CN109045052B - 用于治疗结肠癌的药物配方与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于治疗结肠癌的药物配方与应用,所述的药物配方包含有人参皂苷Rh4和伊立替康,摩尔比为(2:1)‑(4:1)。所述的药物配方能够显著抑制结肠癌细胞增殖以及结肠癌裸鼠移植瘤的生长,效果明显优于同等剂量的人参皂苷Rh4或伊立替康单独使用,说明二者联用后具有协同增效作用,在医药学领域的应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及生物化工领域,具体涉及一种用于治疗结肠癌的药物配方与应用。
背景技术
结肠癌是人类最危险的恶性肿瘤之一,严重危害人类的生命与健康。根据《全球癌症报告2015》的统计资料,由于结肠癌而导致的死亡病例为774 000人。结肠癌的预后差、易复发,并且手术后5年的生存率极低,向其他癌症的转移率也较高。目前,治疗结肠癌的最常见的方法有手术治疗、放疗、化疗和生物治疗等。跟其他几种治疗方法相比,化疗能成功的治愈或明显延长病人的生命,在癌症的治疗中占有至关重要的地位,然而化疗基本上着眼于直接杀死肿瘤细胞,对正常细胞的损伤较大,药物选择性很小,毒副反应多且严重。例如会导致一系列的延迟性腹泻、胃肠道粘膜炎、中性粒细胞减少症等。
伊立替康是临床上用于结肠癌治疗的一线药物,但是由于属于细胞毒性类药物,对机体损伤大,无法持续性治疗。为减轻伊立替康的毒副作用,临床上通常采用联合其他化疗药物的方式对肿瘤进行间歇性治疗,但由于其他化疗药物同样存在较大的毒副作用,故效果并不明显。
鉴于以上原因,人们开始把目光转向天然产物抗肿瘤药物的研发上。天然产物在抑制或杀伤肿瘤细胞、减轻放化疗的毒副作用、调节机体免疫功能都具有重要作用。研究表明,人参皂苷除了具有免疫调节、抗氧化、抗炎和抗白血病的生物活性之外,还有显著的抗肿瘤效果。据报道,Rh2及其衍生物具有显着的抗肿瘤活性,在H22-荷瘤小鼠中具有低毒性和低副作用。另外,人参皂苷Rk1、Rg5具有对各种肿瘤细胞的抗增殖作用,并且体内实验证明对小鼠肾脏和肝脏功能均无毒性。
人参皂苷Rh4是三醇组人参皂苷与人参皂苷Rk3互为同分异构体。人参皂苷Rh4与其他稀有人参皂苷相比,易于溶解,生物利用度高,使其更容易用于药物。因此以人参皂苷Rh4和伊立替康联合用药来治疗结肠癌可能用以减少单独伊立替康化疗带来的各种毒副作用。
为制成口服剂、注射剂,增强药物的使用效果,上述的人参皂苷Rh4和伊立替康药物配方中可以添加有辅料或载体,所述的辅料为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖或胶原蛋白(发酵法)等药学上可接受的辅料,使用上述一种或几种辅料制成的缓释体系对上述药物配方再处理。所述的口服剂为硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液;所述的注射剂为溶液型。混悬液型、乳浊液型或冻干粉。
大量的临床和实验研究证明,联合药物疗法在肿瘤的防治和康复方面有特效。其与传统的单药治疗相比具有多种优点,如可以同时靶向多种重要信号通路、克服肿瘤耐药、降低毒副作用等。目前还未见有人参皂苷Rh4与伊立替康联合用药在治疗结肠癌中的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗结肠癌的药物配方与应用,配方中包括人参皂苷Rh4与伊立替康,能够明显抑制人结肠癌细胞的增殖,并且作用效果优于单独使用人参皂苷Rh4与伊立替康的药效,为将人参皂苷Rh4与伊立替康药物配方开发成一种治疗人结肠癌的药物提供了较充分的依据。
本发明所采用的技术方案为:
用于治疗结肠癌的药物配方,其特征在于:
所述的药物配方包含有人参皂苷Rh4和伊立替康,摩尔比为(2:1)-(4:1)。
人参皂苷Rh4纯度≥95%,伊立替康纯度为≥99%。
如所述的用于治疗结肠癌的药物配方的应用,其特征在于:
所述组合物作为治疗结肠癌药物的有效成分。
包含所述组合物的药物中含有医学上可接受的药用辅料,包括透明质酸钠、海藻酸钠、壳聚糖或者胶原蛋白。
