CN110541011A - 一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，将黑曲霉作为发酵菌接种到胭脂萝卜溶液中发酵，发酵结束后经提取、分离，即得到胭脂萝卜硫素。对发酵过程中发酵温度、料液比、接种量、pH等指标进行优化，以获得最优的发酵工艺条件。黑曲霉的繁殖能力强，发酵条件温和，有一定的抗逆性，并且拥有丰富的酶系，具有多种萝卜硫素的代谢途径，所以本发明的发酵法具有工艺更简单，反应条件温和易控，成本低，产率高，易大规模工业化生产，为萝卜硫素的提取方法提供新的思路和选择。同时也扩大了胭脂萝卜的应用范围，提高了胭脂萝卜的附加值，具有良好的应用前景和经济效益。

Description

一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法

技术领域

本发明涉及食品发酵与加工技术领域，特别的涉及一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法。

背景技术

萝卜硫素，又名莱菔子素，属于异硫代氰酸盐衍生物，分子式为C₆H₁₁S₂NO，分子质量的大小为177.29。其广泛分布于十字花科作物中，它是一种可诱导机体产生Ⅱ型解毒酶的多功能诱导物，这种酶可对许多致癌物产生抗性，进而起到抗癌作用，它是迄今为止蔬菜中发现的最强的抗癌成分。美国和日本的研究人员利用转基因实验鼠证明许多动物体内普遍存在一种用来抵抗食品和环境中有毒化学物致癌作用的系统，发挥这种作用主要依赖于Ⅱ型抗毒酶，此酶可消除有害化学物质，抑制其损伤DNA，从而达到抗癌症效果。近几年以来，我国癌症的发病率逐年上升，萝卜硫素不仅抗癌作用较强而且是植物活性物质。因此在药品和食品方面大规模生产萝卜硫素产品都具有广阔的市场应用前景。

目前，萝卜硫素的主要提取方法为化学合成法和酶法或两者相结合。如九十年代James等人利用化学中手性合成的方法合成萝卜硫素；1992年Schenk等人使用一种手性辅助的方法合成萝卜硫素；虽然化学合成法反应过程容易控制，易大量生产，但是一般使用有毒试剂为原料易造成环境污染，且合成产物是外消旋体，而手性合成方法则步骤多，工艺复杂，收率低；阳晖、赵学勤等以胭脂萝卜废渣为原料提取萝卜硫素，以单因素实验为基础，用响应面法分析了酶解温度、酶解时间、pH、抗坏血酸（Vc）的添加量对萝卜硫素得率的影响，结果表示，萝卜硫素的前体物质硫代葡萄糖苷的最佳的酶解条件为：酶解温度31℃，酶解时间7.7h，pH5.6，Vc添加量0.24mg/kg；吴华彰和赵云利以西兰花种子为实验材料，采用L₉（3⁴）正交实验，对影响酶解产生萝卜硫素的四个条件进行优化，结果表明，各因素的影响程度由大到小为：pH、催化缓冲液类型、Vc的浓度、Zn²⁺ 浓度，最佳生产条件为：pH5.0，以0.1mol/L醋酸-醋酸钠萝卜汁缓冲液为酶解缓冲体系，Vc的浓度为0.5mg/mL，Zn²⁺的浓度为0.1mol/L；但上述方法中酶解法主要使用外源酶进行酶解，外源酶易受环境影响，易造成活力下降或失活（降解），提取效率低，且目前所用的酶大多都是从十字花科蔬菜中提取的，不但对十字花科类蔬菜较为浪费且提取过程较为复杂。

胭脂萝卜，又名红心萝卜，系十字花科萝卜属萝卜种的一个地方品种，主要产区在重庆涪陵，其富含钙、铁、维生素B₁、B₂、木质素与纤维素，此外还含有大量的红色素和花青素，没有人工合成色素的副作用，可作食品、饮料和化妆品的着色剂和添加剂。目前，胭脂萝卜主要采用粗加工为主，用来制作红萝卜干、泡菜等传统食品，深加工品种很少，特色加工产品品种不多，加工总体利用程度低，并没有将其充分的开发和利用，产品附加值低。胭脂萝卜中萝卜硫素含量丰富，因此，从胭脂萝卜中提取制备萝卜硫素具有良好的研究价值和经济效应。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，解决了现有萝卜硫素的提取方法存在提取效率低、操作复杂和环境污染的问题。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，将黑曲霉作为发酵菌接种到胭脂萝卜溶液中发酵，发酵结束后经提取、分离，得到胭脂萝卜硫素；具体包括以下步骤：

