CN110507634A - 一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统及其制备方法 - Google Patents

一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统及其制备方法，本发明公开了一种药物载体体系，它是以模板法制备的中空介孔硅为基体，在其表面修饰双硫键，然后装载模型药物阿霉素后，以聚天冬氨酸封堵其孔道，再以1‑（3‑氨基丙基）咪唑进行改性得到的。本发明提供的药物载体系统，中性环境下带负电，可有效避免被正常细胞吞噬以促进其经充分循环后于肿瘤组织富集；在肿瘤组织的微酸性环境下，咪唑基充分电离，从而实现电荷翻转以促进载体更好地进入肿瘤细胞。

Description

一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统及其制备方法
技术领域
本发明属于药物载体领域，具体涉及一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统及其制备方法。
背景技术
近年来，随着自然环境的恶化，癌症的发病率越来越高。传统的癌症治疗手段包括：手术治疗，化学治疗和放射治疗等等。这些癌症治疗方法，可以在一定程度上延长患者的生命，但是这些治疗方式普遍存在低的富集能力，毒副作用较大，损害正常组织和创伤较大等缺点，从而限制了其对肿瘤的治疗效果。因此，开发新的治疗方式得到越来越多的关注。
目前，化疗是抗肿瘤的主要治疗方案，但化疗受到多药耐药(MDR)的挑战，这在很大程度上限制了化疗的疗效，且往往采用高剂量并增加给药频率。但是，高剂量和增加给药频率不会显著提高治疗效果，反而往往会给重要器官(心脏、肝脏和肾脏)带来严重的不良副作用，有可能进一步恶化耐药性。与传统药物载体相比，具备有电荷翻转能力的高分子载体则在很多方面有着巨大的优势。
高分子载体药物是指本身没有药理作用，也不与药物发生化学反应，但与药物连接后能改善药物的性质的高分子载体，与药物通过微弱的氢键或者共价键结合形成的药物复合物。高分子材料载体尽管没有药理作用，但在整个药物中却起着重要作用。首先，因为高分子载体相对分子质量大，故整个高分子药物不易被分解具有较强的稳定性，能在血液中停留时间较长，用高分子材料制备的微胶囊等还具有缓释作用，通常能提高药物的长效性并能降低药物的毒副作用。同时，合适的高分子载体可以接近进攻病变细胞的靶区或改变药物在靶区内的分布及增加渗透作用，提高药物选择性而使药物致增效。而在药物释放后，高分子载体不会在体内长时间积累，可排出或水解后被吸收，将毒性降到最低。可以说，高分子载体给很多难以解决的问题提供了答案。但是，传统的高分子载体为了实现带负电，通常会与马来酸酐、柠康酸酐等反应，得到带负电的β-羧基酰胺基团，虽然可以实现电荷翻转，但是其效率较低，需要若干小时，其实是不利于癌症治疗。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统，相比传统的载药载体，本发明所述药物载体系统在中性环境下带负电，可有效避免被正常细胞吞噬以促进其经充分循环后于肿瘤组织富集；在肿瘤组织的微酸性环境下，咪唑基充分电离，从而实现电荷翻转以促进载体更好地进入肿瘤细胞；同时，基体表面的双硫键可因癌细胞高浓度的谷胱甘肽而发生断裂，载体可于细胞内释放药物。
本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案为：
一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统，它是以模板法制备的中空介孔硅为基体，在其表面修饰双硫键，然后装载模型药物阿霉素后，以聚天冬氨酸封堵其孔道，再以1-(3-氨基丙基)咪唑进行改性得到的。
按上述方案，所述中空介孔硅用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)模板法制备。
上述电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统，其制备方法主要包括如下步骤：
步骤一，合成巯基功能化的中空介孔硅HMSN-SH
