CN110624054A - 一种治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶，由中药组合物和基质组成，其特征在于，所述中药组合物包括以下重量份数的组分制备：炒黄芩25～35份，党参25～35份，当归15～25份，炒白术25～35份，白芍25～35份，茯苓25～35份，陈皮6～15份，制乳香10～20份，制没药10～20份、白芨15～25份，银花15～25份，黄连15～25份，生甘草6～15份。与现有技术相比，其能够促进皮肤创伤愈合，改善大鼠损伤皮肤组织病理学，促进成纤维细胞趋化，抑制炎症相关转录因子；同时，其采用多成分发挥协同作用，具有清热解毒燥湿与补益气血、养阴祛瘀生肌并用，功效更多。

Description

一种治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶及其制备方法与 应用

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶及其制备方法与应用。

背景技术

皮肤是机体防御外界刺激和损伤的第一道屏障，机械性致伤造成的皮肤损伤将导致微生物入侵、水分和蛋白质流失、内分泌和免疫功能失调等情况，严重者可引起死亡，皮肤创伤的治疗对于人类的生命和健康至关重要。目前我们常使用的药物有抗生素、抗炎药物、固醇类、促成纤维细胞生长类等药物来治疗皮肤创伤，然而西药的使用对人体皮肤易引起刺激和过敏，不良反应较多，且价格昂贵。中药多为天然成分，具有伤口愈合快，疤痕形成轻等特点，通过增加创面毛细血管的通透性，促进创面血液循环，改善创面组织的微循环，特别对一些难愈性的创伤有着显著的优势，同时还具有副作用小的优势。因此，中药在治疗皮肤创伤具有自己的优势。现有的中药复方外用治疗皮肤损伤的剂型多是膏药、软膏剂，主要治疗烧烫伤、放射伤、慢性溃疡。当然也有采用了中药水凝胶剂型用于皮肤创伤性愈合，但报道很少，经查阅文献发现，已报道的中药水凝胶采用的成分都是单一中药成分，主要作用就是生肌，因此，需要开发一种多组分中药成分的复方水凝胶，以发挥更好的疗效。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶及其制备方法与应用。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶，由中药组合物和基质组成。其中，所述中药组合物包括以下重量份数的组分制备：炒黄芩25～35份，党参25～35份，当归15～25份，炒白术25～35份，白芍25～35份，茯苓25～35份，陈皮6～15份，制乳香10～20份，制没药10～20份、白芨15～25份，银花15～25份，黄连15～25份，生甘草6～15份。

作为本发明的优选技术方案，所述中药组合物包括以下重量份数的组分制备：炒黄芩30份，党参30份，当归20份，炒白术30份，白芍30份，茯苓30份，陈皮10份，制乳香15份，制没药15份，白芨20份，银花20份，黄连20份，生甘草10份。

作为本发明的优选技术方案，所述中药组合物包括以下重量份数的组分制备：炒黄芩30g，党参30g，当归20g，炒白术30g，白芍30g，茯苓30g，陈皮10g，制乳香15g，制没药15g，白芨20g，银花20g，黄连20g，生甘草10g。

本发明中药组合物中，炒黄芩、黄连、银花：具有清热解毒燥湿；党参、当归、茯苓、炒白术、白芍、白芨：补益气血、养阴生肌、健脾化湿，缓急止痛；制乳香、制没药：活血消肿、祛瘀止痛生肌；陈皮、生甘草：调中理气、缓急止痛、调和诸药。该中药组合物配伍特点是清热解毒燥湿与补益气血、养阴祛瘀生肌并用，补泻兼施，重在抗炎同时促进创面生长愈合。

