交瘤和收获培养基。对于一些实验，培养物上清液中抗体的浓度足以在没有进一步纯化的情况下进行。放大所选抗体的产量、通过蛋白G层析纯化单克隆抗体、浓缩并将缓冲液换成PBS。使用总IgG ELISA测定单克隆抗体浓度。
表达高水平hCXCR2的L1.2转染子用于免疫小鼠，且单克隆抗体最初通过与用hCXCR2转染的L1.2细胞反应的流式细胞术鉴定。为了确保克隆性，使用稀释平板将选择的杂交瘤亚克隆到384孔板中。用L1.2/hCXCR2转染子和未转染的L1.2细胞通过流式细胞术证实亚克隆交叉反应的特异性。
实施例2
受体结合特异性
为了评价mAb对转染细胞的反应性，我们使用间接免疫荧光染色和流式细胞术。用PBS洗涤细胞一次，并重悬于100μl含有2％(wt/vol)BSA和0.1％(wt/vol)叠氮化钠的PBS(染色缓冲液)和纯化抗体中。在4℃30分钟后，将细胞用染色缓冲液洗涤两次并重悬于50μ1PE缀合的抗人IgG(杰克逊免疫研究实验室)中，所述50μ1PE缀合的抗人IgG(杰克逊免疫研究实验室)在染色缓冲液中1：500稀释以检测人源化mAb或50μ1PE缀合的抗小鼠IgG(杰克逊免疫研究实验室)以检测小鼠mAb。在4℃温育20分钟℃后，用染色缓冲液洗涤细胞两次并在LSRII流式细胞仪上分析。7-AAD染色用于排除死细胞。
图1显示了流式细胞术实验的结果。所有抗体都与表达人CXCR2的细胞结合，但是没有抗体显示出与人CCR6、CXCR1、CXCR3或CXCR7的任何显著结合，因为流式细胞术染色与用不表达任何趋化因子受体的细胞观察到的染色相同。
CXCR2结合分析
图2显示来自流式细胞术或ELISA实验的与L1.2hCXCR2细胞结合的每种抗体的EC50。来自每种结合测定的EC50值充分相关，并且使用流式细胞术的3H9、CM2和6G7的EC50值分别为1.05nM、1.35nM和1.28nM，而使用ELISA的3H9、CM2和6G7的EC50值分别为1.2nM、1.4nM和1.46nM。
实施例3
CXCR2配体竞争结合
对于配体结合分析，重组人GRO-g(“配体”)得自Peprotech(New Jersey，USA)。125I-Bolton-Hunter标记的GRO-g购自Perkin-Elmer(Boston，MA，USA)，比活性为2200Ci/mM。将细胞在结合缓冲液(50mM Hepes，pH7.5，1mM CaCl2，5mM MgCl2，0.5％BSA)中洗涤一次，并以2.5×106细胞/ml的浓度重悬于结合缓冲液中。将冷纯化的单克隆抗体(冷竞争剂)加入到96孔板中，然后加入含有1×105个细胞的等体积(40μ1)结合缓冲液。将细胞和竞争剂在室温下预培养15分钟。然后向各孔中加入放射性标记的配体(终浓度0.5-2nM)，得到最终反应体积为120μ1。在室温下温育60分钟后，用1ml含有150mM NaCl的结合缓冲液洗涤细胞三次。在TopCount液体闪烁计数器(Packard)中计数细胞沉淀中的放射性(结合标记的量)。通过培养不含放射性标记配体的细胞计算非特异性背景结合。一式两份测定样品。
图3A显示所有抗体与CXCL3(Gro-γ；Gro-gamma)竞争以与人嗜中性粒细胞上的CXCR2结合。3H9、6G7和CM2的IC50值分别为0.7nM、3.4nM和11.1nM。令人惊奇的是，3H9表现出亚纳摩尔IC50值。
中性粒细胞迁移抑制
将人嗜中性粒细胞离心下来并在迁移培养基(MM＝RPMI 1640，0.5％BSA)中洗涤并以107细胞/ml重悬。将组织培养插入物(Becton Dickinson&Co.，Mountain View，Calif.)置于24孔组织培养板的每个孔中，形成由带有3mm直径孔的聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terepthalate)膜分隔的上室和下室。将趋化性CXCL6(在测定培养基中稀释)加入到24孔组织培养板中的600μl测定培养基中。将100μl中的一百万个细胞与抗体预孵育30分钟。将纯化的mAb加入孔中的上室，并使细胞在5％CO2 37℃中迁移通过下室。孵育4小时。迁移后取出插入物，用LSRII血细胞计数器(BD Biosciences)计数细胞。通过在30秒的设定时间段内采集事件获得相对细胞计数。
图3B显示所有抗体显著抑制嗜中性粒细胞迁移至CXCR2配体CXCL6(GCP-2)并测试所有浓度。该实验的结果清楚地表明，所有抗体都能有效地抑制CXCR2介导的功能。
此外，图7、8和9还显示抗CXCR2抗体可分别有效抑制CXCL1、CXCL2、CXCL5诱导的人嗜中性粒细胞迁移。
实施例4
表位作图分析
进行表位作图研究以确定CXCR2内被抗CXCR2 mAb识别的区域。最初，在ELISA中使用对应于人CXCR2的N-末端区域和第一、第二和第三细胞外环的生物素化肽。该初步作图研究的结果表明所有抗人CXCR2 mAb识别CXCR2的N-末端区域。
然后合成跨越人CXCR2的整个N-末端区域的三个重叠生物素化肽，并用于更明确的抗CXCR2 mAb表位作图研究。肽1(MEDFNMESDSFEDFWKGEDLS)(SEQ ID NO：53)对应于人CXCR2的氨基酸位置1-21；肽2(SFEDFWKGEDLSNYSSTLPP)(SEQ ID NO：55)对应于10-31位氨基酸，肽3(LSNYSSTLPPFLLDAPCEPESLEINK)(SEQ ID NO：54)对应于人CXCR2的20-46位氨基酸。简言之，用链霉抗生物素蛋白包被多孔板并洗涤，然后将生物素化的肽加入到分离的孔中并温育以促进肽与板的结合。然后通过向平板的孔中加入各自的抗体并孵育平板来测试不同的抗人CXCR2抗体。包括同种型对照和仅缓冲液作为阴性对照。洗涤后，加入适当的缀合抗体并温育平板。再次洗涤平板，并可视化抗体与固定化肽的结合。
图4显示抗体3H9、CM2和6G7都与肽1和2结合，但不与肽3结合。因此，CXCR2上参与抗体结合的区域或表位是SFEDFWKGEDLS(SEQ ID NO：60)或氨基酸10-21(按照人CXCR2编号)。
实施例5
抗CXCR2抗体的人源化
来自抗hCXCR2杂交瘤3H9的总RNA用于合成用于测序分析的cDNA。使用与小鼠轻链(mIgCk)和重链(mIgG3)恒定区退火的引物通过RT-PCR扩增可变区基因，并测序可变重链(VH)和可变轻链(VL)基因。
通过使用标准分子技术将m3H9 mAb的CDR(CDR-H1；CDR-H2；CDR-H3；CDR-L1；CDR-L2；和CDR-L3)转移到人框架区上。IMGT/V-QUEST和IMGT/连接分析工具用于鉴定人种系基因，其中所述重链和轻链可变区的序列与鼠抗体的序列紧密排列。这些选择的人种系基因的构架序列用作小鼠3H9 CDR的受体序列(根据IMGT数据库的IGHV1-3*01和IGKV2-28*01人类基因)。然而，鼠残基保留在关键的“游标”区。通过Genescript合成人源化VH和VL基因，它们也被密码子优化用于在CHO细胞中表达。
为了评价人源化mAb对转染细胞的反应性，我们使用间接免疫荧光染色和流式细胞术。用PBS洗涤细胞一次，并重悬于100μl含有2％(wt/vol)BSA和0.1％(wt/vol)叠氮化钠(染色缓冲液)的PBS和1μg纯化的嵌合3H9或人源化3H9中。在4℃30分钟后，将细胞用染色缓冲液洗涤两次，并重悬于50μ1PE缀合的抗人IgG(杰克逊免疫研究实验室)中，所述IgG在染色缓冲液中以1：500稀释，用于检测人源化mAb(杰克逊免疫研究实验室)，用于检测小鼠mAb。在4℃温育20分钟℃后，用染色缓冲液洗涤细胞两次并在LSRII流式细胞仪上分析。7-AAD染色用于排除死细胞。
图5显示了用人源化3H9和嵌合3H9进行的流式细胞术结合分析的结果。两种抗体与CXCR2表达细胞结合的程度相同，表明人源化不太可能导致CXCR2亲和力的任何显著降低。这由图6所示的结果证实，其中小鼠和人源化3H9与CXCR2L1.2转染的细胞结合具有相似的EC50值。
应当理解，在本说明书中公开和限定的本发明延伸到本文或附图中提到或显而易见的两个或更多个单独特征的所有可选组合。所有这些不同的组合构成本发明的各种可选方面。
P实施方案
P实施方案1.与CXCR2结合并抑制CXCL2、CXCL3和/或CXCL6介导的CXCR2活性的抗原结合位点。
P实施方案2.根据P实施方案1的抗原结合位点，其中抗原结合位点不能可检测地结合CCR6、CXCR1、CXCR2和/或CXCR7或显著地结合CCR6、CXCR1、CXCR2和/或CXCR7。
P实施方案3.根据P实施方案1或2的抗原结合位点，其中抗原结合位点抑制或降低由CXCL2、CXCL3和CXCL6诱导的CXCR2活性。
P实施方案4.根据P实施方案1或2的抗原结合位点，其中抗原结合位点与CXCL2、CXCL3和/或CXCL6竞争结合CXCR2。
P实施方案5.根据P实施方案1、2或4中任一项的抗原结合位点，其中抗原结合位点抑制由CXCL2、CXCL3或CXCL6刺激的免疫细胞的迁移。
P实施方案6.根据P实施方案1至5中任一项的抗原结合位点，其中抗原结合位点对于抑制CXCL2、CXCL3和/或CXCL6介导的CXCR2活性表现出小于2nM的EC50。
P实施方案7.根据P实施方案4的抗原结合位点，其中抗原结合位点在与CXCL3的竞争结合测定中表现出小于约20、15、12、10、8、6、5、4、3、2或1nM的IC50。
P实施方案8.根据P实施方案1至7中任一项的抗原结合位点，其中抗原结合位点进一步抑制CXCL1介导的CXCR2活性。
P实施方案9.根据P实施方案1至8中任一项的抗原结合位点，其中抗原结合位点结合CXCR2的N-末端区域。
