CN110554129B - 一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法，属于高通量筛选活性物质技术领域。一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法，包括以下步骤：用液液萃取法提取橄榄油中的多酚组分；将提取的多酚组分溶解，得到多酚溶液；将COX‑2溶解，得到COX‑2溶液；将多酚溶液和COX‑2溶液混合，孵育，得到孵育液；将孵育液超滤，弃去下层溶液，加入乙腈静置，离心，收集液相，得到抗炎活性成分。本发明将得到抗炎活性成分进行液质分析，检测得到与COX‑2高结合率的15种潜在的抗炎活性化合物，应用本发明提供的潜在的抗炎活性化合物，为其抗炎作用的进一步研究提供依据。
Description
技术领域
本发明属于高通量筛选活性物质技术领域，具体涉及一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法。
背景技术
随着人们保健意识的增强，健康饮食越来越受到人们的关注。地中海饮食是世界公认的健康膳食结构之一，而食用橄榄油是地中海饮食的重要组成部分。特级初榨橄榄油是从油橄榄鲜果中直接压榨出来的果汁，可不经任何加工直接食用的木本油。特级初榨橄榄油中富含多种成分，包括丰富的单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、脂溶性维生素A、D、E、K、植物甾醇及诸多微量的多酚类成分，因而具有极高的营养价值及保健功能。橄榄油中的酚类化合物不仅能够提高橄榄油的氧化稳定性、延长橄榄油的货架期、影响橄榄油的色泽和风味，还具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、降血脂、预防阿尔茨海默病、抗炎等功效。研究表明，炎症与多种疾病的发生、发展具有密切的关系。因此，筛选抗炎活性成分对于预防及治疗炎症引起的各类疾病具有重要意义。
COX抑制剂—非甾体类抗炎药(NSAID)是临床应用最广泛的疼痛和炎症治疗药物，但这类药物对胃肠道有刺激和致溃疡作用，对肾功能、血小板等也有影响。因此，从不良反应更小的食用生物活性物质中筛选抗炎新药已成为国内外学者研究的重点。从天然化合物尤其是食物中快速、简便、高效筛选抗炎药物，对防治和控制炎症对机体的不利影响具有重要的实用意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法，具有操作简单、快速、高通量的特点。
本发明的目的还在于一种基于液质分析方法分离橄榄油多酚提取物中潜在抗炎组分的方法，具有快速、高效分离特级初榨橄榄油中多酚抗炎组分的特点。
本发明的目的还在于一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分，初步明确了特级初榨橄榄油中抗炎活性成分的组成，为进一步研究其抗炎作用提供依据。
本发明提供了一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法，包括以下步骤：
1)用液液萃取法提取橄榄油中的多酚组分；
2)将步骤1)中提取的多酚组分溶解，得到多酚溶液；
3)将COX-2溶解，得到COX-2溶液；
4)将步骤2)所述多酚溶液和步骤3)中COX-2溶液混合，孵育，得到孵育液；
5)将孵育液超滤，弃去下层溶液，加入乙腈或甲醇静置，离心，收集液相，得到潜在抗炎活性成分；
步骤1)～2)与步骤3)之间没有时间顺序的限制。
优选的，步骤1)中液液萃取法提取橄榄油中的多酚组分的方法包括以下步骤：
将特级初榨橄榄油溶解，得到的橄榄油溶液和甲醇水溶液振摇混合，静置分层，收集下层清液，洗涤，去除溶剂，得到多酚组分。
优选的，溶解或洗涤用溶剂包括正庚烷或正己烷。
优选的，橄榄油溶液和甲醇水溶液的体积比为1:1；所述橄榄油溶液的浓度为0.5g/mL，所述甲醇水溶液的体积浓度为60％。
优选的，所述去除溶剂的方法采用减压蒸馏进行，所述减压蒸馏的温度优选为30℃。
优选的，步骤4)中所述多酚溶液和COX-2溶液的体积比为1:5，所述多酚溶液的浓度优选为1.2mg/mL；COX-2溶液的浓度为400～4000pmol/L。
