CN110506596B - 同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法 - Google Patents

同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及烟草病害抗性鉴定技术领域，公开了同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法，包括选择和培育青枯病病圃、烟草普通花叶病病叶的选取与保存、烟草无病壮苗的培育与移栽、接种烟草普通花叶病及带毒检测、选择烟草青枯病和烟草普通花叶病的抗病对照和感病对照和分别采集烟草青枯病和烟草普通花叶病的发病状况数据。本发明利用烟草普通花叶病和烟草青枯病两种病害的发病部位及最佳发病条件具有明显差异的特征，实现了在一个烟草生长周期对同一株烟草植株同时鉴定烟草普通花叶病和青枯病两种病害抗性的方法的研究，与现有技术相比，本发明节约了试验成本，减少了田间种植面积，提高了土地利用率，同时提高了抗性鉴定的准确性。

Description

同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法
技术领域
本发明涉及烟草病害抗性鉴定技术领域，具体涉及同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法。
背景技术
烟草普通花叶病(TMV)、烟草青枯病是在烟草生产中有重要影响的两种病害，选育推广抗病品种是缓解病害对生产影响的经济有效环保的方法，烟草种质(品种)抗性鉴定是抗病品种选育的必要措施。目前烟草TMV抗性多采用烟株接种田间或室内鉴定的方法，烟草青枯病的抗性鉴定多采用病圃鉴定的方法。两者的鉴定方法都较为成熟，在抗性育种中也得到广泛的应用，但烟草农业生产对烟草育种提出了更高的要求，兼抗烟草TMV及青枯病品种的选育是这一要求之一，这同时对抗性鉴定的方法提出了更高的要求。
目前，对同一批烟草品种的烟草TMV抗性鉴定和烟草青枯病抗性鉴定是分开鉴定的，即对同一份烟草种质(品种)分别进行两种病害的鉴定，得出抗性鉴定数据为单独发病的结果，故而必须在大田种植至少两份烟草植株。由此产生的缺陷是：不能对同一份烟草材料同时进行两种病害的抗性鉴定。这一缺陷不仅增加了田间种植面积，增加了试验成本，而且由于一些选育品种可能正在出现一些分离群体，而分离群体中的每一份植株都不相同，导致抗性鉴定的结果不能兼顾两种病害的抗性鉴定。考虑到上述两种病害的发病部位及最佳发病条件具有明显差异，烟草花叶病(TMV)为叶片类病害，适合其发生的温度一般为25-27℃，气温在28-30℃时发病最盛，在高温情况下则会出坏死点和斑块；而烟草青枯病为典型的维管束类根茎类病，病害流行需要更高的温度(30℃以上)和更高的湿度(90％以上的相对湿度)，最适发病温度是34℃。
而在烟草农业生产中各种病害往往混合发生，因此，发明人据此欲研发同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法。
发明内容
基于以上问题，本发明提供一种可节约试验成本、减少田间种植面积、实现对同一株烟草植株同时鉴定烟草普通花叶病和青枯病两种病害抗性的同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法。
为解决以上技术问题，本发明提供了同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法，包括以下步骤：
S1：选择和培育青枯病病圃
选择成熟的烟草青枯病病圃或培育病圃，在病圃上种植烟草青枯病感病品种，当烟草青枯病感病品种在成株期的发病率达到100％、病情指数≥50％、田间发病均匀时即代表烟草青枯病病圃培育成功；
S2：烟草普通花叶病病叶的选取与保存
从患有典型烟草普通花叶病的烟草植株上摘取携带有普通花叶病病毒的烟草病叶，保存备用；
S3：烟草无病壮苗的培育与移栽
选取需要进行烟草普通花叶病与烟草青枯病抗性鉴定的烟草种质种子进行播种，利用漂浮育苗方法或湿润育苗方法培育出烟草无病壮苗，随后将烟草无病壮苗移栽至步骤S1中培育成功的烟草青枯病病圃中栽培；
S4：接种烟草普通花叶病及带毒检测
在步骤S3中的烟草无病壮苗移栽一周后至烟草团棵期前进行烟草普通花叶病病毒接种，接种七日后随机抽取接种有烟草普通花叶病病毒的植株总数量的5％作为烟草植株带毒状况检测对象，根据带毒检测结果判断烟草青枯病病圃的烟草植株携带烟草普通花叶病病毒的情况，并通过反复接种烟草普通花叶病病毒至烟草团棵期以保障每株烟草植株都呈烟草普通花叶病病毒带毒状态；
S5：选择烟草青枯病和烟草普通花叶病的抗病对照和感病对照
烟草青枯病的抗病对照和感病对照对象均在步骤S1中培育成功的烟草青枯病病圃中栽培，烟草普通花叶病的抗病对照和感病对照对象均经过步骤S4中的烟草普通花叶病病毒接种处理；
S6：分别采集烟草青枯病和烟草普通花叶病的发病状况数据。
进一步的，步骤S1中的烟草青枯病感病品种的种植方式为高密度种植，种植密度为4444株/666m2。
进一步的，步骤S1中的烟草青枯病感病品种的种植方式为正常烟草种植密度，种植密度为1111株/666m2。
进一步的，步骤S4中的烟草普通花叶病病毒的接种方法为高压摩擦接种法，具体操作为：将步骤S2中保存的携带有普通花叶病病毒的烟草病叶与烟草无病壮苗的叶片进行高压力摩擦接触接种，摩擦接种2-3次。
进一步的，步骤S4中的烟草普通花叶病病毒的接种方法如下：将步骤S2中保存的携带有普通花叶病病毒的烟草病叶加入至装有磷酸缓冲液的容器中，将烟草病叶打碎，用灭菌纱布过滤以去除烟草病叶残体，随后取滤汁作为烟草普通花叶病病毒接种剂，用高压喷枪朝烟草无病壮苗喷射接种剂，高压喷枪的喷射压力为1.5-2Kg/m2，接种剂的接种浓度为1％。
进一步的，步骤S4中反复接种烟草普通花叶病病毒的接种方法如下：用大剪刀浸润烟草普通花叶病接种剂溶液后，对烟叶进行剪叶残伤接种。
进一步的，步骤S5中的烟草青枯病的感病对照对象为长脖黄，烟草青枯病的抗病对照对象为DB101，烟草普通花叶病的抗病对照对象为三生烟，烟草普通花叶病的感病对照对象为红花大金花。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明利用烟草普通花叶病和烟草青枯病两种病害的发病部位及最佳发病条件具有明显差异的特征，实现了在一个烟草生长周期对同一株烟草植株同时鉴定烟草普通花叶病和青枯病两种病害抗性的方法的研究，与现有技术相比，本发明节约了试验成本，减少了田间种植面积，提高了土地利用率，同时提高了抗性鉴定的准确性。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例：
本实施例提供一种同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法，包括以下步骤：
S1：选择和培育青枯病病圃
选择成熟的烟草青枯病病圃或培育病圃，在病圃上种植烟草青枯病感病品种，烟草青枯病感病品种的种植方式为高密度种植，种植密度为4444株/666m2，同时，烟草青枯病感病品种的种植方式也可以为正常烟草种植密度，种植密度为1111株/666m2；当烟草青枯病感病品种在成株期的发病率达到100％、病情指数≥50％、田间发病均匀时即代表烟草青枯病病圃培育成功，病圃连续两年达到上述标准为最佳烟草青枯病病圃；
S2：烟草普通花叶病病叶的选取与保存
从患有典型烟草普通花叶病的烟草植株上摘取携带有普通花叶病病毒的烟草病叶，保存备用；
S3：烟草无病壮苗的培育与移栽
选取需要进行烟草普通花叶病与烟草青枯病抗性鉴定的烟草种质种子进行播种，利用漂浮育苗方法或湿润育苗方法培育出烟草无病壮苗，随后将烟草无病壮苗移栽至步骤S1中培育成功的烟草青枯病病圃中栽培；
S4：接种烟草普通花叶病及带毒检测
在步骤S3中的烟草无病壮苗移栽一周后至烟草团棵期前进行烟草普通花叶病病毒接种，接种方法可以是高压摩擦接种法和汁液喷洒接种法中的任意一种，高压摩擦接种法的具体操作为：将步骤S2中保存的携带有普通花叶病病毒的烟草病叶与烟草无病壮苗的叶片进行高压力摩擦接触接种，摩擦接种2-3次；汁液喷洒接种法的具体操作如下：将步骤S2中保存的携带有普通花叶病病毒的烟草病叶加入至装有磷酸缓冲液的容器中，将烟草病叶打碎，用灭菌纱布过滤以去除烟草病叶残体，随后取滤汁作为烟草普通花叶病病毒接种剂，用高压喷枪朝烟草无病壮苗喷射接种剂，高压喷枪的喷射压力为1.5-2Kg/m2，接种剂的接种浓度为1％；
接种七日后随机抽取接种有烟草普通花叶病病毒的植株总数量的5％作为烟草植株带毒状况检测对象，根据带毒检测结果判断烟草青枯病病圃的烟草植株携带烟草普通花叶病病毒的情况，并通过反复接种烟草普通花叶病病毒至烟草团棵期以保障每株烟草植株都呈烟草普通花叶病病毒带毒状态，反复接种烟草普通花叶病病毒的接种方法如下：用大剪刀浸润烟草普通花叶病接种剂溶液后，对烟叶进行剪叶残伤接种；
S5：选择烟草青枯病和烟草普通花叶病的抗病对照和感病对照
烟草青枯病的抗病对照和感病对照对象均在步骤S1中培育成功的烟草青枯病病圃中栽培，烟草普通花叶病的抗病对照和感病对照对象均经过步骤S4中的烟草普通花叶病病毒接种处理；烟草青枯病的感病对照对象为长脖黄，烟草青枯病的抗病对照对象为DB101，烟草普通花叶病的抗病对照对象为三生烟，烟草普通花叶病的感病对照对象为红花大金花；
S6：分别采集烟草青枯病和烟草普通花叶病的发病状况数据
烟草普通花叶病和烟草青枯病的发病状况的调查与选择依据国家标准进行。
本实施例将上述方法于2018年在安徽省农业科学院青枯病病圃进行了试验。本实施例选取烟草高代稳代材料95份，于2017年12月28日播种，2018年3月中旬成苗，3月26日移栽于青枯病病圃，栽培方式按4444株/666m2的高密度进行栽培，并按烟草青枯病病圃要求进行施肥和田间管理，每份材料含有32株烟草植株；随后设置烟草青枯病和烟草普通花叶病的抗病对照和感病对照，烟草青枯病的感病对照对象为长脖黄，抗病对照对象为DB101，烟草普通花叶病的抗病对照对象为三生烟，感病对照对象为红花大金花；两种病害的抗病对照和感病对照在田间分别随机种植3份且种植小区间互相独立分布，具体如下：DB101和长脖黄各三份，三生烟和红花大金花各三份，每个对照独立随机分布，三份DB101在田间随机分布种植，三份长脖黄在田间随机分布种植，三份三生烟在田间随机分布种植，三份红花大金元在田间随机分布种植，此种方式在后期数据处理符合统计分析原理，及有利于田间发病均匀性的判断。
2018年4月10日开始对种植于烟草青枯病病圃中的95份烟草材料接种烟草普通花叶病病毒，并于当年4月17日重复接种1次，随后在4月23日随机抽取接种有烟草普通花叶病病毒的烟草植株总数量的5％作为带毒检测对象，用TMV检测试剂盒分别检测每株烟草植株的带毒状况，对个别没检测出带毒的烟草植株于4月25日用大剪刀浸润接种剂汁液，实现对每株烟草进行剪叶残伤再接种。
5月10田间开始有烟草植株出现烟草普通花叶病病症，5月20日、6月2日和6月12日分别实现第一次、第二次和第三次烟草普通花叶病的发病状况调查；之后由于气温上升，该病基本不再扩展，此时感病对照红花大金元发病率达90％以上，发病指数达60以上；6月20日田间开始有烟草植株出现烟草青枯病病症，随后于6月28日、7月10日和7月25日分别实现第一次、第二次和第三次烟草青枯病发病状况调查，第二次调查时感病对照长脖黄的发病率在100％，病情指数在60以上。
本次实施例中的95份烟草材料中除两份高代烟草材料由于花叶病较重而出现矮化现象外，其余烟草材料的最终株高均正常或接近正常，且得到了两种病害的发病状况，并计算得到了抗性状况。
如上即为本发明的实施例。上述实施例以及实施例中的具体参数仅是为了清楚表述发明验证过程，并非用以限制本发明的专利保护范围，本发明的专利保护范围仍然以其权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：选择和培育青枯病病圃
选择成熟的烟草青枯病病圃或培育病圃，在病圃上种植烟草青枯病感病品种，当烟草青枯病感病品种在成株期的发病率达到100％、病情指数≥50％、田间发病均匀时即代表烟草青枯病病圃培育成功；
S2：烟草普通花叶病病叶的选取与保存
从患有典型烟草普通花叶病的烟草植株上摘取携带有普通花叶病病毒的烟草病叶，保存备用；
S3：烟草无病壮苗的培育与移栽
选取需要进行烟草普通花叶病与烟草青枯病抗性鉴定的烟草种质种子进行播种，利用漂浮育苗方法或湿润育苗方法培育出烟草无病壮苗，随后将烟草无病壮苗移栽至步骤S1中培育成功的烟草青枯病病圃中栽培；
S4：接种烟草普通花叶病及带毒检测
在步骤S3中的烟草无病壮苗移栽一周后至烟草团棵期前进行烟草普通花叶病病毒接种，接种七日后随机抽取接种有烟草普通花叶病病毒的植株总数量的5％作为烟草植株带毒状况检测对象，根据带毒检测结果判断烟草青枯病病圃的烟草植株携带烟草普通花叶病病毒的情况，并通过反复接种烟草普通花叶病病毒至烟草团棵期以保障每株烟草植株都呈烟草普通花叶病病毒带毒状态；烟草普通花叶病病毒的接种方法可以为高压摩擦接种法，具体操作为：将步骤S2中保存的携带有普通花叶病病毒的烟草病叶与烟草无病壮苗的叶片进行高压力摩擦接触接种，摩擦接种2-3次；烟草普通花叶病病毒的接种方法也可以为如下：将步骤S2中保存的携带有普通花叶病病毒的烟草病叶加入至装有磷酸缓冲液的容器中，将烟草病叶打碎，用灭菌纱布过滤以去除烟草病叶残体，随后取滤汁作为烟草普通花叶病病毒接种剂，用高压喷枪朝烟草无病壮苗喷射接种剂，高压喷枪的喷射压力为1.5-2Kg/m2，接种剂的接种浓度为1％；
S5：选择烟草青枯病和烟草普通花叶病的抗病对照和感病对照
烟草青枯病的抗病对照和感病对照对象均在步骤S1中培育成功的烟草青枯病病圃中栽培，烟草普通花叶病的抗病对照和感病对照对象均经过步骤S4中的烟草普通花叶病病毒接种处理；
S6：分别采集烟草青枯病和烟草普通花叶病的发病状况数据。
2.根据权利要求1所述的同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法，其特征在于，步骤S1中的烟草青枯病感病品种的种植方式为高密度种植，种植密度为4444株/666m2。
3.根据权利要求1所述的同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法，其特征在于，步骤S1中的烟草青枯病感病品种的种植方式为正常烟草种植密度，种植密度为1111株/666m2。
4.根据权利要求1所述的同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法，其特征在于，步骤S4中反复接种烟草普通花叶病病毒的接种方法如下：用大剪刀浸润烟草普通花叶病接种剂溶液后，对烟叶进行剪叶残伤接种。
5.根据权利要求1所述的同时鉴定同株烟草的烟草普通花叶病与青枯病抗性的方法，其特征在于，步骤S5中的烟草青枯病的感病对照对象为长脖黄，烟草青枯病的抗病对照对象为DB101，烟草普通花叶病的抗病对照对象为三生烟，烟草普通花叶病的感病对照对象为红花大金花。
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