将含有模板的中空介孔硅分散在无水甲醇中，加入3-巯基丙基三甲氧基硅烷，20-40℃下反应20-30小时，离心洗涤；然后，将离心洗涤后的产物分散在甲醇和浓盐酸中，60-80℃下反应30-50小时，再次离心洗涤，得到HMSN-SH；
步骤二，合成氨基功能化的中空介孔硅HMSN-SS-NH2
将巯基功能化的中空介孔硅HMSN-SH溶解在无水甲醇中，超声分散后，加入S-(2-氨乙巯基)-2-巯基吡啶盐酸盐，在20-30℃下反应30-40小时，离心洗涤即得到HMSN-SS-NH2；
步骤三，合成聚天冬氨酸接枝的1-(3-氨丙基)咪唑PASP-API
将PSI溶解在DMF中，再加入1-(3-氨丙基)咪唑，在60-80℃、N2保护条件下反应20-30小时，冷却至室温，冰浴条件下加入NaOH溶液继续反应16-24小时，然后用盐酸调节pH至中性，透析3-4天，得到白色固体PASP-API；
步骤四，合成装载模型药物阿霉素的聚天冬氨酸接枝咪唑修饰的中空介孔硅DOX@HMSN-SS-PASP-API
将PASP-API溶解在水溶液中，用盐酸调节pH至5-6，冰浴条件下，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺，反应20-30小时，得到溶液c；将HMSN-SS-NH2溶解在pH 8-9的磷酸缓冲液中，加入模型药物阿霉素(DOX)，在30-40℃下避光反应20-30小时，得到溶液d；将溶液c滴加到溶液d中，继续反应20-30小时，离心洗涤得到DOX@HMSN-SS-PASP-API，即电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统。
按上述方案，巯基功能化的中空介孔硅的Zeta电位为-20～-30mV。
按上述方案，氨基功能化的中空介孔硅的Zeta电位为15-20mV，尺寸为120～130nm范围内。
按上述方案，步骤一中，含有模板CTAB的中空介孔硅在无水甲醇中的浓度在8-10mg/mL范围内，3-巯基丙基三甲氧基硅烷与无水甲醇的体积比为1：(35-45)。
按上述方案，步骤一中，浓盐酸和甲醇的体积比为(1-2)：(8-10)，巯基功能化的中空介孔硅在其中的分散浓度在6-10mg/mL范围内。
按上述方案，步骤二中，巯基功能化的中空介孔硅在无水甲醇中的浓度在1-3mg/mL范围内，S-(2-氨乙巯基)-2-巯基吡啶盐酸盐在无水甲醇中的浓度为4-6mg/mL。
按上述方案，步骤三中，PSI在DMF中的浓度在30-40mg/mL范围内，API在DMF中的浓度为20-30mg/mL；氢氧化钠溶液的浓度在0.5-0.8mmol/mL范围内，氢氧化钠的有效质量与PSI的质量比为(0.4-0.6):1。
按上述方案，步骤四中，PASP-API在水溶液中的浓度在0.2-0.7mg/mL范围内；EDC、N-羟基琥珀酰亚胺在溶液c中的浓度分别为10-20mg/mL和5-10mg/mL。
按上述方案，步骤四中，HMSN-SS-NH2在缓冲液中的浓度在2-3mg/mL范围内，模型药物阿霉素在溶液d中的浓度在0.5-1.5mg/mL范围内。
按上述方案，步骤四中，溶液c、溶液d的比例关系按照PASP-API与HMSN-SS-NH2的质量比为(1-2):(1-2)来计。
按上述方案，上述S-(2-氨乙巯基)-2-巯基吡啶盐酸盐的合成方法如下：将2,2-二硫二吡啶溶解在无水甲醇和乙酸中，作为溶液a；再将半胱胺盐酸盐溶解在无水甲醇中，作为溶液b；将溶液b滴加至溶液a中，在20-30℃下搅拌反应30-50小时，用旋转蒸发仪浓缩旋干，得到黄色油状物；所得黄色油状物溶解于无水甲醇中，经乙醚沉淀并干燥得到S-(2-氨乙巯基)-2-巯基吡啶盐酸盐。其中，2,2-二硫二吡啶在溶液a中的浓度在0.1-0.2g/mL范围内，无水甲醇和乙酸的体积比在(2.5-3):1范围内；半胱胺盐酸盐在溶液b中的浓度为20-40mg/mL；溶液a、溶液b的比例关系按照2,2-二硫二吡啶与半胱胺盐酸盐的质量比为(4-5)：(1-2)来计。
按上述方案，所述聚琥珀酰亚胺PSI的合成方法如下：将L-天冬氨酸溶解在浓磷酸中，在150-200℃下反应3-4个小时，用DMF沉淀并真空干燥后，得到PSI。其中，L-天冬氨酸和磷酸的质量比为(1-2)：1，其中浓磷酸的浓度为98％。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
