CN110478294A - 金边玫瑰活性提取物、护肤化合物及其制备和应用以及护肤品 - Google Patents

金边玫瑰活性提取物、护肤化合物及其制备和应用以及护肤品 Download PDF

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Abstract

本发明是关于一种金边玫瑰活性提取物、护肤化合物及其制备和应用以及护肤品。主要采用的技术方案为：一种金边玫瑰活性提取物包含没食子酸乙酯和苯乙基6'‑O‑没食子酰基‑β‑D‑葡萄糖苷。其中，金边玫瑰活性提取物中，没食子酸乙酯的质量百分含量不低于0.325％、苯乙基6'‑O‑没食子酰基‑β‑D‑葡萄糖苷的质量百分含量不低于0.25％。一种护肤化合物为没食子酸乙酯或苯乙基6'‑O‑没食子酰基‑β‑D‑葡萄糖苷。本发明主要用于提供或制备一种金边玫瑰活性提取物、以及从金边玫瑰活性提取物中分离出护肤化合物；其中，该金边玫瑰活性提取物、护肤化合物均可作为DPPH自由基清除剂、酪氨酸酶抑制剂，在制备抗衰老、美白的护肤品中的应用。

Description

金边玫瑰活性提取物、护肤化合物及其制备和应用以及护 肤品
技术领域
本发明涉及护肤品技术领域，特别是涉及一种金边玫瑰活性提取物、护肤化合物及其制备和应用以及护肤品。
背景技术
随着人们生活水平的日益提高，如何抵抗皮肤衰老和美白肌肤成为人们基础护肤获得满足后的更深层次的需要。
皮肤衰老分为内源性衰老和外源性衰老，其中内源性衰老也称为自然衰老，是由于激素随年龄增长而发生的变化。而外源性衰老主要是由于受过多的紫外线辐射，导致体内产生过多的自由基或活性氧(ROS)，从而对机体造成氧化损伤。此外，ROS还会激活基质金属蛋白酶(MMPs)，从而导致胶原蛋白及弹性蛋白的降解，导致皮肤会出现如皮肤松弛、皱纹、干燥等衰老症状。因此，研发含有自由基清除活性成分的护肤品对皮肤抗衰老具有重要作用。
此外，ROS的产生还会破坏黑素细胞的氧化还原平衡，刺激黑色素合成的相关蛋白的合成(如酪氨酸酶)，从而提高黑色素的合成，导致皮肤色素过度沉着。色素沉着过度也是一种常见的皮肤病。在正常的人体皮肤组织中含有胞浆状的细胞器，即黑色素体，作用是合成和贮存黑色素，正常人皮肤的颜色主要取决于黑色素体的大小、类型、颜色及分布。一般黑色素分为两类：真黑色素和嗜铬黑色素，源于酪氨酸，前者褐色或黑色，不溶于水，后者黄色或红色，溶于碱。酪氨酸酶是控制黑色素生成的关键酶，它可以将酪氨酸转化为多巴，再转化为多巴醌，最终形成真黑色素。若多巴醌同半胱氨酸作用，则生产嗜铬黑色素。因此，酪氨酸酶抑制剂是一种可用于解决色素沉着过度从而起到美白皮肤的方法。
现有技术中，被广泛使用的黑色素生成抑制剂有龙胆酸、熊果苷、左旋抗坏血酸、氢醌。但是，长期使用氢醌可能引起褐黄病及皮肤真皮弹性纤维变性。因此，发现安全无毒，无致畸、致癌、致敏性的天然来源的黑色素生成抑制剂是目前护肤品抗衰老活性添加物的发展趋势。此外，目前一些护肤品中所添加的抗氧化剂并非天然来源，可能会存在安全性、致敏性等问题。
从护肤品的发展现状来看，植物护肤品有着巨大的国际国内市场需求。植物护肤品是以植物为原料，经过提取、分离加工成各种植物提取物和单体，再加适当的基质复配成各种类型的护肤品。植物护肤安全、温和、不刺激，而且植物中含有丰富的次生代谢产物能发挥广泛的生物活性。因此，寻找具有潜在价值的植物原料，提取其中具有自由基清除及酪氨酸酶抑制活性的成分，并将其作为活性添加物应用于护肤品的研发中，对皮肤抗衰老和美白具有重要意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种金边玫瑰活性提取物、护肤化合物及其制备和应用以及护肤品，主要目的在于提供一种金边玫瑰活性提取物，其中，该金边玫瑰活性提取物、及其所含的护肤化合物均可作为DPPH自由基清除剂、酪氨酸酶抑制剂，在制备抗衰老、美白的护肤品中的应用。
为达到上述目的，本发明主要提供如下技术方案：
一方面，本发明的实施例提供一种金边玫瑰活性提取物，所述金边玫瑰活性提取物包含：没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；