1）将胭脂萝卜洗净、切丝后匀浆后，再将其干燥、研磨至粉末，然后将上述粉末溶于水中，高温高压灭菌，得到胭脂萝卜培养基；

2）将黑曲霉接种到基础培养基上培养，使菌种活化，然后将其在无菌的基础培养基中传代培养2次，得到种子液，再将所述种子液离心收集菌体并用等体积的0.85%的生理盐水重悬得到菌液；

3）将步骤2）得到的菌液接种到步骤1）制得的胭脂萝卜培养基中发酵，发酵至终点，得到发酵液；

4）将步骤3）得到的发酵液置于30~37℃中干燥至无水分为止得到发酵菌体，然后向所述发酵菌体中加入乙酸乙酯，超声提取，再经抽滤、旋转蒸发至无乙酸乙酯，得到胭脂萝卜硫素。

进一步，所述胭脂萝卜培养基中胭脂萝卜粉末与水的质量比为1:2~1:4。由于黑曲霉生长繁殖需要水分，但如果水分含量较低会导致黑曲霉生长受抑制，难以利用水分进行生命活动，最终导致萝卜硫素提取量降低；而水分过多会影响通气，不利于黑曲霉的呼吸，所以料液比应当控制在一定范围内，优选1：3。

进一步，所述基础培养基包括以下组分：牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，氯化钠0.5g/L，琼脂1.5~2.0g/L，pH 7.0~7.2。

进一步，所述发酵温度为30~35℃，优选31℃，随着发酵温度的增高萝卜硫素提取量先增加后减小，温度在30℃时提取量达到最大值，说明此温度下降解产生萝卜硫素的效果最好。也表明在30℃左右时黑曲霉活性最大，温度较低会抑制黑曲霉的活性，温度小范围升高后虽也在黑曲霉的最适生长温度范围内，但一方面会加剧发酵过程中的水分蒸发速度，另一方面可能是过高的温度会影响萝卜硫素的稳定性，使其更容易分解，从而影响了发酵结果使萝卜硫素产量降低。

进一步，所述发酵时间为72~96h。随着发酵时间的增加萝卜硫素提取量逐渐增大，发酵开始阶段黑曲霉利用胭脂萝卜中的营养物质生长，并开始进行活动降解胭脂萝卜中的硫代葡萄糖苷，所以萝卜硫素的提取量是逐渐增加的，并且由于开始发酵时的营养物质充足，黑曲霉生长旺盛，萝卜硫素提取量生长的较快，但在96h后萝卜硫素提取量的增加变得平稳，此时已有大量的硫代葡萄糖苷被降解，黑曲霉的生长也已接近饱和，所以萝卜硫素的提取量也将不再增长。

进一步，步骤3）中所述胭脂萝卜培养基的pH值维持在5.5~6.6，当pH达到5.5时萝卜硫素提取量达到最大值，主要原因是黑曲霉的生长最适酸碱度在5.0 - 6.0之间，在此环境下黑曲霉能够最大程度的进行生命活动，对硫代葡萄糖苷进行降解，产生相对较多的萝卜硫素。而且由于萝卜硫素在不同的pH下都会有所分解，但在碱性条件下会加速分解，而在酸性和中性条件下分解缓慢，优选为5.7。

进一步，步骤3）中所述接种量为6~10%，随着接种量的增高萝卜硫素的提取量也在不断升高，但当接种量达到8%后萝卜硫素的提取量又会随着接种量的增大而有所降低，说明接种到一定量后会饱和，过多的黑曲霉会相互竞争底物的营养物质，竞争的结果反而不利于部分黑曲霉的生命活动，优选为8.3%。