首先，本发明提供的电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统，在中性环境下带负电，可有效降低被正常细胞非特异性吞噬可能性以促进其经充分循环后于肿瘤组织富集；在肿瘤组织的微酸性环境下，咪唑基充分电离，瞬间完成，从而更快的实现电荷翻转以促进载体更好地进入肿瘤细胞；而且，基体表面的双硫键可因癌细胞内高浓度的谷胱甘肽而发生断裂，载体系统可于细胞内释放药物以杀死癌细胞，可以有效提高药物利用率并降低其毒副作用。
附图说明
图1为实施例所采用的二氧化硅纳米粒子SiO2的PCS粒径图；
图2为实施例所采用的二氧化硅纳米粒子SiO2的SEM图；
图3为实施例所采用的聚琥珀酰亚胺PSI的NMR图；
图4为实施例所采用的聚天冬氨酸接枝1-(3-氨丙基)咪唑PASP-API的NMR图；
图5为实施例所采用氨基化中空介孔硅HMSN-SS-NH2的TEM图；
图6为实施例1各步骤产物的Zeta电位表格图；
图7为实施例1各步骤产物的氮气吸脱附曲线图；
图8为实施例1各步骤产物的孔径分布图；
图9为实施例1中各步骤产物的傅里叶红外图；
图10为实施例1中各步骤产物的热重分析图；
图11为实施例1所得产物释药图；
图12为实施例1中产物的电荷翻转图。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明不仅仅局限于下面的实施例。
下述实施例中涉及到的SiO2 NPs、SiO2@CTAB-MSN、S-(2-氨乙巯)-2-巯基吡啶盐酸盐、PSI可以采用如下方法制备，也可以采用其他方法制备。
1、合成SiO2 NPs
通过方法制备二氧化硅纳米粒子，其具体制备步骤如下：将一定量的乙醇，去离子水和氨水混合，室温下搅拌一段时间后，加热到30℃，迅速加入20mL的TEOS,继续反应2h，离心(10000r/min×10min)洗涤(水洗2次)，冷冻干燥得到纳米粒子SiO2。
由图1和图2可知，所制备的二氧化硅纳米粒子的尺寸为100nm范围内。
2、合成含有CTAB模板的实心介孔硅SiO2@CTAB-MSN
将1.0g SiO2 NPs均匀分散在200mL去离子水中，通过超声处理30min，得到悬浮液；然后将该悬浮液加入到混合液(混合液由1.0g CTAB，300mL去离子水，300mL无水乙醇，4.5mL浓氨水组成)中，室温搅拌30min，迅速加入2.1mL TEOS，在搅拌反应6h后，离心(10000r/min×10min)收集产物，并用无水乙醇(×2)和去离子水(×2)反复洗涤，最后分散在300mL去离子水中，得到SiO2@CTAB-MSN悬浮液。
3、合成S-(2-氨乙巯基)-2-巯基吡啶盐酸盐
将4.4g的2,2-二硫二吡啶溶解在30mL无水甲醇和10mL乙酸中(溶液a)，再将1g的半胱胺盐酸盐溶解在30mL无水甲醇中(溶液b)；将溶液b缓慢滴加至溶液a中，在25℃下搅拌反应48小时，用旋转蒸发仪浓缩旋干，得到黄色油状物，溶解于10mL的无水甲醇中，并用200mL的乙醚沉淀后，干燥得到S-(2-氨乙巯基)-2-巯基吡啶盐酸盐。
4、N-羟基琥珀酰亚胺的合成(PSI)
将15g L-天冬氨酸溶解在10mL浓磷酸中，用旋转蒸发仪，在175℃下反应2.5个小时，用DMF沉淀三次，并用水洗至中性，真空干燥得到N-羟基琥珀酰亚胺PSI。
图3为聚琥珀酰亚胺PSI的NMR图，PSI的积分比和化学位移符合预期，表明PSI的合成成功。
5、合成聚天冬氨酸接枝的1-(3-氨丙基)咪唑(PASP-API)
将1g的PSI溶解在30mL的DMF中，再加入0.75g的1-(3-氨丙基)咪唑API，在70℃，N2保护条件下反应24小时，冷却至室温，冰浴条件下加入NaOH溶液20mL(其中固体氢氧化钠为0.5g)，继续反应12h后，用盐酸调节pH至中性，透析3-4天，得到白色固体PASP-API。
由图4可知，通过对特征峰的标记，计算其接枝率与预期的一致，证明聚天冬氨酸接枝1-(3-氨丙基)咪唑成功制备。
实施例1
一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，具体包括如下步骤：
1.合成巯基功能化的中空介孔硅(HMSN-SH)
(1)去核
