CN110431150A - 抗体分子-药物偶联物及其用途 - Google Patents

抗体分子-药物偶联物及其用途 Download PDF

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Abstract

公开了特异性结合脂多糖(LPS)的抗体分子‑药物偶联物(ADC)。该抗体分子‑药物偶联物可用于治疗、预防和/或诊断细菌感染和相关病症。

Description

抗体分子-药物偶联物及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年1月18日提交的美国临时申请号62/447,813以及2017年5月1日提交的美国临时申请号62/492,641的权益。上述申请的内容通过引用的方式全文纳入本文。
序列表
本申请包含以ASCII格式电子提交的序列表，并通过引用全文纳入本文。在2018年1月18日创建的所述ASCII拷贝命名为P2029-7016WO_SL.txt，大小为116,626字节。
背景
多种细菌可造成感染，导致轻微至严重的疾病。细菌感染通常通过抗生素治疗。然而，抗生素耐药性细菌菌株的出现使感染的治疗变得复杂。与易于用抗生素治疗的感染相比，抗生素耐药性感染通常导致更大的残疾和死亡。据疾病控制和预防中心(CDC)称，美国每年至少有200万人患上严重的细菌感染，这些细菌对一种或多种用于治疗这些感染的抗生素有耐药性。每年至少有23000人直接死于这些抗生素耐药性感染。这些估计基于保守的假设，并且可能是最低估计。更多患者可能死于其他因细菌感染而变得复杂的病症。当一线和二线抗生素治疗方案受到耐药性限制或无法获得时，医疗提供者被迫使用可能对患者毒性更高，并且通常更昂贵且效果更差的抗生素。在许多情况下，抗生素耐药性感染需要长时间或更昂贵的治疗，延长住院时间，并且需要额外的医生就诊和医疗护理。
抗生素的使用是导致全世界抗生素耐药性的最重要因素之一。抗生素是人类医学中最常用的处方药。然而，根据CDC的说法，高达50％的用于人处方的抗生素是不需要的，或者没有达到规定的最佳效果。抗生素也常用于食用动物中以预防，控制和治疗疾病，并促进产生食物的动物的生长。细菌的耐药性菌株可在人与人之间传播，或从环境中的非人源传播，包括食物。
需要开发用于治疗，预防和诊断细菌感染的新方法。
发明内容
本公开内容至少部分地提供与细菌，例如革兰氏阴性细菌，例如革兰氏阴性细菌外膜上的脂多糖(LPS)结合，并且包含本文公开的功能和结构性质的抗体分子或抗体分子-药物偶联物(ADC)。在一个实施方式中，ADC包含与抗LPS抗体分子位点特异性偶合(couple)(例如偶联(conjugate))的抗微生物肽。在一个实施方式中，ADC包含各自与抗LPS抗体分子位点特异性偶合(例如偶联)的多种抗微生物肽。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合LPS的核心区。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)LPS的单糖组分(例如，庚糖)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合核心LPS的磷酸化(例如，超磷酸化或双磷酸化)HepI残基(例如，在铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)中)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合，抑制和/或降低不同属，种和/或亚种的一种或多种细菌(例如革兰氏阴性细菌)的活力。在一个实施方式中，抗体分子选自表1或8。在一个实施方式中，ADC包含选自表1或8的抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含表1或8中所述的一个或多个重链可变区和/或一个或多个轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含表1或8中所述的一个或多个重链CDR和/或一个或多个轻链CDR。在一个实施方式中，ADC包含抗微生物肽，例如本文所述的抗微生物肽，例如，在表3或6A-6B，或图4，15A-15B或36中显示。虽然不希望受理论束缚，据信，在一个实施方式中，抗体分子与抗微生物肽的偶联可以改善抗体分子和/或抗微生物肽的一种或多种性质，例如，改善抗微生物肽抑制或降低不同属，种和/或亚种的一种或多种细菌，例如一种或多种革兰氏阴性细菌的活力的能力。还提供了编码抗体分子，ADC或抗微生物肽的核酸分子，表达载体，宿主细胞，组合物(例如药物组合物)，试剂盒/药盒和制备抗体分子，ADC或抗微生物肽的方法。本文公开的抗体分子，ADC和抗微生物肽可以(单独或与其他药剂或治疗方式组合的形式)用于治疗，预防和/或诊断例如由革兰氏阴性细菌(例如，假单胞菌，例如铜绿假单胞菌)引起的或与之相关的细菌感染或相关病症。
因此，在一个方面，本公开提供了抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含修饰的硫酸酯酶基序。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序具有下式：
X1(FGly’)X2Z2X3Z3
其中FGly’具有下式：
HIPS化学，
其中J1是共价偶合的抗微生物肽；
各L1是二价部分，其独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚烯基，取代的亚烯基，亚炔基，亚炔基，亚芳基，取代的亚芳基，亚环烷基，取代的亚环烷基，亚杂芳基，取代的亚杂芳基，亚杂环基，取代的亚杂环基，酰基，酰氨基，酰氧基，亚氨酯基，硫酯，磺酰基，磺酰胺，磺酰基酯，-O-，-S-，-NH-和取代的胺；
n是选自0到40的数字；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当硫酸酯酶基序位于多肽的N-末端时，X1存在；
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
在一个实施方式中，当处于折叠状态时，抗体分子在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序是异源修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于重链恒定区的末端(例如，C末端)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链恒定区中除重链恒定区的末端(例如，C末端)之外的区域中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于轻链恒定区的末端(例如，C末端)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于轻链恒定区中除轻链恒定区的末端(例如，C末端)之外的区域中。
在一个实施方式中，ADC包含多个修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，ADC包含两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，ADC包含三个或更多个(例如，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，ADC包含四个或更多个(例如，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，ADC包含四个修饰的硫酸酯酶基序。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含两条或更多条重链，每条重链包含修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含两条或更多条轻链，每条轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含两条重链和两条轻链，每条重链包含两个修饰的硫酸酯酶基序(例如，一个在CH1中且一个在CH3中，一个在CH1中且一个在CH2中，或一个在CH2且一个在CH3)。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序作为包含由柔性接头分开的修饰的硫酸酯酶基序的多联体形式提供。
在一个实施方式中，Z3是精氨酸(R)。在一个实施方式中，X1(存在时)、X2和X3各自独立地为脂族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。在一个实施方式中，X1(存在时)是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序具有下式：L(FGly’)TPSR(SEQ ID NO:168)。
另一方面，本发明的特征在于一种醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)，其包含具有以下氨基酸序列的硫酸酯酶基序：
X1Z1X2Z2X3Z3
其中
Z1是半胱氨酸，丝氨酸或2-甲酰甘氨酸残基；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当异源硫酸酯酶基序位于醛标记的多肽的N-末端时，X1存在；并且
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
在一个实施方式中，当处于折叠状态时，抗体分子能够在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序是异源硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序是未修饰的硫酸酯酶基序。在另一个实施方式中，硫酸酯酶基序是修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链恒定区的末端(例如，C末端)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链恒定区中除重链恒定区的末端(例如，C末端)之外的区域中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于轻链恒定区的末端(例如，C末端)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于轻链恒定区中除轻链恒定区的末端(例如，C末端)之外的区域中。
在一个实施方式中，抗体分子包含多个硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含三个或更多个(例如，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含四个或更多个(例如，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含四个修饰的硫酸酯酶基序。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者。在一个实施方式中，抗体分子包含两条或更多条重链，每条重链包含硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含两条或更多条轻链，每条轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含两条重链和两条轻链，每条重链包含两个修饰的硫酸酯酶基序(例如，一个在CH1中且一个在CH3中，一个在CH1中且一个在CH2中，或一个在CH2且一个在CH3)。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序作为包含被柔性接头分开的修饰的硫酸酯酶基序的多联体形式提供。
在一个实施方式中，Z3是精氨酸(R)。在一个实施方式中，X1(存在时)、X2和X3各自独立地为脂族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。在一个实施方式中，X1(存在时)是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序具有下式：LCTPSR(SEQ ID NO:169)。
一方面，本公开内容提供了产生ADC的方法，其包括使醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子)与抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)在允许抗体分子的醛与抗微生物肽的反应性基团之间发生反应的条件下接触，从而产生ADC。
在一个实施方式中，醛标记的抗体分子包含2-甲酰基-甘氨酸残基(例如，Z1处的FGly’)。在一个实施方式中，抗微生物肽包含氨氧基或酰肼反应性基团。
在一个实施方式中，该方法包括在反应混合物中联合醛标记的抗体分子和抗微生物肽。
在一个实施方式中，使抗微生物肽与抗体分子接触，或在反应混合物中提供，其量足以提供抗微生物肽与抗体分子的所需比率。在一个实施方式中，抗微生物肽与抗体分子的比率为约1:1，2:1，3:1，4:1，5:1，6:1，7:1，8:1或更大。在一个实施方式中，抗微生物肽与抗体分子的比率为约4:1。
在一个实施方式中，醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过肼基-异-Pictet-Spengler(HIPS)连接偶合。在另一个实施方式中，醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过与肟和酰肼偶联，然后还原而偶合。
在一个实施方式中，该方法还包括例如从反应混合物中分离(例如纯化)ADC。在一个实施方式中，醛标记的抗体分子在醛标记的抗体分子与抗微生物肽接触之前(例如，在反应混合物中的抗微生物肽与醛标记的抗体分子联合之前)是折叠的。
在一方面，本发明提供一种通过本文所述的方法产生的ADC。
在一个方面，本公开提供了一种组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含ADC和药学上可接受的运载体，其中ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
在一个方面，本公开提供了包含ADC的反应混合物，所述ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的硫酸酯酶基序(例如，修饰的硫酸酯酶基序)。
在一个方面，本公开内容的特征在于一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括向有需要的对象给予有效治疗或预防细菌感染或相关病症的量的ADC或包含ADC的药物组合物，其中ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，并且其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
在一个实施方式中，细菌感染与革兰氏阴性细菌相关。在一个实施方式中，细菌感染是假单胞菌感染。在一个实施方式中，细菌感染与铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)相关。
一方面，本发明的特征在于一种核酸，其包含编码本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子的核苷酸序列。
一方面，本发明提供抗体分子或ADC结合本文所述的表位。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含修饰的硫酸酯酶基序(例如，本文所述的修饰的硫酸酯酶基序)。
在一个方面，本公开内容提供了包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，其中所述抗微生物肽通过以下方式与抗体分子偶合：(a)赖氨酸偶联(例如，使用表面暴露的赖氨酸作为抗体反应性基团)；(b)链间二硫键(例如，使用连接HC-HC或HC-LC的二硫键)；(c)非天然氨基酸(例如，被醛，叠氮化物或炔烃取代的氨基酸)；或(d)可生物降解的聚合物(例如赖氨酸或巯基)。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，抗体分子直接偶联抗微生物肽上的活化氨基酸。在一个实施方式中，抗体分子上的赖氨酸被转化为巯基反应性基团，并且具有巯基反应性基团的抗体分子与巯基化的抗微生物肽连接。在一个实施方式中，抗体分子上的赖氨酸被转化为游离巯基，并且具有游离巯基的抗体分子被连接至巯基反应性抗微生物肽。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过(b)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，抗体分子的链间二硫键被还原，并且具有还原的链间二硫键的抗体分子被连接至巯基反应性抗微生物肽。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过(c)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，使用点击化学将抗体分子与抗微生物肽连接(Kolb等，Angew Chem Int Ed Engl.2001；40(11):2004-2021；Evans Australian Journal of Chemistry.2007；60(6):384-395)。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过(d)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，将抗微生物肽连接到可生物降解的聚合物上，并将聚合物连接到抗体分子上。
在一个实施方式中，ADC在组合物(例如，药物组合物)中提供。
在一个实施方式中，ADC或药物组合物用于治疗或预防对象中的细菌感染(例如，与革兰氏阴性细菌，例如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)相关的感染)或相关病症。
因此，在某些方面，本公开内容提供抗体分子-药物偶联物(ADC)，例如，包含本文所述的抗体分子和抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，具有以下属性中的一种或多种(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27种或全部)：
a)以例如，解离常数(KD)小于约100nM，通常约10nM，更通常约10-0.01nM，约5-0.01nM，约3-0.05nM，约1-0.1nM，或更强，例如，小于约80，70，60，50，40，30，20，10，8，6，4，3，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05或0.01nM的高亲和力与不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，来自肠杆菌的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌或柠檬酸杆菌，例如泛耐药性肠杆菌科)，来自假单胞菌的一种或多种细菌，来自不动杆菌的一种或多种细菌，或其任何组合)结合，
b)以例如，解离常数(KD)小于约100nM，通常约10nM，更通常约10-0.01nM，约5-0.01nM，约3-0.05nM，约1-0.1nM，或更强，例如，小于约80，70，60，50，40，30，20，10，8，6，4，3，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05或0.01nM的高亲和力结合脂多糖(LPS)，
c)抑制不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种本文所述的革兰氏阴性细菌)，例如，(如经本文所述的方法)通过测量ADC的最小抑制浓度(MIC)测定，
d)与单独的抗微生物肽相比，以较低MIC，例如，低至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，100，200，500，1000倍的MIC(例如，以摩尔计，通过本文所述的方法测量)抑制不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种的本文所述的革兰氏阴性细菌)，
e)降低不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种本文所述的革兰氏阴性细菌)的活力，例如，(如经本文所述的方法)通过测量最小杀细菌浓度(MBC)测定，
f)与单独的抗微生物肽相比，以较低MBC，例如，低至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，100，200，500，1000倍的MBC(例如，以摩尔计，通过本文所述的方法测量)降低不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种的本文所述的革兰氏阴性细菌)的活力，
g)显示调理吞噬活性(OPA)，例如，通过OPA测定法测定，例如，如本文所述，
h)特异性结合LPS上的表位，例如，与表1或8中描述的抗体分子，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6识别的表位相同或相似的表位，
i)显示与表1或8中描述的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
j)显示与包含表1或8中描述的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
k)显示与包含表1或8中所述的重链可变区和/或轻链可变区，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的重链可变区和/或轻链可变区的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
l)显示与包含表1或8中所述的重链可变区和/或轻链可变区，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的重链可变区和/或轻链可变区的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
m)显示与包含表1或8中所述的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)轻链CDR，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(两个或三个)轻链CDR的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
n)显示与包含表1或8中所述的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)轻链CDR，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(两个或三个)轻链CDR的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
o)显示与包含表1或8中所示氨基酸序列的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
p)显示与包含表1或8中所示氨基酸序列的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
q)抑制，例如，竞争性抑制第二抗体分子与革兰氏阴性细菌，LPS或两者的结合，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
r)抑制，例如，竞争性抑制包含第二抗体分子的第二ADC与革兰氏阴性细菌，LPS或两者的结合，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
s)与第二抗体分子结合相同或重叠的表位，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
t)与包含第二抗体分子的第二ADC结合相同或重叠的表位，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
u)与第二抗体分子竞争结合革兰氏阴性细菌，LPS或两者，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
v)与包含第二ADC的第二ADC竞争结合革兰氏阴性细菌，LPS或两者，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
w)具有选自表1或8中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一种或多种生物学性质，
x)具有包含选自表1或8中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的ADC的一种或多种生物学性质，
y)具有包含选自表1或8中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的ADC的一种或多种药代动力学性质，
z)与来自第二属，种或亚种的革兰氏阴性菌(例如，大肠杆菌，克雷伯氏菌种或两者)的活力降低相比，以高选择性降低来自第一属，种或亚种(例如，假单胞菌)的革兰氏阴性细菌的活力，例如，以至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的杀灭％，例如，通过物本文所述的混合微生物杀灭试验确定，
aa)以高亲和力，例如，以EC50为约200pM或更低，例如，低于约150pM或更低，约120pM或更低，约100pM或更低，约80pM或更低，约60pM或更低，或约40pM或更低，例如约40pM至约120pM，约50pM至约110pM，约60pM至100pM，约40pM至80pM，或80pM至120pM的亲合力结合一种或多种铜绿假单胞菌菌株(例如，表7中描述的一种或多种铜绿假单胞菌菌株)，或
bb)体内抑制不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种本文所述的革兰氏阴性细菌，例如铜绿假单胞菌)，例如，细菌负荷减少至少2，5，10，20，50，100，200，500，1000或更多倍，例如，如使用动物模型，例如本文所述的鼠急性肺炎模型所确定。
因此，在某些方面，本公开内容提供抗体分子，例如本文所述的抗体分子，其具有以下性质中的一种或多种(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15种或全部)：
a)以例如，解离常数(KD)小于约100nM，通常约10nM，更通常约10-0.01nM，约5-0.01nM，约3-0.05nM，约1-0.1nM，或更强，例如，小于约80，70，60，50，40，30，20，10，8，6，4，3，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05或0.01nM的高亲和力与不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，来自肠杆菌的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌或柠檬酸杆菌，例如泛耐药性肠杆菌科)，来自假单胞菌的一种或多种细菌，来自不动杆菌的一种或多种细菌，或其任何组合)结合，
b)以例如，解离常数(KD)小于约100nM，通常约10nM，更通常约10-0.01nM，约5-0.01nM，约3-0.05nM，约1-0.1nM，或更强，例如，小于约80，70，60，50，40，30，20，10，8，6，4，3，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05或0.01nM的高亲和力结合脂多糖(LPS)，
c)显示调理吞噬活性(OPA)，例如，如本文所述通过OPA测定法测定，
d)特异性结合LPS上的表位，例如，与表1或8中描述的抗体分子识别的表位相同或相似的表位，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
e)显示与表1或8中描述的抗体分子(例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6)相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
f)显示与包含表1或8中描述的抗体分子(例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6)的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
g)显示与包含表1或8中所述的重链可变区和/或轻链可变区，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的重链可变区和/或轻链可变区的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
h)显示与包含表1或8中所述的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)轻链CDR，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(两个或三个)轻链CDR的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
i)显示与包含表1或8中所示氨基酸序列的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
j)抑制，例如，竞争性抑制第二抗体分子与革兰氏阴性细菌，LPS或两者的结合，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
k)与第二抗体分子结合相同或重叠的表位，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
l)与第二抗体分子竞争结合革兰氏阴性细菌，LPS或两者，其中第二抗体分子是选自表1或8的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
m)具有选自表1或8中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一种或多种生物学性质，
n)具有选自表1或8中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一种或多种生物学性质，
o)具有选自表1或8中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一种或多种药代动力学性质，或
p)以高亲和力，例如，以EC50为约200pM或更低，例如，低于约150pM或更低，约120pM或更低，约100pM或更低，约80pM或更低，约60pM或更低，或约40pM或更低，例如约40pM至约120pM，约50pM至约110pM，约60pM至100pM，约40pM至80pM，或80pM至120pM的亲合力结合一种或多种铜绿假单胞菌菌株(例如，表7中描述的一种或多种铜绿假单胞菌菌株)。
在一个方面，本公开内容的特征在于抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含a)结合脂多糖(LPS)的抗体分子和b)抗微生物肽。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合LPS的核心戊糖区。在一个实施方式中，核心戊糖区包含一个或多个(例如，两个)Kdo残基和一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合一个或多个(例如，两个)Kdo残基，或一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基，或其任何组合。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：109，145或146中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)；或HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)；和HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；或LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；和LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包括三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，
其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且
其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)；或HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；或LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)；和HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；和LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：106)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；或HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；和HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；或LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；和LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包括三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，
其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且
其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；或HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，和
轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；或LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；和HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：111，139，141，142或143中的任一个)；和LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与抗体mAb001或人源化mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103或115-118中的任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体mAb001或人源化mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103或115-118中的任一个)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与抗体mAb001或人源化mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104或119-137中的任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含抗体mAb001或人源化mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104或119-137中的任一个)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与抗体mAb001或人源化mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103或115-118中的任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与抗体mAb001或人源化mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104或119-137中的任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含抗体mAb001或人源化mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103或115-118中的任一个)，并且轻链可变区包含抗体mAb001或人源化mAb001的VL氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104或119-137中的任一个)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含或由两个重链可变区和两个轻链可变区组成。在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含Fab，F(ab’)2，Fv或单链Fv片段(scFv)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子还包含重链恒定区，轻链恒定区或两者。在一个实施方式中，ADC或抗体分子是IgG抗体分子，例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子不是IgM抗体分子。在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含来自κ或λ轻链的轻链恒定区。
在一个实施方式中，抗体分子是单克隆抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子是人源化抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子是分离的抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子是合成抗体分子。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合不同属，种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如革兰氏阴性细菌)。
在一个实施方式中，所述一种或多种革兰氏阴性细菌选自肠杆菌科的物种(例如，克雷伯氏菌属，肠杆菌属，志贺氏菌属，埃希氏菌属，沙门氏菌属，耶尔森氏菌属或柠檬酸杆菌属，例如泛耐药性肠杆菌科的物种)，假单胞菌属的物种，不动杆菌属的物种，或其任何组合。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合以下一种或多种：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniaesubsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合耐药性铜绿假单胞菌菌株(例如，对本文所述的一种或多种抗生素具有耐药性)。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合突变的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)菌株。在一个实施方式中，铜绿假单胞菌菌株在wapQ基因中具有突变。在一个实施方式中，铜绿假单胞菌菌株在galU基因中具有突变。
在一个实施方式中，一种或多种细菌是一种或多种抗生素耐药性细菌，例如一种或多种多重耐药性革兰氏阴性细菌。
在一个实施方式中，一种或多种抗生素耐药性细菌选自假单胞菌(例如铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如肺炎克雷伯氏菌或大肠杆菌)或不动杆菌(例如鲍氏不动杆菌)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合以下一种或多种：屎肠球菌(Enterococcus faecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子与表7中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10种或所有)铜绿假单胞菌菌株结合。在另一个实施方式中，ADC或抗体分子与表7中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6种或所有)多重耐药性铜绿假单胞菌菌株结合。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子以高亲和力，例如，小于约10nM的KD结合LPS，例如，通过ELISA方法测量。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合LPS的Koff慢于1×10-4、5×10-5、或1×10- 5s-1。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合LPS的Kon快于1×104、5×104、1×105或5×105M-1s-1。
在一个实施方式中，抗体分子具有调理吞噬活性，例如通过OPA测定法测定，例如，如本文所述。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合LPS中包含一个或多个(例如，两个)Kdo残基和/或一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基的表位。
在一个实施方式中，a)与脂多糖(LPS)结合的抗体分子与b)抗微生物肽偶合(例如，融合)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区与抗微生物肽偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，重链可变区在抗微生物肽的N末端。在另一个实施方式中，重链可变区在抗微生物肽的C末端。在一个实施方式中，VH与抗微生物肽融合以形成融合多肽，例如由开放阅读框编码。
在一个实施方式中，重链可变区间接偶合(例如，融合)至抗微生物肽，例如，其中重链可变区的C末端通过恒定区，接头或两者偶合(例如，融合)至抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区与抗微生物肽偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，轻链可变区在抗微生物肽的N末端。在另一个实施方式中，重链可变区在抗微生物肽的C末端。在一个实施方式中，VL与抗微生物肽融合以形成融合多肽，例如由开放阅读框编码。
在一个实施方式中，轻链可变区间接偶合(例如，融合)至抗微生物肽，例如，其中轻链可变区的C末端通过恒定区，接头或两者偶合(例如，融合)至抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，抗体分子包含分选酶受体序列，其包含分选酶识别序列。例如，分选酶识别序列可以具有LPXTG的氨基酸序列(例如，对于金黄色葡萄球菌分选酶A)(SEQ ID NO：160)或LPXTA(例如，对于酿脓链球菌分选酶A)(SEQ ID NO：161)，其中X可以是任何氨基酸残基。在一个实施方式中，分选酶识别序列是LPETG(SEQ ID NO：162)。分选酶受体序列可以包含除分选酶识别序列之外的其他序列。在一个实施方式中，分选酶受体序列还包含接头序列，例如甘氨酸-丝氨酸肽接头序列的串联重复序列(例如，(GS)15(SEQ IDNO：157))。在一个实施方式中，抗体分子的重链包含分选酶受体序列，例如在C末端。在一个实施方式中，抗体分子的轻链包含分选酶受体序列，例如在C末端。
在一个实施方式中，抗体分子的重链包含第一分选酶受体序列，抗体分子的轻链包含第二分选酶受体序列。在一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第一分选酶识别序列，包含(GS)6LPETGGG(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列。在另一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第二分选酶受体序列，包含P(G4S)2LPETGGSG(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列。
在一个实施方式中，ADC包含接头序列，分选酶识别序列或两者，如图37中所述。在一个实施方式中，ADC包含两条重链和两条轻链。在一个实施方式中，ADC的每条重链包含接头序列，分选酶识别序列或两者，如图37中所述。在一个实施方式中，ADC的每条轻链包含接头序列，分选酶识别序列或两者，如图37中所述。
在一个实施方式中，ADC包含两个或更多个(例如，三个，四个，五个，六个，七个，八个或更多个)抗微生物肽。在一个实施方式中，ADC包含四个抗微生物肽。在一个实施方式中，所述抗微生物肽中至少两个是相同或基本相同的。在一个实施方式中，所述抗微生物肽中至少两个是不同的。例如，多个抗微生物肽可以与抗体分子(例如，重链(或其部分)，轻链(或其部分)或两者)偶合(例如，融合)。
在一个实施方式中，ADC包含两个或更多个(例如，三个或四个)相同或基本相同的抗微生物肽，各自例如间接地，例如通过恒定区，接头或两者与重链可变区偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，ADC包含两个或更多个(例如，三个或四个)相同或基本相同的抗微生物肽，各自例如间接地，例如通过恒定区，接头或两者与轻链可变区偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，ADC包含两个相同或基本相同的抗微生物肽，各自例如间接地，例如通过恒定区，接头或两者与重链可变区偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，ADC包含两个相同或基本相同的抗微生物肽，各自例如间接地，例如通过恒定区，接头或两者与轻链可变区偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，ADC包含至少四个相同或基本相同的抗微生物肽。在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含两个重链可变区和两个轻链可变区，并且重链和轻链可变区中的每一个与至少一个抗微生物肽例如间接地，例如，通过恒定区，接头或两者偶合(例如，融合)。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过酶促偶联(例如，分选酶反应)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，抗微生物肽通过化学偶联与抗体分子偶合。
在一个实施方式中，ADC比单独的抗微生物肽或抗体分子更有效地抑制，例如，抑制革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)的生长，毒力或感染性，例如，具有比单独的抗微生物肽的MIC低例如，至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，或100倍的最小抑制浓度(MIC)。
在一个实施方式中，ADC比单独的抗微生物肽或抗体分子更有效地降低(例如，杀灭)革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)的活力，例如，具有比单独的抗微生物肽的MIC低例如，至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，或100倍的最小杀细菌浓度(MBC)。
在一个实施方式中，ADC具有调理吞噬活性(例如，当与嗜中性粒细胞的Fc受体(FcR)结合时被吞噬)，例如，如通过OPA测定所确定的，例如，如本文所述。
在一个实施方式中，ADC不抑制，例如，不抑制革兰氏阳性细菌(例如，本文所述的革兰氏阳性细菌)的生长，毒力或感染性，例如具有比对革兰氏阳性细菌(例如，革兰氏阳性细菌)的最小抑制浓度(MIC)低，例如低至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的对革兰氏阴性细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的MIC。
在一个实施方式中，ADC不降低(例如，杀灭)革兰氏阳性细菌(例如，本文所述的革兰氏阳性细菌)的活力，例如具有比对革兰氏阳性细菌(例如，革兰氏阳性细菌)的最小杀细菌浓度(MBC)低，例如低至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的对革兰氏阴性细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的MBC。在一个实施方式中，革兰氏阳性细菌是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
在一个实施方式中，ADC不改变或不显著改变微生物组(例如，微生物组保留)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由α-螺旋抗微生物肽组成，例如，包含转角的肽，其中残基i和i+4在同一平面上。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与本文所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-256中的任一个相差不超过1，2，3，4或5个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由本文所述的氨基酸序列组成，例如SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-256中的任一个。在一个实施方式中，抗微生物肽包含羧酰胺基团(例如，C-末端羧酰胺官能团)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含1，2，3，4，5，6，7，8，9，10个或更多个D-氨基酸。在另一个实施方式中，抗微生物肽的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是D-氨基酸。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含第一半胱氨酸残基和第二半胱氨酸残基，并且其中第一半胱氨酸残基与第二半胱氨酸残基交联。
在一个实施方式中，抗微生物肽是广谱抗微生物肽，例如，具有针对以下的2种，3种或全部的抗微生物活性：肠杆菌的至少一个种(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌，耶尔森氏菌或柠檬酸杆菌，例如泛耐药性肠杆菌的一个或多个种)，假单胞菌的至少一个种，或不动杆菌的至少一个种。
在一个实施方式中，抗微生物肽是广谱抗微生物肽，例如，具有针对以下的2种，3种，4种，5种，6种或全部的抗微生物活性：一种克雷伯氏菌的至少一个种，肠杆菌的至少一个种，志贺氏菌的至少一个种，埃希氏菌的至少一个种，沙门氏菌的至少一个种，耶尔森氏菌的至少一个种，或柠檬酸杆菌的至少一个种。
在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 25922)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)(例如，铜绿假单胞菌ATCC27853)或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小抑制浓度(MIC)。
在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 25922)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)(铜绿假单胞菌ATCC27853)或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小杀细菌浓度(MBC)。
在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有大于4:1(例如，大于8:1，16:1，24:1或32:1)的部分溶解浓度(PLC)与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，PLC是导致50％红细胞裂解的浓度(例如，最小浓度)。
在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有大于4:1(例如，大于8:1，16:1，24:1或32:1)的部分裂解浓度(MLC)与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，MLC是导致100％红细胞裂解的浓度(例如，最小浓度)。
在一个方面，本公开特征之一在于一种组合物，例如药物组合物，其包含本文所述的ADC和药学上可接受的运载体。
在一个方面，本公开内容的特征在于一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括以有效治疗或预防本文所述的细菌感染或相关疾病的量向有需要的对象给予本文所述的ADC或本文所述的药物组合物。
在一个实施方式中，细菌感染是革兰氏阴性细菌感染。在一个实施方式中，所述病症由革兰氏阴性细菌感染引起或与其相关。
在一个实施方式中，ADC以0.1-100mg/kg，例如0.1-50mg/kg或1-10mg/kg，例如1-5或5-10mg/kg的剂量给予。在一个实施方式中，ADC通过静脉内，皮下或鼻内或通过吸入给予。
在一个实施方式中，在与细菌感染或相关病症相关的症状发作之前给予ADC。在一个实施方式中，在与细菌感染或相关病症相关的症状发作时或之后给予ADC。
在一个实施方式中，对象患有以下的一种或多种：肺炎(例如，社区获得性肺炎，呼吸机相关细菌性肺炎(VABP)和医院获得性细菌性肺炎(HABP))，尿路感染(UTI)，败血症，脑膜炎，腹泻(如旅行者腹泻)，软组织感染，皮肤感染，菌血症，呼吸系统感染(如下呼吸道感染)，心内膜炎，腹腔感染，化脓性关节炎，骨髓炎，中枢神经系统感染，眼科感染，胆囊炎，胆管炎，脑膜炎(如新生儿脑膜炎)，伤寒，食物中毒，肠胃炎，肠热，志贺菌病，血流感染，腹腔内败血症，脑脓肿，脑膜炎，败血症(如，新生儿败血症)，关节感染，骨感染，胃肠道感染或伤口感染。在一个实施方式中，对象具有弱化的免疫系统。在一个实施方式中，对象患有囊性纤维化。在一个实施方式中，对象遭受灼伤。
在一个实施方式中，细菌感染是医院感染或医院获得性感染。在一个实施方式中，与细菌感染有关的病症与医院感染或医院获得性感染有关。
在一个实施方式中，对象是人或动物。在一个实施方式中，对象是免疫受损的患者，例如，具有HIV感染或AIDS，癌症，实体器官移植，干细胞移植，镰状细胞病或无脾，先天性免疫缺陷，慢性炎性病症，耳蜗植入，营养不良或脑脊液渗漏的对象。在一个实施方式中，对象是健康专业人员。
在一个实施方式中，对象为18岁或更小，例如15岁或更小，12岁或更小，9岁或更小，6岁或更小，或3岁或更小。在一个实施方式中，对象为至少60岁，例如，至少65岁，至少70岁，至少75岁，或至少80岁。
在一个实施方式中，该方法还包括向对象给予第二抗微生物剂或疗法，例如抗生素或噬菌体疗法。
在一个实施方式中，抗生素选自氨基糖苷(例如阿米卡星，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，奈替米星，妥布霉素，巴龙霉素，链霉素或壮观霉素)，安莎霉素(例如，格尔德霉素，除莠霉素或利福昔明)，碳头孢烯(例如劳拉卡头孢菌素)，碳青霉烯(例如厄他培南，多利培南，亚胺培南/西司他丁，或美罗培南)，头孢菌素(头孢羟氨苄，头孢唑啉，头孢噻吩，头孢噻吩，头孢氨苄，头孢克洛，头孢噻吩，头孢西丁，头孢丙烯，头孢呋辛，头孢克肟，头孢地尼，头孢噻吩，头孢哌酮(例如，与舒巴坦联合使用)，头孢噻肟，头孢泊肟，头孢他啶，头孢噻吩，头孢唑肟，头孢曲松，头孢吡肟，头孢噻肟，或头孢噻肟)，糖肽(例如，替考拉宁，万古霉素，特拉万星，达巴万星，或奥利万星)，林可酰胺(如克林霉素或林可霉素)，脂肽(如达托霉素)，大环内酯类(如阿奇霉素，克拉霉素，地红霉素，红霉素，罗红霉素，竹桃霉素，泰利霉素或螺旋霉素)，单菌霉素(如氨曲南)，硝基呋喃(如呋喃唑酮或呋喃妥因)，噁唑烷酮(如利奈唑胺，泼斯唑来，雷得唑来，托拉唑来)，青霉素(如阿莫西林，氨苄青霉素，阿洛西林，羧苄青霉素，氯唑西林，双氯西林，氟氯西林，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，青霉素g，青霉素v，哌拉西林，青霉素g，替莫西林或替卡西林)，青霉素组合(如阿莫西林/克拉维酸，氨苄青霉素/舒巴坦，哌拉西林/他唑巴坦，或替卡西林/克拉维酸盐)，多肽(例如杆菌肽，粘菌素或多粘菌素b)，喹诺酮/氟喹诺酮(例如环丙沙星，依诺沙星，加替沙星，吉米沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，莫西沙星，萘啶酸，诺氟沙星，氧氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，司帕沙星或替马沙星)，磺胺类(如磺胺米隆，磺胺醋酰胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶银，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺，柳氮磺胺吡啶，磺胺异噁唑，甲氧苄啶-磺胺甲基异噁唑(复方磺胺甲噁唑)，或偶氮磺胺)，四环素(如地美环素，强力霉素，米诺环素，土霉素或四环素)，抗分枝杆菌的药物(如氯法齐明，氨苯砜，卷曲霉素，环丝氨酸，乙胺丁醇，乙硫氨酰胺，异烟肼，吡嗪酰胺，利福平，利福布汀，利福喷汀或链霉素)，或其他(如阿司匹林，氯霉素，磷霉素，夫西地酸，甲硝唑，莫匹罗星，安替霉素，奎奴普丁/达福普汀，甲砜霉素，替加环素，替硝唑，或甲氧苄啶)。
在一个实施方式中，抗生素选自左氧氟沙星，环丙沙星，庆大霉素，头孢曲松，氧氟沙星，阿米卡星，妥布霉素，氨曲南或亚胺培南/西司他丁。在另一个实施方式中，抗生素是粘菌素或美罗培南。
在一个实施方式中，第二抗微生物剂或疗法在给予ADC之前给予，与给予ADC同时给予，或在给予ADC之后给予。
当组合给予时，ADC，其他药剂(例如，第二或第三药剂)或全部可以以比单独使用，例如，作为单一疗法的每种药剂的量或剂量更高，更低或相同的量或剂量给予。在一个实施方式中，ADC，其他药剂(例如，第二或第三药剂)或全部的给予量或剂量比单独使用的每种药剂，例如作为单一疗法的量或剂量低(例如，至少20％，至少30％，至少40％，或至少50％)。在另一个实施方式中，导致期望效果(例如，抑制细菌生长或治疗细菌感染)的ADC，其他药剂(例如，第二或第三药剂)或全部的量或剂量较低(例如，低至少20％，至少30％，至少40％，或至少50％)。
在一个实施方式中，ADC和第二抗微生物剂或疗法的给予产生协同效应，例如，抑制(例如杀灭)本文所述的细菌，例如铜绿假单胞菌。例如，当ADC以其最小抑制浓度(MIC)的约50％使用时，第二抗微生物剂的MIC降低至少2，4，8，12，16，20，24，28，32，36，40，50，60，70，80，90或100倍。
在一个方面，本公开内容的特征在于抑制或减少细菌感染(例如，革兰氏阴性细菌感染)的方法，包括使细胞(例如，在样品中)或有此需要的对象接触本文所述的ADC，或本文所述的药物组合物，其量可有效抑制或减少细菌感染。
