CN110563808A - 一种南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法 - Google Patents
一种南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110563808A CN110563808A CN201910919409.6A CN201910919409A CN110563808A CN 110563808 A CN110563808 A CN 110563808A CN 201910919409 A CN201910919409 A CN 201910919409A CN 110563808 A CN110563808 A CN 110563808A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antioxidant
- temperature
- antarctic krill
- oligopeptide
- extraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 title claims abstract description 38
- 241000239370 Euphausia superba Species 0.000 title claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 title claims description 46
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 title claims description 39
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 24
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000239366 Euphausiacea Species 0.000 claims description 42
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 19
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 13
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 12
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims description 10
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 10
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims description 10
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 10
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 10
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 8
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 6
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 5
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 5
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 4
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940106134 krill oil Drugs 0.000 claims description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims 5
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 abstract description 10
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 6
- 101800000068 Antioxidant peptide Proteins 0.000 abstract description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 abstract description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 8
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 8
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- AAWLEICNDUHIJM-MBLNEYKQSA-N Ala-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O AAWLEICNDUHIJM-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 2
- BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N Ile-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CQGSYZCULZMEDE-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZXAGTABZUOMUDO-GVXVVHGQSA-N Val-Glu-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZXAGTABZUOMUDO-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- SPSPIUSUWPLVKD-UHFFFAOYSA-N 2,3-dibutyl-6-methylphenol Chemical compound CCCCC1=CC=C(C)C(O)=C1CCCC SPSPIUSUWPLVKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- BGNXCDMCOKJUMV-UHFFFAOYSA-N Tert-Butylhydroquinone Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(O)=CC=C1O BGNXCDMCOKJUMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N butylated hydroxyanisole Chemical compound COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1.COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000004250 tert-Butylhydroquinone Substances 0.000 description 1
- 235000019281 tert-butylhydroquinone Nutrition 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明提出了一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，以南极磷虾为原料，通过脱脂、酶解、超滤、阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽。本发明制备的高活性抗氧化肽对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基具有良好的清除作用，并能显著提高HUVEC细胞内SOD和GSH‑Px的活力，降低胞内NO和MDA的含量。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法。
背景技术
抗氧化剂是能帮助捕获并中和自由基从而祛除自由基对人体损害的一类物质，其能防止或延缓食品氧化，提高食品的稳定性和延长贮存期的食品添加剂。目前，化学合成抗氧化剂，如丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、叔丁基对苯二酚等广泛地应用到食品工业中。但是，化学合成抗氧化剂不同程度上损伤人体的肝脏、肾脏等器官，部分国家和地区已经明确限量或禁止使用。
本发明以南极磷虾为原料，利用酶解技术制备南极磷虾抗氧化寡肽的工艺研究处于空白阶段，而以南极磷虾酶解产物为材料制备高活性抗氧化肽及其应用更是未见报道。
发明内容
本发明提供一种南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法，其目的在于，提供一种南极磷虾抗氧化寡肽，通过脱脂、酶解、超滤、阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽，该抗氧化寡肽对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基具有良好的清除作用，并能显著提高HUVEC细胞内SOD和GSH-Px的活力，降低胞内NO和MDA的含量。
本发明提供一种南极磷虾抗氧化寡肽，所述寡肽的氨基酸序列如SEQ ID.1所示。
本发明进一步保护一种上述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，以南极磷虾为原料，通过脱脂、酶解、超滤、阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽。
作为本发明进一步的改进，所述脱脂的方法为将南极磷虾壳洗净，粉碎，研细，采用低温连续相变技术提取虾油，得到的萃取残渣干燥，过筛后即为脱脂南极磷虾粉。
作为本发明进一步的改进，所述低温连续相变技术的具体方法为：将南极磷虾壳粉装入低温连续相变萃取釜中密封，设定相关萃取参数进行低温连续相变萃取操作，所述萃取温度为37℃，萃取压力为1.2MPa，萃取时间为50min，解析温度为60℃。
作为本发明进一步的改进，所述酶解为多级酶解，方法为将脱脂南极磷虾粉加水复溶，第一次调节pH值，加入碱性蛋白酶在第一温度下酶解第一时间段后，第二次调节pH值，加入中性蛋白酶在第二温度下酶解第二时间段后，第三次调节pH值，加入木瓜蛋白酶在第三温度下酶解第三时间段后灭酶，离心，取上清液，得到酶解液。
作为本发明进一步的改进，所述碱性蛋白酶的添加量为1500U/kg，所述第一次调节pH值为7-8.5，第一温度为55-70℃，第一时间段为1-1.5h；所述中性蛋白酶的添加量为2000U/kg，所述第二次调节pH值为6.8-7，第二温度为45-50℃，第二时间段为0.5-1h；所述木瓜蛋白酶的添加量为2000U/kg，所述第三次调节pH值为5-6.5，第三温度为20-80℃，第三时间段为1-2。
作为本发明进一步的改进，所述第一次调节pH值用1mol/L的NaOH溶液，所述第二次调节pH值用0.1mol/L的HCl溶液，所述第三次调节pH值用1mol/L的HCl溶液，所述脱脂南极磷虾粉和水的体积比为1:(10-50)。
作为本发明进一步的改进，所述超滤条件用5000D的陶瓷膜进行第一次超滤，收集滤过液体；再用500D的有机膜进行第二次超滤，收集未滤过液体。
