CN108651438B - 一种用于组织块的组织固定脱落剂及应用 - Google Patents
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Abstract
根据现在组织细胞学分析过程中存在的问题，本发明提供一种用于组织块的组织固定脱落剂，由以下重量百分比的原料组成：甲醛 10‑15％；EDTA 0.1‑1％；甲醇 5‑15％；PEG400 0‑2％；泊洛沙姆 0‑1％；其余为纯净水，pH为7.0‑7.5。同时还提供了该试剂的应用，可以脱落经组织固定后的组织块上的细胞，做到固定组织及提取细胞悬液双重效果；本工艺简单易行，可以准确快速的检测到癌细胞。
Description
技术领域
本发明涉及组织固定液及细胞脱落剂领域，尤其涉及一种用于组织块的组织固定脱落剂及应用。
背景技术
目前动物及人体组织切除后，为防止组织腐败、变异和生物污染，防止病菌、病毒等散播，选择直接放入10％甲醛中固定为原则，然后再进行后期的切片、染色、研究等工作，用于组织学研究。现阶段是将组织进行切片，然后在显微镜下观察组织状况，但是由于切片的工艺复杂，且只有二维性，不能完全观察到所有类型的细胞；同时由于蛋白质的变性，被固定的生物组织上的细胞很难再从组织块表面上脱落下来，想从甲醛固定的组织块上采集到单一的大量的脱落细胞用于细胞学研究成为困难。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种用于组织块的组织固定脱落剂，该试剂即可固定组织，进行组织学研究，同时也可将组织表面的细胞洗脱，以方便细胞学的使用。
一种用于组织块的组织固定脱落剂，由以下重量百分比的原料组成：甲醛10-15％；EDTA 0.1-1％；甲醇5-15％；PEG400 0-2％；泊洛沙姆0-1％；其余为纯净水，pH为7.0-7.5。
优选的，一种用于组织块的组织固定脱落剂，由以下重量百分比的原料组成：甲醛10％；EDTA0.5％；甲醇10％；PEG400 1％；泊洛沙姆0.3％；其余为纯净水，pH为7.2。
优选地，所述的组织块为胃肠镜所取组织块。
上述试剂的应用，向配制好的试剂中放入新鲜组织块，静置20-30分钟，即可获得固定后的组织块，然后将固定后的组织块在1200-1800转的振荡器中震荡标本瓶10-20min，即可获得细胞悬液。
本发明的有益效果
1.准确性高
常规组织切片分析是将组织块的各个方位分别切取薄薄的几片，然后选取几片染色后在显微镜下观察，这种情况下有可能存在癌变的细胞在组织块的内部，且没有被切取，导致测试结果存在误差，但本发明的方法可以脱落几乎所有的细胞，再加上癌细胞比正常细胞易脱落，因此相对于现在的切片分析，本发明的方法准确性高；
2.快速便捷
本发明提供的组织固定脱落剂，可以快速脱落表面的细胞，且不影响组织固定、组织的保存，相比较现阶段的切片分析，本发明只需要加入组织固定脱落剂，离心，制片、染色即可，省去了切片的工序，因为须切取很薄的一片，费时费力，而本发明的方法简单快速；
3.原料简单易得
甲醛、EDTA与甲醇三者相辅相成，共同完成组织的固定及细胞的脱落。泊洛沙姆(Poloxamer)或PEG400，作为表面活性剂，维持细胞的正常形态，协助细胞脱落，使细胞在载玻片上分布均匀；
4.双重效果
本发明提供了一种用于组织块的组织固定脱落剂，该试剂即可固定组织，进行组织学研究，同时也可将组织表面的细胞洗脱，以方便细胞学的使用；本工艺简单易行，显微镜下即可观察到大量脱落细胞。
具体实施方式
实施例1
一种用于组织块的组织固定脱落剂，由以下重量百分比的原料组成：甲醛10％；EDTA0.1％；甲醇15％；泊洛沙姆1％；其余为纯净水，磷酸盐缓冲液调整pH为7.0。
上述试剂的应用，向配制好的试剂瓶中放入从肌肉中取得的新鲜组织块，静置20分钟，即可获得固定后的组织块，然后在1200转的振荡器中震荡15min，即得细胞悬液。
实施例2
一种用于组织块的组织固定脱落剂，由以下重量百分比的原料组成：甲醛15％；EDTA1％；甲醇5％；PEG400 2％；其余为纯净水，磷酸盐缓冲液调整pH为7.2。
上述试剂的应用，向配制好的试剂瓶中放入从胃部取得的新鲜组织块，静置25分钟，即可获得固定后的组织块，然后在1800转的振荡器中震荡15min，即得细胞悬液。
实施例3
一种用于组织块的组织固定脱落剂，由以下重量百分比的原料组成：甲醛10％；EDTA0.5％；甲醇10％；其余为纯净水，磷酸盐缓冲液调pH为7.2。
上述试剂的应用，向配制好的试剂瓶中放入从肠部取得的新鲜组织块，静置30分钟，即可获得固定后的组织块，然后在1500转的振荡器中震荡15min，后进行离心法制片，即得细胞悬液。
实施例4
一种用于组织块的组织固定脱落剂，由以下重量百分比的原料组成：甲醛10％；EDTA0.5％；甲醇10％；PEG400 1％；泊洛沙姆0.3％；其余为纯净水，磷酸盐缓冲液调pH为7.2。
上述试剂的应用，向配制好的试剂瓶中放入从肠部取得的新鲜组织块，静置30分钟，即可获得固定后的组织块，然后在1500转的振荡器中震荡15min，后进行离心法制片，即得细胞悬液。
对比例
一种用于组织块的组织固定剂，由以下原料组成：甲醛10％，水90％。其余同实施例4。
验证实验
在实践中我们发现，对于肿瘤组织上述试剂的应用更加明显，癌组织增长快，表面松散易脱落。
同等条件下，分别按照实施例1-4及对比例的配方获得同体积的细胞悬液，然后取同样体积量细胞悬液至载玻片上，干燥、染色，显微镜下观察到细胞个数情况，同时对比阳性率(符合率)，结果见表1。
Claims (4)
1.一种用于组织块的组织固定脱落剂，其特征在于，由以下重量百分比的原料组成：甲醛10-15％；EDTA0.1-1％；甲醇5-15％；PEG400 0-2％；泊洛沙姆0-1％；其余为纯净水，pH为7.0-7.5。
2.根据权利要求1所述的组织块的组织固定脱落剂，其特征在于，由以下重量百分比的原料组成：甲醛10％；EDTA0.5％；甲醇10％；PEG400 1％；泊洛沙姆0.3％；其余为纯净水，pH为7.2。
3.根据权利要求1或2所述的组织块的组织固定脱落剂，其特征在于，组织块为胃肠镜所取组织块。
4.一种权利要求1或2所述的组织块的组织固定脱落剂的应用，其特征在于，向组织固定脱落剂中放入新鲜组织块，静置20-30分钟，即可获得固定后的组织块，然后将固定后的组织块在1200-1800转的振荡器中震荡标本瓶10-20min，即可获得细胞悬液。
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