CN110538124A

CN110538124A - 一种白芨多糖面膜精华液的制备方法

Info

Publication number: CN110538124A
Application number: CN201910893354.6A
Authority: CN
Inventors: 苗云峰
Original assignee: Guizhou Daozhuang Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Guizhou Daozhuang Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2019-09-20
Filing date: 2019-09-20
Publication date: 2019-12-06

Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法。通过白芨多糖纳米乳原料、薏苡仁提取物纯化、防腐剂组分的复配、制备工艺的控制，得到了一种稳定、安全的白芨多糖面膜精华液的配方工艺，使得到的白芨多糖面膜精华液具有抗氧化、抗炎、舒缓的效果。

Description

一种白芨多糖面膜精华液的制备方法

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法。

背景技术

白芨因其收敛、止血功能，延缓皮肤衰老等功效，在化妆品领域有许多应用，如营养霜、洗面奶、面膜泥等。已有研究对白芨的安全性进行了全面研究,按GB7919-87《化妆品安全性评价程序和方法》对白芨胶进行皮肤毒理性、安全性试验。结果表明,白芨胶对皮肤无刺激、无变态性反应和无毒反应,对人体也未引起明显的不良反应，作为化妆品添加剂应用是安全的。

但是化妆品的配方并非只有单一组分，白芨多糖在使用中常常需要与其他组分共同配合，以达到最佳效果，包括产品的功效和产品的性质等。随之而来的是添加成分的安全性问题。

很多植物中的天然活性成分如黄酮类、烯萜类、糖苷类、酸类具有良好的抗氧化、抗炎活性，但是根据患者用药的结果统计发现很多都具有致敏性(《中药引发过敏反应的危险因素及中成药致敏成分研究》，林明宝发表)。另外，目前常用的防腐剂都属于化学合成类物质，都具有一定的刺激性、致敏性甚至生物毒性。

面膜已成为化妆品市场上重要的产品，其通过水合作用和活性物质的透皮吸收作用达到护肤美容的目的，然而由于面膜精华液中添加的成分安全性问题，使得消费者在使用中造成的面部皮肤过敏问题屡见不鲜，对消费的身心都造成了伤害，从而，开发一种安全且有效的面膜产品十分必要。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种白芨多糖面膜精华液的制备方法。

具体是通过以下技术方案来实现的：

一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，所述精华液的组成为质量占比10～15％白芨多糖纳米乳、10～15％薏苡仁提取物、1～2％天然防腐剂、5％～8％辅助剂、0.5～1％维生素B₆、水；

所述精华液的制备方法为：白芨多糖纳米乳与薏苡仁提取物混合后加入水中，并依次加入辅助剂，维生素B6粉末和天然防腐剂，快速搅拌20～30min至均匀，超声10～15分钟，调节此溶液pH至5.5～6.5；

所述白芨多糖纳米乳的组成剂质量配比为：表面活性剂：混合油脂：溶剂：白芨多糖质量比＝3～6:2～3:1～2:2～4；

所述白芨多糖纳米乳的制备方法为：表面活性剂与混合油脂按比例混合，不断搅拌，此为油相；白芨多糖与溶剂按比例混合均匀，此为水相，先将1/4～1/6油相缓慢倒入水相中搅拌均匀，再将此混合液体全部倒入剩余油相，不断搅拌，直至形成半透明的黄色分散体；

所述混合油脂为橄榄油：紫苏油质量比＝4～5:1；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5～7的混合物；

所述薏苡仁提取物的制备方法为：薏苡仁加入3～5倍质量的水，在碱性水溶液中45～55℃回流提取2～3h，过滤，取续滤液调节pH至中性，加入0.3～0.5g/g蛋白酶0.4～0.7g/g淀粉酶，在55～65℃酶解3～4h，加入2～3倍体积、质量分数50～70％的乙醇溶液静置2～3h后，加入吸附剂以60～80r/min搅拌30～50min后过滤，挥干乙醇即可；吸附剂为鸡蛋壳先后在4～6倍体积的0.1mol/L磷酸和0.1mol/L氯化铵溶液中各浸泡3h后，经60～80℃烘干研磨而成的粉末；

