CN110616156A - 哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用，涉及生物制剂技术领域。所述发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。上述固态发酵培养基可以有效提高哈茨木霉菌种的发酵水平，进而提高哈茨木霉分生孢子的产孢量和孢子活性。同时发酵获得的孢子可直接应用于(农用)生物制剂的生产，而无需后处理步骤，具有很好的经济性。

Description

哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分 生孢子的生物制剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物制剂技术领域，尤其是涉及一种哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用。
背景技术
哈茨木霉归属于半知菌亚门，丝孢纲，从梗孢目，从梗孢科，木霉属。哈茨木霉及其代谢产物在植病生物防治、促进植物生长、提高植物产量、改善果实品质方面发挥着重要作用，因此其被视为生物农业领域最具应用价值的微生物菌种之一。根据Woo等人2014年的统计数据表明，全球范围内以哈茨木霉为主要活性成分的产品已有99种，其中美国Bioworks公司出品的Root Shield、Rootshield PLUS和Plant Shiled(哈茨木霉T-22)及以色列Makhteshim Agan公司出品Trichodex(哈茨木霉T-39)等产品已经商业化生产，并获准在美国、中国、加拿大、土耳其等多国销售。在我国截至2019年初，注册登记的哈茨木霉微生物肥料多达170余款，生物农药登记证2个，300亿cfu/g母药登记证1个。
哈茨木霉菌种的发酵水平，特别是发酵基质产孢量和孢子活性与其产品质量、生产成本、及田间效果密切相关。含高活性分生孢子多的菌剂产品往往货架期更长，此外分生孢子比菌丝片段具有更好的抗逆性和适应性，更有利于其在田间萌发定殖，形成优势菌群，进而发挥产品的功能。因此开发一种高效的哈茨木霉发酵工艺，提高分生孢子的产孢量，对其产品商业化开发具有重要意义。
固态发酵被广泛应用于真菌孢子制剂生产、食品加工、酶制剂和化学物质生产等领域。丝状真菌采用固态发酵工艺进行生产，具有菌丝易繁殖、产孢量大、酶系丰富、酶活力高、处理简单、生产能耗低及无废水排放等诸多优势。根据已有的文献报道，哈茨木霉固态发酵基质多采用粮食如玉米粉、大米及其副产物稻壳、麸皮，同时配合适量快速碳氮源及微量元素。发酵培养基的产孢量多数低于100亿孢子/g，发酵工艺繁琐，投入产出比相对较低，很大程度上制约了哈茨木霉相关产品的开发和应用。
因此，开发一种高效的哈茨木霉发酵工艺，提高分生孢子的产孢量，并对该分生孢子的应用进行探索，以缓解现有农作物化学防治中环境污染、农药残留对人畜安全隐患造成的问题，探索植物病害的生物解决方案，变得十分必要和迫切。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种哈茨木霉固态发酵培养基，该培养基可以有效的提高哈茨木霉菌种的发酵水平，提高分生孢子的产孢量，同时对发酵得到的分生孢子的应用进行探索，进而提高现有含哈茨木霉生物制剂的应用效果，为探索植物病害的生物防治方法提供更为有效的方案。
本发明提供的一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：
所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；
所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。
进一步的，所述固体发酵基质与营养液搅拌混匀后得到的发酵培养基的含水量为45～55wt％。
优选的，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为50～55wt％；
更优选的，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为50wt％。
进一步的，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为3～5：1。
进一步的，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.4％、硫酸镁0.1～0.3％、氯化钙0.03～0.06％，余量为水，所述各组分的质量百分比之和为100％；
优选的，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.3％、硫酸镁0.1～0.2％、氯化钙0.03～0.05％，余量为水，所述各组分的质量百分比之和为100％；
更优选的，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.3％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％和水99.45％。
本发明提供的一种哈茨木霉分生孢子，所述分生孢子由保藏编号为CGMCCNo.15679的哈茨木霉菌株接种于上述哈茨木霉发酵培养基上发酵制得。
进一步的，所述哈茨木霉菌株发酵过程中的发酵温度为26～30℃，发酵时间为5～7天。
优选的，所述发酵过程中的发酵温度为28℃，发酵时间为6.5天。
进一步的，所述哈茨木霉菌株接种过程中，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：50～80。