将前述制备的SiO2@CTAB-MSN悬浮液超声处理30min后，再剧烈搅拌4h，然后加入5.0g Na2CO3，将混合物在50℃下磁力搅拌10h，之后用去离子水(×3)充分洗涤至完全除去水溶液中的Na2CO3，离心(10000r/min×10min)收集产物，冻干后，即可得到含有CTAB的中空介孔硅纳米粒子CTAB-HMSN；
(2)巯基功能化、去模板CTAB
准确称取1.0g CTAB-HMSN均匀分散于200mL无水甲醇中，加入5.0mL MPTMS(3-巯基丙基三甲氧基硅烷)后，于30℃下剧烈搅拌，反应24h，经过离心(10000r/min×10min)收集产物并用无水甲醇(×2)反复洗涤，得到CTAB-HMSN-SH；
将所制备的CTAB-HMSN-SH 200mg均匀分散在20mL浓盐酸和200mL无水甲醇溶液中，冷凝回流48h，然后在超声辅助下，用去离子水(×3)反复洗涤，离心(10000r/min×10min)收集产物，冻干即可得到巯基功能化的中空介孔硅纳米粒子HMSN-SH。
2.合成氨基功能化的中空介孔硅(HMSN-SS-NH2)
准确称取500mg HMSN-SH，在200mL无水甲醇中超声分散均匀，然后加入1.0g的S-(2-氨乙巯基)-2-巯基吡啶盐酸盐，在室温下反应24h；所得产物离心并用去离子水(×1)和无水乙醇(×2)超声清洗数次，冻干后，得到氨基功能化的中空介孔硅纳米粒子HMSN-SS-NH2。
3.装载模型药物阿霉素PASP-API接枝的中空介孔硅(DOX@HMSN-SS-PASP-API)
将100mg的PASP-API溶解在200mL的去离子水中，调节pH为5-6，然后在冰浴条件下4℃，加入2.87g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和1.73g的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)后于室温下反应24h，得到溶液c；将200mg的HMSN-SS-NH2溶解在100mL的pH为8.0的磷酸缓冲液中，加入100mg的阿霉素(DOX)，在35℃下避光反应24h得到溶液d；将溶液c滴加到溶液d中，继续搅拌反应24h，离心洗涤(pH 7.4的PBS缓冲液洗5次，去离子水洗2次)，冷冻干燥，即得到DOX@HMSN-SS-PASP-API，即电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统。
由图5可知，氨基化的中空介孔硅的大小也满足对载体尺寸的需求；由图6可知，电位由负值变为正值，在变为负值，符合预期要求，初步证明接枝成功；由图7-8可知，每一步反应之后，比表面积和孔径大小逐渐减小，说明孔道封堵成功；
由图9可知，上述步骤中，每一步接枝的特殊基团的伸缩振动峰均能观察到，表明每一步反应均成功。结合图10可知，每一步接枝后的TG下降，表明各步骤均反应成功。
应用测试
1、测试GSH存在对DOX@HMSN-SS-PASP-API药物释放的影响：取适量的实施例1所得DOX@HMSN-SS-PASP-API分别分散在pH＝7.4的PBS缓冲溶液中和含有10mM GSH的pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，放置在37摄氏度的摇床中24小时，每隔一段时间取样，测试药物释放量。
由图11可知，通过控制谷胱甘肽(GSH)的浓度，120h后含10mM GSH的释药量达到98.4％，能够很好地释放出药物，满足要求。
2、通过模拟癌细胞内环境，调节不同pH值，探究在不同pH下，药物载体系统能否实现电荷翻转。取适量的实施例1所得DOX@HMSN-SS-PASP-API分别分散在pH＝7.4、6.8和6.4的PBS缓冲溶液中，放置在37摄氏度的摇床中，每隔一段时间取样，测试样品的电位情况。
由图12可知，通过模拟癌细胞内环境，在不同酸性条件下，即在不同pH条件下药物载体实现了电荷翻转。
实施例2
一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，具体包括如下步骤：