所述天然防腐剂由质量分数40～50％苯乙醇、10～15％芦荟苷、12～15％单辛酸甘油酯、5～10％甘氨酸钠、10～20％水组成的W/O乳剂；

所述天然防腐剂的制备方法为：将配方量的甘氨酸钠和溶于水中，另将处方量的苯乙醇、芦荟苷、单辛酸甘油酯混合均匀，此为油相，再将甘氨酸钠的水溶液缓慢注入油相中，然同一方向80～120r/min搅拌30～40min即得；

所述辅助剂为含量5～8％白芨多糖溶液；

所述精华液可与任意面膜纸组合成为具有抗氧化、抗炎的作用的面膜产品；

所述表面活性剂为吐温80：吐温60质量比＝3:1的混合物；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:3～5的混合物；

所述碱性水溶液为pH9～10的水溶液；

所述超声功率为120～140W；

所述水为纯净水，去离子水或蒸馏水。

有益效果：

1.良好的抗氧化、抗炎、镇静舒缓功效。本产品的主要抗氧化功效来自于白芨多糖，本文件将白芨多糖原料经改进为W/O型纳米乳，通过控制微粒粒径和包裹油性外壳，使得白芨多糖纳米乳与皮肤有良好的相容性，且具有良好的透皮吸收特性，白芨多糖得以更多的进入皮肤发挥作用。另外添加了有效成分薏苡仁提取物和芦荟苷，薏苡仁提取物具有抗炎、抗氧化的功效，芦荟苷具有舒缓补水的功效，三者共同配伍对发挥药效具有协同作用。维生素B6是一种水溶性维生素,在临床上用于治疗冻疮、干燥皱裂、脂溢性皮炎等疾病，在本件中具有抗炎的作用，但由于起可能引起的皮肤耐受问题添加量极少，且与白芨多糖、薏苡仁提取物及芦荟苷的联合应用减轻了皮肤的不耐受反应。在白芨多糖与薏苡仁提取物的混合中，本文件加入了低浓度的白芨多糖溶液，一方面是因为白芨多糖溶于水中形成的白芨多糖胶天然亲水性高分子材料，具有辅助乳化剂的作用，有助于W/O型纳米乳溶解于薏苡仁提取液中，另一方面，白芨多糖因具有抗氧化作用有助于保护精华液不被氧化。在精华液制备的最后，进行各个部分的溶液混合之后，需对混合液超声10～15min，有助于增强纳米乳的稳定性。而调节pH可以增强纳米乳的稳定性，且接近皮肤黏膜的pH，易于相容。

2.配方具有安全性。白芨多糖纳米乳的制备中，并未添加助乳化剂，是为了减少乙醇带来的皮肤刺激性；纳米乳的溶液中不含有乙醇，羟基基团由橄榄油提供，在此情况下，助乳化剂的添加会降低纳米乳的稳定性，阻碍纳米乳粒子的形成；橄榄油本身具有一定致敏性，为了克服此缺点，本文件一方面降低了橄榄油的用量，另一方面添加了紫苏油，紫苏油与橄榄油同为油相，易于混合均匀，其中的α-亚麻酸能降低致敏因子与免疫抗体如IL-2的结合，从而大大减少了致敏的可能。另外，已知许多黄酮、烯萜、酸类物质具有致敏性，因此本文件在制备薏苡仁提取物时通过水提醇沉、调节pH至强碱、添加吸附剂去除了提取液中的酸类、黄酮类致敏性成分。防腐剂的选择由传统的5类化学物质变为了复配型组分，芦荟苷具除舒缓补水功效外还具有抗炎抑菌的功效，且对皮肤无毒性与致敏性，苯乙醇和单辛酸甘油酯无毒且无皮肤刺激性，在化妆品中的添加没有限制；此外，单辛酸甘油酯还是一种非离子型表面活性剂，经制备工艺得到的复合防腐剂为W/O乳剂，而甘氨酸的加入避免了苯乙醇与非离子表面剂络合降低效果，它们的复配在使用量小的情况下对细菌和真菌具有显著的抑制效果；在精华液的制备过程中，各部分溶液混合后的超声有助于防腐剂有效发挥作用：本天然防腐剂的防腐效果与本文件提供的精华液最终形成的乳化粒子大小密切相关，经实验发现，当乳化粒子大小为500nm以下时，此白芨多糖面膜精华液的防腐效能下降了43.5％，仅当乳化粒子大小为700～1000nm时具有最好的防腐效果。经超声处理后，最终精华液的乳化颗粒大小在700～1000nm之间，有助于防腐剂发挥作用。另外，对精华液进行pH调节，提高了防腐剂的稳定性，进一步提高了防腐效能。

