CN110627760B

CN110627760B - 化合物(+/-)-Lucidumone及其制备方法以及在制药和食品中的应用

Info

Publication number: CN110627760B
Application number: CN201910883325.1A
Authority: CN
Inventors: 程永现; 晏永明
Original assignee: Shenzhen University
Current assignee: Shenzhen University
Priority date: 2019-09-18
Filing date: 2019-09-18
Publication date: 2021-07-06
Anticipated expiration: 2039-09-18
Also published as: CN110627760A

Abstract

本发明提供了具有选择性抑制COX‑2活性的一对酚性杂萜化合物，命名为(+)‑Lucidumone和(–)‑Lucidumone。本发明还提供了含有该类化合物的药物组合物以及该化合物的提取分离方法。本发明显示该类化合物具有选择性抑制COX‑2的作用，提示其在治疗炎症相关疾病方面的价值。

Description

化合物(+/-)-Lucidumone及其制备方法以及在制药和食品中的应用

技术领域

本发明属于化学药物领域，具体涉及化合物(+/-)-Lucidumone及其制备方法以及在制药和食品中的应用。

背景技术

灵芝被称为仙草，可治疗百病。其在中华民族的用药历史悠久，近些年，灵芝已经是一个国内外学者聚焦的研究热点，尤其对灵芝多糖和三萜的研究报道。自我们2013年从灵芝中首次报道结构新颖的酚性杂萜类化合物后，该类化合物也陆续从不同的灵芝中发现，同时也发现了在慢性肾病保护、抗肿瘤、抗炎、神经保护等方面的作用。目前我们对发现的1对新酚性杂萜化合物进行了抑制COX-1和COX-2活性研究，结果发现(–)-1具有选择性抑制COX-2的作用，提示该酚性杂萜类化合物在治疗炎症方面显示一定作用，而相关研究未见文献报道。

发明内容

本发明提供一种化合物(+/-)-Lucidumone及其制备方法以及在制药和食品中的应用，该化合物具有抗炎作用。

本发明第一方面公开了一种化合物，所述化合物名称为(+)-Lucidumone和(–)-Lucidumone。所述化合物具有下述结构式的灵芝杂萜类化合物，其晶体结构(晶体数据存于Cambridge Crystallographic Data Centre(no.CCDC1867443).www.ccdc.cam.an.uk/conts/retrieving.html.)如下：

进一步地，所述的化合物是通过从赤芝中提取获得或通过人工合成获得。

本发明第二方面提供了一种化合物的药物组合物，所述药物组合物包括(+)-Lucidumone和(–)-Lucidumone或其药学上可接受的盐类。

进一步地，所述的药物组合物为药物制剂，其是由(+)-Lucidumone和(–)-Lucidumone或其药学上可接受的衍生物及其盐类作为活性成分和药学上可接受的赋形剂组成。

其中固体制剂包括：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；半固体制剂包括软膏剂、栓剂等；液体制剂包括：溶液剂、注射剂、喷雾剂等；眼用制剂包括：滴眼剂、眼用凝胶剂等。

本发明第三方面还公布了一种酚性化合物的制备方法，方法包括：

赤芝40kg，粉碎，用12倍体积95％乙醇渗漉提取，流速180mL/min，减压回收乙醇，得浸膏1.7kg,悬浮于温水，用乙酸乙酯等体积萃取4次，得到乙酸乙酯部分1.3kg；

乙酸乙酯部分(1.3kg)用MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇/水(40:60,50:50,60:40,70:30,80:20,90:10,100:0)梯度洗脱，TLC检测合并相同流份，得Fractions A-I共9个馏分段；Fr.B(14.1g)经Sephadex LH-20柱层析分离，甲醇洗脱，合并得到3个部分，B1-B3；Fr.B2(6.4g)再经RP-18柱层析划段，甲醇/水梯度洗脱(30:70,40:60,50:50,60:40,70:30,80:20,90:10,100:0)得到7个组分，B21-B27；Fr.B21(1.97g)经Sephadex LH-20柱层析分离，甲醇洗脱，合并得到2个部分，B211-B212；Fr.B212(1.4g)经MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇/水(25:75,35:65,45:55,55:45,65:35,75:25,85:15,100:0)梯度洗脱得到6个组分，B2121-B2126；Fr.B2122(420mg)经Sephadex LH-20柱层析分离后进一步使用半制备HPLC(乙腈/水15:85)纯化得(±)-Lucidumone(1.8mg，t_R＝28.1min)；该化合物是一对对映体，经过手性拆分(正己烷/异丙醇68:32)得到(+)-Lucidumone(0.4mg，t_R＝5.2min)和(–)-Lucidumone(0.6mg，t_R＝10.6min)。

