CN110487931A - 一种(e)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯的分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种液相色谱分析(E)‑4‑苯基‑4‑氧代‑3‑丁烯酸乙酯中(E)‑4‑苯基‑4‑氧代‑3‑丁烯酸甲酯及富马酸二乙酯杂质含量的方法，本发明所提供的方法专属性强、分离度好，并且方法耐用性好、灵敏度高。
Description
技术领域
本发明涉及化学分析领域，特别涉及液相色谱检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯及富马酸二乙酯含量的分析方法。
背景技术
普利类抗高血压药是临床上运用非常广泛的抗高血压药，代表性的药物主要有赖诺普利、依那普利、雷米普利及苯那普利等。(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)是普利类药物的一种重要中间体，结构式如下所示：
我们对TAE的合成工艺进行优化及杂质研究时发现，在工艺中会产生3个主要杂质，即(Z)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(Z-TAE)、(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)及富马酸二乙酯，其中MBA及富马酸二乙酯两个杂质在已有的HPLC方法中使用的C18、C8等液相色谱柱分离效果特别差，且此两个杂质会对后续普利类药物合成过程中收率及质量造成重大影响，因此我们需要开发一个合适的方法分离此两个杂质，然后在生产工艺中对其实行分开控制的策略，以便降低TAE杂质含量并确保最终能得到高质量的普利类药物成品。
发明内容
通过一系列的方法摸索，我们发现因TAE、MBA及富马酸二乙酯中均含有明显共轭基团，结构差异较小，C18、C8等常规液相色谱柱对以上各个组分特别是MBA及富马酸二乙酯二者分离效果很差，后续我们考察后发现，当色谱柱采用氰基类填料的色谱柱，会对此类结构差异小的化合物有很好的分离效果。
据此，本发明的提供一种专属性高，耐用性好、干扰杂质少的液相色谱检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)中杂质的分析方法，所述杂质包括(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)及富马酸二乙酯含量，所述方法包括以下步骤：
(1)将含有TAE样品溶解于稀释液中以制备样品溶液；
(2)对样品溶液进行高效液相色谱分析；
其中色谱条件如下：
分析柱：氰基色谱柱；
柱温：10～60℃；
流动相：由流动相A和流动相B组成；其中流动相A选自：水、有机酸水溶液或无机盐水溶液；流动相B选自：甲醇或乙腈；
稀释液选自：有机溶剂，或水与有机溶剂混合物；
检测波长：200～300nm；
流速：0.1～5.0mL/min；
检测器选自紫外检测器(UV detector)。
检测波长：200～300nm；
流速：0.1～5.0mL/min；
检测器选自紫外检测器。
其中所述的氰基色谱柱的固定相组成成份选自二异丙基氰丙基键合硅胶、氰丙基苯基二甲基键合硅胶或氰丙基二甲基键合硅胶。
其中所述无机盐水溶液选自磷酸盐水溶液或全氟磷酸盐水溶液。
其中所述有机酸水溶液选自甲酸水溶液、乙酸水溶液或三氟乙酸水溶液。
其中作为稀释液的有机溶剂进一步选自二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲醇、乙醇、乙腈。
所述的检测方法包括如下步骤：将(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)用稀释液溶解并定容，配制成1mL体积中含(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)1～500mg的溶液；进样检测，记录谱图，完成(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)中杂质的分析。
本发明开发的(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)中杂质的色谱分析方法，分离效果好，操作简单，并且方法灵敏度高，线性范围宽，可以快速有效地检测TAE中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)及富马酸二乙酯的含量。
附图说明
图1为参考实施例1(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)样品溶液及(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)及富马酸二乙酯分离度溶液HPLC检测结果图。
图2为实施例1空白溶液HPLC检测结果图。
图3为实施例1(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)及富马酸二乙酯分离度溶液HPLC检测结果图。
图4为实施例1(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)样品溶液HPLC检测结果图。
具体实施方式
参照实施例1
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：YMC-Pack ODS-A C18,250mm*4.6mm；5.0μm
流动相：水：乙腈＝45:55(％,V/V)
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：35℃
运行时间：45min，流动相等度梯度运行
稀释液：甲醇
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)。主成分TAE出峰在10.5min，MBA及富马酸二乙酯出峰时间均是在7.6min，没有分离，无法获得MBA及富马酸二乙酯准确的含量。色谱图结果见图1.
