CN110384718A - 一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂 - Google Patents
一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110384718A CN110384718A CN201910783047.2A CN201910783047A CN110384718A CN 110384718 A CN110384718 A CN 110384718A CN 201910783047 A CN201910783047 A CN 201910783047A CN 110384718 A CN110384718 A CN 110384718A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- blocking agent
- debilitating
- immune checkpoint
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 title claims abstract description 11
- 239000012667 immune checkpoint blocking agent Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 70
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 64
- 241000238675 Periplaneta americana Species 0.000 claims abstract description 23
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims abstract description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 19
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims description 8
- 101100519207 Mus musculus Pdcd1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 22
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical group ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 27
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 6
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 2
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 2
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 241000321096 Adenoides Species 0.000 description 1
- 101100313763 Arabidopsis thaliana TIM22-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001674044 Blattodea Species 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000221017 Euphorbiaceae Species 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000015817 Infant Nutrition disease Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 240000000233 Melia azedarach Species 0.000 description 1
- 241000238633 Odonata Species 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000219050 Polygonaceae Species 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000002534 adenoid Anatomy 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 244000000053 intestinal parasite Species 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 108010005636 polypeptide C Proteins 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/63—Arthropods
- A61K35/64—Insects, e.g. bees, wasps or fleas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供了一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂，属于医药技术领域；所述抗肿瘤免疫检查点阻断剂针对的肿瘤为胃癌，所述阻断剂的活性成分为美洲大蠊精制物CⅡ‑3，美洲大蠊精制物CⅡ‑3主要成分为含94.4％的肽类物质，其通过降低肿瘤组织局部来源的衰竭性T细胞、外周血、脾脏、淋巴结来源的衰竭性T细胞的比例以及阻断蛋白分子PD‑1的表达起到抗肿瘤作用。本阻断剂副作用小，对胃癌有很好的的治疗效果。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂。
背景技术
肿瘤免疫治疗已经成为继手术治疗、放射治疗和化疗药物治疗之后的第四大肿瘤治疗疗法，也是目前最热门的肿瘤治疗手段。免疫治疗完全颠覆了人们以往对于肿瘤治疗的观念，从原先的依靠外界方式杀死肿瘤，到依靠自身免疫系统杀死肿瘤。目前肿瘤免疫治疗主要包括免疫疫苗、免疫检查点抑制剂治疗、过继性免疫细胞治疗、细胞因子治疗等，其中免疫检查点抑制剂治疗以其显著的临床疗效而备受瞩目。
免疫检查点(Tumor immune checkpoint)是一组介导免疫调节的重要分子，是免疫系统固有的维持自身免疫耐受和机体免疫稳态、避免机体组织损伤和适度调节外周免疫应答的众多抑制性分子，是机体免疫系统在长期进化过程中逐步建立的调节机制，是机体刺激或抑制信号转换的开关，能控制T细胞应答的幅度和持续时间，在免疫应答的适时中止中发挥极为重要的作用。免疫检查点本是人体免疫系统中起保护作用的分子，起类似刹车的作用，防止T细胞过度激活导致的炎症损伤等。而肿瘤细胞及肿瘤浸润的免疫细胞利用人体免疫系统这一特性，通过过度表达免疫检查点分子，抑制人体免疫系统反应，逃脱人体免疫监视与杀伤，从而促进肿瘤细胞的生长。
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，胃癌可发生于胃的任何部位，在我国其发病率居各类肿瘤的首位，未经治疗者平均寿命约为13个月，每年约有17万人死于胃癌，几乎接近全部恶性肿瘤死亡人数的1/4，且每年还有2万以上新的胃癌病人产生出来，胃癌确实是一种严重威胁人民身体健康的疾病。近年来，有众多的学者致力于胃癌发生机制的研究，也取得了很大进展，但其发病机制仍然不清，亦缺乏诊断和治疗的药物。
目前抗PD-1抗体药物已被用于治疗多种癌症，然而仍然存在以下问题：PD-1抑制剂在未经选择的实体瘤患者中，有效率只有10％-30％，近期研究发现很多患者对靶向PD-1抗体药物治疗不响应；而起初具有良好治疗效果的患者，随着药物的长期使用也可能产生耐药。毒副作用大：超过50％的接受免疫检查点抑制剂治疗的病人都有副作用的发生，如皮疹或局部炎症，由于免疫检查点在机体表达的广泛性，抗体制剂的使用会引起自身免疫病。其次，目前的抗体制剂价格昂贵，不算赠药一年费用大概是三十万，许多家庭都难以负担。因此需要寻找针对PD-1抗肿瘤作用的抗体以外的免疫检查点抑制剂。
美洲大蠊(Periplaneta americana L.)属昆虫，蜻蜓目，蓼科，大戟科昆虫，俗称“蟑螂”。美洲大蠊入药有着久远的历史，具有解毒消疳，活血散瘀，利水消肿的功效。近年来，随着对美洲大蠊及其提取物的生物活性的深入研究，人们发现它具有抗肿瘤，组织修复，免疫增强和保护肝脏等药用价值。但其对胃癌的抗肿瘤作用以及抗肿瘤机制的相关研究比较罕见。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂；