在一个实施方式中，ADC在体外，离体或体内与细胞或对象接触。
一方面，本发明的特征在于本文所述的ADC，用于治疗或预防本文所述的细菌感染(例如，革兰氏阴性细菌感染)或相关病症。
另一方面，本发明的特征在于本文所述的ADC在制备用于治疗或预防本文所述的细菌感染(例如，革兰氏阴性细菌感染)或相关病症的药物中的用途。
在一个方面，本公开内容的特征在于试剂盒/药盒，其包含本文所述的ADC或本文所述的药物组合物。
在一个实施方式中，试剂盒/药盒还包含使用ADC或药物组合物的说明书。
在一个方面，本公开内容的特征在于容器，其包含本文所述的ADC或本文所述的药物组合物。
在一个方面，本公开内容的特征在于编码本文所述的ADC，例如如本文所述，与抗微生物肽偶合(例如，融合)的本文所述的抗体分子的VH，VL或两者，或重链，轻链或两者的核酸分子(例如，分离的核酸分子)。
在一个实施方式中，核酸分子包含表2中所述的核苷酸序列，例如SEQ ID NO：81-93或113-114中的任一个。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种载体，其包含本文所述的核酸分子。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种细胞(例如分离的细胞)，其包含本文所述的核酸分子或本文所述的载体。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种产生本文所述的ADC的方法，所述方法包括在允许产生ADC的条件下培养本文所述的细胞，从而产生本文所述的ADC。
在另一个方面，本公开内容的特征在于一种产生本文所述的ADC的方法，该方法包括使抗体分子(例如，本文所述的抗体分子)与肽(例如，包含本文所述的抗微生物肽，和任选地，分选酶供体序列的肽)，在分选酶存在下，在允许分选酶介导的反应发生的条件下接触，从而产生ADC。
在一个实施方式中，抗体分子包含分选酶受体序列，例如本文所述的分选酶受体序列。在一个实施方式中，抗体分子的重链包含分选酶受体序列，例如在C末端。在一个实施方式中，抗体分子的轻链包含分选酶受体序列，例如在C末端。在一个实施方式中，分选酶受体序列还包含接头序列，例如甘氨酸-丝氨酸肽接头序列的串联重复序列。
在一个实施方式中，抗体分子的重链包含第一分选酶受体序列，抗体分子的轻链包含第二分选酶受体序列。在一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第一分选酶识别序列，包含(GS)6LPETGGG(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列。在另一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第二分选酶受体序列，包含P(G4S)2LPETGGSG(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列。
在一个实施方式中，肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与本文所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-256中的任一个相差不超过1，2，3，4或5个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由本文所述的氨基酸序列组成，例如SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-256中的任一个。在一个实施方式中，抗微生物肽包含羧酰胺基团(例如，C-末端羧酰胺官能团)。
在一个实施方式中，使1.5mg/mL抗体分子与20mol当量的分选酶供体肽/分选酶受体序列和1mol当量的分选酶/75mol当量分选酶受体序列接触。在一个实施方式中，接触在150mM NaCl，50mM Tris(pH 7.5)和10mM CaCl2存在下进行。在一个实施方式中，接触在18℃至37℃，例如25℃下进行，例如，进行2至48小时，例如18至24小时，例如20小时。在一个实施方式中，分选酶是分选酶A戊突变体(pentamutant)。
在一个实施方式中，进一步包括检测分选酶介导的反应，例如通过Q-TOF质谱法。在一个实施方式中，进一步包括纯化ADC，例如通过凝胶电泳进行。
在一个方面，本发明的特征在于反应混合物，其包含：
(i)分选酶，例如，本文所述的分选酶，和
(ii)本文所述的抗体分子，本文所述的抗微生物肽或两者。
一方面，本发明的特征在于本文所述的抗体分子。
在一个方面，本公开内容的特征在于编码本文所述抗体分子，例如VH，VL或两者；本文描述的抗体分子或重链，轻链或两者的核酸分子(例如，分离的核酸分子)。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种载体，其包含编码本文所述抗体分子的核酸分子。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种细胞(例如分离的细胞)，其包含编码本文所述的抗体分子的核酸分子或本文所述的载体。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种产生本文所述的抗体分子的方法，所述方法包括在允许产生抗体分子的条件下培养本文所述的细胞，从而产生本文所述的抗体分子。
一方面，本发明的特征在于本文所述的抗微生物肽(例如，分离的或合成的抗微生物肽)。
一方面，本发明的特征在于编码本文所述抗微生物肽的核酸分子(例如，分离的核酸分子)。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种载体，其包含编码本文所述抗微生物肽的核酸分子。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种细胞(例如分离的细胞)，其包含编码本文所述的抗微生物肽的核酸分子或本文所述的载体。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种产生本文所述的抗微生物肽的方法，所述方法包括在允许产生抗微生物肽的条件下培养本文所述的细胞，从而产生本文所述的抗微生物肽。
在一个方面，本公开内容的特征在于一种抗体分子，其与本文所述的抗体分子结合相同的表位或基本上相同的表位。
在一个方面，本发明的特征在于ADC，其包含：a)抗体分子，其与本文所述的抗体分子结合相同表位或基本上相同表位；和b)抗微生物肽，例如本文所述的抗微生物肽。
一方面，本发明的特征在于与本文所述抗体分子竞争结合的抗体分子。
在一个方面，本发明的特征在于ADC，其包含：a)抗体分子，其与本文所述的抗体分子竞争结合；和b)抗微生物肽，例如本文所述的抗微生物肽。
本公开包涵任何一个或多个前述方面和/或实施方式的所有组合，以及与详细描述和实施例中所提供的任何一个或多个实施方式的组合。
通过说明书和附图以及权利要求书不难了解本文组合物和方法的其它特征、目的和优点。
在此提供附图和表格。
附图说明
图1描绘了几种示例性革兰氏阴性细菌的核心戊糖的组成和结构。
图2描绘了通过ELISA测定的抗体3E7与大肠杆菌(Eco)和肺炎克雷伯氏菌(Kpn)的结合。
图3描绘了通过ELISA测定的抗体A001-25与大肠杆菌(Eco)和肺炎克雷伯氏菌(Kpn)的结合。
图4描绘了交联示例性α-螺旋肽(SEQ ID NO：158)的过程。
图5描绘了示例性MIC测定的读数。
图6描绘了使用QTof的分选酶-连接产物的质谱表征。在分析之前，用DTT还原所有样品。上图：52,201处的分选酶标记的重链对应于基于肽序列的理论分子量；下图：分选酶连接的反应产物在55002处显示强信号，对应于连接的构建体的理论分子量。
图7描绘了抗体2C7与代表性大肠杆菌(Eco)，肺炎克雷伯氏菌(Kpn)和鼠伤寒沙门氏菌(Sty)菌株的结合。
图8描绘了抗体3D6与代表性大肠杆菌(Eco)，肺炎克雷伯氏菌(Kpn)和鼠伤寒沙门氏菌(Sty)菌株的结合。
图9描绘了抗体3E7与代表性大肠杆菌(Eco)，肺炎克雷伯氏菌(Kpn)和鼠伤寒沙门氏菌(Sty)菌株的结合。
图10描绘了抗体3G1与代表性大肠杆菌(Eco)，肺炎克雷伯氏菌(Kpn)和鼠伤寒沙门氏菌(Sty)菌株的结合。
图11A描绘了在使用8μg/ml的示例性ADC的混合微生物杀灭测定中假单胞菌，大肠杆菌和克雷伯氏菌种的杀灭％。
图11B描绘了在使用125μg/ml的单独示例性抗体的混合微生物杀灭测定中假单胞菌，大肠杆菌和克雷伯氏菌种的杀灭％。
图11C描绘了在使用0.3μg/ml的单独示例性肽的混合微生物杀灭测定中假单胞菌，大肠杆菌和克雷伯氏菌种的杀灭％。
图11D描绘了在使用125μg/ml的抗体和0.3μg/ml的肽组合的混合微生物杀灭测定中假单胞菌，大肠杆菌和克雷伯氏菌种的杀灭％。
图12描绘了示例性ADC与铜绿假单胞菌菌株的结合。
图13描绘了示例性ADC与细菌表面的结合。
图14描绘了鼠急性肺炎模型中肺中细菌负荷的减少。
图15A描绘了没有装订(stapling)的示例性AMP的血清稳定性。图15A公开了SEQID NO：101。
图15B描绘了有装订的示例性AMP的血清稳定性。图15B公开了SEQ ID NO：159。
图15C描绘了未优化的有效载荷和优化的有效载荷(payload)之间的血清稳定性的差异。
图16描绘了抗体mAb001对通过基于细胞的比色测定法测量的内毒素(假单胞菌LPS)信号的影响。
图17描绘了示例性ADC针对假单胞菌的选择性杀灭活性。
图18A描绘了在鼠急性肺炎模型(共同给予研究组)中通过示例性ADC减少肺中的细菌负荷。
图18B描绘了在鼠急性肺炎模型(鼻内研究组)中通过示例性ADC减少肺中的细菌负荷。
图19描绘了示例性ADC的生物利用度。
图20描绘了示例性含L-氨基酸的抗微生物肽在人血清中的稳定性。
图21描绘了示例性含D-氨基酸的抗微生物肽在人血清中的稳定性。
图22描绘了铜绿假单胞菌的LPS。核心聚糖在所有血清型中都是高度保守的。带圆圈的单元是示例性抗LPS抗体分子(mAb001)的靶标。
图23描绘了用于结合实验的合成聚糖。
图24描绘了抗体-聚糖结合的Octet分析的结果。
图25描绘了对结合亲和力的定量。
图26描绘了用于表位鉴定的计算机，化学和分析方法。
图27描绘了示例性偶联方法和相关化学。
图28描绘了示例性抗LPS抗体分子与临床分离株的结合(倍数变化)。
图29描绘了示例性抗体分子(mAb001)的表位。至少，表位的中心包括庚糖I。抗体也可以与相邻的糖单元接触。
图30描绘了示例性抗体分子(mAb001)中磷酸化聚糖(Hep2,4,6-PO4)和三个精氨酸残基(R100，R101和R103)之间的相互作用。
图31A描绘了示例性抗体分子(mAb001)与野生型(PA01和Pae 27853)和突变体(Pae galU和Pae wapQ)铜绿假单胞菌菌株的结合。
图31B描绘了示例性ADC(mAb001-P297)与野生型(PA01和Pae 27853)和突变体(Pae galU和Pae wapQ)铜绿假单胞菌菌株的结合。
图32A描绘了示例性抗体分子(mAb001)与FcγRIIa的结合，如Octet测定所示。
图32B描绘了示例性抗体分子(mAb001)与C1q的结合，如ELISA所示。
图33描绘了(L)-P297和(D)-P297的圆二色性(CD)结果。
图34A描绘了在不同浓度的示例性AMP((D)-P297)存在下，粘菌素的最小抑制浓度。
图34B描绘了在不同浓度的示例性AMP((D)-P297)存在下，美罗培南的最小抑制浓度。
图35A描绘了钙黄绿素脂质体渗漏测定所示的示例性AMP((D)-P297)的膜破坏活性。
图35B描绘了示例性AMP((D)-P297和(L)-P297)，抗体分子(mAb001)和ADC(mAb001-(D)-P297)之间的膜破坏活性的比较，如钙黄绿素脂质体渗漏测定所示。
图36描绘了示例性(D)-P297类似物。附图按出现的顺序分别公开了SEQ ID NO156和246-256。
图37描绘了肽载荷在抗体分子上的分选酶连接以产生ADC的示例性示意图。附图按出现的顺序分别公开了SEQ ID NO：257-261。“(GS)15”公开为SEQ ID NO：157。
表格简要说明
表1描述了示例性抗体分子的重链可变区(VH)，轻链可变区(VL)，重链CDR(HCDR)和轻链CDR(LCDR)的氨基酸序列。显示了根据Chothia系统和Kabat系统定义的重链和轻链CDR。
表2描述了示例性抗体分子的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的核苷酸序列。
表3描述了示例性抗微生物肽的氨基酸序列。
表4描述了示例性MIC对照化合物值。
表5描述了示例性ADC，抗体分子和肽的靶向体外活性。
表6A描述了示例性抗微生物肽的抑制和溶血活性。
表6B描述了示例性AMP的结构-活性关系。
表6C描绘了两种示例性肽之间的比较。
表7描述了示例性ADC与铜绿假单胞菌的结合亲合力(EC50)。
表8描述了示例性人源化抗体分子的重链可变区(VH)，轻链可变区(VL)，重链CDR(HCDR)和轻链CDR(LCDR)的氨基酸序列。显示了根据Chothia系统和Kabat系统定义的重链和轻链CDR。
表9描述了示例性ADC对铜绿假单胞菌菌株的微生物杀灭活性。
表10描述了示例性ADC对MDR菌株的微生物杀灭活性。
表11描绘了示例性AMP的耐药率测定的概述。
表12A描述了示例性抗LPS抗体分子(mAb001)与人种系的比较。
表12B描绘了示例性抗LPS抗体分子(mAb001)的可显影特征。
表13描述了D-氨基酸和L-氨基酸对AMP活性的影响。
表14描述了(D)-P297在血清中的微生物杀灭活性。
具体实施方式
本文公开了抗体分子和抗体分子-药物偶联物(ADC)，其以高亲和力和特异性结合细菌，例如革兰氏阴性细菌，例如革兰氏阴性细菌外膜上的脂多糖。本文公开的ADC可包括抗体分子和抗微生物肽(AMP)。有利地，与单独的抗微生物肽相比，本文描述的几种ADC具有改善的抑制或降低不同属，种和/或亚种的一种或多种细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的活力的能力。还提供了编码抗体分子，ADC和抗微生物肽的核酸分子，表达载体，宿主细胞，组合物(例如药物组合物)，试剂盒/药盒，和制备抗体分子，ADC和抗微生物肽的方法。本文公开的抗体分子，ADC，抗微生物肽和药物组合物可以(单独或与其他药剂或治疗方式组合)用于治疗，预防和/或诊断例如由革兰氏阴性细菌引起的或与之相关的细菌感染或相关疾病和病症。
在一个实施方式中，本文描述的ADC可以具有一种或多种以下性质：(i)能够治疗或预防有未满足的医疗需求的患者中的细菌性疾病；(ii)能够处理引起细菌疾病的细菌属和种；通过新作用机制起作用；(iii)具有减少或中和耐药性机制的增加的抑制剂；或(iv)具有减少或中和耐药性机制的分子结构的改变。
在一个实施方式中，ADC具有调理吞噬活性(例如，通过抗体分子)，杀细菌活性(例如，通过有效载荷，例如抗微生物肽)或两者。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，在ADC中使用抗微生物肽可以实现以下一个或多个目标：具有低耐药性，协同效力和较低自发耐药性概率的新靶标，改善定向治疗或快速杀细菌活性。在一个实施方式中，ADC靶向核心LPS区域，例如，以降低由潜在的靶位点改变引起的耐药性的可能性。在另一个实施方式中，肽装订用于增加活性和/或稳定性，例如，以减少或防止潜在的抗生素失活。
定义
本文使用冠词“一个”和“一种”表示一个/种或一个/种以上的(即至少一个/种)该冠词语法上的宾语。
除非上下文明确作出不同指示，本文所用术语“或/或者”是指“和/或”，并可与其互换使用。
“约”和“近似”应通常表示在考虑测量的性质或精度的情况下测得量的可接受的误差度。示例性误差度在给定值或数值范围的20％以内，通常在10％以内，更通常在5％以内。
本文所述的组合物和方法包括具有指定序列的多肽和核酸，或具有与指定序列基本相同或与其相似(例如与指定序列至少85％、90％、95％或更高相同性)的序列的多肽和核酸。
在描述氨基酸序列的情况下，用于本文的术语“基本相同”是指第一氨基酸含有足够或最少数量的如下氨基酸残基：i)与第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基相同，或ii)第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基的保守取代，从而第一和第二氨基酸序列可具有共有的结构域和/或共同的功能活性。例如，包含与参比序列(例如本文所提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的共有结构域的氨基酸序列。
在描述核苷酸序列的情况下，本文所用术语“基本相同”是指第一核酸序列包含足够或最少数量的与第二核酸序列中的比对核苷酸相同的核苷酸，从而第一和第二核苷酸序列编码具有相同功能活性的多肽、或编码相同结构多肽结构域或相同功能性多肽活性。例如，包含与参比序列(例如本文所提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的核苷酸序列。
术语“功能性变体”是指与天然序列具有基本相同氨基酸序列或由基本相同的核苷酸序列编码、且能够具有天然序列一种或多种活性的多肽。
序列间的同源性或序列相同性(这些术语在本文中可互换使用)的计算如下进行。
为了确定两条氨基酸序列或两条核酸序列的百分比相同性，可以为了最佳比较目的而对序列进行比对(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列的之一或两条中引入缺口以达到最佳对齐，并且出于比较目的可以不考虑非同源序列)。在一个典型的实施方式中，用于比较目的比对的参比序列长度为该参比序列长度的至少30％，例如至少40％、50％、60％，例如至少70％、80％、90％、100％。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中某位置上占据的氨基酸残基或核苷酸与第二序列中相应位置上的相同时，则这些分子在该位置是相同的。
考虑到用于两个序列的最佳比对而需要引入的缺口数和每个缺口的长度，两条序列之间的百分比相同性与序列共有相同位置的数目相关。
可采用数学算法进行两条序列间的序列比较以及确定其百分比相同性。在一些实施方式中，两条氨基酸序列之间的百分比相同性可以使用Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))算法确定，该算法已经结合到GCG软件包中的GAP程序中(可从http://www.gcg.com获得)，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，缺口权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6。在某些实施方式中，两条核苷酸序列之间的相同性百分比使用GCG软件包中的GAP程序(可从http://www.gcg.com获得)，采用NWSgapdna.CMP矩阵和缺口权重40、50、60、70或80，长度权重1、2、3、4、5或6进行计算。一组合适的参数(以及除非另有说明而应采用的参数组)为Blossum 62评分矩阵，其缺口罚分为12，缺口延伸罚分为4，译码缺口罚分为5。
两条氨基酸或核苷酸序列之间的相同性百分比也可以使用E.Meyers和W.Miller(CABIOS,4:11-17(1989))的算法确定，该算法已被并入ALIGN程序(版本2.0)，使用PAM120权重残基表，缺口长度罚分为12，缺口罚分为4。
本文公开的核酸和蛋白质序列还可以用作“查询序列”来对公共数据库进行搜索，以例如鉴定其他家族组成部分或相关序列。这类搜索可使用Altschul等，1990，J.Mol.Biol.，215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版本)来运行。可以使用NBLAST程序进行BLAST核苷酸搜索，评分＝100，字长＝12，以获得与本文所述核酸同源的核苷酸序列。可利用XBLAST程序进行BLAST蛋白质搜索，评分＝50，字长＝3，以获得与本文所述蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得出于比较目的的缺口比对结果，可如Altschul等，1997，Nucleic Acids Res.，25:3389-3402所述利用缺口BLAST。利用BLAST和缺口BLAST程序时，可使用各程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov。
如本文所用，术语“在低严谨性、中等严谨性、高严谨性或极高严谨性条件下杂交”是指杂交和洗涤的条件。进行杂交反应的指导可见于Current Protocols in MolecularBiology(《新编分子生物学实验指南》，John Wiley&Sons公司,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6)，纳入本文作为参考。该参考文献中描述了水性和非水性方法，可采用这两种方法中的任一种。本文涉及的特定杂交条件如下：1)低严谨性杂交条件为在约45℃的6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中杂交，然后在0.2×SSC、0.1％SDS中于至少50℃下洗涤2次(对于低严谨性条件，洗涤温度可提高至55℃)；2)中等严谨性杂交条件为在约45℃的6×SSC中杂交，然后在0.2×SSC、0.1％SDS中于60℃洗涤一次或多次；3)高严谨性杂交条件为在约45℃的6×SSC中杂交，然后在0.2×SSC、0.1％SDS中于65℃洗涤一次或多次；以及优选地，4)极高严谨性杂交条件为在65℃的0.5M磷酸钠、7％SDS中杂交，然后在0.2×SSC、1％SDS中于65℃洗涤一次或多次。极高严谨性条件4)是合适的条件，且为应采用的条件(除非另有说明)。
应理解，本文所述分子可具有额外的保守或非必需的氨基酸取代，其不对分子功能产生实质性影响。
术语“氨基酸”涵盖了包含氨基官能团和酸官能团且能够被包含于天然存在氨基酸形成的聚合物的所有分子，不论其为天然或合成分子。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物及同类物；具有变体侧链的氨基酸类似物；以及前述中任意的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括D-和L-镜像异构体和模拟肽。
“保守性氨基酸取代”是其中一个氨基酸残基被具有相似侧链的另一个氨基酸残基替代的情况。本领域已定义具有带相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括：具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳族侧链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(若为单链)在本文中可互换使用，指任何长度的氨基酸的聚合物。所述聚合物可以是线形或分支聚合物，可以包含经修饰的氨基酸，可间插有非氨基酸。该术语也包括修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作，如与标记组分偶联。多肽可从天然来源分离，可采用重组技术由原核或真核宿主产生，或者可为合成方法的产品。
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”和“多核苷酸”在本文中可互换使用。它们是指任何长度的核苷酸聚合形式，不论是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或它们的类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果是单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包括修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可间插有非核苷酸组分。多核苷酸聚合后可以被进一步修饰，如通过与标记组分偶联。核酸可为重组多核苷酸、或基因组多核苷酸、cDNA、半合成或合成来源，即非天然存在或以非天然排列方式与另一多核苷酸相联。
本文所用术语“分离的”指，某一物质是从其原生或天然环境(例如，若其是天然产生的，则从天然环境)脱离。例如，活体动物中存在的天然多核苷酸或多肽不是分离的，但与天然系统中的某些或所有共存物质分离的该多核苷酸或多肽则是分离的。此类多核苷酸可为载体的部分和/或此类多核苷酸或多肽可为组合物的部分，但其仍为分离的，这是因为该载体或组合物不是该多核苷酸或多肽天然存在环境的一部分。
如本文所用，术语“治疗”例如本文所述的“治疗”细菌感染或相关病症是指实施方式之一中，与未被给予抗体分子，ADC或抗微生物肽相比，被给予该抗体分子，ADC或抗微生物肽的患有细菌感染或相关病症(例如本文所述的病症)和/或经受细菌感染或相关病症(例如本文所述的病症)症状的对象(例如人)其症状严重度较轻和/或恢复更快。在一个实施方式中，当治疗感染或相关病症时，检测对象中细菌的测定将在有效治疗感染或病症后检测到更少的细菌。例如，使用抗体分子或ADC(例如本文所述的抗体分子或ADC)的诊断测定将在给予抗体分子，ADC或抗微生物肽以有效治疗感染或疾病后在对象的生物样品中检测到较少或没有细菌。其他测定，例如PCR(例如，qPCR)也可用于监测患者的治疗，以检测对象中细菌感染或病症的治疗后存在，例如减少的存在(或不存在)。治疗可为例如部分或完全减轻、改善、缓解、抑制或降低特定感染，疾病，病症和/或紊乱(例如，细菌感染)的严重性和/或减少发病率，以及可任选地延迟特定感染，疾病，病症和/或紊乱(例如，细菌感染)的一种或多种后果或症状、特征和/或病因的显现或发作。在一个实施方式中，治疗针对没有显示出相关感染，疾病、病症和/或紊乱的迹象的对象和/或仅显示该感染，疾病、病症和/或紊乱的早期迹象的对象。在一个实施方式中，治疗针对表现出相关感染，疾病，病症和/或病症的一种或多种确定体征的对象。在一个实施方式中，治疗针对被诊断患有细菌感染或相关病症的对象。
如本文所用，术语“预防”，例如细菌感染，意指如果对象(例如，人)在暴露于引起感染的细菌之前(例如，1天，2天，1周，2周，3周或1个月或更多)接受抗体分子，ADC或抗微生物肽，则对象不太可能患上细菌感染。
如本文所用，术语“最小抑制浓度”或“MIC”是指抗微生物剂，例如抗体分子，ADC或抗微生物肽，例如，在孵育(例如，过夜孵育)之后抑制细菌的生长(例如，可见生长)的最低浓度。确定最小抑制浓度或MIC的方法描述于例如Andrews,J.Antimicrob.Chemother.2001；48增刊1:5-16(勘误于J.Antimicrob.Chemother.2002；49(6):1049)。例如，MIC可以通过使用以下程序来确定：抗生素储备溶液的制备，抗生素稀释范围的制备，琼脂稀释板的制备，接种物的制备，接种，孵育以及阅读和解释结果。MIC也可以通过琼脂稀释或肉汤微量稀释来确定，通常遵循参考机构，例如临床和实验室标准协会(CLSI)，英国抗菌化疗协会(BSAC)或欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST)的指导。在一个实施方式中，MIC是抑制细菌生长至少60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％或95％的抗微生物剂(例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽)的最低浓度。在一个实施方式中，MIC是抑制细菌生长至少80％的抗微生物剂(例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽)的最低浓度。用于确定MIC的示例性方法也描述于实施例2中。
如本文所用，术语“最小杀细菌浓度”或“MBC”是指杀灭特定细菌所需的抗微生物剂(例如抗体分子，ADC或抗微生物肽)的最低浓度。在一个实施方式中，通过传代培养至不含测试剂的琼脂平板，可以从肉汤稀释最小抑制浓度(MIC)测试中确定最小杀细菌浓度或MBC。在一个实施方式中，通过确定降低初始细菌接种物活力≥99.9％的最低抗微生物剂浓度来鉴定MBC。在一个实施方式中，如果MBC不超过MIC的四倍，则抗微生物剂通常被认为是杀细菌的(French,J Antimicrob Chemother.2006；58(6):1107-1117)。
下文中进一步详细描述了本文所述组合物和方法的各个方面。在整个说明书中提供了其他定义。
脂多糖
本文公开了抗体分子和抗体分子-药物偶联物(ADC)，其可结合脂多糖(LPS)，例如在革兰氏阴性细菌的外膜上的。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合LPS的核心戊糖区。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，核心LPS区域至少部分地被靶向，因为其具有以下一种或多种性质：高密度，在物种内保守，可及或粘附必需(Raetz和WhitfieldAnnu.Rev.Biochem.2002；71:635–700；de Kievit和Lam J Bacteriol.1994；176(23):7129-39；Schmengler等，Eur J Cell Biol.2010；89(1):25-33；Pier等，Am J Respir CritCare Med.1996；154(4Pt2):S175-82)。
LPS，也称为脂质聚糖或内毒素，是大分子，其包括脂质和由通过共价键连接的内核，外核，和O-抗原组成的多糖。例如，在革兰氏阴性细菌的外膜中发现LPS，其可在动物中引发强烈的免疫应答。LPS有助于细菌的结构完整性，并保护膜免受某些化学侵袭。它还增加细胞膜的负电荷并有助于稳定整个膜结构。LPS可在动物中诱导强烈的免疫应答。它还涉及细菌生态学的非致病性方面，包括表面粘附，噬菌体敏感性以及与诸如变形虫的捕食者的相互作用。LPS是omptin活性正确构象所必需的；然而，光滑的LPS会在空间上阻碍omptin。由于LPS是革兰氏阴性细菌外膜的主要成分，LPS的突变或去除可导致革兰氏阴性细菌的死亡。
LPS包括三部分：O抗原(或O多糖)，核心寡糖，和脂质A。
O抗原，也称为O多糖或O侧链，是包含在细菌的LPS内的重复聚糖聚合物。O抗原与核心寡糖连接，并且包含LPS分子的最外部结构域。O链的组成因菌株而异。例如，由不同的大肠杆菌菌株产生超过160种不同的O抗原结构(Raetz和WhitfieldAnnu.Rev.Biochem.2002；71:635–700)。O链的存在与否决定了LPS是粗糙还是平滑。全长O-链将使LPS平滑，而O-链的缺失或减少将使LPS粗糙(Rittig等，J.Leukoc.Biol.2003；74(6):1045–55)。具有粗糙LPS的细菌通常具有对疏水性抗生素穿透性更强的细胞膜，因为粗糙的LPS更疏水(Tsujimoto等，J.Infect.Chemother.1999,5(4):196–200)。O抗原暴露于细菌细胞的非常外的表面上可以通过宿主抗体进行识别被靶向。
核心寡糖或核心结构域含有直接附连于脂质A的寡糖成分，且通常含有糖类，如庚糖(Hep)和3-脱氧-D-甘露糖醛酸(也称为Kdo或3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸(keto-deoxyoctulosonate))(Hershberger和Binkley，J.Biol.Chem.1968；243(7):1578–1584)。典型的核心戊糖或核心戊糖区域包括例如两个Kdo残基和一个，两个或三个Hep残基。来自示例性细菌的核心戊糖的组成和结构显示在图1中。许多细菌的LPS核心还含有非碳水化合物组分，例如磷酸盐，氨基酸和乙醇胺取代基。
LPS核心可包括内核和外核。
内核的“碱基”是1-3个Kdo残基。最后的Kdo通常用磷酸酯或乙醇胺基团修饰。从Kdo残基，附连2-3个通常被磷酸化的庚糖残基(例如L-甘油-D-甘露庚酮糖)。这些Kdo和庚糖残基形成“内核”。Kdo和脂质A(α2→6)之间的酮苷键特别易受酸裂解。LPS的脂质和多糖部分可通过弱酸处理分离。仅包含脂质A和内核(或更少)的LPS分子被称为“深-粗糙的LPS”。
外核由己糖残基制成，其附连于内核中的最后一个庚糖残基。通常在外核中发现的己糖包括例如D-葡萄糖，D-甘露糖或D-半乳糖。通常至少有三个己糖结合β1→3，O抗原与第三个己糖连接。通常发现其他己糖与外部核心附连，从主要低聚物分支。包含脂质A和完整核心寡糖(内部和外部)的LPS被称为“粗糙LPS”。
在某些情况下，脂质A是用多种脂肪酸修饰的磷酸化葡糖胺二糖。这些疏水性脂肪酸链将LPS锚定在细菌膜中，其余的LPS从细胞表面突出。脂质A结构域导致革兰氏阴性细菌的大部分毒性。当细菌细胞被免疫系统裂解时，含有脂质A的膜片段释放到循环中，引起发热，腹泻和可能致命的内毒素休克(也称为败血症性休克)。
在一个实施方式中，靶向铜绿假单胞菌的核心聚糖。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌的内核聚糖。例如，表位可以包括HepI，并且在较小程度上包括周围的接触。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合平滑LPS，粗糙LPS或两者。在一个实施方式中，抗体分子或ADC不与O-多糖结合或基本上不结合O-多糖。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合超磷酸化的庚糖。在一个实施方式中，抗体分子或ADC不与铜绿假单胞菌以外的革兰氏阴性细菌结合或基本上不结合铜绿假单胞菌以外的革兰氏阴性细菌。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合合成的磷酸化的庚糖单元。例如，本文描述的抗体分子或ADC(例如，mAb001)可以结合图29中所示的表位。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，铜绿假单胞菌的核心聚糖在菌株间是保守的，在体内可及，和/或具有有限的变异/耐药性元件。
在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合磷酸化的LPS，例如LPS的磷酸化核心戊糖区域。在一个实施方式中，本文所述的抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌的核心LPS区域中的一个或多个(例如，两个或三个)磷酸基团。在一个实施方式中，磷酸基团被抗体分子或ADC中的精氨酸残基结合。在一个实施方式中，磷酸基团被抗体分子或ADC中的精氨酸残基抑制或中和。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌的核心LPS区域中的至少三个磷酸基团(例如，Hep2,4,6-PO4)，其中每个被抗体分子或ADC中的精氨酸残基(例如，R100，R101或R103)结合，抑制或中和。例如，抗体分子的H3和L3腔可以容纳单糖。图30描绘了示例性抗体分子(mAb001)中磷酸化聚糖(Hep2,4,6-PO4)和三个精氨酸残基(R100，R101和R103)之间的相互作用。
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文所述的抗体分子或ADC靶向的磷酸对于细菌(例如铜绿假单胞菌)存活是必需的。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌LPS的内核(例如，HepI)的一个或多个(例如，2或3个)磷酸。在某些革兰氏阴性细菌(例如铜绿假单胞菌)中，外膜生物合成通常需要适当的HepI磷酸化。由于缺乏HepI的适当磷酸化而受损的外膜可导致非病毒性细菌。
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，包含存在于多个测序的铜绿假单胞菌菌株中的三种激酶的操纵子参与HepI磷酸化。在假单胞菌特有的该操纵子中，waaP和wapP激酶基因是铜绿假单胞菌菌株的必需基因，并且通常是生存所必需的(Delucia等，MBio.2011；2(4).pii:e00142-11)。相同的操纵子还含有编码额外激酶的基因(例如，wapQ和至少一种另外的推定激酶)，其对铜绿假单胞菌物种具有特异性并编码非必需激酶。本文所述的抗体分子或ADC与铜绿假单胞菌之间的结合通常不受操纵子的这些非必需激酶基因的缺失的影响。因此，本文所述的抗体分子和ADC具有铜绿假单胞菌菌株的广泛覆盖，对假单胞菌感染的患者具有高度特异性，并且在治疗或预防与耐药性或突变铜绿假单胞菌菌株相关的感染方面是有效的。
抗体分子
本文公开了结合细菌(例如革兰氏阴性细菌)和/或脂多糖(LPS)的抗体分子。本文公开的抗体分子-药物偶联物(ADC)可包括本文公开的抗体分子。
如本文所用术语“抗体分子”是指包含至少一种免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”包括例如全长、成熟抗体以及抗体的抗原结合片段。例如，抗体分子可包含重(H)链可变区序列(本文中缩写为VH)和轻(L)链可变区序列(本文中缩写为VL)。在另一个实例中，抗体分子包两条重(H)链可变结构域序列和两条轻(L)链可变结构域序列，从而形成两个抗原结合位点，如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc、Fd、Fd’、Fv、单链抗体(如scFv)、单可变结构域抗体、双抗体(Dab)(二价且双特异性)以及嵌合(如人源化)抗体，且可通过修饰完整抗体或采用重组DNA技术从头合成的那些产生。这些功能性抗体片段保留了选择性结合其相应抗原或受体的能力。抗体和抗体片段可来自任何抗体类型(包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE)，并来自任何抗体亚型(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。抗体分子可以是单克隆或多克隆的。抗体分子还可为人、人源化、CDR移植或体外产生的抗体。抗体分子可具有选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。抗体分子还可具有选自κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白(Ig)”与本文中的术语“抗体”可互换使用。
抗原结合片段的例子包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫桥联接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，其由抗体单臂的VL和VH结构域组成；(v)双抗体(diabody，dAb)片段，其由VH结构域组成；(vi)骆驼或骆驼源化可变结构域；(vii)单链Fv(scFv)，参见例如Bird等，(1988)Science 242:423-426；以及Huston等，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883)；(viii)单域抗体。这些抗体片段可通过任何合适的方法(包括本领域普通技术人员所知的多种常规技术)获得，并且筛选与完整抗体具有相同应用的片段。
术语“抗体”包括完整分子及其功能性片段。可改变(例如突变)抗体恒定区以修饰该抗体的性能，例如增加或提高或减少或降低如下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能。
抗体分子可为单链抗体。可对单链抗体(scFV)进行工程化改造(参见例如Colcher,D.等，(1999)Ann N Y Acad Sci 880:263-80；以及Reiter,Y.(1996)Clin CancerRes2:245-52)。单链抗体可二聚化或多聚化以产生对相同目标蛋白上不同表位具有特异性的多价抗体。
本文所述的抗体分子还可为单域抗体。单域抗体可包括其互补决定区为单域多肽一部分的抗体。实例包括但不限于：重链抗体、天然缺失轻链的抗体、衍生自常规4链抗体的单域抗体、工程化抗体和非衍生自抗体的单结构域骨架。单域抗体可为本领域中任何单域抗体或任何未来的单域抗体。单域抗体可衍生自任何物种，包括但不限于：小鼠、人、骆驼、大羊驼、鱼、鲨鱼、羊、兔和牛。根据有些方面，单域抗体是已知为缺失轻链的重链抗体的天然存在单域抗体。此类单域抗体公开于例如国际公开号WO94/04678。清楚起见，衍生自天然缺失轻链的重链抗体的该可变结构域在本文中称为VHH或纳米抗体以区别于四链免疫球蛋白的常规VH。该VHH分子可衍生自骆驼科(Camelidae)物种的抗体，例如衍生自骆驼、大羊驼、单峰驼、羊驼和驮马。除了骆驼科，其他物种也可产生天然缺失轻链的重链抗体；本文也包括了这些VHH。
VH和VL区可进一步细分为超变区，称为“互补决定区(CDR)”，其间间插更保守的被称为“框架区(FR或FW)”的区。本文所用术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内赋予抗原特异性和结合亲和性的氨基酸序列。本文所用术语“框架”，“FW”和“FR”可以互换使用。
已采用多种方法精确来划定框架区和CDR的范围(参见Kabat,E.A.,等，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest(《热门免疫学蛋白质序列》，第5版，美国公共卫生署，国立卫生研究院，公开号91-3242；Chothia,C.等，(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；以及采用牛津分子AbM抗体造模软件(Oxford Molecular’s AbMantibody modeling software)所用的AbM定义。总体上参见例如“Protein Sequence andStructure Analysis of Antibody Variable Domains”(《抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析》)。于：《抗体工程实验室手册》(Antibody Engineering Lab Manual)(Duebel,S.和Kontermann,R.编，Springer-Verlag,Heidelberg)。在一个实施方式中，使用以下定义：重链可变结构域CDR1的AbM定义以及对其他CDR的Kabat定义。在一个实施方式中，将Kabat定义用于所有CDR。此外，用Kabat或AbM CDR描述的实施方式也可采用Chothia超变环来实施。每一VH和VL通常包括三个CDR和四个FR，其从氨基端到羧基端按照以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”是指能形成免疫球蛋白可变结构域结构的氨基酸序列。例如，该序列可包括天然存在可变结构域氨基酸序列的全部或部分。例如，该序列可包含或不包含一个、两个或更多给N-或C-末端氨基酸，或可包含与蛋白质结构形成相容的其他改变。
术语“抗原结合区”是指包含形成与抗原，例如脂多糖(LPS)或其表位结合界面的决定簇的抗体分子部分。就蛋白质(或蛋白质模拟物)而言，抗原结合区通常包含形成抗原，例如LPS结合界面的一个或多个环(例如至少4个氨基酸或氨基酸模拟物的环)。通常，抗体分子的抗原结合区包含至少一个或两个CDR和/或超变环，或更通常为至少三个、四个、五个或六个CDR和/或超变环。
术语“竞争”或“交叉竞争”在本文中可互换使用，指抗体分子干扰抗LPS抗体分子(例如，本文提供的抗LPS抗体分子)与靶标(例如，革兰氏阴性细菌上的LPS)的结合的能力。对结合的干扰可以是直接的或间接的(例如通过抗体分子或目标的变构调控)。抗体分子干扰其他抗体分子与目标结合的程度且由此其是否能被称为竞争，可采用竞争性结合测试(例如FACS测试、ELISA、SPR测试、或测试(ForteBio)BIACORE测试)确定。在一个实施方式中，竞争性结合测试是定量竞争性测试。在一个实施方式中，在竞争性结合测试(例如本文所述的竞争性测试)中，第一抗LPS抗体分子与目标的结合有如下减少时，认为该第一抗LPS抗体分子与第二抗LPS抗体分子竞争性结合所述目标：减少10％或更多，例如20％或更多，30％或更多，40％或更多，50％或更多，55％或更多，60％或更多，65％或更多，70％或更多，75％或更多，80％或更多，85％或更多，90％或更多，95％或更多，98％或更多，99％或更多。
本文所用术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指具有单一分子组成的抗体分子制备物。单克隆抗体组合物针对具体表位具有单一的结合特异性和亲和力。单克隆抗体的制备可采用杂交瘤技术或不采用杂交瘤技术的方法(例如重组法)。
“有效/效果上的人(effectively human)”蛋白是不引发中和性抗体应答(例如人抗鼠抗体(HAMA)应答)的蛋白质。HAMA在许多情况下(例如若抗体分子在例如治疗慢性或复发性疾病症状时被反复施用的情况下)会造成问题。HAMA应答可造成反复给予抗体因血清抗体清除率提高(参见例如Saleh等，Cancer Immunol.Immunother.32:180-190(1990))以及潜在的过敏反应(参见例如LoBuglio等，Hybridoma,5:5117-5123(1986))而可能失去效果。
抗体分子可为多克隆或单克隆抗体。在一些实施方式中，可重组产生抗体，例如通过任何合适的噬菌体展示或重组方法来产生。
各种用于生成抗体的噬菌体展示和组合方法是本领域已知的(如下所述，例如，Ladner等，美国专利号5,223,409；Kang等，国际公开号WO 92/18619；Dower等，国际公开号WO 91/17271；Winter等，国际公开号WO 92/20791；Markland等，国际公开号WO 92/15679；Breitling等，国际公开号WO 93/01288；McCafferty等，国际公开号WO 92/01047；Garrard等，国际公开号WO 92/09690；Ladner等，国际公开号WO 90/02809；Fuchs等，(1991)Bio/Technology 9:1370 1372；Hay等，(1992)Hum Antibod Hybridomas 3:81-85；Huse等，(1989)Science 246:1275-1281；Griffths等，(1993)同上；Hawkins等，(1992)J Mol Biol226:889；Clackson等，(1991)Nature352:624；Gram等，(1992)PNAS 89:3576-3580；Garrad等，(1991)Bio/Technology9:1373 1377；Hoogenboom等，(1991)Nuc Acid Res 19:4133-4137；和Barbas等，(1991)PNAS 88:7978-7982，其内容在此全部引入以供参考)。
在一个实施方式中，抗体分子是完全人抗体(例如由小鼠产生的抗体，该小鼠在已通过基因工程化改造以产生源自人免疫球蛋白序列的抗体)、或非人抗体，例如啮齿类(小鼠或大鼠)、羊、灵长类(例如猴)、骆驼抗体。在一个实施方式中，非人抗体是啮齿类抗体(小鼠或大鼠抗体)。制备啮齿类抗体的方法是本领域已知的。
人单克隆抗体可采用携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠而不是小鼠体系产生。来自用感兴趣抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞被用于产生分泌人mAb的杂交瘤，这些人mAb对来自人蛋白质的表位具有结合特异性(参见例如，Wood等，国际申请号WO 91/00906,Kucherlapati等，PCT公开号WO 91/10741；Lonberg等，国际申请号WO 92/03918；Kay等，国际申请号92/03917；Lonberg等，1994Nature368:856-859；Green,L.L.等，1994NatureGenet.7:13-21；Morrison,S.L.等，1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855；Bruggeman等，1993Year Immunol 7:33-40；Tuaillon等，1993PNAS 90:3720-3724；Bruggeman等，1991Eur J Immunol 21:1323-1326)。
抗体可为其中的可变区或其部分(例如CDR)在非人生物(例如大鼠或小鼠)中产生的抗体。嵌合、CDR移植以及人源化抗体均包含在本发明中。本发明包括在非人生物(例如大鼠或小鼠)中产生并随后(例如在可变框架或恒定区中)进行修饰以降低人体内抗原性的抗体。
可采用任何合适的重组DNA技术产生嵌合抗体。本领域中已知多种方法(参见Robinson等，国际专利公开号PCT/US86/02269；Akira,等，欧洲专利申请184,187；Taniguchi,M.,欧洲专利申请171,496；Morrison等，欧洲专利申请173,494；Neuberger等，国际申请WO 86/01533；Cabilly等，美国专利号4,816,567；Cabilly等，欧洲专利申请125,023；Better等，(1988Science 240:1041-1043)；Liu等，(1987)PNAS84:3439-3443；Liu等，1987,J.Immunol.139:3521-3526；Sun等，(1987)PNAS84:214-218；Nishimura等，1987,Canc.Res.47:999-1005；Wood等，(1985)Nature314:446-449；和Shaw等，1988,J.NatlCancer Inst.80:1553-1559)。
人源化或CDR移植抗体中(免疫球蛋白重链或轻链的)至少一个或两个但通常为全部三个受者CDR被供者CDR替代。可在抗体中用至少部分非人CDR进行替换，或用非人CDR替换仅部分CDR。仅需要替换人源化抗体结合脂多糖所需的CDR数。在一个实施方式中，供者可为啮齿类抗体，例如大鼠或小鼠抗体，而受者可为人框架或人共有框架。通常，提供CDR的免疫球蛋白被称“供者”，而提供框架区的免疫球蛋白被称作“受者”。在一些实施方式中，供者免疫球蛋白是非人的(例如，啮齿类)。受者框架通常为天然存在(例如人)的框架或共有框架，或与其约85％或更高例如90％、95％、99％或更高相同性的序列。
如本文所用，术语“共有序列”是指由相关序列家族中最高频存在氨基酸(或核苷酸)组成的序列(参见例如，Winnaker,From Genes to Clones(从基因到克隆，Verlagsgesellschaft出版公司，德国威因海姆(Weinheim,Germany)，1987)。在某一蛋白家族中，共有序列中的各位置上是该家族中该位置处出现频率最高的氨基酸。如果两种氨基酸出现频率相同，可将其中任一种包含于共有序列中。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。
可采用任何合适的方法将抗体人源化，本领域中已知许多此类方法(参见例如，Morrison,S.L.,1985,Science 229:1202-1207,Oi等，1986,BioTechniques 4:214,以及Queen等，US 5,585,089、US 5,693,761和US 5,693,762，其全部内容作为参考纳入本文)。
可采用CDR移植或CDR取代来产生人源化或CDR移植抗体，可替换免疫球蛋白链中的一个、两个或全部CDR。参见例如美国专利号5,225,539；Jones等，1986Nature 321:552-525；Verhoeyan等，1988Science 239:1534；Beidler等，1988J.Immunol.141:4053-4060；Winter US 5,225,539，其全部内容作为参考纳入本文。Winter描述了可用于制备人源化抗体的CDR移植方法(英国专利申请GB 2188638A，提交于1987年3月26日；Winter US 5,225,539)，其全部内容作为参考纳入本文。
还提供了其中特定氨基酸被取代、缺失或插入的人源化抗体。从供者中选择氨基酸的标准描述于例如US 5,585,089，例如US 5,585,089的第12-16栏，其内容通过参考纳入本文。使抗体人源化的其他技术描述于Padlan等EP519596A1(公开于1992年12月23日)。
在一个实施方式中，抗体分子所具有的重链恒定区选自例如：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区；具体而言，选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区(例如人重链恒定区)。在另一个实施方式中，抗体分子所具有的轻链恒定区选自例如κ或λ轻链恒定区(例如人轻链恒定区)。可改变(例如突变)恒定区以修饰该抗体分子的性能(例如以增加或减少如下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方式中，抗体分子具有效应功能且能够固定补体。在另一个实施方式中，抗体分子不募集效应细胞或固定补体。在某些实施方式中，抗体分子结合Fc受体的能力降低或不具备该能力。例如，抗体可以是不支持与Fc受体结合的同种型或亚型、片段或其他突变体，例如其具有经诱变的Fc受体结合区或缺失Fc受体结合区。在一个实施方式中，抗体分子包含Fc区，其被改变以增加ADCC活性。在一个实施方式中，ADCC活性增加10倍或更多，例如25倍或更多倍，50倍或更多倍，100倍或更多倍，200倍或更多倍，400倍或更多，600倍或更多，800倍或更多，或1000倍或更多，例如，在100倍和1000倍之间或在250倍和750倍之间。在一个实施方式中，抗体分子包含Fc区，其被改变以调节与Fcγ受体的接合或调理吞噬活性。在一个实施方式中，抗体分子包含Fc区，其被改变以调节与FcRn受体的接合。
在一个实施方式中，抗体分子的恒定区被改变。改变抗体恒定区的方法是本领域中已知的。具有改变的功能(例如对效应体配体(如细胞上的FcR)或补体的C1组分的亲和力改变)的抗体分子可通过将该抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基替换为不同的残基来产生(参见例如EP388,151A1、美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260，其全部内容通过引用纳入本文)。还包括了使抗体结构稳定的氨基酸突变，例如人IgG4中的S228P(EU命名法，Kabat命名法中的S241P)。可描述相似类型的改变，其若应用于鼠或其他物种的免疫球蛋白将减弱或消除这些功能。
在一个实施方式中，将抗体分子工程化以与Fc受体最佳接合，例如FcγRIIa，FcγRII，C1q或其组合，例如用于增强的调理吞噬活性(OPA)，补体依赖性细胞毒性(CDC)或两者。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，可以通过抗体的Fc区与活化受体FcγRIIa和抑制性受体FcγRIIb的接合来介导OPA。在一个实施方式中，可以例如使用Fc与FcγRIIa和FcγRIIb的解析晶体结构鉴定相对于FcγRIIb选择性增强与FcγRIIa的接合的Fc上的突变。可以在OPA测定中评估具有一个或多个Fc接合增强突变的抗体分子或ADC。在另一个实施方式中，可以鉴定用于增加与C1q复合物的结合的Fc突变，例如，以促进细菌上的补体沉积和CDC介导的细菌杀灭。可以在CDC测定中评估具有一个或多个C1q亲和力增强突变的抗体分子或ADC。
在一个实施方式中，抗体分子中的氨基酸仅为标准氨基酸。在一个实施方式中，抗体分子包含天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物及同类物；具有变体侧链的氨基酸类似物；和/或前述中任意的所有立体异构体。抗体分子可包含肽模拟物和氨基酸的D-或L-光学异构体。
本文所述抗体分子的多肽可为线性或分支型，其可包含经修饰的氨基酸，且可间插有非氨基酸。还可修饰抗体分子；例如，通过二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作，如与标记组分偶联来修饰。多肽可从天然来源分离，可采用重组技术由原核或真核宿主产生，或者可为合成方法的产品。
本文所述的抗体分子可以非偶联形式单独使用，或可与某些物质结合，所述物质为例如毒素或部分(例如治疗药物(例如抗生素)；发出辐射的化合物；植物、真菌或细菌源性分子；或生物蛋白(例如蛋白毒素)或颗粒(例如重组病毒颗粒，例如通过病毒包被蛋白))。例如，抗LPS抗体可与放射性同位素(如α-、β-或γ-放射物或β-和γ-放射物)偶合。
抗体分子可衍生化为或联接其他功能性分子(例如另一肽或蛋白质)。如本文所用，“衍生化”抗体分子是已被修饰的抗体分子。衍生化的方法包括但不限于：添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体(如生物素)。因此，抗体分子包括本文所述抗体的衍生化和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可与一个或多个其他分子实体功能性联接(通过化学偶联、遗传融合、非共价关联或其他)，所述其他分子实体为例如另一抗体(例如双特异性抗体或双抗体)、检测剂、毒素、药剂和/或能介导该抗体或抗体部分与其他分子(如链霉亲和素核心区或多聚组氨酸标签)关联的蛋白质或肽。
某些类型的衍生化抗体分子可通过交联两个或多个抗体(相同类型或不同类型，例如用以产生双特异性抗体)来产生。合适的交联剂包括具有通过合适间隔子分隔的两个不同反应基团的异双官能性交联剂(例如间-马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)或同双官能性(例如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)交联剂。此类交联剂可获自Pierce化学品公司(伊利诺斯州罗克福德)。
可用于衍生化(或标记)抗LPS抗体分子的有用的可检测剂包括荧光化合物、各种酶、辅基、发光材料、生物发光材料、荧光发射金属原子(例如铕(Eu)和其他镧系原子)以及放射性材料(如下文所述)。示例性荧光检测剂包括荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、5-二甲基胺-1-萘磺酸氯、藻红蛋白等。还可用可检测酶衍生化抗体，所述酶可为例如碱性磷酸酶、辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶等。用可检测酶衍生抗体时，可采用加入该酶用来产生可检测反应产物的其他试剂来检测该抗体。例如，当存在检测剂辣根过氧化酶时，加入过氧化氢和二氨基联苯胺产生可检测的颜色反应产物。也可用辅基(例如链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素)来衍生抗体分子。例如，可用生物素衍生抗体，并通过亲和素或链霉亲和素结合的间接测定来检测该抗体。合适荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的例子包括鲁米诺；生物发光材料的例子包括荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白。
可例如诊断性和/或试验性地应用标记的抗体分子，包括(i)用于通过标准技术(如亲和层析或免疫沉淀)分离预定抗原；(ii)用于检测(例如细胞裂解物或细胞上清液中的)预定抗原以评估蛋白质的表达模式和丰度；(iii)用于监测组织中蛋白水平作为临床试验的一部分来例如用于测定给定治疗方案的效力。
抗体分子可与其他分子实体偶联，所述分子实体通常为标记物或治疗剂(例如抗微生物剂(例如抗细菌剂或杀细菌剂)、免疫调节剂、免疫刺激剂、细胞毒剂或细胞抑制剂)或部分。可将放射性同位素用于检测或治疗应用中。可与抗体分子偶合的放射性同位素包括但不限于α-、β-或γ-放射体，或者β-和γ-放射体。此类放射性同位素包括但不限于：碘(131I或125I)、钇(90Y)、镥(177Lu)、锕(225Ac)、镨、砹(211At)、铼(186Re)、铋(212Bi或213Bi)、铟(111In)、锝(99mTc)、磷(32P)、铑(188Rh)、硫(35S)、碳(14C)、氚(3H)、铬(51Cr)、氯(36Cl)、钴(57Co或58Co)、铁(59Fe)、硒(75Se)或镓(67Ga)。可用作治疗剂的放射性同位素包括：钇(90Y)、镥(177Lu)、锕(225Ac)、镨、砹(211At)、铼(186Re)、铋(212Bi或213Bi)和铑(188Rh)。可用作标记物例如用于诊断的放射性同位素包括：碘(131I或125I)、铟(111In)、锝(99mTc)、磷(32P)、碳(14C)和氚(3H)，或以上所列治疗用同位素中的一种或多种。
本公开提供了放射性标记的抗体分子及其标记方法。在一个实施方式中，公开了标记抗体分子的方法。该方法包括使抗体分子接触螯合剂从而产生偶联抗体。该偶联抗体被放射性同位素(例如111铟、90钇和177镥)放射性标记从而产生标记的抗体分子。
