CN110585289A - 对虾用保肝复方中草药液体制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种对虾用保肝复方中草药，主要由龙胆草、茵陈、柴胡、栀子、蒲公英组成。据此，发明人还开发了相应液体制剂及其制备方法。本发明来源于纯天然药物，经合理配比获得，具有低残留、低耐药、防治效果良好且无毒副作用等优点，对于对虾肝胰腺可以进行有效保护。试验证明，在对虾‘转肝期’时使用本发明药物保肝护肝，可以促使对虾‘转肝期’顺利进行。

Description

对虾用保肝复方中草药液体制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于对虾用药技术领域，尤其涉及一种对虾用保肝复方中草药液体制剂及其制备方法。
背景技术
南美白对虾目前是世界三大养殖虾类品种之一，其生存温度跨度大；盐度适应广；并且有着生长迅速、营养要求低、出肉率高、营养丰富等优点，近几年全球饲养范围逐渐扩大。自我国从1998年开始规模化养殖南美白对虾之后，对虾产业一片欣欣向荣。但是，今年来对虾肝胰腺传染病在全球呈现爆发趋势，导致对虾大批量死亡。
在对虾的生长发育以及免疫功能中，肝胰腺是一个及其重要的器官。研究表明，由于无脊椎动物肝胰腺的特殊生理功能，肝胰腺反映了对虾机体的营养状态，是对虾的物质代谢中心；除此以外，肝胰腺还可以应对环境原因对于虾体的各种应激反应，例如低温胁迫，低渗胁迫，低氧胁迫和氨氮胁迫等。对虾成长过程中有一个非常重要的时期——“转肝期”，如果对虾没有顺利经过这个时期，轻则喂料体重不见增长，重则造成对虾死亡，给养殖业带来了巨大经济损失。
随着对虾养殖业的扩大，各种环境变化以及肝胰腺传染性疾病给对虾产业造成了巨大经济损失。对虾肝胰腺疾病一旦爆发，不出几天，整塘对虾就会全部死亡，几乎没有治疗余地，养殖户被迫清塘。因此，面对对虾肝胰腺传染病时要以预防为主，口服适宜药物帮助对虾顺利度过“转肝期”，使其免疫力功能完全，免疫力增长。目前，多数养殖户以投喂抗生素为主，然而，使用抗生素治疗，随着时间的增长，必然导致剂量的增大以及喂药时间的增长。如此不仅会导致对虾对于口服抗生素的敏感性降低，还会造成耐药菌株的产生以及药物残留量超标。
中草药制剂来源于天然药物，在动物体内可以完全代谢，避免了药物残留以及污染环境的问题；而且天然药物作用靶点多，不容易使细菌产生耐药性，这些特点成为未来对虾保肝护肝药物的研究方向。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种纯天然、低残留、低耐药、防治效果良好且无毒副作用的对虾用保肝复方中草药液体制剂及其制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
对虾用保肝复方中草药，主要由龙胆草、茵陈、柴胡、栀子、蒲公英组成。
上述对虾用保肝复方中草药的液体制剂。
上述液体制剂，主要由以下重量份的原料药材制成：龙胆草10～20份，茵陈10～20份，柴胡10～20份，栀子10～20份，蒲公英10～20份。
上述液体制剂的制备方法，将原料药材粉碎磨成粉末，采用水提醇沉法提取，再经旋转蒸发浓缩，即得。
上述液体制剂的制备方法，按以下步骤进行操作：按配方称取各原料药材，按质量体积比1:15加水浸泡0.5h，之后100℃水浴2h，过滤；滤渣再按质量体积比1:15加水继续水浴1.5h，过滤；两次滤液合并，3000r/min离心10min；上清于旋转蒸发仪浓缩，加入体积浓度95％的乙醇溶液，使混合液中乙醇体积浓度达75％，静置24h，抽滤过滤混合液，旋转蒸发回收乙醇至药液浓度为0.5g/mL；115℃高压灭菌15min，-20℃保存备用。