其中，在所述金边玫瑰活性提取物中，所述没食子酸乙酯的质量百分含量不低于0.325％，优选为0.325％-0.5％；
在所述金边玫瑰活性提取物中，所述苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷的质量百分含量不低于0.25％，优选为0.25％-0.35％。
优选的，在DPPH自由基清除活性测试中，所述金边玫瑰活性提取物在95-105μg/mL的测试浓度下，对DPPH自由基的清除率达到90％-100％，优选95％-100％；和/或在酪氨酸酶抑制活性测试中，所述金边玫瑰活性提取物在95-105μg/mL的测试浓度下，对酪氨酸酶的抑制率大于50％。
上述任一项所述的金边玫瑰活性提取物作为DPPH自由基清除剂在制备抗衰老、抗氧化护肤品中的应用。上述任一项所述的金边玫瑰活性提取物作为酪氨酸酶抑制剂在制备美白护肤品中的应用。
上述任一项所述的金边玫瑰活性提取物的制备方法，包括如下步骤：
浸提、浓缩步骤：采用第一溶剂对金边玫瑰花进行浸提，并将浸提液浓缩后，得到第一溶剂提取浸膏；优选的，所述第一溶剂选用乙醇，进一步优选为体积分数为65％-95％的乙醇水溶液；
萃取步骤：采用第二溶剂对所述第一溶剂浸膏进行萃取处理，去除第二溶剂萃取物，得到第一溶剂提取物；优选的，所述第二溶剂选用石油醚；所述第一溶剂提取物为乙醇提取物；
富集、纯化步骤：对所述第一溶剂提取物进行富集、纯化处理，收集含有目标物质的洗脱液；其中，所述目标物质包括没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；优选的，采用大孔吸附树脂对所述第一溶剂提取物进行富集处理，先用体积分数为0-30％的甲醇水溶液洗脱4-10个柱体积以除去大极性成分，再用体积分数为50％-70％的甲醇水溶液洗脱8-10个柱体积；其中，采用体积分数为50％-70％的甲醇水溶液洗脱后得到的洗脱液为含有目标物质的洗脱液。
后处理步骤：对含有目标物质的洗脱液进行浓缩、冷冻、干燥处理，得到金边玫瑰活性提取物。
优选的，所述浸提、浓缩步骤的步骤具体为：将金边玫瑰干花粉碎后，用体积分数为90％-100％的乙醇水溶液冷浸提多次，合并后的浸提液经减压浓缩得到第一乙醇提取浸膏；将剩余植物残渣用体积分数为50％-70％的乙醇水溶液冷浸提多次，合并后的浸提液经减压浓缩得到第二乙醇提取浸膏。进一步的，所述萃取的步骤具体为：向第一乙醇提取浸膏中加水悬浮后，用第二溶剂萃取多次，减压浓缩，得到第二溶剂萃取物和第一乙醇提取物水相部分。将第一乙醇提取物水相部分和第二乙醇提取浸膏合并，冷冻干燥得到的金边玫瑰乙醇水粗提物为第一溶剂提取物。
另一方面，本发明的实施例还提供一种护肤化合物，其中，所述护肤化合物用于制备护肤品；其中，所述护肤化合物为没食子酸乙酯或苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。
上述的护肤化合物作为DPPH自由基清除剂在制备抗衰老、抗氧化护肤品中的应用。
上述的护肤化合物作为酪氨酸酶抑制剂在制备美白护肤品中的应用。
上述的护肤化合物的制备方法，包括：从含有护肤化合物的植物中分离出所述护肤化合物；优选的，所述含有护肤化合物的植物为蔷薇科蔷薇属植物；进一步优选的，所述含有护肤化合物的植物为金边玫瑰；优选的，从金边玫瑰中分离出所述护肤化合物的步骤包括：上述的金边玫瑰活性提取物中分离出所述护肤化合物。优选的，从金边玫瑰中分离出所述护肤化合物的步骤包括：采用上述的金边玫瑰活性提取物的制备方法制备出金边玫瑰活性提取物，并从金边玫瑰活性提取物中分离出所述护肤化合物。优选的，从金边玫瑰活性提取物中分离出所述护肤化合物的步骤，包括：
硅胶柱层析步骤：对金边玫瑰活性提取物进行硅胶柱层析，并用洗脱剂进行洗脱，得到的洗脱流分经检测分析后，合并相同的流分后，得到多个不同的组分；其中的两个组分分别为第一组分和第二组分；其中，第一组分含有没食子酸乙酯、第二组分含有苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；优选的，所述洗脱剂选用氯仿-甲醇；优选的，将得到的洗脱流分用薄层色谱检测分析。进一步优选的，当第一洗脱剂中的氯仿与甲醇的体积比为(8.9-9.1)：1，优选为9:1时，得到的洗脱流分中含有没食子酸乙酯；进一步优选的，当第一洗脱剂中的氯仿与甲醇的体积比为(4.9-5.1):1，优选为5:1时，得到的洗脱流分中含有苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。
