CN110558317B - 一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂 - Google Patents

一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN110558317B
CN110558317B CN201910902298.8A CN201910902298A CN110558317B CN 110558317 B CN110558317 B CN 110558317B CN 201910902298 A CN201910902298 A CN 201910902298A CN 110558317 B CN110558317 B CN 110558317B
Authority
CN
China
Prior art keywords
nitropyrrolidin
procymidone
microcapsule preparation
chitosan
microcapsule
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910902298.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110558317A (zh
Inventor
陈小军
范添乐
张清霞
沈殿晶
胡珊
任亚军
张铭瑞
王智超
杨春梅
杨益众
宋玥颐
任莉
张迎
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yangzhou University
Original Assignee
Yangzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yangzhou University filed Critical Yangzhou University
Priority to CN201910902298.8A priority Critical patent/CN110558317B/zh
Publication of CN110558317A publication Critical patent/CN110558317A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110558317B publication Critical patent/CN110558317B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G13/00—Protecting plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/26—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests in coated particulate form
    • A01N25/28—Microcapsules or nanocapsules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/18—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing the group —CO—N<, e.g. carboxylic acid amides or imides; Thio analogues thereof
    • A01N37/32—Cyclic imides of polybasic carboxylic acids or thio analogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N53/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing cyclopropane carboxylic acids or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D303/00—Compounds containing three-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D303/02—Compounds containing oxirane rings
    • C07D303/12—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by singly or doubly bound oxygen atoms
    • C07D303/18—Compounds containing oxirane rings with hydrocarbon radicals, substituted by singly or doubly bound oxygen atoms by etherified hydroxyl radicals
    • C07D303/20—Ethers with hydroxy compounds containing no oxirane rings
    • C07D303/22—Ethers with hydroxy compounds containing no oxirane rings with monohydroxy compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
    • C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂，包括有效成分、磺酰化壳聚糖囊壁材料和助剂；其特征在于：所述微胶囊制剂中有效成分包括硝吡咯菌素（3‑氯‑4‑(2‑硝基‑3‑氯‑苯基)吡咯）、腐霉利；微胶囊制剂中，硝吡咯菌素占微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20%，腐霉利占所述微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20%，其余是磺酰化壳聚糖囊壁材料、助剂。通过本发明，有助于提高其靶向性和智能性，避免活性成分的过快降解、延长持效期、降低施药量、提高防治效果，对生物农药的研制和保障食品安全工程建设具有重大意义。