针对目前对虾肝胰腺传染病抗生素防治存在的问题，发明人研制了一种对虾用保肝复方中草药，主要由龙胆草、茵陈、柴胡、栀子、蒲公英组成。据此，发明人还开发了相应液体制剂及其制备方法。本发明来源于纯天然药物，经合理配比获得，具有低残留、低耐药、防治效果良好且无毒副作用等优点，对于对虾肝胰腺可以进行有效保护。
处方分析如下：龙胆为龙胆科植物条叶龙胆、龙胆、三化龙胆或坚龙胆的干燥根和根茎；性味苦、寒；归肝、胆经；具有清热燥湿、泻肝胆火的功能；主要用于湿热黄疸、肝火目赤等。茵陈为菊科植物滨蒿或茵陈蒿的干燥地上部分；性味苦、辛、微寒；归脾、胃、肝、胆经；具有清利湿热、利肝退黄的功能；主要用于黄疸尿少、湿温署湿等。柴胡为伞科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根；性味辛、苦、微寒；归肝、胆、肺经；具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气的功能；主要用于感冒发热等。栀子为茜草科植物栀子的干燥成熟果实；性味苦、寒；归心、肺、三焦经；具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒，外用消肿止痛的功能；主要用于热病心烦、湿热黄疸等。蒲公英为菊科植物蒲公英、碱地蒲公英或同属数种植物的干燥全草；性味苦、甘、寒；归肝、胃经；具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋的作用；主要用于疗疮肿毒、湿热黄疸等。
试验证明，在对虾‘转肝期’时使用本发明药物保肝护肝，可以促使对虾‘转肝期’顺利进行。据统计，目前国内对虾产量为70万吨，若有1.0％比率使用，每年应用虾0.7 万吨，以平均每吨对虾用量为1kg计，则年需求量达70吨。本产品按市场价格每千克150 元计算，则年销售额达1050万元，纯利润按30％计算，为315万元。因此，本发明具有广阔的市场前景。
具体实施方式
本发明液体制剂用法：按含药比例吸取相应体积的液体制剂，用喷雾器将其均匀喷洒于相应质量基础日粮上，混匀，使其充分被饲料吸收，阴干24h备用(单位为mL/kg)。每日按体重的3％的量投喂，连续使用7天。
实施例1对虾用保肝复方中草药液体制剂的制备
表1对虾用保肝复方中草药液体制剂配方
药材 龙胆 茵陈 柴胡 栀子 蒲公英
用量(g) 15 15 10 10 10
参考表1的配方，取中草药碎磨成粉末，采用水煎醇沉法提取，再经旋转蒸发浓缩，即得，具体如下：按配方称取各原料，按质量体积比1：15加水浸泡0.5h，之后100℃水浴2h，过滤；滤渣按质量体积比1：15加水继续水浴1.5h，过滤；所得滤液合并，3000r/min 离心10min；上清于旋转蒸发仪浓缩，加入95％酒精，使混合液乙醇浓度达75％，静置24h，抽滤过滤混合液，旋转蒸发回收酒精至药液浓度为0.5g/mL；115℃高压灭菌15min，-20℃保存备用。
使用方法：在动物幼年期针对于保肝护肝使用。按表1配方制备药液，分别按照原药体重比1.5、3.0、6.0、12.0、24.0g/kg灌胃给予小鼠，连续使用7天，最后一次给药 2h后，腹腔注射CCl4建立急性肝损伤模型，建模16h后小鼠眼球采血，静置8h，以4℃， 3000r/min离心10分钟，收集血清，用于检测谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)含量。
结果：模型组ALT，AST含量均显著高于空白对照组，提示急性肝损伤模型建立成功。五个给药组(1.5、3.0、6.0、12.0、24.0g/kg)ALT含量均显著低于模型对照组，给药 4组AST含量显著低于模型对照组，提示本制剂具有护肝功效。
结论：本发明的中药制剂对于急性肝损伤小鼠具有有效的保护作用，取得了预期成果，值得进一步开发利用。
实施例2复方中草药制剂对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用