参照实施例2
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：Ultimate XB-C8,250mm*4.6mm；5.0μm
流动相A：水
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：35℃
运行时间：30min
| 时间/min | 流动相A/％ | 流动相B/％ |
| 0 | 90 | 10 |
| 17 | 55 | 45 |
| 20 | 10 | 90 |
| 22 | 10 | 90 |
| 25 | 90 | 10 |
| 30 | 90 | 10 |
稀释液：乙腈
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，因(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)及富马酸二乙酯没有分离，无法获得MBA及富马酸二乙酯准确的含量。
实施例1
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：Agilent Zorbax SB-CN,150mm*4.6mm；3.5μm(填料：二异丙基氰丙基键合硅胶)
流动相A：水
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：30℃
运行时间：30min
稀释液：乙腈
空白溶液：同稀释液，色谱图见图2.
线性溶液1：称取适量的(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)对照品，用稀释剂稀释至MBA浓度分别为：0.05、0.2、0.8、3.2、6.4、20微克/mL，振摇至完全溶解后用HPLC方法检测。回归系数(R2)＝0.9995。
线性溶液2：称取适量的富马酸二乙酯对照品，用稀释剂稀释至富马酸二乙酯浓度分别为：0.08、0.2、0.8、3.2、6.4、25微克/mL，振摇至完全溶解后用HPLC方法检测。回归系数(R2)＝0.9997。
分离度溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，接着分别加入10mL 1.0微克/mL(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)对照品溶液及10mL 1.0微克/mL富马酸二乙酯对照品溶液，接着再用稀释液稀释至刻度，HPLC方法检测结果见图3。其中富马酸二乙酯及MBA分别出峰位置在11.8分钟及14.6分钟，MBA及富马酸二乙酯与其相邻峰之间的分离度值分别为1.6及3.5。供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)含量0.01％，富马酸二乙酯含量0.27％。检测色谱图见附图4。
实施例2
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：Agilent Zorbax XDB-CN,150mm*4.6mm；3.5μm(填料：氰丙基二甲基键合硅胶)
流动相A：0.1％甲酸水溶液
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.2mL/min
进样体积：5μL
柱温：30℃
运行时间：30min
| 时间/min | 流动相A/％ | 流动相B/％ |
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| 21 | 20 | 80 |
| 25 | 80 | 20 |
| 30 | 80 | 20 |
稀释液：乙腈：水＝1:1
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)含量0.01％，富马酸二乙酯含量0.30％。
实施例3
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：ACE EXCEL 5CN,150mm*4.6mm；3.5μm(填料：氰丙基苯基二甲基键合硅胶)
流动相A：水
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：35℃
运行时间：30min
| 时间/min | 流动相A/％ | 流动相B/％ |
| 0 | 80 | 20 |
| 15 | 55 | 45 |
| 18 | 20 | 80 |
| 21 | 20 | 80 |
| 25 | 80 | 20 |
| 30 | 80 | 20 |
稀释液：甲醇
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)含量0.01％，富马酸二乙酯含量0.28％。
实施例4
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：Dikma Platisil CN,250mm*4.6mm；5.0μm(填料：二异丙基氰丙基键合硅胶)
流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：35℃
运行时间：35min
| 时间/min | 流动相A/％ | 流动相B/％ |
| 0 | 90 | 10 |
| 17 | 55 | 45 |
| 20 | 10 | 90 |
| 22 | 10 | 90 |
| 28 | 90 | 10 |
| 35 | 90 | 10 |
稀释液：乙腈
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)含量0.01％，富马酸二乙酯含量0.29％。
实施例5
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：YMC-Pack CN,250mm*4.6mm；5.0μm(填料：二异丙基氰丙基键合硅胶)
流动相A：10mM磷酸二氢钾水溶液，用磷酸调节pH值为3.0
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：30℃
运行时间：35min
| 时间/min | 流动相A/％ | 流动相B/％ |
| 0 | 90 | 10 |
| 17 | 55 | 45 |
| 20 | 10 | 90 |
| 22 | 10 | 90 |
| 28 | 90 | 10 |
| 35 | 90 | 10 |
稀释液：乙腈
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)低于检测限，富马酸二乙酯含量0.27％。
实施例6
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：YMC-Pack CN,150mm*4.6mm；3.5μm(填料：二异丙基氰丙基键合硅胶)
流动相A：水
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：30℃
运行时间：30min
| 时间/min | 流动相A/％ | 流动相B/％ |
| 0 | 90 | 10 |
| 17 | 55 | 45 |
| 20 | 10 | 90 |
| 22 | 10 | 90 |
| 25 | 90 | 10 |
| 30 | 90 | 10 |
稀释液：甲醇
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)含量0.01％，富马酸二乙酯含量0.28％。
实施例7
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：NUCLEOSIL 100-5CN-RP,250mm*4.6mm；5.0μm(填料：二异丙基氰丙基键合硅胶)
流动相A：0.1％甲酸水溶液
流动相B：乙腈
检测波长：220nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：30℃
运行时间：35min
稀释液：甲醇：水＝1:1
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)低于检测限，富马酸二乙酯含量0.29％。
实施例8
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：Phenomenex Luna CN,150mm*4.6mm；3.5μm(填料：二异丙基氰丙基键合硅胶)
流动相A：水
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
柱温：30℃
运行时间：30min
| 时间/min | 流动相A/％ | 流动相B/％ |
| 0 | 90 | 10 |
| 17 | 55 | 45 |
| 20 | 10 | 90 |
| 22 | 10 | 90 |
| 25 | 90 | 10 |
| 30 | 90 | 10 |
稀释液：乙腈：水＝1:1
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)含量0.01％，富马酸二乙酯含量0.27％。
实施例9
色谱条件
仪器：高效液相色谱仪配备紫外检测器
色谱柱：Agilent Zorbax SB-CN,150mm*4.6mm；3.5μm(填料：二异丙基氰丙基键合硅胶)
流动相A：10mM磷酸二氢钾水溶液
流动相B：乙腈
检测波长：210nm
流速：1.2mL/min
进样体积：5μL
柱温：30℃
运行时间：30min
| 时间/min | 流动相A/％ | 流动相B/％ |
| 0 | 80 | 20 |
| 15 | 55 | 45 |
| 18 | 20 | 80 |
| 21 | 20 | 80 |
| 25 | 80 | 20 |
| 30 | 80 | 20 |
稀释液：乙腈：水＝1:1
供试品溶液：称取50mg供试品，精密称定于50mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混匀，转移至液相进样小瓶中，HPLC方法检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)，其中样品中(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯(MBA)含量低于检测限，富马酸二乙酯含量0.28％。
上述仅对本发明的优选实施例做了详细说明，本发明不限于上述实施例，任何对本发明的变换和变型都归属本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种检测(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯样品中的杂质的分析方法，所述杂质包括(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸甲酯和富马酸二乙酯，所述方法包括以下步骤：
(1)将(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯样品溶解于稀释液中以制备样品溶液；
(2)对样品溶液进行高效液相色谱分析；
其中色谱条件如下：
分析柱：氰基色谱柱；
柱温：10～60℃；
流动相：由流动相A和流动相B组成；其中流动相A选自：水、有机酸水溶液或无机盐水溶液；流动相B选自：甲醇或乙腈；
稀释液选自：有机溶剂，或水与有机溶剂的混合物；
检测波长：200～300nm；
流速：0.1～5.0mL/min；
检测器为紫外检测器。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述无机盐水溶液选自磷酸盐水溶液或全氟磷酸盐水溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机酸水溶液选自甲酸水溶液、乙酸水溶液或三氟乙酸水溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，所述的氰基色谱柱的固定相组成成份选自二异丙基氰丙基键合硅胶、氰丙基苯基二甲基键合硅胶或氰丙基二甲基键合硅胶。
5.根据权利要求1所述的方法，其中作为稀释液的有机溶剂进一步选自二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲醇、乙醇、乙腈。
6.根据权利要求1所述的方法，实验步骤如下：将(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯用稀释液溶解并定容，配制成1mL体积中含(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯(TAE)1～500mg的溶液；进样检测，记录谱图，完成(E)-4-苯基-4-氧代-2-丁烯酸乙酯中杂质的分析。
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2019
- 2019-08-21 CN CN201910774443.9A patent/CN110487931B/zh active Active
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