优选的，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：60～70；
更优选的，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：65；
优选的，所述哈茨木霉菌株接种液中孢子浓度为1.8～2.2×108孢子/mL；
更优选的，所述哈茨木霉菌株接种液中孢子浓度为1.9～2.1×108孢子/mL。
本发明提供的一种含有上述哈茨木霉分生孢子的生物制剂。
进一步的，所述生物制剂主要由上述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和水复配得到；
优选的，所述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水的复配质量比为(10～15)：(4～6)：(2～3)：(1～2)：(70～90)。
本发明提供的一种上述哈茨木霉分生孢子或上述生物制剂在植物病虫害防治领域的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。其中，补充蛋白胨的主要目的是进一步平衡发酵物料碳氮比，为哈茨木霉菌丝营养生长提供更为高效的氮源，同时Mg2+和Ca2+等金属离子的添加可促进分生孢子的产生。所述哈茨木霉固态发酵培养基可以有效提高哈茨木霉菌种的发酵水平，进而提高哈茨木霉分生孢子的产孢量和孢子活性。
本发明提供的一种哈茨木霉分生孢子，所述分生孢子由保藏编号为CGMCCNo.15679的哈茨木霉菌株接种于上述哈茨木霉发酵培养基上发酵制得，上述发酵过程中，哈茨木霉菌株具有优异的产孢效果，同时发酵获得的孢子可直接应用于农业菌剂的生产，而无需后处理步骤，具有很好的经济性。
本发明提供的一种含有哈茨木霉分生孢子的生物制剂，该生物制剂包含本发明的哈茨木霉分生孢子，可以广泛应用于植物病虫害防治领域。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面，一种哈茨木霉发酵培养基，所述发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：
所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；
所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。
本发明提供的哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基包括固体发酵基质与营养液搅拌混匀后制得，其中：所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮组成；所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁、氯化钙。所述哈茨木霉发酵培养基可以有效提高哈茨木霉菌种的发酵水平，进而提高哈茨木霉分生孢子的产孢量和孢子活性。
在本发明的一种优选实施方式中，所述固体发酵基质与营养液搅拌混匀后得到的发酵培养基的含水量为45～55wt％。
作为一种优选的实施方式，上述固体发酵基质与营养液搅拌混匀后得到的发酵培养基的含水量为50～55wt％，上述含水量的发酵培养基具有很好的发酵效果，如发酵培养基的含水量达到60wt％，菌丝容易徒长，产孢量下降，同时在发酵过程中容易污染细菌；而如果发酵培养基的含水量低于45wt％，发酵基质偏干，菌丝生长不够旺盛，后期产孢量不足。
在本发明的一种优选实施方式中，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为3～5：1。
优选的，上述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为4：1。
在本发明的一种优选实施方式中，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.4％、硫酸镁0.1～0.3％、氯化钙0.03～0.06％，余量为水，所述各组分的质量百分比之和为100％；
优选的，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.3％、硫酸镁0.1～0.2％、氯化钙0.03～0.05％，余量为水，所述各组分的质量百分比之和为100％；
更优选的，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.3％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％和水99.45％。
本发明中，通过对各组分用量比例的进一步调整和优化，从而进一步优化了本发明营养液的功效。
优选的，所述水为纯净水。
根据本发明的一个方面，一种哈茨木霉分生孢子，所述分生孢子由保藏编号为CGMCC No.15679的哈茨木霉菌株接种于上述哈茨木霉发酵培养基上发酵制得。
本发明提供的一种哈茨木霉分生孢子，所述分生孢子由保藏编号为CGMCCNo.15679的哈茨木霉菌株接种于上述哈茨木霉发酵培养基上发酵制得，上述发酵过程中，哈茨木霉菌株具有优异的产孢效果，同时发酵获得的孢子可直接应用于农业菌剂的生产，而无需后处理步骤，具有很好的经济性。
作为一种优选的实施方式，上述保藏编号为CGMCC No.15679的哈茨木霉菌株，编号为哈茨木霉MN12371，该菌株分离自海南省五指山某农田土壤。菌株在PDA平板上，25℃培养3天，菌落直径为7.0～9.0cm，菌落圆形平坦，菌丝初期为白色，后变为米黄色，最后为淡绿色，菌丝繁密，绒毡状，菌落背面无色。