作为本发明进一步的改进，所述凝胶层析柱为Sephadex G-25；所述反相高效液相色谱柱为YWG 18柱；所述阳离子交换树脂为D001。
本发明进一步保护一种上述南极磷虾抗氧化寡肽在制备抗氧化相关疾病的药物或者辅助药物、保健食品或食品中的应用。
本发明具有如下有益效果：本发明一种具有显著抗氧化作用的南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法和用途，以南极磷虾为原料，通过脱脂、酶解、超滤、大孔树脂纯化、阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽Leu-Lys-Pro-Gly-Asn，本发明制备的高活性抗氧化肽对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基具有良好的清除作用，并能显著提高HUVEC细胞内SOD和GSH-Px的活力，降低胞内NO和MDA的含量。具有安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、保健食品或食品添加剂等。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例3中阳离子交换树脂柱层析图；
图2为本发明实施例3中葡聚糖凝胶层析柱层析图；
图3为本发明实施例3中经葡聚糖凝胶层析柱层析后各组分对DPPH·清除能力对比图；
图4为本发明实施例3中经葡聚糖凝胶层析柱层析后各组分对HO·的清除能力对比图；
图5为本发明实施例3中AK-2-1的C18反相高效液相的谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法：
S1.脱脂：以南极磷虾为原料，通过脱脂，脱脂的方法为将南极磷虾壳洗净，粉碎，研细，采用低温连续相变技术提取虾油，得到的萃取残渣干燥，过筛后即为脱脂南极磷虾粉；
低温连续相变技术的具体方法为：将南极磷虾壳粉装入低温连续相变萃取釜中密封，设定相关萃取参数进行低温连续相变萃取操作，所述萃取温度为37℃，萃取压力为1.2MPa，萃取时间为50min，解析温度为60℃；
S2.酶解：酶解为多级酶解，方法为将10g脱脂南极磷虾粉加100mL水复溶，用1mol/L的NaOH溶液第一次调节pH值为7，加入碱性蛋白酶(美国GIBCO公司)在55℃下酶解1h后，碱性蛋白酶的添加量为1500U/kg，用0.1mol/L的HCl溶液第二次调节pH值为6.8，加入中性蛋白酶(美国GIBCO公司)在45℃下酶解0.5h，中性蛋白酶的添加量为2000U/kg，用1mol/L的HCl溶液第三次调节pH值为5，加入木瓜蛋白酶(上海晶纯生化科技股份有限公司)在20℃下酶解1h，木瓜蛋白酶的添加量为2000U/kg，灭酶，离心，取上清液，得到酶解液；
S3.超滤：超滤条件用5000D的陶瓷膜进行第一次超滤，收集滤过液体；再用500D的有机膜进行第二次超滤，收集未滤过液体；
S4.阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽，得率为85％。所述凝胶层析柱为Sephadex G-25；所述反相高效液相色谱柱为YWG 18柱；所述阳离子交换树脂为D001，均购于赛默飞世尔科技(中国)有限公司。
实施例2
一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法：
S1.脱脂：以南极磷虾为原料，通过脱脂，脱脂的方法为将南极磷虾壳洗净，粉碎，研细，采用低温连续相变技术提取虾油，得到的萃取残渣干燥，过筛后即为脱脂南极磷虾粉；
低温连续相变技术的具体方法为：将南极磷虾壳粉装入低温连续相变萃取釜中密封，设定相关萃取参数进行低温连续相变萃取操作，所述萃取温度为37℃，萃取压力为1.2MPa，萃取时间为50min，解析温度为60℃；
S2.酶解：酶解为多级酶解，方法为将10g脱脂南极磷虾粉加500mL水复溶，用1mol/L的NaOH溶液第一次调节pH值为8.5，加入碱性蛋白酶在55-70℃下酶解1.5h后，碱性蛋白酶的添加量为1500U/kg，用0.1mol/L的HCl溶液第二次调节pH值为7，加入中性蛋白酶在50℃下酶解1h，中性蛋白酶的添加量为2000U/kg，用1mol/L的HCl溶液第三次调节pH值为6.5，加入木瓜蛋白酶在80℃下酶解2h，木瓜蛋白酶的添加量为2000U/kg，灭酶，离心，取上清液，得到酶解液；
S3.超滤：超滤条件用5000D的陶瓷膜进行第一次超滤，收集滤过液体；再用500D的有机膜进行第二次超滤，收集未滤过液体；
S4.阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽，得率为88％。所述凝胶层析柱为Sephadex G-25；所述反相高效液相色谱柱为YWG 18柱；所述阳离子交换树脂为D001。
实施例3
一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法：
S1.脱脂：以南极磷虾为原料，通过脱脂，脱脂的方法为将南极磷虾壳洗净，粉碎，研细，采用低温连续相变技术提取虾油，得到的萃取残渣干燥，过筛后即为脱脂南极磷虾粉；
低温连续相变技术的具体方法为：将南极磷虾壳粉装入低温连续相变萃取釜中密封，设定相关萃取参数进行低温连续相变萃取操作，所述萃取温度为37℃，萃取压力为1.2MPa，萃取时间为50min，解析温度为60℃；
S2.酶解：酶解为多级酶解，方法为将10g脱脂南极磷虾粉加100-500mL水复溶，用1mol/L的NaOH溶液第一次调节pH值为8，加入碱性蛋白酶在55-70℃下酶解1.2h后，碱性蛋白酶的添加量为1500U/kg，用0.1mol/L的HCl溶液第二次调节pH值为6.9，加入中性蛋白酶在47℃下酶解0.7h，中性蛋白酶的添加量为2000U/kg，用1mol/L的HCl溶液第三次调节pH值为6，加入木瓜蛋白酶在60℃下酶解1.5h，木瓜蛋白酶的添加量为2000U/kg，灭酶，离心，取上清液，得到酶解液；