如上所述，抗体分子可以与治疗剂偶联。已经提到了治疗活性的放射性同位素。其他治疗剂的示例包括抗微生物剂(例如抗细菌剂)，例如抗微生物肽。在一个实施方式中，抗微生物肽可以与抗体分子，例如抗体分子的重链或轻链偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，抗微生物肽偶合(例如，融合)至重链或轻链的N-末端或其功能片段。在一个实施方式中，抗微生物肽偶合(例如，融合)至重链或轻链的C-末端或其功能片段。在一个实施方式中，抗微生物肽偶合(例如，融合)至恒定区或其部分。在一个实施方式中，重链或轻链或其部分和抗微生物肽形成融合多肽，例如由开放阅读框(ORF)编码。一种或多种抗微生物肽可以与抗体分子偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是相同或基本相同的。在另一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是不同的。在一个实施方式中，所有抗微生物肽是相同或基本相同的。
在一些方面中，本公开提供了制备本文所公开抗体分子的方法。所述方法包括：提供抗原，例如细菌(例如革兰氏阴性细菌)或LPS；获得特异性结合抗原的抗体分子；评估抗体分子在调节抗原和/或表达该抗原的生物体(例如细菌(例如革兰氏阴性细菌))的活性方面的功效。该方法还可进一步包括给予对象(例如人)该抗体分子，包括其衍生物(例如人源化抗体分子)。
本公开提供了编码上述抗体分子的分离的核酸分子、及其载体和宿主细胞。核酸分子包括但不限于RNA、基因组DNA和cDNA。
抗体分子的示例性序列描述于下表1，2和8中。
表1.示例性抗体分子的重链可变区(VH)，轻链可变区(VL)，重链CDR(HCDR)和轻链CDR(LCDR)的氨基酸序列。显示了根据Chothia系统和Kabat系统定义的重链和轻链CDR。
表2.示例性抗体分子的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的核苷酸序列。
表8.示例性人源化抗体分子的重链可变区(VH)，轻链可变区(VL)，重链CDR(HCDR)和轻链CDR(LCDR)的氨基酸序列。显示了根据Chothia系统和Kabat系统定义的重链和轻链CDR。
在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，抗体分子包含表1或8中描述的抗体分子的VH区的一个，两个或三个CDR(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)。在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，抗体分子包含表1或8中描述的抗体分子的VL区的一个，两个或三个CDR(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)。在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，抗体分子包含表1或8中所述抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个或多个(例如两个或三个)CDR和/或VL区的一个或多个(例如两个或三个)CDR。
在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中所述的一个，两个或三个HCDR。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中所述的一个，两个或三个LCDR。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中所述的一个或多个(例如，两个或三个)HCDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)LCDR。
在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个，两个，三个或四个框架。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VL区的一个，两个，三个或四个框架。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中所述抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个或多个(例如两个，三个或四个)框架和/或VL区的一个或多个(例如两个，三个或四个)框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中所述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的重链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中所述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或8中所述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的重链可变区和轻链可变区。
在一个实施方式中，抗体分子包含具有表1或8中所述氨基酸序列的重链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含具有表1或8中所述氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含具有表1或8中所述氨基酸序列的重链可变区和具有表1或8中所述氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的重链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的重链可变区和由表2中所述的核苷酸序列编码的轻链可变区。
在一个实施方式中，抗体分子还包含重链恒定区。在一个实施方式中，抗体分子还包含轻链恒定区。在一个实施方式中，抗体分子还包含重链恒定区和轻链恒定区。在一个实施方式中，抗体分子包含本文表1或8中所述抗体分子的重链恒定区、轻链恒定区、以及重链和轻链可变区。在某些实施方式中，抗体分子包含重链恒定区，轻链恒定区和可变区，其包含表1或8中所述的抗体分子的一个，两个，三个，四个，五个或六个CDR。
在一个实施方式中，抗体分子结合LPS的核心戊糖区。在一个实施方式中，核心戊糖区包含一个或多个(例如，两个)Kdo残基和一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基。在一个实施方式中，抗体分子结合一个或多个(例如，两个)Kdo残基，或一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基，或其任何组合。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)；或HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：109)；和HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；或LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：111)；和LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)；或HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；或LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：109)；和HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；和LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；或HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：106)；和HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；或LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：111)；和LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；或HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；或LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：106)；和HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；和LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与抗体mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQID NO：103)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与抗体mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含抗体mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQID NO：104)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与抗体mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与抗体mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含抗体mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：103)，并且轻链可变区包含抗体mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：113)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：114)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：18)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：18)；或HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：18)；和HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；或LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：50)；和LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：18)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：18)；或HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；或LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：18)；和HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；和LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：15)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：15)；或HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：15)；和HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；或LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：50)；和LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：15)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：15)；或HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；或LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：15)；和HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；和LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与抗体A001-25的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：1)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体A001-25的VH的氨基酸序列(例如，SEQID NO：1)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与抗体A001-25的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：1)相差不超过8，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含抗体A001-25的VL的氨基酸序列(例如，SEQID NO：8)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与抗体A001-25的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：1)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与抗体A001-25的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：8)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含抗体A001-25的VH的氨基酸序列(例如，SEQID NO：1)，并且轻链可变区包含抗体A001-25的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：8)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：81)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：88)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：23)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：23)；或HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：23)；和HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：23)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：23)；或HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：54)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：23)；和HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：20)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：20)；或HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：20)；和HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：20)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：20)；或HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：54)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列，并且轻链可变区包含LCDR1，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与抗体hWN01的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：2)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体hWN01的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：2)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与抗体hWN01的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，9，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含抗体hWN01的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与抗体hWN01的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：2)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与抗体hWN01的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体hWN01的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：2)，并且轻链可变区包含抗体hWN01的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：82)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：89)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28)；或HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：28)；和HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28)；或HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：54)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：28)；和HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：25)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：25)；或HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：25)；和HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：25)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：25)；或HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：54)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：25)；和HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与hWNv1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含hWNv1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与hWNv1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含hWNv1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与hWNv1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与hWNv1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：9)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含hWNv1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)，并且其中轻链可变区包含hWNv1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：83)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：89)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)；或HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：31)。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：33)；和HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；或LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：57)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；和LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)；或HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：31)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：56)；或LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)；和HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；和LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)；或HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：31)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)；和HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；或LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：57)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；和LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)；或HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：31)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：56)；或LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)；和HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；和LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与3E7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含3E7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与3E7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：10)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含3E7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：10)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与3E7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与3E7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：10)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含3E7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4)，并且其中轻链可变区包含3E7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：10)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：84)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：90)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)；或HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)；和HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；或LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：60)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；和LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)；或HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：59)；或LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)；和HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；和LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)；或HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)；和HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；或LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：60)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；和LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)；或HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：59)；或LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)；和HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；和LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与3G1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)相差不超过1，2，5，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含3G1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：5)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与3G1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：11)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含3G1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：11)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与3G1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：5)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与3G1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：11)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含3G1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：5)，并且其中轻链可变区包含3G1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：11)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：85)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：91)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)；或HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：41)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)；和HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；或LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：63)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；和LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)；或HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：41)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：62)；或LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)；和HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；和LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)；或HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：41)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)；和HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；或LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：63)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；和LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)；或HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：41)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：62)；或LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)；和HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；和LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与2C7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：6)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含2C7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：6)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与2C7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：12)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含2C7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：12)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与2C7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：6)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与2C7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：12)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含2C7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：6)，并且其中轻链可变区包含2C7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：12)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：86)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：92)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)；或HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：46)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)；和HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；或LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：66)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；和LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)；或HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：46)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：65)；或LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)；和HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；和LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)；或HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：46)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)；和HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；或LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：66)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；和LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)；或HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：46)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：65)；或LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)；和HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；和LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与3D6的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含3D6的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与3D6的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：13)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含3D6的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：13)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与3D6的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与3D6的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：13)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含3D6的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7)，并且其中轻链可变区包含3D6的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：13)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：87)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：93)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中VH包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与表8中所述VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与表8中所述VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与表8中所述VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，VH包含以下一个，两个或全部：HCDR1，其包含表8中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；HCDR2，其包含表8中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；或HCDR3，其包含表8中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)。
在一个实施方式中，VH包含：HCDR1，其包含表8中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；HCDR2，其包含表8中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；和HCDR3，其包含表8中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中VL包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与表8中所述VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与表8中所述VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与表8中所述VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，VL包含以下一个，两个或全部：LCDR1，其包含表8中所述的VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；LCDR2，其包含表8中所述的VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；或LCDR3，其包含表8中所述的VL的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，VL包含：LCDR1，其包含表8中所述的VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；LCDR2，其包含表8中所述的VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；和LCDR3，其包含表8中所述的VL的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，
其中VH包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与表8中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与表8中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与表8中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；并且
其中VL包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与表8中所述VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与表8中所述VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与表8中所述VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，VH包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含表8中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；HCDR2，其包含表8中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；或HCDR3，其包含表8中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；VL包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含表8中所述的VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；LCDR2，其包含表8中所述VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；或LCDR3，其包含表8中所述VL的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，VH包含：HCDR1，其包含表8中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；HCDR2，其包含表8中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；和HCDR3，其包含表8中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；并且VL包含：LCDR1，其包含表8中所述的VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；LCDR2，其包含表8中所述VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；和LCDR3，其包含表8中所述VL的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中VH包含与表8中所述VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，VH包含表8中所述的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中VL包含与表8中所述VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，VL包含表8中所述的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含与表8中所述的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中VL包含与表8中所述的VL的氨基酸序列(例如，SEQID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，VH包含表8中所述的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)，并且VL包含表8中所述的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，HCCDR1，HCCDR2和HCCDR3来自表8中所述的相同VH。在一个实施方式中，LCCDR1，LCCDR2和LCCDR3来自表8中所述的相同VL。
表8中公开的任何VH氨基酸序列(或其HCDR1，HCDR2和HCDR3的氨基酸序列)(或与其相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的序列)可与表8中公开的任何VL氨基酸序列(或其LCDR1，LCDR2和LCDR3的氨基酸序列)(或与其相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的序列)组合，例如，以形成人源化抗体分子。示例性组合包括：
SEQ ID NO：103和104；SEQ ID NO：103和119；SEQ ID NO：103和120；SEQ ID NO：103和121；SEQ ID NO：103和122；SEQ ID NO：103和123；SEQ ID NO：103和124；SEQ ID NO：103和125；SEQ ID NO：103和126；SEQ ID NO：103和127；SEQ ID NO：103和128；SEQ ID NO：103和129；SEQ ID NO：103和130；SEQ ID NO：103和131；SEQ ID NO：103和132；SEQ ID NO：103和133；SEQ ID NO：103和134；SEQ ID NO：103和135；SEQ ID NO：103和136；SEQ ID NO：103和137；SEQ ID NO：115和104；SEQ ID NO：115和119；SEQ ID NO：115和120；SEQ ID NO：115和121；SEQ ID NO：115和122；SEQ ID NO：115和123；SEQ ID NO：115和124；SEQ ID NO：115和125；SEQ ID NO：115和126；SEQ ID NO：115和127；SEQ ID NO：115和128；SEQ ID NO：115和129；SEQ ID NO：115和130；SEQ ID NO：115和131；SEQ ID NO：115和132；SEQ ID NO：115和133；SEQ ID NO：115和134；SEQ ID NO：115和135；SEQ ID NO：115和136；SEQ ID NO：115和137；SEQ ID NO：116和104；SEQ ID NO：116和119；SEQ ID NO：116和120；SEQ ID NO：116和121；SEQ ID NO：116和122；SEQ ID NO：116和123；SEQ ID NO：116和124；SEQ ID NO：116和125；SEQ ID NO：116和126；SEQ ID NO：116和127；SEQ ID NO：116和128；SEQ ID NO：116和129；SEQ ID NO：116和130；SEQ ID NO：116和131；SEQ ID NO：116和132；SEQ ID NO：116和133；SEQ ID NO：116和134；SEQ ID NO：116和135；SEQ ID NO：116和136；SEQ ID NO：116和137；SEQ ID NO：117和104；SEQ ID NO：117和119；SEQ ID NO：117和120；SEQ ID NO：117和121；SEQ ID NO：117和122；SEQ ID NO：117和123；SEQ ID NO：117和124；SEQ ID NO：117和125；SEQ ID NO：117和126；SEQ ID NO：117和127；SEQ ID NO：117和128；SEQ ID NO：117和129；SEQ ID NO：117和130；SEQ ID NO：117和131；SEQ ID NO：117和132；SEQ ID NO：117和133；SEQ ID NO：117和134；SEQ ID NO：117和135；SEQ ID NO：117和136；SEQ ID NO：117和137；SEQ ID NO：118和104；SEQ ID NO：118和119；SEQ ID NO：118和120；SEQ ID NO：118和121；SEQ ID NO：118和122；SEQ ID NO：118和123；SEQ ID NO：118和124；SEQ ID NO：118和125；SEQ ID NO：118和126；SEQ ID NO：118和127；SEQ ID NO：118和128；SEQ ID NO：118和129；SEQ ID NO：118和130；SEQ ID NO：118和131；SEQ ID NO：118和132；SEQ ID NO：118和133；SEQ ID NO：118和134；SEQ ID NO：118和135；SEQ ID NO：118和136；或SEQ IDNO：118和137。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，其包含YISSDGDSX1YYPD X2 X3KG(SEQ ID NO：165)的氨基酸序列，其中X1是I或T；X2是N或S；X3是I或V；或HCDR3，其包含SEQID NO：107的氨基酸序列。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含RASESX1FGHGISPX2H(SEQ ID NO：166)的氨基酸序列，其中X1是V或I；X2是M或L；LCDR2，其包含RASX1X2KX3(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列，其中X1是N或S；X2是L或R；X3是F，T或S；或LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含VH和VL，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2，和LCDR3)，
其中VH包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，其包含YISSDGDSX1YYPD X2 X3KG(SEQ ID NO：165)的氨基酸序列，其中X1是I或T；X2是N或S；X3是I或V；或HCDR3，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列，和
其中VL包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含RASESX1FGHGISPX2H(SEQ IDNO：166)的氨基酸序列，其中X1是V或I；X2是M或L；LCDR2，其包含RASX1X2KX3(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列，其中X1是N或S；X2是L或R；X3是F，T或S；或LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含VH和VL，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2，和LCDR3)，
其中VH包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，其包含YISSDGDSX1YYPD X2 X3KG(SEQ ID NO：165)的氨基酸序列，其中X1是I或T；X2是N或S；X3是I或V；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列，和
其中VL包含：LCDR1，其包含RASESX1FGHGISPX2H(SEQ ID NO：166)的氨基酸序列，其中X1是V或I；X2是M或L；LCDR2，其包含RASX1X2KX3(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列，其中X1是N或S；X2是L或R；X3是F，T或S；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗体分子包含或由两个重链可变区和两个轻链可变区组成。
在一个实施方式中，抗体分子还包含重链恒定区，轻链恒定区或两者。
在一个实施方式中，抗体分子是IgG抗体分子，例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子不是IgM抗体分子。
在一个实施方式中，抗体分子包含来自κ或λ轻链的轻链恒定区。
在一个实施方式中，抗体分子能够结合两种或更多种革兰氏阴性菌株。能够结合两种或更多种革兰氏阴性细菌菌株的抗体分子具有几种有利特性。例如，一种疗法可用于治疗，预防或诊断多种细菌感染。另外，医生无需确定哪种细菌菌株感染患者以确定适当的治疗。
因此，在一个实施方式中，抗体分子结合例如不同属，种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如一种或多种革兰氏阴性细菌)。
在一个实施方式中，所述一种或多种革兰氏阴性细菌选自肠杆菌科的物种(例如，克雷伯氏菌属，肠杆菌属，志贺氏菌属，埃希氏菌属，沙门氏菌属，耶尔森氏菌属或柠檬酸杆菌属，例如泛抗性肠杆菌科的物种)，假单胞菌属的物种，不动杆菌属的物种，或其任何组合。
在一个实施方式中，抗体分子结合以下一种或多种：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，抗体分子结合假单胞菌，例如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)。
在一个实施方式中，一种或多种细菌是一种或多种抗生素耐药性细菌，例如一种或多种多重耐药性革兰氏阴性细菌。
在一个实施方式中，一种或多种抗生素耐药性细菌选自假单胞菌(例如铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如肺炎克雷伯氏菌或大肠杆菌)或不动杆菌(例如鲍氏不动杆菌)。
在一个实施方式中，抗体分子结合以下一种或多种：屎肠球菌(Enterococcusfaecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
在一个实施方式中，抗体分子与表7中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10种或所有)铜绿假单胞菌菌株结合。在另一个实施方式中，抗体分子与表7中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6种或所有)多重耐药性铜绿假单胞菌菌株结合。
在一个实施方式中，抗体分子以高亲和力，例如，KD小于约10nM结合LPS，例如，通过ELISA方法测量。
在一个实施方式中，抗体分子结合LPS的Koff慢于1×10-4、5×10-5、或1×10-5s-1。在一个实施方式中，抗体分子结合LPS的Kon快于1×104、5×104、1×105或5×105M-1s-1。
在一个实施方式中，抗体分子具有调理吞噬活性，例如通过OPA测定法测定，例如，如本文所述。
在一个实施方式中，抗体分子结合包含LPS中的一个或多个(例如，两个)Kdo残基和/或一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基的表位。
在一个实施方式中，a)与脂多糖(LPS)结合的抗体分子偶合(例如，融合)至b)抗微生物肽，例如本文所述的抗微生物肽，例如，以形成抗体分子-药物偶联物(ADC)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区与抗微生物肽偶合(例如，融合)，例如，其中重链可变区在抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，重链可变区间接偶合(例如，融合)至抗微生物肽，例如，其中重链可变区的C末端通过恒定区偶合(例如，融合)至抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区与抗微生物肽偶合(例如，融合)，例如，其中轻链可变区在抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，轻链可变区间接偶合(例如，融合)至抗微生物肽，例如，其中轻链可变区的C末端通过恒定区偶合(例如，融合)至抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，抗体分子与两个或更多个(例如，三个，四个，五个，六个，七个，八个或更多个，例如四个)抗微生物肽偶合(例如，融合)，例如通过酶促偶联或化学结合。在一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是相同的。在一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是不同的。
