CN110357938B - 一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法，包括以下步骤：A)将菠萝蜜种子预处理，得到种子粉；B)将种子粉脱脂、用碱提取，超声、离心，得到上清液和沉淀；沉淀用碱复提一次，合并上清液，备用，得到的沉淀用酸中和，洗涤后，离心得到沉淀物；C)将上清液采用酸调节pH值至4.3，放置、离心、溶解、洗涤、冻干得到碱溶蛋白；将沉淀物配制成悬浊液，采用α‑淀粉酶酶解，接着加入淀粉葡萄糖苷酶酶解，最后加入β‑1,3,4‑葡聚糖酶酶解，而后将悬浊液离心、清洗、冻干得到碱不溶蛋白。本发明采用弱碱联合超声波辅助酶法最大限度进行菠萝蜜蛋白质的提取，同时保证了所提取的菠萝蜜蛋白质达到应用的品质。

Description

一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法

技术领域

本发明涉及食品工业技术领域，尤其是涉及一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法。

背景技术

菠萝蜜(Artocarpus heterophylls Lam.)又名木菠萝、树菠萝，属桑科桂木属常绿乔木，是集水果、粮食及珍贵用材于一体的热带树种，原产于热带亚洲的印度，在热带潮湿地区广泛栽培，主要分布于东南亚国家如斯里兰卡、缅甸、印度尼西亚、中国等。在国内主要分布在海南、广东、广西、云南、福建和四川，其中以海南省种植最多。

一个菠萝蜜中果肉占总重的35％左右，种子和皮渣分别占20％和45％，在对果肉集中加工时必然会剩下大量的下脚料—种子和皮渣，而作为下脚料之一的菠萝蜜种子除利用其进行选育种外都被丢弃。菠萝蜜种子含有58～63％粗淀粉，10～12％粗蛋白质，0.70％的粗脂肪和2.00％灰分(干基)，从成分组成看菠萝蜜种子无疑是一种富含淀粉和蛋白，具有开发价值的淀粉和蛋白资源，但新鲜的菠萝蜜种子不耐贮藏，虽然富含淀粉和蛋白，但大部分种子被丢弃，造成资源的浪费。

目前国内外蛋白质提取方法主要为碱提酸沉法，碱提酸沉法是先用强碱溶液浸泡原料，然后通过等电点强酸沉淀法将蛋白质析出，再经离心脱水分离出蛋白质，干燥粉碎即得成品。但是在高碱性条件下，所得蛋白结构易受损，影响产品的质量和外观，不利于产品的应用及对环境造成污染。此外，目前关于菠萝蜜种子蛋白质提取分离的研究较少。菠萝蜜种子含有丰富的淀粉，必然与蛋白质组分存在结合作用，对蛋白质的提取造成了一定的阻碍，常规的提取方法效率不高。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法，本发明提取可以得到碱溶蛋白和碱不溶蛋白质，纯度高，提取率高。

本发明提供了一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法，包括以下步骤：

A)将菠萝蜜种子预处理，得到种子粉；

B)将种子粉脱脂、用碱提取，超声、离心，得到上清液和沉淀；沉淀用碱复提一次，合并上清液，备用，得到的沉淀用酸中和，洗涤后，离心得到沉淀物；

C)将上清液采用酸调节pH值至4.3，放置、离心、溶解、洗涤、冻干得到碱溶蛋白；

将沉淀物配制成悬浊液，采用α-淀粉酶酶解，接着加入淀粉葡萄糖苷酶酶解，最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶酶解，而后将悬浊液离心、清洗、冻干得到碱不溶蛋白。

