CN110408512A - 一种低温多级细胞板框机及细胞收集方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种低温多级细胞板框机及细胞收集方法。具体地,本发明提供了一种低温多级细胞板框机,所述的板框机包括:机架(1)、过滤组件、压紧板(11)、止推板(2)、与止推板液体连通的料液进口管道(3)、与止推板液体连通的废液出口管道(4)、以及设置于废液出口管道的温度表(5);其中,所述机架包括:支架轨道(23);所述的止推板固定于所述支架轨道的第一端;所述的压紧板及所述的过滤组件设置于所述支架轨道上,并可沿所述支架轨道移动;所述的过滤组件包括:滤板及隔板(8),所述的滤板设置于所述支架轨道上并位于所述压紧板及所述止推板之间,且所述隔板与所述滤板交替设置。本发明还提供使用该板框机收集细胞的方法。
Description
技术领域
本发明属于生物领域,具体地,涉及一种低温多级细胞板框机以及细胞收集方法。
背景技术
传统的细胞收集方法主要有:机械分离法、絮凝法、沉淀法等。机械分离法较常用的方法分为离心、膜分离、树脂分离等;絮凝法又分为无机絮凝法和有机絮凝法。机械分离法存在能耗大、处理量小、维护成本较高等缺点。絮凝法和沉淀法都需要在发酵液中添加外源化学药品,添加的化学药品直接增加了下游工艺的负担,无形中增加了成本。
板框机作为一种(固液)分离设备,广泛应用于化工、染料、石油、陶瓷、制药及污水处理等领域,适合分离固体颗粒浓度10%以下的悬浮液。目前,虽然将板框机应用于丙酸菌VB12发酵液的过滤来收集VB12细胞,但仍存在滤饼含水量较高,成淤泥状,不易成型,易造成滤饼的流失等缺点。
综上所述,本领域迫切需要开发一种用于收集细胞的板框机以及使用所述板框机收集细胞的方法,通过所述板框机得到的细胞滤饼含水量小。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种用于收集细胞的板框机以及使用所述板框机收集细胞的方法,通过所述板框机得到的细胞滤饼含水量小。
本发明提供了一种低温多级细胞板框机,所述的板框机包括:机架(1)、过滤组件、压紧板(11)、止推板(2)、与止推板液体连通的料液进口管道(3) 、与止推板液体连通的废液出口管道(4)、以及设置于废液出口管道的温度表(5);
其中,所述机架包括:支架轨道(23);所述的止推板固定于所述支架轨道的第一端;
所述的压紧板及所述的过滤组件设置于所述支架轨道上,并可沿所述支架轨道移动;
所述的过滤组件包括:滤板及隔板(8),所述的滤板设置于所述支架轨道上并位于所述压紧板及所述止推板之间,且所述隔板与所述滤板交替设置;
所述的料液为含活细胞的料液。
在另一优选例中,所述料液进口管道及所述废液出口管道设有阀门。
在另一优选例中,所述的滤板上设有均匀或不均匀的孔洞结构,所述的孔洞结构用于允许液体通过。
在另一优选例中,所述的滤板的两侧具有滤膜支撑结构(24)。
在另一优选例中,所述的压紧板和/或止推板的一侧具有所述滤膜支撑结构。
在另一优选例中,在所述的滤板上设有滤膜。
在另一优选例中,所述的止推板和/或所述压紧板上设有滤膜。
在另一优选例中,所述滤膜支撑结构为支撑网结构。
在另一优选例中,所述支撑网结构由同心线圈组成。
在另一优选例中,所述压紧板、所述止推板、所述滤板及所述隔板,以压紧板、隔板、一个或多个滤板及隔板、以及止推板的顺序设置于所述的支架轨道上。
在另一优选例中,滤板-隔板-滤板、压紧板-隔板-滤板或滤板-隔板-止推板形成一腔室(25)。
在另一优选例中,在所述腔室中形成细胞滤饼。
在另一优选例中,所述的压紧板、所述的滤板及所述的隔板具有与所述支架轨道相对应的缺口结构(22)通过所述缺口结构固定于所述支架轨道上。
在另一优选例中,所述的隔板设有把手(10)。
