CN110376045A - 一种实验动物实体器官组织梗死染色固定装置和染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种实验动物实体器官组织梗死染色固定装置和染色方法。它包括染色缸、染色缸盖和栅格，所述的染色缸为棕色或不透明的染色缸，所述的染色缸盖是棕色或不透明的染色缸盖，所述的栅格能放置于染色缸中，栅格中的孔的下部设有滤网。本发明将组织切片放置于栅格的孔中的滤网上，进行TTC染色，染色后再将整体栅格转移至多聚甲醛溶液中组织固定，固定好的组织切片从栅格中夹出进行拍照或者可以直接将栅格(通透的孔板)置于深色背景下拍摄，在此过程中不需要反复夹取切片，减少组织切片破坏，避免组织切片损伤。本发明可平均减少每块组织夹取次数3‑5次，确保染色图像排序的准确率达100％，有效避免组织切片染色图像因主观排序导致的错误，从而保证结果的准确性。
Description
技术领域：
本发明属于组织染色领域，具体涉及一种实验动物实体器官组织梗死染色固定装置和染色方法。
背景技术：
TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲臜，用来表示细胞的活力。原理：TTC(2，3，5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感复合物，1894年首次合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。
TTC染色的步骤为：
1、取脑：可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定，所以较软，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。
2、－20℃冰箱中速冻20min左右，便于切片。
3、切片：一般切成5－6片，每隔2mm切一片。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。(参考：张均田，主编.现代药理试验方法)。如果需计算面积的话，应切得均匀或用专门的脑槽。
4、将切片置于TTC染色液中，常规浓度为2％，也有用1％或更低浓度的。
5、用锡箔纸盖住后，放入37℃温箱15～30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液。
6、10％多聚甲醛固定：将TTC染色完成的组织切片转移至10％多聚甲醛容器中室温下固定20分钟。
7、拍摄图片：将固定好的组织切片放置至深色背景上拍摄图片保存，切片排列顺序固定(从前到后或从上到下)。
8、利用相关软件计算目标器官组织梗死体积。
从上面可以看出，在这个染色过程中，需要将脑组织切片用镊子夹入含有TTC染色液的染色缸中，染色完成后又需要用镊子夹出至含有多聚甲醛的容器中固定，固定好的组织切片又需要用镊子夹到深色背景上拍摄，从这里可以看出在整个过程中需要多次夹脑组织切片，而脑组织切片本身柔软，很容易夹烂，从而严重影响实验结果。并且，由于在深色背景上拍摄的时候，需要一个一个组织切片进行排列，而组织切片一多，就容易搞混，就会弄错切片顺序，导致结果不准确。
发明内容：
本发明的目的提供一种能够避免切片损伤、显著提高组织切片保存完整性，有利于提高病理分析准确性，节约时间和提高效率的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置。
本发明的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置，其特征在于，包括染色缸、染色缸盖和栅格，所述的染色缸为棕色或不透明的染色缸，所述的染色缸盖是棕色或不透明的染色缸盖，所述的栅格能放置于染色缸中，栅格中的孔的下部设有滤网。
所述的栅格是能活动的栅格，其可以从染色缸中取出或放入，栅格的大小与染色缸内的腔体大小相适应，以使栅格卡入染色缸内不会移动或晃动。
优选，所述的栅格上设有区分每个孔的标记上，例如直接在每个孔上标记有用于区分的记号或者在栅格的横向和纵向的边缘标记有记号的。
优选，所述的栅格为通透的孔板。透明孔板和孔中固定好的切片可以直接在照相机下拍摄，从而不需要夹出组织切片放置在深色背景下照相。
本发明的第二个目的是提供一种实验动物实体器官组织梗死的染色方法，其是利用上述实验动物实体器官组织梗死染色固定装置进入染色，具体步骤为：
将实验动物实体器官组织梗死切片置于栅格的孔中，使其铺于滤网上，然后在染色缸中倒入TTC染色液，使切片浸没于染色液中，盖上染色缸盖，振荡孵育，染色完成后，将栅格置于含有多聚甲醛的容器中对切片进行固定，固定好的切片从栅格中夹出进行拍照或者直接对栅格进行拍照保存。
然后再利用相关软件对照片进行分析，计算目标器官组织梗死体积。
所述的实验动物实体器官组织梗死可以为心梗、脑梗或肾梗等。
本发明有益效果如下：
1、本发明将切片放置于带栅格孔的滤网上，进行TTC染色，TTC染色后再将整体栅格转移至多聚甲醛溶液中组织固定，固定好的切片从栅格中夹出进行拍照或者可以直接将栅格(通透的孔板)置于相机下拍摄，在此过程中不需要反复夹取组织切片，减少组织破坏，避免切片损伤，平均减少每块组织夹取次数3-5次，显著提高组织切片的保存完整性和染色图像排序的准确性，从而提高组织病理分析的准确性和诊断质量。
2、由于本发明不需要反复的夹取组织切片，因此降低了操作难度，并且每只动物组织切片染色固定过程可节约时间30分钟以上，提高了工作效率。
3、本发明适用范围广，适用于全身实体器官组织梗死，特别是心梗、脑梗、肾梗等。
4、本发明在栅格上具有标记，因此在照相的时候可以按照栅格上的标记对组织切片进行有序排列，然后照相，或者当使用通透的栅格(例如透明的孔板)的时候，直接将孔板进行照相，孔板上的孔上具有标记，从而可以对每一块组织切片进行标记，确保染色图像排序的准确率达100％，可避免组织切片染色图像因主观排序导致的错误，从而保证结果的准确性。