优选的，步骤5)中超滤用超滤膜的截留分子量为30KDa，所述超滤时离心的温度为25℃，离心的转速为8000g，离心的时间为10min。
本发明提供了一种基于液质分析方法分离橄榄油多酚提取物中潜在抗炎组分的方法，包括以下步骤：
将所述筛选方法得到的潜在抗炎活性成分进行液质分析；所述液质分析依次包括色谱分析和质谱分析；
所述色谱分析的条件如下：Waters Acquity UPLC液相色谱系统配备Waters可控温自动进样器和柱温箱及Waters超高压液相泵；色谱柱：Waters ACQUITYUPLC RP18柱；柱温：35℃；样品室温度：10℃；流动相：A为体积浓度0.1％甲酸水溶液，B为乙腈；梯度洗脱：0～10min，95.0～75.0％A；10～25min，75.0～70.0％A；25～50min，70.0～0.0％A；50～51min，0.0～95.0％A；51～60min，95.0～95.0％A；流速为0.3mL/min；
所述质谱分析的条件：Waters Synapt G2S四级杆飞行时间高分辨质谱仪，ESI电喷雾离子源；负离子模式；毛细管电压：2.5kV；锥孔电压，35V；离子源温度，120℃；脱溶剂气温度，350℃；锥孔气流量，50L/h；脱溶剂气流量，600L/h；质谱采集范围：100～1000m/z；校正曲线：甲酸钠，分辨率模式；实时校正：2ng/mL亮氨酸脑啡肽，15s校正一次，每次0.5s，5μL/min。
优选的，所述Waters ACQUITY UPLC RP18柱的规格为2.1mm×100mm，填充颗粒的粒径为1.7μm。
本发明提供了所述方法分离出的特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分，包括以下种类组分：
如式a结构所示的羟基酪醇、如式b结构所示的榄香醇酸、如式c结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体1、如式d结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体2、如式e结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体3、如式f结构所示的橄榄苦苷苷元、如式g结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体4、如式h结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体5、如式i结构所示的10-羟基-橄榄苦苷苷元、如式j结构所示的木犀草素、如式k结构所示的女贞苷苷元同分异构体1、如式l结构所示的女贞苷苷元同分异构体2、如式m结构所示的女贞苷苷元、如式n结构所示的芹菜素和如式o结构所示的脱羧甲基橄榄苦苷苷元；
本发明提供的一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法，以特级初榨橄榄油研究对象，利用液液萃取法从特级初榨橄榄油中提取得到多酚提取物，利用炎症靶点环氧化酶-2(COX-2)结合多酚提取物中活性成分，实现从复杂体系中快速筛选潜在抗炎活性化合物的目的。本发明提供的筛选方法操作简便，快速，能够筛选出多种潜在抗炎活性成分，实现高通量的筛选。
本发明提供的基于液质分析方法分离橄榄油多酚提取物中潜在抗炎组分的方法，将上述筛选方法得到的潜在抗炎活性成分经过液质分析，该分离检测方法使抗炎组分分析更加简便，同时在液质分析的条件下，共检测出15种潜在抗炎活性成分，实现抗炎活性成分的高效分离。
本发明提供了所述方法分离出的特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分，包括15种与COX-2具有结合作用的化合物(△P≥20％)，由于COX-2酶作为炎症靶点，能够与COX-2具有较强结合作用的化合物能够发挥COX-2抑制剂的作用，推测15种潜在抗炎活性成分均具有较高的抗炎活性。
具体实施方式
本发明提供了一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法，包括以下步骤：
1)用液液萃取法提取橄榄油中的多酚组分；
2)将步骤1)中提取的多酚组分溶解，得到多酚溶液；