进一步，步骤4）中所述乙酸乙酯与胭脂萝卜粉的质量比为30:1。

进一步，所述超声功率为250W，超声时间为20min。

进一步，所述旋转蒸发的温度为40℃。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、本发明采用黑曲霉发酵法制备胭脂萝卜硫素，对发酵过程中发酵温度、料液比、接种量、pH等指标进行优化，以获得最优的发酵工艺条件。本发明采用的发酵法较化学合成法来讲，工艺更简单，反应条件更容易控制，温度温和；较酶解法来说，由于黑曲霉的繁殖能力强，酶系丰富，且具有一定的抗逆性，具有成本低、产率高以及不易受外界环境的影响，所以本发明适用于大规模工业化生产，为萝卜硫素的提取方法提供新的思路和选择。

2、本发明利用微生物发酵获得胭脂萝卜中萝卜硫素的方法，工艺更简单，反应条件温和易控，成本低，产率高。以胭脂萝卜为原料，以黑曲霉为发酵剂，安全环保，无环境污染，同时也扩大了胭脂萝卜的应用范围，提高了胭脂萝卜的附加值，具有良好的应用前景和经济效益。

附图说明

图1为发酵时间对萝卜硫素提取量的影响；

图2为发酵温度对萝卜硫素提取量的影响；

图3为发酵料液比对萝卜硫素提取量的影响；

图4为发酵接种量对萝卜硫素提取量的影响；

图5为发酵pH对萝卜硫素提取量的影响；

图6为萝卜硫素标准曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明。所用试剂无特别说明均为普通市售。

以下实施例所用黑曲霉为黑曲霉(Aspergillus niger) CMCC（F）98003菌株购于上海鲁微科技有限公司。

一、基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法

1、一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，包括以下步骤：

1）将新鲜的胭脂萝卜洗净、切丝后匀浆后，再将其放入50℃干燥箱干燥至无水、研磨至粉末，然后取100g上述粉末溶于水中，使胭脂萝卜培养基中的料液比为1:3，在121℃下灭菌15min，得到胭脂萝卜培养基；

2）将黑曲霉接种到牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，NaCl0.5g/L，琼脂1.5-2.0g/L，pH7.0~7.2）置于30℃的生化培养箱中培养24h，使菌种活化，然后将其在无菌的牛肉膏蛋白胨培养基中传代培养2次，得到种子液，再将所述种子液离心收集、清洗菌体并用等体积的0.85%的生理盐水重悬，得到菌液；

3）将步骤2）得到的菌液按照6%的接种量接种到步骤1）制得的胭脂萝卜培养基中，发酵过程中维持发酵温度为30℃，发酵培养基的pH值为5.5，发酵时间分别为24h、48h、72h、96h和120h，得到发酵液；

4）将步骤3）得到的发酵液置于30℃中干燥至无水分为止得到发酵菌体，然后向所述发酵菌体中加入乙酸乙酯，使乙酸乙酯的质量为所加胭脂萝卜粉质量的30倍，超声提取25min，在25℃下放置2h，将提取后的混合液抽滤2次，得到提取液，将提取液在旋转蒸发仪上40℃旋转浓缩至基本无乙酸乙酯为止，用少量提取剂将产物洗涤出来，再用分液漏斗将其分离，得到胭脂萝卜硫素。

比较不同的发酵时间对萝卜硫素提取量的影响，结果如图1所示。

从图中可以看出，随着发酵时间的增加萝卜硫素提取量逐渐增大，发酵开始阶段黑曲霉利用胭脂萝卜中的营养物质生长，并开始进行活动降解胭脂萝卜中的硫代葡萄糖苷，所以萝卜硫素的提取量是逐渐增加的，并且由于开始发酵时的营养物质充足，黑曲霉生长旺盛，萝卜硫素提取量生长的较快，但在96h后萝卜硫素提取量的增加变得平稳，此时已有大量的硫代葡萄糖苷被降解，黑曲霉的生长也已接近饱和，所以萝卜硫素的提取量也将不再增长。