在另一优选例中,所述支架轨道为圆形横杆,且所述的缺口结构(22)为半圆形缺口;并且所述的压紧板、所述的滤板及所述的隔板架于所述支架轨道上。
在另一优选例中,所述的滤板和/或所述的隔板是可拆卸式的。
在另一优选例中,所述的板框机还包括:调节装置,所述的调节装置用于调节所述压紧板的位置,且所述的调节装置定于所述支架轨道的第二端。
所述调节装置包括固定横杆(15)及可调节螺杆(12);其中,所述的固定横杆固定于所述支架轨道的第二端,所述的可调节螺杆的第一端与所述压紧板连接,所述可调节螺杆的杆体与所述的固定横杆连接。
在另一优选例中,所述的温度表用于测量流出废液的温度。
在另一优选例中,所述板框机还包括压力表(6),且所述的压力表用于测量过滤组件内部压力。
在另一优选例中,所述的压力表设置于所述止推板的上方。
在另一优选例中,所述板框机还包括湿度计(7),所述湿度计用于测量所述板框机中细胞滤饼的湿度。
在另一优选例中,所述的湿度计设置于所述的过滤组件上。
在另一优选例中,所述细胞滤饼的湿度为相对湿度。
在另一优选例中,所述的板框机还配有一吹气装置;所述的吹气装置连接于所述的板框机,并可向所述的板框机内吹气。
在另一优选例中,所述的料液进口管道包括主管道以及支管;
其中,所述料液进口管道的主管道的第一端口连接于所述的板框机,第二端口连接至进料装置(21),所述支管与所述吹气装置气体连通。
在另一优选例中,所述支管通过气管(14)与所述吹气装置气体连通。
在另一优选例中,所述吹气装置为空压机。
在另一优选例中,所述空压机的压力小于0.06MPa。
在另一优选例中,所述进料装置为隔膜泵。
在另一优选例中,所述进料装置固定于所述板框机上。
在另一优选例中,所述板框机还包括接收板,所述的板框机通过所述机架设置于所述接收板上。
在另一优选例中,所述的板框机可在低温下使用。
在本发明的第二方面,提供了一种细胞收集方法,使用如第一方面所述的板框机,过滤含细胞的液体,得到细胞滤饼。
在另一优选例中,所述方法包括下述步骤:
(1)提供预冷的含细胞的液体;
(2)使所述的含细胞的液体进入板框机,并除去废液,得到细胞滤饼。
在另一优选例中,步骤(2)中,细胞在所述腔室中形成细胞滤饼。
在另一优选例中,步骤(2)中还包括下述步骤:
(2.1)通过进料装置,使所述的含细胞的液体进入板框机;
(2.2)当所述含细胞的液体进入板框机后,过滤出废液;
(2.3)然后,再通过吹气装置向所述的板框机中吹气,从而进一步过滤出废液。
在另一优选例中,在吹气过程中,板框机中所述细胞滤饼的湿度下降至<30%。
在另一优选例中,所述湿度下降至≤20%;优选地,所述湿度下降至≤10%。
在另一优选例中,步骤(2)中还包括下述步骤:(2.4)取下隔板,并移除滤膜,得到所述细胞滤饼。
在另一优选例中,步骤(2.3)中,在向所述板框机吹气前,使所述板框机处于密封状态。
在另一优选例中,通过关闭所述料液进口管道和/或所述废液出口管道的阀门,使所述板框机处于密封状态。
在另一优选例中,通过发酵得到所述含细胞的液体。
在另一优选例中,所述的预冷为将所述含细胞的液体置于带冷却装置或经预冷的储罐中;并使所述含细胞的液体的温度冷却至1~8℃。
在另一优选例中,所述方法还包括控制废液出口管流出的废液的温度为8~12℃。
在另一优选例中,所述得到的细胞滤饼的湿度为10~30%。
在另一优选例中,所述得到的细胞滤饼中细胞存活率>95%。
在另一优选例中,通过所述方法单次可过滤100~300L含细胞的液体;优选地,可过滤120~250L含细胞的液体;优选地,可过滤140~220L含细胞的液体。
在另一优选例中,通过所述方法单次可收集5~15kg细胞。
应理解,在本发明范围内中,本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合,从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅,在此不再一一累述。