3)将COX-2溶解，得到COX-2溶液；
4)将步骤2)所述多酚溶液和步骤3)中COX-2溶液混合，孵育，得到孵育液；
5)将孵育液超滤，弃去下层溶液，加入乙腈或甲醇静置，离心，收集液相，得到潜在抗炎活性成分；
步骤1)～2)与步骤3)之间没有时间顺序的限制。
本发明用液液萃取法提取橄榄油中的多酚组分。
在本发明中，液液萃取法提取橄榄油中的多酚组分的方法优选包括以下步骤：将特级初榨橄榄油溶解，得到的橄榄油溶液和甲醇水溶液振摇混合，静置分层，收集下层清液，洗涤，去除溶剂，得到多酚组分。
本发明对所述特级初榨橄榄油的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的特级初榨橄榄油的来源即可。在本发明实施例中，所述特级初榨橄榄油为西班牙原装进口托雷多品牌。
在本发明中，溶解用溶剂优选包括正庚烷或正己烷。橄榄油溶液和甲醇水溶液的体积比优选为1:1。所述橄榄油溶液的浓度优选为0.5g/mL。所述甲醇水溶液的体积浓度优选为60％。所述振摇混合优选在分液漏斗中进行，目的使甲醇水溶液充分萃取橄榄油中多酚物质。
在本发明中，静置分层得到的上层溶液再次与甲醇水溶液混合，振摇混合，静置分层，两次得到的下层溶液合并。所述洗涤用溶剂优选为正庚烷。所述洗涤的目的是去除油脂，得到澄清的溶液。所述去除溶剂的方法优选采用减压蒸馏进行，所述减压蒸馏的温度优选优选为30℃，得到的蒸馏残渣为多酚组分。
提取结束后，本发明将提取的多酚组分溶解，得到多酚溶液。
在本发明中，所述多酚组分溶解于二甲基亚砜中，再用磷酸盐缓冲液稀释。所述多酚二甲基亚砜溶液的浓度优选为1.2mg/mL。所述磷酸盐缓冲液为pH值为7.4，浓度为10mM的PBS水溶液。
本发明将COX-2溶解，得到COX-2溶液。
在本发明中，所述COX-2溶解用溶剂为磷酸盐缓冲液。所述磷酸盐缓冲液优选为pH值为7.4，浓度为10mM的PBS水溶液。在配制COX-2溶液时，优选在冰浴上进行。所述COX-2溶液的浓度优选为400～4000pmol/L，更优选为600～1000pmol/L。COX-2溶液浓度过大容易堵塞超滤离心管，导致部分活性物质不能成功分离出来。本发明对所述COX-2的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的COX-2来源即可。在本发明实施例中，所述COX-2购自Sigma公司。
得到多酚溶液和COX-2溶液后，本发明将所述多酚溶液和COX-2溶液混合，孵育，得到孵育液。
在本发明中，所述多酚溶液和COX-2溶液的体积比优选为1:5。在多酚溶液和COX-2溶液混合时，优选先添加COX-2溶液，再添加多酚溶液的稀释液，最后添加多酚溶液。所述多酚溶液的稀释液与多酚溶液的体积比为9:1。在混合过程中，优选在恒温振荡器中进行。所述孵育优选在水浴上进行，使多酚与COX-2酶充分接触。所述恒温振荡器的设定温度优选为37℃。孵育的时间优选为80～100min，更优选为90min。
得到孵育液后，本发明将孵育液超滤，弃去下层溶液，加入乙腈或甲醇静置，离心，收集液相，得到潜在抗炎活性成分。
在本发明中，超滤用超滤膜的截留分子量优选为30KDa，所述超滤时离心的温度优选为25℃，离心的转速优选为8000g，离心的时间优选为10min。
在本发明中，超滤后加入乙腈前，优选将孵育液超滤得到的截留物进行洗涤。所述洗涤用溶液优选为PBS缓冲液。洗涤的目的使将未与COX-2结合的化合物洗掉。所述洗涤后优选进行离心。所述离心的转速优选为10000g，所述离心的时间优选为15min。所述洗涤和离心的过程优选包括2次。
在本发明中，每10μL的多酚溶液加入200μL乙腈。乙腈可使COX-2变性，使与COX-2结合的化合物解离出来。所述静置的温度优选为室温，20～28℃。所述静置的时间优选为10min。所述离心的温度优选为25℃，所述离心的转速优选为10000g。所述离心的时间优选为15min，加入乙腈静置和离心步骤优选重复一次。收集的液相优选经过冻干得到潜在抗炎活性成分。所述冻干的温度优选为-30～-40℃，更优选为-40℃。所述冻干的时间优选为240～360min，更优选为360min。
本发明提供了一种基于液质分析方法分离橄榄油多酚提取物中潜在抗炎组分的方法，包括以下步骤：
