CN110585435A - 具有抗癌效果的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有抗癌效果的组合物及其应用。所述组合物的活性成分包含有白术内酯和Chk1抑制剂。本发明的具有抗癌效果的组合物，将白术内酯和Chk1抑制剂组合在一起，通过二者相互配合，发挥显著协同增效作用，比单独施用白术内酯或Chk1抑制剂的抗癌效果好得多。

Description

具有抗癌效果的组合物及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种具有抗癌效果的组合物及其应用。

背景技术

在癌症治疗中，诸多化疗药物会直接造成肿瘤细胞DNA的损伤。细胞DNA受损后会激活细胞周期检测点激酶1(Chk1)以阻滞细胞周期，从而为DNA修复提供更多时间，减少肿瘤细胞的死亡，大大降低了临床抗肿瘤药物的疗效。因此通过对Chk1活性的抑制，可阻碍发生DNA损伤的肿瘤细胞在细胞周期检测点获得修复，从而导致肿瘤细胞的死亡增加。

MK-8776是一种特异性Chk1抑制剂，已在临床试验中被广泛用于治疗包括黑色素瘤在内的多种实体瘤及血液肿瘤。MK-8776可以诱导肿瘤细胞DNA双键断裂并显著抑制Chk1的激活，致使肿瘤细胞无法依赖检测点进行DNA修复，进入有丝分裂灾难并逐渐凋亡。然而，该Chk1抑制剂只对部分黑色素瘤患者具有一定的疗效。如何提高Chk1抑制剂在制备抗癌药物中的应用值得深入研究。

白术内酯I(Atractylenolide I，AT-I)是白术、苍术等中药的活性成分，为倍半萜类化合物。据报道，AT-I可以通过调节免疫功能来改善胃癌患者的恶性体质。现代药理学研究表明AT-I具有抗炎、抗多种肿瘤的活性，还能增强卵巢癌细胞对DNA损伤剂的敏感性。

虽然单独用AT-I或Chk1抑制剂治疗癌症已在临床试验阶段，但抗癌效果有待提高。

发明内容

基于此，本发明的主要问题是提供一种具有抗癌效果的组合物，该组合物的活性成分包含有白术内酯和Chk1抑制剂，该组合物中，白术内酯和Chk1抑制剂发挥显著的协同增效作用，具有很好的抗肿瘤效果。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的主要目的是提供一种具有抗癌效果的组合物，所述组合物的活性成分包含有白术内酯类化合物和Chk1抑制剂。

在其中一个实施例中，所述Chk1抑制剂为MK-8776(SCH900776)、Prexasertib(LY2606368)和SRA737中的一种或几种。

在其中一个实施例中，所述Chk1抑制剂为MK-8776(SCH900776)。

在其中一个实施例中，所述白术内酯类化合物为白术内酯I、白术内酯II和白术内酯III中的一种或几种。

在其中一个实施例中，所述白术内酯类化合物为白术内酯I。

在其中一个实施例中，所述组合物中，白术内酯和Chk1抑制剂的质量比为1:(0.1-5)。

本发明的还一目的是提供一种上述的组合物在制备治疗癌症的药物中的应用。

本发明的又一目的是提供一种治疗癌症的药物，所述药物包含有上述的组合以及物药学上可以接受的辅料。

在其中一个实施例中，所述药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、涂剂、洗剂、口服液或注射液。

在其中一个实施例中，所述药物为注射液。

在其中一个实施例中，所述癌症为黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌症、眼部癌症、口部癌症、肺部癌症、肝脏癌症、骨癌症、脑部癌症、胃肠道癌症、神经系统癌症、泌尿生殖道癌症、妇科癌症、甲状腺癌症、肾上腺癌症、白血病或淋巴癌。

在其中一个实施例中，所述癌症为黑色素瘤。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明的具有抗癌效果的组合物，将白术内酯和Chk1抑制剂组合在一起，通过二者相互配合，发挥显著协同增效作用，比单独施用白术内酯或Chk1抑制剂的抗癌效果好得多。

附图说明

图1、AT-I/MK-8776组合对人恶性黑色素瘤细胞A375和IGR-1存活率的影响；

图2、AT-I/MK-8776组合对正常成纤维细胞L929及正常肝细胞MIHA存活率的影响；

图3、AT-I/MK-8776组合对小鼠黑色素瘤细胞B16皮下荷瘤小鼠肿瘤生长的影响；

图4、AT-I/MK-8776组合对人恶性黑色素瘤细胞A375皮下荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:ColdSpring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本实施例提供一种具有抗癌效果的组合物，该组合物的活性成分包含有白术内酯和Chk1抑制剂。