本发明第四方面提供了第一方面所述的化合物在治疗炎症方面和食品方面的应用。

本发明第五方面提供了第二方面所述的酚性杂萜化合物的药物组合物在治疗炎症方面和食品方面的应用。

本发明提供的化合物(+/-)-Lucidumone，从赤芝中提取分离或经人工合成制得，在治疗炎症性疾病方面有良好的疗效。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明化合物的结构示意图；

图2为本发明化合物的晶体结构示意图。

具体实施方式

为使得本发明的发明目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而非全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

本发明提供的化合物的提取分离及结构鉴定

取赤芝40kg，粉碎，用12倍体积95％乙醇渗漉提取，流速180ml/min，减压回收乙醇，得浸膏1.7kg，悬浮于温水，用乙酸乙酯等体积萃取4次，得到乙酸乙酯部分1.3kg。

乙酸乙酯部分(1.3kg)用MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇/水(40:60,50:50,60:40,70:30,80:20,90:10,100:0)梯度洗脱，TLC检测合并相同流份，得Fractions A-I共9个馏分段。Fr.B(14.1g)经Sephadex LH-20柱层析分离，甲醇洗脱，合并得到3个部分，B1-B3。Fr.B2(6.4g)再经RP-18柱层析划段，甲醇/水梯度洗脱(30:70,40:60,50:50,60:40,70:30,80:20,90:10,100:0)得到7个组分，B21-B27。Fr.B21(1.97g)经Sephadex LH-20柱层析分离，甲醇洗脱，合并得到2个部分，B211-B212。Fr.B212(1.4g)经MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇/水(25:75,35:65,45:55,55:45,65:35,75:25,85:15,100:0)梯度洗脱得到6个组分，B2121-B2126。Fr.B2122(420mg)经Sephadex LH-20柱层析分离后进一步使用半制备HPLC(乙腈/水15:85)纯化得(±)-Lucidumone(1.8mg，t_R＝28.1min)。该化合物是一对对映体，经过手性拆分(正己烷/异丙醇68:32)得到(+)-Lucidumone(0.4mg，t_R＝5.2min)和(–)-Lucidumone(0.6mg，t_R＝10.6min)。化合物结果鉴定如下：

化合物(±)-Lucidumone(1)，淡黄色固体，{[α]_D ²⁰+29.6(c 0.027,MeOH)；CD(MeOH)λmax(Δε)226(+4.14),243(–4.05),327(+1.51)；(+)-Lucidumone}；{[α]_D ²⁰–70.6(c0.017,MeOH)；CD(MeOH)λmax(Δε)226(–7.81),243(+7.64),327(–2.68)；(–)-Lucidumone}；UV(MeOH)λ_max(logε)355(4.18),256(4.31),229(4.78)nm；ESIMS m/z 331[M+H]⁺；HRESIMS m/z 331.1186[M+H]⁺(calcd for C₁₈H₁₉O₆,336.1176)；¹H and ¹³C NMR data,如表1所示。

表1.化合物1的¹H和¹³C NMR数据

实施例2：

实施例1中化合物(+/-)-Lucidumone中的任一种，按常规法加注射用溶媒，精滤，灌封灭菌后可制成注射液。

实施例3：

实施例1中化合物(+/-)-Lucidumone中的任一种，按常规法配以各种药用辅料可制成片剂。

使用实施例1中化合物(+/-)-Lucidumone中的任一种作为药物活性成分，使用几种赋形剂作为制备组合药物片剂的辅料成分，按照一定比例配比制成每片含有药物成分1-100mg的片剂样品。