总之，本文件通过白芨多糖纳米乳的制备、薏苡仁提取物纯化、防腐剂组分的复配、制备工艺的控制，得到了一种稳定、安全的白芨多糖面膜精华液的配方工艺，使得到的白芨多糖面膜精华液具有抗氧化、抗炎、舒缓的效果。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。

实施例1

一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，所述精华液的组成为质量占比10％白芨多糖纳米乳、10％薏苡仁提取物、1％天然防腐剂、5％辅助剂、0.5％维生素B₆、水；

所述精华液的制备方法为：白芨多糖纳米乳与薏苡仁提取物混合，并依次加入辅助剂，维生素B6粉末和天然防腐剂，快速搅拌20min至均匀，超声10分钟，调节此溶液pH至5.5；

所述白芨多糖纳米乳的组成剂质量配比为：表面活性剂：混合油脂：溶剂：白芨多糖质量比＝3:2:1:2；

所述白芨多糖纳米乳的制备方法为：表面活性剂与混合油脂按比例混合，不断搅拌，此为油相；白芨多糖与溶剂按比例混合均匀，此为水相，先将1/4油相缓慢倒入水相中搅拌均匀，再将此混合液体全部倒入剩余油相，不断搅拌，直至形成半透明的黄色分散体；

所述混合油脂为橄榄油：紫苏油质量比＝4:1；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5的混合物；

所述薏苡仁提取物的制备方法为：薏苡仁加入3倍质量的水，水溶液pH调节至9，45℃回流提取2h，过滤，取续滤液调节pH至中性，加入0.3g/g蛋白酶0.4～g/g淀粉酶，在55℃酶解3h，加入2倍体积、质量分数50％的乙醇溶液静置2h后，加入吸附剂以60r/min搅拌30min后过滤，挥干乙醇即可；吸附剂为鸡蛋壳先后在4倍体积的0.1mol/L磷酸和0.1mol/L氯化铵溶液中各浸泡3h后，经60℃烘干研磨而成的粉末；

所述天然防腐剂由质量分数50％苯乙醇、10％芦荟苷、12％单辛酸甘油酯、8％甘氨酸钠、20％水组成的W/O乳剂；

所述天然防腐剂的制备方法为：将配方量的甘氨酸钠和溶于水中，另将处方量的苯乙醇、芦荟苷、单辛酸甘油酯混合均匀，此为油相，再将甘氨酸钠的水溶液缓慢注入油相中，然同一方向80r/min搅拌30min即得；

所述辅助剂为含量5％白芨多糖溶液；

所述表面活性剂为吐温80：吐温60质量比＝3:1的混合物；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:3的混合物；

所述超声功率为120W；

所述水为纯净水。

实施例2

一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，所述精华液的组成为质量占比15％白芨多糖纳米乳、15％薏苡仁提取物、2％天然防腐剂、8％辅助剂、1％维生素B₆、水；