P实施方案10.根据P实施方案9的抗原结合位点，其中N-末端区域包含残基10至21或由残基10至21组成(根据人CXCR2编号)。
P实施方案11.根据P实施方案10的抗原结合位点，其中残基10至21是SFEDFWKGEDLS(SEQ ID NO：60)。
P实施方案12.根据P实施方案10或11的抗原结合位点，其中抗原结合位点在CXCR2的残基10至21内结合，并且在CXCR2的前46个残基内不结合其它残基。
P实施方案13.根据P实施方案1至12中任一项的抗原结合位点，其中抗原结合位点结合由SEQ ID NO：52的氨基酸序列组成的肽和由SEQ ID NO：53的氨基酸序列组成的另外的肽，但不能可检测地结合由SEQ ID NO：54的氨基酸序列组成的肽。
P实施方案14.用于结合CXCR2的抗原结合位点，抗原结合位点包含：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-接头-FR1a-CDR1a-FR2a-CDR2a-FR3a-CDR3a-FR4a，其中：FR1、FR2、FR3和FR4各自是框架区；CDR1、CDR2和CDR3各自是互补决定区；FR1a、FR2a、FR3a和FR4a均为框架区；CDR1a、CDR2a和CDR3a各自是互补决定区；其中任何框架区或互补决定区的序列如本文所述。
P实施方案15.用于结合CXCR2的抗原结合位点，抗原结合位点包括：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-接头-FR1a-CDR1a-FR2a-CDR2a-FR3a-CDR3a-FR4a，其中：FR1、FR2、FR3和FR4各自是框架区；CDR1、CDR2和CDR3各自是互补决定区；FR1a、FR2a、FR3a和FR4a均为框架区；CDR1a、CDR2a和CDR3a各自是互补决定区；其中任何互补决定区的序列具有本文表1中的氨基酸序列。
P实施方案16.抗原结合位点，其包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成(按照N至C末端或C至N末端的顺序)：-SEQ ID NO：7和8；-SEQID NO：17和18；-SEQ ID NO：27和28；和/或-SEQ ID NO：31和32。
P实施方案17.包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合位点，其中抗原结合结构域结合或特异性结合CXCR2，其中抗原结合结构域包含以下至少一种：
(i)VH，其包含含有与SEQ ID NO：4所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的互补决定区(CDR)1、含有与SEQ ID NO：5所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2、以及含有与SEQ ID NO：6中所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(ii)VH，其含有与SEQ ID NO：8或32所示的序列具有至少约95％或96％或97％或98％或99％相同性的序列；
(iii)VL，其包含含有与SEQ ID NO：1所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR1、含有与SEQ ID NO：2所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2、含有与SEQ ID NO：3中所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(iv)VL，其含有与SEQ ID NO：7或31所示的序列具有至少约95％相同性的序列；
(v)VH，其包含含有SEQ ID NO：4所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：5所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：6所示的序列的CDR3；
(vi)VH，其包含SEQ ID NO：8或32所示的序列；
(vii)VL，其包含含有SEQ ID NO：1所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：2所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：3所示的序列的CDR3；
(viii)VL，其包含SEQ ID NO：7或31所示的序列；
(ix)VH，其包含含有SEQ ID NO：4所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：5所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：6所示的序列的CDR3；和VL，其包含含有SEQ ID NO：1所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：2所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：3所示的序列的CDR3；
(x)包含SEQ ID NO：8所示的序列的VH和包含SEQ ID NO：7所示的序列的VL；或者
(xi)包含SEQ ID NO：32所示的序列的VH和包含SEQ ID NO：31所示的序列的VL。
P实施方案18.包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合位点，其中抗原结合结构域结合或特异性结合CXCR2，其中抗原结合结构域包含以下至少一种：
(i)VH，其包含含有与SEQ ID NO：14所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的(CDR)1、含有与SEQ ID NO：15所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2、以及含有与SEQ ID NO：16中所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(ii)VH，其含有与SEQ ID NO：18所示的序列具有至少约95％或96％或97％或98％或99％相同性的序列；
(iii)VL，其包含含有与SEQ ID NO：11所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR1、含有与SEQ ID NO：12所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2、以及含有与SEQ ID NO：13中所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(iv)VL，其含有与SEQ ID NO：17所示的序列具有至少约95％相同性的序列；
(v)VH，其包含含有SEQ ID NO：14所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：15所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：16所示的序列的CDR3；
(vi)包含SEQ ID NO：18所示的序列的VH；
(vii)VL，其包含含有SEQ ID NO：11所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：12所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：13所示的序列的CDR3；
(viii)包含SEQ ID NO：17所示的序列的VL；
(ix)VH，其包含含有SEQ ID NO：14所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：15所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：16所示的序列的CDR3；和VL，其包含含有SEQ ID NO：11所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：12所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：13所示的序列的CDR3；或者
(x)包含SEQ ID NO：18所示的序列的VH和包含SEQ ID NO：17所示的序列的VL。
P实施方案19.包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合位点，其中抗原结合结构域结合或特异性结合CXCR2，其中抗原结合结构域包含以下至少一种：
(i)VH，其包含含有与SEQ ID NO：24所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的互补决定区(CDR)、含有与SEQ ID NO：25所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2、含有与SEQ ID NO：26中所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(ii)VH，其含有与SEQ ID NO：28所示的序列具有至少约95％或96％或97％或98％或99％相同性的序列；