附图说明
图1为本发明低温多级细胞板框机的侧面示意图。
图2为本发明低温多级细胞板框机的隔板。
图3为本发明的进料泵(隔膜泵)。
图4为本发明的正面示意图。
图5A及5B为止推板、隔板及滤板形成的腔体的内部示意图。
图中,1为机架、2为止推板、3为料液进口管道、4为废液出口管道、5为温度表、6为压力表、7为湿度计、8为隔板、9为滤板、10为把手、11为压紧板、12为可调节螺杆、13为接收板、14为气管、15为固定横杆、21为隔膜泵、22为缺口结构、23为支架轨道、24为滤膜支撑结构、25为滤板-隔板-止推板形成的腔体。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究,开发了一种结构新颖而独特的板框机以及使用这一板框机收集细胞的方法,该板框机不仅可高效地收集细胞,而且制备的细胞滤饼含水量低,成型好,搜集得到的细胞存活率高。此外,本发明板框机的过滤组件拆卸方便,可直接将隔板提出,移除滤膜,得到细胞滤饼,并设有配套的吹气装置,适合工业化大规模应用。在此基础上完成了本发明。
术语
如本文所用,术语 “湿度”是指直接通过湿度计测量的数值。
本发明要解决现有细胞(如酵母细胞)收集过程中存在的处理量小、操作耗时等缺点,提供一种操作简便、处理量大的收集方法和板框机。
下面将结合附图对本发明作进一步的说明。
如图1-4所示,本发明提供了用于细胞收集的低温多级细胞板框机,它包括机架1、安装在机架上的过滤组件、压紧板11和止推板2,与止推板连通的料液进口管道3、废液出口管道4、压力表6、温度表5,与过滤组件连通的湿度计7。所述板框机还设有调节装置,所述调节装置包括第一端与压紧板连接的可调节螺杆12以及固定横杆15固定于机架上;其中,所述的固定横杆上为具有与所述可调节螺杆配套的内螺纹结构;所述的调节装置用于当机架轨道上放置5块隔板或是8块隔板时,调节螺杆的长度将压紧板压紧至过滤装置上。此外,所述的板框机还包括接收板13,料液进口管道为异形三通管道,主管通过金属软管以卡箍形式与隔膜泵21一端相连,支管通过气管14与空压机连接,隔膜泵另一端与储罐相连,过滤组件可在机架的轨道上前后滑动,过滤组件分为可放置滤膜的滤板9和带有腔室的隔板8,滤板和隔板在机架上交替排列,隔板和滤板之间形成滤室,所述的低温多级细胞板框机可放置于低温冷柜中。
典型地,所述的板框机的尺寸为板框机宽度≤550mm;板框机全打开后长度≤1600mm(从最边缘螺丝帽到金属软管与隔膜泵连接处);板框机高度≤550mm。
在另一优选例中,如图5A及5B所示所述压紧板、止推板为单层滤膜支撑板,可贴一张滤膜;除去两端板子,中间应能放置7块16mm厚度的滤膜支撑板(双面贴滤膜),同时能放置8块腔板,尺寸分别为28、28、24、24、20、20、18、18(单位mm);板框进料口与隔膜泵用金属软管连接;隔膜泵放置于板框机上面。
在另一优选例中,所述腔板的厚度为16、18、20、24或28mm。
本发明还提供了一种基于本发明的板框机对细胞进行收集的方法,包括如下工艺步骤:
①储液:将发酵罐中的发酵液泵入预冷的储罐中;
②压滤:将储罐中的发酵液用隔膜泵泵入板框机进行压滤形成滤饼;
③吹气:空压机输送空气进板框机至细胞滤饼的湿度降至30%以下;
④收集储存:取出板框机中的滤饼并迅速冷冻后储存。
本发明所述的低温多级细胞板框机,包括机架、安装在机架上的过滤组件、压紧板和止推板,与止推板连通的料液进口管道、废液出口管道、压力表、温度表,与过滤组件连通的湿度计,还包括接收板。
进一步地,所述的过滤组件分为可两面放置滤膜的滤板和带有腔室的隔板,滤板和隔板在机架上交替排列,滤板和隔板之间形成滤室;
进一步地,所述的隔板上方安装把手10;