所述精华液的制备方法为：白芨多糖纳米乳与薏苡仁提取物混合，并依次加入辅助剂，维生素B6粉末和天然防腐剂，快速搅拌30min至均匀，超声15分钟，调节此溶液pH至6.5；

所述白芨多糖纳米乳的组成剂质量配比为：表面活性剂：混合油脂：溶剂：白芨多糖质量比＝6:3:2:4；

所述白芨多糖纳米乳的制备方法为：表面活性剂与混合油脂按比例混合，不断搅拌，此为油相；白芨多糖与溶剂按比例混合均匀，此为水相，先将1/6油相缓慢倒入水相中搅拌均匀，再将此混合液体全部倒入剩余油相，不断搅拌，直至形成半透明的黄色分散体；

所述混合油脂为橄榄油：紫苏油质量比＝4:1；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5的混合物；

所述薏苡仁提取物的制备方法为：薏苡仁加入5倍质量的水，水溶液pH调节至10，55℃回流提取3h，过滤，取续滤液调节pH至中性，加入0.5g/g蛋白酶0.7g/g淀粉酶，在65℃酶解4h，加入3倍体积、质量分数70％的乙醇溶液静置3h后，加入吸附剂以80r/min搅拌50min后过滤，挥干乙醇即可；吸附剂为鸡蛋壳先后在6倍体积的0.1mol/L磷酸和0.1mol/L氯化铵溶液中各浸泡3h后，经80℃烘干研磨而成的粉末；

所述天然防腐剂由质量分数50％苯乙醇、10％芦荟苷、15％单辛酸甘油酯、10％甘氨酸钠、15％水组成的W/O乳剂；

所述天然防腐剂的制备方法为：将配方量的甘氨酸钠和溶于水中，另将处方量的苯乙醇、芦荟苷、单辛酸甘油酯混合均匀，此为油相，再将甘氨酸钠的水溶液缓慢注入油相中，然同一方向120r/min搅拌40min即得；

所述辅助剂为含量8％白芨多糖溶液；

所述表面活性剂为吐温80：吐温60质量比＝3:1的混合物；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5的混合物；

所述超声功率为140W；

所述水为蒸馏水。

实施例3

一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，所述精华液的组成为质量占比12％白芨多糖纳米乳、12％薏苡仁提取物、1.5％天然防腐剂、7％辅助剂、0.8％维生素B₆、水；

所述精华液的制备方法为：白芨多糖纳米乳与薏苡仁提取物混合，并依次加入辅助剂，维生素B6粉末和天然防腐剂，快速搅拌25min至均匀，超声13分钟，调节此溶液pH至6；

所述白芨多糖纳米乳的组成剂质量配比为：表面活性剂：混合油脂：溶剂：白芨多糖质量比＝5:3:1.5:2；

所述白芨多糖纳米乳的制备方法为：表面活性剂与混合油脂按比例混合，不断搅拌，此为油相；白芨多糖与溶剂按比例混合均匀，此为水相，先将1/5油相缓慢倒入水相中搅拌均匀，再将此混合液体全部倒入剩余油相，不断搅拌，直至形成半透明的黄色分散体；

所述混合油脂为橄榄油：紫苏油质量比＝4.5:1；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:6的混合物；

所述薏苡仁提取物的制备方法为：薏苡仁加入4倍质量的水，水溶液pH调节至10，50℃回流提取2.5h，过滤，取续滤液调节pH至中性，加入0.4g/g蛋白酶0.5g/g淀粉酶，在60℃酶解3.5h，加入2.5倍体积、质量分数65％的乙醇溶液静置2.5h后，加入吸附剂以70r/min搅拌40min后过滤，挥干乙醇即可；吸附剂为鸡蛋壳先后在5倍体积的0.1mol/L磷酸和0.1mol/L氯化铵溶液中各浸泡3h后，经70℃烘干研磨而成的粉末；