(iii)VL，其包含含有与SEQ ID NO：21所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR1、含有与SEQ ID NO：22所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR2、以及含有与SEQ ID NO：23中所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的CDR3；
(iv)VL，其含有与SEQ ID NO：27所示的序列具有至少约95％相同性的序列；
(v)VH，其包含含有SEQ ID NO：24所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：25所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：26所示的序列的CDR3；
(vi)VH，其包含SEQ ID NO：28所示的序列；
(vii)VL，其包含含有SEQ ID NO：21所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：22所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：23所示的序列的CDR3；
(viii)VL，其包含SEQ ID NO：27所示的序列；
(ix)VH，其包含含有SEQ ID NO：24所示的序列的CDR1，含有SEQ ID NO：25所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：26所示的序列的CDR3；和VL，其包含含有SEQ ID NO：21所示的序列的CDR1、含有SEQ ID NO：22所示的序列的CDR2和含有SEQ ID NO：23所示的序列的CDR3；或者
(x)包含SEQ ID NO：28所示的序列的VH和包含SEQ ID NO：27所示的序列的VL。
P实施方案20.根据P实施方案16至18中任一项的抗原结合位点，其中该抗原结合结构域进一步包含以下各项中的至少一项：
(i)VH，其包含含有与SEQ ID NO：40或48所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的框架区(FR)1、含有与SEQ ID NO：41或49所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR2、或含有与SEQ ID NO：42或50所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列FR3、含有与SEQ ID NO：43或51所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR4；
(ii)VL，其包含含有与SEQ ID NO：33、34、35或44所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR1、含有与SEQ ID NO：36或45所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR2、或含有与SEQ ID NO：37、38或46所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列FR3、以及含有与SEQ ID NO：39或47所示的序列具有至少约80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少97％、至少99％相同性的序列的FR4；
(iii)VH，其包含含有SEQ ID NO：40或48所示的序列的FR1、含有SEQ ID NO：41或49所示的序列的FR2、含有SEQ ID NO：42或50所示的序列的FR3和含有SEQ ID NO：43或51所示的序列的FR4；
(iv)VL，其包含含有SEQ ID NO：33、34、35或44所示的序列的FR1、含有SEQ ID NO：36或45所示的序列的FR2、含有SEQ ID NO：37、38或46所示的序列的FR3和含有SEQ ID NO：39或47所示的序列的FR4；或者
(v)VH，其包含含有SEQ ID NO：40或48所示的序列的FR1、含有SEQ ID NO：41或49所示的序列的FR2、含有SEQ ID NO：42或50所示的序列的FR3和含有SEQ ID NO：43或51所示的序列的FR4；和VL，其包含含有SEQ ID NO：33、34、35或44所示的序列的FR1、含有SEQ IDNO：36或45所示的序列的FR2、含有SEQ ID NO：37、38或46所示的序列的FR3和含有SEQ IDNO：39或47所示的序列的FR4。
P实施方案21.根据P实施方案1至20中任一项的抗原结合位点，其中抗原结合位点可以是以下形式：
(i)单链Fv片段(scFv)；
(ii)二聚体scFv(二-scFv)；
(iii)(i)或(ii)之一，其连接至抗体、Fc或重链恒定结构域(CH)2和/或CH3的恒定区；或者
(iv)(i)或(ii)之一，其与结合免疫效应细胞的蛋白质连接。
P实施方案22.根据P实施方案1至20中任一项的抗原结合位点，其中抗原结合位点可以是以下形式：
(i)双特异抗体；
(ii)三抗体；
(iii)四抗体；
(iv)Fab；
(v)F(ab’)2；
(vi)Fv；
(vii)(i)至(vi)之一，其连接至抗体，Fc或重链恒定结构域(CH)2和/或CH3的恒定区；或者
(viii)(i)至(vi)之一，其与结合免疫效应细胞的蛋白质连接。
P实施方案23.根据P实施方案1至22中任一项的抗原结合位点，其中抗原结合位点为非缀合形式并且不适于形成缀合物。
P实施方案24.融合蛋白，其包含根据P实施方案1至23中任一项的抗原结合位点。
P实施方案25.根据P实施方案1至22中任一项的抗原结合位点或融合蛋白形式的缀合物，其与标记或细胞毒性剂缀合。
P实施方案26.用于结合至根据P实施方案1至25中任一项的抗原结合位点、融合蛋白或缀合物的抗体。
P实施方案27.编码根据P实施方案1至26中任一项的抗原结合位点、融合蛋白或缀合物的核酸。
P实施方案28.包含根据P实施方案27的核酸的载体。
P实施方案29.包含根据P实施方案27和28的载体或核酸的细胞。
P实施方案30.药物组合物，其包含根据P实施方案1至26中任一项的抗原结合位点、融合蛋白或缀合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
P实施方案31.试剂盒或制品，其包含根据P实施方案1至26中任一项的抗原结合位点、融合蛋白或缀合物。
P实施方案32.用于治疗或预防对象的炎性疾病或癌症的方法，该方法包括施用根据P实施方案1至26中任一项的抗原结合位点、融合蛋白或缀合物。
P实施方案33.根据P实施方案1至26中任一项的抗原结合位点、融合蛋白或缀合物在制备用于治疗或预防炎性疾病或癌症的药物中的用途。
P实施方案34.包含轻链可变区和重链可变区的C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其中所述轻链可变区包含：SEQ ID NO：1所示的CDR L1、SEQ ID NO：2所示的CDR L2和SEQ ID NO：3所示的CDR L3；并且其中所述重链可变区包含：SEQ ID NO：4所示的CDR H1、SEQ ID NO：5所示的CDR H2和SEQ ID NO：6所示的CDR H3。
P实施方案35.包含轻链可变区和重链可变区的C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其中所述轻链可变区包含：SEQ ID NO：11所示的CDR L1、SEQ ID NO：12所示的CDR L2和SEQ ID NO：13所示的CDR L3；并且其中所述重链可变区包含：SEQ ID NO：14所示的CDRH1，SEQ ID NO：15所示的CDR H2和SEQID NO：16所示的CDR H3。
P实施方案36.包含轻链可变区和重链可变区的C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其中所述轻链可变区包含：SEQ ID NO：21所示的CDR L1、SEQ ID NO：22所示的CDR L2和SEQ ID NO：23所示的CDR L3；并且其中所述重链可变区包含：SEQ ID NO：24所示的CDRH1，SEQ ID NO：25所示的CDR H2和SEQ ID NO：26所示的CDR H3。
P实施方案37.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是人源化抗体。
P实施方案38.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是嵌合抗体。
P实施方案39.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是Fab’片段。
P实施方案40.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是单链抗体(scFv)。