在一个实施方式中，抗体分子与两个相同的抗微生物肽偶合(例如，融合)，每个抗微生物肽，例如间接地，例如通过恒定区偶合(例如，融合)至重链可变区。
在一个实施方式中，与抗体分子偶合(例如，融合)的抗微生物肽比单独的抗微生物肽或抗体分子更有效地抑制(例如，抑制革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)的生长，毒力或感染性，例如，具有比单独的抗微生物肽的最小抑制浓度(MIC)低例如，至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，或100倍的MIC。
在一个实施方式中，与抗体分子偶合(例如，融合)的抗微生物肽比单独的抗微生物肽或抗体分子更有效地降低(例如，抑制革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)的活力，例如杀灭，例如，具有比单独的抗微生物肽的最小杀细菌浓度(MBC)低例如，至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，或100倍的MBC。
在一个实施方式中，抗体分子具有调理吞噬活性(例如，当与嗜中性粒细胞的Fc受体(FcR)结合时被吞噬)，例如，如通过OPA测定所确定的，例如，如本文所述。
在一个实施方式中，与抗体分子偶合(例如，融合)的抗微生物肽不抑制，例如，不抑制革兰氏阳性细菌(例如，本文所述的革兰氏阳性细菌)的生长，毒力或感染性，例如，具有比对革兰氏阳性细菌(例如，革兰氏阳性细菌)的最小抑制浓度(MIC)低，例如，至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的对革兰氏阴性细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的MIC。
在一个实施方式中，与抗体分子偶合(例如，融合)的抗微生物肽不降低革兰氏阳性细菌(例如，本文所述的革兰氏阳性细菌)的活力，例如，不杀灭，例如，具有比对革兰氏阳性细菌(例如，革兰氏阳性细菌)的最小杀细菌浓度(MBC)低，例如，至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的对革兰氏阴性细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的MBC。
在一个实施方式中，革兰氏阳性细菌是金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)。
在一个实施方式中，抗体分子结合革兰氏阴性细菌或LPS上的线性或构象表位。
在一个实施方式中，抗体分子结合低MW LPS和高MW LPS，例如，如Western分析所确定的。在一个实施方式中，抗体分子结合铜绿假单胞菌核心LPS的高度磷酸化的庚糖区域。在一个实施方式中，抗体分子结合核心LPS的磷酸化(例如，超磷酸化，例如，双磷酸化)Hep I残基。在一个实施方式中，抗体分子结合核心LPS中的区域(例如，在铜绿假单胞菌中)，其对于外膜形成是必需的(如例如DeLucia等，MBio.2011；2(4).pii:e00142-11中所述，其内容通过引用并入本文)。
在一个实施方式中，抗体分子以高亲和力结合双磷酸化的庚糖，例如，表观KD等于或小于约20nM，例如，通过本文所述的方法测定。在一个实施方式中，与非磷酸化的庚糖相比，抗体分子优先结合磷酸化的(例如，超磷酸化的)庚糖。在一个实施方式中，与具有单磷酸化的庚糖相比，抗体分子优先结合超磷酸化(例如，双磷酸化)的庚糖。在一个实施方式中，与双磷酸化的甘露糖，具有单磷酸化的甘露糖或非磷酸化的甘露糖相比，抗体分子优先结合超磷酸化(例如，双磷酸化)的庚糖。
在一个实施方式中，具有本文所述结合特性的抗体分子包含硫酸酯酶基序(例如，修饰的硫酸酯酶基序)，例如，如本文所述。
抗微生物肽
如本文所用，术语“抗微生物肽”是指具有抗微生物活性(例如抗菌活性)的肽。尽管不希望受理论束缚，但据信，在一个实施方式中，抗微生物肽可具有可变长度，序列和结构，具有针对许多微生物(例如细菌)的广谱活性，并且任选地具有低水平的诱导耐药性。在一个实施方式中，抗微生物肽是抗细菌肽。
抗微生物肽是多种多样的分子，基于它们的氨基酸组成和结构被分成亚组。通常，这些肽包括由精氨酸，赖氨酸或在酸性环境中组氨酸和大部分(例如，超过50％)疏水残基提供的两个或更多个带正电荷的残基。这些分子的二级结构包括，例如，i)α-螺旋，ii)由于存在2个或更多个二硫键而出现的β链，iii)由于存在单个二硫键和/或肽链的环化而出现的β-发夹或环，和iv)延长。这些肽中的一些可以在游离溶液中非结构化，并且在分配到生物膜中时折叠成它们的最终构型。抗微生物肽可含有沿一侧排列的亲水性氨基酸残基和沿螺旋分子的相对侧排列的疏水性氨基酸残基。抗微生物肽的这种两亲性允许它们分配到膜脂质双层中。尽管不希望受理论束缚，但据信在一个实施方式中，与膜结合的能力是抗微生物肽的典型特征，尽管可能不需要膜透化。
抗微生物肽的类型包括，例如，阴离子肽(例如，富含谷氨酸和天冬氨酸)，线性阳离子α-螺旋肽(例如，缺乏半胱氨酸)，阳离子肽(例如，富含脯氨酸，精氨酸，苯丙氨酸，甘氨酸或色氨酸)，以及含有半胱氨酸并形成二硫键(例如，含有1-3个二硫键)的阴离子和阳离子肽。
抗微生物肽杀灭微生物的作用方式是多种多样的，并且对于不同的细菌种类可能不同。细胞质膜是常见的靶标，但肽也可能干扰DNA和蛋白质合成，蛋白质折叠和细胞壁合成。肽和靶生物体之间的初始接触可以是静电的，因为大多数细菌表面是阴离子的或疏水的。它们的氨基酸组成，两亲性，阳离子电荷和大小允许它们附着并插入膜双层中以通过“桶-壁”，“地毯”或“环形孔”机制形成孔。或者，它们可以渗透到细胞中以结合对细胞生存至关重要的细胞内分子。细胞内结合模型包括抑制细胞壁合成，改变细胞质膜，激活自溶素，抑制DNA，RNA和蛋白质合成，以及抑制某些酶。这些肽可以是杀细菌的和/或抑细菌的。通常，通过测量最小抑制浓度(MIC)来确定这些肽的抗微生物(例如，抗细菌)活性。
已经证明抗微生物肽杀灭革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌，病毒，真菌和转化的或癌细胞(Reddy等，(2004)International Journal of Antimicrobial Agents 24(6):536–547)。抗微生物肽也可具有免疫调节活性。例如，免疫调节活性可能参与感染的清除，例如，改变宿主基因表达，充当趋化因子和/或诱导趋化因子产生，抑制脂多糖诱导的促炎细胞因子产生，促进伤口愈合或调节树突状细胞和适应性免疫应答细胞的反应的能力。
可以使用几种方法来确定抗微生物肽活性的机制。这些方法包括例如固态NMR光谱，显微镜，原子发射光谱，荧光染料，离子通道形成，圆二色性和取向圆二色性，双偏振干涉测量，或中子和X射线衍射。
在一个实施方式中，抗微生物肽低于10kDa，例如低于8kDa，6kDa，4kDa，2kDa或1kDa。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由约6至约100个氨基酸，例如，约6至约75个氨基酸，约6至约50个氨基酸，约6至约25个氨基酸，约25至约100个氨基酸，约50至约100个氨基酸，或约75至约100个氨基酸组成。在一个实施方式中，抗细菌肽包含或由约12至约50个氨基酸组成。在一个实施方式中，抗细菌肽包含或由约15至约45个氨基酸组成。在一个实施方式中，抗微生物肽基本上是阳离子的。在一个实施方式中，抗微生物肽基本上是两亲性的。在一个实施方式中，抗微生物肽基本上是阳离子和两亲性的。在一个实施方式中，抗微生物肽对革兰氏阴性细菌是细胞抑制的。在一个实施方式中，抗微生物肽对革兰氏阴性细菌有细胞毒性。在一个实施方式中，抗微生物肽对革兰氏阳性细菌具有细胞抑制性和细胞毒性。在一个实施方式中，抗微生物肽是广谱抗微生物肽，例如对两种或更多种不同属，种，亚种和/或菌株的细菌具有细胞抑制和/或细胞毒性。在一个实施方式中，抗微生物肽是分泌型多肽。
已经从多种动物：微生物，无脊椎动物，植物，两栖动物，鸟类，鱼类和哺乳动物中分离和描述了抗微生物肽(Wang等，Nucleic Acids Res.2009；37(数据库发行)：D933-7)。例如，抗微生物多肽描述于抗微生物肽数据库(http://aps.unmc.edu/AP/main.php；Wang等，Nucleic Acids Res.2009；37(数据库期)：D933-7)，CAMP：抗微生物肽集(http://www.bicnirrh.res.in/antimicrobial/；Thomas等，Nucleic Acids Res.2010；38(数据库期)：D774-80)，US 5221732，US 5447914，US 5519115，US 5607914，US 5714577，US5734015，US 5798336，US 5821224，US 5849490，US 5856127，US 5905187，US 5994308，US5998374，US 6107460，US 6191254，US 6211148，US 6300489，US 6329504，US 6399370，US6476189，US 6478825，US 6492328，US 6514701，US 6573361，US 6573361，US 6576755，US6605698，US 6624140，US 6638531，US 6642203，US 6653280，US 6696238，US 6727066，US6730659，US 6743598，US 6743769，US 6747007，US 6790833，US 6794490，US 6818407，US6835536，US 6835713，US 6838435，US 6872705，US 6875907，US 6884776，US 6887847，US6906035，US 6911524，US 6936432，US 7001924，US 7071293，US 7078380，US 7091185，US7094759，US 7166769，US 7244710，US 7314858，和US 7582301，其内容通过引用并入。
本文所述的抗微生物肽可以抑制或降低一种或多种细菌物种，例如，不同属，种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的活力。在一个实施方式中，抗微生物肽能够抑制和/或降低2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种革兰氏阴性细菌菌株的活力。例如，抗体分子可以抑制和/或降低来自肠杆菌科的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌，耶尔森氏菌或柠檬酸杆菌，例如，泛抗性肠杆菌科)，来自假单胞菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，来自不动杆菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，或其任何组合的活力。在一个实施方式中，抗微生物肽能够抑制或降低以下的活力：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，抗微生物肽能够抑制或降低以下的活力：屎肠球菌(Enterococcus faecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。本文所述的抗微生物肽可具有以下属性中的一种或多种(例如，两种，三种或全部)：强细菌抑制活性，强杀细菌活性，低红细胞(RBC)溶血活性或低细胞毒性(例如，脱靶毒性)。在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC27853或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小抑制浓度(MIC)。在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC27853或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小杀细菌浓度(MBC)。在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有等于或大于1(例如，大于4:1，8:1，16:1，24:1或32:1)的PLC与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，PLC是裂解50％红细胞所需要或要求的浓度(例如，最小浓度)。在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有大于4:1(例如，大于8:1，16:1，24:1或32:1)的MLC与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，MLC是裂解100％红细胞所需要或要求的浓度(例如，最小浓度)。
在一个实施方式中，抗微生物肽是α-螺旋肽。在一个实施方式中，抗微生物肽具有两个或更多个交联的氨基酸残基。例如，抗微生物肽中的两个半胱氨酸残基可以是交联的，例如化学交联的。尽管不希望受理论束缚，但据信在一个实施方式中，交联抗微生物肽中的两个或更多个氨基酸残基可增强α-螺旋构象，增强血清稳定性和/或增加抗微生物效力。在一个实施方式中，具有两个或更多个交联的氨基酸残基的抗微生物肽，例如，在血清中，比不具有两个或多个交联的氨基酸残基的其他相同的抗微生物肽稳定至少2，3，4，5，6，7，8，9或10倍。在一个实施方式中，具有两个或更多个交联的氨基酸残基的抗微生物肽比不具有两个或多个交联的氨基酸残基的其他相同的抗微生物肽的MIC低至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，98％或99％。
在一个实施方式中，抗微生物肽与抗体分子，例如，本文所述的抗体分子偶合(例如，融合)，例如，以形成抗体分子-药物偶联物(ADC)。
以下标准可用于选择候选抗微生物肽：广谱(例如，针对多种细菌病原体的活性)，α-螺旋二级结构(例如，易于以功能形式表达)，通过膜破坏的作用机制(例如，杀细菌和/或与小分子的协同作用)，体内稳定性(例如，在人血清中稳定)，并且适应N-末端修饰(例如，以C-末端抗体偶联物起作用)。
本文所述的抗微生物肽可含有本身不具有抗微生物活性的序列。在一个实施方式中，抗微生物肽包含接头序列。在一个实施方式中，抗微生物肽包含分选酶供体序列。
在一个实施方式中，单独的抗微生物肽不结合LPS，例如LPS的核心区。
在一个实施方式中，抗体分子的重链包含第一分选酶受体序列，抗体分子的轻链包含第二分选酶受体序列。在一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第一分选酶识别序列，包含(GS)6LPETGGG(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列。在另一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第二分选酶受体序列，包含P(G4S)2LPETGGSG(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与本文所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-256中的任一个相差不超过1，2，3，4或5个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由本文所述的氨基酸序列组成，例如SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-256中的任一个，或其一部分，例如其功能片段(例如，省略了N末端G残基中的一个或多个(例如，两个，三个，四个或更多个))。例如，可以省略SEQ ID NO：101，147，152-154，156或163-164中任一个的前三个N-末端G残基。在一个实施方式中，一个或多个(例如，两个，三个，四个或更多个)N-末端G残基的存在不会降低或显著降低抗微生物肽的活性。
在一个实施方式中，肽包含以下氨基酸序列：RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：68)，GGGRGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：80)，GGGGRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(SEQ ID NO：101)或GRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(SEQ ID NO：102)。
在一个实施方式中，抗微生物肽是装订的抗微生物肽。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，例如在血清中，装订可以增加稳定性，降低非特异性结合，或者两者。例如，在Alexander等，J.Am.Chem.Soc.,2013,135(16),5946–5949和实施例7中描述了示例性装订方法。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由表3或6A-6B或图4，15A-15B或36中所述的氨基酸序列组成。在另一个实施方式中，抗微生物肽包含氨基酸序列或由氨基酸序列组成，该氨基酸序列与与表3或6A-6B或图4，15A-15B或36中所述的氨基酸序列或其部分，例如其功能片段相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％，或100％同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-256的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含羧酰胺基团(例如，C-末端羧酰胺官能团)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：101的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：147的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：152的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：153的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：154的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：156的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：163的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：164的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：156和246-256中任一个的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：246的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：247的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：248的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：249的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：250的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：251的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：252的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：253的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：254的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：255的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：256的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40或更多个)D-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是D-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的所有氨基酸残基都是D-氨基酸。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，抗微生物肽中一个或多个(例如，全部)D-氨基酸的存在可以增加抗微生物肽或ADC例如在血清(例如，人血清)中的稳定性，例如，与含有一个或多个(例如，全部)L-氨基酸的其他方面相同的抗微生物肽相比。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40或更多个)L-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是L-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的所有氨基酸残基都是L-氨基酸。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个D-氨基酸和一个或多个L-氨基酸。例如，表3或6A-6B或图4，15A-15B或36中所述的抗微生物肽中的任何氨基酸残基可以是D-氨基酸或L-氨基酸。
表3.示例性抗微生物肽的氨基酸序列
MAL：马来酰亚胺；EG3：三(乙二醇)
在一个实施方式中，ADC包含肽，该肽包含以下氨基酸序列：RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：68)，GGGRGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：80)，GGGGRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(SEQ ID NO：101)或GRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(SEQ ID NO：102)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由选自以下的氨基酸序列组成：RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：68)，GIGKFLKKAKKFGKAFVKILKK(SEQ ID NO：69)，KKLLKWLKKLL(SEQ ID NO：72)，RLGNFFRKAKKKIGRGLKKIGQKIKDFLGNLVPRTES(SEQ IDNO：74)，GIGKHVGKALKGLKGLLKGLGES(SEQ ID NO：94)，GRRKRKWLRRIGKGVKIIGGAALDHL(SEQID NO：95)，GGLRSLGRKILRAWKKYGPQATPATRQ(SEQ ID NO：96)，IKWKKLLRAAKRIL(SEQ ID NO：97)，IGKKWKRIVKRIKKFLRKL(SEQ ID NO：98)，ILGKIWKIKKLF(SEQ ID NO：99)或RLGDILQKAREKIEGGLKKLVQKIKDFFGKFAPRTES(SEQ ID NO：100)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由选自图36中所述的肽序列的氨基酸序列组成。在一个实施方式中，抗微生物肽是本文所述的抗微生物肽的类似物，例如，以增强抗菌肽的一种或多种生物物理学特性。在一个实施方式中，抗微生物肽是肽297(P297)的类似物，例如(D)-P297。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)包含带电残基(例如精氨酸或赖氨酸)突变为不带电荷的残基(例如丙氨酸或苏氨酸)。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)包含R至A，R至T突变，R至S突变或其组合。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)包含K至A，K至T突变，K至S突变或其组合。在一个实施方式中，抗微生物肽在C-或N-末端或在靠近C-或N-末端的位置(例如，距离C-或N-末端不超过1，2，3，4，5或6个氨基酸)包含阴离子肽。在一个实施方式中，阴离子肽的长度为约2至15，3至14，4至13，5至12，6至11，7至10，8至9，2至13，2至11，2至9，2至7，2至5，12至15，9至15，6至15，3至15，4至9，5至8或6至7个氨基酸残基。在一个实施方式中，抗微生物肽包含AAA序列，例如N-末端并且与阴离子肽序列相邻。
抗体分子-药物偶联物
如本文所用，术语“抗体分子-药物偶联物”或ADC是指与非抗体部分，例如治疗剂或标记物，例如抗微生物肽偶合的抗体分子。抗体分子可以直接或间接地，例如通过接头与非抗体部分偶合。
在一个实施方式中，抗体分子通过共价键与非抗体部分偶合。在一个实施方式中，抗体分子通过肽键与非抗体部分偶合。在一个实施方式中，抗体分子与非抗体部分的偶合由分选酶介导。在一个实施方式中，抗体分子和非抗体部分的偶合形成融合蛋白。在一个实施方式中，抗体分子和非抗体部分形成融合蛋白。在一个实施方式中，融合蛋白包含抗体分子(例如，重链，轻链或两者)与非抗体部分之间的接头。在一个实施方式中，抗体分子通过非肽键与非抗体部分偶合。在一个实施方式中，抗体分子不通过非肽键与非抗体部分偶合。在一个实施方式中，非抗体部分也称为“有效载荷”。
在一个实施方式中，非抗体部分与抗体分子的主链偶合。在另一个实施方式中，非抗体部分与抗体分子的侧链偶合。在一个实施方式中，非抗体部分是肽(例如抗微生物肽)，并且抗体分子与肽的主链(例如抗微生物肽)偶合。在一个实施方式中，非抗体部分是肽(例如抗微生物肽)，并且抗体分子与肽的侧链(例如抗微生物肽)偶合。
在一个实施方式中，两个或更多个(例如，三个，四个，五个，六个，七个，八个或更多个)非抗体部分(例如，抗微生物肽)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，四个非抗体部分(例如，抗微生物肽)与抗体分子偶合。例如，非抗体部分可以是相同的，或者至少一些非抗体部分彼此不同。在一个实施方式中，非抗体部分(例如，抗微生物肽)以二价形式与抗体分子偶合。在另一个实施方式中，非抗体部分(例如，抗微生物肽)以四价形式与抗体分子偶合。
在一个实施方式中，ADC包含结合细菌的抗体分子(例如革兰氏阴性细菌)。在一个实施方式中，ADC包含与LPS结合的抗体分子，例如在革兰氏阴性细菌的外膜上。在一个实施方式中，ADC包含本文所述的抗体分子。
在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，ADC包含表1或8中描述的抗体分子的VH区的一个，两个或三个CDR(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)。在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，ADC包含表1或8中描述的抗体分子的VL区的一个，两个或三个CDR(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)。在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，ADC包含表1或8中所述抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个或多个(例如两个或三个)CDR和/或VL区的一个或多个(例如两个或三个)CDR。
在一个实施方式中，ADC包含表1或8中所述的一个，两个或三个VH CDR。在一个实施方式中，ADC包含表1或8中所述的一个，两个或三个VL CDR。在一个实施方式中，ADC包含表1或8中所述的一个或多个(例如，两个或三个)VH CDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)VL CDR。
在一个实施方式中，ADC包含表1或8中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个，两个，三个或四个框架。在一个实施方式中，ADC包含表1或8中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VL区的一个，两个，三个或四个框架。在一个实施方式中，ADC包含表1或8中所述抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个或多个(例如两个，三个或四个)框架和/或VL区的一个或多个(例如两个，三个或四个)框架。
在一个实施方式中，ADC包含表1或8中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的重链可变区。在一个实施方式中，ADC包含表1或8中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的轻链可变区。在一个实施方式中，ADC包含表1或8中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的重链可变区和轻链可变区。
在一个实施方式中，ADC包含具有表1或8中所述氨基酸序列的重链可变区。在一个实施方式中，ADC包含具有表1或8中所述氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方式中，ADC包含具有表2中所述氨基酸序列的重链可变区和具有表1或8中所述氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的重链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的重链可变区和由表2中所述的核苷酸序列编码的轻链可变区。
在一个实施方式中，ADC包含重链恒定区。在一个实施方式中，ADC包含轻链恒定区。在一个实施方式中，ADC包含重链恒定区和轻链恒定区。在一个实施方式中，ADC包含本文表1或8中所述抗体分子的重链恒定区、轻链恒定区、以及重链和轻链可变区。在某些实施方式中，ADC包含重链恒定区，轻链恒定区和可变区，其包含表1或8中所述的抗体分子的一个，两个，三个，四个，五个或六个CDR。
在一个实施方式中，ADC能够结合两种或更多种不同属，种，亚种和/或菌株的革兰氏阴性细菌。能够结合两种或更多种不同属，种，亚种和/或菌株的革兰氏阴性细菌的抗体分子或ADC具有几种有利特性。例如，一种疗法可用于治疗，预防或诊断多种细菌感染。另外，医生无需确定哪种细菌属、种、亚种和/或菌株感染患者以确定适当的治疗。因此，在一个实施方式中，ADC能够独立地以高亲和力结合不同属，种，亚种和/或菌株的2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种革兰氏阴性细菌。例如，抗体分子可以高亲和力独立地结合来自肠杆菌科的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌，耶尔森氏菌或柠檬酸杆菌，例如，泛抗性肠杆菌科)，来自假单胞菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，来自不动杆菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，或其任何组合。在一个实施方式中，ADC能够结合：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniaesubsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC 25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，ADC能够结合以下一种或多种：屎肠球菌(Enterococcusfaecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
在一个实施方式中，ADC能够与表7中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10种或所有)铜绿假单胞菌菌株结合。在另一个实施方式中，ADC能够与表7中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6种或所有)多重耐药性铜绿假单胞菌菌株结合。
在一个实施方式中，ADC结合LPS上的线性或构象表位。在另一个实施方式中，ADC结合LPS上的核心戊糖区域。在一个实施方式中，ADC具有调理吞噬活性，例如，通过本文所述的调理吞噬试验测定。
在一个实施方式中，ADC包含抗微生物肽，例如本文所述的抗微生物肽，例如，具有表3或6A-6B，或图4，15A-15B或36中所示的氨基酸序列。在另一个实施方式中，抗微生物肽包含氨基酸序列或由氨基酸序列组成，该氨基酸序列与与表3或6A-6B或图4，15A-15B或36中所述的氨基酸序列或其部分，例如其功能片段(例如，省略了一个或多个(例如，两个，三个，四个或更多个)N-末端G残基)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％，或100％同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-256中任一个氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，ADC包含一个或多个(例如，两个，三个，四个，五个，六个，七个，八个或更多个)抗微生物肽，每个抗微生物肽与SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-256中任一个氨基酸序列相差不超过1个，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个或10个氨基酸残基，或与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，ADC包含或由4个或更多个抗微生物肽，各抗微生物肽包含氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-256中任一个氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，ADC包含或由四个或更多个抗微生物肽，各抗微生物肽包含SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-256中的任一个所述的氨基酸序列组成。在一个实施方式中，抗微生物肽包含羧酰胺基团(例如，C-末端羧酰胺官能团)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40或更多个)D-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是D-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的所有氨基酸残基都是D-氨基酸。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40或更多个)L-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是L-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的所有氨基酸残基都是L-氨基酸。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个D-氨基酸和一个或多个L-氨基酸。
在一个实施方式中，ADC能够抑制和/或降低不同属，种，亚种和/或菌株的2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的活力。例如，抗体分子可以抑制和/或降低来自肠杆菌科的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌，耶尔森氏菌或柠檬酸杆菌，例如，泛抗性肠杆菌科)的活力，来自假单胞菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，来自不动杆菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，或其任何组合。在一个实施方式中，ADC能够抑制或降低以下的活力：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiellapneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiellapneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigelladysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigella flexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC 25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonellacholeraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonellacholeraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonellacholeraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuissubsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobactersedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacteryoungae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersinia frederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，ADC能够抑制或降低以下一种或多种的活力：屎肠球菌(Enterococcus faecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
在一个实施方式中，ADC能够与表7中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10种或所有)铜绿假单胞菌菌株结合。在另一个实施方式中，ADC能够与表7中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6种或所有)多重耐药性铜绿假单胞菌菌株结合。
尽管不希望受理论束缚，适于本文所述的ADC的抗微生物肽可至少部分基于以下属性中的一种或多种(例如，两种，三种或全部)选择：强细菌抑制活性，强杀细菌活性，低红细胞(RBC)溶血活性或低细胞毒性(例如，脱靶毒性)。在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小抑制浓度(MIC)。在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC27853或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小杀细菌浓度(MBC)。在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有等于或大于1(例如，大于4:1，8:1，16:1，24:1或32:1)的PLC与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，PLC是裂解50％红细胞所需要或要求的浓度(例如，最小浓度)。在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有大于4:1(例如，大于8:1，16:1，24:1或32:1)的MLC与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，MLC是裂解100％红细胞所需要或要求的浓度(例如，最小浓度)。
在一个实施方式中，抗微生物肽是α-螺旋肽。在一个实施方式中，抗微生物肽具有两个或更多个交联的氨基酸残基。例如，抗微生物肽中的两个半胱氨酸残基可以是交联的，例如化学交联的。尽管不希望受理论束缚，但据信在一个实施方式中，交联抗微生物肽中的两个或更多个氨基酸残基可增强α-螺旋构象，增强血清稳定性和/或增加抗微生物效力。在一个实施方式中，具有两个或更多个交联的氨基酸残基的抗微生物肽，例如，在血清中，比不具有两个或多个交联的氨基酸残基的其他相同的抗微生物肽稳定至少2，3，4，5，6，7，8，9或10倍。在一个实施方式中，具有两个或更多个交联的氨基酸残基的抗微生物肽比不具有两个或多个交联的氨基酸残基的其他相同的抗微生物肽的MIC低至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，98％或99％。
在一个实施方式中，ADC通过酶促合成产生。例如，可以通过表达抗体分子(例如标记的抗体分子)，肽的化学合成(例如抗微生物肽)和肽与抗体分子的酶促连接来产生ADC。在一个实施方式中，实现90％或更高，例如92％或更高，95％或更高，97％或更高，或99％或更高的反应效率。在另一实施方式中，该方法还包括纯化ADC。在一个实施方式中，纯化后产率为60％或更高(例如，70％或更高，75％或更高，80％或更高，90％或更高，或95％或更高)。
在一个实施方式中，ADC结合至细菌表面。在另一个实施方式中，ADC结合至分泌的囊泡。在另一个实施方式中，ADC结合至细菌表面和分泌的囊泡。在一个实施方式中，通过电子显微镜检测结合。在一个实施方式中，与结合来自第二属，种或亚种的细菌相比，ADC具有增强的与第一属，种或亚种的细菌的结合。在一个实施方式中，与结合除铜绿假单胞菌以外的细菌(例如，大肠杆菌或克雷伯氏菌属)相比，ADC具有增强的与铜绿假单胞菌的结合。
在一个实施方式中，ADC包含：a)结合脂多糖(LPS)的抗体分子；和b)抗微生物肽，
其中抗体分子包含VH和VL，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，并且其中ADC或抗体分子包含：
(a)HCDR1，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：109，145或146中任一个的氨基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：110，138，140或144中任一个的氨基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：111，139，141，142或143中任一个的氨基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列，或
(b)HCDR1，其包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：110，138，140或144中任一个的氨基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：111，139，141，142或143中任一个的氨基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列；和
其中抗微生物肽包含或由以下组成：
(i)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：101的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(ii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：147的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(iii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：152的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(iv)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：153的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(v)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：154的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(vi)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：156的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(vii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：163的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(viii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：164的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(ix)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：246的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(x)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：247的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xi)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：248的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：249的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xiii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：250的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xiv)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：251的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xv)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：252的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xvi)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：253的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xvii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：254的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xviii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：255的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；或
(xix)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：256的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，ADC包括(a)和(i)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(ii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(iii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(iv)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(v)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(vi)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(vii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(viii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(ix)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(x)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xi)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xiii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xiv)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xv)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xvi)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xvii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xviii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xix)。
在一个实施方式中，ADC包括(b)和(i)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(ii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(iii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(iv)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(v)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(vi)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(vii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(viii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(ix)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(x)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xi)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xiii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xiv)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xv)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xvi)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xvii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xviii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xix)。
位点特异性偶联
本文描述的ADC可以通过位点特异性偶联方法制备。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，位点特异性偶联可提供优于用于制备ADC的常规偶联化学的某些优点。例如，位点特异性偶联，包括例如位点特异性有效载荷放置，允许控制药物-抗体比率和偶联位点，这可以影响ADC的性质，例如ADC的药代动力学(PK)，配置或功效。此外，用于位点特异性偶联的接头组合物也可以影响ADC的性质。
用于制备ADC的位点特异性偶联方法可以产生同质产物，例如具有受控的药物负载，简化的分析和改善的治疗指数。通常，这些方法在抗体骨架上的限定位置引入反应性氨基酸，并使用这些氨基酸的独特化学或酶促反应性来偶联有效载荷(如例如Junutula等，Nat Biotechnol.2008；26(8):925-32；Strop等，Chem Biol.2013；20(2):161-7；Axup等，Proc Natl Acad Sci U S A.2012；109(40):16101-6；Kung Sutherland等，Blood.2013；122(8):1455-63中所述)。
示例性的位点特异性偶联方法也描述于例如Drake等，Bioconjug Chem.2014；25(7):1331-41，美国专利号9,238,878和国际公开号WO 2010/096394，其全部内容通过引用纳入本文。例如，蛋白质位点选择性修饰的化学酶法可以使用天然存在的甲酰甘氨酸生成酶(FGE)将甲酰甘氨酸(fGly)残基引入蛋白质骨架中。可设计接头以选择性地与fGly的醛侧链反应以与蛋白质形成稳定的C-C键。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文所述的方法可以产生位点特异性偶联的ADC，例如，具有受控的化学计量和清洁分析，其允许设计具有期望功效和降低的毒性的ADC。
如本文所述，在一个实施方式中，位点特异性ADC产生基于将非天然氨基酸甲酰甘氨酸(fGly)掺入抗体序列中。例如，为了掺入fGly，可以使用标准分子生物学克隆技术将短的共有序列(例如，CXPXR，其中X通常是丝氨酸，苏氨酸，丙氨酸或甘氨酸)插入抗体重链或轻链的所需位置，例如保守区域(Rabuka等，Nat Protoc.2012；7(6):1052-67)。共有序列可以插入抗体分子的多个位置，例如，在重链中(例如，在CH1，CH2或CH3中，或在C-末端)，在轻链中(例如，在恒定区或在C-末端)，或两者。可以将多个共有序列(例如，2，3，4，5，6，7，8或更多个相同，相似或不同的共有序列)插入抗体分子中。
标记的抗体分子可以在共表达甲酰甘氨酸生成酶(FGE)的细胞中重组产生。FGE可以将标签内的半胱氨酸共翻译转化成fGly残基，产生与醛标签一起表达的抗体分子(Carison等，J Biol Chem.2008；283(29):20117-25)。标签中的醛官能团可以用作生物正交偶联的化学柄(Sletten等，Angew Chem Int Ed Engl.2009；48(38):6974-98)。在一个实施方式中，使用肼基-异-Pictet-Spengler(HIPS)连接将有效载荷连接至fGly，在药物有效载荷(例如，抗微生物肽)和抗体分子之间形成稳定的共价C-C键(Agarwal等，BioconjugChem.2013；24(6):846-51)。该C-C键通常对ADC遇到的生理学相关挑战是稳定的，例如在循环和FcRn再循环期间(例如，蛋白酶，低pH或还原剂)。图26中描述了示例性偶联方法和相关化学。
本文的公开内容提供了包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，其中所述抗体分子包含修饰的硫酸酯酶基序。本公开还提供了醛标记的抗体分子，其可以与抗微生物肽共价和位点特异性偶合以提供含药物的支架。本文所述的ADC可用于根据本文所述的方法治疗或预防细菌感染(例如，与革兰氏阴性细菌，例如铜绿假单胞菌相关的感染)或相关病症。本文还描述了产生本文所述的ADC或醛标记的抗体分子的方法。
醛标签
通常，醛标签可以基于衍生自硫酸酯酶基序的任何氨基酸序列，其能够被甲酰甘氨酸生成酶(FGE)转化为含有甲酰甘氨酸(FGly)。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，FGE的作用以序列特异性方式指导，例如，FGE作用于硫酸酯酶基序，并且该硫酸酯酶基序可位于抗体分子的任何区域内。在一个实施方式中，FGE介导的硫酸酯酶基序的转化是位点特异性的，例如，FGE作用于硫酸酯酶基序的氨基酸序列处。在另一个实施方式中，FGE作用于硫酸酯酶基序的能力是序列背景独立的，例如，FGE转化硫酸酯酶基序的半胱氨酸/丝氨酸的能力独立于其中在抗体分子中呈现硫酸酯酶基序的序列背景。
醛标签的最小硫酸酯酶基序长度通常不超过6个氨基酸残基，通常长度为约5或6个氨基酸残基。醛标签可以包含5或6个残基的最小硫酸酯酶基序，或者可以更长并且包含最小的硫酸酯酶基序，其可以通过一个或多个另外的氨基酸残基侧接在基序的N-和/或C-末端侧。可以使用例如5或6个氨基酸残基的醛标签，以及超过5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20或更多个氨基酸残基的更长氨基酸序列。
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，希望通过最小化插入，缺失，取代(替代)或添加(例如，添加到N-或C-末端)的氨基酸残基的数量来最小化抗体分子的天然氨基酸序列的修饰程度。在一个实施方式中，醛标签需要对抗体分子的氨基酸序列的少于16，15，14，13，12，11，10，9，8或7个氨基酸残基进行修饰(插入，添加，缺失，取代/替代)。
在一个实施方式中，可用于如本文所述的醛标签的硫酸酯酶基序具有下式：
X1Z1X2Z2X3Z3 (I)
其中
Z1是半胱氨酸或丝氨酸(也可以用(C/S)表示)；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基(也可以用(P/A)表示)；
Z3是碱性氨基酸，并且可以是精氨酸(R)，赖氨酸(K)或组氨酸(H)，通常是赖氨酸)，或脂肪族氨基酸(丙氨酸(A)，甘氨酸(G)，亮氨酸(L)，缬氨酸(V)，异亮氨酸(I)或脯氨酸(P)，通常为A，G，L，V或I；
X1存在或不存在，并且当存在时，可以是任何氨基酸，但通常是脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，不同于芳族氨基酸或带电荷的氨基酸)，通常为L，M，V，S或T，更通常为L，M，S或V，条件是当硫酸酯酶基序位于抗体链的N末端时，X1存在；和
X2和X3可独立地为任何氨基酸，但通常为脂肪族氨基酸，极性不带电荷的氨基酸或含硫氨基酸(例如，除芳族氨基酸或带电荷的氨基酸外)，通常为S，T，A，V，G或C，更通常是S，T，A，V或G。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序具有下式：
X1Z1X2Z2X3R (Ia).