Description

一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂
技术领域
本发明涉及一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂，属于农药制剂学研究领域。
背景技术
目前，在大棚温室果蔬生产过程中，因致病性真菌引起的病害尤为严重，而传统化学农药大量、频繁的使用所造成的果蔬、粮食中农药残留超标以及土壤微环境恶化等问题，已引起了社会的广泛关注，因此，研究及开发可替代化学农药的微生物制剂或生物农药具有巨大的市场潜力和应用前景。利用有益微生物进行生物防治是控制病害、减少化学污染的重要途径。其中研究比较深入的是假单胞菌属(Pseudomonas)和芽孢杆菌属(Bacillus)的生防细菌。假单胞杆菌是一种广泛分布于植物根际的革兰氏阴性细菌。这类细菌因其繁殖量大、与植物根围适应性好而作为植物病害生防菌得到了广泛的研究和应用。一些农业生产中危害严重的土传病害，如小麦全蚀病(Gaeumannomyces graminis)、烟草黑根腐病(Thielaviopsis basicola)、棉花立枯病(Rhizoctonia solani)以及番茄青枯病(Ralstonia solanacearum)等因荧光假单胞菌(P.fluorescens)生防菌株的应用而得到有效控制。其生防机制主要涉及5个方面：(1)抗生作用，即产生抗生性次生代谢产物，抑制病菌生长；(2)竞争作用，包括位点和营养竞争；(3)菌寄生；(4)抗菌蛋白及胞壁降解酶指分泌对病菌有毒的抗菌蛋白或多肽及分解病菌细胞壁的几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶和蛋白酶等；(5)诱导抗性，即菌体或其代谢物诱导植株产生抗性，抵抗病菌的侵染。对于一种生防菌来说，其生防作用是一种或两种以上综合的效应。这5种作用中，由于抗生代谢物(抗生素)和抗菌蛋白等，可以通过微生物发酵提取，制成大量无活体的生物农药，因而具有更广阔的应用前景，如井岗霉素、阿维菌素、申嗪霉素、Bt等。
随着时代的发展，我国也大力提倡研发环保新型剂型，一些环保新剂型在化学农药中的产量已在逐步上升，研究应用生物农药的环保新型剂型已是时代发展的必然趋势。壳聚糖作基质载体材料，在纳米载体的制备中已经受到越来越多的关注。壳聚糖作为药物载体不仅可以控制药物释放、延长药物疗效、降低药物毒副作用、提高疏水性药物的稳定性、改变给药途径，还可以大大加强制剂的靶向给药能力，被认为是一种最具希望的高分子药物跨膜输送载体。目前，各种壳聚糖及其衍生物已被用于制备纳米载药体系。随着研究的深入，以壳聚糖为基材的纳米粒子制备方法不断发展，极大地丰富了纳米载药体系的种类和功能。但壳聚糖分子间或分子内氢键作用强，溶解性能差，导致其表面吸附能力差，液体表面张力弱，更不能形成大分子胶束。壳聚糖只能溶于酸性的水溶液，这在一定程度上限制壳聚糖的应用。
如何使壳聚糖溶于中性或碱性水溶液，并适合负载不同类型的药物，这成为制备壳聚糖纳米载药体系的关键问题。壳聚糖改性的重要目的是改善其在水中的溶解性能。赋予壳聚糖及其衍生物一些新颖的理化特性可以丰富它们作为功能材料的用途，这也是近些年来研究的热点。壳聚糖衍生物的胶束具有可控的纳米尺寸，稳定性又远远超过脂质体或纳米乳之类材料，而且可生物降解的聚合物胶束没有脂质体常见的毒性，是增溶疏水农药的理想载体。合成出粒径较小、临界胶束浓度较低的壳聚糖衍生物纳米胶束，从而获得能显著延长农药缓释时间的纳米载体，制备出的壳聚糖衍生物胶束显著提高，将更适合作为农药的载体系统。
灰霉病是温室大棚蔬菜经常发生且危害严重的一种病害，番茄、黄瓜等蔬菜受害一般可造成减产20％～30％，严重时可达50％以上。因为蔬菜大棚内冬春季气温低、湿度大，此病害可造成蔬菜叶片枯死，落花落果，对保护地蔬菜的产量和品质影响很大，给菜农造成较大经济损失。本发明专利中制备的微胶囊制剂具有高度的环境相容性，有助于提高其靶向性和智能性，避免活性成分的过快降解、延长持效期、降低施药量、提高防治效果，对生物农药的研制和保障食品安全工程建设具有重大意义。
发明内容
本发明专利针对上述现有的技术不足，提供一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂的制备方法及其应用，该制剂用于防治蔬菜灰霉病等病害，持效期长，对环境污染小，施药简便。
本发明的目的是这样实现的，一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂，包括有效成分、磺酰化壳聚糖囊壁材料、助剂；其特征在于：所述微胶囊制剂中有效成分包括硝吡咯菌素(3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯)、腐霉利；
微胶囊制剂中，硝吡咯菌素占微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20％，腐霉利占所述微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20％，其余是磺酰化壳聚糖囊壁材料、助剂。
所述微胶囊制剂中有效成分硝吡咯菌素(3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯)与腐霉利的质量配比为1:6或1:4或1:2或1:1或2:1。
所述微胶囊制剂中有效成分硝吡咯菌素(3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯)与腐霉利的最佳配比为1:4。
通过本发明，本发明的制剂由硝吡咯菌素、腐霉利作为有效成分，通过磺酰化壳聚糖制备成微胶囊剂，其中硝吡咯菌素化学名为3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯，化学结构式见图1。
一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂，微胶囊制剂由有效成分、磺酰化壳聚糖囊壁材料、助剂，其中有效成分为硝吡咯菌素(3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯)、腐霉利；磺酰化壳聚糖囊壁材料为市场上常见的现有的，也可以用本说明书中所叙方法制备得到，助剂丙二醇为市场上常见的现有的；硝吡咯菌素占所述微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20％，腐霉利占所述微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20％，其余为磺酰化壳聚糖囊壁材料和助剂；制剂中有效成分硝吡咯菌素与腐霉利的质量配比为1:6、1:4、1:2、1:1或2:1，其中制剂中有效成分硝吡咯菌素与腐霉利的最佳配比为1:4。
磺酰化壳聚糖的合成、结构鉴定：合成分三步进行，首先在壳聚糖的氨基上接枝强疏水性的十八醇疏水甘油醚后，再进行磺酰化，制备两亲性壳聚糖衍生物载体，合成路线如下。①十八烷氧基缩水甘油醚的合成：为获得较高产率的十八烷基缩水甘油醚，以反应物十八醇与环氧氯丙烷的摩尔比、NaOH用量、反应时间、反应温度为试验因素，产率为考察指标，进行L9(43)的正交设计，合成路线见图2。
②N-(3-十八烷氧基-2-羟基丙基)壳聚糖的制备：取6.0g高度脱乙酰壳聚糖，以120mL2％乙酸溶解(20滴，100mL)，用20％NaOH溶液沉淀(40mL)，将沉淀搅碎，抽虑，去离子水冲洗，使pH接近7.0，挤压干水份，得疏松溶胀的壳聚糖并转入250mL三口瓶。加入18.0g十八烷氧基缩水甘油醚(OGE)，加入70mL异丙醇作为反应介质，63℃保温反应3h，过滤，滤饼以20mL甲苯洗涤4次，除去未反应的十八烷氧基缩水甘油醚，得到纯净的N-(3-十八烷氧基-2-羟基丙基)壳聚糖，60℃真空干燥12h备用，合成路线见图3。
③N-(3-十八烷氧基-2-羟丙基)-O-磺酰基壳聚糖制备：取35mL甲酰胺溶剂于三口瓶中，在冰水浴条件下逐滴加入5mL氯磺酸，取2.0g第二步产物加入三口瓶中，升高温度至68℃，反应6h后，停止反应，倒出以20％NaOH调节pH至略偏碱性，以丙酮沉淀，抽滤，滤饼以热的无水乙醇(60℃)洗涤2～3次，60℃真空干燥得微黄色粉末磺酰化壳聚糖(NOSCS)，合成路线见图4。