S3.超滤：超滤条件用5000D的陶瓷膜进行第一次超滤，收集滤过液体；再用500D的有机膜进行第二次超滤，收集未滤过液体；
S4.阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽，得率为90％。所述凝胶层析柱为Sephadex G-25；所述反相高效液相色谱柱为YWG 18柱；所述阳离子交换树脂为D001。
抗氧化活性的测定
(1)DPPH·清除能力测定
测定多肽对DPPH自由基的清除率：按照表1添加试剂，混匀后于室温避光反应6分钟，于517nm处测定吸光度值。
表1 DPPH自由基清除率的测定
| 试剂 | 对照组(mL) | 样品组(mL) | 空白组(mL) |
| 多肽液 | - | 1 | 1 |
| 0.2mMDPPH | 0.25 | 0.25 | - |
| 双蒸水 | 1 | - | - |
| 99.5％乙醇 | 1 | 1 | 1.25 |
清除率测定公式如下：
DPPH·清除率％＝(对照+空白-样品)/对照×100％
(2)HO·清除能力测定
用水杨酸法测定多肽对羟自由基的清除率：按表2添加试剂，37℃恒温水浴90分钟，于536nm波长处测定吸光度值。
表2羟自由基清除率的测定
| 试剂 | Ap(mL) | Ab(mL) | As(mL) |
| 0.75mM邻二氮菲 | 1 | 1 | 1 |
| (0.2m/L、pH 7.4)PBS | 2 | 2 | 2 |
| 多肽液 | - | - | 1 |
| 双蒸水 | 1 | 2 | - |
| 0.75mM FeSO<sub>4</sub> | 1 | 1 | 1 |
| 0.12％H<sub>2</sub>O<sub>2</sub> | 1 | - | 1 |
清除率测定公式如下：
HO·清除率％＝(As-Ap/Ab-Ap)×100％
(3)超氧阴离子清除能力测定
按照表3添加试剂，在25℃水浴5min，于560nm测吸光度
表3超氧阴离子清除率的测定
| 试剂 | Ac(mL) | As(mL) |
| 2.52mM NBT | 2 | 2 |
| 624uM NADH | 2 | 2 |
| 多肽液 | 2 | - |
| 双蒸水 | - | 2 |
| 120uMPMS | 2 | 2 |
清除率测定公式如下：
超氧阴离子清除率％＝(Ac-As)/Ac×100％
阳离子交换树脂层析：将S3得到的未滤过液体通过玻璃棒引流缓缓倒入层析柱(柱体积约200mL)。待其上层沉降完成，用双蒸水清洗层析柱，清洗4～5个柱体积，以充分洗去残留乙醇。再用Tris-HCl缓冲溶液(0.05mol/L，pH 8.4)平衡至pH恒定。将以上实验所得到的最优活性组分配置成50mg/mL的溶液，并将溶液组分以12000r/min离心20min，后取其上清过0.45um微滤膜，以充分除去不溶性杂质。取6mL左右样品并通过恒流泵恒流上样。最后依次按照Tris-HCl缓冲液、Tris-HCl(含0.1mol/L NaCl)缓冲液、Tris-HCl(含0.25mol/LNaCl)缓冲液、Tris-HCl(含0.5mol/L NaCl)缓冲液、Tris-HCl(含1mol/L NaCl)缓冲液逐级洗脱。每个浓度洗脱体积为400mL，洗脱流速为3mL/min，并在280nm紫外波长下收集出峰组分。
结果如图1。从图1中可以看出，样品经Tris-HCl缓冲液、Tris-HCl(含0.1mol/LNaCl)缓冲液、Tris-HCl(含0.25mol/L NaCl)缓冲液分步洗脱出3个峰，分别命名为AK-1、AK-2、AK-3，将所得到的单峰组分进行旋蒸浓缩后，进行下一步实验。
凝胶柱层析：
将适量葡聚糖凝胶Sephadex G-25干粉用超纯水隔夜溶胀，去除上浮颗粒，用抽滤装置对其进行脱气泡处理，并将胶液调至适宜浓度以方便倒出。将层析柱(2.6cm×90cm)垂直固定在铁架台上。进行检漏后，加入1/3柱体积的双蒸水，以玻璃棒引流，先快后慢倒入凝胶，使其自然沉降，待其完全沉降，开启恒流泵过夜，用流水压实胶柱体。
取适量过阳离子交换树脂层析柱所得的组分，以0.6mL/min流速进行脱盐及分离，并在280nm紫外波长下收集出峰组分。
将过阳离子交换树脂层析柱得到的AK-1、AK-2、AK-3进行脱盐处理，并在280nm波长下检测出峰。从图2可以看出AK-1、AK-2、AK-3经葡聚糖凝胶G-25分别纯化得到AK-1-1、AK-1-2、AK-2-1、AK-2-2、AK-3-1和AK-3-2六个组份。将分离得到的六个组份进行活性测定。
将上述六个组分冻干后，将其分别配制成1.0mg/mL的样品溶液，测定其对DPPH·的清除能力。结果如图3所示：在1.0mg/mL的浓度下，AK-2-1组分的DPPH·清除率最好，为48.19±2.5％，但其与AK-3-1组分活性(44.58±2.6％)差异不明显(P<0.05)。
将上述六个组分冻干后，将其分别配制成1.0mg/mL的样品溶液，测定其对HO·的清除能力。结果如图4所示：在1.0mg/mL的浓度下，AK-2-1组分的H O·清除率最好，为40.52±2.0％，其与AK-3-1组分活性(35.32±2.8％)有显著性差异(P<0.05)。结合对DPPH·的清除活性，因此选取AK-2-1进行下一步实验。
高效液相色谱纯化、制备：
将上步经葡聚糖凝胶Sephadex G-25层析柱后抗氧化活性最好的组分用HPL C进一步分离纯化、制备。并将所得组分委托相关科研检测机构进行氨基酸测序。
将组分AK-2-1经高效液相分析，收集得到10个组分，经测序得到12条多肽(S1-S12)：Ala-Thr-His(S1，327.34Da)、Ala-Glu-Lys(S2，346.38Da)、Leu-Gln-Pro(S3，356.42Da)、Ile-Glu-Asn(S4，374.39Da)、Val-Glu-Lys(S5，374.44Da)、Ile-Glu-Lys-Gly(S6，445.52Da)、Ile-Asp-Ser-Gln(S7，461.47Da)Val-Glu-Lys-Thr(S8，475.54Da)、Ile-Glu-Lys-Thr(S9，489.57Da)、Leu-Lys-Pro-Gly-Asn(S10，527.62Da)、Val-Glu-Lys-Gly-Lys(S11，559.66Da)和Ala-Glu-Lys-Thr-Arg(S12，603.68Da)。