为达到上述目的，本发明的技术方案为：一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂，所述阻断剂的活性成分为美洲大蠊精制物CⅡ-3。
进一步的，所述美洲大蠊精制物CⅡ-3主要成分为含94.4％的肽类物质。
进一步的，所述抗肿瘤免疫检查点阻断剂针对的肿瘤为胃癌。
进一步的，所述免疫检查点为程序性死亡受体-1(PD-1)。
进一步的，所述抗肿瘤免疫检查点阻断剂通过阻断程序性死亡受体-1(PD-1)在T细胞中的表达而起到抗肿瘤作用。
进一步的，所述美洲大蠊精制物CⅡ-3降低了衰竭性T细胞比例，从而起到了抗肿瘤作用。
进一步的，所述衰竭性T细胞包括肿瘤组织局部来源的衰竭性T细胞，也包括外周血、脾脏、淋巴结来源的衰竭性T细胞。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：肿瘤细胞包括胃癌细胞对于机体具有免疫原性，可刺激机体的T细胞发生活化而发挥抗肿瘤作用，但同时引起衰竭性T细胞的产生，从而阻碍机体的抗肿瘤免疫作用，该免疫检查点阻断剂可减少衰竭性T细胞的产生，增强机体的抗肿瘤免疫作用。本研究全面评估了美洲大蠊来源的多肽“美洲大蠊精制物CⅡ-3”对小鼠胃癌模型中免疫检查点PD-1表达的影响，发现CⅡ-3下调了肿瘤组织局部来源的衰竭性T细胞，也下调了外周血、脾脏、淋巴结来源的竭性T细胞；利用免疫检查点抑制剂恢复T细胞的激活状态，借助人体免疫系统达到杀灭肿瘤目的的治疗策略，其临床疗效与化疗和靶向治疗相比，具有更加持久的反应，同时也使患者具有更好的生存和生活质量。本发明的抗肿瘤免疫检查点阻断剂的毒副作用小，通过抑制免疫检查点活性，释放肿瘤微环境中的免疫刹车，重新激活T细胞对肿瘤的免疫应答效应，从而达到抗肿瘤的作用，抗肿瘤效果好，是一种有效的、毒副作用低、价廉、非抗体类抗肿瘤免疫检查点阻断剂。
附图说明
图1小鼠肿瘤组织病理学检测；其中a.模型组；b.CTX组；c.CⅡ-3低剂量组；d.CⅡ-3中剂量组；e.CⅡ-3高剂量组；
图2 CⅡ-3对外周血衰竭性T细胞的影响；其中a.正常组；b.模型组；c.CTX组；d.CⅡ-3低剂量组；e.CⅡ-3中剂量组；f.CⅡ-3高剂量组。A排显示的是血中CD3+PD-1+T细胞的变化；B排显示的是血中CD3+CD4+PD-1+T细胞的变化；C排显示的是血中CD3+CD8+PD-1+T细胞的变化；
图3 CⅡ-3对脾脏衰竭性T细胞的影响；其中a.正常组；b.模型组；c.CTX组；d.CⅡ-3低剂量组；e.CⅡ-3中剂量组；f.CⅡ-3高剂量组；A排显示的是脾脏CD3+PD-1+T细胞的变化；B排显示的是脾脏CD3+CD4+PD-1+T细胞的变化；C排显示的是脾脏CD3+CD8+PD-1+T细胞的变化；
图4 CⅡ-3对淋巴结衰竭性T细胞的影响；a.正常组；b.模型组；c.CTX组；d.CⅡ-3低剂量组；e.CⅡ-3中剂量组；f.CⅡ-3高剂量组；A排显示的是淋巴结CD3+PD-1+T细胞的变化；B排显示的是淋巴结CD3+CD4+PD-1+T细胞的变化；C排显示的是淋巴结CD3+CD8+PD-1+T细胞的变化；
图5小鼠肿瘤组织衰竭型T细胞分析；a.正常组；b.模型组；c.CTX组；d.CⅡ-3低剂量组；e.CⅡ-3中剂量组；f.CⅡ-3高剂量组。
具体实施方式
下面将结合附图和具体实施例对本发明技术方案作进一步描述；
实施例1胃癌(MFC)细胞体外培养
小鼠胃癌细胞(MFC)，MFC取自615小鼠的胃癌组织，购于中国科学院细胞库，为上皮细胞，呈贴壁生长。
从液氮中取出的预先保存的MFC细胞株，快速转移入37℃水浴锅中复苏，加入2mLRPMI-1640完全培养基洗涤一次，用台盼蓝染色计数细胞量并观察细胞形态及活性，用适量的RPMI-1640完全培养基调整细胞悬液浓度至1×106/mL。加入25cm2细胞培养瓶，放于37℃、5％CO2培养箱中培养，定时更换培养液，约3天传代一次，培养到一定数量后，台盼蓝计数，将MFC细胞用无菌PBS制成浓度调整为2×107/mL的悬液。
实施例2美洲大蠊精制物CⅡ-3的提取物
取美洲大蠊药材粉碎为粗粉，石油醚脱脂后，用10倍量90％的乙醇浸泡48h，以3mL·min-1·kg-1的速度进行渗漉，收集渗漉液，滤过，滤液在50-60℃浓缩至1:1(mL:g)，通过HP20大孔树脂柱，70％的乙醇进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至1:2(mL:g)，冷冻干燥，即得美洲大蠊精制物CⅡ-3。