通常，在FGE对硫酸酯酶基序起作用后，Z1被氧化以产生2-甲酰甘氨酸(FGly)残基。在FGE介导的转化和与抗微生物肽的反应性伴侣反应之后，上式中Z1处的FGly位置与抗微生物肽共价结合。在一个实施方式中，反应性伴侣是α-亲核试剂，例如氨氧基或酰肼基，并且提供抗体分子与抗微生物肽的连接，例如通过肟或腙键。在一个实施方式中，抗体分子和抗微生物肽不通过酰胺键连接，如可以在基于重组融合蛋白技术的其他药物偶联物中发现的。
在一个实施方式中，醛标签存在于抗体链的N末端以外的位置，并且上式的X1由抗体分子的天然氨基酸序列的氨基酸残基提供。在一个实施方式中，当存在于抗体分子链的N-末端以外的位置时，硫酸酯酶基序具有下式：
(C/S)X1(P/A)X2Z3 (II)
其中X1和X2可独立地为任何氨基酸，但通常为脂肪族氨基酸，极性不带电荷的氨基酸或含硫氨基酸(例如，除芳族氨基酸或带电荷的氨基酸外)，通常为S，T，A，V或C，更通常是S，T，A或V。式II中的Z3如上定义。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序具有下式：
(C/S)X1(P/A)X2R (IIa)
硫酸酯酶基序可以在序列的N-和C-末端的一个或两个处含有额外的残基，例如，使得醛标签包括硫酸酯酶基序和“辅助基序”。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序在C-末端(例如，在上式中的精氨酸残基后)包含任选的辅助基序AALLTGR(SEQ ID NO：170)，SQLLTGR(SEQ ID NO：171)，AAFMTGR(SEQ ID NO：172)，AAFLTGR(SEQ ID NO：173)，SAFLTGR(SEQ IDNO：174)，ASILTGK(SEQ ID NO：175)，VSFLTGR(SEQ ID NO：176)，ASLLTGL(SEQ ID NO：177)，ASILITG(SEQ ID NO：178)，VSFLTGR(SEQ ID NO：176)，SAIMTGR(SEQ ID NO：179)，SAIVTGR(SEQ ID NO：180)，TNLWRG(SEQ ID NO：181)，TNLWRGQ(SEQ ID NO：182)，TNLCAAS(SEQ IDNO：183)，VSLWTGK(SEQ ID NO：184)，SMLLTG(SEQ ID NO：185)，SMLLTGN(SEQ ID NO：186)，SMLLTGT(SEQ ID NO：187)，ASFMAGQ(SEQ ID NO：188)或ASLLTGL(SEQ ID NO：177)(参见，例如，Dierks等，(1999)EMBO J 18(8):2084-2091)，或GSLFTGR(SEQ ID NO：189)的氨基酸序列的1，2，3，4，5，6或所有7个连续残基。在一个实施方式中，醛标签不含有氨基酸序列CGPSR(M/A)S(SEQ ID NO：190)或CGPSR(M/A)(SEQ ID NO：191)，其可以作为膦酸单酯水解酶中的天然氨基酸序列存在。
通常选择醛标签的硫酸酯酶基序以能够通过选择的FGE进行转化。在一个实施方式中，FGE存在于其中表达醛标记的抗体分子的宿主细胞中。在另一个实施方式中，FGE在无细胞方法中与醛标记的抗体分子接触。
通常，易受真核FGE转化的硫酸酯酶基序含有半胱氨酸和脯氨酸(例如，分别在上述式I中的Z1和Z2处的半胱氨酸和脯氨酸(例如，X1CX2PX3R)；上述式II中的CX1PX2R)并且被“SUMF1型”FGE修饰(如例如Cosma等，Cell2003,113,(4),445-56；Dierks等，Cell 2003,113,(4),435-44中所述)。易受原核FGE转化的硫酸酯酶基序在硫酸酯酶基序中含有半胱氨酸或丝氨酸，以及脯氨酸(例如，上述式I中Z1处的半胱氨酸或丝氨酸，以及Z2处的脯氨酸(例如，上述式II中的X1(C/S)X2PX3R)；(C/S)X1PX2R)分别通过“SUMF1型”FGE或“AtsB型”FGE进行修饰(例如，如Szameit等，J Biol Chem 1999,274,(22),15375-81中所述)。易受原核FGE转化的其他硫酸酯酶基序在硫酸酯酶基序中含有半胱氨酸或丝氨酸，以及脯氨酸或丙氨酸(例如，Z1处的半胱氨酸或丝氨酸，以及Z2处的脯氨酸或丙氨酸，例如，SX1AX2R；X1CX2PX3Z3；X1SX2PX2Z3；X1CX2AX3Z3；X1SX2AX3Z3；CX1PX2Z3；SX1PX2Z3；CX1AX2Z3；SX1AX2Z3(在上述式I)；CX1PX2Z3(在上述式II)；X1CX2PX3R；X1SX2PX2R；X1CX2AX3R；X1SX2AX3R(在上述式Ia)；CX1PX2R；SX1PX2R；CX1AX2R；SX1AX2R(在上述式IIa)，并且易于修饰，通过例如可以通过厚壁菌门(例如，产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens))的FGE进行修饰，如Berteau等，J.Biol.Chem.2006；281:22464-22470所述)。
在一个实施方式中，FGE是真核FGE(例如，哺乳动物FGE，例如人FGE)，并且硫酸酯酶基序具有下式：
X1CX2PX3Z3 (III)
其中
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，但通常是脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，不同于芳族氨基酸或带电荷的氨基酸)，通常为L，M，S或V，条件是当硫酸酯酶基序位于抗体链的N末端时，X1存在；
X2和X3独立地是任何氨基酸，但通常是脂族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，除芳族氨基酸或带电荷的氨基酸外)，通常为S，T，A，V，G或C，更通常为S，T，A，V或G；和
Z3是碱性氨基酸(可以不是精氨酸(R)，并且可以是赖氨酸(K)或组氨酸(H)，通常是赖氨酸)，或脂肪族氨基酸(丙氨酸(A)，甘氨酸(G)，亮氨酸(L)，缬氨酸(V)，异亮氨酸(I)或脯氨酸(P)，通常为A，G，L，V或I，其中式IIIa中的Z3为精氨酸(R)。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序具有下式
X1CX2PX3R (IIIa).
例如，示例性硫酸酯酶基序包括但不限于LCTPSR(SEQ ID NO：169)，MCTPSR(SEQID NO：192)，VCTPSR(SEQ ID NO：193)，LCSPSR(SEQ ID NO：194)，LCAPSR(SEQ ID NO：195)，LCVPSR(SEQ ID NO：196)，LCGPSR(SEQ ID NO：197)，ICTPAR(SEQ ID NO：198)，LCTPSK(SEQID NO：199)，MCTPSK(SEQ ID NO：200)，VCTPSK(SEQ ID NO：201)，LCSPSK(SEQ ID NO：202)，LCAPSK(SEQ ID NO：203)，LCVPSK(SEQ ID NO：204)，LCGPSK(SEQ ID NO：205)，LCTPSA(SEQID NO：206)，ICTPAA(SEQ ID NO：207)，MCTPSA(SEQ ID NO：208)，VCTPSA(SEQ ID NO：209)，LCSPSA(SEQ ID NO：210)，LCAPSA(SEQ ID NO：211)，LCVPSA(SEQ ID NO：212)和LCGPSA(SEQID NO：213)。
如下文更详细描述的，转化的醛标记的抗体分子与感兴趣的部分的反应性伴侣反应，以提供感兴趣的部分与转化的醛标记的抗体分子的FGly残基之间的偶联，以及产生修饰的多肽(例如，本文所述的ADC)。具有修饰的醛标签的修饰的抗体分子通常通过包含具有下式的修饰的硫酸酯酶来描述：
X1(FGly’)X2Z2X3Z3 (I′)
其中
FGly’是具有共价连接的部分(例如，本文所述的抗微生物肽)的甲酰甘氨酸残基；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基(也可以用(P/A)表示)；
式I'中的Z3是碱性氨基酸，并且可以是精氨酸(R)(如式Ia'中)，赖氨酸(K)或组氨酸(H)，通常是赖氨酸)，或脂肪族氨基酸(丙氨酸(A)，甘氨酸(G)，亮氨酸(L)，缬氨酸(V)，异亮氨酸(I)或脯氨酸(P)，通常为A，G，L，V或I；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，但通常是脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，不同于芳族氨基酸或带电荷的氨基酸)，通常为L，M，V，S或T，更通常为L，M或V，条件是当硫酸酯酶基序位于抗体链的N末端时，X1存在；和
其中X2和X3可独立地为任何氨基酸，但通常为脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，除芳族氨基酸或带电荷的氨基酸外)，通常为S，T，A，V，G或C，更通常是S，T，A，V或G。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序具有下式：
X1(FGly’)X2Z2X3R (Ia′)
示例性的转化的硫酸酯酶基序包括但不限于L(FGly)TPSR(SEQ ID NO:214)，M(FGly)TPSR(SEQ ID NO:215)，V(FGly)TPSR(SEQ ID NO:216)，L(FGly)SPSR(SEQ ID NO:217)，L(FGly)APSR(SEQ ID NO:218)，L(FGly)VPSR(SEQ ID NO:219)，L(FGly)GPSR(SEQ IDNO:220)，I(FGly)TPAR(SEQ ID NO:221)，L(FGly)TPSK(SEQ ID NO:222)，M(FGly)TPSK(SEQID NO:223)，V(FGly)TPSK(SEQ ID NO:224)，L(FGly)SPSK(SEQ ID NO:225)，L(FGly)APSK(SEQ ID NO:226)，L(FGly)VPSK(SEQ ID NO:227)，L(FGly)GPSK(SEQ ID NO:228)，L(FGly)TPSA(SEQ ID NO:229)，M(FGly)TPSA(SEQ ID NO:230)，V(FGly)TPSA(SEQ ID NO:231)，L(FGly)SPSA(SEQ ID NO:232)，L(FGly)APSA(SEQ ID NO:233)，L(FGly)VPSA(SEQ ID NO:234)，和L(FGly)GPSA(SEQ ID NO:235)。
通过与FGly残基的醛反应共价偶合至抗微生物肽的示例性抗体分子可包括具有上述氨基酸序列但具有修饰的FGly(以上由FGly'表示)代替未修饰的FGly的那些抗体分子。
修饰抗体分子以含有醛标签
可以通过插入(例如，在天然氨基酸序列内提供5或6个氨基酸残基插入)和/或通过添加(例如，在抗体链的N-或C-末端)可以在抗体分子(例如，抗体重链或轻链或其片段)中提供醛标签。还可以通过用醛标签的连续氨基酸序列完全或部分取代抗体分子的天然氨基酸残基来提供醛标签。例如，通过用醛标签的相应氨基酸残基取代天然氨基酸序列的1，2，3，4，5或6个氨基酸残基，可以在抗体分子中提供5或6个氨基酸残基的异源醛标签。
可以使用重组分子遗传技术来修饰抗体分子以包括一个或多个醛标签，例如，以产生编码所需醛标记的多肽的核酸。或者，可以使用非重组技术添加醛标签，例如，使用天然化学连接或假天然化学连接，例如，将醛标签添加到多肽的C末端(例如在美国专利号6,184,344，6,307,018，6,451,543和6,570,040；和Rush等，(2006年1月5日)Org Lett.8(1):131-4中所述)。
醛标签可以位于抗体分子内的任何合适位置。在一个实施方式中，醛标签的位点对于通过FGE转化并随后在FGly处修饰而言是可及的，或可(例如，通过使多肽变性)使其可及。抗体分子可包括多个醛标签，例如2，3，4，5，6，7，8或更多个醛标签。在一个实施方式中，所述多个醛标签中的至少两个(例如所有)醛标签是相同的。在另一个实施方式中，所述多个醛标签中的至少一个醛标签与所述多个醛标签中的另一个醛标签不同。
含多个醛标签的抗体分子
多个醛标签可以位于醛标记的抗体分子中，例如，以将标签分布在抗体分子的表面上。
在一个实施方式中，醛标签在抗体分子中通过抗体分子天然的氨基酸残基间隔开。在另一个实施方式中，醛标签通过接头间隔开，其中接头具有与抗体分子异源的氨基酸序列。
在一个实施方式中，醛标签在醛标记的抗体分子中以2，3，4或更多个醛标签的多联构建体提供，其中表达构建体因此编码修饰的抗体分子的连续序列中2，3，4或更多个硫酸酯酶基序，其中硫酸酯酶基序通过接头间隔开。例如，可以选择接头以在醛标签之间提供柔性，从而允许共价结合的抗微生物肽的旋转，例如，以增强ADC表面上生物活性抗微生物肽的呈递。此类接头也可用于醛标签不以多联体形式提供的情况，例如，其中醛标签位于抗体链的C-或N-末端。醛标签，包括以多联体形式提供的那些标签，可以位于抗体链的C末端处或附近，抗体链的N末端处或附近，和/或抗体分子的一个或多个溶剂可及的环处。
可以例如根据所用的醛标签，多联体中醛标签的数量，所需的柔性程度或其组合来选择接头。接头的长度可以变化，例如，约2-50，3-25，4-23，5-20，6-18，7-16，8-14或9-12个氨基酸。示例性柔性接头包括但不限于甘氨酸聚合物(G)n，甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如(GS)n，(GSGGS)n(SEQ ID NO:236)和(GGGS)n(SEQ ID NO:237)，其中n是至少1的整数)，甘氨酸-丙氨酸聚合物，丙氨酸-丝氨酸聚合物和其他柔性接头，例如振荡器钾通道的系链。甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物是令人感兴趣的，因为这两种氨基酸都是相对非结构化的，因此可以用作组分之间的中性系链。甘氨酸聚合物是特别令人感兴趣的，因为甘氨酸比甚至丙氨酸获得显着更多的空间，并且更长侧链带来限制少得多的tan残基(参见Scheraga，Rev.Computational Chem.11173-142(1992))。示例性的柔性接头包括但不限于GGSGG(SEQ ID NO：238)，GSGSG(SEQ ID NO：239)，GSGGG(SEQ ID NO：240)，GGGSG(SEQ IDNO：241)或GSSSG(SEQ ID NO：242)。其他接头可以由非氨基酸键组成。聚乙二醇(PEG)重复(例如，EG2，EG3，EG4或EG6)是特别令人感兴趣的，因为PEG重复与生物分子几乎没有非特异性结合。
含有接头的多联体醛标签构建体可以通过以下通式描述：T1-Ln-T2，其中T1和T2是如本文所述的相同或不同的醛标签(例如，式I，Ia，I'，Ia'，II，IIa，III和IIIa)，L是连接肽，并且n是1或更大的整数，例如2，3，4，5，6，7，8或更大。含有接头的多联体醛标签的示例性氨基酸序列是LCTPSRGGGGLCTPSR(SEQ ID NO：243)，其中半胱氨酸(C)通过FGE的作用被修饰成FGly，并且可以与含有反应性伴侣的抗微生物肽反应以提供如本文所述的共价结合的抗微生物肽。
醛标签可以定位在抗体分子中以在折叠时考虑其结构(例如，在无细胞环境中，通常是无细胞生理环境中)，例如，在折叠的抗体分子中的溶剂可及位点处提供醛标签。因此，溶剂可及的醛标签可以在折叠的、未转化的醛标记的抗体分子中可及，以可接近FGE以将丝氨酸或半胱氨酸转化为FGly和/或转化为反应性伴侣试剂用于偶联抗微生物肽。当醛标签位于溶剂可及位点时，可以在不需要使蛋白质变性的情况下进行无细胞FGE介导的转化和通过与反应性伴侣反应的部分修饰。溶剂可及位点还可包括当在宿主细胞中表达时在细胞外或细胞内细胞表面暴露的多肽区域。
因此，可以在独立地选自例如溶剂可及的N-末端，溶剂可及的N-末端区域，溶剂可及的C-末端，溶剂可及的C-末端区域和/或环结构的位点处提供一个或多个醛标签。在一个实施方式中，醛标签位于抗体链的C末端以外的位点。在一个实施方式中，两个或更多个醛标签位于重链中，例如，在CH1，CH2或CH3中的一个，两个或全部中。在一个实施方式中，抗体分子的轻链不含醛标签。
在一个实施方式中，醛标签位点位于亲本抗体分子(例如，天然存在的位点)中翻译后修饰的位点。例如，醛标签可以在天然抗体分子中的糖基化(例如N-糖基化，O-糖基化)，磷酸化，硫酸化，泛素化，酰化，甲基化，异戊烯化，羟基化或羧化的位点处引入。在一个实施方式中，翻译后修饰的位点被工程改造(例如，通过重组技术)并且不在抗体分子中天然存在。
在一个实施方式中，醛标记的抗体分子包含醛标记的Fc片段。具有单个和多个醛标签的示例性醛标记的小鼠IgG1 Fc片段，包括含有醛标签多联体的示例性醛标记的Fc片段，其具有通过接头间隔开的两个醛标签，描述于美国专利号9,238,878中。
甲酰甘氨酸生成酶(FGE)
甲酰甘氨酸生成酶(FGE)是将硫酸酯酶基序中的半胱氨酸或丝氨酸氧化成FGly的酶。如本文所用，FGE包括将在硫酸酯酶基序中的半胱氨酸(C)转化为FGly的酶，以及将硫酸酯酶基序(也称为Ats-B样)中的丝氨酸(S)转化为FGly的酶。
可以根据醛标签中存在的硫酸酯酶基序选择用于促进多肽醛标签的硫酸酯酶基序中半胱氨酸或丝氨酸向FGly转化的FGE。FGE对于其中表达醛标记的多肽的宿主细胞可以是天然的，或者可以对宿主细胞进行遗传修饰以表达合适的FGE。真核生物硫酸酯酶通常在其硫酸酯酶基序中含有半胱氨酸并且被“SUMF1型”FGE修饰(Cosma等，Cell 2003,113,(4),445-56；Dierks等，Cell 2003,113,(4),435-44)。原核生物硫酸酯酶通常在其硫酸酯酶基序中含有半胱氨酸或丝氨酸，并分别通过“SUMF1型”FGE或“AtsB型”FGE进行修饰(Szameit等，J Biol Chem 1999,274,(22),15375-81)。已经在结核分枝杆菌(例如，GenBank登录号NP-215226(gi：15607852)和国际公开号WO 2008/036350)中，在后口动物中，包括脊椎动物和棘皮动物(例如，Pepe等，Cell 2003；113,445-456,Dierks等，(2003)Cell 113,435-444；Cosma等，Hum.Mutat.2004；23,576-581)描述了FGE。编码多个FGE的核酸是本领域已知的并且容易获得(例如，Preusser等，J.Biol.Chem.2005；280(15):14900-10；Fang等，JBiol.Chem.2004；79(15):14570-8；Landgrebe等，Gene.2003；316:47-56；Dierks等，FEBSLett.1998；423(1):61-5；Dierks等，Cell.2003；113(4):435-44；Cosma等，Cell 2003；113(4):445-56；Baenziger Cell 2003；113(4):421-2(综述)；Dierks等，Cell.2005；121(4):541-52；Roeser等，Proc Natl Acad Sci USA 2006；103(1):81-6；Sardiello等，HumMol.Genet.2005；14(21):3203-17；GenBank登录号NM182760；国际公开号WO 2004/072275和WO 2008/036350)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序与人FGE(例如，SUMF1型FGE，如Cosma等，Cell 2003；113,445-56；Dierks等，Cell 2003；113,435-44中所述)相容。在一个实施方式中，醛标记的抗体分子在表达FGE的人细胞中或在宿主细胞中表达，所述宿主细胞通常是哺乳动物细胞，经遗传修饰以表达人FGE。当使用无细胞方法转化含硫酸酯酶基序的抗体分子时，可以使用分离的FGE。
转化和修饰醛标签的方法
存在于醛标记的抗体分子中的醛标签的转化可以通过基于细胞的方法或无细胞方法完成。
在一个实施方式中，醛标记的抗体分子的醛标签的转化可以通过在含有合适的FGE的细胞中表达醛标记的蛋白质来实现。例如，醛标签的半胱氨酸或丝氨酸的转化可以在宿主细胞中翻译期间或之后发生。宿主细胞的FGE对于宿主细胞可以是内源的，或者宿主细胞可以是针对与宿主细胞异源的合适的FGE重组的。FGE表达可以由FGE基因内源的表达系统提供(例如，表达由存在于宿主细胞的天然FGE基因中的启动子和其他控制元件提供)，或者可以由来自重组表达系统的表达系统提供，其中FGE编码序列与异源启动子可操作地连接以提供组成型或诱导型表达。适于用于实现反应性伴侣部分与醛标记的抗体分子的偶联的条件类似于Mahal等，Science 1997；276(5315):1125-8中描述的那些。
在另一个实施方式中，醛标记的抗体分子的醛标签的无细胞转化可以通过在适于将醛标签的硫酸酯酶基序的半胱氨酸或丝氨酸转化为FGly的合适条件下使醛标记的抗体分子与FGE接触来实现。例如，编码醛标记的多肽的核酸可以在合适的FGE存在下在体外转录/翻译系统中表达，以提供转化的醛标记的抗体分子的产生。
或者，可以在缺乏合适的FGE的宿主细胞中重组产生或通过合成产生后分离分离的未转化的醛标记的抗体分子。然后将分离的醛标记的抗体分子与合适的FGE在一定条件下接触以提供醛标签转化。醛标记的抗体分子可以通过本领域已知的方法展开(例如，使用加热，调节pH，离液剂(例如尿素)，有机溶剂(例如，烃：辛烷，苯或氯仿)和用合适的FGE接触的变性蛋白质。然后醛标记的抗体分子在合适的条件下重折叠。
类似地，醛标记的抗体分子的转化醛标签的修饰可以通过基于细胞或无细胞的方法完成。例如，转化的醛标记的抗体分子可以从生产来源(例如，重组宿主细胞生产，合成生产)中分离，并在适于提供反应性伴侣的部分与醛标签的FGly偶联的条件下与含反应性伴侣的抗微生物肽接触。
修饰肽以含有供与2-甲醛甘氨酸反应的反应性伴侣的方法
可以修饰待与醛标记的抗体分子偶联的抗微生物肽，以掺入反应性伴侣用于与醛标记的抗体分子的FGly残基的醛反应。
由于醛标记的抗体修饰方法与常规化学方法相容，因此可以使用多种市售试剂中的任何一种来完成偶联。例如，许多感兴趣的部分的氨氧基，酰肼，肼或氨基硫脲衍生物是合适的反应性伴侣，并且易于获得或可以使用标准化学方法产生。
在一个实施方式中，反应性部分(例如，氨氧基或酰肼)可位于N-末端区域，N-末端，C-末端区域，C-末端或肽内部的位置。例如，肽可以由Boc保护的前体合成。肽的氨基可以与包含羧酸基团和氧基-N-Boc基团的化合物(例如3-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基氧基)丙酸)反应。包含羧酸基团和氧基-N保护基团的化合物的其他变化可包括不同数目的亚烷基接头中的碳和亚烷基接头上的取代基。肽的氨基与包含羧酸基团和氧基-N保护基团的化合物之间的反应通过标准肽偶联化学发生。可以使用的肽偶联试剂的实例包括但不限于DCC(二环己基碳二亚胺)，DIC(二异丙基碳二亚胺)，二对甲苯酰基碳二亚胺，BDP(1-苯并三唑二乙基磷酸-1-环己基-3-(2-吗啉基乙基)碳二亚胺)，EDC(1-(3-二甲基氨基丙基-3-乙基-碳二亚胺盐酸盐)，氰尿酰氟，氰尿酰氯，TFFH(四甲基氟代脲六氟磷酸盐)，DPPA(二苯基磷酰肼)，BOP(苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐)，HBTU(O-苯并三唑-1-基-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐)，TBTU(O-苯并三唑-1-基-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸盐)，TSTU(O-(N-琥珀酰亚胺基)-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸盐)，HATU(N-[(二甲基氨基)-1-H-1,2,3-三唑并[4,5,6]-吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物)，BOP-Cl(双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯)，PyBOP((1-H-1,2,3-苯并三唑-1-基氧基)-三(吡咯烷基)鏻四氟磷酸盐)，BrOP(溴代三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐)，DEPBT(3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮)，PyBrOP(溴代三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐)。
可以对包含N-保护基团的肽进行脱保护以暴露氨基-氧基官能团。例如，根据环酰胺基团的标准脱保护条件，发生N-氧基琥珀酰亚胺基团的脱保护。脱保护条件可以在Greene和Wuts，《有机化学中的保护性基团》(Protective Groups in OrganicChemistry)，第三版，1999,约翰威利父子公司(John Wiley&Sons)，纽约州和Harrison等中找到。某些脱保护条件包括肼试剂，氨基试剂或硼氢化钠。例如，Boc保护基团的脱保护可以用TFA进行。用于脱保护的其他试剂包括但不限于肼，甲基肼，苯肼，硼氢化钠和甲胺。产物和中间体可通过常规方法纯化，例如HPLC纯化。
在一个实施方式中，偶联反应在低于7的pH下进行，pH为约5.5，约6或约6.5。当用活细胞中存在的醛标记的抗体分子进行偶联时，选择条件以在生理学上相容。例如，可以暂时滴加pH足够的时间以允许反应发生，但是在具有醛标签的细胞(例如，约30分钟至1小时)耐受的时间内。在细胞表面上进行醛标记的抗体分子修饰的生理条件可以类似于在带有细胞表面叠氮化物的细胞的修饰中用于酮-叠氮化物反应的那些(例如，美国专利号6,570,040)。
示例性位点特异性ADC
在一个实施方式中，ADC用一种或多种共价偶合的抗微生物肽进行位点特异性修饰。含反应性伴侣的抗微生物肽与蛋白质的醛标签的反应的位点特异性允许产生具有多个化学偶联位点的蛋白质，因此提供用于产生ADC的支架具有每蛋白质比率所需的肽有效载荷。在一个实施方式中，醛标签在醛标记的蛋白质中的相对位置可以被设计为在最终ADC的表面上提供共价结合的抗微生物肽的所需呈递，从而允许控制所展示的肽有效载荷的空间取向。
在一个实施方式中，用于将抗微生物肽连接至抗体分子的醛标签的化学修饰的位点特异性质可用于提供包含基本上同源的群体ADC的组合物。此类ADC可以提供对药物递送的化学计量的控制。这种同质群体包括群体中的60％或更多，例如70％或更多，75％或更多，80％或更多，85％或更多，90％或更多，95％或更多的ADC具有相同的抗微生物肽有效载荷与抗体分子比率的那些群体。
在一个实施方式中，本公开的ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和一种或多种共价结合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含下式的修饰的硫酸酯酶基序：
X1(FGly′)X2Z2X3Z3
其中FGly’具有下式：
HIPS化学，
其中J1是共价结合的抗微生物肽；
各L1是二价部分，其独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚烯基，取代的亚烯基，亚炔基，亚炔基，亚芳基，取代的亚芳基，亚环烷基，取代的亚环烷基，亚杂芳基，取代的亚杂芳基，亚杂环基，取代的亚杂环基，酰基，酰氨基，酰氧基，亚氨酯基，硫酯，磺酰基，磺酰胺，磺酰基酯，-O-，-S-，-NH-和取代的胺；
n是选自0到40的数字；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当硫酸酯酶基序位于多肽的N-末端时，X1存在；
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸，和
其中当处于折叠状态时，抗体分子在溶剂可及的表面上呈现共价结合的药物。可以如上所述进一步定义X1，X2，Z2，X3和Z3。
在一个实施方式中，ADC通过HIPS化学连接形成(例如，如图27中所述)。
在一个实施方式中，可以设计醛标记的蛋白质以提供多个化学偶联位点，例如，提供用于产生具有每蛋白质比率的所需药物有效载荷的ADC的支架。本公开的ADC通常包含至少2个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)具有共价结合的抗微生物肽的修饰的硫酸酯酶基序。本公开的ADC可以在ADC中提供4个或更多个，5个或更多个，或6个或更多个共价结合的抗微生物肽。因此，本公开的ADC包括肽有效载荷与抗体分子比率为至少2:1，至少3:1，至少4:1，至少5:1，至少6:1，至少7:1，或至少8:1的那些。
醛标签在醛标记的抗体分子中的相对位置可以设计为在最终ADC的表面上提供所需的共价偶合的抗微生物肽的呈递。该特征允许控制所展示的药物有效载荷在最终ADC表面上的空间取向。含有多个醛标签的ADC，其可包括由如本文所述的柔性接头间隔开的多联体醛标签，可提供例如更大的药物有效载荷:抗体分子比率和增强的药物向存在ADC的生理环境中的呈递。在一个实施方式中，ADC可以描述为修饰的抗体分子，其用与抗体分子共价偶合抗微生物肽“装饰”，例如通过肟或腙键与抗体分子的主链连接。
例如，醛标签可以位于ADC中抗体链的N-末端，抗体链的C-末端和抗体分子的溶剂可及的环处。如上所述，醛标签可任选地与接头，例如柔性接头连接。多个醛标签可以定位于抗体分子或抗体链的特定区域(例如，在溶剂可及的环，N-末端区域(包括N-末端)，C-末端区域(包括C-末端)中的一个或多个中提供)，或可以分布在折叠的修饰的抗体分子的溶剂可及的表面区域上。在一个实施方式中，至少一个醛标签位于重链恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个，两个或全部)，轻链恒定区或两者。
在一个实施方式中，醛标签间隔开，使得最终ADC具有共价偶合的抗微生物肽，其间隔距离足以避免共价偶合的抗微生物肽之间的相互作用，例如，使得肽不相互接触或以其他方式干扰他们各自的生物活性。
制备ADC的方法
本公开内容提供了含有FGly的醛标记的抗体分子与含有反应性伴侣的抗微生物肽的偶联以提供具有所需肽有效载荷与抗体分子比率的ADC的方法。
在一个实施方式中，本文所述的方法涉及在适于促进醛标记的抗体分子的FGly的醛与肽的反应性伴侣之间反应的条件下，在反应混合物中将含FGly的醛标记的抗体分子与含反应性伴侣的抗微生物肽(例如，含氨氧基或酰肼的肽)组合，从而产生具有与抗体分子的主链共价偶合的肽的ADC的反应产物，例如，通过肟键，酰肼键或其他醛特异性化学物质，例如还原胺化或维蒂希反应。
在产生醛标记的抗体分子后，使用本领域可用的多种技术中的任一种(例如，色谱法，例如HPLC，FPLC或免疫亲和纯化)分离。在一个实施方式中，抗体分子含有免疫标签(例如，His标签，FLAG标签)，通常位于N-或C-末端以促进在与药物偶联之前的分离和纯化。用于与抗微生物肽的偶联反应的含有FGly的醛标记的抗体分子可以以变性形式提供，或者可以在反应混合物中联合之前折叠。通常，含有FGly的醛标记的抗体分子以折叠形式在偶联反应混合物中提供。当从表达醛标记的抗体分子和相容的FGE的细胞获得时，含有FGly的醛标记的抗体分子可以折叠形式从细胞中分离，或者在分泌时从培养上清液中分离。需要时，蛋白质折叠的方法在本领域中是可获得的，并且可以容易地应用于本文所述的方法。
在一个实施方式中，分离具有FGly残基的醛标记的蛋白质。在一个实施方式中，纯化具有FGly残基的醛标记的蛋白质。在一个实施方式中，醛标记的蛋白质在反应混合物(例如，在缓冲溶液中)中与含有反应性伴侣的抗微生物肽组合。缓冲溶液可以处于生理或接近生理的pH，例如约5至7的pH，通常约6.5的pH。在一个实施方式中，含有反应性伴侣的抗微生物肽在反应混合物中以相对于含FGly的醛标记的蛋白质的醛部分过量提供，通常至少2，3，4，5，6，7，8，9，10倍或更多倍过量，例如，以促使反应完成。在向反应混合物中加入含反应性伴侣的抗微生物肽后，在合适的时间和温度条件下搅拌混合物(例如在室温下搅拌约2小时)。将得到的ADC与反应混合物分离，并可使用标准技术(例如色谱法，例如HPLC或FPLC)进一步纯化。
替代的ADC连接方法
本文所述的ADC可以通过许多不同的方法产生。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过赖氨酸偶联与抗体分子偶合(例如，使用表面暴露的赖氨酸作为抗体反应基团)。在一个实施方式中，抗体分子直接偶联抗微生物肽上的活化氨基酸。在另一个实施方式中，抗体分子上的赖氨酸被转化为硫醇反应性基团，并且具有硫醇反应性基团的抗体分子与硫醇化的抗微生物肽连接。在另一个实施方式中，抗体分子上的赖氨酸被转化为游离巯基，并且具有游离巯基的抗体分子被连接至巯基反应性抗微生物肽。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过链间二硫键(例如，使用连接HC-HC或HC-LC的二硫键)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，抗体分子的链间二硫键被还原，并且具有还原的链间二硫键的抗体分子被连接至巯基反应性抗微生物肽。
在一个实施方式中，使用非天然氨基酸(例如，用醛，叠氮化物或炔烃取代的氨基酸)将抗微生物肽偶合至抗体分子。在一个实施方式中，使用点击化学将抗体分子与抗微生物肽连接(Kolb等，Angew Chem Int Ed Engl.2001；40(11):2004-2021；Evans AustralianJournal of Chemistry.2007；60(6):384-395)。
在一个实施方式中，使用可生物降解的聚合物(例如，赖氨酸或巯基)将抗微生物肽偶合至抗体分子。在一个实施方式中，将抗微生物肽连接到可生物降解的聚合物上，并将聚合物连接到抗体分子上。
本文还提供了通过本文所述的方法制备的ADC。
评价候选物
本文所述的ADC可以使用许多体外测定来评估，包括例如1)杀细菌活性，2)调理吞噬活性，和3)膜破裂。
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，作用的双重机制，直接杀灭和调理吞噬活性(OPA)可以允许本文所述的ADC在正常或中性粒细胞减少患者中起作用。调理抗体通常通过与细菌表面结合，募集补体和吞噬细胞(例如嗜中性粒细胞)，然后吞噬细菌起作用。免疫受损的患者感染的风险最高，并且通常具有非常低水平的吞噬细胞。提供直接杀细菌作用机制的抗菌方法可以克服基于抗体的疗法的一些局限性，这些疗法集中于调理吞噬作用或补体介导的杀灭作为作用机制。还据信，在一个实施方式中，通过引入直接的，快速作用的杀细菌功能，本文所述的ADC可以克服几种耐药性机制。
杀细菌测定：ADC的直接杀灭活性可以针对两个充分描述的铜绿假单胞菌实验室菌株(PA14和PA01)和不少于三个铜绿假单胞菌临床菌株(包括MDR和泛耐药性菌株)进行测量。这些测定在不存在补体或效应细胞的情况下进行。该测定中的活性可以提供对ADC的固有杀灭活性的深入理解。
调理吞噬作用测定：可以针对与杀细菌活性相同的铜绿假单胞菌菌株测量ADC的杀灭活性，但这次存在补体和新鲜纯化的多形核白细胞。该测定中的活性可以提供关于ADC通过调理吞噬作用募集中性粒细胞和诱导细菌杀灭的能力的信息。
膜破裂：可以针对在杀细菌和调理吞噬作用测定中使用的相同铜绿假单胞菌菌株进行染料释放/摄取测定。测量ADC破坏细菌外膜的能力。该测定中的活性可以提供对ADC的分子作用机制的深入理解。
评价候选物：调理吞噬作用试验(OPA)
本文所述的抗体分子和抗体分子-药物偶联物(ADC)的候选物可例如通过调理吞噬作用试验(opsonophagocytosis assay)在体外评价它们的调理吞噬活性。
抗体介导的补体依赖性调理作用的试验描述于，例如，Hemachandra等，InfectImmun.2001；69(4):2223-2229。简而言之，可以通过流式细胞术测量抗体分子或ADC候选物调理细菌以供人多形核白细胞(PMN)摄取的能力。细菌经生长，热杀灭，和FITC标记。可以通过将标记的细菌与抗体分子或抗体分子-药物偶联物一起孵育来进行调理吞噬，其中有或没有来自无丙种球蛋白症患者的1％人血清作为补体来源。在含有6％葡聚糖和0.2％葡萄糖的PBS中洗涤细菌，然后将其重悬于含有0.1％明胶的汉克斯平衡盐溶液中。可以通过健康成人志愿者的静脉穿刺从外周人血液中分离PMN。将PMN重新悬浮以达到107个细胞/ml的浓度，并用每毫升细胞10μl 10-6稀释的N-甲酰基-Met-Leu-Phe(FMLP；加利福尼亚州圣卡洛斯的半岛实验室有限公司(Peninsula Laboratories，San Carlos，CA))活化30分钟。将PMN添加到每个调理的细菌调理细菌样品中，在37℃孵育，通过差速离心与游离细菌分离，并重悬于PBS中。PMN的单色流式细胞术分析可以使用FACScan和CellQuest软件(加利福尼亚州芒廷维尤的BD公司(Becton Dickinson，Mountain View，CA))进行，并且吞噬作用以每个样品的10,000PMN的平均荧光的相对单位表示。为了证明观察到的调理吞噬作用与细菌杀灭相关，可以使用另一种试验，其中将25,000CFU的活细菌与无丙种球蛋白症人血清，各种浓度的抗体分子或抗体分子-药物偶联物和106个如上所述获得的新鲜人PMN在RPMI培养基中混合(400ml终体积)。在37℃孵育90分钟的开始和结束时获取样品，之后稀释细菌，然后铺板用于细菌计数。
在一个实施方式中，可以针对与杀细菌活性相同的铜绿假单胞菌菌株测量ADC的杀灭活性，但这次存在补体和新鲜纯化的多形核白细胞。该试验中的活性可以提供关于ADC通过调理吞噬作用募集中性粒细胞和诱导细菌杀灭的能力的信息。
实施例1中还描述了示例性的调理吞噬作用试验。
评价候选物：最小抑制浓度确定
本文所述的抗微生物肽和抗体分子-药物偶联物(ADC)的候选物可例如通过确定最小抑制浓度(MIC)在体外评价其微生物抑制活性。
在一个实施方式中，MIC在人血清(例如，50％人血清)存在下确定，并且有时在本文中称为hsMIC。在一个实施方式中，在磷酸盐缓冲盐水(PBS)存在下确定MIC。在一个实施方式中，MIC或hsMIC基于每个ADC为基础确定。在一个实施方式中，MIC或hsMIC基于每个有效载荷或抗微生物肽为基础确定。在一个实施方式中，hsMIC与MIC的比率等于或小于2，例如，等于或小于1.5或1。
确定MIC的方法也描述于例如临床和实验室标准研究所,2012,《对有氧生长的细菌进行稀释抗菌药敏试验的方法；批准的标准》(Methods for dilution antimicrobialsusceptibility tests for bacteria that grow aerobically；approved standard)，第9版，M07-A8，第29卷，第2期，临床和实验室标准研究所，宾夕法尼亚州韦恩(Wayne，PA)。例如，可以根据CLSI指南，在96孔微量滴定板中使用2倍连续化合物稀释确定MIC。简言之，将化合物在母板上在水中稀释，然后将2μl冲压至测定板，每个待测试菌株一个板。将细菌菌株在37℃下在琼脂平板上过夜继代培养。过夜平板用于在0.85％盐水中制备0.5McFarland培养物。将这些浓缩的培养物在生长培养基中以1:200稀释至约5×105个细胞/ml。所有测定板每孔接受100μl稀释的培养物。将所有板置于37℃过夜。18小时后，使用镜面板读数器读取板并反射白炽灯光。在一些实施方式中，MIC可以定义为抑制生长至少80％的化合物的最低浓度。当通过眼睛阅读时，MIC及其以上的孔应该看起来没有生长。
用于确定MIC的示例性方法也描述于实施例2中。
评价候选物：体外细胞因子释放和Fc功能研究
可以在体外可溶性细胞因子释放测定中评估ADC刺激细胞因子释放的能力。例如，来自健康志愿者的人全血可以在37℃下与三种浓度的抗体分子和合适的对照一起孵育24小时。完成孵育后，可以分析样品中的一组细胞因子。相对于其他商业抗体，细胞因子释放曲线的没有影响可用作该研究的通过标准。
可以表征结合和介导效应功能的抗体分子的特征，例如抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒性，以确认候选ADC具有基于其对Fcγ受体和C1q的经典同种型结合特征的预期Fc效应功能。
动物模型
可以例如使用各种动物模型在体内评估本文所述的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)和抗微生物肽。例如，动物模型可用于测试本文所述的抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物在减少或抑制细菌感染中的功效。动物模型也可用于例如调查副作用，原位测量抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的浓度，证明在受控条件下细菌感染和细菌之间的相关性。
可用于评估本文所述的抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的示例性动物模型包括但不限于基础抗微生物筛选模型(例如，如Zak和O'Reilly，Antimicrob.AgentsChemother.1991；35(8):1527-1531中所述)；初级啮齿动物感染模型(例如，如Marra和Girard，Curr.Protoc.Pharmacol.2006；第13章:单元13A.4中所述)；离体模型(例如，如Zak和O'Reilly，Antimicrob.Agents Chemother.1991；35(8):1527-1531中所述)；单参数或判别模型(例如，如Zak和O'Reilly，Antimicrob.Agents Chemother.1991；35(8):1527-1531中所述)；伤口愈合的小鼠模型(例如，如Samy等，Methods Mol.Biol.2011；716:245-265中所述)；用于评估细菌迁移和定植的兔模型(例如，如Allan等，J.Biomed.Biotechnol.2012；2012:921617中所述)。抗微生物药物的药代动力学-药效学建模描述于例如Nielsen和Friberg，Pharmacol.Rev.2013；65(3):1053-1090。
可用于评估本文所述抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的示例性动物类型包括但不限于：小鼠、大鼠、兔、豚鼠以及猴。各种免疫抑制方法可用于增强接种用细菌的毒力。这些方法包括例如靶向骨髓(例如，通过辐射)，靶向中性粒细胞(例如，使用细胞抑制剂)，靶向巨噬细胞(例如，使用粘蛋白或面包酵母)，靶向补体(例如，使用眼镜蛇毒因子)，靶向促吞噬素(例如，通过脾切除术)，靶向免疫球蛋白(例如，使用抗Ig)，靶向T淋巴细胞(例如，通过胸腺切除术)，或靶向白细胞介素(例如，使用抗体或化学化合物)。可能影响体内试验中的抗细菌活性的其他考虑因素包括，例如接种物大小，毒力，体内生长或生成时间，治疗时间，给药方法，药代动力学/药效学，和体内耐药性的发展。
药物组合物和试剂盒/药盒
在一些方面，本公开提供了组合物，例如药学上可接受的组合物，其包括与药学上可接受的运载体一起配制的如本文所述的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)或抗微生物肽。
如本文所用，“药学上可接受的运载剂”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等等。优选地，运载体可适于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、直肠、脊柱，透皮或表皮给予(例如，通过注射或输注)。在某些实施方式中，药物组合物中少于约5％(例如少于约4％、3％、2％或1％)的抗体分子，ADC或抗微生物肽以聚集物形式存在。在另一些实施方式中，药物组合物中至少约95％(例如至少约96％、97％、98％、98.5％、99％、99.5％、99.8％或更多)的抗体分子，ADC或抗微生物肽以单体形式存在。在一些实施方式中，聚集物或单体水平通过色谱法(例如高效尺寸排阻色谱(HP-SEC))测定。
本文所述组合物可为各种形式。这些包括例如，液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如可注射和可输注溶液)、分散体或悬浮体、脂质体以及栓剂。合适的形式取决于目标给药模式以及治疗应用。通常合适的组合物为可注射或可输注溶液形式。合适的给药模式之一是胃肠道外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)。在一些实施方式中，抗体分子，ADC或抗微生物肽通过静脉内输注或注射给予。在某些实施方式中，抗体，ADC或抗微生物肽通过肌内或皮下注射给予。
本文所用术语“胃肠道外给药”和“经胃肠道外给予”表示除肠道和局部给药外的给药形式，通常通过注射，例如但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼内、心脏内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下(subcapsular)、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注给药。
在制备和储存条件下，治疗性组合物通常应无菌和稳定。可将组合物配制成溶液、微乳剂、分散体、脂质体或适合高抗体浓度的其他有序结构。可根据需要将在合适溶剂中的所需量活性化合物(即抗体或抗体部分)与上述组分中的一种或组合掺混，然后进行过滤灭菌，从而制备无菌注射液。通常，将活性活化物掺入含有碱性分散介质和上述其它所需成分的无菌载剂中制备分散剂。在制备无菌注射液的无菌粉剂时，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，由之前无菌过滤的溶液得到活性组分和任何其它所需组分的粉末。可维持溶液的合适流动性，例如通过使用诸如卵磷脂的涂层、在分散剂情况下通过保持所需粒度以及通过使用表面活性剂。组合物中包含延迟吸收的试剂如单硬脂酸盐和明胶可延长可注射组合物的吸收。
抗体分子ADC或抗微生物肽可以通过多种方法给予。本领域中已知数种，并且对于许多治疗性、预防性或诊断性应用，适当的给药途径/模式是静脉内注射或输注。例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽通过静脉内输注给药的速度可小于10毫克/分钟；优选小于或等于5毫克/分钟来达到约1～100毫克/平方米的剂量，优选约5～50毫克/平方米，约7～25毫克/平方米，更优选约10毫克/平方米。本领域熟练技术人员应当理解，给药的途径和/或方式根据所需结果而有所不同。在某些实施方式中，活性化合物可与运载体一起制备，该运载体将保护该化合物不被迅速释放，如控释制剂，包括植入体、透皮贴片和微包封递送系统。可利用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备此类制剂的许多方法已获得专利或为本领域技术人员熟知。参见例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems(《缓控释药物递送系统》)，J.R.Robinson编,Marcel Dekker公司，纽约，1978。
在某些实施方式中，可口服给予(例如与惰性稀释剂或可吸收食用运载体一起)抗体分子，ADC或抗微生物肽。抗体分子，ADC或抗微生物肽(以及按需的其他组分)也可容纳在硬或软壳明胶胶囊里、压缩成片剂、或直接掺混入对象的膳食中。对于口服治疗性给药，可将抗体分子，ADC或抗微生物肽与赋形剂混合，并以可摄取的片剂、口颊含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮剂、糖浆、薄片等形式使用。为了通过非胃肠道外给药途径的其他形式来给予抗体分子，ADC或抗微生物肽，可能需要用材料包覆化合物或将某种材料与该化合物共同给药，以防止该化合物失活。还可采用医疗装置来给予治疗性、预防性或诊断性组合物，本领域中已知数种此类装置。
给药方案经调整能提供所需反应(例如治疗、预防或诊断反应)。例如，可以是一次推注，按时间分次给药或根据治疗情况的紧急性成比例地降低或增加剂量。尤其有利的是配制成单位剂型的胃肠道外组合物以便于给药和剂量均一性。本文中单位剂型指作为单个剂量用于待治疗对象的物理上离散的单位，每个单位包含预定量的活性化合物与所需药物运载体，该预定量经测算能够产生所需治疗效果。本发明中剂量单位形式的规格取决于或直接依赖于(a)抗体分子，ADC或抗微生物肽的独特特性和待实现的具体治疗、预防或诊断效果，以及(b)此抗体分子，ADC或抗微生物肽配制相关领域关于应对个体敏感性的固有限制。
在一个实施方式中，将ADC作为单剂量给予于对象。本文所述的示例性ADC的体外研究证明，即使在不存在血清或效应细胞的情况下，对于铜绿假单胞菌，包括MDR菌株，在约10微克/mL或更低下具有快速杀细菌活性。此外，使用示例性ADC的体内研究证明了中性粒细胞减少的铜绿假单胞菌肺部感染模型中细菌计数的显著减少。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文描述的ADC的特异性和半衰期(例如，大约数天)可以允许ADC的单剂量给予，例如，病原体特异性抗菌药，针对铜绿假单胞菌，包括MDR/XDR菌株，同时促进抗菌药物管理，保留肠道微生物组，并限制耐药性的发展。
抗体分子，ADC或抗微生物肽的治疗、预防或诊断有效量的示例性非限制性范围为约0.1-100mg/kg，例如，0.1-50mg/kg或0.1-20mg/kg，例如，约1-10，1-5，5-10或1-3mg/kg，例如，约1，2，3，4，5，6，7，8，9或10mg/kg。例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽通过静脉内输注给药，速度可小于10毫克/分钟，例如小于或等于5毫克/分钟来达到约1～100毫克/平方米的剂量，例如约5～50毫克/平方米，约7～25毫克/平方米，约10毫克/平方米。需要注意的是，剂量值可能会根据待缓解病症的种类和严重程度而不同。需要理解，对于每个具体对象，应当随着时间根据个体需求以及给予组合物或监管组合物给予的人的专业判断来调节具体剂量方案，本文所列的剂量范围仅仅是示例性的，并不意在对所要求权利的组合物的范围或实施方式构成限制。
本文的药物组合物可包含“治疗有效量”、“预防有效量”或“诊断有效量”的抗体分子，ADC或抗微生物肽。
“治疗有效量”指按照一定剂量和必要时程能够实现所需治疗效果的量。抗体分子，ADC或抗微生物肽的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重等因素以及抗体或抗体部分在个体中引起所需反应的能力而不同。治疗有效量也是抗体分子，ADC或抗微生物肽的治疗有益效果胜过毒性或有害效果的量。相对于未治疗对象，“治疗有效剂量”通常使可测参数被抑制至少约20％，例如至少约40％，至少约60％或至少约80％。可测量的参数可以是例如细菌负荷，发热，头痛，肌肉或关节疼痛，皮疹，出血，血小板水平降低和血压降低。可以在预测减少，抑制或预防细菌感染的功效的动物模型系统中评估抗体分子，ADC或抗微生物肽抑制可测量参数的能力。或者，组合物的这种性质可以通过检测抗体分子，ADC或抗微生物肽抑制或降低细菌活力的能力来评估，例如通过本文所述的体外测定。
“预防有效量”是指按照一定剂量和必要时程能够有效实现所需预防效果的量。一般而言，由于预防剂量在疾病的早期或患病之前用于对象，预防有效量将小于治疗有效量。
“诊断有效量”指按照一定剂量和必要时程能够实现所需诊断效果的量。通常，诊断有效量是可体外、离体或体内诊断细菌感染或相关病症的量。
本公开内容还包括试剂盒/药盒，其包含本文所述的抗体分子，ADC或抗微生物肽。该试剂盒/药盒可包括一种或多种其他部分，包括：使用说明；其他试剂，例如标记物、治疗剂、可用于将将抗体分子，ADC或抗微生物肽螯合或偶合于标记物或治疗剂的试剂、辐射防护组合物/组分；用于制备用于给药的抗体分子，ADC或抗微生物肽的装置或其他材料；药学上可接受的运载体；以及用于向对象给药的装置或其他材料。
核酸
本公开的特征还在于包含编码抗体分子(例如，抗体分子的重链和轻链可变区和CDR)的核苷酸序列的核酸，抗体分子-药物偶联物(例如，抗体分子-药物偶联物的重链和轻链可变区和CDR)，或抗微生物肽，如本文所述。
例如，本公开内容的特征在于分别编码选自本文公开的一种或多种抗体分子的抗体分子(例如表1或8的抗体分子)或抗体分子的一部分(例如表1或8的可变区)的重链和轻链可变区的第一和第二核酸。核酸可包含编码本文表中任何一个氨基酸序列的核苷酸序列，或与其基本相同的序列(例如，序列与本文表中所示序列至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，或与其相差不超过3，6，15，30或45个核苷酸)。