进一步地,所述的压紧板和止推板均单面放置滤膜;
进一步地,所述的料液进口管道为异形三通管道,主管通过金属软管以卡箍形式与隔膜泵一端相连,隔膜泵21另一端与储罐相连,支管通过气管与空压机连接(如图3及图4所示);
进一步地,所述的废液出口管道上设有温度表;
进一步地,所述的压力表位于止推板的上方;
进一步地,所述的湿度计位于过滤组件上方;
进一步地,所述的压紧板后面设有可调节螺杆;
进一步地,所述的接收板位于过滤组件下方;
进一步地,所述的板框机可放置于冷柜中。
本发明的主要优点包括:
(1)通过本发明板框机及方法收集的细胞滤饼含水量低,处理量大、操作简便、节约时间、可实现在低温条件下收集细胞,且收集过程对细胞的存活率没有影响。
(2)本发明的板框机中的滤板与隔板可方便地直接从板框机中提出;特别是隔板,过滤后,隔板内充满细胞滤饼(隔板内形成细胞滤饼),可以将隔板连带着其中的滤饼取出,并一起转移至储存区域。
(3)本发明的板框机止推板及压紧板为单侧具有滤膜支撑结构,滤饼不会留在止推板及压紧板内侧,不需要额外的铲下附着在止推板或压紧板上的细胞滤饼。
(4)本发明的收集方法,可以有效控制收集过程中诸如温度等的条件,保证细胞的存活率。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
实施例1
如图1所示,细胞收集方法的低温多级细胞板框机,包括机架1、安装在机架上的过滤组件、压紧板11和止推板2,与止推板连通的料液进口管道3、废液出口管道4、压力表6、温度表5,与过滤组件连通的湿度计7,与压紧板连接的可调节螺杆12,所述的可调节螺杆通过固定横杆15固定于机架上,所述板框机还设有调节装置,所述调节装置包括第一端与压紧板连接的可调节螺杆12以及固定横杆15固定于机架上;其中,所述的固定横杆上为具有与所述可调节螺杆配套的内螺纹结构;所述的调节装置用于当机架轨道上放置5块隔板或是8块隔板时,调节螺杆的长度将压紧板压紧至过滤装置上。此外,还包括接收板13,料液进口管道为异形三通管道,主管通过金属软管以卡箍形式与隔膜泵21一端相连,支管通过气管14与空压机连接,隔膜泵21另一端与储罐相连,过滤组件可在机架的轨道上前后滑动,过滤组件分为可放置滤膜的滤板9和带有腔室的隔板8(隔板如图2所示),滤板和隔板在机架上交替排列,隔板和滤板之间形成滤室,所述的低温多级细胞板框机可放置于低温冷柜中。
其中,所述的板框机的尺寸为板框机宽度≤550mm;板框机全打开后长度≤1600mm(从最边缘螺丝帽到金属软管与隔膜泵连接处);板框机高度≤550mm。
在另一优选例中,所述压紧板、止推板为单层滤膜支撑板,可贴一张滤膜;除去两端板子,中间应能放置7块16mm厚度的滤膜支撑板(双面贴滤膜),同时能放置8块腔板,尺寸分别为28、28、24、24、20、20、18、18(单位mm);板框进料口与隔膜泵用金属软管连接;隔膜泵放置于板框机上面。
实施例2
在本实施例中,采用实施例1的低温多级细胞板框机,对细胞进行收集,所述方法包括如下步骤:
发酵结束前1小时预冷储罐,并发酵罐、储罐、空压机、板框机连接起来,板框机置于冷柜。
板框机支架轨道(23)上放置12块厚度为28mm的隔板和11块厚度为16mm的滤板。
发酵结束后将体积为200L的发酵液通过蠕动泵泵入250L已预冷的储罐中,待发酵液冷却至4℃,用于后续分离。
将冷却后的发酵液通过隔膜泵缓慢连续不断地泵入板框机,待发酵液完全泵入板框机,废液通过废液管道流出,废液管道中测得的废液温度为10℃。发酵液进入板框机的同时,废液一边从废液管道流出。在废液出口不再有废液流出,关闭料液进口阀门,同时打开空压机(压力小于0.06MPa)及进气阀门对板框机中形成的细胞滤饼(位于隔板的腔体)吹气;吹气过程中板框机中所述细胞滤饼的湿度下降至10%(湿度由湿度计7测定,湿度计:JH-220W),观察过滤组件不再有液体滴入接收盘,关闭进气阀门及空压机。
