CN110368419B - 头花蓼在调节尿酸方面的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，具体是头花蓼在调节尿酸方面的应用。本发明通过研究，发现了头花蓼能够通过抑制肝脏中黄嘌呤氧化酶的活性，降低高尿酸血症个体血清中尿酸含量，能较好地应用于调节尿酸，治疗与高尿酸有关的疾病或制备用于治疗、预防、减轻和/或缓解与高尿酸有关的疾病的药物。头花蓼具有抗高尿酸血症和痛风作用，为治疗高尿酸血症和痛风提供了全新的、安全有效的天然药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体是头花蓼在调节尿酸方面的应用。
背景技术
尿酸是人类嘌呤化合物的代谢产物。人体内嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少会使血液中尿酸浓度持续增高，从而导致高尿酸血症。血液中过量的尿酸则会形成小针尖状单钠尿酸盐(MSU)结晶，沉积在关节、肾脏、软骨等处，引起软组织非特异性炎症反应，最终导致痛风(gout)。因此，高尿酸血症是诱发痛风的生化基础。
另一方面，高尿酸血症也是引起肾损害、高血压、高血脂症、动脉粥样硬化和肥胖等疾病发生的重要因素，已成为威胁人类健康的主要代谢性疾病之一。随着人们饮食结构和生活方式的改变，高尿酸血症的发病率逐年上升，据调查，我国成人患病率已超过20％，高尿酸血症已成为继高血压、高血糖、高血脂之外的“第四高”。目前，针对高尿酸血症与痛风的治疗，西医主要以增加尿酸排泄、降低血尿酸浓度为主。然而，促进尿酸排泄的药物由于副作用大，部分药物(如苯溴马隆)已经被迫撤出市场。
抑制黄嘌呤氧化酶的活性，降低黄嘌呤向尿酸的转化，可从根本上减少体内尿酸的生成，已成为治疗高尿酸血症和痛风的有效手段。黄嘌呤氧化酶抑制剂(如别嘌呤醇，非布司他)自1966年用于临床以来，一直是降尿酸的一线药物，但别嘌呤醇仍具有肝脏和骨髓的毒性，非布司他在使用过程中也会肝功能异常。因此，寻找更安全有效的黄嘌呤氧化酶抑制剂以降低尿酸的生成，是目前急需解决的问题。
植物药是寻找和开发治疗高尿酸血症和痛风药物的重要来源，头花蓼(Polygonumcapitatum)为蓼科蓼属头状蓼组多年生草本植物，主要产于我国的西南地区，是少数民族地区常用药，具有清热利湿、解毒止痛、和血散瘀、利尿通淋的功效，临床上主要用于治疗肾盂肾炎、尿路结石、膀胱炎、痢疾、风湿痛、跌打损伤、尿道感染、疮疡湿疹等症。但未见用于治疗高尿酸血症和痛风的报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了具有抗高尿酸血症和痛风作用的苗药头花蓼提取物，为治疗高尿酸血症和痛风提供了有效的药物，具体如下：
头花蓼在调节尿酸方面的应用。本发明通过研究发现了头花蓼能够降低高尿酸血症个体血清中的尿酸含量，在调节尿酸方面有着良好的应用前景。
头花蓼在调节尿酸方面的应用，使其能更好地在与高尿酸相关疾病中进行应用。进一步地，头花蓼可以用于治疗、预防、减轻和/或缓解高尿酸相关疾病的药物制备，目前较为常见的与高尿酸有关的疾病，是高尿酸血症及痛风。
优选地，所述调节尿酸方面的应用，是抑制黄嘌呤氧化酶活性方面的应用。本发明研究发现头花蓼对黄嘌呤氧化酶具有显著的抑制活性，能够将其应用在抑制黄嘌呤氧化酶活性的相关方面。
所述头花蓼可以是单独的头花蓼原药材、头花蓼提取物或头花蓼有效部位的形式；还可以是头花蓼与其他中药组成的组合物形式。各种形式的头花蓼均包含头花蓼的特征，应当与头花蓼等同看待。
优选地，所述头花蓼提取物，是头花蓼水提取物、醇提取物、醇-水混合提取物中一种。
进一步优选地，所述头花蓼醇-水混合提取物，是头花蓼含水乙醇/甲醇提取物。所述溶剂为含水乙醇/甲醇时，含水乙醇/甲醇的体积百分含量为10％～90％，优选为50％～80％。
进一步优选地，所述头花蓼醇提取物，是头花蓼甲醇/乙醇提取物。