所述天然防腐剂由质量分数45％苯乙醇、12％芦荟苷、13％单辛酸甘油酯、10％甘氨酸钠、20％水组成的W/O乳剂；

所述天然防腐剂的制备方法为：将配方量的甘氨酸钠和溶于水中，另将处方量的苯乙醇、芦荟苷、单辛酸甘油酯混合均匀，此为油相，再将甘氨酸钠的水溶液缓慢注入油相中，然同一方向100r/min搅拌35min即得；

所述辅助剂为含量7％白芨多糖溶液；

所述表面活性剂为吐温80：吐温60质量比＝3:1的混合物；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:3的混合物；

所述超声功率为130W；

所述水为纯净水。

实施例4

一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，所述精华液的组成为质量占比14％白芨多糖纳米乳、11％薏苡仁提取物、1.5％天然防腐剂、5％辅助剂、0.5％维生素B₆、水；

所述精华液的制备方法为：白芨多糖纳米乳与薏苡仁提取物混合，并依次加入辅助剂，维生素B6粉末和天然防腐剂，快速搅拌27min至均匀，超声11分钟，调节此溶液pH至6.5；

所述白芨多糖纳米乳的组成剂质量配比为：表面活性剂：混合油脂：溶剂：白芨多糖质量比＝4:2.5:1.5:2；

所述混合油脂为橄榄油：紫苏油质量比＝4.8:1；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5的混合物；

所述薏苡仁提取物的制备方法为：薏苡仁加入4.5倍质量的水，水溶液pH调节至10，52℃回流提取2.8h，过滤，取续滤液调节pH至中性，加入0.5g/g蛋白酶0.6g/g淀粉酶，在63℃酶解3.5h，加入2.5倍体积、质量分数65％的乙醇溶液静置2.4h后，加入吸附剂以75r/min搅拌48min后过滤，挥干乙醇即可；吸附剂为鸡蛋壳先后在5倍体积的0.1mol/L磷酸和0.1mol/L氯化铵溶液中各浸泡3h后，经75℃烘干研磨而成的粉末；

所述天然防腐剂的制备方法为：将配方量的甘氨酸钠和溶于水中，另将处方量的苯乙醇、芦荟苷、单辛酸甘油酯混合均匀，此为油相，再将甘氨酸钠的水溶液缓慢注入油相中，然同一方向110r/min搅拌38min即得；

所述辅助剂为含量8％白芨多糖溶液；

所述表面活性剂为吐温80：吐温60质量比＝3:1的混合物；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5的混合物；

所述超声功率为120W；

所述水为蒸馏水。

实施例5

一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，所述精华液的组成为质量占比10％白芨多糖纳米乳、15％薏苡仁提取物、1.2％天然防腐剂、8％辅助剂、0.9％维生素B₆、水；

所述精华液的制备方法为：白芨多糖纳米乳与薏苡仁提取物混合，并依次加入辅助剂，维生素B6粉末和天然防腐剂，快速搅拌30min至均匀，超声12分钟，调节此溶液pH至6.5；

所述白芨多糖纳米乳的组成剂质量配比为：表面活性剂：混合油脂：溶剂：白芨多糖质量比＝6:2.5:1.5:3；

所述混合油脂为橄榄油：紫苏油质量比＝5:1；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5的混合物；

所述薏苡仁提取物的制备方法为：薏苡仁加入4倍质量的水，水溶液pH调节至9，45℃回流提取2.5h，过滤，取续滤液调节pH至中性，加入0.4g/g蛋白酶0.5g/g淀粉酶，在60℃酶解3.5h，加入2.5倍体积、质量分数60％的乙醇溶液静置2.5h后，加入吸附剂以65r/min搅拌45min后过滤，挥干乙醇即可；吸附剂为鸡蛋壳先后在5倍体积的0.1mol/L磷酸和0.1mol/L氯化铵溶液中各浸泡3h后，经7℃烘干研磨而成的粉末；