该菌株菌丝透明有隔，初生分枝与主枝呈直角，分枝较为繁复；分生孢子梗成金字塔状结构，末端小梗瓶形，束生、对生或互生，长度2.5～3.0μm×4.0～10.0μm。分生孢子球形，淡绿色，光滑，直径2.02～2.89μm×1.99～2.46μm。MN12371菌株ITS序列与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)(Accession No.MH865862)的同源性达100％。并于2018年5月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15679。
在本发明的一种优选实施方式中，所述哈茨木霉菌株发酵过程中的发酵温度为26～30℃，发酵时间为5～7天。
优选的，所述哈茨木霉菌株发酵过程中的发酵温度为28℃，发酵时间为6.5天。
作为一种优选的实施方式，温度低于26℃时，哈茨木霉菌丝生长延缓，延长发酵周期；温度高于30℃时，哈茨木霉菌丝生长缓慢，甚至影响菌丝活性，进而严重影响产孢。发酵时间低于5天时，哈茨木霉尚未全部产分生孢子；发酵时间5～7天为哈茨木霉产孢高峰期；发酵时间超过7天时，大量孢子出现二次萌发现象，会造成以孢子为活性物质的生物制剂的生防效果不稳定。
在本发明的一种优选实施方式中，所述哈茨木霉菌株接种过程中，所述哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：50～80。
上述哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比典型但非限制性的优选实施方案为：1：50、1：60、1：70和1：80。
在上述优选实施方式中，所述哈茨木霉菌株接种液中孢子浓度为1.8～2.2×108孢子/mL。
优选的，上述哈茨木霉菌株接种液中孢子浓度为2.0×108孢子/mL。
根据本发明的一个方面，一种含有上述哈茨木霉分生孢子的生物制剂。
本发明提供的一种含有哈茨木霉分生孢子的生物制剂，该生物制剂包含本发明的哈茨木霉分生孢子，可以广泛应用于棉花立枯病的防治。
在本发明的一种优选实施方式中，所述生物制剂主要由上述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水复配得到；
优选的，所述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水的复配质量比为(10～15)：(4～6)：(2～3)：(1～2)：(70～90)。
更优选的，上述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水的复配质量比为12：5：2：1：80。
本发明提供的上述哈茨木霉分生孢子或上述生物制剂可以广泛应用于在植物病虫害防治领域中。
下面将结合实施例和对比例对本发明的技术方案进行进一步地说明。
实施例1
一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基由固体发酵基质与营养液营养液搅拌混匀至含水量55％制得，其中：
所述固体发酵基质为陈化米和麸皮，所述固体发酵基质基质中陈化米和麸皮的质量比为3：1。
所述营养液营养液，按质量百分数计，由以下成分配制得到：蛋白胨0.2％、硫酸镁0.1％、氯化钙0.03％，余量为水。
实施例2
一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基由固体发酵基质与营养液搅拌混匀至含水量50％制得，其中：
所述固体发酵基质为陈化米和麸皮，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为5：1。
所述营养液，按质量百分数计，由以下成分配制得到：蛋白胨0.4％、硫酸镁0.3％、氯化钙0.06％，余量为水。
实施例3
一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基由固体发酵基质与营养液搅拌混匀至含水量55％制得，其中：
所述固体发酵基质为陈化米和麸皮，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为3：1。
所述营养液，按质量百分数计，由以下成分配制得到：蛋白胨0.2％、硫酸镁0.1％、氯化钙0.04％，余量为水。
实施例4
一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基由固体发酵基质与营养液搅拌混匀至含水量45％制得，其中：
所述固体发酵基质为陈化米和麸皮，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为4：1。
所述营养液，按质量百分数计，由以下成分配制得到：蛋白胨0.4％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.06％，余量为水。
实施例5
一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基由固体发酵基质与营养液搅拌混匀至含水量50％制得，其中：
所述固体发酵基质为陈化米和麸皮，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为4：1。
所述营养液，按质量百分数计，由以下成分配制得到：蛋白胨0.3％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％，余量为水。
对比例1