P实施方案41.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含：对应于Kabat位置1的位置处的Val或Asp；在对应于Kabat位置2的位置处的Ile、Val或Ala；在对应于Kabat位置7的位置处的Thr、Ala或Ser；在对应于Kabat位置14的位置处的Ser或Thr；
在对应于Kabat位置15的位置处的Leu或Pro；在对应于Kabat位置17的位置处的Asp或Glu；在对应于Kabat位置18的位置处的Gln或Pro；在对应于Kabat位置45的位置处的Lys或Gln；对应于Kabat位置67的位置处的Ser或Ala；在对应于Kabat位置83的位置处的Leu或Val；和/或在对应于Kabat位置100的位置的Gly或Gln。
P实施方案42.根据P实施方案34至36或41中任一项的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含：对应于Kabat位置5的位置处的Gln或Val；在对应于Kabat位置9的位置处的Pro或Ala；在对应于Kabat位置11的位置处的Leu或Val；在对应于Kabat位置12的位置处的Val或Lys；在对应于Kabat位置20的位置处的Ile或Val；在对应于Kabat位置38的位置处的Lys或Arg；在对应于Kabat位置40的位置处的Arg或Ala；在对应于Kabat位置43的位置处的Lys或Gln；在对应于Kabat位置44的位置处的Lys或Arg；在对应于Kabat位置75的位置的Ser或Ala；对应于Kabat位置81的位置处的Gln或Glu；在对应于Kabat位置83的位置处的Thr或Arg；和/或对应于Kabat位置87的位置处的Ser或Thr。
P实施方案43.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：27或NO：31的序列。
P实施方案44.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：28或NO：32的序列。
P实施方案45.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：33所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：37所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
P实施方案46.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：34所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：37所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
P实施方案47.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：35所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：38所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
P实施方案48.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：44所示的FR L1、SEQ ID NO：45所示的FR L2、SEQ ID NO：46所示的FR L3和SEQ ID NO：47所示的FR L4。
P实施方案49.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40所示的FR H1、SEQ ID NO：41所示的FR H2、SEQ ID NO：42所示的FR H3和SEQ ID NO：43所示的FR H4。
P实施方案50.根据P实施方案34至36中任一项的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：48所示的FR H1、SEQ ID NO：49所示的FR H2、SEQ ID NO：50所示的FR H3和SEQ ID NO：51所示的FR H4。
P实施方案51.根据P实施方案34至48中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是IgG。
P实施方案52.根据P实施方案34至49中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是IgG4。
P实施方案53.编码根据P实施方案34至50中任一项的CXCR2抗体的分离的核酸。
P实施方案54.包含治疗有效量的根据P实施方案34至50中任一项的CXCR2抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
P实施方案55.包含根据P实施方案34至50中任一项的CXCR2抗体的细胞。
P实施方案56.在有此需要的对象中治疗炎性疾病或癌症的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的根据P实施方案34至50中任一项的CXCR2抗体，从而在对象中治疗炎性疾病或癌症。
实施方案
实施方案1.C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区包含：
SEQ ID NO：1所示的CDR L1、SEQ ID NO：2所示的CDR L2和SEQ ID NO：3所示的CDRL3；以及
其中所述重链可变区包含：
SEQ ID NO：4所示的CDR H1、SEQ ID NO：5所示的CDR H2和SEQ ID NO：6所示的CDRH3。
实施方案2.C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区包含：
SEQ ID NO：11所示的CDR L1、SEQ ID NO：12所示的CDR L2和SEQ ID NO：13所示的CDR L3；以及
其中所述重链可变区包含：
SEQ ID NO：14所示的CDR H1、SEQ ID NO：15所示的CDR H2和SEQ ID NO：16所示的CDR H3。
实施方案3.C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区包含：
SEQ ID NO：21所示的CDR L1、SEQ ID NO：22所示的CDR L2和SEQ ID NO：23所示的CDR L3；以及
其中所述重链可变区包含：
SEQ ID NO：24所示的CDR H1、SEQ ID NO：25所示的CDR H2和SEQ ID NO：26所示的CDR H3。
实施方案4.C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区包含：
SEQ ID NO：1所示的CDR L1、SEQ ID NO：2所示的CDR L2和SEQ ID NO：3所示的CDRL3；以及
其中所述重链可变区包含：
SEQ ID NO：58所示的CDR H1、SEQ ID NO：5所示的CDR H2和SEQ ID NO：6所示的CDR H3。
实施方案5.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是人源化抗体。
实施方案6.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是嵌合抗体。
实施方案7.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是Fab’片段。
实施方案8.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是单链抗体(scFv)。
实施方案9.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含：
在与Kabat位置1相对应的位置处的Val或Asp；
在与Kabat位置2相对应的位置处的Ile、Val或Ala；
在与Kabat位置7相对应的位置处的Thr、Ala或Ser；
在与Kabat位置14相对应的位置处的Ser或Thr；
在与Kabat位置15相对应的位置处的Leu或Pro；
在与Kabat位置17相对应的位置处的Asp或Glu；
在与Kabat位置18相对应的位置处的Gln或Pro；
在与Kabat位置45相对应的位置处的Lys或Gln；
在与Kabat位置47相对应的位置处的Glu或Gln；
在与Kabat位置67相对应的位置处的Ser或Ala；
在与Kabat位置83相对应的位置处的Leu或Val；和/或
在与Kabat位置100相对应的位置处的Gly或Gln。
实施方案10.根据实施方案1至4或99中任一项的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含：
在与Kabat位置5相对应的位置处的Gln或Val；
在与Kabat位置9相对应的位置处的Pro或Ala；
在与Kabat位置11相对应的位置处的Leu或Val；
在与Kabat位置12相对应的位置处的Val或Lys；
在与Kabat位置20相对应的位置处的Ile或Val；
在与Kabat位置38相对应的位置处的Lys或Arg；
在与Kabat位置40相对应的位置处的Arg或Ala；