1试验材料
1.1试验动物
昆明系小鼠60只，体重18-22g之间，雌雄各半。由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号为：SCXK桂2014-0002。购入后常规饲养3d自由进食饮水。
1.2试验试剂
CCl4，分析纯，购于上海麦克林生化科技有限公司。
复方中草药液体制剂(按实施例1配方制备)
联苯双酯滴丸，购于万邦德制药集团股份有限公司。
谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT)检测试剂盒，购于南京建成生物有限公司；
2.试验方法
2.1试剂配制
配制0.5％CCl4-橄榄油溶液，生理盐水。
2.2实验动物分组及实验前处理
80只小鼠随机分为8组，每组10只，雌雄各半。8组分别为空白对照组，药物对照组，模型组，给药1组，给药2组，给药3组，给药4组及给药5组。小鼠买回来之后先饲养 3d，自由饮食饮水，实验开始前分别用苦味酸标号，并称重。
2.3试验方法
每日14时，空白对照组和模型组灌胃生理盐水；药物对照组按0.06g/kg体重灌胃联苯双酯滴丸；给药1组按1.5g/kg体重灌胃龙茵护肝合剂，给药2组按3.0g/kg体重灌胃龙茵护肝合剂，给药3组按6.0g/kg体重灌胃龙茵护肝合剂，给药4组按12.0g/kg体重灌胃龙茵护肝合剂，给药5组按24.0g/kg体重灌胃龙茵护肝合剂，连续给药7d。在最后一次灌胃 2h后，除空白对照组外所有小鼠按照10ml/kg体重一次性腹腔注射0.5％CCl4-橄榄油溶液复制急性肝损伤模型，空白对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水，之后观察小鼠精神运动状态，小鼠禁食不禁水。16h后小鼠先称重后眼球采血，静置8h，以4℃，3000r/min离心 10分钟，收集血清，用于检测ALT,AST水平。
3.试验结果
各组ALT,AST水平如表2所示：
表2小鼠ALT和AST实验结果(n＝10)
注：与空白对照组比较：*表示差异显著(p＜0.05)，**表示差异极显著(p＜0.01)；与模型组比较：# 表示差异显著(p＜0.05)，##表示差异极显著(p＜0.01)。
ALT和ALT是机体内反应肝功能最有代表性的指标，模型组ALT，AST含量均显著高于空白对照组，提示急性肝损伤模型建立成功。五个给药组(1.5、3.0、6.0、12.0、24.0g/kg)ALT含量均显著低于模型对照组，给药4组AST含量显著低于模型对照组，说明了上述保肝复方中草药液体制剂以及阳性对照药物联苯双酯滴丸对于CCl4所致的急性肝损伤的小鼠具有保护作用。
4结论
本发明的中药制剂对于急性肝损伤小鼠具有有效的保护作用，取得了预期成果，值得进一步开发利用。
实施例3对虾用保肝复方中草药制剂对南美白对虾肝胰腺的保护作用
1试验材料
1.3试验动物
南美白对虾1500尾，体长0.8-1.2cm之间，由广西粤海种苗基地提供。平均分为5组，每组再做3个重复，即每组分3桶饲养，共15桶，每桶养殖约100尾南美白对虾。5组分别为空白对照组、阳性药物组，高剂量组、中剂量组以及低剂量组。购入后常规饲养3d。
1.4试验试剂
复方中草药液体制剂(按实施例1配方制备)
联苯双酯滴丸，购于万邦德制药集团股份有限公司。
谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)检测试剂盒，购于南京建成生物有限公司；
2.试验方法
2.1饲料配制
将复方中草药液均匀拌在对虾饲料中，给药剂量分别为高剂量组(0.8g/kg饲料)、中剂量组(0.4g/kg饲料)、低剂量组(0.2g/kg饲料)。阳性药物组给予联苯双酯滴丸，给药剂量为100mg/kg饲料。空白对照组给予正常对虾饲料。给药组对虾饲料要充分混匀，烘箱低温烘干，之后压碎备用。