AK-2-1经C18反相高效液相分析，得到谱图图5。
以DPPH·、HO·和O2·-清除率评价多肽清除自由基活性，通过紫外分光光度法测定各自的EC50值，结果如表4所示。
表4多肽的自由基清除活性
注：a-g间字母相同无显著性(p>0.05)
对12个多肽(S1-S12)进行自由基清除活性分析，EC50越低，其抗氧化能力越强。由表4可知，在羟自由基清除率活性中，S3、S10的EC50值较低分别为0.837±0.03mg/mL，0.715±0.006mg/mL，且无明显差异；在DPPH自由基清除率活性中，S1、S3、S5、S6、S10的EC50值较低分别为1.547±0.15mg/mL，1.408±0.04mg/mL，1.372±0.07mg/mL，1.895±0.03mg/mL和1.181±0.036mg/mL且无明显差异；在超氧阴离子清除率活性中，S3、S6、S8、S10的EC50值较低分别为1.034±0.05mg/mL，0.758±0.028mg/mL，0.860±0.032mg/mL，和0.763±0.024mg/mL，且无明显差异。研究认为氨基酸Glu、Tyr、Lys、Leu和Pro有很强的抗氧化活性，以上活性较好的多肽可能与此有关。依据自由基清除结果来看，S10体外抗氧化能力最强，即为本发明所制备的南极磷虾抗氧化寡肽。
本实验以南极磷虾虾粉为原料，以DPPH·和HO·清除率为抗氧化指标，酶解液经过超滤、阳离子交换树脂层析、Sephadex G-25凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等一系列纯化技术制备出具抗氧化活性的12个肽段(S1-S12)：S1.Ala-Thr-His(327.34Da)；S2.Ala-Glu-Lys(346.38Da)；S3.Leu-Gln-Pro(356.42Da)；S4.Ile-Glu-Asn(374.39Da)；S5.Val-Glu-Lys(374.44Da)；S6.Ile-Glu-Lys-Gly(445.52Da)；S7.Ile-Asp-Ser-Gln(461.47Da)；S8.Val-Glu-Lys-Thr(475.54Da)；S9.Ile-Glu-Lys-Thr(489.57Da)；S10.Leu-Lys-Pro-Gly-Asn(527.62Da)；S11.Val-Glu-Lys-Gly-Lys(559.66Da)；S12.Ala-Glu-Lys-Thr-Arg(603.68Da)。其中S10为本发明所述南极磷虾抗氧化寡肽，见序列表1，抗氧化活性最好，其清除DPPH·的EC50分别为：0.837±0.03mg/mL和0.715±0.006mg/mL；清除HO·的EC50分别为：1.408±0.04mg/mL和1.181±0.036mg/mL；清除O2·-的EC50分别为：1.034±0.05mg/mL和0.763±0.024mg/mL。
与现有技术相比，本发明一种具有显著抗氧化作用的南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法和用途，以南极磷虾为原料，通过脱脂、酶解、超滤、大孔树脂纯化、阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽Leu-Lys-Pro-Gly-Asn，本发明制备的高活性抗氧化肽对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基具有良好的清除作用，并能显著提高HUVEC细胞内SOD和GSH-Px的活力，降低胞内NO和MDA的含量。具有安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、保健食品或食品添加剂等。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列号
Leu-Lys-Pro-Gly-Asn
Claims (10)
1.一种南极磷虾抗氧化寡肽，其特征在于，所述寡肽的氨基酸序列如SEQ ID. 1所示。
2.一种如权利要求1所述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于，以南极磷虾为原料，通过脱脂、酶解、超滤、阳离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化寡肽。
3.根据权利要求2所述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于，所述脱脂的方法为将南极磷虾壳洗净，粉碎，研细，采用低温连续相变技术提取虾油，得到的萃取残渣干燥，过筛后即为脱脂南极磷虾粉。
4.根据权利要求2所述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于，所述低温连续相变技术的具体方法为：将南极磷虾壳粉装入低温连续相变萃取釜中密封，设定相关萃取参数进行低温连续相变萃取操作，所述萃取温度为37℃，萃取压力为1.2MPa，萃取时间为50min，解析温度为60℃。
5.根据权利要求2所述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于，所述酶解为多级酶解，方法为将脱脂南极磷虾粉加水复溶，第一次调节pH值，加入碱性蛋白酶在第一温度下酶解第一时间段后，第二次调节pH值，加入中性蛋白酶在第二温度下酶解第二时间段后，第三次调节pH值，加入木瓜蛋白酶在第三温度下酶解第三时间段后灭酶，离心，取上清液，得到酶解液。
6.根据权利要求4所述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白酶的添加量为1500U/kg，所述第一次调节pH值为7-8.5，第一温度为55-70℃，第一时间段为1-1.5h；所述中性蛋白酶的添加量为2000U/kg，所述第二次调节pH值为6.8-7，第二温度为45-50℃，第二时间段为0.5-1h；所述木瓜蛋白酶的添加量为2000U/kg，所述第三次调节pH值为5-6.5，第三温度为20-80℃，第三时间段为1-2h。