实施例3小鼠肿瘤模型建立及分组给药
小鼠购自湖南克莱克精达实验动物有限公司，6-8周龄，SPF BALB/c小鼠，平均体重18-20克，共72只。
酒精消毒小鼠腋下后，采用1mL注射器给予小鼠0.2mL MFC细胞悬液注射，浓度为2×107/mL。随机将BALB/c小鼠分为模型组(生理盐水20mL/kg，ig，qd)、CTX组(45mg/kg，ip，q2d)、CⅡ-3低剂量组(100mg/kg，20mL/kg，ig，qd)、CⅡ-3中剂量组(200mg/kg，20mL/kg，ig，qd)、CⅡ-3高剂量组(400mg/kg，20mL/kg，ig，qd)，另设正常组(生理盐水20mL/kg，ig，qd)。连续10d给药。10d后触摸小鼠腋下可见有大小不一的瘤块生长，说明造模成功。
实施例4小鼠体重及抑瘤率的测定
小鼠肿瘤模型建立次日开始给药，连续给药10d后，测量并记录小鼠体重。颈椎脱臼处死小鼠后，称重，无菌取肿瘤，计算抑瘤率。抑瘤率(％)＝(模型组平均瘤重-给药组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100％。小鼠体重变化及抑瘤率见表1。
表1CⅡ-3对荷瘤小鼠体重的影响及抑制肿瘤生长作用
a.P<0.05，与正常组比较，b.P<0.05，与模型组比较，c.P<0.05，与CTX组比较
从表1的结果显示美洲大蠊精制物CⅡ-3具有较好的抗肿瘤效果，且随着剂量的增加抑制肿瘤细胞生长作用增加。在测定时间内，CTX组小鼠体重下降，而CⅡ-3组小鼠体重无明显变化。从体重变化可以看出，传统化疗药物CTX使荷瘤小鼠体重随着用药时间的增加体重下降明显，有较强的毒副作用，而美洲大蠊精制物CⅡ-3在抗肿瘤的同时对荷瘤小鼠的毒副作用较低。
实施例5病理学检测结果证实了美洲大蠊精制物CⅡ-3的抗肿瘤作用
荷瘤小鼠肿瘤组织形态学检测进一步证实了CⅡ-3的抗肿瘤作用，见图1。通过HE染色发现，模型组可见肿瘤组织弥漫成片的肿瘤细胞，并浸润肌肉组织，局部有坏死；CTX组可见坏死区域广泛，无明显腺样结构，异型明显；CⅡ-3低剂量组可见炎性细胞局部浸润，凋亡小体形成，呈中央型坏死；CⅡ-3中剂量组可见大片肿瘤性坏死并崩碎，伴有炎性反应；CⅡ-3高剂量组可见大面积肿瘤坏死崩碎，伴炎性反应，周围肉芽形成。即CⅡ-3能增加肿瘤微环境中的炎性细胞浸润，使炎性反应增加，促进凋亡，增加肿瘤组织坏死，肉芽产生。
1、外周血细胞的获取及其衰竭性T细胞测定
给予小鼠连续药物处理，10d后，经眼内眦静脉取血，加入EDTA-Na2抗凝。分别取50μL加入流式管中，每管加入CD3-FITC抗体、CD4-APC抗体、CD8-PERCP抗体和PD-1-PE荧光抗体混合液染色。室温避光孵育30min，加入新鲜配制Gey’s液1mL裂解红细胞，避光孵育2min。之后每管加入1mL 3％FBS-细胞稀释液，1200rmp 5min后吸去上清。加入2mL细胞稀释液洗涤2次，后用400μL细胞稀释液重悬细胞，FCAS分析，结果见表2.
表2小鼠外周血衰竭性T细胞比例分析(％)
a.与正常组比较,P<0.05；b.与模型组比较,P<0.05；c.与CTX比较,P<0.05。
结合表2和图2，可以看出，与正常组、模型组和CTX组相比较，CⅡ-3低、中、高剂量组总衰竭性T淋巴细胞的比例降低(P＜0.05)；与正常组比较，模型组和CTX组总衰竭性T淋巴细胞的比例升高，差异也具有统计学意义(P＜0.05)。与正常组、模型组和CTX组相比较，CⅡ-3低、高剂量组CD3+CD4+衰竭性T淋巴细胞比例降低；其余各组间差异不明显，不具有统计学意义。与正常组和CTX组相比较，CⅡ-3高剂量组CD3+CD8+衰竭性T细胞占比下降(P＜0.05)；与模型组相比较，CⅡ-3低、中、高剂量组外周血中CD3+CD8+衰竭性T细胞占比均下降(P＜0.05)。
2、脾脏单细胞悬液的获取及其衰竭性T细胞测定