在与Kabat位置43相对应的位置处的Lys或Gln；
在与Kabat位置44相对应的位置处的Lys或Arg；
在与Kabat位置75相对应的位置处的Ser或Ala；
在与Kabat位置81相对应的位置处的Gln或Glu；
在与Kabat位置83相对应的位置处的Thr或Arg；和/或
在与Kabat位置87相对应的位置处的Ser或Thr。
实施方案11.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：31和SEQ ID NO：57所示的序列。
实施方案12.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：32或SEQ ID NO：56所示的序列。
实施方案13.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：33所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：37所示的FR L3和SEQID NO：39所示的FR L4。
实施方案14.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：44所示的FR L1、SEQ ID NO：59所示的FR L2、SEQ ID NO：46所示的FR L3和SEQID NO：47所示的FR L4。
实施方案15.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：34所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：37所示的FR L3和SEQID NO：39所示的FR L4。
实施方案16.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：35所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：38所示的FR L3和SEQID NO：39所示的FR L4。
实施方案17.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：44所示的FR L1、SEQ ID NO：45所示的FR L2、SEQ ID NO：46所示的FR L3和SEQID NO：47所示的FR L4。
实施方案18.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：40所示的FR H1、SEQ ID NO：41所示的FR H2、SEQ ID NO：42所示的FR H3和SEQID NO：43所示的FR H4。
实施方案19.根据实施方案1至4中任一项的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：48所示的FR H1、SEQ ID NO：49所示的FR H2、SEQ ID NO：50所示的FR H3和SEQID NO：51所示的FR H4。
实施方案20.根据实施方案1至19中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是IgG。
实施方案21.根据实施方案1至20中任一项的CXCR2抗体，其中抗体是IgG4。
实施方案22.编码根据实施方案1至21中任一项的CXCR2抗体的分离的核酸。
实施方案23.包含治疗有效量的根据实施方案1至21中任一项的CXCR2抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
实施方案24.包含根据实施方案1至21中任一项的CXCR2抗体的细胞。
实施方案25.在有此需要的对象中治疗炎性疾病或癌症的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的根据实施方案1至21中任一项的CXCR2抗体，由此在对象中治疗炎性疾病或癌症。
序列表
<110> 莫纳什大学
<120> CXCR2抗体及其用途
<130> 048517-532001WO
<150> AU 2017900656
<151> 2017-02-27
<160> 62
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
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<211> 8
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<220>
<223> Synthetic Polypeptide
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<220>
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 7
Val Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
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20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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Arg
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<220>
<223> Synthetic Polypeptide
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Ile Asn Tyr Tyr Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Ala Arg Ser Phe Leu Tyr Val Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
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<220>
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gttattgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacaatgg 120
tatctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaggtac acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacgg 339
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic Polynucleotide
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caggttcagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcctc agtgaagatt 60
tcctgcaagg cttctggcta cgcattcagt aactcctgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggaaagg gtcttgagtg gattggacgg atttatcctg gagatggaaa tattaactac 180
tatgggaagt tcaaggacaa ggccacactg actgcagaca aatcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct acttctgtgc aaggagtttt 300
ctctacgtgg actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 12
Lys Val Ser
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<220>
<223> Synthetic Polypeptide
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<223> Synthetic Polypeptide
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Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Leu Val His Ser
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Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Gly
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Arg
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<223> Synthetic Polypeptide