包含所述组合物的药物为口服剂,包括硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液;或为注射剂,包括溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉。
所述组合物给药时,人参皂苷Rh4的给药剂量为20-120mg/kg,伊立替康的给药剂量为5-60mg/kg。
本发明具有以下优点:
本发明的药物配方可以有效地治疗结肠癌,效果明显优于同等剂量的人参皂苷Rh4或伊立替康单独使用,说明二者联用后具有协同增效作用,临床应用前景良好。
附图说明
图1为人参皂苷Rh4、伊立替康以及联合用药组对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用。
图2为人参皂苷Rh4、伊立替康以及联合用药组对人结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用。
图3为人参皂苷Rh4、伊立替康以及联合用药组诱导Caco-2细胞凋亡。
图4为人参皂苷Rh4、伊立替康以及联合用药组用药30天后裸鼠体重和肿瘤体积的变化。
图5为小鼠经人参皂苷Rh4、伊立替康以及联合用药处理后对其饮水量、摄食量和体重的影响。
图6为小鼠经人参皂苷Rh4、伊立替康以及联合用药组处理后对其肝功能和肾功能的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。
本发明涉及一种用于治疗结肠癌的药物配方,所述的药物配方包含有人参皂苷Rh4和伊立替康,摩尔比为(2:1)-(4:1),人参皂苷Rh4纯度≥95%,伊立替康纯度为≥99%。
所述组合物可作为治疗结肠癌药物的有效成分,包含所述组合物的药物中含有医学上可接受的药用辅料,包括透明质酸钠、海藻酸钠、壳聚糖或者胶原蛋白。
包含所述组合物的药物为口服剂,包括硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液;或为注射剂,包括溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉。
所述组合物给药时,人参皂苷Rh4的给药剂量为20-120mg/kg,伊立替康的给药剂量为5-60mg/kg。
实施例1人参皂苷Rh4胶囊
按照如下比例制成胶囊(10000粒,人参皂苷Rh4含量:60mg/粒,伊立替康含量20mg/粒)
实施例2人参皂苷Rh4片剂
按照如下比例制成片剂(10000粒,人参皂苷Rh4含量:90mg/粒,伊立替康含量30mg/粒)
实施例3本发明药物配方体外对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用
将人结肠癌细胞(Caco-2)接种于无菌96孔板中,加入0~180 μM人参皂苷Rh4、0~180 μM伊立替康以及0~180 μM联合用药组各药物浓度。每个药物组浓度设置三个复孔,空白对照组加入等体积的培养液,置于37℃培养箱培48h。弃上清,每孔加入10%(体积/体积)CCK-8溶液继续培养2小时,在酶标仪以450 nm波长处测吸光值A值,按下列公式求出人参皂苷Rh4组、伊立替康以及药物配方对结肠癌细胞以及正常结肠组织细胞增殖的抑制率
抑制率=(1-用药组平均A值/对照组平均A值)×100%
本实施例实验结果图见附图1。实验结果表明经人参皂苷Rh4处理48h的结肠癌细胞的增殖明显受到抑制,并伴随剂量依赖性。其中,处理48h的Caco-2细胞在人参皂苷Rh4浓度120 μM时抑制率达到35.27%,伊立替康组药物浓度为40μM时抑制率达到36.95%,而此时120 μM的人参皂苷Rh4与40 μM的伊立替康联合用药组对结肠癌Caco-2细胞的抑制率达到78.03%。这说明联合用药组在本发明配比3:1下使用后具有协同增效的作用,效果大于单独使用人参皂苷Rh4与伊立替康的药效。
实施例4本发明药物配方体外对人结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用