将所述筛选方法得到的潜在抗炎活性成分进行液质分析；所述液质分析依次包括色谱分析和质谱分析；
所述色谱分析的条件如下：Waters Acquity UPLC液相色谱系统配备Waters可控温自动进样器和柱温箱及Waters超高压液相泵；色谱柱：Waters ACQUITYUPLC RP18柱；柱温：35℃；样品室温度：10℃；流动相：A为体积浓度0.1％甲酸水溶液，B为乙腈；梯度洗脱：0～10min，95.0～75.0％A；10～25min，75.0～70.0％A；25～50min，70.0～0.0％A；50～51min，0.0～95.0％A；51～60min，95.0～95.0％A；流速为0.3mL/min；
所述质谱分析的条件：Waters Synapt G2S四级杆飞行时间高分辨质谱仪，ESI电喷雾离子源；负离子模式；毛细管电压：2.5kV；锥孔电压，35V；离子源温度，120℃；脱溶剂气温度，350℃；锥孔气流量，50L/h；脱溶剂气流量，600L/h；质谱采集范围：100～1000m/z；校正曲线：甲酸钠，分辨率模式；实时校正：2ng/mL亮氨酸脑啡肽，15s校正一次，每次0.5s，5μL/min。
在本发明中，所述Waters ACQUITY UPLC RP18柱的规格优选为2.1mm×100mm，填充颗粒的粒径优选为1.7μm。
在本发明中，所述潜在抗炎活性成分优选用体积浓度50％的甲醇水溶液溶解，进行液质分析。
在本发明中，还设置空白对照组。所述空白对照组酶进行沸水浴灭活，其他操作同上。
基于上述液质分析法，本发明提供了所述方法分离出的特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分，包括以下种类组分：
如式a结构所示的羟基酪醇、如式b结构所示的榄香醇酸、如式c结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体1、如式d结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体2、如式e结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体3、如式f结构所示的橄榄苦苷苷元、如式g结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体4、如式h结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体5、如式i结构所示的10-羟基-橄榄苦苷苷元、如式j结构所示的木犀草素、如式k结构所示的女贞苷苷元同分异构体1、如式l结构所示的女贞苷苷元同分异构体2、如式m结构所示的女贞苷苷元、如式n结构所示的芹菜素和如式o结构所示的脱羧甲基橄榄苦苷苷元；
在本发明中，上述15种潜在抗炎活性物质均与COX-2具有较强的结合作用(△P≥20％)，因此推测本发明提供的抗炎活性成分具有较好的抗炎活性。
下面结合实施例对本发明提供的一种特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种筛选特级初榨橄榄油多酚提取物中潜在抗炎组分的方法，依次进行以下步骤：
准确称取特级初榨橄榄油样品10.00g，加入20mL正庚烷，振摇，使油样完全溶解，加入20mL甲醇-水溶液(60:40,v/v)，在50mL分液漏斗中振摇2min，静置分层，收集下层清液；上层液体加入20mL甲醇-水溶液(60:40,v/v)重复操作，静置分层，收集下层清液，合并两次液体后加入20mL正庚烷进行洗涤，得到澄清下层液体。将下层液体进行30℃减压蒸干，将残渣溶于二甲基亚砜中。
准确称取0.1mg的COX-2，以磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH＝7.4，10mM)定容至10mL，-80℃保存，用前用磷酸盐缓冲溶液稀释，得到400pmol的COX-2酶溶液。