微胶囊剂的制备方法：准确称取一定的待装载的有效成分硝吡咯菌素、腐霉利的有效组合物于烧瓶中，按照一定的比例加入丙酮和乙醇混合溶剂，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入一定量的上述所制备的纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加40mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h以上)。样品放入真空冷冻干燥后，加入丙酮进行洗脱(洗脱3次)过滤。收集滤液定容之后进行高效液相色谱法进行检测分析。上层滤渣收集后在除水干燥，干燥后得到所制备的微胶囊剂(图5)。
通过本发明，其由硝吡咯菌素(3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯)、腐霉利、囊壁材料和农药助剂等制备而成，其中硝吡咯菌素、腐霉利占所述微胶囊制剂总质量的质量百分比分别为0.1～20％、0.1～20％。所制备的微胶囊制剂具有高度的环境相容性，有助于提高其靶向性和智能性，避免活性成分的过快降解、延长持效期、降低施药量、提高防治效果，对生物农药的研制和保障食品安全工程建设具有重大意义。
附图说明
图1为硝吡咯菌素的化学结构式；
图2为十八烷氧基缩水甘油醚的合成反应；
图3为N-(3-十八烷氧基-2-羟丙基)壳聚糖的合成；
图4为N-(3-十八烷氧基-2-羟丙基)-O-磺酰基壳聚糖的制备；
图5为本发明的防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂。
具体实施方式
下面的实施例是对本发明技术方案进一步说明，但本发明的内容并不局限于此(以下实施例所有组成均按质量百分比计)。
一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂中的有效成分包括硝吡咯菌素(3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯)、腐霉利、制备的磺酰化壳聚糖囊壁材料、助剂；其中，硝吡咯菌素占微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20％，腐霉利占所述微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20％，其余为磺酰化壳聚糖囊壁材料和助剂。
所述微胶囊制剂中有效成分硝吡咯菌素(3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯)与腐霉利的质量配比为1:6或1:4或1:2或1:1或2:1。
所述微胶囊制剂中有效成分硝吡咯菌素(3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯)与腐霉利的最佳配比为1:4。
实施例1、14.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：微胶囊剂中硝吡咯菌素的质量浓度2.0％、腐霉利的质量浓度12.0％。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素2.5g、腐霉利15g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂60mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的98g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加50mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到100g质量浓度为14.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为2.0g，腐霉利的质量为12.0g，微胶囊剂的电镜图片见图5。
实施例2、10.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：微胶囊剂中硝吡咯菌素的质量浓度2.0％、腐霉利的质量浓度8.0％。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素2.5g、腐霉利10g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂60mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的108g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加40mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到102g质量浓度为10.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为2.0g，腐霉利的质量为8.0g。
实施例3、6.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：微胶囊剂中硝吡咯菌素的质量浓度2.0％、腐霉利的质量浓度4.0％。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素2.5g、腐霉利5g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂50mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的108g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加50mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到107g质量浓度为6.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为2.0g，腐霉利的质量为4.0g。
实施例4、8.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：微胶囊剂中硝吡咯菌素的质量浓度4.0％、腐霉利的质量浓度4.0％。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素5.0g、腐霉利5.0g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂50mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的105g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加50mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到100g质量浓度为8.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为4.0g，腐霉利的质量为4.0g。
实施例5、6.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：微胶囊剂中硝吡咯菌素的质量浓度4.0％、腐霉利的质量浓度2.0％。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素5.0g、腐霉利2.5g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂50mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的107g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加50mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到100g质量浓度为6.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为4.0g，腐霉利的质量为2.0g。