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Ile Asn Tyr Tyr Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Ser Phe Leu Tyr Val Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
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<223> Synthetic Polynucleotide
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atctcttgca ggtctagtca gacccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacaatgg 120
tatctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaggtac acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacgg 339
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<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polynucleotide
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caggttcagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcctc agtgaagatt 60
tcctgcaagg cttctggcta cgcattcagt aactcctgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggaaagg gtcttgagtg gattggacgg atttatcctg gagatggaaa tattaactac 180
tatgggaagt tcaaggacaa ggccacactg actgcagaca aatcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct acttctgtgc aaggagtttt 300
ctctacgtgg actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354
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<223> Synthetic Polypeptide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
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<223> Synthetic Polypeptide
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<223> Synthetic Polypeptide
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<220>
<223> Synthetic Polypeptide
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<223> Synthetic Polypeptide
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
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Arg
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<223> Synthetic Polypeptide
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asn Ser
20 25 30
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35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Ile Asn Tyr Tyr Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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<223> Synthetic Polynucleotide
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tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggagcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacgg 339
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<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polynucleotide
<400> 30
caggttcagc tgcagcagtc tggacctgaa ctggtgaagc ctggggcctc agtgaagatt 60
tcctgtaagg cttctggcta cgcattcagt aactcctgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggaaagg gtcttgagtg gattggacgg atttatcctg gagatggaaa tattaactac 180
tatgggaagt tcaaggacaa ggccacactg actgcagaca aatcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct acttctgtgc aaggagtttt 300
ctctacgtgt actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354
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<223> Synthetic Polypeptide
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<223> Synthetic Polypeptide
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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<223> Synthetic Polypeptide
<400> 33
Val Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic Polypeptide
<400> 34
Asp Val Val Met Thr Gln Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
20 25
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 35
Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 36
Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic Polypeptide
<400> 37
Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly
20 25 30
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35
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic Polypeptide
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Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly
20 25 30
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic Polypeptide
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 40
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 41
Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Arg
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 42