在某些实施方式中，核酸可包含编码来自重链可变区的至少一个，两个或三个CDR的核苷酸序列，所述重链可变区具有本文表中列出的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。在一些实施方式中，核酸可包含编码来自轻链可变区的至少一个，两个或三个CDR的核苷酸序列，所述重链可变区具有本文表中列出的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。在一些实施方式中，核酸可包含编码来自重链和轻链可变区的至少一个，两个，三个，四个，五个或六个CDR的核苷酸序列，所述重链可变区具有本文表中列出的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。
在某些实施方式中，核酸可包含编码来自重链可变区的至少一个，两个或三个CDR的核苷酸序列，所述核酸具有表2中所示的核苷酸序列，与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交)。在一些实施方式中，核酸可包含编码来自轻链可变区的至少一个，两个或三个CDR的核苷酸序列，所述核酸具有表2中所示的核苷酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交)。在某些实施方式中，核酸可包含编码来自重链和轻链可变区的至少一个，两个，三个，四个，五个或六个CDR的核苷酸序列，所述核酸具有表2中所示的核苷酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交)。
在某些实施方式中，核酸包含表2中所示的核苷酸序列或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交)。在一些实施方式中，核酸包含表2中所示的核苷酸序列的一部分或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交)。该部分可编码例如可变区(例如VH或VL)；一个、两个或三个或更多个CDR；或一个、两个、三个、四个或更多个框架区。
在某些实施方式中，核酸包含编码表3或6A-6B或图4，15A-15B或36中所示的氨基酸序列的核苷酸序列或与其基本同源的序列(例如，与其至少约80％，85％，90％，95％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交)。在一些实施方式中，核酸包含编码表3或6A-6B或图4，15A-15B或36中所示的氨基酸序列的核苷酸序列的一部分或与其基本同源的序列(例如，与其至少约80％，85％，90％，95％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交)。
本文所述的核酸包括脱氧核糖核酸或核糖核酸或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果是单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包括修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可间插有非核苷酸组分。多核苷酸聚合后可以被进一步修饰，如通过与标记组分偶联。核酸可为重组多核苷酸、或基因组多核苷酸、cDNA、半合成或合成来源，即非天然存在或以非天然排列方式与另一多核苷酸相联。
在某些方面中，本申请的特征包括包含本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可存在于同一宿主细胞或非同一宿主细胞中的单个载体中或独立的多个载体中，详见下文。
载体
本文进一步提供了包含编码本文所述的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)或抗微生物肽的核苷酸序列的载体。在一些实施方式中，载体包含编码本文所述抗体分子的核苷酸。在一些实施方式中，载体包含本文所述的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。
可采用许多种载体系统。例如，一类载体利用DNA元件，这些元件衍生自动物病毒例如牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、痘苗病毒、杆状病毒、逆转录病毒(劳斯氏肉瘤病毒、MMTV或MOMLV)或SV40病毒。另一类载体利用衍生自RNA病毒的RNA元件，所述RNA病毒为例如塞姆利基森林病毒、东部马脑炎病毒和黄病毒。
此外，通过引入能够选择已转染宿主细胞的一种或多种标记物，可选择已将DNA稳定整合入其染色体中的细胞。该标记物可向营养缺陷型宿主提供例如原养型、杀生物剂(如抗生素)抗性或对重金属如铜等的抗性。选择性标记基因可直接联接于待表达的DNA序列，或者通过共同转化引入同一细胞内。mRNA的优化合成也可能需要其它元件。这些元件可以包括剪接信号，以及转录启动子、增强子和终止信号。
一旦制得用于表达的含构建体表达载体或DNA序列，可将表达载体转染或导入合适的宿主细胞。可用各种技术实现之，例如原生质体融合、磷酸钙沉淀、电致孔、逆转录病毒转导、病毒转染、基因枪、脂质转染或其他常规技术。在原生质体融合的情形下，可在培养基中使细胞生长，并筛选适当的活性。
培养所得转染细胞以及回收所产生的抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的方法和条件是本领域技术人员已知的，且可基于本文的描述，根据所用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞进行改变或优化。
细胞
本公开还提供了宿主细胞，其包含编码如本文所述的抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的核酸。例如，宿主细胞可以包含表2的核酸，与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交的序列)，或所述核酸之一的一部分。另外，宿主细胞可包含编码表1，3，6A-6B或8中所述的氨基酸序列的核酸，与其基本上同源的序列(例如，与其至少约80％，85％，90％，95％，99％或更多相同的序列)，或所述序列之一的一部分。
在一些实施方式中，宿主细胞经基因工程改造以包含编码抗体分子，ADC或抗微生物肽的核酸。
在某些实施方式中，采用表达盒对宿主细胞进行遗传工程化改造。术语“表达盒”是指能够影响与此类序列相容的宿主中基因表达的核苷酸序列。此类表达盒可包括启动子、含或不含内含子的开放阅读框、以及终止信号。还可以采用实现表达所必需或有帮助的其他因子，例如诱导型启动子。
本公开还提供了包含本文所述载体的宿主细胞。
细胞可为但不限于：真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于：Vero细胞、HeLa细胞、COS细胞、CHO细胞、HEK293细胞、BHK细胞和MDCKII细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于：Sf9细胞。
抗体分子，抗体分子-药物偶联物，和抗微生物肽的用途
本文公开的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)或抗微生物肽，以及本文公开的药物组合物，具有体外，离体和体内治疗，预防和/或诊断应用。
在一个实施方式中，抗体分子，ADC或抗微生物肽抑制或降低细菌(例如革兰氏阴性细菌)的活力。例如，这些分子可以给予于培养，体外或离体的细胞，或给予于对象，例如人对象，例如体内，以抑制或降低细菌，例如革兰氏阴性细菌的活力。因此，在一个方面，本公开内容提供了治疗或预防对象中细菌感染的方法，包括向对象给予本文所述的抗体分子，ADC或抗微生物肽，从而治疗或预防细菌感染。例如，这些抗体分子可以给予于培养的细胞，例如，体外或离体，或在对象体内的细胞，例如体内，以治疗，预防和/或诊断细菌感染，或抑制或减少细菌感染。
本文所用术语“对象”旨在包括人和非人动物。在一些实施方式中，对象是人对象，例如感染细菌，例如致病细菌，例如革兰氏阴性细菌，或有被细菌，例如致病细菌，例如，革兰氏阴性细菌感染的风险的人类患者。术语“非人动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类动物。在一些实施方式中，该对象是人。本文所述的方法和组合物适用于治疗感染细菌，例如引起疾病的细菌，例如革兰氏阴性细菌的人类患者。感染细菌，例如引起疾病的细菌，例如革兰氏阴性细菌的患者包括已经暴露于细菌但是(至少暂时)无症状的患者，患有细菌感染的患者，或患有与细菌感染相关的病症的患者。
治疗或预防细菌感染的方法
革兰氏阴性细菌在细菌的外膜上展示脂多糖(LPS)。尽管不希望受理论束缚，但在一个实施方式中，本文所述的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)或抗微生物肽可以至少部分地通过结合至LPS来抑制或降低革兰氏阴性细菌的活力。
本文所述的抗体分子，ADC和抗微生物肽可用于治疗或预防细菌感染，以及与细菌感染相关的病症，病症或症状。
在一个实施方式中，细菌感染由以下细菌中的一种或多种引起：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniaesubsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，细菌感染由以下一种或多种引起：屎肠球菌(Enterococcusfaecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
可与细菌感染相关的示例性病症或病症包括但不限于肺炎(例如，社区获得性肺炎和医院获得性细菌性肺炎)，尿路感染(UTI)，败血症，脑膜炎，腹泻(如旅行者腹泻)，软组织感染，皮肤感染，菌血症，呼吸系统感染(如下呼吸道感染)，心内膜炎，腹腔感染，化脓性关节炎，骨髓炎，中枢神经系统感染，眼科感染，胆囊炎，胆管炎，脑膜炎(如新生儿脑膜炎)，伤寒，食物中毒，肠胃炎，肠热，志贺菌病，血流感染，腹腔内败血症，脑脓肿，脑膜炎，败血症(如，新生儿败血症)，关节感染，骨感染，胃肠道感染或伤口感染。
本文所述的某些抗体分子，ADC和抗微生物肽能够治疗至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，25，30，35，40，50，100，200或更多种不同属，种，亚种和/或菌株的细菌(例如，革兰氏阴性细菌)。因此，在一个实施方式中，当未进行测试以确定细菌的属，种，亚种和/或菌株，例如感染或致病细菌的类型可能是未知的时，将抗体分子，ADC或抗微生物肽给予于感染细菌感染或具有感染细菌感染风险的患者。。
抗体分子，ADC或抗微生物肽通常以在患者系统中保持治疗有效水平的抗体分子，ADC或抗微生物肽的频度给药直至患者康复。例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽的给药频度可实现足以使至少约1、2、5、10、20、30或40种抗体分子，ADC或抗微生物肽结合各自细菌的血清浓度。在一个实施方式中，抗体分子，ADC或抗微生物肽每1，2，3，4，5，6或7天给予。
给予各种抗体分子，ADC或抗微生物肽的方法是本领域中已知的，并且如下所述。所用抗体分子，ADC或抗微生物肽的合适剂量将取决于对象的年龄和体重以及所用的具体药物。
抗体分子或抗微生物肽可以单独使用或与第二种试剂偶联，例如抗菌剂，毒素或蛋白质，例如第二种抗细菌(例如抗LPS)抗体分子或抗微生物肽。该方法包括：给予需要该治疗的对象单独的抗体分子或抗微生物肽，或者与第二试剂偶联的抗体分子或抗微生物肽。抗体分子可用于递送多种治疗剂，例如毒素或抗病毒剂，或其混合物。
联合治疗
抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)和抗微生物肽可以与其他疗法组合使用。例如，组合疗法可包括与一种或多种另外的治疗剂共同配制和/或共同给予的抗体分子，ADC或抗微生物肽，例如抗细菌剂(包括抗生素或其他抗细菌抗体)，疫苗或增强免疫反应的药剂。在其他实施方式中，抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物与其他治疗性治疗方式组合给予，例如静脉内补液，退热剂(例如对乙酰氨基酚)或输血。此类联合治疗可有利地利用较低剂量的所给治疗剂，由此避免了与各种单独治疗相关的可能毒性或并发症。
如本文所用，“联合”给予是指在对象罹患细菌感染或病症之前或期间，将两种(或更多种)不同处理/治疗递送给该对象。在一个实施方式中，预防性递送两种或更多种治疗，例如在对象被感染或诊断出细菌(例如革兰氏阴性细菌)之前。在另一个实施方式中，在对象被感染或诊断出细菌(例如革兰氏阴性细菌)后递送两种或更多种治疗。在一些实施方式中，在第二处理开始递送时，第一处理的递送仍在持续，由此存在重叠。有时称此为“同时”或“共同递送”。在其他实施方式中，在第一处理的递送终止后，再开始递送其他处理。在这两种情况之任一的实施方式中，处理因联合给予而更有效。例如，与若只给予第二处理而不给予第一处理所能观察到的相比，第二处理更有效(例如采用更少的第二处理观察到同样的效果，或者第二处理更大程度地减轻或减少症状)，或者第一处理亦然。在一些实施方式中，与递送一种处理而不递送另一种所能观察到的相比，递送更大程度地减轻或减少或降低细菌感染或病症相关的其他参数。两种处理的效果可部分加合、完全加合或大于加合。递送可使递送第一处理的效果在递送第二处理时仍可被检测到。
在一些实施方式中，另外的抗微生物剂是抗生素。例如，抗生素可以是β-内酰胺抗生素(例如，青霉素，头孢菌素，单环内酰胺或碳青霉烯)，单环内酰胺，碳青霉烯，大环内酯，林可酰胺，链阳性菌素，氨基糖苷类，喹诺酮，磺酰胺，四环素，糖肽，脂肽，噁唑烷酮，利福霉素，多肽或哌拉霉素。示例性抗生素包括但不限于阿米卡星，阿莫西林，氨苄青霉素，阿奇霉素，氨曲南，巴卡西林，杆菌肽，巴洛沙星，贝西沙星，卷曲霉素，羧苄青霉素，头孢乙腈(cephacetrile)，头孢氯嗪，头孢克洛，头孢羟氨苄(cefadroxyl)，头孢氨苄(cephalexin)，头孢来星(cephaloglycin)，头孢洛宁(cephalonium)，头孢洛仑，头孢噻啶(cephaloradine)，头孢噻吩(cephalothin)，头孢孟多，头孢帕罗，头孢匹林(cephapirin)，头孢噻嗪，头孢唑灵，头孢唑酮，头孢唑啉(cephazolin)，头孢卡奈，头孢卡品，头孢克定，头孢达肟，头孢地尼，头孢托仑，头孢屈洛，头孢吡酮，头孢吡肟，头孢他美，头孢三唑，头孢维曲，头孢克肟，头孢瑞南，头孢马替林，头孢甲肟，头孢氯铵，头孢美唑，头孢地嗪，头孢尼西，头孢哌酮，头孢瑟利，头孢噻肟，头孢替坦，头孢维星，头孢噁唑，头孢西丁，头孢唑兰，头孢咪唑，头孢匹罗，头孢泊肟，头孢丙烯(cefproxil)，头孢喹肟，头孢拉定(cephradine)，头孢罗替，头孢沙定，头孢舒米，头孢拉定啉，头孢洛林(teflaro)，头孢他啶，头孢特仑，头孢替唑，头孢布烯，头孢噻呋，头孢噻林，头孢噻氧，头孢唑肟，头孢吡普，头孢三嗪，头孢呋汀，头孢呋辛，头孢唑喃，氯霉素，环丙沙星，克拉霉素，克林沙星，克林霉素，氯唑西林，环丝氨酸，达托霉素(cubicin)，去甲环素，双氯西林，地红霉素，多利培南，强力霉素，依诺沙星，厄他培南，红霉素，氟氯西林，氟甲喹，加替沙星，吉米沙星，吉米沙星(factive)，庆大霉素，格帕沙星，亚胺培南，亚胺培南/西司他丁，卡那霉素，左氧氟沙星，林可霉素，利奈唑胺，洛美沙星，大环素，美罗培南，甲硝唑，美洛西林，米诺环素，莫西沙星，纳西沙星，萘夫西林，萘啶酸，新霉素，奈替米星，呋喃妥因，诺氟沙星，氧氟沙星，苯唑西林，恶喹酸，土霉素，巴龙霉素，帕珠沙星，培氟沙星，青霉素g，青霉素v，吡哌酸，哌拉西林，吡咯酸，匹夫氨苄青霉素，匹美西林，多粘菌素b，吡斯美星，普卢利沙星，奎奴普汀/达福普，利福布汀，利福平，利福喷汀，罗沙星，罗红霉素，罗氟沙星，西他沙星，司帕沙星，链霉素，磺胺甲基异噻唑，替硝唑，妥布霉素，托沙星，甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲恶唑，曲伐沙星，万古霉素，维霉素或博莱霉素。
在一些实施方式中，另外的抗细菌剂是疫苗。疫苗可以是例如活的，减毒的或灭活的细菌，例如炭疽疫苗(例如，)，DTaP疫苗(例如，或)，DT疫苗，b型流感嗜血杆菌(Hib)疫苗(例如，或)，脑膜炎球菌疫苗(例如，或)，肺炎球菌疫苗(例如，23或13)，破伤风/白喉疫苗(例如，或)，破伤风/白喉/百日咳疫苗(例如，或)，伤寒疫苗(例如，或)，DTaP/脊髓灰质炎疫苗(例如，)，DTaP/乙型肝炎/脊髓灰质炎疫苗(如)，DTaP/脊髓灰质炎/B型流感嗜血杆菌疫苗(如)，b型流感嗜血杆菌/乙型肝炎疫苗(如)和b型流感嗜血杆菌/脑膜炎球菌疫苗(例如，)。
在某些实施方式中，另外的抗病毒剂是第二抗体分子，ADC或抗微生物肽，例如不同于第一抗体分子，ADC或抗微生物肽的抗体分子，ADC或抗微生物肽。可以组合使用的示例性抗体分子包括但不限于表1或8中列出的抗体分子的任何组合。
在一些实施方式中，另外的抗细菌剂是抗微生物(例如，抗细菌)肽。示例性抗微生物肽包括但不限于醋酸哌替啶(MSI 78)，奥米加南(MX-226/MBI-226或CLS001)，艾塞加南(IB-367)，hLF1-11，XOMA 629，PAC-113，CZEN-002，IMX942，OP-145，生长素，PMX-30063，十肽(delmitide)(RDP58)，菌丝霉素和HB1345。
在一些实施方式中，另外的抗菌剂是耐药性修饰剂。示例性的耐药性修饰剂包括但不限于外排抑制剂(例如，Phe-Arg-β-萘酰胺)和β-内酰胺酶抑制剂(例如克拉维酸或舒巴坦)。
诊断方法
在一些方面，本公开提供了用于在体外(例如，在生物样品，例如血液样品中)或体内(例如，在对象体内成像)检测细菌存在的诊断方法。该方法包括：(i)使样品与本文所述的抗体分子或抗体分子-药物偶联物(ADC)接触，或向对象给予抗体分子或ADC；(任选地)(ii)使参照样品，例如对照样品(例如对照生物样品，例如血浆或血液)或对照对象与本文所述的抗体分子或ADC接触；和(iii)检测抗体分子或ADC与样品或对象或对照样品或对象之间复合物的形成，其中相对于对照样品或对象，样品或对象中复合物形成的变化，例如统计学上显著的变化指示样品中存在细菌。抗体分子或ADC可以用可检测物质直接或间接标记，以便于检测结合或未结合的抗体。合适的可检测物质包括如上所述并在下面更详细地描述的各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、和放射性材料。
术语“样品”在涉及用于检测细菌的样品时包括但不限于：细胞，细胞裂解物，细胞的蛋白质或膜提取物，体液(如血液)或组织样品。
抗体分子或ADC与细菌或脂多糖之间的复合物形成可以通过测量或可视化与细菌或脂多糖结合的抗体分子或抗体分子-药物偶联物或未结合的抗体分子或ADC来检测。任何合适的检测方法均可使用，常规检测方法包括酶联免疫测试(ELISA)，荧光激活细胞分选(FACS)测定，放射免疫测试(RIA)或组织免疫组化法。作为标记抗体分子或ADC的替代，样品中细菌或脂多糖的存在还可通过采用以可检测物质标记的标准物质和未标记的抗体分子或ADC的竞争性免疫测试法来测定。在该测试中，合并生物样品、有标记标准物质和抗体分子或ADC，并测定与无标记结合分子结合的有标记标准物质的量。样品中细菌或脂多糖的量与结合于抗体分子或ADC的有标记标准物质的量成反比。
在下面的编号段落中提供了其他方面和实施方式。
1.一种抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含修饰的硫酸酯酶基序。
2.如段落1所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序具有下式：
X1(FGly’)X2Z2X3Z3
其中FGly’具有下式：
HIPS化学
其中J1是共价偶合的抗微生物肽；
各L1是二价部分，其独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚烯基，取代的亚烯基，亚炔基，亚炔基，亚芳基，取代的亚芳基，亚环烷基，取代的亚环烷基，亚杂芳基，取代的亚杂芳基，亚杂环基，取代的亚杂环基，酰基，酰氨基，酰氧基，亚氨酯基，硫酯，磺酰基，磺酰胺，磺酰基酯，-O-，-S-，-NH-和取代的胺；
n是选自0到40的数字；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当硫酸酯酶基序位于多肽的N-末端时，X1存在；
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
3.如段落1或2所述的ADC，其中当处于折叠状态时，抗体分子在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
4.如段落1-3中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序是异源修饰的硫酸酯酶基序。
5.如段落1-4中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
6.如段落1-5中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。
7.如段落1-6中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。
8.如段落1-7中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)，例如，位于重链的恒定区的末端(例如，C-末端)。
9.如段落1-8中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。
10.如段落1-9中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区，例如，位于轻链的恒定区的末端(例如，C-末端)。
11.如段落1-10中任一项所述的ADC，其中ADC包含多个修饰的硫酸酯酶基序，例如两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。
12.如段落11所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。
13.如段落11或12所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者。
14.如段落11-13中任一项所述的ADC，其包含两个或更多个重链，每个重链包含修饰的硫酸酯酶基序。
15.如段落11-14中任一项所述的ADC，其包含两个或更多个轻链，每个轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。
16.如段落1-15中任一项所述的ADC，其中Z3是精氨酸(R)。
17.如段落1-16中任一项所述的ADC，其中X1(存在时)、X2和X3各自独立地为脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。
18.如段落1-17中任一项所述的ADC，其中X1(存在时)是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。
19.一种醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)，其包含具有以下氨基酸序列的硫酸酯酶基序：
X1Z1X2Z2X3Z3
其中
Z1是半胱氨酸，丝氨酸或2-甲酰甘氨酸残基；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当异源硫酸酯酶基序位于醛标记的多肽的N-末端时，X1存在；并且
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
20.如段落19所述的抗体分子，当处于折叠状态时，所述抗体分子能够在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
21.如段落19或20所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序是异源硫酸酯酶基序，和/或未修饰的硫酸酯酶基序或修饰的硫酸酯酶基序。
22.如段落19-21中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
23.如段落19-22中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。
24.如段落19-23中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。
25.如段落19-24中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)，例如，位于重链的恒定区的末端(例如，C-末端)。
26.如段落19-25中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。
27.如段落19-26中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区，例如，位于轻链的恒定区的末端(例如，C-末端)。
28.如段落19-27中任一项所述的抗体分子，其中ADC包含多个硫酸酯酶基序，例如两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。
29.如段落28所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。
30.如段落28或29所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者。
31.如段落28-30中任一项所述的抗体分子，其包含两个或更多个重链，每个重链包含硫酸酯酶基序。
32.如段落28-31中任一项所述的抗体分子，其包含两个或更多个轻链，每个轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。
33.如段落19-32中任一项所述的抗体分子，其中Z3是精氨酸(R)。
34.如段落19-33中任一项所述的抗体分子，其中X1(存在时)、X2和X3各自独立地为脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。
35.如段落19-34中任一项所述的抗体分子，其中X1(存在时)是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。
36.一种产生ADC的方法，其包括使醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子)与抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)在允许抗体分子的醛与抗微生物肽的反应性基团之间发生反应的条件下接触，从而产生ADC。
37.如段落36所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子包含2-甲酰基-甘氨酸残基(例如，Z1处的FGly’)。
38.如段落36或37所述的方法，所述抗微生物肽包含氨氧基或酰肼反应性基团。
39.如段落36-38中任一项所述的方法，其包括在反应混合物中联合醛标记的抗体分子和抗微生物肽。
40.如段落36-39中任一项所述的方法，其中抗微生物肽与抗体分子接触，或以反应混合物形式提供，其量足以提供所需比率的抗微生物肽与抗体分子，例如约1:1，2:1，3:1，4:1，5:1，6:1，7:1，8:1或更大的比率。
41.如段落36-40中任一项所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过肼基-异-Pictet-Spengler(HIPS)连接偶合。
42.如段落36-40中任一项所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过肟和酰肼偶联，然后还原来偶合。
43.如段落36-42中任一项所述的方法，还包括例如从反应混合物中分离(例如纯化)ADC。
44.如段落36-43中任一项所述的方法，其中醛标记的抗体分子在醛标记的抗体分子与抗微生物肽接触之前(例如，在反应混合物中的抗微生物肽与醛标记的抗体分子联合之前)是折叠的。
45.一种组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含ADC和药学上可接受的运载体，所述ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
46.一种反应混合物，所述反应混合物包含ADC和药学上可接受的运载体，所述ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的硫酸酯酶基序(例如修饰的硫酸酯酶基序)。
47.一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括向有需要的对象给予有效治疗或预防细菌感染或相关病症的量的ADC或包含ADC的药物组合物，其中ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，并且其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
48.如段落47所述的方法，其中细菌感染与革兰氏阴性细菌相关。
49.如段落47或48所述的方法，其中细菌感染是假单胞菌感染。
50.如段落47-49中任一项所述的方法，其中细菌感染与铜绿假单胞菌有关。
51.一种核酸，其包含编码本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子的核苷酸序列。
52.一种抗LPS抗体分子或ADC结合本文所述的表位，其中抗体分子或ADC包含修饰的硫酸酯酶基序(例如，本文所述的修饰的硫酸酯酶基序)。
53.如段落51所述的抗体分子或ADC，其结合铜绿假单胞菌的核心LPS中的超磷酸化HepI残基。
54.一种包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，其中所述抗微生物肽通过以下方式与抗体分子偶合
(a)赖氨酸偶联(例如，使用表面暴露的赖氨酸作为抗体反应基团)；
(b)链间二硫键(例如，使用连接HC-HC或HC-LC的二硫键)；
(c)非天然氨基酸(例如，被醛，叠氮化物或炔烃取代的氨基酸)；或
(d)可生物降解的聚合物(例如赖氨酸或巯基)。
55.如段落54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子与抗微生物肽上的活化氨基酸直接偶联。
56.如段落54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子上的赖氨酸被转化为巯基反应性基团，并且具有巯基反应性基团的抗体分子与巯基化抗微生物肽连接。
57.如段落54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子上的赖氨酸被转化为游离巯基，并且具有游离巯基的抗体分子与巯基反应性抗微生物肽连接。
58.如段落54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(b)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子的链间二硫键被还原，并且具有还原的链间二硫键的抗体分子与巯基反应性抗微生物肽连接。
59.如段落54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(c)与抗体分子偶合，并且其中使用点击化学将抗体分子与抗微生物肽连接。
60.如段落54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(d)与抗体分子偶合，并且其中抗微生物肽与可生物降解的聚合物连接，并且聚合物与抗体分子连接。
61.一种包含段落54-60中任一项所述的ADC的组合物(例如，药物组合物)。
62.一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括以有效治疗或预防细菌感染或相关疾病的量向有需要的对象给予段落54-60中任一项所述的ADC或段落61所述的药物组合物。
实施例
实施例1：通过调理吞噬试验(OPA)体外评估候选抗体分子
在体外评估候选抗体分子对多种革兰氏阴性细菌的调理吞噬杀灭活性。调理吞噬试验(OPA)评估抗体分子在补体和嗜中性粒细胞存在下使细菌受调理作用的能力。细菌的调理作用(opsonization)是一种主要途径，通过该途径已显示抗体在体内杀灭细菌。该试验中的活性是选择抗体分子和对其进行进一步体内评估的先决条件。
简而言之，使用以下试验组分：
补体(C')：用特定细菌试验菌株吸附的正常人血清。
中性粒细胞：来自健康成年供者的新鲜人血。
细菌：大肠杆菌ATCC菌株25922。
阳性对照：对每种测试细菌的调理性多克隆IgG(pAb)。
筛选：从0.1μg/ml至25μg/ml筛选抗体分子的OPA。
通过从正常人血清中吸附细菌特异性抗体分子来制备补体试剂。简言之，将约109CFU细菌悬浮于血清(10mL)中并在冰上搅动孵育30分钟。将样品离心并转移血清并重悬于109CFU细菌中。将其在冰上孵育并再混合30分钟。通过离心回收血清/补体，并通过0.22μM过滤器过滤灭菌。
制备来自单个供者的多形核细胞(PMN)。将新鲜人血与等体积的混合，并在37℃下孵育1小时。收集上层并通过以250g离心5分钟使细胞沉淀。通过在室温下孵育10分钟，用1％NH4Cl裂解剩余的红细胞。洗涤细胞并重悬于MEM中。通过台盼蓝测定细胞活力并将其悬浮至5×106个细胞/ml的终浓度。
细菌通过如下方式制备：将具有阳离子调节的穆勒辛顿肉汤(MHB)的6ml管中接种大肠杆菌25922至0.1的600nM吸光度并在血琼脂平板上过夜生长。使细胞生长至对数中期(A600nM＝0.6-1.0)，然后在0.9％盐水中稀释至A600nM＝0.2。这提供了约1×108cfu/ml的培养物。将培养物在最小必需培养基(MEM)中以1:100稀释，以获得1×106cfu/ml的培养物。这是在OPA中使用的细菌悬浮物。所需的培养物吸光度因细菌菌株而异。
该试验每次进行包含多个对照和测试制品。除细菌外，试验组分别为：单独C'，PMN+C'，PMN+热灭活C'，PMN+C'+非特异性mAb；PMN+C'+阳性对照pAb，C'+阳性对照pAb，PMN+C'+测试制品mAb(稀释系列)。如下进行OPA。将各100μl的PMN悬浮液，细菌悬浮液，抗血清或抗体和补体混合，总体积为400μl。在T＝0时立即从该混合物中取出25μl样品。在旋转架中于37℃孵育90分钟后，在T＝90分钟时再次取样。将样品1:10稀释到225μl TSB+0.05％吐温中以裂解白细胞(替代裂解皂苷)。将样品接种到双份TSA板(各100μl)上，并在37℃下孵育过夜。由于制剂为1×106CFU/ml，0.1ml/管，最终体积为0.4ml，因此为250,000CFU/ml。以1:100铺板每个板应该可以产生250CFU/板，一式两份。一个对数下降将是25CFU/板。调节每种细菌物种的温度以获得更好的分辨率。对板进行计数。与T＝0相比，计算T＝90分钟时CFU的减少量，并报告为杀灭百分比。期望至少一个对数下降。
基于针对大肠杆菌的OPA活性对抗体分子进行排序。针对大肠杆菌具有最高OPA活性的抗体分子将被选择用于体内评估。
进行OPA试验的方法也描述于，例如，Hemachandra等，Infect Immun.2001；69(4):2223-2229，其全部内容通过引用并入本文。
本文描述的方法还可用于评估抗体分子-药物偶联物针对多种革兰氏阴性细菌的体外调理吞噬杀灭活性。
实施例2：最小抑制浓度测定
基于CLSI公布的标准和实践(文献M07-A9，M100-24)进行最小抑制浓度(MIC)测定。使用肉汤微量稀释将其用于测定试验化合物对几种微生物物种的最小抑制浓度。该测定在富肉汤存在下将化合物与细菌混合，并测量细菌生长减少至少80％的化合物的最小浓度。该测定可以使用96孔板/高通量形式，使得可以同时针对大量细菌菌株测试化合物。对于每个测试菌株，都有一个公布的抑制标准，CSLI文件中公布的标准结果应该是公布值的两倍，并且在随后的测试中变化不应超过两倍。
操作如下所述：
在第1天，在测定中使用的所有菌株取自-80℃储存，在冰上解冻，并使用10μl接种环传代培养至合适的琼脂平板。将所有板置于37℃过夜。或者，菌株可以从新鲜的过夜琼脂平板或小于一周龄的冷藏琼脂平板进行传代培养。
在第2天，检查所有过夜平板的同源性和合适的菌落形态。使用10μl接种环将所有菌株传代培养至合适的琼脂平板。将所有板置于37℃过夜。
在第3天，检查所有过夜平板的同源性和合适的菌落形态。制备测试化合物和标准品的母板。在96孔聚丙烯板中，将40μl 50x浓度的化合物(50倍所需的顶部最终测定浓度)置于第1列中(每个板8种化合物)。将20μl稀释剂置于第2-12列中。在第2-11列中，将20μl跨板带入20μl(倍增稀释液)。第12列用作生长对照。稀释剂可根据化合物的溶解度而变化(常用稀释剂是水，DMSO和0.1N HCl)。
浓度范围也可根据化合物的功效而变化。通常，化合物以3.2mg/ml重悬用于64μg/ml的顶部最终测定浓度，然而，较低效的化合物以25.6mg/ml重悬用于512μg/ml的顶部最终测定浓度。或者，具有甚至更高MIC的化合物或其起始浓度低的化合物可以使用替代方案进行高浓度MIC测定，其中化合物在第1和第20列中使用40μl未稀释的原液直接在测定板中稀释，跨第2-11板列将20μ1带至20μl中。然后该测定添加80μl(相对于100μl)培养基，使得化合物稀释度仅为1:5(而不是1:50)。
子板如下制备。通过从母板的每排带2μl到子板中的相应行，从母板压印子板，为每个待测菌株制作一个子板。
培养的培养基如下制备。对于每种待测菌株，制备等同于McFarland 0.5的培养物。使用10μl接种环将细胞从过夜琼脂平板接种到含有5ml 0.85％盐水的10ml Pyrex管中。使用密度计，通过添加更多细胞或盐水将每个管调节至0.5McFarland单位。这些培养物应含有约1×108个细胞/ml。将这些培养物在合适的培养基中稀释至1:200，以将细胞浓度降低至约5×105个细胞/ml。例外的是酵母菌株，包括白色念珠菌，应稀释1:2000。每个平板接种每个稀释的培养物，每孔100μl(每个平板约10ml)。用100μl/孔的适当培养物接种所有子板。将所有板置于37℃过夜。
在第4天，使用镜面平板读数器和反射的白炽灯光在接种后18小时读取所有平板。在某些实验中，MIC被认为是抑制生长至至少80％的化合物的最低浓度。当用肉眼读取时，孔应该看起来没有生长，甚至部分扣状体(button)也会构成可观察到的生长。例如，如图5所示，重复的MIC将被读作3，3，2，2，6，6，2，2。
对于每个测试菌株，相应的对照化合物应具有在预期值的2倍内的MIC。如果对照得到验证，则报告所有测试化合物的值。
各种菌株的示例性MIC对照化合物值示于表4中。
表4.示例性MIC对照化合物值
实施例3：靶向的抗体药物偶联物的体外活性
研究了示例性ADC(具有在重链C末端融合的肽2的抗假单胞菌抗体)对结合和抑制细菌的作用。在该实施例中，使用细菌菌株ATCC 27853。通过FACS测定，示例性ADC显示出与单独的抗体相似的与细菌表面的结合(数据未显示)。如表5中所示，相对于单独的肽，ADC显示出约10倍的活性增强。ADC还保留了调理吞噬活性。此外，ADC显示出对革兰氏阴性病原体的特异性，因为在该实验中未观察到革兰氏阳性细菌的杀灭。
表5.靶向的体外活性
实施例4：示例性抗体的产生和测试
通过WN1 222-5的结构导向工程改造设计示例性抗体hWN01和hWNv1(Di Padova等，Infect Immun.1993；61(9):3863-3872)。抗体hWN01和hWNv1靶向LPS的保守核心聚糖，并且经过工程改造以使它们接近人种系并改善与肺炎克雷伯氏菌的结合。如图2所示，hWN01显示与大肠杆菌的皮摩尔(pM)结合和与肺炎克雷伯氏菌菌株的纳摩尔(nM)结合。此外，hWN01和hWNv1接近人类种系序列并具有改善的表达。
还产生了示例性抗体2C7，3D6，3E7和3G1。通过ELISA测定抗体2C7，3D6，3E7和3G1与代表性大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌和鼠伤寒沙门氏菌菌株的结合。结果显示在图7-10中。
实施例5：用于工程改造小鼠免疫mAb A001-25的新型支架
为了鉴定靶向LPS核心的广泛反应性抗体，用大肠杆菌J5-OMP疫苗(10μg)和希尔多醇佐剂(10μg)免疫CD-1小鼠。每周用免疫原-佐剂混合物腹膜内给予小鼠持续3周，此时通过全细胞ELISA评估来自免疫小鼠的血清对多种病原体的滴度。选择针对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的具有最高滴度的小鼠进行融合。用骨髓瘤伴侣细胞进行脾融合，并接种到96孔中进行克隆发育。两周后，筛选杂交瘤识别大肠杆菌J5 LPS的能力。通过全细胞ELISA，结合大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的一种这样的克隆是mAb A001-25。它靶向LPS的保守核心聚糖。如图3所示，A001-25具有与大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的强皮摩尔(pM)结合。基于建模结构的结构评估指示了用于亲和力增强的途径。
实施例6：通过级联测试对示例性抗微生物肽进行排序
测试候选抗微生物肽对细菌的抑制活性及其溶血活性。在肉汤，小鼠和人血清中对大肠杆菌和假单胞菌都具有高杀灭活性且一并具有低细胞毒性或溶血活性的肽优先作为先导候选物。结果列于表6A。选择具有强抑制或杀细菌活性，低红细胞溶血和低脱靶毒性的抗微生物肽用于进一步分析。
表6A.示例性抗微生物肽对细菌的抑制活性和溶血活性
检查示例性AMP的结构-活性关系，用于ADC构建。基于例如杀灭活性，溶血水平和人血清中的活性选择候选AMP。结果列于表6B。选择示例性AMP，P265，P271，GGG-八肽，P293，P294，P295，P261和P297用于评估ADC。
表6B.示例性AMP的结构-活性关系
在表6B中，在PBS存在下测定MIC，在50％人血清存在下测定hsMIC，MLC确定为导致100％红细胞裂解的浓度(例如，最小浓度)；PLC确定为导致50％红细胞裂解的浓度(例如，最小浓度)。
Pae：铜绿假单胞菌；Eco：大肠杆菌；Sau：金黄色葡萄球菌；Kpn：肺炎克雷伯氏菌
进一步比较两种示例性肽P295和P297。结果列于表6C。
表6C.P295与P297的比较
*报告的数字是部分裂解浓度(PLC)
**细胞毒性是使用293T细胞对细胞活力的测量值。
实施例7：进行肽装订(peptide stapling)以改善抗微生物肽的效力和稳定性
该实施例显示肽装订改善了示例性α-螺旋抗微生物肽的效力和稳定性。通过化学交联的肽装订的过程在图4中示出。确定了在装订之前和之后抗微生物肽的抑制活性。示例性肽的MIC为160μg/ml，而吻合的肽的MIC为10μg/ml。例如，在Alexander等，J.Am.Chem.Soc.,2013,135(16),5946–5949中描述了示例性装订方法。
实施例8：使用基于分选酶的连接产生抗体药物偶联物
分选酶连接在分选酶识别序列和分选酶供体序列之间形成天然肽键。图37中显示了肽有效载荷在抗体分子上的分选酶连接以产生ADC的示例性示意图。
使用分选酶A戊突变体(pentamutant)实现定量添加肽GGGRGLRRLGRKIAHGVKKGPGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：80)至含有(GS)6LPETGGG(SEQ ID NO：24)的抗体重链和含有P(G4S)2LPETGGSG(SEQ ID NO：26)的轻链的C末端(Chen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2011,108(28):11399-11404)。GGG的序列是分选酶供体结构域，RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：68)的序列是抗微生物肽结构域。
代表性方法描述如下。将150mg NaCl，50mM Tris(pH7.5)中1.5mg/mL抗体，10mMCaCl2，每种分选酶受体序列20mol当量分选酶供体肽，每75mol当量分选酶受体序列1mol当量分选酶合并。将反应在25℃下孵育20小时，并通过Q-TOF质谱法监测转化程度。在通过Q-TOF确定反应完全转化后，将反应混合物在PBS中稀释10倍并在蛋白A柱上纯化。通过Q-TOF和凝胶电泳进一步表征FPLC纯化的构建体。结果示于图6。
分选酶连接也如下进行。将含有N末端GGG分选酶供体序列的肽连接到含有分选酶A识别序列LPETGGG(SEQ ID NO：244)的抗体重链的C末端。在连接之前，将抗体缓冲液交换成150mM NaCl/50mM Tris(pH 7.5)。优化的分选酶连接条件在150mM NaCl/50mM Tris(pH7.5)中进行，使用20mol多肽/mol mAb，1.5mg/mL mAb(150kDa)，10mM CaCl2，5.8μg/mL分选酶A(来自BPS生物科学公司(BPS Bioscience)，(21.7kDa))。在环境温度下在黑暗中孵育18小时后，将样品在PBS中稀释至10ml总体积并通过FPLC纯化。使用通过在10mM DTT中在65℃下加热5μg样品15分钟制备的还原的抗体，通过Q-TOF质谱法测定偶联效率。
实施例9：抗体药物偶联物的选择性的评估
使用混合微生物杀灭测定评估示例性ADC对靶细菌的选择性。如图11A-11D所示，与单独抗体，单独肽或抗体和肽的组合相比，靶向假单胞菌的ADC的对于假单胞菌的杀灭活性优于大肠杆菌和克雷伯氏菌种。
实施例10：与包括多重耐药性菌株的铜绿假单胞菌结合
测试了示例性ADC(包含mAb001)与铜绿假单胞菌(包括多重耐药性菌株)的结合。如图12和表7中所示，示例性ADC显示出与铜绿假单胞菌的强结合。示例性ADC对于铜绿假单胞菌是高度选择的(数据未显示)。结合是LPS核心特异性的。
表7.与铜绿假单胞菌的结合亲合力(EC50)
铜绿假单胞菌菌株 结合(pM)
BAA-2108* 53
BAA-2109* 73
BAA-2110* 68
BAA-2111* 53
BAA-2112* 104
BAA-2113* 58
BAA-2114* 56
33348 73
27316 72
33358 72
27853 113
*菌株是多重耐药性的
实施例11：与细菌表面的接合
检查了示例性ADC(包含mAb001)与细菌表面的结合。使用免疫金二级标记通过电子显微镜观察结合。如图13所示，示例性ADC结合细菌表面。与其他靶标相比，观察到增强的表面结合。
实施例12：抗体体内活性：小鼠急性肺炎
在鼠急性肺炎模型中测试示例性抗LPS抗体分子(mAb001)的体内活性。
小鼠由查尔斯河公司(Charles River)(英国马盖特)提供，并且不含特定病原体。使用的小鼠品系是ICR(也称为CD1小鼠)，其是充分表征的远交鼠品系。小鼠(雄性)在收到时为11-15g，并使其适应至少7天。通过在感染前4天用200mg/kg和感染前1天用150mg/kg环磷酰胺腹膜内注射的免疫抑制使小鼠中性白细胞减少。免疫抑制方案在第一次注射给药后24小时开始导致中性粒细胞减少，这在整个研究中持续。铜绿假单胞菌菌株ATCC 27853用于体内研究。
通过鼻内滴注用新鲜肉汤制备并用PBS稀释至最佳浓度的铜绿假单胞菌ATCC27853，在第二剂免疫抑制剂后约24小时感染小鼠。对于感染，通过以约15mL/kg递送的IP注射用氯胺酮/甲苯噻嗪(90mg/kg氯胺酮/9mg/kg甲苯噻嗪)麻醉动物。通过鼻内滴注(每个鼻孔20μL，鼻孔之间5分钟)用0.04mL接种物感染麻醉的小鼠，并在感染后在绳架上保持直立位约10分钟。接种物浓度为6.67×105CFU/mL(约2.67×104CFU/小鼠肺)。在PBS(达式磷酸盐缓冲盐水)中制备测试制品的储备溶液。重建后，所有测试剂量溶液在给药期间保持半透明和非微粒状。
在计划的感染时间之前12小时，通过静脉内(IV)途径给予试验制品一次。从感染后2小时开始，分别通过IV和皮下(SC)途径，每天三次给予(TID)比较剂妥布霉素和多粘菌素B。对于所有测试制品剂量和比较物，给药体积为10mL/kg。
每组包括8只中性粒细胞减少的动物。动物接受鼻内接种铜绿假单胞菌ATCC27853。抗体分子以5mg/kg或45mg/kg静脉内给予。使用多粘菌素B作为阳性对照。测量肺中的24小时细菌负荷。如图14所示，示例性抗体分子显示2-log降低(CFU/g)。结果证明了LPS核心靶向抗体在鼠急性肺炎模型中的体内功效。
实施例13：AMP装订对稳定性和非特异性结合的作用
使用示例性抗微生物肽检查了装订对稳定性和非特异性结合(NSB)的作用。如图15A-15B所示，T＝0和T＝60分钟血清测量均显示装订的AMP相对于未装订形式的量增加。该数据是定量的并且在LS/MS上生成。这一增加归因于使用装订的化合物减少NSB。图15C显示了未优化的有效载荷和优化的有效载荷之间的差异。可以基于血清稳定性选择有效载荷。可以选择具有降低的非特异性结合和/或增强的蛋白酶稳定性的有效载荷。
血清稳定性样品的产生如下进行。将正常人血清(NHS)(Sigma S-7023)解冻，在水中稀释，以13000rpm离心10分钟，并将上清液在水浴中温热至37℃。将20μl每种测试制品置于2.0ml圆底微量离心管中。向每个管中加入2ml稀释的NHS，并立即涡旋管，并将200μl转移到具有40μl 15％三氯乙酸(TCA)的新微量离心管中。将测定管在37℃下在时间点之间的旋转架中放置。将TCA管置于冰上15分钟，然后以13000rpm离心10分钟。收集每个管的上清液并在-20℃冷冻用于分析。收获样品并在不同时间点处理长达6小时。Nguyen等，(2010)PLoSONE 5(9):e12684也公开了示例性方法。
实施例14：抗LPS抗体对内毒素信号的作用
基于细胞的比色测定用于内毒素信号LPS的检测和定量。该测定基于Toll样受体(TLR)4(哺乳动物内毒素传感器)的激活(Beutler等，Curr Top Microbiol Immunol.2002；270:109-20)。TLR4识别革兰氏阴性细菌的LPS并激活NF-κB。经工程改造以对LPS敏感的细胞，例如HEK-BlueTM-4细胞(英杰公司(InvivoGen))稳定表达人TLR4和NF-κB诱导型分泌胚胎碱性磷酸酶(SEAP)报告基因。可以通过HEK-BlueTM-4细胞检测LPS的存在，从而导致NF-κB的活化。使用QUANTI-BlueTM(英杰公司)，一种产生颜色信号的SEAP检测介质，可以在620-655nm处检测到NF-kB活化。由于吸光度与存在的内毒素的量成正比，因此内毒素的浓度可以从使用HEK-BlueTM内毒素标准品(英杰公司)的系列稀释物获得的标准曲线测量。
如图16所示，在示例性抗LPS抗体分子mAb001的存在下，内毒素信号(假单胞菌-LPS)被完全消除。阴性对照(艰难梭菌抗毒素抗体，CDA1)对内毒素信号没有任何作用。在该研究中使用0.5EU/ml的假单胞菌-LPS。
实施例15：采用抗体药物偶联物的微生物杀灭活性
测试示例性ADC的微生物杀灭活性。
微生物杀灭测定如下进行。细菌细胞在琼脂平板上于37℃需氧培养过夜。过夜平板用于接种在250ml通气烧瓶中的30ml生长培养基的培养物。培养物在37℃有氧培养，以150rpm振荡。在A600 nM处监测生长，并在对数中期生长时收获细菌细胞。将10ml培养物在4000×G下沉淀10分钟，并用PBS加1％BSA洗涤一次，然后再悬浮于2ml PBS+BSA中。将浓缩的培养物用于将6ml管的PBS加BSA接种至OD，得到浓度为1×108个细胞/ml。将培养物在PBS加BSA中稀释至1×104个细胞/ml。将测试制品在PBS+1％BSA中稀释，并将50μl每种测试浓度加载到96孔聚丙烯微量滴定板中。将50μl稀释的培养物加入所有测试孔以及没有化合物的对照孔。摇动平板并在37℃，90分钟，静态孵育。将来自每个测定孔的10μl接种到琼脂平板上，并在37℃下孵育过夜。由与没有化合物的对照孔的CFU相比的测试孔的CFU确定杀灭百分比。
如表9中所示，多个示例性ADC在低于10μg/ml的浓度下显示出对铜绿假单胞菌菌株的50％杀灭活性。
表9.示例性ADC的微生物杀灭活性
实施例16：针对多重耐药性菌株的微生物杀灭活性
测试示例性化合物对多重耐药性铜绿假单胞菌菌株的微生物杀灭活性。
如实施例15中所述进行微生物杀灭测定。如表10中所示，示例性ADC显示针对铜绿假单胞菌的多重耐药性(MDR)菌株的微生物杀灭活性。
表10.示例性ADC对MDR菌株的微生物杀灭活性
实施例17：通过抗体药物偶联物选择性杀灭细菌
测试示例性化合物对不同细菌的杀灭选择性。
在该测定中使用的假单胞菌菌株是铜绿假单胞菌27853(ATCC)，铜绿假单胞菌39324(ATCC)，铜绿假单胞菌PA01(UMD)。测定中使用的大肠杆菌菌株是大肠杆菌25922(ATCC)和大肠杆菌43745(J5)(ATCC)。用于该测定的克雷伯氏菌菌株是肺炎克雷伯氏菌700603(ATCC)。使来自冷冻储液的细菌细胞在琼脂平板上生长。所有细菌菌株在血琼脂平板(TSA+5％绵羊血)上生长。将所有板在37℃下生长过夜。