其中，所述基质包括卡波姆、水和调节pH值的物质；其中，所述调节pH值的物质为三乙醇胺。

其中，所述的基质还包括辅料；其中，所述的辅料为丙三醇、尼泊金乙酯和甘油的三种组合物。

上述治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶的制备方法，包括如下步骤：

(1)将各中药原料按重量份数称取，混合均匀，浸泡于水中，煎煮，过滤，得到一次滤渣和一次滤液；

(2)将步骤(1)得到的一次滤渣浸泡于水中，煎煮，过滤，得到二次滤渣和二次滤液；合并步骤(1)的一次滤液和步骤(2)的二次滤液，浓缩，得到浓缩液；

(3)将卡波姆溶于水中，得到卡波姆水溶液，向其中加入步骤(2)得到浓缩液，加入调节pH值的物质，最后再加入辅料，即得中药复方水凝胶。

步骤(1)中，所述的浸泡于水，煎煮优选为将混匀后的中药原料浸没于水中30min后加入两倍量的水煎煮1h。

步骤(2)中，所述煎煮的时间为30min。

步骤(2)中，所述的浓缩为浓度至1～3.5g(生药)/mL。

步骤(3)中，卡波姆的浓度为4～7mg/mL，优选5mg/mL；卡波姆水溶液与浓缩液的体积比为1:(10～15)，优选1:13。

步骤(3)中，加入调节pH值的物质使体系的pH为6.5～7.5，体系的状态呈凝胶状；其中，体系的pH优选调节为7.0；控制辅料的添加量使得中药复方水凝胶中中药的含量为1～3.5g(生药)/mL。

其中，所述辅料的添加量优选为丙三醇0.2mL、尼泊金乙酯0.1g、甘油0.2mL；所述中药复方水凝胶中中药的含量为1～3.5g(生药)/mL。

上述中药复方水凝胶在治疗皮肤创伤愈合中的应用也在本发明的保护范围之内。

其中，所述的应用为改善损伤皮肤的组织病理，升高成纤维细胞功能的细胞因子含量，降低炎症相关转录因子的表达的作用，从而促进皮肤机械性损伤的创面愈合。

由于，皮肤创伤会导致微生物入侵、水分和蛋白质流失、内分泌和免疫功能失调等情况，严重者可引起死亡，因此，皮肤创伤的治疗对于人类的生命和健康至关重要。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下的优势：

(1)本发明所提供的中药复方水凝胶能够促进皮肤创伤愈合，改善大鼠损伤皮肤组织病理学，促进成纤维细胞趋化，抑制炎症相关转录因子。

(2)现有技术中，中药水凝胶治疗皮肤创伤性愈合的单一中药成分，功效单一的缺陷，与现有的单一成分的中药水凝胶制剂不同，本方中药多组分的水凝胶制剂，多组分共同作用，多成分发挥协同作用，具有清热解毒燥湿与补益气血、养阴祛瘀生肌并用，功效更多。另外，其多功效，多靶点，能够促进皮肤创伤性愈合；同时适应症是急性皮肤机械性损伤，促进皮肤愈合，发挥抗感染的功效，而目前的中药皮肤外用药主要治疗烧烫伤、放射伤、慢性溃疡等，因此与已有中药复方皮肤外用药不同。

附图说明

图1为各剂量组大鼠皮肤组织病理结果。

图2为本发明中药复方水凝胶对蛋白NF-κB,Smad3,Smad2表达(X±SD,n＝5)

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：中药复方水凝胶的制备方法

(1)中药组合物的组成：炒黄芩30克，党参30克，当归20克，炒白术30克，白芍30克，茯苓30克，陈皮10克，制乳香15克，制没药15克，白芨20克，银花20克，黄连20克，生甘草10克。

(2)将各中药原料按重量份数称取，混合均匀，浸没于水中30min后加入药物两倍量水煎制1h，滤过，药渣再煎制30min，两次药液混合加热浓缩，所得浓缩液另置备用(浓缩浓度至3.5g(生药)/mL和1g(生药)/mL)。