进一步优选地，所述头花蓼水提取物，是将头花蓼用水煎煮和或回流提取后得到。进一步优选地，所述提取时间为每次1～4小时，优选为1～1.5小时；提取次数为1～3次，优选为2次。
本发明通过研究，发现了头花蓼提取物对黄嘌呤氧化酶具有显著的抑制活性，能够降低高尿酸血症个体血清中尿酸含量，说明头花蓼具有抗高尿酸血症和痛风作用。
与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在：
本发明提供了能够抑制肝脏黄嘌呤氧化酶活性的头花蓼提取物，能够降低高尿酸血症个体血清中尿酸的含量，说明头花蓼能较好地应用于调节尿酸，治疗高尿酸相关疾病领域、或用于制备治疗、预防、减轻和/或缓解尿酸相关疾病的药物。头花蓼具有抗高尿酸血症和痛风作用，为治疗高尿酸血症和痛风提供了全新的、安全有效的天然药物。
附图说明
图1是头花蓼水提物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响结果图；
图2是头花蓼水提物对高尿酸血症小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性的影响。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
实施例1
头花蓼甲醇提取物的制备：
将头花蓼全草粉碎，过4号筛，称取一定量放入圆底烧瓶中，加入8倍量甲醇，加热回流提取1h，过滤，滤渣加入8倍量甲醇提取1h，过滤，合并两次滤液浓缩至浸膏，真空干燥，得到头花蓼甲醇提取物，提取率为13.98％。
实施例2
头花蓼80％乙醇提取物的制备：
将头花蓼全草粉碎，过4号筛，称取一定量放入圆底烧瓶中，加入8倍量80％乙醇-水混合溶剂，加热回流提取1h，过滤，滤渣加入8倍量80％乙醇-水混合溶剂提取1h，过滤，合并两次滤液浓缩至浸膏，真空干燥，得到头花蓼80％乙醇提取物，提取率为21.53％。
实施例3
头花蓼水提物的制备：
将头花蓼全草粉碎，过4号筛，称取一定量放入圆底烧瓶中，加入8倍量水浸泡1h，煎煮提取2h，过滤，滤渣加入8倍量水提取1.5h，过滤，再以8倍量水提取1h，合并三次滤液浓缩至浸膏，真空干燥，得到头花蓼水提取物，提取率为20.08％。
将实施例1-3得到的头花蓼提取物进行如下实验：
1.头花蓼水提物对氧嗪酸钾和酵母膏诱导高尿酸血症小鼠尿酸水平及肝脏黄嘌呤氧化酶活性的影响：
1.1将实验用昆明小鼠(体重18～22g)随机分为正常对照组、模型组、别嘌呤醇组、头花蓼水提取物低剂量组(0.875g/kg)、中剂量组(1.75g/kg)、高剂量组(3.5g/kg)，每组10只。模型组与各给药组饲料以1:3(酵母膏:鼠饲料)比例加入酵母膏，并按照250mg/kg/d剂量口服灌胃氧嗪酸钾进行造模，连续造模7天，别嘌呤醇组和给药组分别在给予造模剂的第3天给予别嘌呤醇(5mg/kg)和不同剂量的头花蓼水提取物，正常对照组以等剂量蒸馏水代替。末次给药1h后，小鼠摘眼球取血约2-3mL，2500r/min离心15min，分离血清，测定尿酸含量。同时取出肝脏、称重后剪碎，加入生理盐水，匀浆，匀浆液离心，取上清液，测定小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性。
1.2采用SPSS(19.0)统计软件进行分析，结果以Mean±SD表示。采用t检验统计分析两组间实验数据，p<0.05具有统计学差异。
1.3头花蓼水提物对高尿酸血症小鼠尿酸水平及肝脏黄嘌呤氧化酶活性的影响(Mean±SD，n＝10)：
##p<0.01vs正常对照组，**p<0.01vs模型组
2.体外筛选头花蓼醇提物对黄嘌呤氧化酶活性的影响：
2.1底物的配制：
称取黄嘌呤9.13mg，加入PBS缓冲溶液(pH＝7.3)超声溶解，室温下用1M的NaOH溶液调pH至7.5，定容至100mL，最终获得0.6mM的黄嘌呤底物溶液。
2.2酶溶液的配制：