所述天然防腐剂由质量分数50％苯乙醇、15％芦荟苷、14％单辛酸甘油酯、9％甘氨酸钠、12％水组成的W/O乳剂；

所述天然防腐剂的制备方法为：将配方量的甘氨酸钠和溶于水中，另将处方量的苯乙醇、芦荟苷、单辛酸甘油酯混合均匀，此为油相，再将甘氨酸钠的水溶液缓慢注入油相中，然同一方向90r/min搅拌35min即得；

所述辅助剂为含量7％白芨多糖溶液；

所述表面活性剂为吐温80：吐温60质量比＝3:1的混合物；

所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5的混合物；

所述超声功率为130W；

所述水为去离子水。

对比例1

将添加的白芨多糖纳米乳替换为同等药量的白芨多糖原料，其余组分和制备工艺与实施例5相同。

对比例2

将复配的防腐剂替换为为0.2％的苯甲醇，其余组分和制备工艺与实施例5相同。

对比例3

超声时间变为25min，其余组分和制备工艺与实施例5相同。

对比例4

pH变为7，其余组分和制备工艺与实施例5相同。

制备完成之后，本文件对不同参数工艺得到的白芨多糖面膜精华液的性质进行了考察，包括如下几个方面：

实验例1.粒径观察：

滴加1滴制备得到的精华液于载玻片上，盖上盖玻片，于100倍电子显微镜下观察乳化粒子大小并记录。结果见表1。

表1.不同样品的乳化粒径大小

由观察结果可以看出，超声时间对白芨多糖面膜精华液的乳化粒子粒径有着显著影响，当超声时间由10分钟增加为25分钟后，精华液的乳化粒子粒径大大缩小了。

实验例2.透皮吸收性质的比较

实验方法：

2.1小鼠离体皮肤制备

SPF级小鼠用veet脱毛膏除去背部毛，用水洗净，24h后断颈处死，立即剥离背部皮肤，去除脂肪及皮下组织，用生理盐水洗净，-80℃冻存备用；

2.2白芨多糖含量的检测

准确称取D-葡萄糖对照品,配置成2.5g·L-1标准溶液,现用现配。分别量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mL于试管中,对应加入0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mL蒸馏水,再各加1mL的5％苯酚溶液、5mL的浓硫酸,震荡摇匀后,静置30min。以蒸馏水做对照,在490nm波长下测OD值。以葡萄糖标准溶液浓度(X,μg·mL-1)为横坐标,以OD值(Y)为纵坐标,得出线性方程与相关系数分别为Y＝0.009 8X+0.0268,R2＝0.996 5,表明线性关系良好。

将干燥的白芨多糖粉碎后,精密称取0.01g,加入适量蒸馏水在磁力搅拌器60℃下充分溶解后,定容至100mL,配成样品溶液。吸取1mL样品溶液于试管中,加入1mL的5％苯酚溶液,5mL浓硫酸,震荡摇匀,静置30min,在490nm波长下测OD值。将OD值代入回归方程,得其浓度,白芨多糖含量计算公式为:

白芨多糖含量W(％)＝(样品浓度C×样品定容后的体积V/样品的质量m)×100

2.3白芨多糖及其纳米乳体外透皮吸收实验方法

取冻存的小鼠皮肤于37℃生理盐水中，解冻好之后剪成1cm的圆形，固定在Franz扩散池中，角质层面向供给池，在供给池中加入接收液，接收液为pH5.6-5.8的PBS溶液，接收液与小鼠皮肤应充分接触，水浴温度37℃，磁力搅拌速度为300r/min，分别于2,6,10h时取出2ml接收液同时补加等体积接收液。每组给与白芨多糖含量为2mg的试样，于特定时间点测定白芨多糖的含量，计算累积透过量(Qn，ug/cm²)；

Qn为累积透过量，Cn为接收池中白芨多糖最终浓度μg/ml，Ci为某一时间点接收池中l-龙脑浓度μg/ml，V为接收池体积，Vi为取样体积ml，A为扩散池面积；结果见表2。