在一个实施例中，所述Chk1抑制剂，包含多种Chk1抑制剂，如MK-8776(SCH900776)、Prexasertib(LY2606368)、SRA737。可以理解的是，Chk1抑制剂的种类不受上述例子所限制。

在一个实施例中，所述白术内酯是包括白术内酯I、白术内酯II、白术内酯III等存在于白术、苍术等中药中的内酯类化合物，以及含有这些类化合物的药物、保健品及功能性食品。

在一个实施例中，所述组合物中，白术内酯和Chk1抑制剂的质量比为1:(0.1-5)。

本实施例还提供一种上述具有抗癌效果的组合物在制备治疗癌症的药物中的应用。

本实施例的治疗癌症的药物，为直接治疗癌症的药物或者用于制备治疗癌症的辅助药物。上述辅助药物可用于辅助放疗或其他抗肿瘤化疗药物、靶向制剂、免疫疗法、生物疗法等治疗癌症。

本实施例还提供一种治疗癌症的药物，所述治疗癌症的药物包含有上述具有抗癌效果的组合物以及药学上可以接受的辅料。

在一个实施例中，所述治疗癌症的药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、涂剂、洗剂、口服液、注射液等任何一种剂型，但不受上述所列剂型所限制。上述各种剂型的药物均可按照药学领域的常规方法制备。可经注射、口服或外用形式给药，给药途径不受上述例子所限制。

在一个实施例中，所述的癌症包括黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌症、眼部癌症、口部癌症、肺部癌症、肝脏癌症、骨癌症、脑部癌症、胃肠道癌症、神经系统癌症、泌尿生殖道癌症、妇科癌症、甲状腺癌症、肾上腺癌症、白血病、淋巴癌等多种癌症，以及对现有药物治疗抵抗或耐受的癌症。癌症的种类不受上述例子所限制。

实施例1

本实施例采用MTT法，评价了AT-I与/或MK-8776对恶性黑色素瘤细胞、正常成纤维、肝细胞存活率的影响。

人体恶性黑色素瘤细胞A375、IGR-1以及正常成纤维细胞L929和正常肝细胞MIHA的培养体系采用含有1％双抗生素(青霉素/链霉素)、5％胎牛血清的DMEM培养基，于37℃，5％CO₂细胞培养箱中培养。

上述各细胞经胰酶消化后，用完全培养基制成每毫升含细胞个数为3×10⁴/mL的悬液，接种于96孔培养板，每孔100μL，放入37℃，5％CO₂细胞培养箱中培养24h后弃去细胞液，空白对照组加入含有0.1％DMSO的完全培养基，给药组分别加入0.25μM的MK-8776、0.5μM的MK-8776、100μM的AT-I、0.25/100μM的MK-8776/AT-I组合以及0.5/100μM的MK-8776/AT-I组合。每个浓度设3个副孔。孵育48h后每孔加入10L的MTT溶液(5mg/mL，PBS溶液配置)，继续培养4h后，用移液枪吸取上清液，然后每孔中分别加入100L DMSO，于振荡器上避光摇至结晶完全溶解，最后在紫外分光光度计下以波长570nm参比630nm来测定各孔的吸光值，计算各组细胞的存活率。结果请参见表1、图1、图2。

如图1所示，AT-I与MK-8776能够协同抑制恶性黑色素瘤细胞A375、IGR-1的增殖(**，CDI<0.7；协同作用显著)，并呈现明显的剂量效应关系。再如图2所示，相同剂量下的AT-I与/或MK-8776并未对正常皮肤纤维细胞L929和正常肝细胞MIHA的增殖产生显著抑制的作用。这一系列的数据支持了AT-I/MK-8776组合可以协同抑制肿瘤细胞的增殖，而对正常细胞无明显影响。

表1各给药组的存活率(％)

实施例2

本实施例建立小鼠黑色素瘤B16同种移植瘤模型评价AT-I与/或MK-8776的体内抗肿瘤效果。

雄性C57BL/6小鼠(约6周大小)，体重约为25g，由香港科技大学动物实验中心提供。在香港浸会大学实验动物中心恒温，自然光照环境中，饲养1周后开始建立小鼠黑色素瘤B16同种移植瘤模型评价AT-I与/或MK-8776的体内抗肿瘤效果。