2、称取100g干燥研磨后的胭脂萝卜，在发酵时间为96h，发酵料液比为1:3，接种量为6%，pH值为5.5的条件下，分别将接种后的胭脂萝卜培养基在温度分别为20℃、25℃、30℃、35℃、40℃的培养箱中培养，其它步骤同实验1，比较不同的发酵温度对萝卜硫素提取量的影响，结果如图2所示。

从图中可以看出，随着发酵温度的增高萝卜硫素提取量先增加后减小，温度在30℃时提取量达到最大值，说明此温度下降解产生萝卜硫素的效果最好。也表明在30℃左右时黑曲霉活性最大，温度较低会抑制黑曲霉的活性，温度小范围升高后虽也在黑曲霉的最适生长温度范围内，但一方面会加剧发酵过程中的水分蒸发速度，另一方面可能是过高的温度会影响萝卜硫素的稳定性，使其更容易分解，从而影响了发酵结果使萝卜硫素产量降低。

3、称取100g干燥研磨后的胭脂萝卜，在发酵时间为96h，发酵温度为30℃，接种量为6%，pH为5.5的条件下，分别将料液比为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5的胭脂萝卜培养基接种后在培养箱中培养，其它步骤同实验1，比较不同的发酵料液比对萝卜硫素提取量的影响，结果如图3所示。

从图中可以看出，料液比在1:2 – 1:4之间时发酵效果较好，在1:3时达到最大值0.5012mg/g，黑曲霉生长繁殖需要水分，但如果水分含量较低会导致黑曲霉生长受抑制，难以利用水分进行生命活动，最终导致萝卜硫素提取量降低。而水分过多会影响通气，不利于黑曲霉的呼吸，所以料液比应当控制在一定范围内。

4、称取100g干燥研磨后的胭脂萝卜，在发酵时间为96h，发酵温度为30℃，发酵料液比为1:3，pH为5.5的条件下，分别将接种量为2%、4%、6%、8%、10%的胭脂萝卜培养基在培养箱中培养，其它步骤同实验1，比较不同的接种量对萝卜硫素提取量的影响，结果如图4所示。

从图中可以看出，随着接种量的增高萝卜硫素的提取量也在不断升高，但当接种量达到8%后萝卜硫素的提取量又会随着接种量的增大而有所降低，说明接种到一定量后会饱和，过多的黑曲霉会相互竞争底物的营养物质，竞争的结果反而不利于部分黑曲霉的生命活动。

5、称取100g干燥研磨后的胭脂萝卜，在发酵时间为96h，发酵温度为30℃，发酵料液比为1:3，接种量为6%的条件下，分别将接种后的胭脂萝卜培养基调节pH为4.5、5.5、6.5、7.5、8.5后在培养箱中培养，其它步骤同实验1，比较不同pH对萝卜硫素提取量的影响，结果如图5所示。

从图中可以看出，在其他因素保持不变的情况下，当pH达到5.5时萝卜硫素提取量达到最大值，主要原因是黑曲霉的生长最适酸碱度在5.0 - 6.0之间，在此环境下黑曲霉能够最大程度的进行生命活动，对硫代葡萄糖苷进行降解，产生相对较多的萝卜硫素。而且由于萝卜硫素在不同的pH下都会有所分解，但在碱性条件下会加速分解，而在酸性和中性条件下分解缓慢。

实施例1

一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，包括以下步骤：

1）将新鲜的胭脂萝卜洗净、切丝后匀浆后，再将其放入50℃干燥箱干燥至无水、研磨至粉末，然后取上述粉末溶于水中，使料液比为1:3，在121℃下灭菌15min，得到胭脂萝卜培养基；

2）将黑曲霉接种到牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，NaCl0.5g/L，琼脂1.5-2.0g/L，pH7.0~7.2）置于30℃的生化培养箱中培养24h，使菌种活化，然后将其在无菌的牛肉膏蛋白胨培养基中传代培养2次，得到种子液，再将所述种子液离心收集、清洗菌体并用等体积的0.85%的生理盐水重悬，得到菌液；