优选的，所述预处理具体为：采用水洗去菠萝蜜种子外层的果胶，然后磨粉、风干、过筛；所述磨粉为用粉碎机细化处理2min～10min。

优选的，步骤B)所述脱脂为采用正己烷脱脂；所述种子粉和正己烷的质量体积比为1g/5～8mL。

优选的，所述用碱提取为用NaHCO₃提取；所述NaHCO₃的浓度为1mol/L；所述NaHCO₃与菠萝蜜种子的质量比为10:1。

优选的，所述水浴超声采用数控超声波清洗器，功率为200～500w，时间20～50min。

优选的，步骤C)所述酸为HAc；所述酸浓度为1mol/L；所述放置具体为4℃放置1h；所述溶解为用蒸馏水溶解调pH至7。

优选的，每1g沉淀物加入α-淀粉酶的酶活力为10000～12000U/g；每1g种子粉加入淀粉葡萄糖苷酶的酶活力为600～800U/g；每1g种子粉加入β-1,3,4-葡聚糖酶的酶活力为6～10U/g。

优选的，步骤C)所述α-淀粉酶酶解温度为60℃～70℃；所述酶解时间为1～2h；所述淀粉葡萄糖苷酶酶解温度为35℃～45℃；所述酶解时间为14～18h；所述β-1,3,4-葡聚糖酶酶解温度为35℃～38℃；所述酶解时间为1～1.5h。

优选的，步骤C)所述悬浊液离心转速为4000rpm～5000rpm，离心时间为20～30min。

优选的，步骤C)所述悬浊液离心后冻干具体为在-80℃将蛋白沉淀干燥至水分质量百分含量为4～6％。

与现有技术相比，本发明提供了一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法，包括以下步骤：A)将菠萝蜜种子预处理，得到种子粉；B)将种子粉脱脂、用碱提取，超声、离心，得到上清液和沉淀；沉淀用碱复提一次，合并上清液，备用，得到的沉淀用酸中和，洗涤后，离心得到沉淀物；C)将上清液采用酸调节pH值至4.3，放置、离心、溶解、洗涤、冻干得到碱溶蛋白；将沉淀物配制成悬浊液，采用α-淀粉酶酶解，接着加入淀粉葡萄糖苷酶酶解，最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶酶解，而后将悬浊液离心、清洗、冻干得到碱不溶蛋白。本发明采用弱碱联合超声波辅助酶法最大限度进行菠萝蜜蛋白质的提取，同时保证了所提取的菠萝蜜蛋白质达到应用的品质。实验结果表明，本发明制备的菠萝蜜种子蛋白其蛋白含量98.92％左右(干基)，提取率超过95％(干基)，从蛋白质二三级结构及微观结构表征显示蛋白质结构保持完整，且蛋白质功能性质中的起泡性和起泡稳定性较常规强碱提取强酸沉淀法分别提高了50％和20％，该蛋白在低于常规强碱提取强酸沉淀法提取的蛋白浓度50％的条件下即可形成凝胶。

具体实施方式

本发明提供了一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供了一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法，包括以下步骤：

A)将菠萝蜜种子预处理，得到种子粉；

B)将种子粉脱脂、用碱提取，超声、离心，得到上清液和沉淀；沉淀用碱复提一次，合并上清液，备用，得到的沉淀用酸中和，洗涤后，离心得到沉淀物；

C)将上清液采用酸调节pH值至4.3，放置、离心、溶解、洗涤、冻干得到碱溶蛋白；

将沉淀物配制成悬浊液，采用α-淀粉酶酶解，接着加入淀粉葡萄糖苷酶酶解，最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶酶解，而后将悬浊液离心、清洗、冻干得到碱不溶蛋白。

本发明提供的从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法首先将菠萝蜜种子预处理，得到种子粉。

本发明所述预处理具体为：采用水洗去菠萝蜜种子外层的果胶，然后磨粉、风干、过筛。

优选具体为：采用水将新鲜菠萝蜜种子外层的果胶物质洗掉，清洗至不粘手；将去果胶的种子用粉碎机进行粉碎，本发明所述磨粉为用粉碎机细化处理2min～10min。得到的种子粉进行室温风干后再次粉碎磨粉，接着过筛。本发明所述过筛优选为过60目筛。本发明对于所述清洗、磨粉、风干、过筛等操作不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。