无菌取小鼠脾脏，将其置用200目细胞研磨网将脾脏组织研碎，3％FBS-PBS冲洗收集单细胞悬液，转移至50mL离心管中，离心1200r/min 5min，弃上清。加2mL红细胞裂解液裂解2min,之后再加入3％FBS-细胞稀释液10mL,1200rmp离心5min，弃上清。2mL 3％FBS-细胞稀释液洗涤一次。5mL 3％FBS-细胞稀释液重新悬浮细胞，台盼蓝染色，计算细胞数，把细胞调整至浓度为1×107/mL。取流式管每管加入1×106个脾脏细胞，再加入CD3-FITC抗体、CD4-APC抗体、CD8-PERCP抗体和PD-1-PE抗体荧光抗体混合液染色，室温避光孵育30min，加2mL细胞稀释液洗涤2次后，用400μL细胞稀释液重悬，FCAS分析，结果如表3和图3所示，与模型组和CTX组相比较，CⅡ-3低、中、高剂量组总衰竭性T淋巴细胞的比例降低(P＜0.05)；与正常组对比，CTX组总衰竭性T淋巴细胞的比例显著上升(P＜0.05)。与模型组和CTX组相比较，CⅡ-3低、中、高剂量组小鼠脾脏中CD3+CD4+衰竭性T细胞所占比降低；与正常组相比较，CⅡ-3高剂量组CD3+CD4+衰竭性T细胞的占比也降低(P＜0.05)。与CTX组相比较，CⅡ-3中、高剂量组CD3+CD8+衰竭性T淋巴细胞的比例降低，且差异具有统计学意义(P＜0.05)；与正常组和模型组相比较，CⅡ-3低、中、高剂量组CD3+CD8+衰竭性T淋巴细胞比例降低。
表3小鼠脾脏衰竭性T细胞比例分析
a.与正常组比较,P<0.05；b.与模型组比较,P<0.05；c.与CTX比较,P<0.05。
3、淋巴结单细胞悬液的获取及其衰竭性T细胞测定
无菌取小鼠颈部、腋窝和肠系膜的淋巴结。将其分别在200目细胞研磨网仔细研磨，后用3％FBS-PBS冲洗至50mL离心管中，离心1200r/min 5min，弃上清。2mL 3％FBS-细胞稀释液洗涤一次。5mL 3％FBS-细胞稀释液重新悬浮细胞，台盼蓝染色，计算细胞数，调整细胞浓度为1×107/mL。取1×106个淋巴结细胞置于流式管中，加入CD3-FITC抗体、CD4-APC抗体、CD8-PERCP抗体和PD-1-PE抗体荧光抗体混合液染色，室温避光孵育30min，加2mL细胞稀释液洗涤2次后，用400μL细胞稀释液重悬，FCAS分析。由表4和图4可以看出，与模型组和CTX组相比较，CⅡ-3低、中、高剂量组淋巴结中总衰竭性T淋巴细胞的比例降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与正常组相比较，CⅡ-3低、高剂量组总衰竭性T淋巴细胞的比例也降低，且差异具有统计学意义(P＜0.05)。与模型组和CTX组相比较，CⅡ-3低、高剂量组淋巴结中CD3+CD4+衰竭性淋巴细胞的比例降低(P＜0.05)；与模型组和CTX组相比较，CⅡ-3低、中、高剂量组CD3+CD8+衰竭性T细胞的比例降低(P＜0.05)。
表4小鼠淋巴结衰竭性T细胞比例分析
a.与正常组比较,P<0.05；b.与模型组比较,P<0.05；c.与CTX比较,P<0.05。
4、肿瘤组织单个核细胞的获取及肿瘤局部微环境衰竭性T细胞的测定
(1)小鼠肿瘤组织淋巴细胞的获取
严格无菌条件下用剪刀及镊子分离瘤体(取呈鱼肉样生长旺盛的肿瘤组织)，称其重量，拍照，并做记录。转到培养皿中，除去坏死组织与纤维结缔组织，细细剪碎瘤体成1-2mm3左右，放在200目的铜网上用弯镊子轻轻挤压瘤体组织并反复研磨，并用3％FBS-细胞稀释液不断冲洗。收集单细胞悬液于10ml的离心管中，于1000r/min，离心10min，弃上清，收集细胞沉淀用3％FBS-细胞稀释液稀释。另取无菌离心管先后分层缓慢放入100％(1.083)及75％(1.062)的小鼠淋巴细胞分离液各3ml，其上再轻轻加入细胞悬液4mL(按3mL：3mL：4mL分层)，以2000r/min，离心5min，弃75％的界面上的上层肿瘤细胞，收集100％界面上富含肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的悬液，用PBS液洗2次(1000r/min，10min/次)，以除去淋巴细胞分离液。所得细胞沉积再用RPMI1640完全培养基中使细胞重悬，调整细胞浓度为1×106/mL。
(2)肿瘤局部微环境衰竭性T细胞的测定
取肿瘤淋巴细胞106个，用抗小鼠荧光抗体CD3-FITC、PD-1-PE作染色。染色方法同上，FCAS分析。
取肿瘤组织淋巴细胞106个，用抗小鼠荧光抗体CD3-FITC、PD-1-PE染色，“gate”CD3+T作肿瘤微环境衰竭性T淋巴细胞分析，结果见图5。由图5可以看出，与模型组和CTX组相比较，CⅡ-3低、中、高剂量组肿瘤组织中衰竭性T淋巴细胞的比例降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，以CII-3高剂量组的下调最为明显。
程序性细胞死亡受体1(programmed cell death 1,PD-1/CD279)是主要的免疫检查点。在肿瘤免疫应答中，肿瘤抗原刺激T细胞活化后，PD-1表达于活化的T细胞，使T细胞衰竭，T细胞发生衰竭之后，会随肿瘤的持续进行，逐步丧失原有的免疫效应功能，从而使患者失去抗肿瘤能力。免疫检查点阻断剂治疗通过抑制免疫检查点活性，释放肿瘤微环境中的免疫刹车，重新激活T细胞对肿瘤的免疫应答效应，从而达到抗肿瘤的作用，这也使其成为对抗肿瘤的新武器。