3）将步骤2）得到的菌液按照8.3%的接种量接种到步骤1）制得的胭脂萝卜培养基中，发酵过程中维持发酵温度为31℃，发酵培养基的pH值为5.7，发酵96h，得到发酵液；

4）将步骤3）得到的发酵液置于30℃中干燥至无水分为止得到发酵菌体，然后向所述发酵菌体中加入乙酸乙酯，使乙酸乙酯的质量为所加胭脂萝卜粉质量的30倍，超声功率为250W的条件下提取25min，在25℃下放置2h，将提取后的混合液抽滤2次，得到提取液，将提取液在旋转蒸发仪上40℃旋转浓缩至基本无乙酸乙酯为止，用少量提取剂将产物洗涤出来，再用分液漏斗将其分离，得到胭脂萝卜硫素。

实施例2

一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，包括以下步骤：

1）将新鲜的胭脂萝卜洗净、切丝后匀浆后，再将其放入50℃干燥箱干燥至无水、研磨至粉末，然后取上述粉末溶于水中，使料液比为1:4，在121℃下灭菌15min，得到胭脂萝卜培养基；

2）将黑曲霉接种到牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，NaCl0.5g/L，琼脂1.5-2.0g/L，pH7.0~7.2）置于30℃的生化培养箱中培养24h，使菌种活化，然后将其在无菌的牛肉膏蛋白胨培养基中传代培养2次，得到种子液，再将所述种子液离心收集、清洗菌体并用等体积的0.85%的生理盐水重悬，得到菌液；

3）将步骤2）得到的菌液按照8%的接种量接种到步骤1）制得的胭脂萝卜培养基中，发酵过程中维持发酵温度为35℃，发酵培养基的pH值为5.5，发酵96h，得到发酵液；

4）将步骤3）得到的发酵液置于30℃中干燥至无水分为止得到发酵菌体，然后向所述发酵菌体中加入乙酸乙酯，使乙酸乙酯的质量为所加胭脂萝卜粉质量的30倍，超声功率为250W的条件下提取25min，在25℃下放置2h，将提取后的混合液抽滤2次，得到提取液，将提取液在旋转蒸发仪上40℃旋转浓缩至基本无乙酸乙酯为止，用少量提取剂将产物洗涤出来，再用分液漏斗将其分离，得到胭脂萝卜硫素。

实施例3

一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，包括以下步骤：

1）将新鲜的胭脂萝卜洗净、切丝后匀浆后，再将其放入50℃干燥至无水、研磨至粉末，然后取上述粉末溶于水中，使料液比为1:3，在121℃下灭菌15min，得到胭脂萝卜培养基；

2）将黑曲霉接种到牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，NaCl0.5g/L，琼脂1.5-2.0g/L，pH7.0~7.2）置于30℃的生化培养箱中培养24h，使菌种活化，然后将其在无菌的牛肉膏蛋白胨培养基中传代培养2次，得到种子液，再将所述种子液离心收集、清洗菌体并用等体积的0.85%的生理盐水重悬，得到菌液；

3）将步骤2）得到的菌液按照10%的接种量接种到步骤1）制得的胭脂萝卜培养基中，发酵过程中维持发酵温度为30℃，发酵培养基的pH值为6.5，发酵96h，得到发酵液；

4）将步骤3）得到的发酵液置于30℃中干燥至无水分为止得到发酵菌体，然后向所述发酵菌体中加入乙酸乙酯，使乙酸乙酯的质量为所加胭脂萝卜粉质量的30倍，超声功率为250W的条件下提取25min，在25℃下放置2h，将提取后的混合液抽滤2次，得到提取液，将提取液在旋转蒸发仪上40℃旋转浓缩至基本无乙酸乙酯为止，用少量提取剂将产物洗涤出来，再用分液漏斗将其分离，得到胭脂萝卜硫素。