一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基由固体发酵基质与营养液搅拌混匀至含水量50％制得，其中：
所述固体发酵基质为陈化米；
所述营养液为水。
对比例2
本对比例除不含麸皮外，其余同实施例5。
对比例3
一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基由固体发酵基质与营养液搅拌混匀至含水量50％制得，其中：
所述固体发酵基质为高粱仁、豆粕和稻壳，所述固体发酵基质中玉米粉、豆粕和稻壳的质量比为3：1：1。
所述营养液，按质量百分数计，由以下成分配制得到：蛋白胨0.3％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％，余量为水。
对比例4
一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基由固体发酵基质与营养液搅拌混匀至含水量50％制得，其中：
所述固体发酵基质为麦仁、玉米粉和豆粕，所述固体发酵基质中麦仁、玉米粉和豆粕的质量比为3：1：1。
所述营养液，按质量百分数计，由以下成分配制得到：蛋白胨0.3％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％，余量为水。
对比例5
本对比例除发酵培养基的含水量为40％外，其余同实施例5。
对比例6
本对比例除发酵培养基的含水量为60％外，其余同实施例5。
实施例6(接种液的制备)
首先，将保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、保藏编号为CGMCC No.15679的哈茨木霉MN12371菌株接种在PDA平板上，于28℃条件下培养7d进行菌株活化；
随后，用含有0.1％吐温的灭菌水冲洗活化后的菌种，并刮下菌丝和孢子，并用纱布过滤于三角瓶中，同时放置于摇床使孢子充分分散，调整种子液含量为2.0×108孢子/mL备用。
效果例1
为了说明本申请发酵培养基的优势，发明人分别取实施例1～5和对比例1～6制备得到的哈茨木霉固态发酵培养基50g分别装入发酵瓶中，并按比例加入营养液，于121℃条件下湿热灭菌30min。待发酵物料冷却后，分别加入实施例6制备得到的接种液1mL并充分混匀，接种后1～2d于28℃培养，第3～4d于26℃培养，其中发酵至60～72h，翻动发酵物料1～2次，5～7d恢复28℃恒温培养箱培养，发酵周期维持6.5d。发酵结束后，向每个发酵瓶中加入0.1％吐温灭菌水250mL，摇床转速调至200r/min振荡30min，然后进行梯度稀释，用血球计数板检测孢子数。以上各实施例和对比实施例中所检测的孢子数，均为不同含水量湿物料的孢子数，为方便比较，发酵物料都按8％含水量干物料进行孢子数统一换算。
所述实施例6接种液在各培养基中的产孢情况，以及实施例5相对于对比例1～4的产孢量增加百分率如下表1、2所示。
表1：所述实施例6接种液在各培养基中的产孢情况。
组别 产孢量(×10<sup>8</sup>孢子/g)
实施例1 214
实施例2 211
实施例3 210
实施例4 189
实施例5 238
对比例1 132
对比例2 167
对比例3 144
对比例4 179
对比例5 92
对比例6 115
表2：实施例5相对于对比例1～4的产孢量增加百分率。
由上述可知，本发明由保藏编号为CGMCC No.15679的哈茨木霉菌株在本发明所述的发酵培养基上具有优异的产孢效果，产孢量可以达到238×108孢子/g左右，明显优于现有的发酵培养基，投入产出比值更高，更适用于工业化生产。
实施例7
一种生物制剂，所述生物制剂由实施例5制备得到的哈茨木霉分生孢子与聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水复配得到；
所述实施例5制备得到的哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水的复配质量比为10：4：2：1：70；
所述裹种孢子数为0.1×105孢子/g。
实施例8
一种生物制剂，所述生物制剂由实施例5制备得到的哈茨木霉分生孢子与聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水复配得到；
所述实施例5制备得到的哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水的复配质量比为15：6：3：2：90；
所述裹种孢子数为0.76×105孢子/g。
实施例9
一种生物制剂，所述生物制剂由实施例5制备得到的哈茨木霉分生孢子与聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水复配得到；
所述实施例5制备得到的哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水的复配质量比为12：5：2：1：80；
所述裹种孢子数为10.1×105孢子/g。
效果例2(棉花立枯病的防治效果实验)
1、实验目的：
验证哈茨木霉MN12371发酵孢子生物制剂对棉花立枯病的防治效果。
2、棉花种子处理
将棉花种子用自来水反复冲洗后，于55℃温水中浸种10min，然后用无菌纱布包裹于室温条件下催芽36h，挑取露白的棉籽。将本发明实施案例7～9制备的哈茨木霉发酵孢子生物制剂用无菌水进行梯度稀释，然后分别按10：1(V/W)比例与棉籽进行种子处理。
3、育苗盘试验