PD-1是导致T细胞衰竭的免疫检查点分子，PD-1又叫CD279，是免疫球蛋白超家族CD28成员的一种，其配体PD-L1则属于B7家族成员，PD-1和其配体PD-L1共同组成信号通路，作为重要的负性调控因子，影响机体抗肿瘤免疫的过程。在肿瘤微环境中，可持续激活PD-1/PD-L1信号通路，使肿瘤浸润CD8+T淋巴细胞持续处于抑制状态，产生颗粒酶B和细胞因子的能力下降，无法有效攻击肿瘤细胞。此外，高表达PD-L1的肿瘤细胞还能有效的抑制肿瘤浸润T淋巴细胞(TIL)产生IL-2、IFN-γ，以及促进其分泌IL-10，继而其对肿瘤的杀伤能力下降。PD-1/PD-L1还可以诱导CTL细胞向耗竭型CTL细胞转变，抑制机体抗肿瘤免疫，促进肿瘤的发展。研究发现CTL细胞表面高表达PD-1，PD-1/PD-L1信号途径在被沉默后，可使CTL细胞增殖能力、细胞因子分泌及细胞毒能力增强。
衰竭性T细胞(exhausted T cells)主要是指T细胞在病原体病毒或肿瘤等一些抗原的刺激次下，导致T细胞功能发生障碍，免疫功能受损的状态。其最重要的表现为体内分泌了较多的负性信号分子，导致T细胞对免疫相关的细胞因子的分泌能力及杀伤作用都显著下降。
本发明全面评估了美洲大蠊来源的多肽“美洲大蠊精制物CⅡ-3”对小鼠胃癌模型中免疫检查点PD-1表达的影响，发现CⅡ-3下调了肿瘤组织局部来源的衰竭性T细胞，也下调了外周血、脾脏、淋巴结来源的衰竭性T细胞；另外本发明还发现，模型组由于肿瘤的刺激作用使得总衰竭性T淋巴细胞的比例上升，传统化疗药环磷酰胺(CTX)在治疗肿瘤的同时也使得总衰竭性T淋巴细胞升高，可以看出传统化疗药物具有一定局限性。综上看出，美洲大蠊多肽CⅡ-3能阻断PD-1的表达，降低衰竭性T细胞的比例，从而增强机体抗肿瘤的免疫效应，大大提升抗肿瘤效果，是一种有效的抗肿瘤免疫检查点阻断剂。
以上所述，为本发明的具体实施例，但本发明的保护范围不仅限于此，在本发明技术方案基础上任何不经过创造性劳动的变化和替换均应涵盖在本发明的保护范围之内；因此，本发明的保护范围应权利要求书所限定的范围为准。
Claims (7)
1.一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂，其特征在于：所述阻断剂的活性成分为美洲大蠊精制物CⅡ-3。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤免疫检查点阻断剂，其特征在于：所述美洲大蠊精制物CⅡ-3主要成分为94.4％的肽类物质。
3.根据权利要求1所述的抗肿瘤免疫检查点阻断剂，其特征在于：抗肿瘤免疫检查点阻断剂针对的肿瘤为胃癌。
4.根据权利要求1所述的抗肿瘤免疫检查点阻断剂，其特征在于：所述免疫检查点为程序性死亡受体-1(PD-1)。
5.根据权利要求1所述的抗肿瘤免疫检查点阻断剂，其特征在于：所述美洲大蠊精制物CⅡ-3通过阻断程序性死亡受体-1(PD-1)在T细胞的表达而起到抗肿瘤作用。
6.根据权利要求5所述的抗肿瘤免疫检查点阻断剂，其特征在于：所述美洲大蠊精制物CⅡ-3降低了衰竭性T细胞比例，从而起到了抗肿瘤作用。
7.根据权利要求6所述的抗肿瘤免疫检查点阻断剂，其特征在于：所述衰竭性T细胞包括肿瘤组织局部来源的衰竭性T细胞，也包括外周血、脾脏、淋巴结来源的衰竭性T细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910783047.2A CN110384718A (zh) | 2019-08-23 | 2019-08-23 | 一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910783047.2A CN110384718A (zh) | 2019-08-23 | 2019-08-23 | 一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110384718A true CN110384718A (zh) | 2019-10-29 |
Family
ID=68289321