表2.不同样品的透皮吸收效果比较

由实验结果可以看出，将白芨多糖制备为白芨多糖纳米乳后，其透过皮肤的白芨多糖含量在第10小时增加了2倍，纳米乳使得白芨多糖的透皮吸收效果显著增加。

实验例3.防腐效果评价

实验方法

3.1样品制备

取包装完好的待测化妆品样品2份,在无菌条件下各称取100g于灭菌试剂瓶中,备用。

3.2细菌悬浊液的制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希氏菌分别接种于大豆酪蛋白琼脂斜面培养基上,37℃培养24h。用5mL灭菌0.85％生理盐水冲洗菌苔,按照菌落总数测定方法测定细菌的菌落数,保证其菌落数在108CFU/mL左右,将以上3种细菌悬浊液等体积混合,备用。

3.3真菌悬浊液的制备

将白色念珠菌、黑曲霉分别接种于马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上,白色念珠菌28℃培养48h,用5mL灭菌0.85％生理盐水冲洗菌苔,按照菌落总数测定方法测定真菌的菌落其菌落数在107CFU/mL左右,黑曲霉28℃培养5d,用5mL含0.05％吐温的灭菌0.85％生理盐水冲洗菌苔,按照菌落总数测定方法测定真菌的菌落数,保证其菌落数在107CFU/mL左右,将2种真菌悬浊液等体积混合,备用。

3.4样品接种

取上述样品(100g),分别加入1mL混合细菌悬浊液和1mL混合真菌悬浊液,混合均匀,保证加入细菌悬浊液的样品中,每克样品含菌量在106CFU/mL左右,加入真菌悬浊液的样品中,每克样品含菌量在105CFU/mL左右。将样品置于室温(22.5±2.5)℃保存,并分别于第0、3、7、14、21、28d检测化妆品中的菌落数,以判断化妆品的防腐效能。

3.5样品检测

称取10g样品,加至90mL灭菌的生理盐水稀释瓶中充分摇荡均匀,制成1:10(m:V)的样品稀释液,再取1mL此稀释液加入到9mL生理盐水中,充分混匀稀释成1:100的样品稀释液,依此类推制成1:1000(V:V),1:10000(V:V)等,稀释到适宜的倍数。根据每次的实验结果选取适宜稀释度的稀释液2mL,加入到2个灭菌培养皿中,每个培养皿中加入1mL。加入细菌悬浊液的化妆品采用大豆酪蛋白琼脂培养基,37℃培养48h计数；加入真菌悬浊液的化妆品采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基,28℃培养3d后逐日计数,最终结果以第5d结果计算。

3.6评价标准

本次实验参照CTFA法,加入细菌混合液的样品在第7d时菌落总数下降99.9％,至第28d时无增长,加入真菌混合液的样品在第7d时致敏性评菌落总数下降90.0％,至28d时无增长,判断为防腐效果合格。其中细菌和真菌有1项不能达到以上标准判断为化妆品的防腐效果不合格。菌落总数下降90.0％,至28d时无增长,判断为防腐效果合格。其中细菌和真菌有1项不能达到以上标准判断为化妆品的防腐效果不合格。结果见表3。