Asn Tyr Tyr Gly Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys
1 5 10 15
Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Val Tyr Phe Cys
35
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<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 43
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1 5 10
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 44
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
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<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 45
Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 46
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 46
Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly
20 25 30
Val Tyr Phe Cys
35
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 47
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 48
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 49
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Arg
<210> 50
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 50
Asn Tyr Tyr Gly Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys
1 5 10 15
Ser Ala Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
20 25 30
Thr Ala Val Tyr Phe Cys
35
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 51
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 52
<211> 360
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 52
Met Glu Asp Phe Asn Met Glu Ser Asp Ser Phe Glu Asp Phe Trp Lys
1 5 10 15
Gly Glu Asp Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Ser Ser Thr Leu Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Leu Asp Ala Ala Pro Cys Glu Pro Glu Ser Leu Glu Ile Asn Lys
35 40 45
Tyr Phe Val Val Ile Ile Tyr Ala Leu Val Phe Leu Leu Ser Leu Leu
50 55 60
Gly Asn Ser Leu Val Met Leu Val Ile Leu Tyr Ser Arg Val Gly Arg
65 70 75 80
Ser Val Thr Asp Val Tyr Leu Leu Asn Leu Ala Leu Ala Asp Leu Leu
85 90 95
Phe Ala Leu Thr Leu Pro Ile Trp Ala Ala Ser Lys Val Asn Gly Trp
100 105 110
Ile Phe Gly Thr Phe Leu Cys Lys Val Val Ser Leu Leu Lys Glu Val
115 120 125
Asn Phe Tyr Ser Gly Ile Leu Leu Leu Ala Cys Ile Ser Val Asp Arg
130 135 140
Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Thr Arg Thr Leu Thr Gln Lys Arg Tyr
145 150 155 160
Leu Val Lys Phe Ile Cys Leu Ser Ile Trp Gly Leu Ser Leu Leu Leu
165 170 175
Ala Leu Pro Val Leu Leu Phe Arg Arg Thr Val Tyr Ser Ser Asn Val
180 185 190
Ser Pro Ala Cys Tyr Glu Asp Met Gly Asn Asn Thr Ala Asn Trp Arg
195 200 205
Met Leu Leu Arg Ile Leu Pro Gln Ser Phe Gly Phe Ile Val Pro Leu
210 215 220
Leu Ile Met Leu Phe Cys Tyr Gly Phe Thr Leu Arg Thr Leu Phe Lys
225 230 235 240
Ala His Met Gly Gln Lys His Arg Ala Met Arg Val Ile Phe Ala Val
245 250 255
Val Leu Ile Phe Leu Leu Cys Trp Leu Pro Tyr Asn Leu Val Leu Leu
260 265 270
Ala Asp Thr Leu Met Arg Thr Gln Val Ile Gln Glu Thr Cys Glu Arg
275 280 285
Arg Asn His Ile Asp Arg Ala Leu Asp Ala Thr Glu Ile Leu Gly Ile
290 295 300
Leu His Ser Cys Leu Asn Pro Leu Ile Tyr Ala Phe Ile Gly Gln Lys
305 310 315 320
Phe Arg His Gly Leu Leu Lys Ile Leu Ala Ile His Gly Leu Ile Ser
325 330 335
Lys Asp Ser Leu Pro Lys Asp Ser Arg Pro Ser Phe Val Gly Ser Ser
340 345 350
Ser Gly His Thr Ser Thr Thr Leu
355 360
<210> 53
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 53
Met Glu Asp Phe Asn Met Glu Ser Asp Ser Phe Glu Asp Phe Trp Lys
1 5 10 15
Gly Glu Asp Leu Ser
20
<210> 54
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 54
Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Ser Ser Thr Leu Pro Pro Phe Leu Leu Asp
1 5 10 15
Ala Ala Pro Cys Glu Pro Glu Ser Leu Glu Ile Asn Lys
20 25
<210> 55
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 55
Ser Phe Glu Asp Phe Trp Lys Gly Glu Asp Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr
1 5 10 15
Ser Ser Thr Leu Pro Pro
20
<210> 56
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Ile Asn Tyr Tyr Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Phe Leu Tyr Val Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser
115
<210> 57
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 57
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Glu Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 58