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910783047.2A Pending CN110384718A (zh) | 2019-08-23 | 2019-08-23 | 一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110384718A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114146097A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-03-08 | 大理大学 | 美洲大蠊提取物和/或单体在制备肿瘤微环境m2极化抑制药物中的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105878289A (zh) * | 2015-07-06 | 2016-08-24 | 四川好医生攀西药业有限责任公司 | 一种美洲大蠊制剂及其在制备治疗胃癌药物中的应用 |
| CN106632614A (zh) * | 2017-01-26 | 2017-05-10 | 大理大学 | 一种美洲大蠊免疫调节肽及其制备方法和医药用途 |
| CN108524547A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-09-14 | 云南中医学院 | 美洲大蠊提取物在制备激活自然杀伤性t细胞药物中的应用 |
-
2019
- 2019-08-23 CN CN201910783047.2A patent/CN110384718A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105878289A (zh) * | 2015-07-06 | 2016-08-24 | 四川好医生攀西药业有限责任公司 | 一种美洲大蠊制剂及其在制备治疗胃癌药物中的应用 |
| CN106632614A (zh) * | 2017-01-26 | 2017-05-10 | 大理大学 | 一种美洲大蠊免疫调节肽及其制备方法和医药用途 |
| CN108524547A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-09-14 | 云南中医学院 | 美洲大蠊提取物在制备激活自然杀伤性t细胞药物中的应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| YANAN ZHAO等: "Anti-tumor effects of the American cockroach, Periplaneta Americana", 《CHINESE MEDICINE》 * |
| 李小红: "PD-1+肿瘤浸润性CD8+T淋巴细胞的表型鉴定及功能研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)医药卫生科技辑》 * |
| 梁刚等: "美洲大蠊多肽对人肝癌细胞Bel-7402裸鼠移植瘤生长的抑制作用", 《中国新药杂志》 * |
| 欧红利: "美洲大蠊多肽抗肿瘤及免疫调节作用研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士）医药卫生科技辑》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114146097A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-03-08 | 大理大学 | 美洲大蠊提取物和/或单体在制备肿瘤微环境m2极化抑制药物中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10934364B2 (en) | Method for in vivo expansion of T regulatory cells | |
| Sonoda et al. | Long-term survival of corneal allografts is dependent on intact CD1d-reactive NKT cells | |
| AU2018101488A4 (en) | Method and kit for treating cancer through combination therapy | |
| CN106668852B (zh) | 一种治疗和/或预防ⅰ型糖尿病的组合物及其应用 | |