附图说明：
图1是本发明的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置的俯视结构示意图(栅格放置于染色缸中，没有盖上染色缸盖)；
图2是本发明的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置的剖视结构示意图，盖上了染色缸盖；
其中1、染色缸；2、染色缸盖；3、栅格；4、孔；5、滤网；6、数字；7、字母。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
如图1所示，本实施例的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置，包括染色缸1、染色缸盖2和栅格3，所述的染色缸1为不透明的染色缸，所述的染色缸盖2是不透明的染色缸盖，染色缸为搪瓷材质，不透明，确保TTC液体避光，规格：长25cm，宽21cm，高3cm，所述的栅格3可以放置于染色缸中，栅格中的孔4的下部设有不锈钢制成的滤网5(封住栅格的孔)。栅格行列4×4，共16个孔，每个孔长、宽、高为6×5×2cm，可以满足大、小实验动物心、脑等实体器官组织切片染色需要。栅格的大小与染色缸内的腔体大小相适应，以使栅格卡入染色缸内不会移动或晃动。在栅格的横向和纵向的边缘标记有记号，如在栅格的横向上侧边缘标记有阿拉伯数字6，在栅格的纵向左侧边缘标记有字母7，阿拉伯数字和字母分别对应于所在行列的孔。
利用上述实验动物实体器官组织梗死染色固定装置进入染色，具体步骤为：
1、TTC染色液配置：磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline，PBS)，红四氮唑粉末(2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC)，将红四氮唑粉末加入到磷酸缓冲盐溶液中，配制质量分数2％TTC染色液，溶液需4℃避光保存。
将老鼠脑梗死组织切片按固定顺序(从前到后或从上到下)置于栅格的孔中，使其铺于滤网上，然后在染色缸中倒入TTC染色液，使切片浸没于染色液中，盖上染色缸盖，置于37℃恒温振荡培养箱，轻微振荡(40-60rpm/min)孵育15min，孵育过程需避光。染色完成后，将栅格置于含有多聚甲醛的容器中对切片进行固定20min，固定好的切片放置至深色背景上拍摄图片、保存，利用相关软件计算目标器官组织梗死体积。
实施例2：
本实施例与实施例1基本相同，只是栅格是通透的(例如透明的孔板)，在栅格的孔的是旁边有标记，最后多聚甲醛固定完成后，直接将栅格放置至深色背景上拍摄图片保存，连同栅格一起拍摄，利用相关软件计算目标器官组织梗死体积。这样在照片中，每个栅格的孔上都有标记，避免组织切片的顺序混淆，从而确保结果的准确性。
Claims (7)
1.一种实验动物实体器官组织梗死染色固定装置，其特征在于，包括染色缸、染色缸盖和栅格，所述的染色缸为棕色或不透明的染色缸，所述的染色缸盖是棕色或不透明的染色缸盖，所述的栅格能放置于染色缸中，栅格中的孔的下部设有滤网。
2.根据权利要求1所述的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置，其特征在于，所述的栅格的大小与染色缸内的腔体大小相适应，以使栅格卡入染色缸内不会移动或晃动。
3.根据权利要求1或2所述的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置，其特征在于，所述的栅格上设有区分每个孔的标记。
4.根据权利要求3所述的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置，其特征在于，每个孔上标记有用于区分的记号或者在栅格的横向和纵向的边缘标记有记号。
5.根据权利要求1或2所述的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置，其特征在于，所述的栅格为通透的孔板。
6.一种实验动物实体器官组织梗死的染色方法，其是利用权利要求1所述的实验动物实体器官组织梗死染色固定装置进入染色，具体步骤为：
将实验动物实体器官组织梗死切片置于栅格的孔中，使其铺于滤网上，然后在染色缸中倒入TTC染色液，使切片浸没于染色液中，盖上染色缸盖，振荡孵育，染色完成后，将栅格置于含有多聚甲醛的容器中对组织切片进行固定，固定好的组织切片从栅格中夹出进行拍照或者直接对栅格进行拍照保存。
7.根据权利要求6所述的染色方法，其特征在于，所述的实验动物实体器官组织梗死为心梗、脑梗或肾梗。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: The Yangtze River Road 412007 in Hunan province Zhuzhou city Tianyuan District No. 116 Applicant after: ZHUZHOU CENTRAL Hospital Applicant after: Institute of zoology, Guangdong Academy of Sciences Address before: The Yangtze River Road 412007 in Hunan province Zhuzhou city Tianyuan District No. 116 Applicant before: ZHUZHOU CENTRAL Hospital Applicant before: Guangdong Institute of Applied Biological Resources |
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| CB02 | Change of applicant information |