高效液相色谱分离步骤：对所述第一组分、第二组分分别进行高效液相色谱分离，得到没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；
再一方面，本发明实施例还提供一种护肤品，其中，所述护肤品的活性成分包括上述的金边玫瑰活性提取物；或所述护肤品的活性成分包括上述的护肤化合物。
与现有技术相比，本发明的金边玫瑰活性提取物、护肤化合物及其制备和应用以及护肤品至少具有下列有益效果：
1.本发明的发明人首次从金边玫瑰中提取出一种金边玫瑰活性提取物，该金边玫瑰活性提取物含有质量分数不低于0.325％的没食子酸乙酯、质量分数不低于0.25％的苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。进一步地，本发明的发明人首次发现该金边玫瑰活性提取物具有DPPH自由基清除作用、酪氨酸酶抑制作用。因此，本发明的发明人首次提出及制备出上述金边玫瑰活性提取物，并首次发现其具有制备抗氧化、抗衰老、美白护肤品的用途。
2.本发明的发明人首次发现化合物没食子酸乙酯、化合物苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷的新活性，即具有DPPH自由基清除作用、酪氨酸酶抑制作用；因此，本发明的发明人首次提出化合物没食子酸乙酯、化合物苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷具有制备抗氧化、抗衰老、美白护肤品的新用途。
3.本发明的发明人首次提出从金边玫瑰中分离出金边玫瑰活性提取物、护肤化合物没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。因此，本发明的金边玫瑰活性提取物、护肤化合物是纯天然化合物，并非是有机合成产物，其具有安全无毒、无致畸、无致癌、无致敏性等优点。
4.本发明还提供一种护肤品，该护肤品的活性成分包括上述的金边玫瑰活性提取物或护肤化合物。因此，本发明的护肤品具有抗衰老、美白的功效，且具有安全无毒、无致畸、无致癌、无致敏性等优点。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合较佳实施例，对依据本发明申请的具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征、结构、或特点可由任何合适形式组合。
一方面，本发明实施例提供一种金边玫瑰活性提取物，其中，金边玫瑰活性提取物包含：没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。其中，在金边玫瑰活性提取物中，所述没食子酸乙酯的质量百分含量不低于0.325％(优选为0.325％-0.5％)；在金边玫瑰活性提取物中，所述苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷的质量百分含量不低于0.25％(优选为0.25％-0.35％)。
其中，没食子酸乙酯的结构式如下：
苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷的结构式如下：
化合物1和2的1H-NMR及13C-NMR数据：
化合物1；1H NMR(600MHz,Methanol-d4)δ:7.03(2H,s,H-2,6),4.26(2H,q,J＝7.1Hz,CH2),1.33(3H,t,J＝7.1Hz,CH3)；
13C NMR(150MHz,Methanol-d)δ:168.5(CO),146.5(C-3,5),139.7(C-4),121.7(C-1),110.0(C-2,6),61.7(CH2),14.6(CH3).
化合物2，ESI-MS m/z:459[M+Na]+,分子式:C21H24O10；1H NMR(600MHz,Methanol-d4)δ:7.19(2H,t,J＝7.5Hz,H-3,5),7.17–7.12(3H,m,H-2,4,6),7.09(2H,s,H-2”,6”),4.51(1H,dd,J＝11.8,2.2Hz,H-6'a),4.43(1H,dd,J＝11.8,5.9Hz,H-6'b),4.33(1H,d,J＝7.8Hz,H-1'),3.97(1H,ddd,J＝9.9,8.2,6.6Hz,H-2'),3.75(1H,ddd,J＝9.8,8.3,6.7Hz,H-8a),3.55(1H,ddd,J＝9.6,5.9,2.2Hz,H-5'),3.44–3.35(2H,m,H-4',8b),3.21(1H,dd,J＝9.1,7.7Hz,H-3'),2.88(2H,h,J＝6.9Hz,H-7)；
13C NMR(150MHz,Methanol-d)δ:168.4(C-7”),146.5(C-3”,5”),139.9(C-4”),139.8(C-1),129.9(C-3,5),129.3(C-2,6),127.1(C-4),121.4(C-1”),110.1(C-2”,6”),104.5(C-1'),78.0(C-5'),75.5(C-3'),75.1(C-2'),71.9(C-8),71.8(C-4'),64.7(C-6'),37.3(C-7).
在此，金边玫瑰(Rosa chinensis cv.‘JinBian’)，属于蔷薇科蔷薇属下的一个品种，最开始在云南省昆明市富民县种植，并开发为玫瑰花茶，现在云南文山、楚雄、大理、昆明、曲靖等都已有大面积种植，面积达8000亩。目前对金边玫瑰的研究较少。本申请的发明人经过前期的活性筛选发现：金边玫瑰具有较强的DPPH自由基清除和酪氨酸酶抑制活性。
优选的，通过DPPH自由基清除活性实验测试，上述金边玫瑰活性提取物在100μg/mL的测试浓度下，DPPH自由基清除率大于90％，优选达到90％-97％，进一步优选95％-97％，进一步优选97％。通过酪氨酸酶抑制活性测试，金边玫瑰活性提取物在100μg/mL的测试浓度下，酪氨酸酶抑制率达到50％以上。
上述的金边玫瑰活性提取物作为DPPH自由基清除剂在制备抗衰老、抗氧化护肤品中的应用。上述的金边玫瑰活性提取物作为酪氨酸酶抑制剂在制备美白护肤品中的应用。
另外，上述的金边玫瑰活性提取物的制备方法包括如下步骤：将金边玫瑰干花粉碎后，用体积分数为65％-95％的乙醇水溶液冷浸提多次，合并滤液得到浸提液，对浸提液进行减压浓缩得到乙醇提取浸膏。向乙醇浸膏中加水悬浮后，用石油醚萃取多次，减压浓缩，得到石油醚萃取物和乙醇提取物。乙醇提取物用水溶解，采用大孔吸附树脂(HP-20)富集活性成分，先用体积分数为0-30％的甲醇水溶液洗脱4-10个柱体积除去大极性成分，再用体积分数为50％-70％的甲醇水溶液洗脱8-10个柱体积，收集用体积分数为50％-70％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液，对该洗脱液进行减压浓缩、冷冻干燥即获得金边玫瑰活性提取物。此外，通过以上工艺所得活性提取物相较最初的乙醇浸膏有很大的脱色效果。
为了保证所制备金边玫瑰活性提取物的活性，以其所含活性化合物1(没食子酸乙酯)和活性化合物2(苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷)的相对百分含量作为质量控制标准(保证该提取物中所含活性化合物1和2的质量百分含量分别达到0.325％和0.25％及以上)。利用安捷伦高效液相色谱仪进行百分含量分析(提取物浓度：4mg/mL；色谱柱：Agilent SB-Aq，4.6×250，5μm；流速：1mL/min；进样量：10μL；梯度洗脱条件：0-15min，35％甲醇-水；15-40min，35-65％甲醇-水；40-41min，65-35％甲醇-水；41-43min,35％甲醇-水；检测：DAD检测器，检测波长：220nm)。分析结果显示，上述的金边玫瑰活性提取物的制备方法能确保所制备的金边玫瑰活性提取物中所含活性化合物1和化合物2的质量百分含量分别达到0.325％和0.25％及以上。
另一方面，本发明实施例提供一种护肤化合物，该护肤化合物可用于制备护肤品。所述护肤化合物为没食子酸乙酯或苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。
在此，本发明的发明人首次创新发现：上述的护肤化合物作为DPPH自由基清除剂在制备抗衰老、抗氧化护肤品中的应用。
在此，本发明的发明人首次创新发现：上述的护肤化合物作为酪氨酸酶抑制剂在制备美白护肤品中的应用。
本申请的发明人首次研究发现金边玫瑰中同时含有上述两种化合物。并提出一种从金边玫瑰中提取分离上述护肤化合物的方法，具体包括如下步骤：
提取金边玫瑰活性提取物：将金边玫瑰干花粉碎后，用体积分数为65％-95％的乙醇水溶液冷浸提多次，合并滤液得到浸提液，对浸提液减压浓缩得到乙醇提取浸膏。向乙醇浸膏中加水悬浮后，用石油醚萃取多次，减压浓缩，得到石油醚萃取物和乙醇提取物。乙醇提取物用水溶解，采用大孔吸附树脂(HP-20)富集活性成分，先用体积分数为0-30％的甲醇水溶液洗脱4-10个柱体积除去大极性成分，再用体积分数为50％-70％的甲醇水溶液洗脱8-10个柱体积，收集用体积分数为50％-70％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液，对该洗脱液进行减压浓缩、冷冻干燥即获得金边玫瑰活性提取物。本申请的上述提取、分离方法后：利用HPLC-DAD在220nm下，检测发现，该提取物中所含活性化合物1和2的质量百分含量分别达到0.325％和0.25％及以上。
从金边玫瑰活性提取物中分离出护肤化合物：将金边玫瑰活性提取物经硅胶(200-300目)正相硅胶柱层析，以氯仿-甲醇溶剂系统(C/M 9：1-1：1)洗脱，洗脱液经薄层色谱检测后共合并为9个流分(D1-D9)。流分D2经半制备HPLC(YMC-Pack ODS-AQ，40％甲醇-水)分离得到化合物1；D3经半制备HPLC(YMC-Pack ODS-AQ，45％甲醇-水)分离得到化合物2。所得化合物1和2经1H-NMR和13C-NMR分别鉴定为没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。
再一方面，本发明的实施例还提供一种护肤品，其中，所述护肤品的活性成分包括上述的金边玫瑰活性提取物；或所述护肤品的活性成分包括上述的护肤化合物。在此，由于本发明实施例的护肤品由于包括上述的金边玫瑰活性提取物或上述的护肤化合物，因此，本发明实施例提供的护肤品具有抗氧化、抗衰老、美白的功效。
在此，本发明实施例的护肤品可以是护肤水、护肤乳液、护肤面膜、护肤霜等；本发明实施例的护肤品也可以指化妆品；以及本发明的实施例的护肤品也可以指的是对皮肤具有抗氧化、抗衰老、美白作用的护肤药物。
下面通过具体实施例进一步详细说明如下：
实施例1
本实施例主要是从金边玫瑰提取出一种金边玫瑰提取物，具体包括如下步骤：
将800g金边玫瑰干花粉碎后，用体积分数为95％的乙醇水溶液冷浸提三次，合并后的滤液减压浓缩得到95％的乙醇提取物；剩余植物残渣用体积分数为65％的乙醇水溶液冷浸提三次，合并后的滤液减压浓缩得到65％的乙醇提取物。向95％的乙醇提取物中加水悬浮后，用石油醚萃取三次，减压浓缩，得到石油醚萃取物(7.431g)和95％乙醇提取物水相部分。将95％乙醇提取物水相部分和65％的乙醇提取物合并，冷冻干燥得金边玫瑰乙醇水粗提物(110.56g)。
金边玫瑰乙醇水粗提物(取100g)，采用大孔吸附树脂(HP-20)富集活性成分，先用体积分数为30％的甲醇水溶液洗脱10个柱体积除去大极性成分，再用体积分数为70％的甲醇水溶液各洗脱10个柱体积，收集用70％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液，对洗脱液进行减压浓缩、冷冻干燥即获得金边玫瑰活性提取物(40g)。
利用安捷伦高效液相色谱仪对本实施例中所制备的金边玫瑰活性提取物中的化合物1(没食子酸乙酯)、化合物2(苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷)进行百分含量分析。分析样品：金边玫瑰活性提取物的浓度为4mg/mL；色谱柱：Agilent SB-Aq，4.6×250，5μm；流速：1mL/min；进样量：10μL；梯度洗脱条件：0-15min，35％甲醇-水；15-40min，35-65％甲醇-水；40-41min，65-35％甲醇-水；41-43min,35％甲醇-水；检测：DAD检测器，检测波长：220nm。经以上色谱条件分析后，化合物1的保留时间为12.222min，质量百分含量为0.375％；化合物2的保留时间为20.503min，质量百分含量为0.25％。
实施例2
本实施例主要是从实施例1制备的金边玫瑰活性提取物中分离出护肤化合物，具体步骤如下：
选取实施例1制备的金边玫瑰活性提取物15g经硅胶(200目)正相硅胶柱层析，以氯仿-甲醇溶剂系统(氯仿/甲醇体积比为9:1、7:1、5:1、3:1、1:1)洗脱，洗脱液经薄层色谱检测后共合并为9个流分(D1-D9)。流分D2(氯仿/甲醇的体积比为9:1时洗脱得到)经半制备HPLC(YMC-Pack ODS-AQ，40％甲醇-水)分离得到化合物1(44mg)；流分D3(氯仿/甲醇的体积比为5:1时洗脱得到)经半制备HPLC(YMC-Pack ODS-AQ，45％甲醇-水)分离得到化合物2(30mg)。
本实施例上述分离步骤所得的化合物1和2经1H-NMR和13C-NMR分别鉴定为没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。
实施例3
本实施例主要是对实施例1制备的金边玫瑰活性提取物、实施例2制备的化合物1和化合物2进行DPPH自由基清除活性实验测试、酪氨酸酶抑制活性测试。具体如下：
(1)所需的药品：DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)、水溶性维生素E(Trolox)、α-熊果苷(α-arbutin)、蘑菇酪氨酸酶和左旋多巴(L-Dopa)购自Sigma公司。
(2)DPPH自由基清除活性测试：
实验方法：在96孔板上，将待测样品与DPPH(终浓度为100μM)混合反应，设定3个重复孔，同时设置不含药物的空白对照和Trolox阳性对照，在30℃下，反应1h后，用酶标仪测定OD值，检测波长为515nm。
抗氧化率(％)＝(1-实验孔OD515nm/空白孔OD515nm)×100％
(3)酪氨酸酶抑制活性：
实验方法：将待测样品(待测样品和阳性对照α-熊果苷均为100μg/mL)与左旋多巴(L-Dopa，终浓度1.25mM)混合后，再加入酪氨酸酶(终浓度25U/mL)开始反应，设定3个重复孔，同时设置不含药物的空白对照和α-熊果苷(α-arbutin)阳性对照，在室温下，反应5min后，用酶标仪测定OD值，检测波长为490nm。计算得到酪氨酸酶活性抑制率。
酪氨酸酶活性抑制率(％)＝(1–样品OD490nm/实验对照孔OD490nm)×100％
(4)测试结果：
a.实施例1所制备的金边玫瑰活性提取物的DPPH清除率和酪氨酸酶抑制率测试结果参见表1所示。
表1为金边玫瑰活性提取物的DPPH清除率和酪氨酸酶抑制率测试结果
b.实施例2所制备的化合物1、化合物2的抗氧化活性测试结果参见表2所示。
表2为化合物1、化合物2的抗氧化活性测试结果
c.实施例2所制备的化合物1、化合物2的酪氨酸酶抑制测试结果参见表3所示。
表3为化合物1、化合物2的酪氨酸酶抑制测试结果
从上述测试及测试数据可以看出：
实施例1所制备的金边玫瑰活性提取物，在测试浓度为100ug/mL时，DPPH自由基清除率达95％以上、酪氨酸酶抑制活性均超过50％。由此可以看出，本发明实施例制备的金边玫瑰活性提取物具有较强的抗氧化活性、较强的黑色素生成抑制活性。
实施例2制备的化合物1、化合物2在测试浓度为100ug/mL时，DPPH自由基清除率均达90％以上，表明其具有强的抗氧化活性；此外，在测试浓度为100ug/mL时，酪氨酸酶抑制活性均超过50％，达到阳性对照α-熊果苷的两倍以上，表明其具有强的黑色素生成抑制活性，具有皮肤美白作用。
综上，本发明实施例制备的金边玫瑰活性提取物、化合物1(没食子酸乙酯)、化合物2(苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷)均具有优异的抗氧化活性、优异的酪氨酸酶抑制活性。
因此，本发明实施例制备的金边玫瑰活性提取物、化合物1(没食子酸乙酯)、化合物2(苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷)均具有制备抗氧化、抗衰老、美白护肤品的新用途。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种金边玫瑰活性提取物，其特征在于，所述金边玫瑰活性提取物包含：没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；
其中，在所述金边玫瑰活性提取物中，所述没食子酸乙酯的质量百分含量不低于0.325％，优选为0.325％-0.5％；
在所述金边玫瑰活性提取物中，所述苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷的质量百分含量不低于0.25％，优选为0.25％-0.35％。
2.根据权利要求1所述的金边玫瑰活性提取物，其特征在于，
DPPH自由基清除活性测试中，所述金边玫瑰活性提取物在95-105μg/mL的测试浓度下，对DPPH自由基的清除率大于90％，优选达到90％-97％，进一步优选达到95％-97％；和/或
酪氨酸酶抑制活性测试中，所述金边玫瑰活性提取物在95-105μg/mL的测试浓度下，对酪氨酸酶的抑制率大于50％。
3.权利要求1或2所述的金边玫瑰活性提取物作为DPPH自由基清除剂在制备抗衰老、抗氧化护肤品中的应用。
4.权利要求1或2所述的金边玫瑰活性提取物作为酪氨酸酶抑制剂在制备美白护肤品中的应用。
5.权利要求1或2所述的金边玫瑰活性提取物的制备方法，包括如下步骤：
浸提、浓缩步骤：采用第一溶剂对金边玫瑰花进行浸提，并将浸提液浓缩后，得到第一溶剂提取浸膏；
萃取步骤：采用第二溶剂对所述第一溶剂浸膏进行萃取处理，去除第二溶剂萃取物，得到第一溶剂提取物；
富集、纯化步骤：对所述第一溶剂提取物进行富集、纯化处理，收集含有目标物质的洗脱液；其中，所述目标物质包括没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；
后处理步骤：对含有目标物质的洗脱液进行浓缩、冷冻、干燥处理，得到金边玫瑰活性提取物；
优选的，在所述浸提、浓缩步骤中：所述第一溶剂选用乙醇，进一步优选为体积分数为65％-95％的乙醇水溶液；
优选的，在所述萃取步骤中：所述第二溶剂选用石油醚；所述第一溶剂提取物为乙醇提取物；
优选的，所述浸提、浓缩步骤的步骤具体为：将金边玫瑰干花粉碎后，用体积分数为90％-100％的乙醇-水溶液冷浸提多次，合并后的浸提液经减压浓缩得到第一乙醇提取浸膏；将剩余植物残渣用体积分数为50％-70％的乙醇-水溶液冷浸提多次，合并后的浸提液经减压浓缩得到第二乙醇提取浸膏。进一步的，所述萃取的步骤具体为：向第一乙醇提取浸膏中加水悬浮后，用第二溶剂萃取多次，减压浓缩，得到第二溶剂萃取物和第一乙醇提取物水相部分。将第一乙醇提取物水相部分和第二乙醇提取浸膏合并，冷冻干燥得到的金边玫瑰乙醇-水粗提物为第一溶剂提取物；
优选的，在所述富集、纯化步骤中：采用大孔吸附树脂对所述第一溶剂提取物进行富集处理；进一步优选的，先用体积分数为0％-30％的甲醇水溶液洗脱4-10个柱体积以除去大极性成分，再用体积分数为50％-70％的甲醇水溶液洗脱8-10个柱体积；其中，采用体积分数为50％-70％的甲醇水溶液洗脱后得到的洗脱液为含有目标物质的洗脱液。
6.一种护肤化合物，其特征在于，所述护肤化合物用于制备护肤品；其中，所述护肤化合物为没食子酸乙酯或苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。
7.权利要求6所述的护肤化合物作为DPPH自由基清除剂在制备抗衰老、抗氧化护肤品中的应用。
8.权利要求6的护肤化合物作为酪氨酸酶抑制剂在制备美白护肤品中的应用。
9.权利要求6所述的护肤化合物的制备方法，其特征在于，从含有所述护肤化合物的植物中分离出所述护肤化合物；
优选的，所述含有护肤化合物的植物为蔷薇科蔷薇属植物；进一步优选的，所述含有护肤化合物的植物为金边玫瑰；
优选的，从金边玫瑰中分离出所述护肤化合物的步骤包括：从权利要求1或2所述的金边玫瑰活性提取物中分离出所述护肤化合物；
优选的，从金边玫瑰中分离出所述护肤化合物的步骤包括：采用权利要求5所述金边玫瑰活性提取物的制备方法制备出金边玫瑰活性提取物，并从金边玫瑰活性提取物中分离出所述护肤化合物；
进一步优选的，从金边玫瑰活性提取物中分离出所述护肤化合物的步骤，包括：
硅胶柱层析步骤：对金边玫瑰活性提取物进行硅胶柱层析，并用洗脱剂进行洗脱，得到的洗脱流分经检测分析后，合并相同的流分后，得到多个不同的组分；其中的两个组分分别为第一组分和第二组分；其中，第一组分含有没食子酸乙酯、第二组分含有苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；
高效液相色谱分离步骤：对所述第一组分、第二组分分别进行高效液相色谱分离，得到没食子酸乙酯和苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；
优选的，在所述硅胶柱层析步骤中：所述洗脱剂选用氯仿-甲醇；进一步优选的，当第一洗脱剂中的氯仿与甲醇的体积比为(8.9-9.1):1时，得到的洗脱流分中含有没食子酸乙酯；进一步优选的，当第一洗脱剂中的氯仿与甲醇的体积比为(4.9-5.1):1时，得到的洗脱流分中含有苯乙基6'-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷；
优选的，在所述硅胶柱层析步骤中：将得到的洗脱流分用薄层色谱检测分析。
10.一种护肤品，其特征在于，所述护肤品的活性成分包括权利要求1或2所述的金边玫瑰活性提取物；或
所述护肤品的活性成分包括权利要求6所述的护肤化合物。
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