实施例4：

实施例1中化合物(+/-)-Lucidumone中的任一种按常规法配以各种药用辅料可制成胶囊剂：

含有实施例1中化合物(+/-)-Lucidumone中的任一种作为有效成分的药物组合胶囊制剂的制备，使用实施例1中化合物(+/-)-Lucidumone中的任一种作为药物活性成分、使用几种赋形剂作为制备组合药物胶囊剂的辅料成分，按照一定比例配比制成每粒胶囊中含有化合物成分1-100mg的胶囊制剂。

实施例5：

取实施例1的方法制得的化合物(+/-)-Lucidumone中的任一种1份，10份植脂末，混匀，按照常规方法制成固体饮料。

实施例6：

本实验用Cayman’s COX Fluorescent Inhibitor Screening Assay Kit来检测COX-1和COX-2的酶活性。具体步骤如下：

1.化合物梯度稀释：先将化合物用DMSO溶解成10mM储存液，并用DMSO 1:3梯度稀释成10个浓度梯度的1000×化合物系列浓度储存液，再转移至化合物转移仪器适配的384PP板中备用。

2.每孔加入酶稀释液10μL，空白对照孔不加酶加入10μL 1xassay buffer。

3.将化合物将转移到20nL 1000×梯度浓度稀释好的化合物加入到反应液中，空白对照及DMSO对照孔中加入DMSO。室温孵育10-15min。

4.用1xassay buffer稀释荧光底物ADHP及辅酶Heme，Heme稀释倍数为100倍，ADHP稀释倍数为40倍。每孔加入4μL ADHP稀释液及4μL Heme稀释液。

5.用水配制底物花生四烯酸与氢氧化钾工作液，稀释倍数均为40倍。每孔加入2μL底物，马上用酶标仪动态检测531/595nm处荧光信号。

结果显示，化合物在浓度30μM具有选择性显著抑制COX-2活性，IC₅₀如表2所示。鉴于COX-2和炎症的密切关系，说明化合物具有一定的抗炎活性。

表2.化合物抑制COX-1和COX-2的活性

在上述实施例中，对各个实施例的描述都各有侧重，某个实施例中没有详述的部分，可以参见其它实施例的相关描述。

以上为对本发明所提供的技术方案的描述，对于本领域的技术人员，依据本发明实施例的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims

1.一种具有选择性抑制COX-2活性的酚性杂萜化合物，其特征在于，所述化合物命名为(+)-Lucidumone和(–)-Lucidumone，所述化合物的结构式为：

2.一种含有酚性杂萜化合物的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1中所述的酚性杂萜化合物(+)-Lucidumone、(–)-Lucidumone或其药学上可接受的盐类。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为药物制剂，由(+)-Lucidumone、(–)-Lucidumone组成。

4.权利要求1所述的具有选择性抑制COX-2活性的一对酚性杂萜化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

取赤芝40kg，粉碎，用12倍体积95％乙醇渗漉提取，提取流速为180mL/min，减压回收乙醇，得浸膏1.7kg,悬浮于温水，用乙酸乙酯等体积萃取4次，得到乙酸乙酯部分1.3kg；

1.3kg乙酸乙酯部分用MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇/水以：40:60,50:50,60:40,70:30,80:20,90:10,100:0的梯度洗脱，TLC检测合并相同流份，得Fractions A-I共9个馏分段；14.1gFr.B经Sephadex LH-20柱层析分离，甲醇洗脱，合并得到3个部分，B1-B3；6.4gFr.B2再经RP-18柱层析划段，甲醇/水梯度洗脱为：30:70,40:60,50:50,60:40,70:30,80:20,90:10,100:0，得到7个组分，B21-B27；1.97gFr.B21经Sephadex LH-20柱层析分离，甲醇洗脱，合并得到2个部分，B211-B212；1.4gFr.B212经MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇/水以：25:75,35:65,45:55,55:45,65:35,75:25,85:15,100:0的梯度洗脱得到6个组分，B2121-B2126；420mgFr.B2122经Sephadex LH-20柱层析分离后进一步使用半制备HPLC其中，乙腈/水：15:85，纯化得(±)-Lucidumone1.8 mg，t_R＝28.1min；该化合物是一对对映体，在正己烷/异丙醇为68:32的条件下经过手性拆分，得到(+)-Lucidumone0.4 mg，t_R＝5.2min和(–)-Lucidumone 0.6mg，t_R＝10.6min。