使用过夜平板在6ml 1X PBS中的10ml Pyrex管中建立0.5McFarland培养物。将浓缩的培养物(约1×108个细胞/ml)在PBS(在9.9ml PBS中0.1ml培养物)中以2×1:100稀释至约1×104个细胞/ml的浓度。使用无菌“曲棍球棒”涂布器将10μl每种稀释的培养物接种到血琼脂平板(BAP)上以确定初始浓度，检查纯度，并建立菌株形态。然后将1ml每种稀释的培养物与足够的PBS混合，使体积达到10ml。该混合培养物每毫升具有约1×103个各细菌菌株的细胞。将25μl该混合培养物接种到BAP上，以确定每种菌株的t＝0CFU/ml。
待测试的抗体，抗微生物肽(AMP)和抗体药物偶联物(ADC)在1×PBS中稀释。稀释液为2倍或4倍，并且测试每种化合物的3或4个浓度。对于抗体和偶联物，用于测定的典型最终测定浓度为100，25，6.25和1.56μg/ml，尽管已使用更高，更低和更宽的稀释范围。以与相应偶联物中发现的肽量的摩尔当量(最常见的是4.4，1.1，0.28和0.07μg/ml)测试抗微生物肽。所有化合物在2.0ml圆底Eppendorf管中的最终体积为200μl。还包括无化合物对照管。
将200μl上述混合细菌培养物加入所有测定管中。将试管进行涡旋，并将50μl每个试管置于单独的BAP上。然后将测定管置于37℃的旋转架中。在4小时内以1小时或2小时的间隔重复涂板程序，管在时间点之间以37℃旋转。将所有板置于37℃过夜。
所需总板数＝(测定管数×时间点数)+t＝0对照(3-4)
第二天，对所有平板计数每种细菌菌株的CFU。
对于每种化合物，在每个时间点计算每种菌株的杀灭百分比(与无化合物对照相比的％CFU降低)。数据被制表并绘制为％杀灭与时间的关系。
如图17所示，示例性ADC选择性地杀灭假单胞菌并实现快速杀灭(在一小时内)。
实施例18：抗体药物偶联物体内活性：小鼠急性肺炎
在鼠急性肺炎模型中测试示例性ADC(mAb001-conj2)的体内活性。
小鼠由查尔斯河公司(Charles River)(英国马盖特)提供，并且不含特定病原体。使用的小鼠品系是ICR(也称为CD1小鼠)，其是充分表征的远交鼠品系。小鼠(雄性)在收到时为11-15g，并允许适应至少7天。通过在感染前4天用200mg/kg和感染前1天用150mg/kg环磷酰胺腹膜内注射的免疫抑制使小鼠中性白细胞减少。免疫抑制方案在第一次注射给药后24小时开始导致中性粒细胞减少，这在整个研究中持续。铜绿假单胞菌菌株ATCC 27853用于体内研究。
通过鼻内滴注用新鲜肉汤制备并用PBS稀释至最佳浓度的铜绿假单胞菌ATCC27853，在第二剂免疫抑制剂后约24小时感染小鼠。对于感染，通过以约15mL/kg递送的IP注射用氯胺酮/甲苯噻嗪(90mg/kg氯胺酮/9mg/kg甲苯噻嗪)麻醉动物。通过鼻内滴注(每个鼻孔20μL，鼻孔之间5分钟)用0.04mL接种物感染麻醉的小鼠，并在感染后在绳架上保持直立位约10分钟。接种物浓度为6.67×105CFU/mL(约2.67×104CFU/小鼠肺)。在PBS(达式磷酸盐缓冲盐水)中制备测试物品的储备溶液。重建后，所有测试剂量溶液在给药期间保持半透明和非微粒状。
对于静脉内给药，在计划的感染时间之前12小时，通过IV途径给予测试制品一次。从感染后2小时开始，分别通过IV和SC途径，每天三次给予(TID)比较剂妥布霉素和多粘菌素B。对于所有测试物品剂量和比较剂，给药体积为10mL/kg。
对于鼻内(IN)给药，测试制品和比较剂妥布霉素在感染后鼻内(IN)给药一次(共同给药15分钟；治疗2小时)。用异氟烷麻醉动物。通过鼻内滴注(每个鼻孔20μL，鼻孔之间5分钟)用0.04mL接种物给予麻醉的小鼠，并在给予后在绳架上保持直立位约10分钟。
感染后2小时，使用过量戊巴比妥，对治疗前对照动物进行人道安乐死。监测剩余动物的临床状况，并且对抵挡不住该疾病的动物进行人道安乐死。在感染后约23小时终止该研究，那时大多数载剂小鼠处于伦理上认可的终点。
在感染后23小时，评估所有剩余动物的临床状况，并通过过量戊巴比妥使其人道安乐死。在移除肺并称重之前测定动物重量。使用Precellys珠粒打浆机将肺样品在冰冷的无菌磷酸盐缓冲盐水中匀浆；将匀浆物在假单胞菌选择性琼脂上定量培养，并在37℃下孵育16至24小时，然后计数菌落。以CFU/g为基础报告肺部细菌负荷。小鼠模型也在Secher等，PLoS One.2013；8(9):e73396中描述。
在共同给药研究组中，每组包括6只中性粒细胞减少的动物。动物接受ADC或抗体分子与细菌的共同给药。ADC(mAb001-Conj2)以10μg或200μg(mAb001-Conj2＝mAb001-P297偶联物)给予，并且mAb001以200μg给予。测量肺中的24小时细菌负荷。如图18A所示，当与细菌共同给予时，示例性ADC显示出快速活性。该活性与妥布霉素相当。
在鼻内(IN)研究组中，每组包括6只中性粒细胞减少的动物。动物接受鼻内接种铜绿假单胞菌ATCC 27853。接种后2小时以10μg或200μg给予ADC(mAb001-Conj2)。测量肺中的24小时细菌负荷。如图18B所示，示例性ADC在CFU/g上显示出约2log10的降低。
获得了使用小鼠急性肺炎模型和鼻腔接种铜绿假单胞菌的额外数据。在感染前12小时以2mg/kg静脉内给予mAb001-(D)-P297。8小时后测量肺中的细菌负荷。观察到细菌负荷显著减少(>90％)(P＝0.0047)。
实施例19：抗体药物偶联物的生物利用度
在小鼠模型中研究示例性ADC的生物利用度。使用6周龄雄性C57/BL6小鼠。每组包括四只小鼠。通过静脉内注射以5mg/kg给予mAb001和mAb001-P297。在给药后24小时和120小时收集数据。通过ELISA定量人IgG。
如图19所示，mAb001偶联物的生物利用度与mAb001相当。
实施例20：实施例20：核心LPS中磷酸化聚糖的研究
磷酸化聚糖代表所有铜绿假单胞菌菌株中的关键保守基序。LPS由PAC557菌株制备。NMR分析显示多种糖型，外核中的可变O-乙酰化和高磷酸化的L,D-甘露庚酸单元。
实施例21：D-氨基酸对肽血清稳定性的影响
研究了D-氨基酸对人血清中抗微生物肽稳定性的影响。在该研究中使用示例性抗微生物肽P297。P297与α-螺旋AMP的导管素家族有关。与二级结构预测一致，P297在疏水环境中形成α-螺旋。圆二色性(CD)结果显示在图33中。来自假单胞菌表面的α-螺旋嵌入膜中。(D)-P297含有所有D-氨基酸，而(L)-P297含有所有L-氨基酸。(D)-P297形成右旋螺旋，而(L)-P297形成左旋螺旋。在不存在人血清的情况下，或在存在2％，5％或10％人血清的情况下，在60分钟的时间内测量剩余的完整肽的百分比。如图20-21所示，(L)-P297快速降解(并且在某些测试条件下完全降解)，并且(D)-P297比(L)-P297稳定得多。
实施例22：表位鉴定
LPS-凝胶的Western分析显示mAb001与来自铜绿假单胞菌的低MW和高MW LPS两者结合，证实靶表位在LPS的核心区域中并且是可及的，即使在长光滑LPS链中也是如此。在ELISA中，mAb0001也与铜绿假单胞菌LPS强烈结合，而不与大肠杆菌或肺炎克雷伯氏菌LPS结合。基于抗体结合位点的计算建模，认为mAb001特异性靶向铜绿假单胞菌核心LPS的高度磷酸化的庚糖区域(图22)。
使用化学合成的单糖的结合数据强烈支持mAb001与超磷酸化的Hep I的结合。
以mg规模制备合成聚糖用于结合实验。合成聚糖的结构如图23所示。进行Octet分析以检测mAb001与合成聚糖之间的结合。如图24所示，观察到与较高磷酸化类似物的选择性结合。结合亲和力的定量显示在图25中。
总之，mAb001以以下结合亲和力与合成聚糖结合：
庚糖2P>>甘露糖2P>>>庚糖1P，甘露糖1P，庚糖，甘露糖。庚糖2P单糖的表观KD约为20nM。结果显示与铜绿假单胞菌LPS的单一单糖组分的强结合。合成聚糖庚糖2P与核心LPS的HepI单元相关联。
Hep1磷酸化的变化使铜绿假单胞菌无活力。适当磷酸化的Hep1与LPS转运机器的结合对于外膜形成是必需的(DeLucia等，MBio.2011；2(4).pii:e00142-11)。磷酸化在铜绿假单胞菌中高度保守，并且不可能突变以引起耐药性。结果表明选择性，因为其他革兰氏阴性菌中不存在超磷酸化。
用于表位鉴定的计算机，化学和分析方法也在图26中描述。
实施例23：结合的宽度和耐药性
进行全细胞ELISA以评估体外与来自不同地理区域和多个身体部位的临床分离株的结合。示例性的抗LPS抗体分子mAb001与超过100种评估的临床分离株结合。相对于对照菌株的倍数变化显示在图28中。所有结合都在测定的可变性范围内。此外，显示mAb001结合铜绿假单胞菌的所有O-血清型，几种LPS突变菌株和粘液菌株。
观察到示例性抗微生物肽P297针对铜绿假单胞菌ATCC 27853的低频率耐药性(约10-8-10-10)。
表11中显示了耐药性频率测定的总结。使用标准方案，对于任一化合物，P32(GIGKFLKKAKKFGKAFVKILKK-NH2(SEQ ID NO：245)(C末端上的羧酰胺))和(L)-P297在2×MIC下的频率在10-8至10-9范围内，并且在4×MIC及以上没有观察到生长。使用微点阵方案，在所有测试浓度下，P32，(L)-P297和(D)-P297的频率在10-7至10-9的范围内。与公布的10-5至10-8范围内的频率相比，这些频率被认为是有利的。与粘菌素相比，P297具有相当或更低的耐药性发展。
表11.示例性AMP的耐药性频率测定的总结
实施例24：与保守表位的结合
测试了示例性抗体分子mAb001与野生型和突变型铜绿假单胞菌菌株的结合。如图31A所示，mAb001与野生型和突变型铜绿假单胞菌菌株等效结合。与wapQ-菌株的结合显示mAb001结合铜绿假单胞菌的最小保守LPS的能力。与galU-菌株的结合显示mAb001结合可变磷酸化核心LPS的能力。突变菌株一般代表铜绿假单胞菌所用的主要耐药性机制。因此，结果证实没有针对mAb001的预先存在的耐药性。
测试了示例性ADC，mAb001-P297与野生型和突变型铜绿假单胞菌菌株的结合。如图31B所示，ADC与野生型和突变型铜绿假单胞菌菌株等效结合。ADC(mAb001-P297)具有与单独抗体分子(mAb001)相当的EC50。结果表明ADC中的存在有效载荷不会影响与靶标的结合。
实施例25：药物可能性的评价
人源化mAb001接近具有高人类字符串内容(string content)的人类种系。示例性人源化mAb001的结果显示在表12A中。
表12A.示例性抗LPS抗体分子与人类种系的比较
*用于计算T20-评分的方法描述于例如Gao等，2013BMC Biotechnology13:55。
**用于计算人类串内容的方法描述于例如Apgar等，2016,mAbs 8,1302-1318。
人源化mAb001也具有良好的可开发特征。瞬时转染中的表达率>50mg/mL。Fab Tm约为65℃。它在SEC曲线上作为单峰洗脱。示例性人源化mAb001的其他结果显示在表12B中。
表12B.示例性抗LPS抗体分子的可开发特征
可开发指数(Fv)* 39.8
聚集评分(Fv)** 47.2
分子电荷 12.17
*，**使用Discovery Studio程序(BIOVIA)计算两个参数，其例如描述于Lauer等，2012,J Pharm Sci 10,102-115。
如图32A-32B所示，人源化mAb001与FcγRIIa和C1q接合以激活调理吞噬活性(OPA)和补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。
实施例26：D-氨基酸和L-氨基酸对肽活性的影响
在不同测定中比较示例性AMP(P297)的D-和L-形式。结果列于表13。
(D)-P297具有与(L)-P297非常相似的MIC曲线。这些肽对假单胞菌和大肠杆菌具有活性，对金黄色葡萄球菌或肺炎克雷伯氏菌不具有高活性。无论“手性”如何，P297均未观察到毒性。两种化合物均未显示出对RBC的溶血活性。没有观察到针对293T细胞的细胞毒性。
如表14所示，(D)-297维持血清中的假单胞菌杀灭活性。(D)-P297及其偶联物在人血清中显示出相同或增强的杀灭活性。
表13.D-氨基酸和L-氨基酸对AMP活性的影响
MIC＝最小抑制浓度；MLC＝平均裂解浓度；PLC＝部分裂解浓度，观察到溶血的浓度
表14.血清中(D)-P297的微生物杀灭活性
实施例27：与抗生素的协同作用
示例性肽(D)-P297显示出与针对铜绿假单胞菌的两类抗生素的协同作用。如图34A所示，对于(D)-P297，在50％MIC下，粘菌素的MIC值降低32倍。如图34B所示，对于D-P297，在50％MIC下，美罗培南的MIC值降低16倍。
实施例28：膜破坏活性的评价
DOPE/DOPG脂质体代表模型细菌膜。如图35A所示，(D)-P297以浓度和时间依赖性方式破坏脂质双层。
如图35B所示，单独(D)-P297和(L)-P297均以浓度和时间依赖性方式诱导钙黄绿素渗漏。结果表明膜破坏的机制不需要与诸如跨膜蛋白的手性组分相互作用。偶联改变了抗微生物肽的某些杀细菌特性。对于观察到的针对铜绿假单胞菌的ADC活性，mAb001的靶向功能可能是重要的。
实施例29：肽优化
设计(D)-P297的类似物以增强有效载荷的生物物理特性。示例性类似物示于图36。
通过参考纳入
本文提到的所有出版物、专利和登记号在此通过引用全文纳入本文，如同每个单独的出版物或专利被明确单独指明通过引用纳入。
等同形式
尽管讨论了本文的组合物和方法的具体实施方式，但以上说明书仅为说明性而非限制性的。本领域的技术人员阅读了本说明书和下面权利要求后将清楚了解本发明的许多变化。本发明的全部范围应该通过参考所附权利要求书连同其等同物的全部范围，以及说明书连同此类变化来确定。
序列表
<110> 威特拉公司（VISTERRA, INC.）
<120> 抗体分子-药物偶联物及其用途
<130> P2029-7016WO
<140>
<141>
<150> 62/492,641
<151> 2017-05-01
<150> 62/447,813
<151> 2017-01-18
<160> 261
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
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35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Ser Asn Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 6
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asn Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 7
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Thr Arg Gln Leu Gly Leu Arg Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 8
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
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Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Ile Trp
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Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Arg
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly
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Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 12
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
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Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 13
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Gln Ser Ala Ser Leu Gly
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Glu Ser Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Ser Phe Lys Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Pro Trp
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 14
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 15
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1 5
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<212> PRT
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 16
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 17
Asp His Tyr Ile Asn
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 18
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1 5 10 15
Asp
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 19
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 21
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 22
Asp Tyr Tyr Met Thr
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 23
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1 5 10 15
Val Lys Gly
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<211> 19
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Leu Pro Glu Thr
1 5 10 15
Gly Gly Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 25
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<211> 19
<212> PRT
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 26
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1 5 10 15
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 28
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 29
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 31
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 33
Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
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Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 34
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1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 35
Asp Pro Ala Asn Gly Asn
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 36
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1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 37
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1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 38
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 39
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 40
Ser Tyr Asp Gly Ser
1 5
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 41
Trp Asn Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 42
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 42
Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn
1 5
<210> 43
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 43
Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn
1 5 10 15
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 44
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
1 5
<210> 45
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 45
Asn Pro Tyr Asn Gly Gly
1 5
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 46
Thr Arg Gln Leu Gly Leu Arg Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 47
Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 48
Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 49
Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 50
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 51
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 52
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Ile Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 53
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 54
Leu Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 55
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 55
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 56
Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 57
Met Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 58
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 58
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 59
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 59
Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 60
Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 61
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 61
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 62
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 62
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 63
Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 64
Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 65
Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 66
Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 67
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 67
Ala Leu Trp Lys Thr Leu Leu Lys Lys Val Leu Lys Ala Ala Ala Lys
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<210> 68
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 68
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly
20 25
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<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 69
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys
20
<210> 70
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 70
Ala Leu Trp Lys Thr Leu Leu Lys Lys Val Leu Lys Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 71
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 71
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 72
Lys Lys Leu Leu Lys Trp Leu Lys Lys Leu Leu
1 5 10
<210> 73
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 73
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys
20
<210> 74
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 74
Arg Leu Gly Asn Phe Phe Arg Lys Ala Lys Lys Lys Ile Gly Arg Gly
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Lys Asp Phe Leu Gly Asn Leu Val
20 25 30
Pro Arg Thr Glu Ser
35
<210> 75
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 75
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ile Gly Lys Phe Leu
1 5 10 15
Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe Val Lys Ile Leu Lys Lys
20 25 30
<210> 76
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 76
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala
20 25 30
<210> 77
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 77
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Trp Lys Thr Leu
1 5 10 15
Leu Lys Lys Val Leu Lys Ala Ala Ala Lys
20 25
<210> 78
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 78
Gly Trp Lys Lys Trp Phe Asn Arg Ala Lys Lys Val Gly Lys Thr Val
1 5 10 15
Gly Gly Leu Ala Val Asp His Tyr Leu Gly
20 25
<210> 79
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 79
Gly Ala Phe Gly Asn Phe Leu Lys Gly Val Ala Lys Lys Ala Gly Leu
1 5 10 15
Lys Ile Leu Ser Ile Ala Gln Cys Lys Leu Phe Gly Thr Cys
20 25 30
<210> 80
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 80
Gly Gly Gly Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly
1 5 10 15
Val Lys Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly
20 25 30
<210> 81
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 81
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgtg ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggata cacattcact gaccactata taaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggaggt atttatcctt accacggtat tactaagtac 180
aaccggaatt tcaaggacaa ggccacattg actgttgaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctca acagcctgac atctgaactc tctgcagtct attactgtgc aagcggggga 300
agtcgccggt acttcgatgt ctggggcaca gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 82
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 82
gaagtgcagc tcgtggaatc tggaggagga cttgtgcaac ctggaggttc cctgcgactg 60
tcgtgtgccg catccggttt caccttttcc gactactaca tgacctgggt cagacaggcg 120
ccggggaagg gactggagtg ggtcggcttg atccgcaaca agaggaacgg cgatactgct 180
gaatactcgg ccagcgtgaa ggggcggttc accatctcga gagatgacag caagaactcc 240
ctgtacctcc aaatgaactc cctgaaaacc gaggacactg cggtgtacta ctgcgcccgc 300
cagggtcgcg gctacacgct ggactattgg ggccagggca ccctggtcac tgtgtcaagc 360
<210> 83
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 83
gaagtgcagc tcgtggaatc tggaggagga cttgtgcaac ctggaggttc cctgcgactg 60
tcgtgtgccg catccggttt caccttttcc gactactgga tgacctgggt cagacaggcg 120
ccggggaagg gactggagtg ggtcggcttg atccgcgcca aggcgaacgg cgatactgct 180
gaatactcgg ccagcgtgaa ggggcggttc accatctcga gagatgacag caagaactcc 240
ctgtacctcc aaatgaactc cctgaaaacc gaggacactg cggtgtacta ctgcgcccgc 300
cagggtcgcg gctacacgct ggactattgg ggccagggca ccctggtcac tgtgtcaagc 360
<210> 84
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 84
caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag cttgtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga taacctgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggagat atttatcctg gtagtggtag tactaactac 180
aatgagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca catcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaggtagc 300
tactcccttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348
<210> 85
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 85
gaggttcagc tgcagcagtc tgtggcagag cttgtgaggc caggggcctc agtcaagttg 60
tcctgcacag cttctggctt caacattaaa aacacctata tgcactgggt gaagcagagg 120
cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg cgaatggtaa tactaaatat 180
gccccgaagt tccagggcaa ggccactata actgcagaca catcctccaa cacagcctac 240
ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccatct attactgtgc tcctagtaac 300
taccatgcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351
<210> 86
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 86
gatgtacagc ttcaggagtc aggacctggc ctcgtgaaac cttctcagtc tctgtctctc 60
acctgctctg tcactggcta ctccatcacc agtggttatt actggaactg gatccggcag 120
tttccaggaa acaaactgga atggatgggc tacataagct acgatggtag caataactac 180
aacccatctc tcaaaaatcg aatctccatc actcgtgaca catctaagaa ccagtttttc 240
ctgaagttga attctgtgac tactgaggac acagccacat attactgtgc aagatggaat 300
ggtaactact ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351
<210> 87
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 87
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgtg ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactata tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggagtt attaatcctt acaacggtgg tactagctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgttgaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaaccaga 300
cagctcgggc tacgttggtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca 360
<210> 88
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 88
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagacttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336
<210> 89
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 89
gacatccaga tgactcagtc cccgtcctca gtctccgcat ccgtgggaga tcgcgtgacg 60
attacttgcc gggcgtcgca gaacatcaac atctggctgt cgtggtacca gcagaagccc 120
gggaaggctc cgaagctgct gatctacaag gcctcaaact tgcacaccgg cgtgccttcc 180
cgcttttctg gttcgggctc cgggactgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaggacttcg ccacctatta ctgcctccaa ggacagtcct acccaagaac cttcggcgga 300
ggaaccaagg tcgaaatcaa a 321
<210> 90
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 90
gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60
atctcctgca ggtctagtaa gagtcttctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120
ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag cgcctgatat attatatgtc caaccttgcc 180
tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcaga gggtcaggaa ctgatttcac actgagaatc 240
agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaaagtct agaatatcct 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaa 336
<210> 91
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 91
gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60
atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120
ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180
tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240
agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336
<210> 92
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 92
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca aatccagtca gagtctgctc aacagtagaa cccgaaagaa ctacttggct 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaagcaatc ttataatctg 300
tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336
<210> 93
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 93
gacattcaga tgacccagtc tcctgcctcc cagtctgcat ctctgggaga aagtgtcacc 60
atcacatgcc tggcaagtca gaccattggt acatggttag catggtatca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctcagctcct gatttatgct gcaaccagct tggcagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gtagtggatc tggcacaaaa ttttctttca agatcagcag cctacaggct 240
gaagattttg taagttatta ctgtcaacaa ctttacagta ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 94
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 94
Gly Ile Gly Lys His Val Gly Lys Ala Leu Lys Gly Leu Lys Gly Leu
1 5 10 15
Leu Lys Gly Leu Gly Glu Ser
20
<210> 95
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 95
Gly Arg Arg Lys Arg Lys Trp Leu Arg Arg Ile Gly Lys Gly Val Lys
1 5 10 15
Ile Ile Gly Gly Ala Ala Leu Asp His Leu
20 25
<210> 96
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 96
Gly Gly Leu Arg Ser Leu Gly Arg Lys Ile Leu Arg Ala Trp Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Gln Ala Thr Pro Ala Thr Arg Gln
20 25
<210> 97
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 97
Ile Lys Trp Lys Lys Leu Leu Arg Ala Ala Lys Arg Ile Leu
1 5 10
<210> 98
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 98
Ile Gly Lys Lys Trp Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Lys Lys Phe Leu
1 5 10 15
Arg Lys Leu
<210> 99
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 99
Ile Leu Gly Lys Ile Trp Lys Ile Lys Lys Leu Phe
1 5 10
<210> 100
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 100
Arg Leu Gly Asp Ile Leu Gln Lys Ala Arg Glu Lys Ile Glu Gly Gly
1 5 10 15
Leu Lys Lys Leu Val Gln Lys Ile Lys Asp Phe Phe Gly Lys Phe Ala
20 25 30
Pro Arg Thr Glu Ser
35
<210> 101
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 101
Gly Gly Gly Gly Arg Phe Lys Arg Phe Arg Lys Lys Phe Lys Lys Leu
1 5 10 15
Phe Lys Lys Leu Ser Pro Val Ile Pro Leu Leu His Leu Gly
20 25 30
<210> 102
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 102
Gly Arg Phe Lys Arg Phe Arg Lys Lys Phe Lys Lys Leu Phe Lys Lys
1 5 10 15
Leu Ser Pro Val Ile Pro Leu Leu His Leu Gly
20 25
<210> 103
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 103
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 104
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 104
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Phe Gly His
20 25 30
Gly Ile Ser Pro Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Lys Phe Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 105
Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
1 5
<210> 106
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 106
Ser Ser Asp Gly Asp Ser
1 5
<210> 107
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 107
Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 108
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 108
Asp Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 109
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 109
Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 110
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 110
Arg Ala Ser Glu Ser Val Phe Gly His Gly Ile Ser Pro Met His
1 5 10 15
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 111
Arg Ala Ser Asn Leu Lys Phe
1 5
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 112
Gln Gln Ser Asn Glu Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 113
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 113
gaagtgaagt tggtggagtc tgggggagac ttggtgaaac ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgaatt cactttcagt gattatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggcgaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagtagtg atggtgatag tacctactat 180
ccggacaata ttaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctatac 240
ctgcaaatga acagtctgag gtctgaggac acggccatgt atttttgtgc aagagaaata 300
cggctaaggg ggtacttcga tgtctggggc gcagggacca cggtcaccgt ctcctca 357
<210> 114
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多核苷酸”
<400> 114
gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atatcctgca gagccagtga aagtgttttt ggtcatggca ttagtcctat gcactggtac 120
cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctaaaattt 180
gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240
cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga atatcctcgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggagatc aaa 333
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 115
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<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
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<220>
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<220>
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<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<220>
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<220>
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<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<220>
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<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<220>
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<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
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<220>
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35 40
<210> 148
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 148
Gly Gly Gly Lys Trp Lys Ser Phe Ile Lys Lys Leu Thr Lys Ala Ala
1 5 10 15
Lys Lys Val Val Thr Thr Ala Lys Lys Pro Leu Ile Val
20 25
<210> 149
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 149
Gly Gly Gly Val Asn Trp Lys Lys Ile Leu Gly Lys Ile Ile Lys Val
1 5 10 15
Val Lys
<210> 150
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 150
Gly Gly Gly Thr Leu Ile Ser Trp Ile Lys Asn Lys Arg Lys Gln Arg
1 5 10 15
Pro Arg Val Ser Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly Gly Arg Arg Arg Arg
20 25 30
<210> 151
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 151
Gly Gly Gly Gly Ile Gly Ala Ile Leu Lys Val Leu Ala Thr Gly Leu
1 5 10 15
Pro Thr Leu Ile Ser Trp Ile Lys Asn Lys Arg Lys Gln
20 25
<210> 152
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 152
Gly Gly Gly Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile
1 5 10 15
Lys Glu Lys Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu Leu Pro
20 25 30
Lys Leu Ala
35
<210> 153
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 153
Gly Gly Gly Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Ile
1 5 10 15
Lys Lys Tyr Gly Pro Thr Ile Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly
20 25 30
<210> 154
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 154
Gly Gly Gly Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly
1 5 10 15
Val Lys Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Lys Lys Tyr Gly
20 25 30
<210> 155
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 155
Gly Gly Gly Lys Arg Phe Lys Lys Phe Phe Lys Lys Leu Lys Asn Ser
1 5 10 15
Val Lys Lys Arg Ala Lys Lys Phe Phe Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly
20 25 30
Val Ser Ile Pro Phe
35
<210> 156
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 156
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 157
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 157
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
20 25 30
<210> 158
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 158
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Cys Gly Lys Ala Cys
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys
20
<210> 159
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 159
Gly Gly Gly Gly Arg Cys Lys Arg Phe Arg Lys Lys Cys Lys Lys Leu
1 5 10 15
Phe Lys Lys Leu Ser Pro Val Ile Pro Leu Leu His Leu Gly
20 25 30
<210> 160
<211> 5
<212> PRT
<213> 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<400> 160
Leu Pro Xaa Thr Gly
1 5
<210> 161
<211> 5
<212> PRT
<213> 化脓性葡萄球菌（Staphylococcus pyogenes）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<400> 161
Leu Pro Xaa Thr Ala
1 5
<210> 162
<211> 5
<212> PRT
<213> 葡萄球菌种（Staphylococcus sp.）
<400> 162
Leu Pro Glu Thr Gly
1 5
<210> 163
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 163
Gly Gly Gly Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly
1 5 10 15
Lys Ala Phe Val Lys Ile Leu Lys Lys
20 25
<210> 164
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> D-Dab
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(6)
<223> Dab
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(11)
<223> 环状
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> D-Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(10)
<223> Dab
<400> 164
Gly Gly Gly Xaa Xaa Xaa Leu Phe Xaa Xaa Leu
1 5 10
<210> 165
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> 变体
<222> (9)..(9)
<223> /替换="Thr"
<220>
<221> 变体
<222> (14)..(14)
<223> /替换="Ser"
<220>
<221> 变体
<222> (15)..(15)
<223> /替换="Val"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(17)
<223> /注=“序列中给出的变体残基相对于变体位置注解中的那些没有偏好”
<400> 165
Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 166
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> /替换="Ile"
<220>
<221> 变体
<222> (14)..(14)
<223> /替换="Leu"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(15)
<223> /注=“序列中给出的变体残基相对于变体位置注解中的那些没有偏好”
<400> 166
Arg Ala Ser Glu Ser Val Phe Gly His Gly Ile Ser Pro Met His
1 5 10 15
<210> 167
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> 变体
<222> (4)..(4)
<223> /替换="Ser"
<220>
<221> 变体
<222> (5)..(5)
<223> /替换="Arg"
<220>
<221> 变体
<222> (7)..(7)
<223> /替换="Thr"或"Ser"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> /注=“序列中给出的变体残基相对于变体位置注解中的那些没有偏好”
<400> 167
Arg Ala Ser Asn Leu Lys Phe
1 5
<210> 168
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 168
Leu Xaa Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 169
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 169
Leu Cys Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 170
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 170
Ala Ala Leu Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 171
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 171
Ser Gln Leu Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 172
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 172
Ala Ala Phe Met Thr Gly Arg
1 5
<210> 173
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 173
Ala Ala Phe Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 174
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 174
Ser Ala Phe Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 175
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 175
Ala Ser Ile Leu Thr Gly Lys
1 5
<210> 176
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 176
Val Ser Phe Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 177
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 177
Ala Ser Leu Leu Thr Gly Leu
1 5
<210> 178
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 178
Ala Ser Ile Leu Ile Thr Gly
1 5
<210> 179
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 179
Ser Ala Ile Met Thr Gly Arg
1 5
<210> 180
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 180
Ser Ala Ile Val Thr Gly Arg
1 5
<210> 181
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 181
Thr Asn Leu Trp Arg Gly
1 5
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 182
Thr Asn Leu Trp Arg Gly Gln
1 5
<210> 183
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 183
Thr Asn Leu Cys Ala Ala Ser
1 5
<210> 184
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 184
Val Ser Leu Trp Thr Gly Lys
1 5
<210> 185
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 185
Ser Met Leu Leu Thr Gly
1 5
<210> 186
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 186
Ser Met Leu Leu Thr Gly Asn
1 5
<210> 187
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 187
Ser Met Leu Leu Thr Gly Thr
1 5
<210> 188
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 188
Ala Ser Phe Met Ala Gly Gln
1 5
<210> 189
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 189
Gly Ser Leu Phe Thr Gly Arg
1 5
<210> 190
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> /替换="Ala"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(7)
<223> /注=“序列中给出的变体残基相对于变体位置注解中的那些没有偏好”
<400> 190
Cys Gly Pro Ser Arg Met Ser
1 5
<210> 191
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> /替换="Ala"
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(6)
<223> /注=“序列中给出的变体残基相对于变体位置注解中的那些没有偏好”
<400> 191
Cys Gly Pro Ser Arg Met
1 5
<210> 192
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 192
Met Cys Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 193
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 193
Val Cys Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 194
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 194
Leu Cys Ser Pro Ser Arg
1 5
<210> 195
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 195
Leu Cys Ala Pro Ser Arg
1 5
<210> 196
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 196
Leu Cys Val Pro Ser Arg
1 5
<210> 197
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 197
Leu Cys Gly Pro Ser Arg
1 5
<210> 198
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 198
Ile Cys Thr Pro Ala Arg
1 5
<210> 199
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 199
Leu Cys Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 200
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 200
Met Cys Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 201
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 201
Val Cys Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 202
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 202
Leu Cys Ser Pro Ser Lys
1 5
<210> 203
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 203
Leu Cys Ala Pro Ser Lys
1 5
<210> 204
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 204
Leu Cys Val Pro Ser Lys
1 5
<210> 205
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 205
Leu Cys Gly Pro Ser Lys
1 5
<210> 206
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 206
Leu Cys Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 207
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 207
Ile Cys Thr Pro Ala Ala
1 5
<210> 208
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 208
Met Cys Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 209
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 209
Val Cys Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 210
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 210
Leu Cys Ser Pro Ser Ala
1 5
<210> 211
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 211
Leu Cys Ala Pro Ser Ala
1 5
<210> 212
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 212
Leu Cys Val Pro Ser Ala
1 5
<210> 213
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 213
Leu Cys Gly Pro Ser Ala
1 5
<210> 214
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 214
Leu Xaa Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 215
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 215
Met Xaa Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 216
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 216
Val Xaa Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 217
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 217
Leu Xaa Ser Pro Ser Arg
1 5
<210> 218
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 218
Leu Xaa Ala Pro Ser Arg
1 5
<210> 219
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 219
Leu Xaa Val Pro Ser Arg
1 5
<210> 220
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 220
Leu Xaa Gly Pro Ser Arg
1 5
<210> 221
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 221
Ile Xaa Thr Pro Ala Arg
1 5
<210> 222
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 222
Leu Xaa Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 223
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 223
Met Xaa Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 224
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 224
Val Xaa Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 225
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 225
Leu Xaa Ser Pro Ser Lys
1 5
<210> 226
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 226
Leu Xaa Ala Pro Ser Lys
1 5
<210> 227
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 227
Leu Xaa Val Pro Ser Lys
1 5
<210> 228
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 228
Leu Xaa Gly Pro Ser Lys
1 5
<210> 229
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 229
Leu Xaa Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 230
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 230
Met Xaa Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 231
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 231
Val Xaa Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 232
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 232
Leu Xaa Ser Pro Ser Ala
1 5
<210> 233
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 233
Leu Xaa Ala Pro Ser Ala
1 5
<210> 234
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 234
Leu Xaa Val Pro Ser Ala
1 5
<210> 235
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 235
Leu Xaa Gly Pro Ser Ala
1 5
<210> 236
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 236
Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 237
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 237
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 238
Gly Gly Ser Gly Gly
1 5
<210> 239
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 239
Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 240
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 240
Gly Ser Gly Gly Gly
1 5
<210> 241
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 241
Gly Gly Gly Ser Gly
1 5
<210> 242
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 242
Gly Ser Ser Ser Gly
1 5
<210> 243
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 243
Leu Cys Thr Pro Ser Arg Gly Gly Gly Gly Leu Cys Thr Pro Ser Arg
1 5 10 15
<210> 244
<211> 7
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 来源
<223> /注=“未知的说明：分选酶A识别序列”
<400> 244
Leu Pro Glu Thr Gly Gly Gly
1 5
<210> 245
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成肽”
<400> 245
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys
20
<210> 246
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 246
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Ala Leu Lys Lys Ser Val Ala Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Ala Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 247
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 247
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Thr Leu Lys Lys Ser Val Thr Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Thr Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 248
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 248
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Thr Leu Lys Lys Ser Val Lys Thr Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Thr Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 249
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 249
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Ala Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Ala Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 250
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 250
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Ala Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Ala Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 251
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 251
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Ser Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Ser Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 252
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 252
Gly Gly Gly Ala Phe Phe Ala Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 253
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 253
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Ala Lys Pro Ala Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 254
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 254
Gly Gly Gly Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ala Gly Lys Phe Phe Arg Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro
20 25 30
Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro Phe
35 40
<210> 255
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 255
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe Ala Ala Ala Gly Glu Glu Glu Glu
35 40
<210> 256
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 256
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe Ala Ala Ala Gly Ala Val Glu Asp Leu Glu Asp
35 40
<210> 257
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 257
Asn Arg Gly Glu Cys Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
20 25 30
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ala Ser Leu Pro Glu Thr Gly Gly Ser
35 40 45
Gly
<210> 258
<211> 43
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成多肽”
<400> 258
Pro Gly Lys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
20 25 30
Ser Ala Ser Leu Pro Glu Thr Gly Gly Ser Gly
35 40
<210> 259
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注=“人工序列的说明：合成6xHis标签”
<400> 259
His His His His His His
1 5
<210> 260
<211> 5
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 来源
<223> /注=“未知的说明：分选酶A识别序列”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<400> 260
Leu Pro Xaa Thr Gly
1 5
<210> 261
<211> 7
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 来源
<223> /注=“未知的说明：分选酶A识别序列”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<400> 261
Leu Pro Xaa Thr Gly Gly Gly
1 5

Claims (62)

1.一种抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含修饰的硫酸酯酶基序。
2.如权利要求1所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序具有下式：
X1(FGly’)X2Z2X3Z3
其中FGly’具有下式：
其中J1是共价偶合的抗微生物肽；
各L1是二价部分，其独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚烯基，取代的亚烯基，亚炔基，亚炔基，亚芳基，取代的亚芳基，亚环烷基，取代的亚环烷基，亚杂芳基，取代的亚杂芳基，亚杂环基，取代的亚杂环基，酰基，酰氨基，酰氧基，亚氨酯基，硫酯，磺酰基，磺酰胺，磺酰基酯，-O-，-S-，-NH-和取代的胺；
n是选自0至40的数字；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当硫酸酯酶基序位于该多肽的N-末端时，X1存在；
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
3.如权利要求1或2所述的ADC，其中当处于折叠状态时，抗体分子在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
4.如权利要求1-3中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序是异源修饰的硫酸酯酶基序。
5.如权利要求1-4中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
6.如权利要求1-5中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。
7.如权利要求1-6中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。
8.如权利要求1-7中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)中，例如，位于重链恒定区的末端(例如，C-末端)。
9.如权利要求1-8中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。
10.如权利要求1-9中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区中，例如，位于轻链恒定区的末端(例如，C-末端)。
11.如权利要求1-10中任一项所述的ADC，其中ADC包含多个修饰的硫酸酯酶基序，例如两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。
12.如权利要求11所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。
13.如权利要求11或12所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者中。
14.如权利要求11-13中任一项所述的ADC，其包含两个或更多个重链，每个重链包含修饰的硫酸酯酶基序。
15.如权利要求11-14中任一项所述的ADC，其包含两个或更多个轻链，每个轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。
16.如权利要求1-15中任一项所述的ADC，其中Z3是精氨酸(R)。
17.如权利要求1-16中任一项所述的ADC，其中存在时的X1，以及X2和X3各自独立地为脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。
18.如权利要求1-17中任一项所述的ADC，其中存在时的X1是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。
19.一种醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)，其包含具有以下氨基酸序列的硫酸酯酶基序：
X1Z1X2Z2X3Z3
其中
Z1是半胱氨酸，丝氨酸或2-甲酰甘氨酸残基；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当异源硫酸酯酶基序位于醛标记的多肽的N-末端时，X1存在；并且
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
20.如权利要求19所述的抗体分子，当处于折叠状态时，所述抗体分子能够在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
21.如权利要求19或20所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序是异源硫酸酯酶基序，和/或未修饰的硫酸酯酶基序或修饰的硫酸酯酶基序。
22.如权利要求19-21中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
23.如权利要求19-22中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。
24.如权利要求19-23中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。
25.如权利要求19-24中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)中，例如，位于重链恒定区的末端(例如，C-末端)。
26.如权利要求19-25中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。
27.如权利要求19-26中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区，例如，位于轻链恒定区的末端(例如，C-末端)。
28.如权利要求19-27中任一项所述的抗体分子，其中ADC包含多个硫酸酯酶基序，例如两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。
29.如权利要求28所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。
30.如权利要求28或29所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者中。
31.如权利要求28-30中任一项所述的抗体分子，其包含两个或更多个重链，每个重链包含硫酸酯酶基序。
32.如权利要求28-31中任一项所述的抗体分子，其包含两个或更多个轻链，每个轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。
33.如权利要求19-32中任一项所述的抗体分子，其中Z3是精氨酸(R)。
34.如权利要求19-33中任一项所述的抗体分子，其中存在时的X1，以及X2和X3各自独立地为脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。
35.如权利要求19-34中任一项所述的抗体分子，其中存在时的X1是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。
36.一种产生ADC的方法，其包括使醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子)与抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)在允许抗体分子的醛与抗微生物肽的反应性基团之间发生反应的条件下接触，从而产生ADC。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子包含2-甲酰基-甘氨酸残基(例如，Z1处的FGly’)。
38.如权利要求36或37所述的方法，所述抗微生物肽包含氨氧基或酰肼反应性基团。
39.如权利要求36-38中任一项所述的方法，其包括在反应混合物中联合醛标记的抗体分子和抗微生物肽。
40.如权利要求36-39中任一项所述的方法，其中抗微生物肽与抗体分子接触，或以反应混合物形式提供，其量足以提供所需比率的抗微生物肽与抗体分子，例如约1:1，2:1，3:1，4:1，5:1，6:1，7:1，8:1或更大的比率。
41.如权利要求36-40中任一项所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过肼基-异-Pictet-Spengler(HIPS)连接偶合。
42.如权利要求36-40中任一项所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过肟和酰肼偶联，然后还原来偶合。
43.如权利要求36-42中任一项所述的方法，还包括例如从反应混合物中分离(例如纯化)ADC。
44.如权利要求36-43中任一项所述的方法，其中醛标记的抗体分子在醛标记的抗体分子与抗微生物肽接触之前(例如，在反应混合物中的抗微生物肽与醛标记的抗体分子联合之前)是折叠的。
45.一种组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含ADC和药学上可接受的运载体，所述ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
46.一种反应混合物，所述反应混合物包含ADC和药学上可接受的运载体，所述ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的硫酸酯酶基序(例如，修饰的硫酸酯酶基序)。
47.一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括向有需要的对象给予有效治疗或预防细菌感染或相关病症的量的ADC或包含ADC的药物组合物，其中ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，并且其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
48.如权利要求47所述的方法，其中细菌感染与革兰氏阴性细菌相关。
49.如权利要求47或48所述的方法，其中细菌感染是假单胞菌(Pseudomonas)感染。
50.如权利要求47-49中任一项所述的方法，其中细菌感染与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)有关。
51.一种核酸，其包含编码本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子的核苷酸序列。
52.一种抗LPS抗体分子或ADC，其结合本文所述的表位，其中抗体分子或ADC包含修饰的硫酸酯酶基序(例如，本文所述的修饰的硫酸酯酶基序)。
53.如权利要求51所述的抗体分子或ADC，其结合铜绿假单胞菌的核心LPS中的超磷酸化HepI残基。
54.一种包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，其中所述抗微生物肽通过以下方式与抗体分子偶合
(a)赖氨酸偶联(例如，使用表面暴露的赖氨酸作为抗体反应基团)；
(b)链间二硫键(例如，使用连接HC-HC或HC-LC的二硫键)；
(c)非天然氨基酸(例如，被醛，叠氮化物或炔烃取代的氨基酸)；或
(d)可生物降解的聚合物(例如赖氨酸或巯基)。
55.如权利要求54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子与抗微生物肽上的活化氨基酸直接偶联。
56.如权利要求54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子上的赖氨酸被转化为巯基反应性基团，并且具有巯基反应性基团的抗体分子与巯基化抗微生物肽连接。
57.如权利要求54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子上的赖氨酸被转化为游离巯基，并且具有游离巯基的抗体分子与巯基反应性抗微生物肽连接。
58.如权利要求54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(b)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子的链间二硫键被还原，并且具有还原的链间二硫键的抗体分子与巯基反应性抗微生物肽连接。
59.如权利要求54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(c)与抗体分子偶合，并且其中使用点击化学将抗体分子与抗微生物肽连接。
60.如权利要求54所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(d)与抗体分子偶合，并且其中抗微生物肽与可生物降解的聚合物连接，并且聚合物与抗体分子连接。
61.一种包含权利要求54-60中任一项所述的ADC的组合物(例如，药物组合物)。
62.一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括以有效治疗或预防细菌感染或相关疾病的量向有需要的对象给予权利要求54-60中任一项所述的ADC或权利要求61所述的药物组合物。
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