实施例6、12.5％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：微胶囊剂中硝吡咯菌素的质量浓度0.5％、腐霉利的质量浓度12.0％。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素0.625g、腐霉利15g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂60mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的99g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加50mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到100g质量浓度为12.5％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为0.5g，腐霉利的质量为12.0g。
实施例7、20.5％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：微胶囊剂中硝吡咯菌素的质量浓度0.5％、腐霉利的质量浓度20.0％。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素0.625g、腐霉利25g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂100mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的90g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加50mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到100g质量浓度为20.5％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为0.5g，腐霉利的质量为20.0g。
实施例8、20.5％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：微胶囊剂中硝吡咯菌素的质量浓度20.0％、腐霉利的质量浓度0.5％。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素25g、腐霉利0.625g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂60mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的90g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加50mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到100g质量浓度为20.5％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为20.0g，腐霉利的质量为0.5g。
实施例9、10.5％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂：由硝吡咯菌素10.0、腐霉利0.5，按照上述微胶囊剂的方法制备得到所需要的微胶囊剂。
制备方法：准确称取待装载的有效成分硝吡咯菌素12.5g、腐霉利0.625g的有效组合物于烧瓶中，加入丙酮和乙醇混合溶剂60mL(丙酮与甲醇的体积比为2:1)，磁力搅拌下溶解有效成分硝吡咯菌素、腐霉利后加入上述所制备的101g磺酰基壳聚糖纳米载体，以1滴/s的速度逐滴加50mL三蒸水，继续搅拌4h使溶剂充分挥发，加入抗冻剂丙二醇5mL，然后转移到培养皿里，减压真空除气泡及未挥发的有机溶剂，随后转入-80℃冰箱预冻(2h)。样品放入冷冻干燥机中进行干燥，加入丙酮30mL后进行洗脱(洗脱3次)再过滤。上层滤渣收集后再除水干燥，干燥后得到100g质量浓度为10.5％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂，硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂中：硝吡咯菌素的质量为10.0g，腐霉利的质量为0.5g。
实施例10、室内抑菌活性试验
把硝吡咯菌素原药和腐霉利原药分别配制成10μg/mL的母液，置于4℃冰箱中备用。母液再用适量的无菌水溶解后，在单剂室内抑菌活性测定的基础上，按硝吡咯菌素与腐霉利母液的质量比分别为1∶6、1∶4、1∶2、1∶1、2∶1进行配比，采用生长速率抑制法测定混剂的抑制率。在初筛的基础上，将硝吡咯菌素、腐霉利母液及5种混配组合各设置5个梯度的质量浓度。以药剂有效成分在培养基中的浓度为毒理试验浓度，配制成含有药剂的马铃薯蔗糖琼脂培养基。采用无菌水作空白对照。测试方法将保留的番茄灰霉病病菌转接到马铃薯蔗糖琼脂培养基中，在25℃活化72h，然后在近菌落边缘用打孔器制取直径为5mm的菌饼，并转接到配比稀释配制的含药马铃薯蔗糖琼脂培养基系列平皿和空白对照平皿中。每个处理重复3次。于25℃培养5d，待对照中菌落约长至平皿直径的4/5时，采用十字交叉法量取菌落直径。以药剂浓度对数值为自变量x、菌丝生长平均抑制率的概率值为因变量y，计算出毒力回归方程和相关系数r，根据回归方程求出各药剂的抑制中浓度EC50值及共毒系数。
表1各药剂对番茄灰霉病菌的室内毒力(5d)
Figure GDA0002964958680000071
Figure GDA0002964958680000081
由表1可以看出，硝吡咯菌素、腐霉利、硝吡咯菌素与腐霉利各个配比混配对番茄灰霉病的抑制中浓度EC50值按序(1:6、1:4、1:2、1:1和2:1)分别为0.66、0.60、0.75、0.98和1.35μg/mL；硝吡咯菌素与腐霉利各个配比混配的共毒系数按序(1:6、1:4、1:2、1:1和2:1)分别为131.43、151.31、137.01、127.17和115.81。硝吡咯菌素与腐霉利配比为1:6、1:4、1:2、1:1和2:1具有增效作用，其中配比为1:4时增效作用最明显。
实施例11、田间药效试验
试验田在江苏省宜兴市省现代农业产业园的番茄温室大棚内，前茬为辣椒，试验地土壤肥沃，沙壤质褐土，pH值7.0，有机质质量百分含量为2.5％。番茄灰霉病常年发生。各处理药剂分别为空白对照组、对照1(2％硝吡咯菌悬浮剂)、对照2(20％腐霉利悬浮剂)、实施例1(14.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂)、实施例2(10.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂)、实施例3(6.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂)、实施例4(8.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂)和实施例5(6.0％硝吡咯菌素·腐霉利微胶囊剂)。施药时间为2019年6月15日，在番茄结果期灰霉病发生初期施药，东西两端各设4行的保护行，所有试验小区的栽培管理条件一致，每个小区面积30m2，每个处理3次重复，采用随机区组排列。药后10d进行调查统计，每小区采用五点取样法，每点调查2株，每株自上至下调查10片叶，调查各级病叶片数量，并计算各处理对番茄灰霉病的防控效果。各制剂对番茄灰霉病的防控效果见表2。
表2各制剂对番茄灰霉病的防控效果(10d)
各处理 防效效果(％)
对照组 /
2％硝吡咯菌悬浮剂 79.16±2.04
20％腐霉利悬浮剂 99.62±1.85
实施例1 95.48±2.28
实施例2 92.56±1.55
实施例3 87.89±2.50
实施例4 90.54±1.06
实施例5 87.56±2.17