取1mL无菌水溶解黄嘌呤氧化酶，获得100U/mL的黄嘌呤氧化酶溶液，将其分装至EP管中，每管50μL，-80℃保存。每次取1-2管酶溶液，用PBS缓冲溶液(pH＝7.3)进行稀释，最终获得0.2U/mL的黄嘌呤氧化酶溶液。配制完毕立即放入冰盒保存。
2.3样品溶液的配制
取头花蓼甲醇提取物干燥浸膏适量，精密称定，用DMSO溶解，加PBS缓冲溶液(pH＝7.5)稀释，获得最大浓度为1mg/mL的供试品溶液，采用二倍稀释法，依次获得250、125、62.5、31.3、15.62、7.81、3.91μg/ml的供试品溶液。
2.4黄嘌呤氧化酶体外活性抑制试验
采用96孔板进行酶反应试验，反应体系中(总体积为200μL)分别为100μL的供试品溶液和50μL黄嘌呤氧化酶PBS溶液(终浓度0.05U/mL)，在25℃预温育15min后，加入50μL黄嘌呤底物溶液(终浓度150μM)以启动反应。在25℃温育20min后，加入50μLHCl溶液(1mol/L)终止反应。使用Thermo Scientific Varioskan LUK酶标仪在290nm波长下测定反应液的吸光度，每个样品平行测定3次，计算平均抑制率。其中，空白组为1％浓度的DMSO的PBS缓冲溶液。
2.5黄嘌呤氧化酶抑制率的计算
活性抑制率(％)＝(1-B/A)×100％，以百分比表示：其中：A为空白组的吸光度，B为供试品的吸光度。
2.6半数抑制浓度(IC50)的计算
采用GraphpadPrism软件进行数据分析，以提取物(或别嘌呤醇)的浓度的对数为横坐标，以其相对应的吸光度为纵坐标作线性拟合，计算IC50。
2.7头花蓼甲醇提取物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制作用见表1，头花蓼甲醇提取物浓度≥31.25μg/mL时，抑制率均大于50％，IC50值为23.10μg/mL，表现出良好的抑制黄嘌呤氧化酶活性的能力。
以上活性测试结果表明，头花蓼能够通过抑制肝脏中黄嘌呤氧化酶的活性，降低血清中尿酸的含量，能较好地应用于调节尿酸、治疗与高尿酸血症相关的疾病，或用于制备治疗高尿酸血症相关疾病的药物。头花蓼具有抑制黄嘌呤氧化酶活性和降低血尿酸的作用，为治疗高尿酸血症和痛风提供了全新的、安全有效的天然药物。
最后，应当指出，以上实施例仅是本发明较有代表性的例子。显然，本发明的技术方案并不限于上述实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (7)
1.头花蓼在制备用于高尿酸血症或痛风方面的降低高尿酸血症个体血清中尿酸含量的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于高尿酸血症或痛风方面的降低高尿酸血症个体血清中尿酸含量的药物中的应用，是制备抑制黄嘌呤氧化酶活性方面药物的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述头花蓼可以是单独的头花蓼原药材、头花蓼提取物或头花蓼有效部位的形式；还可以是头花蓼与其他中药组成的组合物形式。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述头花蓼提取物，是头花蓼水提取物、醇提取物、醇-水混合提取物中的一种。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述头花蓼醇提取物，是头花蓼甲醇或乙醇提取物。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述头花蓼水提取物，是将头花蓼用水煎煮和/或回流提取后得到。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述头花蓼醇-水混合提取物，是头花蓼含水乙醇或含水甲醇提取物。
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