将100mg的PASP-API溶解在200mL的去离子水中，调节pH为5-6，冰浴条件下，加入2.87g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和1.73g的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),室温下反应24h，得到溶液a；将200mg的HMSN-SS-NH2溶解在100mL的去离子水中，调节pH为7-8，加入100mg的阿霉素，在35℃下避光反应24h得到溶液b；将溶液a滴加到溶液b中，继续搅拌反应24h，离心洗涤，冷冻干燥即得到DOX@HMSN-SS-PASP-API，即电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统。
实施例3
一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，具体包括如下步骤：
将100mg的PASP-API溶解在200mL的去离子水中，调节pH为5.5，冰浴条件下，加入2.0g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和1.0g的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),室温下反应24h，得到溶液a；将200mg的HMSN-SS-NH2溶解在100mL的pH为8.0的磷酸缓冲液中，加入100mg模型药物阿霉素，在35℃下避光反应24h得到溶液b；将溶液a滴加到溶液b中，继续搅拌反应24h，离心洗涤(pH 7.4的PBS缓冲液洗5次，去离子水洗2次)，冷冻干燥即得到DOX@HMSN-SS-PASP-API，即电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统。
实施例2-3所得各中间产物以及最终产物的检测方法与实施例1相同，经验证均成功制得药物载体系统，具有良好的电荷翻转能力以及靶向性，且药物本身无较大的毒副作用，在由正常细胞进入肿瘤微环境，能够快速实现电荷翻转，并且在肿瘤微环境下，双硫键断裂，释放出药物，进入肿瘤细胞，从而杀死细胞，不仅可有效地降低载体被正常组织细胞非特异性吞噬的可能性并可促进癌细胞对载体的吞噬，显著提高了载体对癌症的治疗能力，降低了毒副作用。更为重要的是，咪唑基充分电离，瞬间完成，从而更快地实现电荷翻转，以促进载体更好地进入肿瘤细胞，解决了传统高分子载体所存在效率低的问题。
因此，本发明所述药物载体系统具备较好的电荷翻转能力，更加高效的癌细胞内靶向给药能力，可以有效提高药物利用率并降低其毒副作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干改进和变换，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统，其特征在于，它是以中空介孔硅为基体，在其表面修饰双硫键，然后装载模型药物阿霉素后，以聚天冬氨酸封堵其孔道，再以1-（3-氨基丙基）咪唑进行改性得到的。
2.根据权利要求1所述的一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统，其特征在于，所述中空介孔硅采用十六烷基三甲基溴化铵模板法制备。
3.一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，其特征在于，主要包括如下步骤：
步骤一，合成巯基功能化的中空介孔硅HMSN-SH
将含有模板的中空介孔硅分散在无水甲醇中，加入3-巯基丙基三甲氧基硅烷，20-40℃下反应20-30小时，离心洗涤；然后，将离心洗涤后的产物分散在甲醇和浓盐酸中，60-80℃下反应30-50小时，再次离心洗涤，得到HMSN-SH；
步骤二，合成氨基功能化的中空介孔硅HMSN-SS-NH2
将巯基功能化的中空介孔硅HMSN-SH溶解在无水甲醇中，超声分散后，加入S-(2-氨乙巯基）-2-巯基吡啶盐酸盐，在20-30℃下反应30-40小时，离心洗涤即得到HMSN-SS-NH2；
步骤三，合成聚天冬氨酸接枝的1-（3-氨丙基）咪唑PASP-API
将PSI溶解在DMF中，再加入1-（3-氨丙基）咪唑，在60-80℃、N2保护条件下反应20-30小时，冷却至室温，冰浴条件下加入NaOH溶液继续反应16-24小时，然后用盐酸调节pH至中性，透析3-4天，得到白色固体PASP-API；
步骤四，合成装载模型药物阿霉素的聚天冬氨酸接枝咪唑修饰的中空介孔硅DOX@HMSN-SS-PASP-API