| KR101713166B1 (ko) | 말똥진흙버섯 추출물을 포함하는 다발성 경화증 및 자가면역성 질환의 예방 및 치료용 조성물 | |
| Shin et al. | Immunostimulatory effects of cordycepin‐enriched WIB‐801CE from Cordyceps militaris in splenocytes and cyclophosphamide‐induced immunosuppressed mice | |
| Takano et al. | The liquid culture filtrates of Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson (= Isaria japonica Yasuda) and Paecilomyces cicadae (Miquel) Samson (= Isaria sinclairii (Berk.) Llond) regulate Th1 and Th2 cytokine response in murine Peyer's patch cells in vitro and ex vivo | |
| CN114870009A (zh) | 一种抗肿瘤联合组合物及其应用和抗肿瘤药物 | |
| CN110384718A (zh) | 一种抗肿瘤免疫检查点阻断剂 | |
| CN107582566A (zh) | 通过多胺化合物调控自身免疫性疾病的方法和组合物 | |
| KR101734093B1 (ko) | 알러지 유발 물질을 저감시킨 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 | |
| CN101626781A (zh) | 制备具有抗肿瘤免疫应答反应的细胞群的方法 | |
| CN103181952A (zh) | 一种防治自身免疫疾病的黄杞提取物及其制备方法 | |
| CN104337819B (zh) | 白桦脂酸衍生物在制备抑制t细胞分化的药物中的应用 | |
| CN109432116A (zh) | 黄芪皂苷ⅲ在制备肿瘤免疫治疗药物中的用途 | |
| CN106119192B (zh) | 组合物及其在cik细胞培养中的应用 | |
| CN101147803B (zh) | 抗Toll样受体2抗体抑制肿瘤转移的用途 | |
| CN101686992A (zh) | 卡介菌多糖核酸提取物在制备治疗变态反应性皮肤病的药物中的应用及其注射剂和制备方法 | |
| US20060039999A1 (en) | Pharmaceutical composition for inhibition of tumor growth or metastasis | |
| CN110947004B (zh) | 药物组合物及其应用、无菌容器和试剂盒 | |
| Mongini et al. | Inhibition of lymphocyte trapping by cell-free ascitic fluids cultivated in syngeneic mice | |
| Osborn et al. | Effects of C. parvum on growth and induction of intracerebral tumours in mice | |
| Kumar et al. | Aqueous extract of Withania somnifera (Ashwagandha) root an indigenous medicinal plant enhances antigen specific Cell-Mediated Immune Response (CMIR) in AT cell Lymphoma | |
| CN118593602A (zh) | 一种三叶青提取物及其在制备用于预防和/或逆转t细胞耗竭的药物中的应用 | |
| Cui et al. | Regulation of interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP)-specific Th1 and Th17 cells in anterior chamber-associated immune deviation (ACAID) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191029 |