Claims (3)

1.一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂，包括有效成分、磺酰化壳聚糖囊壁材料和助剂；
其特征在于：所述微胶囊制剂中有效成分包括硝吡咯菌素（3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯）、腐霉利，二者按质量比为1:6-1:1；
微胶囊制剂中，硝吡咯菌素占微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20%，腐霉利占所述微胶囊制剂总质量的质量百分比为0.1～20%，其余是磺酰化壳聚糖囊壁材料、助剂。
2.根据权利要求1所述的一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂，其特征在于：所述微胶囊制剂中有效成分硝吡咯菌素（3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯）与腐霉利的质量配比为1:6或1:4或1:2或1:1。
3.根据权利要求1所述的一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂，其特征在于：所述微胶囊制剂中有效成分硝吡咯菌素（3-氯-4-(2-硝基-3-氯-苯基)吡咯）与腐霉利的最佳配比为1:4。
CN201910902298.8A 2019-09-24 2019-09-24 一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂 Active CN110558317B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910902298.8A CN110558317B (zh) 2019-09-24 2019-09-24 一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910902298.8A CN110558317B (zh) 2019-09-24 2019-09-24 一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110558317A CN110558317A (zh) 2019-12-13
CN110558317B true CN110558317B (zh) 2021-07-16

Family

ID=68781810

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910902298.8A Active CN110558317B (zh) 2019-09-24 2019-09-24 一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110558317B (zh)