将PASP-API溶解在水溶液中，用盐酸调节pH至5-6，冰浴条件下，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺，反应20-30小时，得到溶液c；将HMSN-SS-NH2溶解在pH 8-9的磷酸缓冲液中，加入模型药物阿霉素（DOX）,在30-40℃下避光反应20-30小时，得到溶液d；将溶液c滴加到溶液d中，继续反应20-30小时，离心洗涤得到DOX@HMSN-SS-PASP-API，即电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统。
4.根据权利要求3所述的一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，其特征在于，巯基功能化的中空介孔硅的Zeta电位为-20～-30mV；氨基功能化的中空介孔硅的Zeta电位为15-20mV，尺寸为120～130nm范围内。
5.根据权利要求3所述的一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，其特征在于，步骤一中，含有模板CTAB的中空介孔硅在无水甲醇中的浓度在8-10mg/mL范围内，3-巯基丙基三甲氧基硅烷与无水甲醇的体积比为1：（35-45）；浓盐酸和甲醇的体积比为（1-2）：（8-10），巯基功能化的中空介孔硅在其中的分散浓度在6-10mg/mL范围内。
6.根据权利要求3所述的一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，其特征在于，步骤二中，巯基功能化的中空介孔硅在无水甲醇中的浓度在1-3mg/mL范围内，S-(2-氨乙巯基）-2-巯基吡啶盐酸盐在无水甲醇中的浓度为4-6mg/mL。
7.根据权利要求3所述的一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，其特征在于，步骤三中，PSI在DMF中的浓度在20-30mg/mL范围内，API在DMF中的浓度为30-40mg/mL；氢氧化钠溶液的浓度在0.5-0.8mmol/mL范围内，氢氧化钠的有效质量与PSI的质量比为（0.4-0.6）:1。
8.根据权利要求3所述的一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，其特征在于步骤四中，PASP-API在水溶液中的浓度在0.2-0.7mg/mL范围内；EDC、N-羟基琥珀酰亚胺在溶液c中的浓度分别为10-20mg/mL和5-10mg/mL；HMSN-SS-NH2在缓冲液中的浓度在2-3mg/mL范围内；模型药物阿霉素在溶液d中的浓度在0.5-1.5mg/mL范围内；步骤四中，溶液c、溶液d的比例关系按照PASP-API与HMSN-SS-NH2的质量比为(1-2):（1-2）来计。
9.根据权利要求3所述的一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，其特征在于，所述S-(2-氨乙巯基）-2-巯基吡啶盐酸盐的合成方法如下：将2,2-二硫二吡啶溶解在无水甲醇和乙酸中，作为溶液a；再将半胱胺盐酸盐溶解在无水甲醇中，作为溶液b；将溶液b滴加至溶液a中，在20-30℃下搅拌反应30-50小时，用旋转蒸发仪浓缩旋干，得到黄色油状物；所得黄色油状物溶解于无水甲醇中，经乙醚沉淀并干燥得到S-(2-氨乙巯基）-2-巯基吡啶盐酸盐；
其中，2,2-二硫二吡啶在溶液a中的浓度在0.1-0.2g/mL范围内，无水甲醇和乙酸的体积比在（2.5-3）:1范围内；半胱胺盐酸盐在溶液b中的浓度为20-40mg/mL；溶液a、溶液b的比例关系按照2,2-二硫二吡啶与半胱胺盐酸盐的质量比为（4-5）：（1-2）来计。
10.根据权利要求3所述的一种电荷翻转型中空介孔硅基药物载体系统的制备方法，其特征在于，所述聚琥珀酰亚胺PSI的合成方法如下：将L-天冬氨酸溶解在浓磷酸中，在150-200℃下反应3-4个小时，用DMF沉淀并真空干燥后，得到PSI；L-天冬氨酸磷酸的质量比为（1-2）:1。
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