7.根据权利要求2所述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于，所述第一次调节pH值用1mol/L的NaOH溶液，所述第二次调节pH值用0.1mol/L的HCl溶液，所述第三次调节pH值用1mol/L的HCl溶液，所述脱脂南极磷虾粉和水的体积比为1:（10-50）。
8.根据权利要求2所述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于，所述超滤条件用5000D的陶瓷膜进行第一次超滤，收集滤过液体；再用500D的有机膜进行第二次超滤，收集未滤过液体。
9.根据权利要求2所述一种南极磷虾抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于，所述凝胶层析柱为Sephadex G-25；所述反相高效液相色谱柱为YWG 18柱；所述阳离子交换树脂为D001。
10.一种如权利要求1所述南极磷虾抗氧化寡肽在制备抗氧化相关疾病的药物或者辅助药物、保健食品或食品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910919409.6A CN110563808B (zh) | 2019-09-26 | 2019-09-26 | 一种南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910919409.6A CN110563808B (zh) | 2019-09-26 | 2019-09-26 | 一种南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110563808A true CN110563808A (zh) | 2019-12-13 |
| CN110563808B CN110563808B (zh) | 2021-04-20 |
Family
ID=68782699
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910919409.6A Active CN110563808B (zh) | 2019-09-26 | 2019-09-26 | 一种南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110563808B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111041059A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-21 | 广东兴亿海洋生物工程股份有限公司 | 一种具有抗氧化活性南极磷虾肽的制备方法 |
| CN112480207A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-03-12 | 浙江海洋大学 | 南极磷虾金属螯合肽 |
| CN113527423A (zh) * | 2021-07-15 | 2021-10-22 | 浙江海洋大学 | 一种辅助治疗nafld的南极磷虾寡肽及其应用 |
| CN114836505A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-08-02 | 泸州品创科技有限公司 | 一种小分子解酒肽及其制备方法与应用 |
| CN115340595A (zh) * | 2022-05-09 | 2022-11-15 | 湖南伍星生物科技有限公司 | 一种新型脱脂工艺制备牛软骨胶原蛋白肽的生产方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7202074B2 (en) * | 2004-07-22 | 2007-04-10 | University Of Chile | Protein and nucleic acid sequence encoding a KRILL-derived cold adapted trypsin-like activity enzyme |
| CN109400674B (zh) * | 2018-11-22 | 2021-03-16 | 浙江海洋大学 | 一种源于南极磷虾的降压三肽及其应用 |
| CN109762863A (zh) * | 2019-03-11 | 2019-05-17 | 青岛琛蓝医药科技发展有限公司 | 一种南极磷虾活性寡肽的制备方法、该方法制备的南极磷虾活性寡肽及应用 |
-
2019
- 2019-09-26 CN CN201910919409.6A patent/CN110563808B/zh active Active
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111041059A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-21 | 广东兴亿海洋生物工程股份有限公司 | 一种具有抗氧化活性南极磷虾肽的制备方法 |
| CN111041059B (zh) * | 2019-12-25 | 2020-11-20 | 广东兴亿海洋生物工程股份有限公司 | 一种具有抗氧化活性南极磷虾肽的制备方法 |
| CN112480207A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-03-12 | 浙江海洋大学 | 南极磷虾金属螯合肽 |
| CN113527423A (zh) * | 2021-07-15 | 2021-10-22 | 浙江海洋大学 | 一种辅助治疗nafld的南极磷虾寡肽及其应用 |