表3.不同样品的防腐效果比较

由实验结果可以看出，本文件提供的防腐剂的防腐效果与传统的防腐剂苯甲酸相当，当超声时间延长为25分钟后防腐效果稍有下降，其余条件的改变不影响防腐效果。

实验例4.致敏性评价

4.1设置实验组、空白组、对照组，实验组分为胶原蛋白浸提液以及胶原蛋白/壳聚糖复合海绵样品浸提液，空白组加入相同体积的细胞培养液，BSA为阳性对照(使得其最终浓度是10mg/L)，每组设置5个复孔。按底物显色法检测β-己糖胺酶含量，准备好全新的96孔酶标板，每孔加入50L配备好的1mMβ-氨基己糖溶液，吸取之前收集的反应上清每孔加50μL到96孔板中，5％CO2，37℃恒温孵育1.5h，然后加入200μL 0.1M Na₂CO₃/Na HCO₃缓冲液(pH＝10)终止显色反应，冰浴10min使其终止脱颗粒反应过程，最后于4℃条件下1000rpm/min离心5min后收集反应上清，并检测上清中β-己糖胺酶含量。各组在收集完上清后，每孔再加入200μL含0.1％Triton X-100的PBS溶液裂解细胞，并收集细胞裂解液后利用酶标仪在405nm处的OD值检测β-己糖胺酶含量，并计算β-己糖胺酶释放率。按如下公式计算：

β-己糖胺酶释放率(％)＝(裂解液β-己糖胺酶A值－上清β-己糖胺酶A值)/裂解液β-己糖胺酶A值×100％

表4.不同样品的致敏性比较

检测RBL-2H₃细胞脱颗粒后释放的炎症介质或其信号分子可以评价致敏性和过敏程度，因此RBL-2H₃细胞是用于评价过敏反应或类过敏的灵敏模型。由对比结果可知，阳性对照具有较高的致敏性，与空白组相比，实施例5结果几乎相同，不具有致敏性，而对比例2虽然β-己糖胺酶释放率只为阳性对照的一半，但仍具有很高的致敏可能性。

Claims

1.一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，其特征在于，所述精华液的组成为质量为10～15％白芨多糖纳米乳、10～15％薏苡仁提取物、1～2％天然防腐剂、5％～8％辅助剂、0.5～1％维生素B₆、水。

2.如权利要求1所述一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，其特征在于，所述精华液的制备方法为：白芨多糖纳米乳与薏苡仁提取物混合后加入水中，并依次加入辅助剂，维生素B₆粉末和天然防腐剂，快速搅拌20～30min至均匀，超声10～15分钟，调节此溶液pH至5.5～6.5。

3.如权利要求1和2所述一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，其特征在于，所述白芨多糖纳米乳的组成剂质量配比为表面活性剂：混合油脂：溶剂：白芨多糖＝3～6:2～3:1～2:2～4。

4.如权利要求1至3所述一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，其特征在于，所述白芨多糖纳米乳的制备方法为：表面活性剂与混合油脂按比例混合，不断搅拌，此为油相；白芨多糖与溶剂按比例混合均匀，此为水相，先将1/4～1/6油相缓慢倒入水相中搅拌均匀，再将此混合液体全部倒入剩余油相，不断搅拌，直至形成半透明的黄色分散体。

5.如权利要求3所述一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，其特征在于，所述混合油脂为橄榄油：紫苏油质量比＝4～5:1。

6.如权利要求3所述一种白芨多糖面膜精华液的制备方法，其特征在于，所述溶剂为三乙醇胺：水质量比＝1:5～7的混合物。

7.如权利要求1和2所述一种白芨多糖面膜精华液的制备方法，其特征在于，所述薏苡仁提取物的制备方法为：薏苡仁在碱性水溶液回流提取，过滤，取续滤液调节pH至中性，加入蛋白酶和淀粉酶进行酶解，加入质量分数50～70％的乙醇溶液静置2～3h后，加入吸附剂搅拌后过滤，挥干乙醇即可。

8.吸附剂为鸡蛋壳先后在磷酸和氯化铵溶液中各浸泡3h后，经60～80℃烘干研磨而成的粉末。

9.如权利要求1和2所述一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，其特征在于，所述天然防腐剂由质量分数40～50％苯乙醇、10～15％芦荟苷、12～15％单辛酸甘油酯、5～10％甘氨酸钠、10～20％水组成的W/O乳剂。

10.如权利要求5所述一种白芨多糖面膜精华液及其制备方法，其特征在于，所述辅助剂为5～8％g/g白芨多糖溶液。