配制0.9％生理盐水。
2.2试验方法
分别于每日7:00、11:00、16:00时给对虾投喂含有不同剂量复方中草药液的饲料，22:00 时每组对虾均投喂正常对虾饲料。第一周每桶对虾投喂1g饲料，第二周每桶对虾投喂2g 饲料，第三周每桶对虾投喂3g饲料，第四周每桶对虾投喂3.5g饲料。每日11:00时每桶泼洒补剂与维C，每三天泼洒一次益生菌。同时在第一周和第二周每日8:00、13:00、17:00、23:00时给对虾投喂丰年虫。饲喂28d后每组取10尾对虾，剖取肝胰腺，称量重量，按照质量体积比为1:9的比例加入适量生理盐水，做成肝胰腺组织匀浆，用于检测对虾肝胰腺中谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-px)的活性及丙二醛(MDA)的含量。
3.试验结果
表3南美白对虾肝胰腺中相关酶含量实验结果(n＝10)
注：与空白对照组比较：*表示差异显著(p＜0.05)，**表示差异极显著(p＜0.01)；与模型组比较：# 表示差异显著(p＜0.05)，##表示差异极显著(p＜0.01)。
阳性药物组南美白对虾肝胰腺中ALT含量显著低于空白对照组，中剂量组和高剂量组对虾肝胰腺中ALT含量极显著低于空白对照组；阳性药物组和低剂量组对虾肝胰腺中AST 含量极显著低于空白对照组；ALT和ALT是机体内反应肝功能最有代表性的指标，以上结果中ALT和ALT含量的显著降低，说明了上述保肝复方中草药液体制剂以及阳性对照药物联苯双酯滴丸对于南美白对虾有保肝护肝的作用。
阳性药物组和高剂量组对虾肝胰腺中SOD含量极显著高于空白对照组，低剂量组和中剂量组对虾肝胰腺中SOD含量显著高于空白对照组。高剂量组对虾肝胰腺中MDA含量显著低于空白对照组。阳性药物组、中剂量组和高剂量组对虾肝胰腺中GSH-px含量极显著低于空白对照组，低剂量组对虾肝胰腺中GSH-px含量显著低于空白对照组。SOD是生物体内重要的抗氧化酶，而MDA是脂质过氧化最重要的产物之一，以上结果中SOD含量的升高以及MDA含量的降低说明了上述保肝复方中草药液体制剂以及阳性对照药物联苯双酯滴丸可以通过促进抗氧化酶合成以及抑制组织脂质过氧化从而通过抑制机体氧化应激而产生保肝护肝的作用。除此之外，GSH-px是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶，其含量的降低说明在南美白对虾体内，上述保肝复方中草药液体制剂以及阳性对照药物联苯双酯滴丸不可以通过提高可分解过氧化物的酶含量的途径来抑制体内氧化应激。
4结论
本发明的中药制剂对于南美白对虾肝胰腺具有有效的保护作用，取得了预期成果，值得进一步开发利用。

Claims (5)

1.一种对虾用保肝复方中草药，其特征在于主要由龙胆草、茵陈、柴胡、栀子、蒲公英组成。
2.权利要求1所述对虾用保肝复方中草药的液体制剂。
3.根据权利要求2所述的液体制剂，其特征在于主要由以下重量份的原料药材制成：龙胆草10～20份，茵陈10～20份，柴胡10～20份，栀子10～20份，蒲公英10～20份。
4.权利要求3所述液体制剂的制备方法，其特征在于将原料药材粉碎磨成粉末，采用水提醇沉法提取，再经旋转蒸发浓缩，即得。
5.根据权利要求4所述的液体制剂的制备方法，其特征在于按以下步骤进行操作：按配方称取各原料药材，按质量体积比1:15加水浸泡0.5h，之后100℃水浴2h，过滤；滤渣再按质量体积比1:15加水继续水浴1.5h，过滤；两次滤液合并，3000r/min离心10min；上清于旋转蒸发仪浓缩，加入体积浓度95％的乙醇溶液，使混合液中乙醇体积浓度达75％，静置24h，抽滤过滤混合液，旋转蒸发回收乙醇至药液浓度为0.5g/mL；115℃高压灭菌15min，-20℃保存备用。
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