将人结肠癌细胞(HCT116)接种于无菌96孔板中,加入0~180 μM人参皂苷Rh4、0~180 μM伊立替康以及0~180 μM联合用药组各药物浓度。每个药物组浓度设置三个复孔,空白对照组加入等体积的培养液,置于37℃培养箱培48h。弃上清,每孔加入10%(体积/体积)CCK-8溶液继续培养2小时,在酶标仪以450 nm波长处测吸光值A值,按下列公式求出人参皂苷Rh4组、伊立替康以及药物配方对结肠癌细胞以及正常结肠组织细胞增殖的抑制率
抑制率=(1-用药组平均A值/对照组平均A值)×100%
本实施例实验结果图见附图2。实验结果表明经人参皂苷Rh4处理48h的结肠癌细胞的增殖明显受到抑制,并伴随剂量依赖性。其中,处理48h的Caco-2细胞在人参皂苷Rh4浓度120 μM时抑制率达到36.32%,伊立替康组药物浓度为40 μM时抑制率达到33.54%,而此时120 μM的人参皂苷Rh4与40 μM的伊立替康联合用药组对结肠癌Caco-2细胞的抑制率达到80.32%。这说明联合用药组在本发明配比3:1下使用后具有协同增效的作用,效果大于单独使用人参皂苷Rh4与伊立替康的药效。
实施例5本发明药物配方诱导结肠癌细胞凋亡的作用
将人结肠癌细胞Caco-2接种于无菌6孔板中,培养24h后,加入浓度为0~60 µM的人参皂苷Rh4组药物,0~20 µM的伊立替康药物组,0~53.3 µM人参皂苷Rh4和 0~26.7 µM伊立替康联合使用,处理时间为24h。对照组加入等体积的1640培养液,每个浓度设置5个复孔。继续培养24h后,加入冰冷的PBS洗涤2-3次,加入1 × Binding Buffer缓冲液,吹打均匀,再滴加适量的AV/PI混合染液,避光孵育15min,使用流式细胞仪检测细胞凋亡。
附图3为采用流式细胞术检测人参皂苷Rh4组、伊立替康组以及联合用药组诱导Caco-2细胞凋亡的实验结果图,得到由四个象限组成细胞直方图。区域Q1表示实验操作过程中出现机械损伤的细胞,区域Q2表示发生晚期凋亡的细胞,区域Q3表示功能形态正常的细胞,区域Q4表示发生早期凋亡的细胞。从图中可以看出,随着人参皂苷Rh4以及伊立替康以及联合用药组个药物浓度的增加,区域Q4所代表的发生凋亡的细胞百分率呈现逐渐增加的趋势。当人参皂苷Rh4浓度为60 µM时,Caco-2细胞的早期凋亡率为15.54%(对照组的早期凋亡率为3.32%),伊立替康浓度为20 µM时,Caco-2细胞早期凋亡率为19.86%(对照组的早期凋亡率为3.58%)。此时联合用药组(60 µM人参皂苷Rh4和20 µM的伊立替康)对应的Caco-2细胞早期凋亡率为41.28%。这说明联合用药组在本发明配比2:1下使用后对结肠癌细胞的凋亡具有协同增效的作用,效果大于单独使用人参皂苷Rh4与伊立替康的药效。
实施例6本发明联合用药体内对结肠癌肿瘤的抑制作用
将人Caco-2细胞异种接种于雌性BALB/c裸鼠,每只裸鼠注射3-4×106个细胞。接种20天后,观察到裸鼠左腋窝皮下有肿瘤块长出,仅米粒大小。继续饲养裸鼠4天后,肿瘤尺寸超过100 mm3时,将裸鼠随机分为空白对照组、人参皂苷Rh4治疗组、伊立替康治疗组、人参皂苷Rh4和伊立替康联合用药组;空白组按体重腹腔注射生理盐水溶液,人参皂苷Rh4治疗组按体重腹腔注射含Rh4浓度为30 mg/kg/d、伊立替康治疗组按体重腹腔注射含伊立替康浓度为10 mg/kg/d的生理盐水溶液一天一次,连续30天,联合用药组按体重腹腔注射含人参皂苷Rh4浓度为30 mg/kg/d和伊立替康10 mg/kg/d的生理盐水溶液。
本实施例结果如附图4所示。与对照组相比,人参皂苷Rh4处理组小鼠体重增加、伊立替康组处理组体重急剧下降,而联合用药组使得小鼠的体重呈缓慢增长趋势。人参皂苷Rh4处理组和伊立替康处理组以及联合用药组的异种移植肿瘤重量低于对照组。实验结果表明人参皂苷Rh4处理组和伊立替康治疗组以及联合用药组肿瘤生长抑制率分别为27.43%、29.67%、62.43%。
实施例7 本发明药物配方体内体内安全性评价
将雄性健康ICR小鼠饲养于室温环境中,自由饮食,相对湿度为50~60%, 12h白天/12h黑夜。饲养1周,待其适应环境后,禁食12h。12h后,将小鼠随机分为4组:(1)对照组;(2)30 mg/kg人参皂苷 Rh4组;(3)10 mg/kg伊立替康组;(4)联合用药组(30 mg/kg Rk3和10 mg/kg伊立替康)。以上5组均灌胃方式给药。给药6 h后,取消禁食,正常喂养小鼠15天。观察小鼠饮水、摄食、体重及肝肾功能变化。