| CN115340595A (zh) * | 2022-05-09 | 2022-11-15 | 湖南伍星生物科技有限公司 | 一种新型脱脂工艺制备牛软骨胶原蛋白肽的生产方法 |
| CN114836505A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-08-02 | 泸州品创科技有限公司 | 一种小分子解酒肽及其制备方法与应用 |
| CN114836505B (zh) * | 2022-05-19 | 2024-04-12 | 泸州品创科技有限公司 | 一种小分子解酒肽及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110563808B (zh) | 2021-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110563808B (zh) | 一种南极磷虾抗氧化寡肽及其制备方法 | |
| CN103980347B (zh) | 一种大黄鱼鱼鳔降压肽及其制备方法和用途 | |
| AU666531B2 (en) | Processes for the preparation of amylase inhibitor | |
| CN103204906A (zh) | 一种贻贝肉蛋白抗氧化肽及其制备方法 | |
| CN111041059B (zh) | 一种具有抗氧化活性南极磷虾肽的制备方法 | |
| CN113024685A (zh) | 一种低分子量竹荪菌托多糖及其制备方法与应用 | |
| JPS5896025A (ja) | 新規生理活性物質ｃｈ−１およびその製造法 | |
| CN106636274A (zh) | 一种米糠抗氧化活性肽的分离制备方法 | |
| CN114105747A (zh) | 一种提高姜黄素提取率和纯化效果的方法 | |
| CN116813711B (zh) | 降血糖抗氧化的菊芋肽、其制备方法及其应用 | |
| CN110105430B (zh) | 一种具有血管紧张素转化酶抑制活性的银杏果蛋白肽及其制备方法 | |
| CN107190040B (zh) | 一种竹节虾抗氧化肽及其制备方法 | |
| CN112245342A (zh) | 一种人参系列护肤提取物及其制备方法和应用 | |
| CN111087447A (zh) | 一种鳄鱼抗氧化肽复合物及其制备方法和应用 | |
| CN113214412B (zh) | 一种刺五加果多糖、多糖的提取方法及其应用 | |
| CN113234783A (zh) | 一种鲍鱼多肽的制备方法及其应用 | |
| CN111072752A (zh) | 一种具有促进人体皮肤细胞增殖多肽的制备方法和产品及其应用 | |
| CN109400677B (zh) | 一种麒麟菜降血脂四肽及其应用 | |
| CN111825754A (zh) | 一种从芝麻蛋白中获得的具有降血压与降血糖活性的多肽 | |
| CN111714570A (zh) | 一种菠萝果皮黄酮的分离纯化方法及黄酮 | |
| CN113528605B (zh) | 一种超声辅助酶解制备单环刺螠内脏抗氧化肽的方法 | |
| CN113416231B (zh) | 一种海鞘抗氧化多肽及其制备方法 | |
| CN108059670A (zh) | 一种基于亲和层析柱的乌司他丁纯化方法 | |
| CN114044807B (zh) | 一种治疗高脂血症的贻贝降血脂寡肽 | |
| CN117820431B (zh) | 一种具有降尿酸功效的青稞酒糟肽及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220620 Address after: 710000 No. B49, Xinda Zhongchuang space, 26th Street, block C, No. 2 Trading Plaza, South China City, international port district, Xi'an, Shaanxi Province Patentee after: Xi'an Huaqi Zhongxin Technology Development Co.,Ltd. Address before: 316000 plot C2-10, Xiaohui Industrial Zone, Putuo exhibition, Putuo marine science and Technology Industrial Park, Putuo District, Zhoushan City, Zhejiang Province Patentee before: Zhejiang Ocean University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220816 Address after: No. 532, Middle Section of Huaxing Road, Hengyuan Street, Linyi County, Dezhou City, Shandong Province, 253000 Patentee after: DEZHOU LANLI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 710000 No. B49, Xinda Zhongchuang space, 26th Street, block C, No. 2 Trading Plaza, South China City, international port district, Xi'an, Shaanxi Province Patentee before: Xi'an Huaqi Zhongxin Technology Development Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |