CN110461829B - 作为免疫调节剂的取代的异喹啉衍生物 - Google Patents

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Abstract

本公开一般涉及可用作免疫调节剂的化合物。本文提供化合物、包含这样的化合物的组合物及其使用方法。本公开还涉及包含至少一种根据本公开的化合物的药物组合物，其可用于治疗各种疾病，包括癌症和传染性疾病。

Description

作为免疫调节剂的取代的异喹啉衍生物
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年3月27日提交的临时专利申请USSN 62/477,139的优先权，该临时专利申请通过引用整体并入本文。
本发明一般地涉及用作PD-1/PD-L1蛋白/蛋白和CD80/PD-L1蛋白/蛋白的相互作用的抑制剂的化合物。本发明提供了化合物、包含此类化合物的组合物及其使用方法。本发明进一步涉及包含至少一种根据本发明化合物的药物组合物，其可用于治疗各种疾病，包括癌症和感染性疾病。
程序性死亡-1(CD279)是T细胞上的一种受体，其已被证明在与其任一配体(程序性死亡-配体1(PD-L1、CD274、B7-H1)或PD-L2(CD273、B7-DC))结合时抑制T细胞受体的活化信号(Sharpe等人,Nat.Imm.2007)。当表达PD-1的T细胞接触表达其配体的细胞时，响应抗原刺激的功能活性被降低，所述功能活性包括增殖、细胞因子分泌和细胞溶解活性。在感染或肿瘤消退期间或在自身耐受性发展期间PD-1/PD-配体的相互作用下调免疫应答(KeirMe,Butte MJ,Freeman GJ等人,PD-1and its ligands in tolerance andimmunity.Annu.Rev.Immunol.2008；26：Epub)。慢性抗原刺激，诸如在肿瘤疾病或慢性感染期间出现的慢性抗原刺激，致使T细胞表达升高含量的PD-1且在针对慢性抗原的活性方面功能异常(评述于Kim和Ahmed,Curr Opin Imm,2010中)，被称为"T细胞枯竭"的过程。B细胞也呈现PD-1/PD-配体抑制和"枯竭"。
PD-L1也被证明与CD80相互作用(Butte MJ等人,Immunity；27:111-122(2007))。已经证明PD-L1/CD80对表达免疫细胞的相互作用为抑制性相互作用。已经证明阻断该相互作用可以消除这种抑制性相互作用(Paterson AM等人,J Immunol.,187:1097-1105(2011)；Yang J等人,J Immunol.Aug 1；187(3):1113-9(2011))。
已经证明使用PD-L1的抗体阻断PD-1/PD-L1相互作用在许多系统中恢复和增强T细胞活化。患有晚期癌症的患者受益于使用针对PD-L1的单克隆抗体的疗法(Brahmer等人,New Engl J Med 2012)。肿瘤的临床前动物模型已经证明通过单克隆抗体阻断PD-1/PD-L1路径可以增强免疫应答且实现对多种组织学上不同的肿瘤的免疫应答(Dong H,ChenL.B7-H1 pathway and its role in the Evasion of tumor immunity.J Mol Med.2003；81(5):281-287；Dong H,Strome SE,Salamoa DR等人,Tumor-associated B7-H1 promotesT-cell apoptosis：a potential mechanism of immune evasion.Nat Med.2002；8(8):793-800)。
干扰PD-1/PD-L1相互作用也已经证明在慢性感染系统中增强的T细胞活性。小鼠的慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎(Chronic lymphocytic chorio meningitis)病毒感染也表现出随着阻断PD-L1而改善的病毒清除率和恢复的免疫力(Barber DL,Wherry EJ,Masopust D等人,Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronicviral infection.Nature.2006；439(7077):682-687)。感染HIV-1的人源化小鼠表现出对病毒血症增强的防护和减少的CD4+T细胞的病毒消耗(Palmer等人,J.Immunol 2013)。经由对PD-L1的单克隆抗体阻断PD-1/PD-L1可以恢复HIV患者(Day,Nature 2006；Petrovas,J.Exp.Med.2006；Trautman,Nature Med.2006；D'Souza,J.Immunol.2007；Zhang,Blood2007；Kaufmann,Nature Imm.2007；Kasu,J.Immunol.2010；Porichis,Blood 2011)、HCV患者[Golden-Mason,J.Virol.2007；Jeung,J.Leuk.Biol.2007；Urbani,J.Hepatol.2008；Nakamoto,PLoS Path.2009；Nakamoto,Gastroenterology 2008]或HBV患者(Boni,J.Virol.2007；Fisicaro,Gastro.2010；Fisicaro等人,Gastroenterology,2012；Boni等人,Gastro.,2012；Penna等人,JHep,2012；Raziorrough,Hepatology 2009；Liang,World JGastro.2010；Zhang,Gastro.2008)的T细胞的体外抗原特异性功能。
也已经证明阻断PD-L1/CD80相互作用可以刺激免疫力(Yang J.等人,JImmunol.8月1日；187(3):1113-9(2011))。已经证明由阻断PD-L1/CD80相互作用引起的免疫刺激通过与阻断另外的PD-1/PD-L1或PD-1/PD-L2相互作用相结合而得到增强。
免疫细胞表型的改变被假设为是感染性休克的重要因素(Hotchkiss等人,NatRev Immunol(2013))。这些包括PD-1和PD-L1水平和T细胞凋亡的增加(Guignant等人,Crit.Care(2011))。针对PD-L1的抗体可以降低免疫细胞凋亡的水平(Zhang等人,Crit.Care(2011))。此外，缺乏PD-1表达的小鼠与野生型小鼠相比对感染性休克症状更具抗性(Yang J.等人,J Immunol.8月1日；187(3):1113-9(2011))。研究表明，使用抗体阻断PD-L1相互作用可以抑制不当免疫应答和改善疾病症状。
除了增强对慢性抗原的免疫应答之外，也已经证明阻断PD-1/PD-L1路径可以增强对疫苗接种(包括在慢性感染的情形下的治疗性疫苗接种)的应答(S.J.Ha,S.N.Mueller,E.J.Wherry等人,"Enhancing therapeutic vaccination by blocking PD-1-mediatedinhibitory signals during chronic infection",The Journal of ExperimentalMedicine,第205卷,第3期,第543-555页,2008.；A.C.Finnefrock,A.Tang,F.Li等人,"PD-1blockade in rhesus macaques：impact on chronic infection and prophylacticvaccination",The Journal of Immunology,第182卷,第2期,第980-987页,2009；M.-Y.Song,S.-H.Park,H.J.Nam,D.-H.Choi和Y.-C.Sung,"Enhancement of vaccine-inducedprimary and memory CD8+t-cell responses by soluble PD-1",The Journal ofImmunotherapy,第34卷,第3期,第297-306页,2011)。
PD-1路径是由慢性感染和肿瘤疾病期间的慢性抗原刺激引起的T细胞枯竭中的关键抑制分子。经由靶向PD-L1蛋白来阻断PD-1/PD-L1相互作用已经证明可以在体外和体内恢复抗原特异性T细胞免疫功能，包括在肿瘤或慢性感染的背景下增强对疫苗接种的应答。因此，需要阻断PD-L1与PD-1或CD80的相互作用的药剂。
申请人发现有效化合物，该化合物具有作为PD-L1与PD-1和CD80的相互作用的抑制剂的活性，并因此可以用于治疗性给药以增强在癌症或感染中的免疫力，包括治疗性疫苗。提供这些化合物用作具有所期望的稳定性、生物利用度、治疗指数和毒性值的药物，所述期望的稳定性、生物利用度、治疗指数和毒性值对于其成药性(drugability)而言是重要的。
本发明也提供药物组合物，其包含式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐；以及药学上可接受的载体。
本发明也提供一种治疗与PD-L1活性(包括其与诸如PD-1和B7-1(CD80)的其它蛋白的相互作用)相关的疾病或病症的方法，该方法包括向有此需求的患者给药式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。
本发明也提供用于制备式(I)的化合物和/或其盐的方法和中间体。
本发明也提供式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐，其用于疗法中。
本发明也提供式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗或预防PD-L1相关病况(如癌症和感染性疾病)的药物的用途。
式(I)的化合物和包含式(I)的化合物的组合物可以用于治疗、预防或治愈各种感染性疾病和癌症。包含这些化合物的药物组合物可以用于治疗、预防或减缓各种治疗领域中的疾病或病症(诸如癌症和感染性疾病)的进展。
本发明的这些及其它特征将随本发明公开内容的继续而以展开形式阐述。
在第一方面中，本发明提供式(I)的化合物：
Figure BDA0002218269030000051
或其药学上可接受的盐，其中
n是1或2；
n'是1或2；条件是n和n'中的至少一个不是2；
X和X'中的一个选自NH和NRx，另一个选自CH2和CHRy；
Rx选自-CH2CO2H、-CH2CO2C1-C3烷基和-CO2C1-C3烷基；
Ry选自-CH2CO2H、-CH2CO2C1-C3烷基、-CO2H和-CO2C1-C3烷基；
R2选自氢、-OH、
Figure BDA0002218269030000052
Figure BDA0002218269030000053
其中R4选自-CN、-CO2H和-CO2C1-C3烷基；
R3选自氢和卤素；和
Ar选自
Figure BDA0002218269030000054
在第一方面的第一个实施方案中，本公开提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中n和n'各自是1。在第二个实施方案中，X是NRx且X'是CH2。
在第一方面的第三个实施方案中，本公开提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中n和n'各自是1，X是CHRy，并且X'是NH。
在第二方面，本公开提供一种药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
在第三方面，本公开提供一种在有此需要的受试者中增强、刺激、调节和/或增加免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在第三方面的第一个实施方案中，所述方法还包括在施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时施用另外的药剂。在第三方面的第二个实施方案中，所述另外的药剂是抗微生物剂、抗病毒剂、基因表达调节剂、细胞毒性剂和/或免疫应答调节剂。
在第四方面，本公开提供一种抑制在有此需要的受试者中的癌细胞生长、增殖或转移的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或药学上可接受的盐。在第四方面的第一个实施方案中，所述癌症选自黑素瘤、肾细胞癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非鳞状NSCLC、结直肠癌、去势抵抗性前列腺癌、卵巢癌、胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、头颈部鳞状细胞癌、食道癌、胃肠道癌和乳腺癌以及血液恶性肿瘤。
在第五方面，本发明提供了一种治疗在有此需要的受试者中的感染性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在第五方面的第一个实施方案中，所述感染性疾病由病毒引起。在第五方面的第二个实施方案中，所述病毒选自HIV、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、疱疹病毒、乳突状瘤病毒和流感。
在第六方面，本公开提供了一种治疗在有此需要的受试者中的感染性休克的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在第七方面，本公开提供了一种阻断受试者中的PD-L1与PD-1和/或CD80的相互作用的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
本领域技术人员在阅读以下具体描述后可以更容易地理解本发明的特征和优点。应理解，为清楚起见，在各个实施方案的情况下在上文和下文所描述的本发明的某些特征也可以组合形成单一实施方案。相反地，为简洁起见，在单一实施方案的情况下描述的本发明的各种特征也可以组合形成其子组合方案。本文中鉴别为示例性或优选的实施方案旨在是说明性的且不是限制性的。
除非本文中另有具体说明，否则以单数形式提及也可包括复数形式。例如，"一个/种"可指一个/种，或一或多个/种。
如本文所用，短语"化合物或其药学上可接受的盐"指至少一种化合物、所述化合物的至少一种盐或其组合。例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐包括一种式(I)的化合物；两种式(I)的化合物；式(I)的化合物的一种盐；一种式(I)的化合物和所述式(I)的化合物的一或多种盐；和一种式(I)的化合物的两种或更多种盐。
除非另有说明，否则假定具有不饱和价态的任何原子具有足以使价态饱和的氢原子。
在整个说明书中，本领域技术人员可以选择基团及其取代基以提供稳定的部分和化合物。
下文列出用于描述本发明的各种术语的定义。当术语单独地或作为较大基团的一部分用于整个本说明书中(除非在特定情况下以其它方式加以限制)时，这些定义适用于术语。本文所阐述的定义优先于以引用的方式并入本文中的任何专利、专利申请和/或专利申请公开中所阐述的定义。
本文所用的术语“C1-C3烷基”是指衍生自包含1-3个碳原子的直链或支链饱和烃的基团。
本文所用的术语“卤代”和“卤素”是指F、Cl、Br或I。
短语"药学上可接受的"在本文中用于指在合理医学判断的范畴内适于与人和动物的组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理益处/风险比相匹配的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
式(I)的化合物可形成也在本发明范畴内的盐。除非另外说明，否则提及本发明化合物应理解为包括提及一种或多种其盐。术语"盐"表示与无机酸和/或有机酸以及无机碱和/或有机碱形成的酸性盐和/或碱性盐。此外，术语"盐"可包括两性离子(内盐)，例如当式(I)的化合物含有碱性部分(诸如胺或吡啶或咪唑环)与酸性部分(诸如羧酸)时。药学上可接受的(即无毒的，生理学上可接受的)盐为优选，诸如可接受的金属和胺盐，其中阳离子不会明显促成所述盐的毒性或生物活性。然而，其它盐可用于例如在制备期间可采用的分离或纯化步骤，并因此涵盖在本发明的范畴内。所述式(I)的化合物的盐例如可通过使式(I)的化合物与一定量(诸如当量的量)的酸或碱在介质(诸如使盐沉淀的介质)中或在水性介质中反应，继而冻干来形成。
示例性酸加成盐包括乙酸盐(诸如用乙酸或三卤乙酸(例如三氟乙酸)形成的那些盐)、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐(用盐酸形成)、氢溴酸盐(用溴化氢形成)、氢碘酸盐、马来酸盐(用马来酸形成)、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐(用甲磺酸形成)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐(pectinates)、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(诸如用硫酸形成的那些盐)、磺酸盐(诸如本文中提及的那些盐)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(诸如甲苯磺酸盐(tosylate))、十一烷酸盐等。
示例性碱性盐包括铵盐；碱金属盐，诸如钠盐、锂盐和钾盐；碱土金属盐，诸如钙盐和镁盐；钡盐、锌盐和铝盐；与有机碱(例如有机胺)形成的盐，所述有机碱如三烷基胺(诸如三乙胺)、普鲁卡因(procaine)、二苯甲基胺、N-苯甲基-β-苯乙胺、1-二苯羟甲胺(1-ephenamine)、N,N'-二苯甲基乙二胺、脱氢枞胺、N-乙基哌啶、苯甲胺、二环己胺或类似的药学上可接受的胺，以及与氨基酸(诸如精氨酸、赖氨酸等)形成的盐。碱性含氮基团可用如下试剂季铵化，诸如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物，甲基、乙基、丙基和丁基溴化物以及甲基、乙基、丙基和丁基碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物，癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基溴化物以及癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基碘化物)、芳烷基卤化物(例如苯甲基和苯乙基溴化物)等。优选的盐包括单盐酸盐、硫酸氢盐、甲磺酸盐、磷酸盐或硝酸盐。
前药的各种形式为本领域中熟知的且描述于以下中：
a)The Practice of Medicinal Chemistry,Camille G.Wermuth等人,第31章,(Academic Press,1996)；
b)Design of Prodrugs,H.Bundgaard编辑,(Elsevier,1985)；
c)A Textbook of Drug Design and Development,P.Krogsgaard-Larson和H.Bundgaard编辑第5章,第113-191页(Harwood Academic Publishers,1991)；和
d)Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism,Bernard Testa和JoachimM.Mayer,(Wiley-VCH,2003)。
此外，式(I)的化合物在其制备后可经分离和纯化以获得含有其量以重量计，等于或大于99％的式(I)的化合物("基本上纯")的组成，其随后如本文所述使用或配制。此类"基本上纯"的式(I)的化合物也作为本发明的部分涵盖在本文中。
"稳定的化合物"和"稳定的结构"旨在表明足够稳固，从而可以经受由反应混合物至可用纯度程度的分离和成为有效治疗试剂的配制(formulation)的化合物。本发明旨在包括稳定的化合物。
"治疗有效量"旨在包括有效抑制PD-1/PD-L1蛋白/蛋白和/或CD80/PD-L1蛋白/蛋白相互作用或有效治疗或预防癌症或感染性疾病(诸如HIV或乙型肝炎、丙型肝炎和丁型肝炎)的本发明化合物单独的量、或本发明化合物的组合的量、或与其它活性成分组合的本发明化合物的量。
如本文所用，"治疗(treating)"或"治疗(treatment)"涵盖治疗哺乳动物，尤其人类的疾病状态(disease-state)，且其包括：(a)预防哺乳动物出现所述疾病状态，尤其在此类哺乳动物易于患上所述疾病状态但尚未被诊断为患有所述疾病状态时；(b)抑制所述疾病状态，即遏制其发展；和/或(c)缓解所述疾病状态，即使得所述疾病状态消退。
本发明的化合物旨在包括本发明化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的那些原子。作为一般实例但非限制性地，氢的同位素包括氘(D)和氚(T)。碳的同位素包括13C和14C。本发明的同位素标记化合物一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于本文所述的方法，使用适当的同位素标记试剂替代原先使用的未标记试剂来制备。例如，甲基(-CH3)也包括氘化甲基，诸如-CD3。
根据式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐可通过适合于待治疗的病况的任何方式给药，其可根据位点特异性治疗的需要或待递送的式(I)的化合物的量而定。如下类别的药物组合物也涵盖在本发明内，其包含式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐；和一种或多种无毒的药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或辅助剂(在本文中统称为"载体"材料)和必要时其它活性成分。式(I)的化合物可通过任何适合的途径给药，优选为适于此类途径的药物组合物形式且为对预期治疗有效的剂量。本发明的所述化合物和组合物可以含有常规药学上可接受的载体、辅助剂和赋形剂的剂量单位制剂例如经口服、经粘膜、经直肠或肠胃外(包括血管内、静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内和胸骨内)给药。例如，所述药物载体可含有甘露糖醇或乳糖与微晶纤维素的混合物。所述混合物可含有其它组分，诸如润滑剂(例如硬脂酸镁)和崩解剂(诸如交联聚维酮(crospovidone))。载体混合物可填充至明胶胶囊中或压缩为片剂。所述药物组合物可例如以口服剂型或输注形式给药。
对于口服给药，所述药物组合物可呈例如片剂、胶囊、液体胶囊、混悬剂或液体形式。所述药物组合物优选以含有特定量活性成分的剂量单位形式制得。例如，所述药物组合物可以包含约0.1至1000mg，优选约0.25至250mg，且更优选约0.5至100mg范围内的量的活性成分的片剂或胶囊提供。用于人类或其它哺乳动物的适合日剂量可根据患者的病况及其它因素而广泛变化，但可使用常规方法确定。
本文中涵盖的任何药物组合物均可例如经由任何可接受且适合的口服制剂经口服递送。示例性口服制剂包括(但不限于)例如片剂、糖锭剂、锭剂、水性和油性混悬剂、可分散粉末或颗粒、乳剂、硬和软胶囊、液体胶囊、糖浆和酏剂。旨在用于口服给药的药物组合物可根据本领域中已知的制备旨在用于口服给药的药物组合物的任何方法制备。为提供药学上适口的制剂，根据本发明的药物组合物可含有至少一种选自甜味剂、调味剂、着色剂、缓和剂、抗氧化剂和防腐剂的试剂。
片剂可例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或至少一种其药学上可接受的盐与至少一种适合于制备片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合来制备。示例性赋形剂包括(但不限于)例如惰性稀释剂，诸如，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙和磷酸钠；造粒剂和崩解剂，诸如，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉和海藻酸；粘合剂，诸如，例如淀粉、明胶、聚乙烯基-吡咯烷酮和阿拉伯胶；和润滑剂，诸如，例如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。此外，片剂可未被包衣或通过常规技术被包衣以掩盖口味使人不快的药物的不佳味道，或推迟活性成分在胃肠道中的崩解和吸收，从而使活性成分的作用维持更长的时间段。示例性水溶性掩味材料包括(但不限于)羟丙基-甲基纤维素和羟丙基-纤维素。示例性延时材料包括(但不限于)乙基纤维素和乙酸丁酸纤维素。
硬明胶胶囊可例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或至少一种其盐与至少一种惰性固体稀释剂(诸如，例如碳酸钙；磷酸钙；和高岭土)混合来制备。
软明胶胶囊可例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或至少一种其药学上可接受的盐与至少一种水溶性载体(诸如，例如聚乙二醇)和至少一种油性介质(诸如，例如花生油、液体石蜡和橄榄油)混合来制备。
可例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或至少一种其药学上可接受的盐与至少一种适合于制备水性混悬剂的赋形剂混合来制备水性混悬剂。适用于制备水性混悬剂的示例性赋形剂包括(但不限于)例如助悬剂，诸如，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素、海藻酸钠、海藻酸、聚乙烯-吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂，诸如，例如天然存在的磷脂，例如卵磷脂；环氧烷与脂肪酸的缩合产物，诸如，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，诸如，例如十七亚乙基-氧基十六醇；环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，诸如，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯；以及环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的偏酯的缩合产物，诸如，例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水性混悬剂也可含有至少一种防腐剂，诸如，例如对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸正丙酯；至少一种着色剂；至少一种调味剂；和/或至少一种甜味剂，包括(但不限于)例如蔗糖、糖精和阿斯巴甜。
油性混悬剂可例如通过使至少一种式(I)的化合物和/或至少一种其药学上可接受的盐悬浮于植物油(诸如，例如花生油；橄榄油；芝麻油；和椰子油)或矿物油(诸如，例如液体石蜡)中来制备。油性混悬剂也可含有至少一种增稠剂，诸如，例如蜂蜡；硬石蜡；和鲸蜡醇。为提供适口的油性混悬剂，可将至少一种上文已描述的甜味剂和/或至少一种调味剂添加至油性混悬剂中。油性混悬剂可进一步含有至少一种防腐剂，包括(但不限于)例如抗氧化剂，诸如，例如丁基化羟基茴香醚和α-生育酚。
可分散的粉末和颗粒可例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或至少一种其药学上可接受的盐与至少一种分散剂和/或湿润剂、至少一种助悬剂和/或至少一种防腐剂混合来制备。适合的分散剂、湿润剂和助悬剂如上文已描述。示例性防腐剂包括(但不限于)例如抗氧化剂，例如抗坏血酸。此外，可分散的粉末和颗粒也可含有至少一种赋形剂，包括(但不限于)例如甜味剂、调味剂和着色剂。
至少一种式(I)的化合物和/或至少一种其药学上可接受的盐的乳剂可例如制备为水包油乳剂。包含式(I)的化合物的乳剂的油相可以已知方式由已知成分构成。所述油相可由例如(但不限于)以下提供：植物油，诸如，例如橄榄油和花生油；矿物油，诸如，例如液体石蜡；及其混合物。尽管所述相可仅包含乳化剂，但其也可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或脂肪与油两者的混合物。适合的乳化剂包括(但不限于)例如天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的酯或偏酯，诸如，例如脱水山梨糖醇单油酸酯；和偏酯与环氧乙烷的缩合产物，诸如，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。优选地，亲水性乳化剂与充当稳定剂的亲脂性乳化剂一起包括在内。还优选包括油和脂肪两者。总之，有或没有一种或多种稳定剂的一种或多种乳化剂组成所谓乳化蜡，且所述蜡连同所述油和脂肪组成所谓乳化软膏基质，其形成乳膏制剂的油性分散相。乳剂也可含有甜味剂、调味剂、防腐剂和/或抗氧化剂。适合用于本发明制剂中的乳化剂和乳剂稳定剂包括Tween 60、Span80、鲸蜡硬脂醇、十四烷醇、单硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸钠、单独或含蜡的二硬脂酸甘油酯或本领域中所熟知的其它物质。
式(I)的化合物和/或至少一种其药学上可接受的盐也可例如在静脉内、皮下和/或肌肉内经由任何药学上可接受且适合的可注射形式递送。示例性可注射形式包括(但不限于)例如包含可接受的赋形剂和溶剂的无菌水溶液，所述赋形剂和溶剂诸如，例如水、林格氏溶液(Ringer's solution)和生理盐溶液；无菌水包油微乳剂；和水性或油性混悬剂。
用于肠胃外给药的制剂可呈水性或非水性等渗无菌注射溶液或混悬剂形式。这些溶液和混悬剂可使用被提及用于口服给药的制剂中的一种或多种载体或稀释剂，或通过使用其它适合的分散剂或湿润剂和悬浮剂，由无菌粉末或颗粒来制备。所述化合物可溶解于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠、黄蓍胶和/或各种缓冲液中。其它辅助剂和给药模式在医药领域中深入且广泛地已知。活性成分也可作为具有适当的载体(包括盐水、葡萄糖或水)或具有环糊精(即Captisol)、共溶剂增溶(即丙二醇)或胶束增溶(即Tween 80)的组合物通过注射给药。
无菌可注射制剂也可为在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬剂，例如作为1,3-丁二醇中的溶液。可采用的所述可接受的赋形剂和溶剂有水、林格氏溶液和生理盐溶液。此外，无菌不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。为此，可采用任何温和的不挥发性油，包括合成的单-或二甘油酯。此外，诸如油酸的脂肪酸可用于制备可注射剂。
无菌可注射水包油微乳剂可例如通过以下来制备：1)使至少一种式(I)的化合物溶解于油相，诸如，例如大豆油与卵磷脂的混合物中；2)将含有式(I)的油相与水和甘油混合物组合；和3)处理所述组合以形成微乳剂。
无菌水性或油质的混悬剂可根据本领域中已知的方法制备。例如，无菌水性溶液或混悬剂可用无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(诸如，例如1,3-丁二醇)制备；和无菌油质的混悬剂可用无菌无毒的可接受的溶剂或悬浮介质(诸如，例如无菌不挥发性油(例如合成单-或二甘油酯)；和脂肪酸(诸如，例如油酸))制备。
可用于本发明的药物组合物中的药学上可接受的载体、辅助剂和赋形剂包括(但不限于)离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；自乳化药物递送系统(SEDDS)，诸如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯；用于医药剂型的表面活性剂，诸如Tweens、聚乙氧基化蓖麻油(诸如CREMOPHOR表面活性剂(BASF))或其它类似聚合物递送基质；血清蛋白，诸如人类血清白蛋白；缓冲物质，诸如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质，诸如鱼精蛋白硫酸盐；磷酸氢二钠；磷酸氢钾；氯化钠；锌盐；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯基吡咯烷酮；基于纤维素的物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物；聚乙二醇和羊毛脂。环糊精(诸如α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精)或经化学改性的衍生物(诸如羟烷基环糊精，包括2-和3-羟丙基-环糊精)或其它溶解的衍生物也可有利地用于增强本文所描述的化学式的化合物的递送。
本发明的药学上活性化合物可根据制药学常规方法进行处理以产生用于向包括人类及其它哺乳动物的患者给药的药剂。所述药物组合物可进行诸如灭菌的常规医药操作和/或可含有常规辅助剂，诸如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、缓冲剂等。片剂和丸剂可另外用肠溶包衣来制备。此类组合物也可包含辅助剂，诸如湿润剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
所给药的化合物的量和用本发明的化合物和/或组合物治疗疾病病况的给药方案取决于多种因素，所述因素包括主体的年龄、体重、性别、医学病况；疾病类型；疾病的严重性；给药途径和频率以及所采用的具体化合物。因此，所述给药方案可广泛变化，但可常规地使用标准方法确定。每公斤体重约0.001至100mg，优选每公斤体重约0.0025与约50mg之间且最优选每公斤体重约0.005至10mg之间的日剂量可以是适当的。日剂量可以每天一至四剂给药。其它给药方案包括每周一剂和每两天的周期一剂。
出于治疗目的，本发明的活性化合物通常与一种或多种适于所表明的给药途径的辅助剂组合。如果口服给药，则所述化合物可与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合且随后经压片或胶囊化以方便给药。此类胶囊或片剂可含有如活性化合物于羟丙基甲基纤维素中的分散液中可提供的控制释放制剂。
本发明的药物组合物包含至少一种式(I)的化合物和/或至少一种其药学上可接受的盐和任选的选自任何药学上可接受的载体、辅助剂和赋形剂的其它试剂。本发明的替代性组合物包含本文所述的式(I)的化合物或其前药和药学上可接受的载体、辅助剂或赋形剂。
本发明的化合物抑制PD-1/PD-L1蛋白/蛋白，从而阻断PD-L1。阻断PD-L1可增强哺乳动物(包括人类)中对癌细胞和感染性疾病的免疫应答。
在一个方面中，本发明涉及在体内使用式(I)的化合物或其盐治疗主体，从而抑制癌性肿瘤的生长。可单独使用式(I)的化合物或其盐以抑制癌性肿瘤的生长。或者，式(I)的化合物或其盐可与如下所述的其它免疫原性药剂或标准癌症治疗结合使用。
在一个实施方案中，本发明提供一种抑制主体中的肿瘤细胞生长的方法，其包含向主体给药治疗有效量的式(I)的化合物或其盐。
在一个实施方案中，提供一种治疗癌症的方法，其包含向有此需求的患者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其盐。癌症的实例包括其生长可使用本发明化合物抑制的那些，包括通常对免疫疗法有应答的癌症。所治疗的优选癌症的非限制性实例包括黑素瘤(例如转移性恶性黑素瘤)、肾癌(例如透明细胞癌)、前列腺癌(例如激素难治性前列腺癌)、乳腺癌、结肠癌和肺癌(例如非小细胞肺癌)。此外，本发明包括其生长可使用本发明化合物抑制的难治性或复发性恶性肿瘤。
可使用本发明的方法治疗的其它癌症的实例包括骨癌；胰腺癌；皮肤癌；头颈癌；皮肤或眼内恶性黑素瘤；子宫癌；卵巢癌；直肠癌；肛门区癌；胃癌；睾丸癌；子宫癌；输卵管癌；子宫内膜癌；子宫颈癌；阴道癌；外阴癌；霍奇金病(Hodgkin's Disease)；非霍奇金淋巴瘤；食道癌；小肠癌；内分泌系统癌；甲状腺癌；甲状旁腺癌；肾上腺癌；软组织肉瘤；尿道癌；阴茎癌；慢性或急性白血病，包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia)、慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocyticleukemia)；儿童实体肿瘤；淋巴细胞性淋巴瘤；膀胱癌；肾癌或输尿管癌；肾盂癌；中枢神经系统(CNS)肿瘤；原发性CNS淋巴瘤；肿瘤血管生成；脊髓轴肿瘤(spinal axis tumor)；脑干神经胶质瘤；垂体腺瘤；卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)；表皮样癌；鳞状细胞癌；T细胞淋巴瘤；环境诱发癌，包括由石棉诱发的癌症；和所述癌症的组合。本发明也适用于治疗转移性癌症，尤其是表达PD-L1的转移性癌症(Iwai等人(2005)Int.Immunol.17:133-144)。
任选地，式(I)的化合物或其盐可与另一免疫原性剂组合，所述另一免疫原性剂诸如癌细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白、肽和碳水化合物分子)、细胞和经编码免疫刺激性细胞因子的基因转染的细胞(He等人(2004)J.Immunol.173:4919-28)。可使用的肿瘤疫苗的非限制性实例包括黑素瘤抗原的肽，诸如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1和/或酪氨酸酶的肽，或经转染以表达细胞因子GM-CSF的肿瘤细胞。在人类中，已经证明一些肿瘤具有免疫原性，诸如黑素瘤。预期通过利用PD-L1阻断提高T细胞激活的阈值，期望激活宿主中的肿瘤应答。
所述PD-L1阻断可与疫苗接种方案组合。已设计出针对肿瘤的许多实验性疫苗接种策略(参见Rosenberg,S.,2000,Development of Cancer Vaccines,ASCO EducationalBook Spring：60-62；Logothetis,C.,2000,ASCO Educational Book Spring：300-302；Khayat,D.2000,ASCO Educational Book Spring：414-428；Foon,K.2000,ASCOEducational Book Spring：730-738；也参见Restifo,N.和Sznol,M.,Cancer Vaccines,第61章,第3023-3043页；DeVita,V.等人(编辑),1997,Cancer：Principles and Practice ofOncology.第五版)。在这些策略之一中，使用自体或同种异体肿瘤细胞制备疫苗。已证明这些细胞疫苗在肿瘤细胞经转导以表达GM-CSF时最有效。已证明GM-CSF为用于肿瘤疫苗接种的抗原呈递的有效激活剂(Dranoff等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：3539-43)。
对各种肿瘤中基因表达和大规模基因表达模式的研究已导致所谓肿瘤特异性抗原的定义(Rosenberg,S A(1999)Immunity 10：281-7)。在许多情况下，这些肿瘤特异性抗原是在肿瘤中和出现肿瘤的细胞中表达的分化抗原，例如黑色素细胞抗原gp100、MAGE抗原和Trp-2。更重要地，可证明许多这些抗原为宿主中发现的肿瘤特异性T细胞的靶标。PD-L1阻断可与许多在肿瘤中表达的重组蛋白和/或肽结合使用以产生针对这些蛋白的免疫应答。这些蛋白通常被免疫系统视为自抗原且因此对其具耐药性。所述肿瘤抗原也可包括蛋白端粒酶，其是合成染色体端粒所需且在超过85％人类癌症中和仅有限数目的躯体组织中表达(Kim,N等人(1994)Science 266：2011-2013)。(可通过各种方法保护这些躯体组织免受免疫攻击)。肿瘤抗原也可为由于改变蛋白序列或在两个不相关序列(即费城染色体(Philadelphia chromosome)中的bcr-abl)之间产生融合蛋白的躯体细胞突变而表达于癌细胞中的"新抗原"，或来自B细胞肿瘤的个体基因型。
其它肿瘤疫苗可包括来自人类癌症中所牵涉的病毒的蛋白，所述病毒诸如人乳头状瘤病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV、HDV和HCV)和卡波西氏疱疹肉瘤病毒(KHSV)。可与PD-L1阻断结合使用的肿瘤特异性抗原的另一形式是从肿瘤组织自身分离的纯化的热休克蛋白(HSP)。这些热休克蛋白含有来自肿瘤细胞的蛋白片段且这些HSP高效地递送至抗原呈递细胞以引起肿瘤免疫力(Suot,R&Srivastava,P(1995)Science 269:1585-1588；Tamura,Y.等人(1997)Science 278:117-120)。
树突状细胞(DC)是可用于引发抗原特异性应答的有效抗原呈递细胞。DC可离体产生且载有各种蛋白和肽抗原以及肿瘤细胞提取物(Nestle,F.等人(1998)Nature Medicine4：328-332)。DC也可通过基因方法转导以也表达这些肿瘤抗原。DC也已与肿瘤细胞直接融合用于达成免疫目的(Kugler,A.等人(2000)Nature Medicine 6:332-336)。作为接种疫苗的方法，DC免疫作用可与PD-L1阻断有效组合以激活更有效的抗肿瘤应答。
PD-L1阻断也可与标准癌症治疗组合。PD-L1阻断可与化学治疗方案有效组合。在这些情形下，可能减少所给药的化学治疗试剂的剂量(Mokyr,M.等人(1998)CancerResearch 58：5301-5304)。此类组合的一个实例是本发明化合物与达卡巴嗪(dacarbazine)组合用于治疗黑素瘤。此类组合的另一个实例是本发明化合物与白细胞介素-2(IL-2)组合用于治疗黑素瘤。支持所述PD-L1阻断与化学疗法组合使用的科学基本原理在于细胞死亡，所述细胞死亡作为大部分化学治疗化合物的细胞毒性作用的结果，应使得抗原呈递路径中肿瘤抗原的含量增加。可通过细胞死亡而与PD-L1阻断产生协同作用的其它组合疗法为放射、手术和激素剥夺。这些方案中的每一种在宿主中产生肿瘤抗原源。血管生成抑制剂也可与PD-L1阻断组合。抑制血管生成引起肿瘤细胞死亡，其可将肿瘤抗原送至宿主抗原呈递路径中。
本发明的化合物也可与将表达Fcα或Fcγ受体的效应细胞靶向肿瘤细胞的双特异性化合物组合使用(参加例如美国专利号5,922,845和5,837,243)。可使用双特异性化合物靶向两个单独的抗原。例如，抗-Fc受体/抗肿瘤抗原(例如Her-2/neu)的双特异性抗体已用于使巨噬细胞靶向肿瘤位点。此靶向可更有效地激活肿瘤特异性应答。这些应答的T细胞臂通过使用PD-L1阻断来增强。或者，可通过使用结合于肿瘤抗原和树突状细胞特异性细胞表面标记物的双特异性化合物将抗原直接递送至DC。
肿瘤通过多种机制逃避宿主免疫监督。许多这些机制可通过使肿瘤所表达且具免疫抑制性的蛋白失活来克服。这些尤其包括TGF-β(Kehrl,J.等人(1986)J.Exp.Med.163：1037-1050)、IL-10(Howard,M.&O'Garra,A.(1992)Immunology Today 13：198-200)和Fas配体(Hahne,M.等人(1996)Science 274：1363-1365)。结合于且阻断这些实体中的每一种的抑制剂可与本发明化合物组合使用以抵消免疫抑制剂的作用且有利于宿主的肿瘤免疫应答。
激活宿主免疫应答的化合物可与PD-L1阻断组合使用。这些包括树突状细胞表面上的激活DC功能和抗原呈递的分子。抗CD40化合物能够有效地取代辅助性T细胞活性(Ridge,J.等人(1998)Nature 393：474-478)且可与PD-L1阻断结合使用(Ito,N.等人(2000)Immunobiology 201(5)527-40)。激活诸如CTLA-4(例如美国专利号5,811,097)、OX-40(Weinberg,A.等人(2000)Immunol 164：2160-2169)、4-1BB(Melero,I.等人(1997)Nature Medicine 3：682-685(1997)和ICOS(Hutloff,A.等人(1999)Nature 397：262-266)的T细胞共刺激分子的化合物也可提供增加的T细胞激活水平。
骨髓移植目前正用于治疗多种造血来源的肿瘤。虽然移植物抗宿主疾病是该治疗的后果，但可由移植物抗肿瘤应答获得治疗益处。PD-L1阻断可用于增加供体移植的肿瘤特异性T细胞的有效性。
本发明的其它方法用于治疗已暴露于特定毒素或病原体的患者。因此，本发明的另一方面提供一种治疗主体的感染性疾病的方法，其包含向主体给药治疗有效量的式(I)的化合物或其盐。
类似于如上文所论述其对肿瘤的应用，式(I)的化合物或其盐可单独或作为辅助剂、与疫苗组合用于刺激对病原体、毒素和自身抗原的免疫应答。该治疗方法可特别适用的病原体的实例包括当前无有效疫苗的病原体或常规疫苗不完全有效的病原体。其包括(但不限于)HIV、肝炎(甲型、乙型、丙型或丁型)、流感病毒、疱疹、贾第虫(Giardia)、疟疾、利什曼原虫、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(PseudomonasAeruginosa)。PD-L1阻断对于由在感染过程期间呈现改变的抗原的病原体(agent)(诸如HIV)建立的感染特别适用。这些新颖表位在给药时经识别为外源的，因此引起强烈T细胞应答，此T细胞应答不会被通过PD-1的负信号抑制。
引起可通过本发明方法治疗的感染的病原性病毒的一些实例包括HIV、肝炎(甲型、乙型、丙型或丁型)、疱疹病毒(例如VZV、HSV-1、HAV-6、HHv-7、HHV-8、HSV-2、CMV和爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein Barr virus))、腺病毒、流感病毒、黄病毒、埃可病毒(echovirus)、鼻病毒、柯萨奇病毒(coxsackie virus)、cornovirus、呼吸道融合细胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛痘病毒、HTLV病毒、登革热病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒和虫媒病毒脑炎病毒(arboviral encephalitis virus)。
引起可通过本发明方法治疗的感染的病原菌的一些实例包括衣原体(chlamydia)、立克次体细菌(rickettsial bacteria)、分枝杆菌(mycobacteria)、葡萄球菌(staphylococci)、链球菌(streptococci)、肺炎球菌(pneumonococci)、脑膜炎球菌(meningococci)和淋球菌(conococci)、克雷伯氏菌(klebsiella)、变形杆菌(proteus)、沙雷氏菌(serratia)、假单胞菌(pseudomonas)、军团菌(legionella)、白喉(diphtheria)、沙门氏菌(salmonella)、杆菌(bacilli)、霍乱(cholera)、破伤风(tetanus)、肉毒中毒(botulism)、炭疽病(anthrax)、瘟疫(plague)、钩端螺旋体病(leptospirosis)和莱姆病(Lymes disease)细菌。
引起可通过本发明方法治疗的感染的病原性真菌的一些实例包括念珠菌属(Candida)(白色念珠菌(albicans)、克鲁斯氏念珠菌(krusei)、光滑念珠菌(glabrata)、热带念珠菌(tropicalis)等)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、曲霉菌属(Aspergillus)(烟曲霉(fumigatus)、黑曲霉(niger)等)、毛霉目属(Genus Mucorales)(毛霉菌属(mucor)、犁头霉属(absidia)、根霉属(rhizophus))、申克氏孢子丝菌(Sporothrixschenkii)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)。
引起可通过本发明方法治疗的感染的病原性寄生虫的一些实例包括溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、结肠小袋虫(Balantidium coli)、福氏耐格里阿米巴(Naegleriafowleri)、棘阿米巴虫属(Acanthamoeba sp.)、蓝氏贾第虫(Giardia lambia)、隐胞子虫属(Cryptosporidium sp.)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(plasmodium vivax)、微小巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、克鲁斯氏锥体虫(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、弓形虫(Toxoplasma gondi)和巴西日圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)。在所有上述方法中，PD-L1阻断可与免疫疗法的其它形式组合，所述免疫疗法的其它形式诸如细胞因子治疗(例如干扰素、GM-CSF、G-CSF、IL-2)或提高肿瘤抗原的呈递的双特异性抗体疗法(参见例如Holliger(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak(1994)Structure 2:1121-1123)、疫苗或修饰基因表达的试剂。
本发明的化合物可引起且放大自身免疫应答。实际上，使用肿瘤细胞和肽疫苗诱导抗肿瘤应答表明许多抗肿瘤应答涉及抗自身反应性(在上述van Elsas等人中抗-CTLA-4+GM-CSF-修饰的B16黑素瘤中观测到的脱色素；经Trp-2疫苗接种的小鼠中的脱色素(Overwijk,W.等人(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96：2982-2987)；由TRAMP肿瘤细胞疫苗引起的自身免疫前列腺炎(Hurwitz,A.(2000)上述)、在人类的临床试验中观测到的黑素瘤肽抗原疫苗接种和白斑症(vitilago)(Rosenberg,S A和White,D E(1996)J.Immunother Emphasis Tumor Immunol 19(1)：81-4)。
因此，可能考虑将抗-PD-L1阻断与各种自身蛋白结合使用从而设计高效产生针对这些自身蛋白的免疫应答用于疾病治疗的疫苗接种方案。例如，阿尔茨海默病涉及在脑中的淀粉状沉积物中A.β.肽的不当积聚；针对这些淀粉状蛋白的抗体应答能够清除这些淀粉状沉积物(Schenk等人,(1999)Nature 400：173-177)。
其它自身蛋白也可用作靶标，诸如用于过敏和哮喘治疗的IgE和用于类风湿性关节炎治疗的TNFα。最后，对各种激素的抗体应答可通过使用式(I)的化合物或其盐诱导。针对生殖激素的中和抗体应答可用于避孕。针对特定肿瘤生长所需的激素及其它可溶性因子的中和抗体应答也可考虑为可能的疫苗接种靶标。
上文关于抗-PD-L1抗体的用途所述的类似方法可用于诱导治疗性自身免疫应答，以治疗具有其它自身抗原(诸如阿尔茨海默病中的淀粉状沉积物(包括A.β.)、细胞因子(诸如TNFα和IgE)的不当积聚的患者。
本发明的化合物可通过共同给药式(I)的化合物或其盐与感兴趣的抗原(例如疫苗)而用于刺激抗原特异性免疫应答。因此，在另一个方面中，本发明提供了一种提高主体中对抗原的免疫应答的方法，其包含向主体给药：(i)抗原；和(ii)式(I)的化合物或其盐，以提高主体对抗原的免疫应答。所述抗原可为例如肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原或来自病原体的抗原。此类抗原的非限制性实例包括以上部分中所讨论的那些，诸如上文所讨论的肿瘤抗原(或肿瘤疫苗)或者来自上文所述的病毒、细菌或其它病原体的抗原。
如先前所述，本发明的化合物可与一种或多种其它治疗剂(例如细胞毒性剂、放射毒性剂或免疫抑制剂)共同给药。本发明的化合物可在另一治疗试剂之前、之后或同时给药，或可与其它已知疗法(例如抗癌疗法，例如放射)共同给药。此类治疗试剂尤其包括本身仅在对患者具毒性或亚毒性的水平下才有效的抗肿瘤剂，诸如阿霉素(doxorubicin)(亚德里亚霉素(adriamycin))、顺铂(cisplatin)、硫酸博来霉素(bleomycin sulfate)、卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、达卡巴嗪(decarbazine)和环磷酰胺羟基脲(cyclophosphamide hydroxyurea)。顺铂每四周以每剂100mg静脉内给药一次，且亚德里亚霉素每21天以60-75mg/mL剂量静脉内给药一次。共同给药式(I)的化合物或其盐与化学治疗试剂提供两种经由不同机制起作用的抗癌剂，其对人类肿瘤细胞产生细胞毒性作用。此类共同给药可解决因耐药性出现或肿瘤细胞的抗原性变化而使其不与抗体起反应所引起的问题。
本文所述的化合物也可用于治疗严重败血症或感染性休克。
包含式(I)的化合物或其盐和使用说明书的试剂盒也属于本发明的范畴。所述试剂盒可进一步含有至少一种其它试剂。试剂盒通常包括说明试剂盒内含物的预期用途的标签。所述术语标签包括在试剂盒上或与试剂盒一起供应或以其它方式伴随试剂盒的任何书面或记录材料。
以上其它治疗试剂在与本发明化合物组合使用时可以例如Physicians'DeskReference(PDR)中所示或由本领域技术人员以其它方式确定的那些量使用。在本发明的方法中，此类其它治疗试剂可在本发明化合物给药之前、与其同时或在其之后给药。
在一个实施方案中，所述式(I)的化合物抑制PD-1/PD-L1相互作用，其IC50值如通过PD-1/PD-L1均相时间分辨荧光(HTRF)结合测定所测量，为20μM或更低，例如0.006至20μM。优选地，式(I)的化合物以0.006至100nM的IC50值抑制PD-1/PD-L1相互作用。
实施例
本发明在以下实施例中进一步定义。应理解所述实施例仅为了说明而提供。从以上讨论和实施例，本领域技术人员可确定本发明的必要特征，且在不偏离其精神和范畴的情况下，可进行各种改变和修改以使本发明适于各种用途和条件。因此，本发明不受下文所阐述的说明性实施例的限制，而由其随附的权利要求限定。
如本说明书中所用，下列术语具有所示含义：Me表示甲基；TEA表示三乙胺；Bu表示丁基；THF表示四氢呋喃；DIAD表示偶氮二甲酸二异丙酯；Ph表示苯基；tBu或t-Bu表示叔丁基；DMF表示N,N-二甲基甲酰胺；TFA表示三氟乙酸；DCM表示二氯甲烷；BOC或Boc表示叔丁氧基羰基；DMSO表示二甲基亚砜；EtOAc表示乙酸乙酯；h或hr或hrs表示小时；min或mins表示分钟；sec表示秒；RT或rt或tR表示室温或保留时间(根据上下文)；TMS表示三甲基甲硅烷基；MeOH表示甲醇；AcOH表示乙酸；NCS表示N-氯代琥珀酰亚胺；OAc表示乙酸根；sat.或satd.表示饱和的；evap'd表示蒸发的。
制备实施例1001和实施例1002的方法示于以下方案中。
Figure BDA0002218269030000251
6,8-二甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯和1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇均可根据如下所示的方案由2-(3,5-二甲氧基苯基)乙-1-胺制备。
Figure BDA0002218269030000252
中间体：1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇·HBr
Figure BDA0002218269030000261
在密封容器中将6,8-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉·HCl(1.0g,4.35mmol)溶于48％溴化氢水溶液(30mL)中，于95℃搅拌16小时。然后将混合物冷却并浓缩，得到粗产物1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇·HBr(1.07g,4.35mmol,100％产率)，为红橙色固体，其直接继续使用。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),9.25(br.s.,1H),8.85(br.s.,2H),6.23(d,J＝2.1Hz,1H),6.08(d,J＝2.0Hz,1H),3.95(t,J＝4.6Hz,2H),3.29(d,J＝6.0Hz,2H),2.83(t,J＝6.1Hz,2H)。LCMS：tR(保留时间)＝0.53min；LCMS(ESI)m/z C9H12NO2计算值：166.09,实测值：166.00[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
中间体：2-(6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000262
将2-溴乙酸叔丁基酯(0.64mL,4.35mmol)加入氮气吹扫的1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇·HBr(1.07g,4.35mmol)和无水三乙胺(1.82mL,13.05mmol)的无水THF(70mL)溶液中，将混合物在24℃下搅拌3小时，然后将其用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。然后将溶于少量DCM中的残余物加载到RediSepRf正相硅胶Teledyne ISCO40g一次性柱中，该柱首先用0％B至0％B洗脱60mL，然后用5％B至100％B洗脱600mL，其中溶剂B＝乙酸乙酯，溶剂A＝己烷。浓缩洗脱液后，分离产物2-(6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(0.94g,77％产率)，为白色泡沫状物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ6.09(br s,1H),5.96(br s,1H),3.51-3.35(2m,4H),2.68-2.59(m,2H),1.71(s,2H),1.42(s,9H)。LCMS：tR＝0.69min；LCMS(ESI)m/z C15H22NO4计算值：280.16,实测值：280.00[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
中间体：2-(6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000271
在0℃下将偶氮-1,2-二甲酸二异丙基酯(DIAD)(0.21mL,1.07mmol)滴加到2-(6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(300mg,1.07mmol)、(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苯基)甲醇(275mg,1.07mmol)和三苯基膦(282mg,1.07mmol)的无水THF(5mL)溶液中。将得到的黄色溶液(在加入DIAD后)温热至rt，搅拌16小时，然后浓缩。将残余物溶于少量DCM中，并加载在RediSepRf正相硅胶Teledyne ISCO 40g一次性柱中，该柱首先用0％B至0％B洗脱60mL，然后用0％B至100％洗脱600mL，其中溶剂B＝乙酸乙酯，溶剂A＝己烷。浓缩洗脱液后，分离产物-(6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-8-羟基-3,4-二氢-异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(112mg,20％产率)，为浅黄色泡沫。(未确定样品中区域异构体2-(8-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-6-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯与所需产物的比率)。LCMS：tR＝1.10min；LCMS(ESI)m/z C31H36NO6计算值：518.26,实测值：518.25[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
中间体：2-(8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯·TFA和区域异构体2-(6-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-8-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯·TFA
Figure BDA0002218269030000281
将碳酸铯(120mg,0.37mmol)一次性加入搅拌的上述制备的2-(6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)-氧基)-8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(425mg,0.246mmol)和5-(氯甲基)烟腈(41mg,0.27mmol)的无水DMF(2mL)溶液中。将悬浮液在室温下搅拌16小时，然后真空除去溶剂，并将残余物在乙酸乙酯和水之间分配。分离水相，再次用EtOAc萃取。合并有机萃取物并用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物，然后用甲醇(2mL)稀释残余物，过滤通过Whatman 13mm PVDF注射过滤器(45μM)，放置在一个pHPLC小瓶(2mL)中并使用Waters-SunFire柱(30x 100mm，S5)通过反相制备型HPLC分四份纯化(梯度为经25分钟从0％B至100％B，@40ml/min)，其中溶剂B＝90％CH3CN-10％H2O-0.1％TFA和溶剂A＝5％CH3CN-95％H2O-0.1％TFA。在试管的高速真空蒸发后，分离产物2-(8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯·TFA及其区域异构体(56.3mg，0.075mmol，30.6％产率)，为白色固体。(没有确定样品中这两种区域异构体的比率)。混合物的1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.94-8.91(2m,2H),8.17和8.09(2m,1H),7.40-7.36和7.35-7.32(2m,1H),7.27-7.26(2m,2H),6.95-6.94和6.93-6.92(2m,1H),6.85-6.84和6.84-6.83(2m,1H),6.81-6.80和6.79-6.78(2m,1H),6.60-6.59和6.54-6.53(2m,1H),6.49和6.41-6.40(2m,1H),5.16和5.15(2s,2H),5.10和5.07(2s,2H),4.33(s,4H),4.03和4.00(2s,2H),3.85-3.50(br.m,3H),3.40-3.00(br.m,3H),2.28和2.26(2s,3H),1.52和1.49(2s,9H)。LCMS：tR＝1.17min；LCMS(ESI)m/z C38H40N3O6计算值：634.29,实测值：634.30[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
实施例1001：2-(8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)-氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸·2TFA
Figure BDA0002218269030000291
将TFA(0.2mL,2.60mmol)加入搅拌的上面制备的2-(8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基-苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(15mg,0.024mmol)的无水DCM(1mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌总共7小时，然后将其浓缩并通过制备型LC/MS在以下条件下纯化：柱：XBridgeC18,19×200mm，5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95：5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经30分钟10-70％B，然后在100％B下保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。分离出2-(8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸(3.5mg,18％)，通过LCMS分析估计的其纯度为96％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.94(br.s.,2H),8.31(br.s.,1H),7.39(br.s.,1H),7.31-7.09(m,2H),6.90(br.s.,1H),6.75(br.s.,2H),6.61(br.s.,1H),6.50(br.s.,1H),5.23(br.s.,2H),5.08(br.s.,2H),4.28(br.s.,4H),3.67(br.s.,2H),2.93-2.52(2m,6H),2.19(br.s.,3H)；LCMS：tR＝1.04min；LCMS(ESI)m/z C34H32N3O6计算值：578.23,实测值：578.25[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。使用两次分析型LC/MS注射来确定最终纯度。注射1条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B为95：5的乙腈：水+10mM乙酸铵，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％B保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。注射2条件：Waters AcquityUPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B为95：5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％B保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。
分析条件1：保留时间＝1.796min；ESI-MS(+)m/z＝578.0(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.747min；ESI-MS(+)m/z＝578.0(M+H)+。
实施例1002：2-(6-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-8-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]-二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸·2TFA
Figure BDA0002218269030000311
还将2-(6-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-8-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸(3.9mg,20％)从实施例1001的上述反应混合物中分离。通过LCMS分析估计的纯度为96％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.97(dd,J＝14.7,1.8Hz,2H),8.37(s,1H),7.39(d,J＝7.7Hz,1H),7.24(s,1H),7.17(d,J＝7.3Hz,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.81-6.73(m,2H),6.69(d,J＝2.2Hz,1H),6.48(d,J＝1.8Hz,1H),5.22(s,2H),5.13(s,2H),4.29(s,4H),3.65(s,2H),2.87-2.78(m,4H),2.55(s,2H),2.22(s,3H)；LCMS：tR＝1.02；LCMS(ESI)m/z C34H32N3O6计算值：578.23,实测值：578.25[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B为95：5的乙腈：水+10mM乙酸铵，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。注射2条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B为95：5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。
分析条件1：保留时间＝1.743min；ESI-MS(+)m/z＝578.0(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.704min；ESI-MS(+)m/z＝578.0(M+H)+。
实施例1003：2-(6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0002218269030000321
通过LCMS分析估计的纯度为96％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.40-7.35(m,1H),7.24(s,1H),7.16(s,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.81-6.73(m,2H),6.34(s,1H),6.15(s,1H),5.05(s,2H),4.29(s,4H),3.58(s,2H),3.15-3.09(m,1H),2.78-2.70(一系列m,5H),2.20(s,3H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters AcquityUPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝1.466min；ESI-MS(+)m/z＝462.2(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.519min；ESI-MS(+)m/z＝462.2(M+H)+。
用于制备实施例1004和实施例1005的方法如下所示。
Figure BDA0002218269030000331
中间体：(R)-7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基酯3-甲基酯
Figure BDA0002218269030000332
将(R)-2-(叔丁氧基羰基)-7-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸(650mg,2.22mmol)溶于MeOH(4mL)中并逐滴加入2M(重氮甲基)三甲基硅烷的乙醚溶液(1.1mL,2.22mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入另外的0.7mL 2M(重氮甲基)三甲基硅烷的乙醚溶液以确保完成。将混合物再搅拌1小时，然后用AcOH(0.1mL)淬灭并浓缩。将残余物溶于DCM中并用半饱和的NaHCO3溶液洗涤，经MgSO4干燥并浓缩，得到产物(630mg，92％)。一部分产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经15分钟25-65％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。将包含所需产物的级分合并并通过离心蒸发干燥。产物的产量为18.4mg，通过LCMS分析估计的纯度为100％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.06-6.93(m,1H),6.62-6.50(m,2H),4.89-4.58(2m,1H),4.55-4.40(m,1H),4.38-4.21(m,1H),3.58和3.54(2s,3H),3.11-2.86(2m,2H),1.46和1.38(2s,9H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝1.575min；ESI-MS(+)m/z＝330.0(M+Na)+。
分析条件2：保留时间＝1.569min；ESI-MS(+)m/z＝330.0(M+Na)+。
中间体：(R)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基酯3-甲基酯
Figure BDA0002218269030000341
将偶氮-1,2-二甲酸二异丙基酯(DIAD)(0.53mL,2.70mmol)加入氮气吹扫的(R)-7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基酯3-甲基酯(755mg,2.46mmol)、(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苯基)甲醇(630mg,2.46mmol)和三苯基膦(709mg,2.70mmol)的THF(2.5mL)溶液中，将所得到的混合物在24℃下搅拌18小时，然后加入三苯基膦(355mg)和DIAD(0.37mL)以确保反应完成。在室温下再搅拌16小时后，将混合物浓缩并将粗残余物溶于少量DCM中并随后加载到RediSepRf正相硅胶Teledyne ISCO 40g一次性柱中，该柱用5％B至85％B洗脱1500mL，其中溶剂B＝乙酸乙酯且溶剂A＝己烷。在浓缩洗脱液后，分离产物(245mg,18％)并回收原料(280mg)。一部分产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经20分钟30-100％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为21.8mg，通过LCMS分析估计的纯度为100％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.40(d,J＝7.3Hz,1H),7.24(t,J＝7.7Hz,1H),7.16(d,J＝6.6Hz,1H),7.13-7.11(m,1H),7.00-6.93(2m,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.90-6.86(m,1H),6.78(d,J＝2.2Hz,1H),6.75(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),5.08(br.s.,2H),4.93和4.66(2m,1H),4.63-4.49(m,1H),4.47-4.33(m,1H),4.28(s,4H),3.58和3.55(2s,3H),3.47-3.37(m,1H),3.16-2.93(m,2H),2.19(s,3H),1.46和1.38(2s,9H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters Acquity UPLCBEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝2.613min；ESI-MS(+)m/z＝568.1(M+Na)+。
分析条件2：保留时间＝2.597min；ESI-MS(+)m/z＝568.1(M+Na)+。
中间体：(R)-2-(叔丁氧基羰基)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸
Figure BDA0002218269030000361
将氢氧化锂一水合物(17.3mg,0.41mmol)加入(R)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)-氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基酯3-甲基酯(75mg,0.14mmol)在THF(2.5mL)和水(1mL)中的溶液中。将混合物在24℃下搅拌36小时，然后用1NHCl酸化(pH＝4)并在EtOAc中稀释。分离有机相，用盐水洗涤并经MgSO4干燥，得到产物(70mg,96％)。通过制备型LC/MS进一步纯化粗产物，条件如下：柱：XBridgeC18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经15分钟40-80％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为6.0mg，通过LCMS分析估计的纯度为92％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.40(d,J＝7.3Hz,1H),7.24(s,1H),7.16(d,J＝6.6Hz,1H),7.13-7.07(m,1H),6.97-6.91(2m,1H),6.93-6.91(m,1H),6.88-6.83(m,1H),6.78(d,J＝2.2Hz,1H),6.77-6.73(m,1H),5.08(s,2H),4.83-4.35(一系列m,3H),3.19-2.92(m,2H),2.19(s,3H),1.46-1.40(2s,9H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：Waters AcquityUPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝1.971min；ESI-MS(+)m/z＝530.1(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝3.235min；ESI-MS(+)m/z＝530.1(M+H)+。
实施例1004：(R)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸
Figure BDA0002218269030000371
将(R)-2-(叔丁氧基羰基)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸(66mg,0.12mmol)溶于4NHCl/二噁烷(5mL)中并在24℃下搅拌2小时。从反应混合物中取出一半溶液(2.5mL)并用1N NaOH溶液部分中和，过滤以除去形成的沉淀，并通过制备型LC/MS在以下条件下纯化：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95甲醇：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5甲醇：水+10mM乙酸铵；梯度：经20分钟50-100％B，然后在100％B下保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为5.4mg(20％产率)，并且通过LCMS分析估计的纯度为100％。两次分析LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters AcquityUPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝1.582min；ESI-MS(+)m/z＝432.0(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.675min；ESI-MS(+)m/z＝432.0(M+H)+。
中间体：(S)-2-(叔丁氧基羰基)-7-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸
Figure BDA0002218269030000381
将BOC酸酐(1.20mL,5.18mmol)加入(S)-7-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸(1.0g,5.18mmol)和三乙胺(0.72mL,5.18mmol)的二噁烷(40mL)溶液中，将混合物在室温下搅拌48小时，然后将其用EtOAc稀释，用0.1N HCl溶液、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到产物(590mg,39％)。LCMS：tR＝0.91min；LCMS(ESI)m/z C15H20NO5计算值：294.14,实测值：238.00[M+H-tBu]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
中间体：(S)-7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-(叔丁基酯)3-甲基酯
Figure BDA0002218269030000382
使用针对(R)-7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基酯3-甲基酯所述的程序由(S)-2-(叔丁氧基羰基)-7-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸获得(S)-7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-(叔丁基酯)3-甲基酯(313mg,50.5％)。一部分产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：waters xbridge c-18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经15分钟25-65％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.03-6.93(m,1H),6.64-6.51(2m,2H),4.94-4.58(2m,1H),4.54-4.41(m,1H),4.36-4.24(m,1H),3.58和3.54(2s,3H),3.09-2.87(m,2H),1.46和1.38(2s,9H)。产物的产量为16.6mg，通过LCMS分析估计的纯度为100％。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝1.560min；ESI-MS(+)m/z＝330.0(M+Na)+。
分析条件2：保留时间＝1.665min；ESI-MS(+)m/z＝330.0(M+Na)+。
中间体：(S)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基酯3-甲基酯
Figure BDA0002218269030000391
使用针对(R)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基3-甲基酯所述的程序由(S)-7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-(叔丁基酯)3-甲基酯和(3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苯基)-甲醇获得(S)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基-苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基酯3-甲基酯(390mg,75％)。一部分产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经15分钟60-100％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为10.1mg，通过LCMS分析估计的纯度为97％。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.41(d,J＝7.0Hz,1H),7.24(t,J＝7.5Hz,1H),7.19-7.09(m,2H),7.03-6.84(m,3H),6.81-6.72(m,2H),5.09(br.s.,2H),4.97-4.64(2m,1H),4.63-4.50(m,1H),4.49-4.35(m,1H),4.29和4.28(2s,4H),3.59和3.55(2s,3H),3.15-2.94(2m,2H),2.21和2.20(2s,3H),1.47和1.38(2s,9H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：WatersAcquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝2.601min；ESI-MS(+)m/z＝568.1(M+Na)+。
分析条件2：保留时间＝2.663min；ESI-MS(+)m/z＝546.0(M+H)+。
中间体：(S)-2-(叔丁氧基羰基)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸
Figure BDA0002218269030000401
使用针对(R)-2-(叔丁氧基羰基)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]-二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸所述的程序由(S)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢-异喹啉-2,3(1H)-二甲酸2-叔丁基酯3-甲基酯获得(S)-2-(叔丁氧基羰基)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸(67mg,69％)。一部分产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经15分钟40-80％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为13.7mg，通过LCMS分析估计的纯度为98％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.41(d,J＝7.3Hz,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.15(d,J＝6.6Hz,1H),7.06(t,J＝8.1Hz,1H),6.93-6.86(2m,2H),6.83-6.81(m,1H),6.78(d,J＝2.2Hz,1H),6.76(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),5.07(s,2H),4.76-4.36(一系列m,2H),3.20-3.04(m,2H),2.99-2.82(m,1H),2.19(s,3H),1.45-1.40(2s,9H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝1.932min；ESI-MS(+)m/z＝530.1(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝2.416min；ESI-MS(+)m/z＝546.0(M+Na)+。
实施例1005：(S)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸
Figure BDA0002218269030000411
使用针对(R)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-甲酸，实施例1004所述的程序由(S)-2-(叔丁氧基羰基)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸获得(S)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸(4.3mg,10.6％)。粗产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经13分钟25-65％B，最后在100％B保持3分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为4.3mg，通过LCMS分析估计的纯度为96％.1H NMR(HCl盐,400MHz,DMSO-d6)δ10.01-9.44(m,2H),7.41(d,J＝6.5Hz,1H),7.27-7.19(m,2H),7.19-7.15(m,1H),7.02-6.97(2m,2H),6.93(d,J＝8.3Hz,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,1H),6.75(2m,1H),5.11(s,2H),4.36(dd,J＝11.2,4.9Hz,1H),4.29(s,4H),3.77-3.64(m,2H),3.63-3.56(m,1H),3.49(dd,J＝11.8,4.8Hz,1H),3.25(dd,J＝16.8,5.0Hz,1H),3.08–3.01(m,1H),2.19(s,3H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。
分析条件1：保留时间＝1.706min；ESI-MS(+)m/z＝432.0(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.696min；ESI-MS(+)m/z＝432.0(M+H)+。
用于制备实施例1006的方法如以下方案所示：
Figure BDA0002218269030000431
中间体：6,8-二甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000432
向冷却(0℃)的6,8-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉·HCl(1.0g,4.35mmol)和三乙胺(1.214mL,8.71mmol)在无水THF(25mL)中的悬浮液中一次性加入二碳酸二叔丁基酯(0.950g,4.35mmol)。将混合物搅拌16小时，然后用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物溶于少量二氯甲烷中，加载到RediSepRf正相硅胶TeledyneISCO 40g一次性柱中，该柱首先用0％B至0％B洗脱100mL，然后用0％B至35％B洗脱700mL，其中溶剂B＝乙酸乙酯，溶剂A＝己烷。浓缩洗脱液后，分离出所需产物，6,8-二甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(1.29g,4.39mmol,101％产率)，为金黄色玻璃。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.33(d,J＝1.8Hz,1H),6.28(s,1H),4.43(br.s.,2H),3.86-3.76(m,6H),3.63(br.s.,2H),2.79(br.s.,2H),1.51(s,9H)。LCMS：tR＝1.30min；LCMS(ESI)m/zC16H24NO4计算值：294.17,实测值：238.00[M+H-tBu]+和279.05[M+H-tBu+MeCN]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
中间体：5-氯-6,8-二甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000441
在室温下向6,8-二甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(25mg,0.085mmol)的DMF(0.75mL)溶液一次性加入NCS(12.52mg,0.094mmol)。15分钟后，将混合物温热至60℃，在该温度下搅拌16小时。在冷却至室温后，真空去除溶剂。两个反应一前一后地进行。随后将合并的残余物溶于DCM中，用饱和NaHCO3溶液(pH＝9)、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物溶于少量DCM中并加载到RediSepRf正相硅胶Teledyne ISCO 12g一次性柱，该柱首先用0％B至0％B洗涤30mL，随后用0％B至50％B洗涤240mL，其中溶剂B＝乙酸乙酯，溶剂A＝己烷。在浓缩洗脱液后，分离所需产物5-氯-6,8-二甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(35.0mg,0.100mmol,117％产率)，为无色油状物，静置后凝固。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42(s,1H),4.43(br.s.,2H),3.92(s,3H),3.85(s,3H),3.64(t,J＝5.9Hz,2H),2.84(t,J＝5.3Hz,2H),1.50(s,9H)。LCMS：tR＝1.38min；LCMS(ESI)m/zC16H23ClNO4计算值：328.13,实测值：313.05[M+H-Me]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLCBEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
中间体：5-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇·HBr
Figure BDA0002218269030000451
使用针对1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇·HBr所述的程序由5-氯-6,8-二甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯获得5-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇·HBr(0.46g,108％)。LCMS：tR＝0.69min；LCMS(ESI)m/z C10H11ClNO2计算值：200.05,实测值：200.15[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。一部分产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的甲醇：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的甲醇：水+10mM乙酸铵；梯度：经20分钟10-40％B，随后在100％B保持3分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为3.1mg，通过LCMS分析估计的纯度为100％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ6.37(s,1H),3.62-3.16(m,1H),3.00-2.82(m,2H),2.57-2.52(m,2H),1.91(s,2H)。使用分析型LC/MS来确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的甲醇：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的甲醇：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3.5分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.5分钟；流速：0.5mL/min；检测：MS和UV(220nm)。分析条件1：保留时间＝0.497min；ESI-MS(+)m/z＝200.0(M+H)+。
中间体：2-(5-氯-6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000461
使用针对2-(6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯所述的程序由5-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇·HBr获得2-(5-氯-6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(76.6mg,68.5％)。LCMS：tR＝1.06min；LCMS(ESI)m/z C15H21ClNO4计算值：314.12,实测值：314.12[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。一部分产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经15分钟20-60％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为8.3mg，通过LCMS分析估计的纯度为100％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ6.39(s,1H),3.46(s,2H),2.79-2.72(m,2H),2.69-2.61(m,2H),2.55(br s,2H),1.44(s,9H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mmx 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。注射2条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm).
分析条件1：保留时间＝1.547min；ESI-MS(+)m/z＝314.0(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.037min；ESI-MS(+)m/z＝314.1(M+H)+。
中间体：(R)-1-(3-((3'-(羟基甲基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)氧基)-丙基)吡咯烷-3-醇
Figure BDA0002218269030000471
在厚壁压力管中在室温下将第二代XPHOS催化剂(52.2mg,0.066mmol)一次性加入氩气脱气的(R)-1-(3-(3-溴-2-甲基苯氧基)-丙基)吡咯烷-3-醇(500mg,1.59mmol)、(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)甲醇(329mg,1.33mmol)和磷酸钾(704mg,3.32mmol)在THF(6mL)和水(3mL)中的混合物中。将管密封，将所得混合物在室温下搅拌48小时，然后用EtOAc和水稀释，摇动，分离有机相。用乙酸乙酯再次萃取水相，随后合并有机萃取物并用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到的残余物溶于少量DCM中并加载到RediSepRf正相硅胶Teledyne ISCO 40g一次性柱中，该柱首先用0％B至0％B洗脱60mL，然后用0％B至100％B洗脱600mL，其中溶剂B＝甲醇，溶剂A＝DCM。浓缩洗脱液后，分离产物(R)-1-(3-((3'-(羟基甲基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)氧基)丙基)吡咯烷-3-醇(443.6mg,94％产率)，为白色泡沫。LCMS：tR＝0.89min；LCMS(ESI)m/z C22H30NO3计算值：356.22,实测值：356.15[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。一部分该产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经20分钟15-55％B，随后100％B下保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为11.0mg，通过LCMS分析估计的纯度为97％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.40(d,J＝7.7Hz,1H),7.26-7.14(m,2H),6.95(d,J＝7.7Hz,2H),6.66(d,J＝7.7Hz,1H),4.56(s,2H),4.28(br.s.,1H),4.08(q,J＝6.6Hz,2H),2.98-2.59(一系列m,3H),2.11-1.96(m,3H),1.93(s,3H),1.92-1.91(m,1H),1.85(s,3H),1.68(br.s.,1H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。注射2条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。
分析条件1：保留时间＝1.244min；ESI-MS(+)m/z＝356.2(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.286min；ESI-MS(+)m/z＝356.2(M+H)+。
中间体：(R)-2-(5-氯-8-羟基-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000481
在0℃下将(E)-偶氮-1,2-二甲酸二异丙基酯(0.104mL,0.526mmol)逐滴加入2-(5-氯-6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(150mg,0.478mmol)、(R)-1-(3-((3'-(羟基甲基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)氧基)丙基)-吡咯烷-3-醇(170mg,0.478mmol)和三苯基膦(138mg,5.26mmol)的无水THF(3mL)溶液中。将得到的黄色溶液(加入DIAD后)温热至室温，在该温度下搅拌16小时，然后浓缩。将混合物用EtOAc和水稀释，振荡，分离水相。将水相再次用乙酸乙酯萃取，然后合并有机萃取物并用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到粘稠的黄橙色油状物。将该物质溶于MeOH(6mL)中，通过Whatman 13mm PVDF注射过滤器(45mM)过滤，放置在三个pHPLC小瓶(2mL)中并分六份使用Waters Sunfire OBD柱(30x 100mm,5u)进行pHPLC(梯度为经20分钟10％B至100％B@40ml/min)，其中溶剂B＝95％CH3CN-5％H2O-10mMNH4OAc，溶剂A＝5％CH3CN-95％H2O-10mMNH4OAc。在试管快速真空蒸发后，分离产物(R)-2-(5-氯-8-羟基-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(113.5mg,36.5％产率)，为黄色固体。LCMS：tR＝1.21min；LCMS(ESI)m/zC37H48ClN2O6计算值：651.32,实测值：651.35[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。一部分产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经15分钟45-85％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。该分离的产物需要使用以下条件进行第二次制备型LC/MS纯化：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经15分钟55-100％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为1.3mg，通过LCMS分析估计的纯度为100％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.47(d,J＝7.0Hz,1H),7.31-7.24(m,1H),7.23-7.17(m,1H),7.06(d,J＝7.3Hz,1H),6.96(d,J＝8.1Hz,1H),6.67(d,J＝7.3Hz,1H),6.61(s,1H),5.13(s,2H),4.25-4.15(m,1H),4.07(d,J＝6.6Hz,2H),3.89(s,2H),3.52(s,2H),2.82-2.76(m,2H),2.74-2.66(m,3H),2.62-2.56(m,3H),2.48-2.42(m,1H),2.34(dd,J＝9.5,3.7Hz,1H),2.02(br s,3H),1.99-1.96(m,1H),1.94-1.91(m,2H),1.90(s,3H),1.85(s,3H),1.60-1.51(m,1H),1.48-1.41(m,9H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。注射2条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。
分析条件1：保留时间＝2.135min；ESI-MS(+)m/z＝651.1(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.648min；ESI-MS(+)m/z＝651.2(M+H)+。
中间体：(R)-2-(5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000511
将碳酸铯(4.6mg,0.014mmol)一次性加入搅拌的(R)-2-(5-氯-8-羟基-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(18mg,0.014mmol)和5-(氯甲基)烟腈(2.2mg,0.014mmol)的无水DMF(0.5mL)溶液中。将悬浮液在室温下搅拌16小时，然后加入另外的碳酸铯(4.6mg,0.14mmol)和5-(氯甲基)烟腈(2.2mg,0.014mmol)。将混合物再搅拌48小时，然后真空除去溶剂，得到焦糖色油状物。LCMS：tR＝1.29min；LCMS(ESI)m/z C44H52ClN4O6计算值：767.36,实测值：767.45[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。粗产物通过制备型LC/MS进一步纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经23分钟42-82％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为6.9mg，通过LCMS分析估计的纯度为94％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.99(d,J＝1.8Hz,1H),8.94(d,J＝1.8Hz,1H),8.34(s,1H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,1H),7.23-7.18(m,1H),7.07(d,J＝7.0Hz,1H),6.99-6.94(m,2H),6.68(d,J＝7.7Hz,1H),5.30(s,2H),5.24(s,2H),4.20(br.s.,1H),4.12-4.01(m,2H),3.61(s,2H),2.84-2.76(m,2H),2.75-2.70(m,3H),2.60-2.55(m,5H),2.47-2.42(m,1H),2.34(dd,J＝9.5,3.7Hz,1H),2.05(s,3H),2.02-1.95(m,1H),1.91(t,J＝6.8Hz,2H),1.84(s,3H),1.60-1.50(m,1H),1.42(s,9H)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mmx 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。注射2条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。
分析条件1：保留时间＝1.714min；ESI-MS(+)m/z＝767.1(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝2.348min；ESI-MS(+)m/z＝767.1(M+H)+。
实施例1006：(R)-2-(5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0002218269030000521
将TFA(0.1mL,1.30mmol)加入搅拌的(R)-2-(5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(29.2mg,0.038mmol)的无水DCM(1mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌总共16小时，然后将其浓缩并通过制备型LC/MS在以下条件下纯化：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经20分钟15-55％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。分离(R)-2-(5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸(0.5mg,1.4％产率,74％纯度)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B为95：5的乙腈：水+10mM乙酸铵，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。注射2条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B为95：5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。
分析条件1：保留时间＝1.387min；ESI-MS(+)m/z＝711.1(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.535min；ESI-MS(+)m/z＝711.1(M+H)+。
实施例1006的替代制备显示在以下方案中：
Figure BDA0002218269030000541
中间体：2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000542
在0℃下将DIAD(0.35mL,1.75mmol)的无水THF(0.65mL)溶液分批(0.1mL)加入(3-溴-2-甲基苯基)甲醇(320.0mg,1.59mmol)、2-(5-氯-6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(500.0mg,1.59mmol)和三苯基膦(460.0mg,1.75mmol)的无水THF(15mL)溶液中。将得到的黄色溶液温热至室温，在该温度下搅拌16小时，然后浓缩。然后将残余物溶于少量DCM中，并加载到RediSepRf正相硅胶Teledyne ISCO 40g一次性柱中，该柱首先用己烷洗脱60mL，然后用0-50％B洗脱800mL，其中溶剂B＝乙酸乙酯，溶剂A＝己烷。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥，得到产物2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(703.0mg,89％)，为黄色固体，储存在冰箱中。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)d 8.36(s,1H),7.59(dd,J＝13.9,8.1Hz,1H),7.44(d,J＝7.7Hz,1H),7.23-7.08(m,1H),6.54(s,1H),6.12(s,1H),5.19-5.05(m,2H),4.53(s,1H),3.61(t,J＝7.5Hz,1H),3.54(s,1H),3.38(s,1H),2.94(t,J＝7.7Hz,1H),2.86-2.78(m,1H),2.71(br.s.,1H),2.36(d,J＝9.2Hz,3H),1.44-1.37(m,9H)。LCMS：tR＝1.54min；LCMS(ESI)m/z C23H28BrClNO4计算值：496.09,实测值：496.15和498.15[M+H]+。LCMS条件：注射体积＝3mL；梯度＝2-98％B；梯度时间＝1.5min；流速＝0.8ml/min；波长＝220nm；流动相A＝0:100的乙腈：水+0.05％三氟乙酸；流动相B＝100:0的乙腈：水+0.05％三氟乙酸；柱＝Waters Aquity BEH C18,2.1x 50mm,1.7mm；炉温＝40℃。
中间体：2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)-甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯
Figure BDA0002218269030000551
在室温下将碳酸铯(328mg,1.01mmol)一次性加入2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-羟基-3,4-二氢-异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(500mg,1.01mmol)和5-(氯甲基)烟腈(154mg,1.01mmol)的无水DMF(10mL)溶液中。将混合物在50℃下搅拌3小时。冷却至室温后，真空除去溶剂。然后将粗残余物用乙酸乙酯和水稀释，分离水相，用乙酸乙酯再萃取一次。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将粗残余物溶于少量二氯甲烷中，用乙醚、乙酸乙酯和己烷研磨，在抽滤后得到标题化合物2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(170.0mg,28％)，为淡黄色固体。LCMS：tR＝1.21min；LCMS(ESI)m/z C30H33BrClN3O4计算值：612.13,实测值：612.00和613.95[M+H]+。LCMS条件：注射体积＝3mL；梯度＝2-98％B；梯度时间＝1.5min；流速＝0.8ml/min；波长＝220nm；流动相A＝0:100的乙腈：水+0.05％三氟乙酸；流动相B＝100:0的乙腈：水+0.05％三氟乙酸；柱＝Waters Aquity BEH C18,2.1x 50mm,1.7mm；炉温＝40℃。
中间体：2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0002218269030000561
在室温、氮气下将TFA(0.5mL,6.5mmol)加入搅拌的2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(170mg,0.28mmol)的干燥DCM(2.5mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌16小时，随后将其真空浓缩，得到无色油状物，将其与二氯甲烷和乙醚研磨，在抽滤后得到标题化合物2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸,2TFA(180.2mg,83％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.96-8.91(m,2H),8.30(s,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.44(d,J＝7.7Hz,1H),7.11(t,J＝7.7Hz,1H),6.98(s,1H),5.37(s,2H),5.29(s,2H),4.59-4.40(m,2H),4.30(s,2H),3.70(br s,2H),3.23(brt,J＝5.9Hz,2H),2.49(s,3H)。LCMS：tR＝1.08min；LCMS(ESI)m/z C26H25BrCIN3O计算值：556.07,实测值：555.90和557.90[M+H]+。LCMS条件：注射体积＝3mL；梯度＝2-98％B；梯度时间＝1.5min；流速＝0.8ml/min；波长＝220nm；流动相A＝0:100的乙腈：水+0.05％三氟乙酸；流动相B＝100:0的乙腈：水+0.05％三氟乙酸；柱＝Waters Aquity BEH C18,2.1x 50mm,1.7mm；炉温＝40℃。
实施例1006：(R)-2-(5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0002218269030000571
在室温下在1打兰压力小瓶中将XPHOS第二代预催化剂(4.2mg,5.39μmol)一次性加入氩气脱气的(R)-1-(3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)丙基)吡咯烷-3-醇(46.7mg,0.13mmol)、2-(6-((3-溴-2-甲基苄基)氧基)-5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸(60.0mg,0.11mmol)、磷酸钾(80.0mg,0.38mmol)在THF(1mL)和水(0.5mL)中的混合物中。将小瓶密封，将得到的悬浮液在40℃下搅拌16小时。在氩气氛下加入另外的(R)-1-(3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)丙基)吡咯烷-3-醇(46.7mg,0.13mmol)、XPHOS第二代预催化剂(4.2mg,5.39μmol)和THF(1mL)。压力小瓶重新密封，并在65℃下加热16个小时，随后将反应混合物冷却至室温。将混合物在乙酸乙酯和pH＝5的缓冲液之间分配。分离水层，用乙酸乙酯再萃取一次。使用氮气流浓缩有机萃取物。将残余物溶于DMF(加入一些THF和甲醇)，通过注射过滤器过滤，并通过制备LCMS纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x200mm,5mm；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经25分钟13-53％B，随后在100％B保持4分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物(白色固体)的产量为8.4mg(10.8％)，通过LCMS分析估计的纯度为98％。两次分析型LCMS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters AcquityUPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7mm；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持4分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射1结果：纯度：98.5％；质量实测值：711.3；保留时间：1.46min。注射2条件：柱：Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x 50mm,1.7mm；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0-100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1.0mL/min；检测：UV，220nm。注射2结果：纯度：99.0％；质量实测值：711.2；保留时间：1.45min。
实施例1007：(R)-2-(5-氯-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-8-((5-(甲氧基羰基)吡啶-3-基)甲氧基)-3,4-二氢-异喹啉-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0002218269030000581
在1打兰小瓶中将冷(0℃)的4N HCl/二噁烷(0.1mL,1.30mmol)一次性加入(R)-2-(5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3'-(3-(3-羟基-吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯(15mg,0.020mmol)中。5分钟后，加入无水MeOH(0.15mL)。将混合物在室温下搅拌总共4小时，随后用饱和NaHCO3溶液碱化。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用1N HCl调节pH直至达到pH＝5。分离水相，用乙酸乙酯再萃取两次。然后将合并的有机萃取液用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物溶于MeOH中，通过尼龙注射过滤器过滤，并通过制备型LC/MS纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；梯度：经20分钟5-65％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。分离(R)-2-(5-氯-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-8-((5-(甲氧基羰基)吡啶-3-基)甲氧基)-3,4-二氢-异喹啉-2(1H)-基)乙酸(0.4mg,1.9％产率,100％纯度)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：Waters Acquity UPLCBEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B为95：5的乙腈：水+10mM乙酸铵，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。注射2条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B为95：5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。
分析条件2：保留时间＝1.336min；ESI-MS(+)m/z＝373.0(M+2H)2+/2+。
分析条件1：保留时间＝1.868min；ESI-MS(+)m/z＝372.3(M+2H)2+/2+。
实施例1008：(R)-5-(((5-氯-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-基)氧基)甲基)烟酸甲基酯
Figure BDA0002218269030000591
从实施例1007的反应混合物还分离(R)-5-(((5-氯-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)-甲氧基)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-基)氧基)甲基)-烟酸甲基酯(0.5mg,2.2％产率,96.0％纯度)。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μmC18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B为95：5的乙腈：水+10mM乙酸铵，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。注射2条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B为95：5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸，温度为50℃，梯度为经3分钟0-100％B，在100％保持0.75分钟，流速为1.0mL/分钟，UV波长为220nm。
分析条件2：保留时间＝1.484min；ESI-MS(+)m/z＝758.0(M+H)+.
分析条件1：保留时间＝2.142min；ESI-MS(+)m/z＝758.1(M+H)+。
中间体：2-(5-氯-6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸甲基酯
Figure BDA0002218269030000601
使用针对2-(5-氯-6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯所述的程序由5-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6,8-二醇·HBr和2-溴乙酸甲基酯获得2-(5-氯-6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸甲基酯(102.0mg,53％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.29-6.27(m,1H),3.77(s,3H),3.59(s,2H),3.49-3.39(m,2H),2.88-2.77(m,2H)。LCMS：tR＝0.44min；LCMS(ESI)m/z C15H15ClNO4计算值：272.07,实测值：272.15[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
中间体：(R)-2-(5-氯-8-羟基-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸甲基酯
Figure BDA0002218269030000611
使用针对(R)-2-(5-氯-8-羟基-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸叔丁基酯所述的程序由(R)-1-(3-((3'-(羟基甲基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)氧基)-丙基)吡咯烷-3-醇和2-(5-氯-6,8-二羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸甲基酯获得(R)-2-(5-氯-8-羟基-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸甲基酯(49mg,26％)。LCMS：tR＝1.13min；LCMS(ESI)m/z C34H42ClN2O6计算值：609.28,实测值：609.25[M+H]+。LCMS条件：WatersAcquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。
实施例1009：(R)-2-(5-氯-8-羟基-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0002218269030000612
将氢氧化锂一水合物(8.3mg,0.197mmol)一次性加入搅拌的(R)-2-(5-氯-8-羟基-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸甲基酯(30mg,0.039mmol)在THF(0.5mL)、MeOH(0.1mL)和水(0.1mL)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌16小时，随后用氮气流除去有机溶剂。然后将残余物溶于EtOAc中并用1NHCl(0.33mL)和pH＝5的缓冲液(3mL)中和。分离水层，用EtOAc再次萃取，合并的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，为棕橙色固体(25mg)。LCMS：tR＝1.10min；LCMS(ESI)m/z C33H40ClN2O6计算值：595.26,实测值：595.25[M+H]+。LCMS条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18,2.1x 50mm，其中流动相A为100％水+0.05％三氟乙酸；流动相B为100％乙腈+0.05％三氟乙酸，温度为40℃，梯度为经1.5分钟2-98％B，流速为0.8mL/分钟，UV波长为220nm。一部分该粗产物通过制备型LC/MS纯化，条件如下：柱：XBridge C18,19x 200mm,5μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；梯度：经20分钟10-50％B，随后在100％B保持5分钟；流速：20mL/min。合并包含所需产物的级分并通过离心蒸发干燥。产物的产量为1.4mg，通过LCMS分析估计的纯度为94％。两次分析型LC/MS注射用于确定最终纯度。注射1条件：柱：Waters XBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；流动相B：95:5的乙腈：水+0.1％三氟乙酸；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。注射2条件：柱：WatersXBridge C18,2.1mm x 50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5：95的乙腈：水+10mM乙酸铵；流动相B：95:5的乙腈：水+10mM乙酸铵；温度：50℃；梯度：经3分钟0％B至100％B，随后在100％B保持0.75分钟；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6/D2O)δ7.33(d,J＝7.3Hz,1H),7.12(t,J＝7.5Hz,1H),7.08-7.02(m,1H),6.91(d,J＝8.1Hz,1H),6.81(d,J＝8.1Hz,1H),6.53(d,J＝7.3Hz,1H),6.47(s,1H),4.98(s,2H),4.10-4.01(m,1H),3.92(q,J＝6.2Hz,3H),3.75(s,2H),3.42(s,3H),2.68(d,J＝5.9Hz,3H),2.63-2.54(m,5H),2.52-2.41(m,5H),2.21(dd,J＝9.7,3.5Hz,2H),1.90-1.84(m,6H),1.80-1.74(m,10H),1.70(s,6H),1.46-1.36(m,2H)。
分析条件1：保留时间＝1.419min；ESI-MS(+)m/z＝595.1(M+H)+。
分析条件2：保留时间＝1.292min；ESI-MS(+)m/z＝595.1(M+H)+。
生物测定
使用PD-1/PD-L1均相时间分辨荧光(HTRF)结合测定研究式(I)的化合物与PD-L1结合的能力。
均相时间分辨荧光(HTRF)结合测定
PD-1与PD-L1的相互作用可使用这两种蛋白的胞外域的可溶的经纯化制剂来评定。PD-1和PD-L1蛋白胞外域被表达为与检测标签的融合蛋白，对于PD-1，该标签为免疫球蛋白的Fc部分(PD-1-Ig)，且对于PD-L1，其为6组氨酸基序(PD-L1-His)。所有结合研究均在由补充有0.1％(w/v)牛血清白蛋白和0.05％(v/v)Tween-20的dPBS组成的HTRF测定缓冲液中进行。对于h/PD-L1-His结合测定，将抑制剂与PD-L1-His(最终10nM)一起在4μl测定缓冲液中预温育15分钟，接着添加在1μl测定缓冲液中的PD-1-Ig(最终20nM)且进一步温育15分钟。使用铕穴状化合物标记的抗Ig(最终1nM)和别藻蓝蛋白(APC)标记的抗His(最终20nM)实现HTRF检测。在HTRF检测缓冲液中稀释抗体且将5μl分配于结合反应顶部。使反应混合物平衡60分钟且使用EnVision荧光计获得所得信号(665nm/620nm的比率)。在人类蛋白PD-1-Ig/PD-L2-His(分别为20&2nM)和CD80-His/PD-L1-Ig(分别为100&10nM)之间进行额外的结合测定。
重组蛋白：使具有免疫球蛋白G(Ig)表位标记的C端人类Fc域的人类PD-1(25-167)[hPD-1(25-167)-3S-IG]和具有C端His表位标记的人类PD-L1(18-239)[hPD-L1(18-239)-TVMV-His]于HEK293T细胞中表达且通过蛋白A亲和色谱法和尺寸排阻色谱法依次纯化。人类PD-L2-His和CD80-His经由市售来源获得。
重组人类PD-1-Ig的序列
hPD1(25-167)-3S-IG
Figure BDA0002218269030000641
(SEQ ID NO：1)
重组人类PD-L1-His的序列
hPDL1(18-239)-TVMV-His
Figure BDA0002218269030000642
(SEQ ID NO：2)
下表列出PD-1/PD-L1均相时间分辨荧光(HTRF)结合测定中所测量的本公开的代表性实施例的IC50值。范围如下：A＝0.002-0.015μM；B＝0.016-0.050μM；C＝0.051-1.50μM；D＝1.51-10μM。
实施例编号 IC50(μM)(范围或值)
1001 A
1002 C
1003 C
1004 D
1005 ＞10uM
1006 0.002uM
1007 B
1008 ＞10uM
式(I)的化合物具有作为PD-1/PD-L1相互作用的抑制剂的活性，并因此可用于治疗与PD-1/PD-L1相互作用相关的疾病或缺乏。经由抑制PD-1/PD-L1相互作用，本发明化合物可用于治疗感染性疾病，诸如HIV、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎或丁型肝炎和癌症。
Figure IDA0002218269060000011
Figure IDA0002218269060000021
Figure IDA0002218269060000031
Figure IDA0002218269060000041

Claims (15)

1.式(I)的化合物
Figure DEST_PATH_IMAGE001
或其药学上可接受的盐，其中
n是1或2；
n'是1或2；条件是n和n'中的至少一个不是2；
X和X'中的一个选自NH和NRx，另一个选自CH2和CHRy；
Rx选自-CH2CO2H、-CH2CO2C1-C3烷基和-CO2C1-C3烷基；
Ry选自-CH2CO2H、-CH2CO2C1-C3烷基、-CO2H和-CO2C1-C3烷基；
R2选自氢、-OH、
Figure DEST_PATH_IMAGE002
和
Figure DEST_PATH_IMAGE003
，其中R4选自-CN、-CO2H和-CO2C1-C3烷基；
R3选自氢和卤素；和
Ar选自
Figure DEST_PATH_IMAGE004
和
Figure DEST_PATH_IMAGE005
。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中n和n'各自是1。
3.权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是NRx且X'是CH2。
4.权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是CHRy且X'是NH。
5.选自以下的化合物：
2-(8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸；
2-(6-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-8-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]-二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸；
2-(6-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸；
(R)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸；
(S)-7-((3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-甲基苄基)氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸；和
(R)-2-(5-氯-8-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)-6-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸；
或其药学上可接受的盐。
6.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
7.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在有此需要的受试者中增强、刺激、调节和/或增加免疫应答的药物中的用途，其中向受试者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。
8.权利要求7的用途，其中在给予权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时还给予另外的药剂。
9.权利要求8的用途，其中所述另外的药剂是抗微生物剂、抗病毒剂、细胞毒性剂、基因表达调节剂和/或免疫应答调节剂。
10.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制在有此需要的受试者中的癌细胞生长、增殖或转移的药物中的用途，其中向受试者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或药学上可接受的盐。
11.权利要求10的用途，其中所述癌症选自黑素瘤、肾细胞癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非鳞状NSCLC、结直肠癌、去势抵抗性前列腺癌、卵巢癌、胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、头颈部鳞状细胞癌、食道癌、胃肠道癌和乳腺癌以及血液恶性肿瘤。
12.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗在有此需要的受试者中的感染性疾病的药物中的用途，其中向受试者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。
13.权利要求12的用途，其中所述感染性疾病由病毒引起。
14.权利要求13的用途，其中所述病毒选自HIV、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、疱疹病毒、乳突状瘤病毒和流感。
15.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗在有此需要的受试者中的感染性休克的药物中的用途，其中向受试者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。
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