小鼠在用药后15天内体重、摄食量和饮食量的变化见图5。由图可知,与对照相比,伊立替康组小鼠体重、摄食量和饮水量下降程度较大,人参皂苷Rh4治疗组小鼠的体重、摄食量和饮水量基本不变,联合用药组小鼠体重和饮水量有一定程度的下降,但是下降幅度比单独的伊立替康组缓慢。这说明联合用药组在一定程度上缓解了由伊立替康带来的毒副作用。
如图6所示,小鼠经人参皂苷Rh4给药15天后,人参皂苷Rh4治疗组小鼠的肝肾重量相对于空白组来说并没有明显的差异,分别为1.98±0.24 g vs 1.76±0.26 g、0.56±0.06 g vs 0.58±0.07 g;联合用药组小鼠的肝肾重量相对于空白组来说并没有明显的差异,分别为1.80±0.22 g vs 1.76±0.26 g、0.54±0.06 g vs 0.58±0.07 g,但是单独伊立替康组小鼠的肝肾重量分别为1.54±0.25 g vs 1.76±0.26 g、0.50±0.05 g vs 0.58±0.07 g,表现出一定的肝肾损伤。
人参皂苷Rh4治疗组小鼠血清中谷丙转氨酶和肌氨酸酐的含量分别为48.1±6.4IU/L vs 45.2±5.2 IU/L,0.12±0.007 μmol/L vs 0.14±0.002 μmol/L,联合用药组小鼠血清中谷丙转氨酶和肌氨酸酐的含量分别为51.3±6.2 IU/L vs 45.2±5.2 IU/L ,0.15±0.008 μmol/L vs 0.14±0.002 μmol/L,与对照差异很小,与脏器变化结果相一致。但是单独的伊立替康组小鼠的这两项指标都有所上升,分别为53.3±6.1 IU/L vs 45.2±5.2 IU/L,0.16±0.006 μmol/L vs 0.14±0.002 μmol/L,这也是肝肾有异常变化的指标之一。
由此可见,单独的人参皂苷Rh4组对小鼠的肝肾重量以及血清中谷丙转氨酶和肌酐酸酶的含量基本无影响。如图6所示,小鼠经各组给药15天后,人参皂苷Rh4治疗组小鼠肝脏和肾脏重量相对于空白组来说并没有明显的差异,两组小鼠血清中谷丙转氨酶和肌氨酸酐的含量分别为差异很小,与脏器变化结果相一致。联合用药组与伊立替康组血清中谷丙转氨酶和肌氨酸酐的含量与对照相比有所差别,但是,与小鼠体重、摄食量和饮水量表现一致的是:联合用药组的这两项指标的含量更接近于正常值。这进一步说明联合用药组在一定程度上缓解了由伊立替康用药带来的肝肾损伤等毒副作用。
本发明的内容不限于实施例所列举,本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换,均为本发明的权利要求所涵盖。
Claims (5)
1.包含有人参皂苷Rh4和伊立替康的药物组合物在制备治疗结肠癌药物的应用,其特征在于:
人参皂苷Rh4和伊立替康的摩尔比为(2:1)-(4:1)。
2.根据权利要求1所述的包含有人参皂苷Rh4和伊立替康的药物组合物在制备治疗结肠癌药物的应用,其特征在于:
人参皂苷Rh4纯度≥95%,伊立替康纯度为≥99%。
3.根据权利要求2所述的包含有人参皂苷Rh4和伊立替康的药物组合物在制备治疗结肠癌药物的应用,其特征在于:
所述药物组合物中含有医学上可接受的药用辅料,包括透明质酸钠、海藻酸钠、壳聚糖或者胶原蛋白。
4.根据权利要求3所述的包含有人参皂苷Rh4和伊立替康的药物组合物在制备治疗结肠癌药物的应用,其特征在于:
所述药物组合物为口服剂,包括硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液;或为注射剂,包括溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉。
5.根据权利要求4所述的包含有人参皂苷Rh4和伊立替康的药物组合物在制备治疗结肠癌药物的应用,其特征在于:
所述组合物给药时,人参皂苷Rh4的给药剂量为20-120mg/kg,伊立替康的给药剂量为5-60mg/kg。
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GR01 | Patent grant | ||
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