取B16细胞按5×10⁵/0.1mL/只皮下接种于小鼠背部。将小鼠按体重随机分成4组，每组4只，从第一天开始腹腔注射给药，空白对照组给予等量溶剂(30％PEG400，5％吐温80，5％二甲基亚砜，60％PBS)，AT-I给药组和AT-I/MK-8776组合给药组腹腔给予剂量为20mg/kg/d的AT-I，0.2mL/只，每天一次，连续给药两周。一周后，MK-8776给药组和AT-I/MK-8776组合给药组腹腔给予剂量为4mg/kg/d的MK-8776，0.2mL/只，每天一次，连续给药一周。

实验期间每隔2-3天测量一次肿瘤的体积(长×宽×高，mm³)，并记录动物体重(g)。两周后脱颈处死动物，收集动物体内肿瘤样本并拍照记录。结果见表2及图3。

表2

实验结果表明，自模型建立后第一天起连续给予AT-I(20mg/kg/d)可以在一定程度上对小鼠体内黑色素瘤的生长起到预防作用，MK-8776以及AT-I/MK-8776组合可显著抑制小鼠体内肿瘤的生长(**，p<0.01)。在给药后的第13天和第16天，AT-I/MK-8776组合给药组小鼠的肿瘤体积相较于空白对照组明显发生了缩小(*，p<0.05)。所有处理组的动物没有明显的体重下降或行为异常。

实施例3

本实施例建立人恶性黑色素瘤A375异种移植瘤模型来评价AT-I与/或MK-8776的体内抗肿瘤疗效。

雄性BALB/c-nu/nu裸鼠(约8周大小)，体重约为25g，由香港中文大学动物实验中心提供。在香港浸会大学实验动物中心恒温恒压无菌环境中，自由摄食饮水1周后开始建立人恶性黑色素瘤A375异种移植瘤模型来评价AT-I与/或MK-8776的体内抗肿瘤疗效。

取A375细胞按3×10⁶/0.1mL/只皮下接种于小鼠背部。一周后，将小鼠按肿瘤大小随机分成6组，每组5只，腹腔注射给药，连续给药两周。空白对照组给予等量溶剂(30％PEG400，5％吐温80，5％二甲基亚砜，60％PBS)；AT-I的单用剂量为20mg/kg/d，7次/周，0.2mL/只；MK-8776的单用剂量为4mg/kg/d，5次/周，0.2mL/只；AT-I/MK-8776组合用药的剂量为20mg/kg/d的AT-I+4mg/kg/d的MK-8776。开始给药后，每隔2-3天测量一次肿瘤的体积(长×宽×高，mm³)，并记录动物体重(g)。两周后脱颈处死动物，收集动物体内肿瘤样本并拍照记录。结果见表3及图4。

表3

如图4所示，AT-I与MK-8776协同抑制裸鼠体内恶性黑色素瘤的生长：AT-I/MK-8776组合给药组的肿瘤重量和体积显著小于空白对照组及AT-I或MK-8776单一给药组(##，CDI<0.7；协同作用显著)。所有处理组的动物没有明显的体重下降或行为异常。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种具有抗癌效果的组合物，其特征在于，所述组合物的活性成分包含有白术内酯和Chk1抑制剂。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述Chk1抑制剂为MK-8776、Prexasertib和SRA737中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述白术内酯为白术内酯I、白术内酯II和白术内酯III中的一种或几种。

4.根据权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物中，白术内酯和Chk1抑制剂的质量比为1:(0.1-5)。

5.权利要求1至4任一项所述的组合物在制备治疗癌症的药物中的应用。

6.一种治疗癌症的药物，其特征在于，所述药物包含有权利要求1至4任一项所述的组合以及物药学上可以接受的辅料。

7.根据权利要求6所述的治疗癌症的药物，其特征在于，所述药物为片剂、胶囊剂、或颗粒剂。

8.根据权利要求6所述的治疗癌症的药物，其特征在于，所述药物为涂剂、洗剂、口服液或注射液。

9.根据权利要求6至8任一项所述的治疗癌症的药物，其特征在于，所述癌症为黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌症、眼部癌症、口部癌症、肺部癌症、肝脏癌症、骨癌症、脑部癌症、胃肠道癌症、神经系统癌症、泌尿生殖道癌症、妇科癌症、甲状腺癌症、肾上腺癌症、白血病或淋巴癌。

10.根据权利要求9所述的治疗癌症的药物，其特征在于，所述癌症为黑色素瘤。