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102004049761A1 (de) * 2004-10-12 2006-04-13 Bayer Cropscience Ag Fungizide Wirkstoffkombinationen
CA2612106A1 (en) * 2005-06-21 2006-12-28 Bayer Cropscience Sa Fungicide composition comprising a phosphorous acid derivative, a mandelamide type compound and a further fungicide compound
TWI504350B (zh) * 2010-09-01 2015-10-21 Du Pont 殺真菌吡唑及其混合物
BR112013014277A2 (pt) * 2010-12-09 2016-07-19 Bayer Ip Gmbh misturas pesticidas com propriedades aperfeiçoadas
EP2494867A1 (de) * 2011-03-01 2012-09-05 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen in Kombination mit Fungiziden
BR122019010799B1 (pt) * 2011-09-26 2020-10-13 Nippon Soda Co., Ltd composição fungicida para agricultura e horticultura
CN102921358B (zh) * 2012-11-06 2014-04-09 北京市农林科学院 一种可调控释放速率的杀菌微胶囊悬浮剂及其制备和使用方法
CN103918653A (zh) * 2014-03-31 2014-07-16 海利尔药业集团股份有限公司 一种含有啶氧菌酯与腐霉利的杀菌组合物
CN105685060A (zh) * 2015-10-19 2016-06-22 陕西西大华特科技实业有限公司 杀菌组合物的制备及应用
CN106070204A (zh) * 2016-06-22 2016-11-09 太仓市新进农场专业合作社 一种农药微胶囊缓释剂及其制备方法
UY37913A (es) * 2017-10-05 2019-05-31 Syngenta Participations Ag Derivados de picolinamida fungicidas que portan un grupo terminal cuaternario
CN107668194A (zh) * 2017-10-18 2018-02-09 山东省果树研究所 咯菌腈联合壳寡糖在防治水果、蔬菜贮藏病害中的应用
CN107853316A (zh) * 2017-12-12 2018-03-30 广东中迅农科股份有限公司 一种含有嘧菌环胺和咪鲜胺的杀菌组合物

Also Published As

Publication number Publication date
CN110558317A (zh) 2019-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0706321B1 (en) Use of streptomyces wyec 108 to control plant pathogens
WO2023005129A1 (zh) 一种火龙果溃疡病杀菌剂及其应用
CN115925486A (zh) 用于防治土壤青苔的海藻复合微生物肥料及其制备方法
CN115927034A (zh) 一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌、菌剂及其应用
CN105638744A (zh) 一种短短芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法
CN105432668A (zh) 一种蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法
CN108522545B (zh) 一种玫烟色棒束孢可湿性粉剂及其制备方法
US20030103944A1 (en) Sprayable formulations of mycelium-based biological control agents produced by solid state fermention
CN110558317B (zh) 一种防控蔬菜灰霉病的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂
CN116391726B (zh) 一种防治猕猴桃细菌性溃疡病的复配生防菌剂
CN113115776B (zh) 一种增效复配微生物除草剂及其制备方法与应用
CN110558327B (zh) 一种防治番茄灰霉病的杀菌制剂
CN110521723B (zh) 一种高效防控蔬菜灰霉病等病害的磺酰化壳聚糖微胶囊制剂
CN116162577B (zh) 一株胶质芽孢杆菌及其应用
CN106906171A (zh) 一种苹果树腐烂病生防菌剂的制备方法
CN114752507B (zh) 拟康宁木霉smf2在防治植物细菌性病害中的应用
CN109456900B (zh) 一种复合生物制剂及其用途
CN109526974B (zh) 一种高效防治水稻稻瘟病的组合物及应用方法
CN113545365A (zh) 一种防治食用菌细菌性病害的组合物、其制剂及制备方法
CN111387211A (zh) 一种防治土传病害的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN112056327A (zh) 绿僵菌和虫螨腈复配杀草地贪夜蛾的药剂
JP2021020864A (ja) 抗菌剤、農薬、および微生物による植物伝染病害の防除方法
CN113826635B (zh) 一种增效型杀菌剂及其应用
CN105494440A (zh) 一种坚强芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法
CN103392743B (zh) 含有芽孢杆菌与棘霉素的杀菌组合物及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant