CN110553985A - 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒 - Google Patents

一种胃蛋白酶原的测定试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN110553985A
CN110553985A CN201910750446.9A CN201910750446A CN110553985A CN 110553985 A CN110553985 A CN 110553985A CN 201910750446 A CN201910750446 A CN 201910750446A CN 110553985 A CN110553985 A CN 110553985A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
pepsinogen
concentration
kit
buffer solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910750446.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110553985B (zh
Inventor
孔铖将
张兼
陈青松
章晓庆
余法建
徐玲
林委
汪春建
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ZHEJIANG KUAKE BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.
Original Assignee
Huzhou Oubang Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huzhou Oubang Biotechnology Co Ltd filed Critical Huzhou Oubang Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201910750446.9A priority Critical patent/CN110553985B/zh
Publication of CN110553985A publication Critical patent/CN110553985A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110553985B publication Critical patent/CN110553985B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种胃蛋白酶原的测定试剂盒，属于生物检测技术领域。该试剂盒包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液30‑100mmol/L；表面活性剂0.01‑2g/L；分散剂1‑10g/L；离子溶液10‑25g/L；试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液30‑100mmol/L；牛血清白蛋白0.05‑2g/L；抗体乳胶颗粒2‑15mg/L；防腐剂0.05‑1g/L。本发明在实施过程中通过向试剂R2中加入了十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱作为稳定剂以及控制稳定剂与防腐剂的质量比，从而在减少防腐剂添加量的基础上使试剂盒具有准确度高、精密度高、稳定性好、线性关系好的特点。

Description

一种胃蛋白酶原的测定试剂盒
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种胃蛋白酶原的测定试剂盒。
背景技术
胃蛋白酶原是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，是分子量为42000Da的单链多肽，其在胃内可转变为具有活性的胃蛋白酶。胃蛋白酶是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段，根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织分布，胃蛋白酶原可分成胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)两个亚群：其中1～5组分免疫原性近似，称为PGⅠ(PGA)，主要由胃底腺的主细胞和颈粘液细胞分泌；6～7组分被称为PGⅡ(PGC)，除由上述两种细胞分泌外，幽门腺的黏液细胞、贲门腺以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGⅡ，胃粘膜合成的PGⅡ约为总量的25％。合成后的PG大部分进入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶，只有少量(约1％)PG透过胃粘膜毛细血管进入学循环。血清PG水平反应了不同部位胃粘膜的形态和功能。PGⅠ是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，PGⅠ升高意味着胃酸分泌增多，PGⅠ的降低意味着胃酸分泌减少或胃粘膜腺体萎缩。PGⅡ与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关。PGⅠ/PGⅡ比值进行性降低与胃黏膜萎缩进展相关。联合测定胃蛋白酶原PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ比值可以代替胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。
现有技术中，胃蛋白酶原的检测方法包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、化学发光免疫分析法(CLIA)和胶乳免疫比浊法等。其中，酶联免疫吸附测定检测准确度高，但操作过程略显复杂、测定时间较长、影响因素多，且不适合急诊样本的检测；化学发光免疫分析法测定其自动化操作速度快、准确度高，但是成本高、设备昂贵、稳定性较差，无法普及中基层医院及医疗机构；胶乳免疫比浊法测定中，其检测快速、精准、准确度高、特异性强、精密度好、成本较低，且检测样本量少，可进行少量样本和急诊样本的测定。
为了便于检测，进而提高检测灵敏性和准确性，研发了一系列的试剂盒，但是目前所研发的试剂盒只能针对性的检测一种胃蛋白酶原。
例如，中国专利申请201811635877.2中公开了一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒及生产工艺，所述的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其中：试剂R1包括如下成分：三羟甲基氨基甲烷缓冲液1-10g/L、氯化钠1-20g/L、吐温200.1-10ml/L、聚乙二醇2000010-50g/L、叠氮化钠0.1-10g/L；试剂R2包括如下成分：三羟甲基氨基甲烷缓冲液1-10g/L、海藻糖10-100g/L、表面活性剂2-10ml/L、胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体10-1000mg/L、叠氮化钠0.1-10g/L，该发明所述的胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒即开即用，无需配制，检测灵敏度高，测量重复性好，并且长期存放的稳定性较好，但是该试剂盒中防腐剂含量较高，会在一定程度上影响试剂盒的检测精密性，另外该申请中所述的试剂盒只能单纯的用于检测胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)，使用具有局限性。
又如，中国专利申请201810694916.X中公开了一种用于检测胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，属于生物检测技术领域，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2，试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液10～200mmoL/L、表面活性剂0.01～5g/L、促凝剂5～20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液80～160mmoL/L、稳定剂10～120g/L、封闭剂5～30g/L、抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体胶乳溶液0.5～3.0g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度；稳定剂至少为甘油、蔗糖、海藻糖和葡萄糖中的一种。该发明试剂盒具有灵敏度高、精密度高、试剂稳定等优点，同样该试剂盒只能单纯的用于检测胃蛋白酶原Ⅱ，使用具有局限性。
为了解决现有试剂盒的局限性，本发明提供了一种灵敏性以及稳定性更好，精密度更好，本发明在试剂盒中加入了一定浓度的稳定剂，可以在减少防腐剂用量的基础上提高试剂盒的稳定性。并且本发明公开的试剂盒可以用于检测两种不同的胃蛋白酶原，打破了试剂盒检测单一酶原的局限性。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种可以用于检测两种不同的胃蛋白酶原的试剂盒，该试剂盒具有更高的灵敏性和稳定性，而且具有更好的精密度和线性关系。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种胃蛋白酶原的测定试剂盒，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液30-100mmol/L；
表面活性剂0.01-2g/L；
分散剂1-10g/L；
离子溶液10-25g/L；
试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液30-100mmol/L；
牛血清白蛋白0.05-2g/L；
抗体乳胶颗粒2-15mg/L；
防腐剂0.05-1g/L。
优选地，所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液40-80mmol/L；
表面活性剂0.05-1.5g/L；
分散剂3-8g/L；
离子溶液12-20g/L；
试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液40-80mmol/L；
牛血清白蛋白0.1-1.5g/L；
抗体乳胶颗粒5-12mg/L；
防腐剂0.1-1g/L。
再优选地，所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液40-60mmol/L；
表面活性剂0.5-1.0g/L；
分散剂4-6g/L；
离子溶液15-20g/L；
试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液40-60mmol/L；
牛血清白蛋白0.5-1.0g/L；
抗体乳胶颗粒5-10mg/L；
防腐剂0.5-1g/L。
进一步优选地，所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液40mmol/L；
表面活性剂1g/L；
分散剂4g/L；
离子溶液15g/L；
试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液40mmol/L；
牛血清白蛋白1.0g/L；
抗体乳胶颗粒5mg/L；
防腐剂1g/L。
本发明所述的试剂R2中还包括稳定剂，所述的稳定剂为十二烷基葡糖苷和/或月桂酰胺丙基甜菜碱；
优选地，所述的稳定剂为质量比为2-5:1的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱；
优选地，所述的稳定剂为质量比为4:1的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱。
其中所述的稳定剂的浓度为50-100g/L；优选为60-80g/L；再优选为70g/L。
作为一些优选的技术方案，本发明所述的一种胃蛋白酶原的测定试剂盒，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液30-100mmol/L；
表面活性剂0.01-2g/L；
分散剂1-10g/L；
离子溶液10-25g/L；
试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液30-100mmol/L；
牛血清白蛋白0.05-2g/L；
抗体乳胶颗粒2-15mg/L；
防腐剂0.05-1g/L；
稳定剂50-100g/L。
作为另一个优选的技术方案，本发明所述的一种胃蛋白酶原的测定试剂盒，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液40mmol/L；
表面活性剂1g/L；
分散剂4g/L；
离子溶液15g/L；
试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液40mmol/L；
牛血清白蛋白1.0g/L；
抗体乳胶颗粒5mg/L；
防腐剂0.07g/L；
稳定剂70g/L。
所述的缓冲液为反应提供稳定适宜的pH环境。
在优选条件下，所述的缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液和甘氨酸-NaOH缓冲液中的一种或几种；
优选为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、Tris-HCl缓冲液和甘氨酸-NaOH缓冲液中的一种或几种；
再优选为三羟甲基氨基甲烷缓冲液和甘氨酸-NaOH缓冲液中的一种或几种；进一步优选为三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
所述的表面活性剂可以提高反应效率。
在优选条件下，所述的表面活性剂选自曲拉通X-100、司盘-40、司盘-60、司盘-80、吐温-20、吐温-60和吐温-80中的一种或几种；
优选为曲拉通X-100、司盘-40、司盘-60、吐温-20和吐温-60中的一种或几种；
再优选为曲拉通X-100、司盘-40和吐温-20中的一种或几种；
进一步优选为吐温-20。
所述的分散剂可以提高配制溶液和反应体系的均匀性和稳定性，提高抗原抗体结合物的反应浊度，提高试剂的灵敏度。
在优选条件下，所述的分散剂选自聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000和聚乙二醇-8000中的一种或几种；
优选为聚乙二醇-4000和聚乙二醇-6000中的一种或几种；
再优选为聚乙二醇-4000。
所述的离子液体为反应提供一个离子环境，同时能够增加试剂中盐离子效应。
所述的离子溶液为氯化钠。
所述的抗体乳胶颗粒为抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体乳胶颗粒或抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳胶颗粒中的一种。
所述的防腐剂为叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和Proclin-300中的一种；优选为叠氮钠。
所述的抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体乳胶颗粒的制备方法，包括以下步骤：
(1)取抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体溶于pH为7.0的Tris-HCl缓冲液中，制得抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体溶液；
(2)取聚苯乙烯胶乳微球溶解于Tris-HCl缓冲液中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N,N-亚甲基双丙烯酰胺，孵育，离心，弃上清，用Tris-HCl缓冲液洗涤胶乳微球两次，加入Tris-HCl缓冲液，震荡重悬，制得胶乳微球悬浮液；
(3)将步骤(1)得到的抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体溶液和步骤(2)得到的胶乳微球悬浮液混均，孵育，加入2-羟基乙胺混匀，封闭，离心，弃上清，用Tris-HCl缓冲液洗涤两次，加入Tris-HCl缓冲液，震荡重悬，制得抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体乳胶颗粒。
所述的抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳胶颗粒的制备方法与抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体乳胶颗粒制备方法相同。
本发明在实施过程中意外地发现控制稳定剂与防腐剂的浓度比为50-2000:1时可以明显提高试剂盒的稳定性；
优选地，所述的稳定剂与防腐剂的浓度比为100-1500:1；再优选为500-1200:1；进一步优选为1000:1。
另一方面，本发明还提供了一种胃蛋白酶原测定试剂盒的使用方法：
本试剂盒适用于杜邦AR、日立7080/7170/7600/7180、迈瑞BS320、迪瑞CS600、雅培C8000/16000、东芝TBA40FR/2000FR/FX8、贝克曼AU680/AU5800、西门子ADVIA2400、罗氏C501/701/702等全自动生化分析仪。
该测定试剂盒的测定方法为两点终点法，反应方向为升反应：
(1)将162μL试剂R1和30μL待测样本混合均匀，37℃孵育5min后得到反应液1，测定吸光度A1，测定主波长为700nm；
(2)加入30μL试剂R2混合均匀，反应5min，得到反应液2，测定吸光度A2，测定主波长为700nm；
(3)按照步骤(1)-(2)，对不同浓度的胃蛋白酶原标准品的吸光度进行测定，得到吸光度A空白和A标准；
(4)以标准品的吸光度变化值ΔA(A标准-A空白)为纵坐标，以相应的标准品浓度c为横坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线方程；
(5)计算样本的吸光度变化值ΔA(A2-A1)，根据标准曲线方程，得到样本中胃蛋白酶原的含量。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明通过合理控制试剂R1和R2中各物质的含量，提高了试剂盒检测的准确性；
(2)本发明在实施过程中在试剂R2中加入了稳定剂，即质量比为2-5:1的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱，在减少防腐剂添加量的基础上提高了试剂盒的稳定性和精密性；
(3)本发明在实施过程中控制稳定剂与防腐剂的浓度比为50-2000:1，使测定试剂的稳定性明显提高；
(4)本发明公开的试剂盒可用于检测两种胃蛋白酶原，解决了试剂盒检测单一组分的局限定，扩大了应用范围，更有利于在生产过程中的推广。
附图说明
图1为实施例5中的线性相关图；
图2为实施例12中的线性相关图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明中使用的抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体购自上海桂康生物科技有限公司，货号为GK-050；所使用的抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体购自上海桂康生物科技有限公司，货号为GK-051。
测试条件与方法：
仪器：日立7080全自动生化分析仪
参数：
主波长 700nm 样品 6μL
次波长 - 试剂1 162μL
反应温度 37℃ 试剂2 30μL
反应方向 反应类型 终点法
操作步骤：
实施例1-7胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒
对比例1
与实施例5的区别在于：稳定剂为质量比为1:1的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱的混合溶液；其他组分以及浓度与实施例5相同。
对比例2
与实施例5的区别在于：稳定剂为质量比为8:1的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱的混合溶液；其他组分以及浓度与实施例5相同。
对比例3
与实施例5的区别在于：所述的稳定剂与防腐剂的浓度比为30:1，即稳定剂的浓度为30g/L，叠氮钠的浓度为1g/L；其他组分以及浓度与实施例5相同。
对比例4
与实施例5的区别在于：所述的稳定剂与防腐剂的浓度比为2500:1，即稳定剂的浓度为125g/L，叠氮钠的浓度为0.05g/L；其他组分以及浓度与实施例5相同。
试验例1
精密度检测：同一样品中连续抽取10次，计算测定值的平均值、标准差(SD)和变异系数(CV)，CV＝(标准差/平均值)*100％，结果见表1，CV通常用于衡量一项测定方法的精密度，CV值越小，表示该测定方法的结果精密度越好。对于临床化学检验项目而言，CV小于5％的方法精密度公认是可以接受的。
表1：精密度检测结果
试剂盒 平均值(mg/L) 标准差(SD) 变异系数(CV)
实施例1 42.60 0.29 0.68％
实施例2 43.72 0.24 0.55％
实施例3 42.37 0.20 0.47％
实施例4 42.22 0.05 0.12％
实施例5 42.96 0.02 0.04％
实施例6 43.15 0.03 0.07％
实施例7 43.19 0.07 0.16％
对比例1 62.53 0.43 0.69％
对比例2 63.53 0.46 0.72％
对比例3 63.51 0.47 0.74％
对比例4 65.45 0.49 0.75％
表1中CV值≤0.68％，表明本发明提供的试剂盒精密度较高，其中实施例5所述的试剂盒精密度最高。
试验例2
准确度检测：用抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗原含量为10mg/L的质控品进行测定，重复5次，取均值，计算相对偏差(CB)，检测结果见表2。对于临床化学检验项目而言，相对偏差不超过±15％，被认为具有优良的准确度。
表2：准确度检测结果
表2中相对偏差均不超过±0.08％，表明本发明提供的试剂盒准确度较高，其中实施例5所述的试剂盒准确度最高。
试验例3
稳定性检测：在2-8℃储存条件下，分别在0个月、6个月和12个月对抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗原含量为4.0mg/L的同一标准品样本进行测定，每个样本测定10次，取均值，结果见表3。
表3：稳定性检测结果
由表3可以看出，检测值差异较小，表明本发明提供的试剂盒稳定性较好，在2-8℃下储存至少可以稳定12个月以上，其中实施例5所述的试剂盒稳定性最好。
试验例4
线性检测：利用实施例5所述的试剂盒检测六个浓度梯度的标准品，每个梯度浓度检测3次，取平均值，对测定值的平均值和标准品的理论浓度作回归分析，X轴表示理论浓度，Y轴表示测定值均值。一般R2≥0.9900被认为具有良好的线性，结果见图1。
得到的线性回归方程为：y＝1.0121x+0.1193，相关系数：R2＝0.9994。结果表明，本发明提供的试剂盒具有良好的线性相关关系。
实施例8-14胃蛋白酶原Ⅱ测定试剂盒
对比例5
与实施例12的区别在于：稳定剂为质量比为1:2的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱的混合溶液；其他组分以及浓度与实施例12相同。
对比例6
与实施例12的区别在于：稳定剂为质量比为10:1的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱的混合溶液；其他组分以及浓度与实施例12相同。
对比例7
与实施例12的区别在于：所述的稳定剂与防腐剂的浓度比为30:1，即稳定剂的浓度为30g/L，叠氮钠的浓度为1g/L；其他组分以及浓度与实施例12相同。
对比例8
与实施例12的区别在于：所述的稳定剂与防腐剂的浓度比为2500:1，即稳定剂的浓度为125g/L，叠氮钠的浓度为0.05g/L；其他组分以及浓度与实施例12相同。
试验例5
精密度检测：同一样品中连续抽取20次，按照上述步骤进行测定，计算测定值的平均值、标准差(SD)和变异系数(CV)，CV＝(标准差/平均值)*100％，结果见表4，CV通常用于衡量一项测定方法的精密度，CV值越小，表示该测定方法的结果精密度越好。对于临床化学检验项目而言，CV小于5％的方法精密度公认是可以接受的。
表4：精密度检测结果
试剂盒 平均值(mg/L) 标准差(SD) 变异系数(CV)
实施例8 24.38 0.18 0.73％
实施例9 25.11 0.14 0.56％
实施例10 23.29 0.12 0.52％
实施例11 24.48 0.07 0.29％
实施例12 23.71 0.05 0.21％
实施例13 23.85 0.11 0.46％
实施例14 26.63 0.09 0.34％
对比例5 42.42 0.39 0.93％
对比例6 43.38 0.45 1.04％
对比例7 42.76 0.44 1.03％
对比例8 45.40 0.43 0.90％
表4中CV值≤0.73％，表明本发明提供的试剂盒精密度较高，其中实施例12所述的试剂盒精密度最高。
试验例6
准确度检测：用抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗原含量为10mg/L的质控品进行测定，重复5次，取均值，计算相对偏差(CB)，检测结果见表5。对于临床化学检验项目而言，相对偏差不超过±15％，被认为具有优良的准确度。
表5：准确度检测结果
表5中相对偏差均不超过±0.70％，表明本发明提供的试剂盒准确度较高，其中实施例12所述的试剂盒准确度最高。
试验例7
稳定性检测：在2-8℃储存条件下，分别在0个月、6个月和12个月对抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗原含量为4.0mg/L的同一标准品样本进行测定，每个样本测定10次，取均值，结果见表6。
表6：稳定性检测结果
试剂盒 0个月 6个月 12个月
实施例8 4.08 4.11 4.13
实施例9 4.10 4.07 4.05
实施例10 3.95 3.92 3.90
实施例11 4.02 4.04 4.04
实施例12 4.05 4.04 4.06
实施例13 3.98 3.96 3.95
实施例14 4.04 4.06 4.06
对比例5 8.12 6.09 4.12
对比例6 8.10 6.22 4.16
对比例7 8.08 6.15 4.00
对比例8 8.16 6.33 3.98
由表6可以看出，检测值差异较小，表明本发明提供的试剂盒稳定性较好，在2-8℃下储存至少可以稳定12个月以上，其中实施例12所述的试剂盒稳定性最好。
试验例8
线性检测：利用实施例12所述的试剂盒检测六个浓度梯度的标准品，每个梯度浓度检测3次，取平均值，对测定值的平均值和标准品的理论浓度作回归分析，X轴表示理论浓度，Y轴表示测定值均值。一般R2≥0.9900被认为具有良好的线性，结果见图2。
得到的线性回归方程为：y＝1.0449x+0.241，相关系数：R2＝0.9977。结果表明，本发明提供的试剂盒具有良好的线性相关关系。
综上，本发明提供的试剂盒的检测结果可知，本发明提供的试剂盒具有准确度高、精密度高、稳定性好、线性关系好的特点。其中利用实施例5和实施例12所述的试剂盒进行检测，检测结果最佳。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述的试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液30-100mmol/L；
表面活性剂0.01-2g/L；
分散剂1-10g/L；
离子溶液10-25g/L；
所述的试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液30-100mmol/L；
牛血清白蛋白0.05-2g/L；
抗体乳胶颗粒2-15mg/L；
防腐剂0.05-1g/L。
2.根据权利要求1所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述的试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液40-60mmol/L；
表面活性剂0.5-1.0g/L；
分散剂4-6g/L；
离子溶液15-20g/L；
所述的试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液40-60mmol/L；
牛血清白蛋白0.5-1.0g/L；
抗体乳胶颗粒5-10mg/L；
防腐剂0.5-1g/L。
3.根据权利要求2所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述的试剂R1包含以下浓度的组分：
缓冲液40mmol/L；
表面活性剂1g/L；
分散剂4g/L；
离子溶液15g/L；
所述的试剂R2包含以下浓度的组分：
缓冲液40mmol/L；
牛血清白蛋白1.0g/L；
抗体乳胶颗粒5mg/L；
防腐剂1g/L。
4.根据权利要求3所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中还包括稳定剂，所述的稳定剂为十二烷基葡糖苷和/或月桂酰胺丙基甜菜碱。
5.根据权利要求4所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为质量比为2-5:1的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱。
6.根据权利要求5所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为质量比为4:1的十二烷基葡糖苷和月桂酰胺丙基甜菜碱。
7.根据权利要求4所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂的浓度为50-100g/L。
8.根据权利要求3所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：所述的抗体乳胶颗粒为抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体乳胶颗粒或抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳胶颗粒中的一种。
9.根据权利要求3所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂与防腐剂的浓度比为50-2000:1。
10.根据权利要求9所述的胃蛋白酶原的测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂与防腐剂的浓度比为1000:1。
CN201910750446.9A 2019-08-14 2019-08-14 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒 Active CN110553985B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910750446.9A CN110553985B (zh) 2019-08-14 2019-08-14 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910750446.9A CN110553985B (zh) 2019-08-14 2019-08-14 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110553985A true CN110553985A (zh) 2019-12-10
CN110553985B CN110553985B (zh) 2020-06-30

Family

ID=68737778

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910750446.9A Active CN110553985B (zh) 2019-08-14 2019-08-14 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110553985B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112051401A (zh) * 2020-08-28 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒
CN114544527A (zh) * 2022-01-26 2022-05-27 浙江夸克生物科技有限公司 一种涎液化糖链抗原kl-6测定试剂盒及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104111335A (zh) * 2013-11-13 2014-10-22 唐勇 胃蛋白酶原i／ii胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒
CN104359906A (zh) * 2014-11-28 2015-02-18 山东博科生物产业有限公司 一种稳定、抗干扰能力强的血清总胆汁酸检测试剂
CN109187984A (zh) * 2018-08-11 2019-01-11 金华市强盛生物科技有限公司 一种β2微球蛋白检测试剂盒
CN109541241A (zh) * 2019-01-25 2019-03-29 浙江夸克生物科技有限公司 一种脂蛋白(a)的测定试剂盒
CN109813909A (zh) * 2018-12-29 2019-05-28 宁波普瑞柏生物技术股份有限公司 消除d-二聚体检测中钩状效应的方法和试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104111335A (zh) * 2013-11-13 2014-10-22 唐勇 胃蛋白酶原i／ii胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒
CN104359906A (zh) * 2014-11-28 2015-02-18 山东博科生物产业有限公司 一种稳定、抗干扰能力强的血清总胆汁酸检测试剂
CN109187984A (zh) * 2018-08-11 2019-01-11 金华市强盛生物科技有限公司 一种β2微球蛋白检测试剂盒
CN109813909A (zh) * 2018-12-29 2019-05-28 宁波普瑞柏生物技术股份有限公司 消除d-二聚体检测中钩状效应的方法和试剂盒
CN109541241A (zh) * 2019-01-25 2019-03-29 浙江夸克生物科技有限公司 一种脂蛋白(a)的测定试剂盒

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112051401A (zh) * 2020-08-28 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒
CN114544527A (zh) * 2022-01-26 2022-05-27 浙江夸克生物科技有限公司 一种涎液化糖链抗原kl-6测定试剂盒及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110553985B (zh) 2020-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108362688B (zh) 一种25羟基维生素d磁微粒化学发光检测试剂盒
Soldin et al. The measurement of free thyroxine by isotope dilution tandem mass spectrometry
US7759074B2 (en) Immunological latex turbidimetry method and reagent therefor
CN110553985B (zh) 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒
EP0256851B1 (en) Electrochemical assay for haemoglobin
US5482866A (en) Method for quantitation of calcium and magnesium and the novel reagent compositions
CN104655843A (zh) 一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒
CN110672849B (zh) 一种s100蛋白的检测试剂盒
CN108982850A (zh) 一种用于检测胃蛋白酶原ⅱ的试剂盒
CN112684166A (zh) 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒
CN111983217A (zh) 一种样本处理液及其应用
EP0167340B1 (en) Method for assaying a biocomponent
Molinero-Fernández et al. An on-chip microfluidic-based electrochemical magneto-immunoassay for the determination of procalcitonin in plasma obtained from sepsis diagnosed preterm neonates
EP2439533B1 (en) Immunoassay method and reagent therefor
EP3480601B1 (en) Inhibin b chemiluminescent immunoassay kit and preparation method therefor
CN111693721A (zh) 基于普鲁士蓝纳米酶标记物的酶联免疫吸附实验的制备方法及应用
CN112147333A (zh) 一种基于胃蛋白酶原pgⅱ的免疫分析试剂盒及其制备方法和检测方法
CN109060782B (zh) 一种猫早孕的发光检测试剂的制备方法及应用
CN114371292A (zh) 一种检测可溶性st2蛋白的试剂盒
CN112698034A (zh) 一种癌胚抗原cea的检测试剂盒
CN117288966B (zh) 一种联合检测igf-1和igfbp-3的试剂盒及其所用裂解液、缓冲液
CN209878780U (zh) 胃蛋白酶原i检测试剂盒
CN108562735A (zh) 一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液及其制备方法
CN114705641B (zh) 壳多糖酶3样蛋白1的测定试剂、试剂盒及定量方法
CN112229995B (zh) 胃蛋白酶原pgi/ii复合校准品的稀释液及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220408

Address after: 312500 Xinchang provincial high tech Industrial Park, Shaoxing City, Zhejiang Province (1 Jiangdong Road)

Patentee after: ZHEJIANG KUAKE BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

Address before: 313000 building 12, National University Science Park, No. 669 Gaotie railway, Changxing County Economic and Technological Development Zone, Huzhou City, Zhejiang Province

Patentee before: Huzhou Oubang Biotechnology Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right