(3)0.1g卡波姆加入20mL纯水中溶解，然后按比例1:13加入上述制备的浓缩液，再加入适量三乙醇胺调pH＝7使之成凝胶状，最后加入辅料0.2mL丙三醇、0.1g尼泊金乙酯、0.2mL甘油得到3.5g(生药)/mL和1g(生药)/mL中药复方水凝胶剂。

实施例2：小鼠化学性创伤性溃疡的影响

(一)受试动物

昆明小鼠，SPF级，雌雄各半，18-22g，上海杰思捷实验动物有限公司，合格证：SCXK(沪)

(二)药品与试剂

本发明中药复方水凝胶为实施例1所制备

水合氯醛：济南嘉格化工生物有限公司，批号：20171203

锦虹创面修复诱导凝胶：山西康颐健科技有限公司，批号：20160802

(三)仪器与设备

电子天平，上海浦春科学仪器有限公司，JY5001

(四)实验方法

取小鼠50只，均为雄性，腹腔注射10％水合氯醛麻醉，用电推子背部脱毛，小鼠背部皮下注射稀盐酸(0.05mol·mL^-1)0.4mL/只，注射1天，3天后小鼠背部皮肤溃疡形成。将造模小鼠随机分为5组，每组10只，分别为：模型组：注射等量的生理盐水；基质组：给予卡波姆凝胶基质0.5％；本发明中药复方水凝胶低剂量组：1g·mL^-1；本发明中药复方水凝胶高剂量组：3.5g·mL^-1；阳性组：锦虹创面修复诱导凝胶：3g/支。自造模成功次日分别给各组小鼠局部外敷，在溃疡局部均匀敷2-3mm厚，约0.5mL·cm²，每天保持溃疡局部与相应药物接触时间6h，6h后以温生理盐水清洗用药局部；每天敷药1次，连续敷药10d。

(五)检测项目：

观察给药后小鼠化学性损伤皮肤溃疡创面愈合率：给药第5天处死小鼠，剪下小鼠溃疡创面皮肤，用透明薄膜描记创面面积，与原创面面积比较，计算不同组别创面愈合率。愈合率(％)＝(原创面面积－现创面面积)/原创面面积×100％。

(六)实验结果：

(1)本发明中药复方水凝胶对于小鼠化学性创伤性溃疡愈合率的影响

表1：本发明中药复方水凝胶对小鼠化学创伤性溃疡愈合率的影响(％)

与基质组比较，^*p<0.05

以上结果表明：给药5天后，与基质组比较，本发明中药复方水凝胶高剂量组和低剂量组愈合率无显著差异(P>0.05)，由此可知，本发明中药复方水凝胶对化学性损伤溃疡无明显治疗作用。