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 58
Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Ser Trp
1 5
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 59
Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Glu Ser Pro Gln Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 60
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 60
Ser Phe Glu Asp Phe Trp Lys Gly Glu Asp Leu Ser
1 5 10
<210> 61
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 61
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 62
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 62
Cys Pro Pro Cys
1

Claims (27)

1.C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区包含：
SEQ ID NO：1所示的CDR L1、SEQ ID NO：2所示的CDR L2和SEQ ID NO：3所示的CDR L3；以及
其中所述重链可变区包含：
SEQ ID NO：4所示的CDR H1、SEQ ID NO：5所示的CDR H2和SEQ ID NO：6所示的CDR H3。
2.C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区包含：
SEQ ID NO：11所示的CDR L1、SEQ ID NO：12所示的CDR L2和SEQ ID NO：13所示的CDRL3；以及
其中所述重链可变区包含：
SEQ ID NO：14所示的CDR H1、SEQ ID NO：15所示的CDR H2和SEQ ID NO：16所示的CDRH3。
3.C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区包含：
SEQ ID NO：21所示的CDR L1、SEQ ID NO：22所示的CDR L2和SEQ ID NO：23所示的CDRL3；以及
其中所述重链可变区包含：
SEQ ID NO：24所示的CDR H1、SEQ ID NO：25所示的CDR H2和SEQ ID NO：26所示的CDRH3。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述抗体是Fab’片段。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述抗体是单链抗体(scFv)。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含：
在与Kabat位置1相对应的位置处的Val或Asp；
在与Kabat位置2相对应的位置处的Ile、Val或Ala；
在与Kabat位置7相对应的位置处的Thr、Ala或Ser；
在与Kabat位置14相对应的位置处的Ser或Thr；
在与Kabat位置15相对应的位置处的Leu或Pro；
在与Kabat位置17相对应的位置处的Asp或Glu；
在与Kabat位置18相对应的位置处的Gln或Pro；
在与Kabat位置45相对应的位置处的Lys或Gln；
在与Kabat位置47相对应的位置处的Glu或Gln；
在与Kabat位置67相对应的位置处的Ser或Ala；
在与Kabat位置83相对应的位置处的Leu或Val；和/或
在与Kabat位置100相对应的位置处的Gly或Gln。
9.根据权利要求1至3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含：
在与Kabat位置5相对应的位置处的Gln或Val；
在与Kabat位置9相对应的位置处的Pro或Ala；
在与Kabat位置11相对应的位置处的Leu或Val；
在与Kabat位置12相对应的位置处的Val或Lys；
在与Kabat位置20相对应的位置处的Ile或Val；
在与Kabat位置38相对应的位置处的Lys或Arg；
在与Kabat位置40相对应的位置处的Arg或Ala；
在与Kabat位置43相对应的位置处的Lys或Gln；
在与Kabat位置44相对应的位置处的Lys或Arg；
在与Kabat位置75相对应的位置处的Ser或Ala；
在与Kabat位置81相对应的位置处的Gln或Glu；
在与Kabat位置83相对应的位置处的Thr或Arg；和/或
在与Kabat位置87相对应的位置处的Ser或Thr。
10.根据权利要求1所述的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：31或SEQ ID NO：57的序列。
11.根据权利要求1或2所述的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：8、SEQID NO：18或SEQ ID NO：32的序列。
12.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ IDNO：33所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：37所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
13.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ IDNO：44所示的FR L1、SEQ ID NO：59所示的FR L2、SEQ ID NO：46所示的FR L3和SEQ ID NO：47所示的FR L4。
14.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ IDNO：34所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：37所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
15.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ IDNO：35所示的FR L1、SEQ ID NO：36所示的FR L2、SEQ ID NO：38所示的FR L3和SEQ ID NO：39所示的FR L4。
16.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ IDNO：44所示的FR L1、SEQ ID NO：45所示的FR L2、SEQ ID NO：46所示的FR L3和SEQ ID NO：47所示的FR L4。
17.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ IDNO：40所示的FR H1、SEQ ID NO：41所示的FR H2、SEQ ID NO：42所示的FR H3和SEQ ID NO：43所示的FR H4。
18.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ IDNO：48所示的FR H1、SEQ ID NO：49所示的FR H2、SEQ ID NO：50所示的FR H3和SEQ ID NO：51所示的FR H4。
19.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述抗体是IgG。
20.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体，其中所述抗体是IgG4。
21.分离的核酸，其编码根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体。
22.药物组合物，其包含根据权利要求1-3中任一项的治疗有效量的CXCR2抗体和药学上可接受的赋形剂。
23.细胞，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体。
24.根据权利要求1-3中任一项所述的CXCR2抗体在制备用于在有此需要的对象中治疗炎性疾病或癌症的药物中的用途。
25.权利要求2的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17的序列。
26.权利要求3的CXCR2抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:27的序列。
27.权利要求3的CXCR2抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:28的序列。
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