在96孔板中加入50μL的400pmol COX-2酶溶液，加入90μL磷酸盐缓冲溶液，最后加入10μL(1.2mg/mL)样品底物，37℃恒温振荡器中孵育90min。将孵育后的溶液转移到超滤管中(30K)，25℃，8000g离心10min。然后离心管中加入200μLPBS将未与COX-2结合的化合物洗掉，25℃，10000g离心15min，重复两次。更换1.5mL EP管，离心管中加入200μL乙腈(乙腈可使蛋白变性，可以解离)，室温放置10min，25℃，10000g离心15min，重复一次。收集滤液，冻干。残渣用甲醇/水(50:50，v:v)溶解，用于液质分析。
对照组中，酶进行沸水浴灭活。其他操作同上。
实施例2
一种筛选特级初榨橄榄油多酚提取物中潜在抗炎组分的方法，依次进行以下步骤：
橄榄油中多酚提取物萃取步骤同具体实施例1。
准确称取0.1mg的COX-2，以磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH＝7.4，10mM)定容至10mL，-80℃保存，用前用磷酸盐缓冲溶液稀释，得到4000pmol的COX-2酶溶液。
在96孔板中加入50μL的4000pmol COX-2酶溶液，加入90μL磷酸盐缓冲溶液，最后加入10μL样品底物，37℃恒温振荡器中孵育90min。将孵育后的溶液转移到超滤管中(30K)，25℃，8000g离心10min。然后离心管中加入200μL PBS将未与COX-2结合的化合物洗掉，25℃，10000g离心15min，重复两次。更换1.5mL EP管，离心管中加入200μL乙腈，室温放置10min，25℃，10000g离心15min，重复一次。收集滤液，冻干。残渣用甲醇/水(50:50，v:v)溶解，得到抗炎活性成分溶液用于液质分析。
对照组中，酶进行沸水浴灭活。其他操作同上。
实施例3
将实施例1和实施例2制备的潜在抗炎活性成分溶液进行液质分析，确定潜在抗炎化合物。液质分析条件：
色谱条件：WatersAcquity UPLC液相色谱系统配备Waters可控温自动进样器和柱温箱及Waters超高压液相泵。色谱柱：Waters ACQUITY UPLC RP18柱(2.1mm×100mm，1.7μm)。柱温：35℃；样品室温度：10℃。流动相：A为0.1％甲酸水(V/V)，B乙腈。梯度洗脱：0-10min，95.0-75.0％A；10-25min，75.0-70.0％A；25-50min，70.0-0.0％A；50-51min，0.0-95.0％A；51-60min，95.0-95.0％A。流速为0.3mL/min。
质谱条件：Waters Synapt G2S四级杆飞行时间高分辨质谱仪，ESI电喷雾离子源(美国Waters)。负离子模式；毛细管电压：2.5kV；锥孔电压，35V；离子源温度，120℃；脱溶剂气温度，350℃；锥孔气流量，50L/h；脱溶剂气流量，600L/h。质谱采集范围：m/z 100-1000。校正曲线：甲酸钠，分辨率模式。实时校正：2ng/mL亮氨酸脑啡肽，15s校正一次，每次0.5s，5μL/min。
结合率计算公式I：
△P＝(A实验组-A空白组)/A实验组×100 式I
应用本发明方法从实施例1中筛选的多酚抗炎活性成分中共检测到13种与COX-2具有相互作用的化合物(△P≥20％)，其中羟基酪醇与COX-2的结合率最高，为61.6％，推测其抗炎活性最好(见表1)。
应用本发明方法从实施例2中筛选得到的多酚潜在抗炎活性成分中共筛选出11种潜在抗炎化合物(△P≥20％)，结果见表1。
由两实施例结果对比发现，实施例2种筛选的化合物的数量明显低于实施例1，推测是高浓度的酶堵塞超滤膜，从而导致化合物结合率下降。
表1特级初榨橄榄油中的多酚化合物与COX-2的结合率△P值
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种基于液质分析方法分离橄榄油多酚提取物中潜在抗炎组分的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将从特级初榨橄榄油中筛选方法得到的潜在抗炎活性成分进行液质分析；所述液质分析依次包括色谱分析和质谱分析；