将板框机上的隔板提出,除去滤膜后迅速将细胞滤饼(细胞滤饼即为需收集的酵母细胞,得到约12kg酵母细胞)转移并冷冻储存。
对比例1 离心分离
离心分离设备型号为:湘仪,L720R-3;
离心条件为:4000g,4℃,10min。
发酵结束后,将体积为2L的发酵液,通过离心分离,收集得到酵母细胞。
经测试,通过离心分离收集的细胞的湿度为55%(湿度由湿度计7测定,湿度计:JH-220W)。
实施例3 细胞存活率测试
取1g滤饼细胞重悬于10倍去离子水中;取美兰染液0.9mL于试管中,再取上述稀释后的细胞悬浮液0.1mL相混合,染色10min。吸取少量染色后的细胞悬浮液滴加在盖玻片与计数板的边缘缝隙处,使其缓慢渗入计数室,静置片刻后在显微镜下选择中格区并逐格计数。通常选取25中格计数室内的5格即四个角与中央计取细胞数量。为提高精确度,须重复计数3次,取平均值。经美兰染色后观察到活酵母细胞为无色,死酵母细胞为蓝色。
n1:活酵母细胞数量
n2:死酵母细胞数量
存活率=n1/(n1+n2 )×100%
经测得,通过板框收集得到的细胞存活率与离心机方法得到的细胞存活率基本一致,约为95%。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种低温多级细胞板框机,其特征在于,所述的板框机包括:机架(1)、过滤组件、压紧板(11)、止推板(2)、与止推板液体连通的料液进口管道(3)、与止推板液体连通的废液出口管道(4)、以及设置于废液出口管道的温度表(5);
其中,所述机架包括:支架轨道(23);所述的止推板固定于所述支架轨道的第一端;
所述的压紧板及所述的过滤组件设置于所述支架轨道上,并可沿所述支架轨道移动;
所述的过滤组件包括:滤板及隔板(8),所述的滤板设置于所述支架轨道上并位于所述压紧板及所述止推板之间,且所述隔板与所述滤板交替设置;
所述的料液为含活细胞的料液。
2.如权利要求1所述的板框机,其特征在于,所述压紧板、所述止推板、所述滤板及所述隔板,以压紧板、隔板、一个或多个滤板及隔板、以及止推板的顺序设置于所述的支架轨道上。
3.如权利要求1所述的板框机,其特征在于,所述的压紧板、所述的滤板及所述的隔板具有与所述支架轨道相对应的缺口结构(22)通过所述缺口结构固定于所述支架轨道上。
4.如权利要求1所述的板框机,其特征在于,所述的板框机还包括:调节装置,所述的调节装置用于调节所述压紧板的位置,且所述的调节装置定于所述支架轨道的第二端。
5.如权利要求1所述的板框机,其特征在于,所述板框机还包括湿度计(7),所述的湿度计设置于所述的过滤组件上,所述湿度计用于测量所述板框机内部湿度。
6.如权利要求1所述的板框机,其特征在于,所述的板框机还配有一吹气装置;所述的吹气装置连接于所述的板框机,并可向所述的板框机内吹气。
7.一种细胞收集方法,其特征在于,使用如权利要求1所述的板框机,过滤含细胞的液体,得到细胞滤饼。
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法包括下述步骤:
(1)提供预冷的含细胞的液体;
(2)使所述的含细胞的液体进入板框机,并除去废液,得到细胞滤饼。
9.如权利要求8所述的方法,其特征在于, 步骤(2)中还包括下述步骤:
(2.1)通过进料装置,使所述的含细胞的液体进入板框机;
(2.2)当所述含细胞的液体进入板框机后,过滤出废液;
(2.3)然后,再通过吹气装置向所述的板框机中吹气,从而进一步过滤出废液。
10.如权利要求9所述的方法,其特征在于,步骤(2)中包括下述步骤:
(2.4)取下隔板,并移除滤膜,得到所述细胞滤饼。
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