结论：本药对由化学性损伤造成的皮肤溃疡没有明显的改善作用。

实施例3：本发明中药复方水凝胶对大鼠皮肤机械性损伤的治疗作用

(一)受试动物

SD大鼠，SPF级，雌雄各半，180-220g,上海杰思捷实验动物有限公司提供，合格证：SCXK(沪)2013-0006

(二)药品与试剂：

本发明中药复方水凝胶为实施例1所制备

大鼠TGF-β1，IL-2，TNF-α酶联免疫分析试剂盒，上海源叶生物科技有限公司

锦虹创面修复诱导凝胶：山西康颐健科技有限公司，批号：20160802

NF-κB一抗:Abcam货号ab16502

Smad2一抗:Abcam货号ab13546

Smad3一抗:Abcam货号ab32157

β-actin一抗：Santa Cruz SC-47778

BCA蛋白浓度测定试剂盒：南京建成生物有限公司

(三)仪器与设备

低温高速离心机：德国Eppendorf

XHF-D高速分散器，宁波新芝生物科技股份有限公司

电子天平，上海浦春科学仪器有限公司，JY5001

酶标仪，上海科华实验系统有限公司，型号：ST360

电泳仪，上海天能科技有限公司，型号：EPS 300

凝胶成像系统，Bio-Rad公司型号：ChemiDoc MP

Mini-PROTEAN电泳系统：美国Bio-Rad

(四)实验方法

SD大鼠50只，用1％水合氯醛溶液麻醉大鼠，剔除其背部毛发，以无菌手术剪在背部在脊柱左右对称地剪开，每只大鼠背部开5个直径为0.7cm的圆形全层皮肤缺损的创面，深至皮下。大鼠造模后，以外敷形式将药物涂布在伤口表面约2-3mm厚，约0.5mL·cm²。模型组：空白皮肤不给予任何处理，基质组：给予卡波姆凝胶基质0.5％，中药复方水凝胶高剂量组3.5g·mL^-1；中药复方水凝胶低剂量1g·mL^-1；阳性组：锦虹创面修复诱导凝胶：3g/支。

(五)检测项目：

(1)观察给药后大鼠各组皮肤创面愈合率

在给药后第1天、第3天、第6天、第9天用透明薄膜描记创面面积，与原创面面积比较，计算不同组别创面愈合率。愈合率(％)＝(原创面面积－现创面面积)/原创面面积×100％。

(2)大鼠皮肤常规病理组织学切片染色

在给药后第9天处死各组大鼠，取皮肤创缘及周围0.5cm左右宽的组织，深达皮下组织，将组织块甲醛固定，常规石蜡包埋后。常规脱水，包埋，切片后作HE染色，光镜观察皮肤及肉芽组织结构改变。

(3)Elisa法检测大鼠皮肤组织细胞因子表达：

给药第9天，取大鼠伤口部位皮肤组织，用匀浆机制成10％的匀浆。Elisa法检测TGF-β1、IL-2、TNF-α的分泌的变化。

(4)Western blot法检测NF-κB,Smad2,Smad3蛋白表达

给药第9天，取大鼠皮肤组织，匀浆制备，采用Western印迹的方法，进行SDS-PAGE凝胶电泳，步骤参照文献。丽春红染色显示凝胶中的蛋白条带后，转移至PVDF膜上进行NF-κBp65,Smad2,Smad3蛋白的检测。一抗(1：200)和β-actin(1：1500)，二抗(1：5000)稀释。采用ECL化学发光试剂盒，显影定影水洗晾干后，对胶片感光条带进行灰度扫描。应用BIO-RAD图像分析软件对Western印迹杂交条带进行密度扫,检测NF-κB,Smad2,Smad3的蛋白表达。

(六)实验结果

(1)本发明中药复方水凝胶对于大鼠机械性创面愈合率的影响

表1：各组大鼠不同时间创面愈合率比较(n＝10)

与基质组比，^*p<0.05

以上结果表明：给药1，3，6，9天，与模型组比，基质组的愈合率无显著差异(P>0.05),给药6天后，与基质组比，中药复方水凝胶高剂量组能明显提高伤口愈合率(P<0.05),给药9天后，中药复方水凝胶高剂量组能显著提高伤口愈合率(P<0.01)。

(2)本发明中药复方水凝胶对大鼠机械性创面皮肤病理组织学影响

从图1中可以看出：模型组皮肤各层组织表皮层增厚，但未完全愈合并伴有组织轻度坏死；基质组表皮结构消失，可见渗出，真皮内见增生性反应，局部有充血；中药复方水凝胶低剂量组皮肤各层组织结构清晰，结缔组织明显，可见肉芽组织；高剂量组真皮层结构尚清晰，阳性组皮肤各层组织结构较完整清晰。

(3)Elisa法检测大鼠皮肤组织细胞因子TGF-β1、IL-2、TNF-α表达

表2：本发明中药复方水凝胶对各组大鼠TGF-β1、IL-2、TNF-α含量的影响(n＝10)