所述色谱分析的条件如下：Waters Acquity UPLC液相色谱系统配备Waters可控温自动进样器和柱温箱及Waters超高压液相泵；色谱柱：Waters ACQUITY UPLC RP18柱；柱温：35℃；样品室温度：10℃；流动相：A为体积浓度0.1％甲酸水溶液，B为乙腈；梯度洗脱：0～10min，95.0～75.0％A；10～25min，75.0～70.0％A；25～50min，70.0～0.0％A；50～51min，0.0～95.0％A；51～60min，95.0～95.0％A；流速为0.3mL/min；
所述质谱分析的条件：Waters Synapt G2S四级杆飞行时间高分辨质谱仪，ESI电喷雾离子源；负离子模式；毛细管电压：2.5kV；锥孔电压，35V；离子源温度，120℃；脱溶剂气温度，350℃；锥孔气流量，50L/h；脱溶剂气流量，600L/h；质谱采集范围：100～1000m/z；校正曲线：甲酸钠，分辨率模式；实时校正：2ng/mL亮氨酸脑啡肽，15s校正一次，每次0.5s，5μL/min；
特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分的筛选方法，包括以下步骤：
1)用液液萃取法提取橄榄油中的多酚组分；
2)将步骤1)中提取的多酚组分溶解，得到多酚溶液；
3)将COX-2溶解，得到COX-2溶液；
4)将步骤2)所述多酚溶液和步骤3)中COX-2溶液混合，孵育，得到孵育液；
5)将孵育液超滤，弃去下层溶液，加入乙腈或甲醇静置，离心，收集液相，得到潜在抗炎活性成分；
步骤1)～2)与步骤3)之间没有时间顺序的限制；
所述特级初榨橄榄油为西班牙原装进口托雷多品牌。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1)中液液萃取法提取橄榄油中的多酚组分的方法包括以下步骤：
将特级初榨橄榄油溶解，得到的橄榄油溶液和甲醇水溶液振摇混合，静置分层，收集下层清液，洗涤，去除溶剂，得到多酚组分。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，溶解或洗涤用溶剂包括正庚烷或正己烷。
4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，橄榄油溶液和甲醇水溶液的体积比为1:1；所述橄榄油溶液的浓度为0.5g/mL，所述甲醇水溶液的体积浓度为60％。
5.根据权利要求2～4任意一项所述方法，其特征在于，所述去除溶剂的方法采用减压蒸馏进行，所述减压蒸馏的温度为30℃。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)中所述多酚溶液和COX-2溶液的体积比为1:5，所述多酚溶液的浓度为1.2mg/mL；COX-2溶液的浓度为400～4000pmol/L。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤5)中超滤用超滤膜的截留分子量为30KDa，所述超滤时离心的温度为25℃，离心的转速为8000g，离心的时间为10min。
8.权利要求1所述方法，其特征在于，所述Waters ACQUITY UPLC RP18柱的规格为2.1mm×100mm，填充颗粒的粒径为1.7μm。
9.权利要求1～8任意一项所述方法分离出的特级初榨橄榄油中潜在抗炎活性成分，其特征在于，包括以下种类组分：
如式a结构所示的羟基酪醇、如式b结构所示的榄香醇酸、如式c结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体1、如式d结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体2、如式e结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体3、如式f结构所示的橄榄苦苷苷元、如式g结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体4、如式h结构所示的橄榄苦苷苷元同分异构体5、如式i结构所示的10-羟基-橄榄苦苷苷元、如式j结构所示的木犀草素、如式k结构所示的女贞苷苷元同分异构体1、如式l结构所示的女贞苷苷元同分异构体2、如式m结构所示的女贞苷苷元、如式n结构所示的芹菜素和如式o结构所示的脱羧甲基橄榄苦苷苷元；
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