对比例1

发酵菌为大肠杆菌，发酵温度为37℃，其它的同实施例1。

二、产物的定性和定量分析

1、胭脂萝卜硫素的定性分析。

在实施例1~3和对比例1发酵得到的粗提物中加入过量硝酸银，实施例1~3中均能生成大量不溶解的硫化银和碳化二亚胺，即棕黑色沉淀，则表明提取物中存在胭脂萝卜硫素；而对比例1中沉淀不明显。

2、胭脂萝卜硫素的定量分析。

运用紫外分光光度法，先制作标准曲线，具体方法为精确量取萝卜硫素标样1mg，再取9ml的无水乙醇溶液将其配成浓度为0.1mg/mL的标准溶液。按照浓度梯度配置浓度分别为0.10、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04mg/mL的标准溶液，依次在波长为201nm处测定其吸光度，测三次，求平均值。然后以所得吸光度为纵坐标，以萝卜硫素测定的含量（mg/mL）为横坐标建立标准曲线，结果如图1所示。

得到线性方程为y=0.6429x-0.0171，标准曲线的相关系数为R²=0.9934，由此将待测样品的吸光度带入线性方程即可计算出粗提物中萝卜硫素浓度。

萝卜硫素提取量（mg/g）=粗提物中萝卜硫素浓度(mg/mL)×粗提物体积(mL)/萝卜质量(g) （1）

将实施例1~3和对比例1制备的胭脂萝卜硫素粗提物采用紫外分光光度法进行浓度测定，在根据式（1）萝卜硫素提取量，结果如表1所示。

表1

实施例	提取量（mg/g）
		实施例1	0.5124
实施例2	0.4650
		实施例3	0.4872
对比例1	0.0522

从表1可以看出，相对于对比例1，本发明经黑曲霉发酵后的胭脂萝卜能够提取出更多的萝卜硫素，且效果明显。说明本发明产生的萝卜硫素不仅仅是利用了黑芥子硫酸苷酶的酶解作用，可能是由于本发明黑曲霉中拥有丰富的酶系，因此拥有多种代谢途径，从而通过黑曲霉发酵诱导代谢胭脂萝卜中的萝卜硫苷，产生了更多的胭脂萝卜硫素。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管申请人参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围的，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，将黑曲霉作为发酵菌接种到胭脂萝卜溶液中发酵，发酵结束后经提取、分离，即得到胭脂萝卜硫素。

2.根据权利要求1所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1）将胭脂萝卜洗净、切丝后匀浆后，再将其干燥、研磨至粉末，然后将上述粉末溶于水中，高温高压灭菌，得到胭脂萝卜培养基；

2）将黑曲霉接种到基础培养基上培养，使菌种活化，然后将其在无菌的液体基础培养基中传代培养2次，得到种子液，再将所述种子液离心收集菌体并用等体积的0.85%的生理盐水重悬得到菌液；

3）将步骤2）得到的菌液接种到步骤1）制得的胭脂萝卜培养基中发酵，发酵至终点，得到发酵液；

4）将步骤3）得到的发酵液置于30~37℃中干燥至无水分为止得到发酵菌体，然后向所述发酵菌体中加入乙酸乙酯，超声提取，再经抽滤、旋转蒸发至无乙酸乙酯，即得到胭脂萝卜硫素。

3.根据权利要求2所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，所述胭脂萝卜培养基中胭脂萝卜粉末与水的质量比为1:2~1:4。

4.根据权利要求2所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，所述基础培养基包括以下组分：牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，NaC l0.5g/L，琼脂1.5~2.0g/L，pH 7.0~7.2。

5.根据权利要求2所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，所述发酵温度为30~35℃，发酵时间为72~96h。

6.根据权利要求2所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，步骤3）中所述胭脂萝卜培养基的pH值维持在5.5~6.6，优选为5.7。

7.根据权利要求2所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，步骤3）中所述接种量为6~10%。

8.根据权利要求2所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，步骤4）中所述乙酸乙酯与胭脂萝卜粉的质量比为30:1。

9.根据权利要求2所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，所述超声功率为250W，超声提取时间为20min。

10.根据权利要求2所述基于发酵法制备胭脂萝卜硫素的方法，其特征在于，所述旋转蒸发的温度为40℃。