与基质组比，^*p<0.05

以上结果表明：与模型组相比，基质组TGF-β1，IL-2，TNF-α含量无明显差异(P>0.05)。与基质组相比，阳性药组、中药复方水凝胶高剂量组TGF-β1含量有显著升高，TNF-α显著下降，有差异(P<0.05)。

(4)免疫印迹法检测蛋白NF-κB,Smad2,Smad3表达

图2表明：与基质组相比，阳性药组、中药复方水凝胶高剂量组、低剂量组的NF-κB的表达明显下降(P＜0.05)，而Smad3、Smad2的蛋白表达无明显统计学差异(P＞0.05)。

以上试验研究表明：

(1)本药具有促进对大鼠机械性创伤的创面愈合率，对小鼠化学性创伤性溃疡模型的溃疡面积没有效果；(2)本药可明显改善大鼠损伤皮肤组织病理学；(3)本药能显著升高调节成纤维细胞功能的细胞因子TGF-β1含量，降低炎症因子TNF-α含量和炎症相关转录因子NF-κB的表达。

结论：本药具有促进皮肤机械性损伤的创面愈合率，改善损伤皮肤的组织病理，升高成纤维细胞功能的细胞因子含量，降低炎症因子和炎症相关转录因子的表达的作用，因此，本发明中药组合物可以用于治疗皮肤创伤愈合。

本发明提供了一种治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶及其制备方法与应用的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

Claims (10)

1.一种治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶，由中药组合物和基质组成，其特征在于，所述中药组合物包括以下重量份数的组分制备：炒黄芩25～35份，党参25～35份，当归15～25份，炒白术25～35份，白芍25～35份，茯苓25～35份，陈皮6～15份，制乳香10～20份，制没药10～20份、白芨15～25份，银花15～25份，黄连15～25份，生甘草6～15份。

2.根据权利要求1所述的治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶，其特征在于，所述中药组合物包括以下重量份数的组分制备：炒黄芩30份，党参30份，当归20份，炒白术30份，白芍30份，茯苓30份，陈皮10份，制乳香15份，制没药15份，白芨20份，银花20份，黄连20份，生甘草10份。

3.根据权利要求1所述的治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶，其特征在于，所述基质包括卡波姆、水和调节pH值的物质。

4.根据权利要求1所述的治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶，其特征在于，所述调节pH值的物质为三乙醇胺。

5.根据权利要求1所述的治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶，其特征在于，所述的基质还包括辅料；其中，所述的辅料为丙三醇、尼泊金乙酯和甘油的三种组合物。

6.权利要求1～5中任意一项所述治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将各中药原料按重量份数称取，混合均匀，浸泡于水中，煎煮，过滤，得到一次滤渣和一次滤液；

(2)将步骤(1)得到的一次滤渣浸泡于水中，煎煮，过滤，得到二次滤渣和二次滤液；合并步骤(1)的一次滤液和步骤(2)的二次滤液，浓缩，得到浓缩液；

(3)将卡波姆溶于水中，得到卡波姆水溶液，向其中加入步骤(2)得到浓缩液，加入调节pH值的物质，最后再加入辅料，即得中药复方水凝胶。

7.根据权利要求6所述治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，卡波姆的浓度为4～7mg/mL；卡波姆水溶液与浓缩液的体积比为1:(10～15)。

8.根据权利要求6所述治疗皮肤创伤愈合的中药复方水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，加入调节pH值的物质使体系的pH为6.5～7.5，体系的状态呈凝胶状；控制辅料的添加量使得中药复方水凝胶中中药的含量为1～3.5g/mL。

9.权利要求1～5中任意一项所述中药复方水凝胶在治疗皮肤创伤愈合中的应用。

10.根据权利要求9所述的中药复方水凝胶在治疗皮肤创伤愈合中的应用，其特征在于，所述的应用为改善损伤皮肤的组织病理，升高成纤维细胞功能的细胞因子含量，降低炎症相关转录因子的表达的作用，从而促进皮肤机械性损伤的创面愈合。