将保存于-80℃的棉花立枯病病原菌立枯丝核菌移到PDA平板(7.5mL PDA培养基，直径6cm上，25℃培养3d后，取1.2g含有立枯丝核菌的培养基，用打浆机将菌丝打碎，加入100mL灭菌水搅匀。将菌液与灭菌土(121℃高压灭菌2h)充分混匀，使病原菌与土壤的比例为1:1500。将接种土壤装入花盆(直径15cm，高13cm)中，每盆装土约600g。将棉花种子(中棉所12号)用自来水反复冲洗后，于55℃下温汤浸种10min，再放置25℃温箱中保温催芽，挑取露白的棉籽播入上述花盆中，每盆10粒，均匀排列，并用灭菌土覆盖。另设不接菌作空白对照。每处理3次重复，随机排列，定期加水调节土壤温度，20-32℃下生长14～21d后，根据病情分级标准，调查发病情况。
棉花立枯病病菌发病参照0-5级分级标准：0-无病(无症状)；1-茎秆上有褐斑，不足茎周1/2；2-病斑达茎周的1/2；3-病斑达茎周的1/2-3/4；4-病斑超过茎周3/4；5-直至全株死亡。
平均病指数(％)＝∑(各级病株数×病级值)×100/调查总株数×最高级值。
相对防效(％)＝(发病对照病情指数-各处理病情指数)/发病对照病情指数×100。
所述育苗盘试验结果如表3所示。
表3：育苗盘试验结果
由上述可知，播种后10d棉花立枯病发病对照的病情指数为71.9％，以本申请实施例7～9制得的生物制剂处理后，棉花植株病情指数可保持在31.3～37.5％，相对防效能达到47.8～56.5％，说明本申请哈茨木霉的发酵孢子能够有效抑制棉花立枯病发生。另外，当棉花种子包裹的孢子量达到≥104孢子/g水平时，对棉花立枯病防效可达到50％左右，说明本发明提供的哈茨木霉发酵孢子生物制剂具有良好的商品化潜力，在棉花种植中具有重要价值。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，所述哈茨木霉固态发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：
所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；
所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。
2.根据权利要求1所述的哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为45～55wt％；
优选的，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为50～55wt％；
更优选的，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为50wt％。
3.根据权利要求1或2所述的哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为3～5：1。
4.根据权利要求1或2所述的哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，按质量百分比计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.4％、硫酸镁0.1～0.3％、氯化钙0.03～0.06％，余量为水，各组分的质量百分比之和为100％；
优选的，按质量百分比计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.3％、硫酸镁0.1～0.2％、氯化钙0.03～0.05％，余量为水，所述各组分的质量百分比之和为100％；
更优选的，按质量百分比计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.3％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％和水99.45％。
5.一种哈茨木霉分生孢子，其特征在于，所述分生孢子由保藏编号为CGMCC No.15679的哈茨木霉菌株接种于权利要求1～4任一项所述的哈茨木霉固态发酵培养基上发酵制得。
6.根据权利要求5所述的哈茨木霉分生孢子，其特征在于，发酵过程中的发酵温度为26～30℃，发酵时间为5～7天；
优选的，所述发酵过程中的发酵温度为28℃，发酵时间为6.5天。
7.根据权利要求5所述的哈茨木霉分生孢子，其特征在于，所述哈茨木霉菌株接种过程中，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：50～80；
优选的，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：60～70；
更优选的，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：65；
优选的，所述哈茨木霉菌株接种液中孢子浓度为1.8～2.2×108孢子/mL；
更优选的，所述哈茨木霉菌株接种液中孢子浓度为1.9～2.1×108孢子/mL。
8.一种含有权利要求5～7任一项所述哈茨木霉分生孢子的生物制剂。
9.根据权利要求8所述的生物制剂，其特征在于，所述生物制剂主要由权利要求5～7任一项所述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和水复配得到；
优选的，所述权利要求5～7任一项所述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水的复配质量比为(10～15)：(4～6)：(2～3)：(1～2)：(70～90)。
10.一种权利要求5～7任一项所述的哈茨木霉分生孢子或权利要求8或9所述的生物制剂在植物病虫害防治领域的应用。
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