得到种子粉后，将种子粉脱脂。

本发明所述脱脂为采用正己烷脱脂；即为将种子粉按照1g/5～8mL质量与体积比用正己烷脱脂，磁力搅拌2～3h后，抽干正己烷，并将种子粉烘干。

本发明对于所述正己烷的来源不进行限定，本领域技术人员熟知的市售即可。本发明对于所述搅拌、抽干、烘干不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。

脱脂后，用碱提取，超声、离心，得到上清液和沉淀。

本发明优选采用弱碱提取；所述用碱提取为用NaHCO₃提取；所述NaHCO₃的浓度为1mol/L；所述NaHCO₃与菠萝蜜种子的质量比为10:1；

优选具体为：用NaHCO₃与种子粉按上述比例配制成悬浊液，磁力搅拌4～5h，接着水浴超声处理后，离心分离上清液和沉淀，沉淀按上述条件复提1～2次，合并上清液。本发明所述水浴超声采用数控超声波清洗器，功率为200～500w，时间20～50min。

针对现有蛋白质提取方法采用强碱提取强酸沉淀的缺陷或复合酶联合碱提酸沉蛋白提取率不高等问题，本发明优化工艺步骤，选择采用弱碱联合超声波辅助酶法最大限度进行菠萝蜜蛋白质的提取，同时保证了所提取的菠萝蜜蛋白质达到应用的品质，在某些方面甚至更优于现有水平。

将上清液采用酸调节pH值至4.3，放置、离心、溶解、洗涤、冻干得到碱溶蛋白。优选具体为：上清液用酸调pH至4.3，放置，离心得到蛋白沉淀，用适量蒸馏水溶解调pH至7后，洗涤，冻干，过筛即得碱溶蛋白质。

本发明所述酸为HAc；所述酸浓度为1mol/L；所述放置具体为4℃放置1h；所述溶解为用蒸馏水溶解调pH至7。

本发明所述离心转速为4000rpm～5000rpm，优选为4600～4800rpm；离心时间为20～30min。本发明所述冻干具体为在-80℃采用冻干机冻干。

得到的沉淀用酸中和，洗涤后，离心得到沉淀物。优选具体为：沉淀用1mol/LHAc中和，用蒸馏水洗2～3次，离心得到沉淀物。

将沉淀物配制成悬浊液，即为所得的沉淀物用8～10倍蒸馏水的配制成悬浊液，采用α-淀粉酶酶解，接着加入淀粉葡萄糖苷酶酶解，最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶酶解。

按照本发明，每1g沉淀物种子粉加入α-淀粉酶的酶活力为10000～12000U/g；每1g种子粉加入淀粉葡萄糖苷酶的酶活力为600～800U/g；每1g种子粉加入β-1,3,4-葡聚糖酶的酶活力为6～10U/g。

所述α-淀粉酶酶解温度优选为60℃～70℃；更优选为65℃；pH值为6.5，所述酶解时间为1～2h；所述淀粉葡萄糖苷酶酶解温度为35℃～45℃；更优选为40℃；pH值为6.5，所述酶解时间为14～18h；所述β-1,3,4-葡聚糖酶酶解温度为35℃～38℃；更优选为37℃；pH值为5.0，所述酶解时间为1～1.5h。

本发明的酶的种类及活力的选择及酶解顺序的选择并不是偶然的，而是发明人付出了创造性的劳动得到，酶及各种比例的调整均会影响最终蛋白的提取效果，只有采用本发明所给的酶及酶的相应活力对菠萝蜜种子进行处理，而且按照本发明的顺序进行才能得到本发明的结果，将酶进行替换或者加酶顺序的替换均得不到最大蛋白质提取率和纯度。

而后将悬浊液离心、清洗、冻干得到碱不溶蛋白。

将悬浊液离心，得到沉淀，用去离子水清洗2次，丢弃上清液，收集蛋白质沉淀；本发明所述离心转速为4000rpm～5000rpm，优选为4600～4800rpm；离心时间为20～30min。

本发明所述冻干具体为在-80℃采用冻干机冻干，将蛋白沉淀干燥至水分质量百分含量为4～6％。冻干蛋白质样品过100目样品筛，得到碱不溶蛋白质。

本发明采用菠萝蜜种子为原料提取其中的蛋白质资源，提取方法中不使用强碱和强酸，取而代之的是使用弱碱联合超声波辅助酶法提取碱溶和碱不溶蛋白质，相比于强碱提取强酸沉淀法在提取节约成本的基础上不破坏蛋白质结构，对环境没有污染，操作简单，成本低，而且可以最大限度的提取蛋白质，适合蛋白质大规模生产。

本发明提供了一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法，包括以下步骤：A)将菠萝蜜种子预处理，得到种子粉；B)将种子粉脱脂、用碱提取，超声、离心，得到上清液和沉淀；沉淀用碱复提一次，合并上清液，备用，得到的沉淀用酸中和，洗涤后，离心得到沉淀物；C)将上清液采用酸调节pH值至4.3，放置、离心、溶解、洗涤、冻干得到碱溶蛋白；D)将沉淀物配制成悬浊液，采用α-淀粉酶酶解，接着加入淀粉葡萄糖苷酶酶解，最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶酶解，而后将悬浊液离心、清洗、冻干得到碱不溶蛋白。本发明采用弱碱联合超声波辅助酶法最大限度进行菠萝蜜蛋白质的提取，同时保证了所提取的菠萝蜜蛋白质达到应用的品质。实验结果表明，本发明制备的菠萝蜜种子蛋白其蛋白含量98.92％左右(干基)，提取率超过95％(干基)，从蛋白质二三级结构及微观结构表征显示蛋白质结构保持完整，且蛋白质功能性质中的起泡性和起泡稳定性较常规强碱提取强酸沉淀法分别提高了50％和20％，该蛋白在低于常规强碱提取强酸沉淀法提取的蛋白浓度50％的条件下即可形成凝胶。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法进行详细描述。

实施例1：从菠萝蜜种子中提取蛋白质

脱果胶：称取1kg菠萝蜜种子(蛋白质含量10％，干基；水分含量50％)，用2L自来水将新鲜菠萝蜜种子外层的果胶物质洗掉，清洗至不粘手；

磨粉：将去果胶的种子用粉碎机进行粉碎，得到的种子粉进行室温风干后再次粉碎磨粉，接着过60目筛；

脱脂：将种子粉按照1:5的质量与体积比用正己烷脱脂，磁力搅拌3h后，抽干正己烷，并将种子粉烘干；

提取：用1mol/L NaHCO₃与种子粉按1:1比例配制成悬浊液，磁力搅拌4h，接着水浴超声处理后(300W)中处理30min，离心分离上清液和沉淀，沉淀按上述条件复提1次，合并上清液；

碱溶蛋白：上清液用1mol/L HAc调pH至4.3，4℃放置1h，离心得到蛋白沉淀，用适量蒸馏水溶解调pH至7后，洗涤，冻干，过筛即得碱溶蛋白质15g。

脱淀粉：沉淀用1mol/L HAc中和，用蒸馏水洗2次，离心得到沉淀物，所得的沉淀物用10倍蒸馏水配制成悬浊液，接着加入α-淀粉酶至浓度为10000U/g，于65℃，pH 6.5酶解1h；再加入淀粉葡萄糖苷酶至浓度为600U/g，于40℃，pH 6.5酶解16h；最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶至浓度为6U/g，于37℃，pH 5.0酶解1h。

离心：将悬浊液离心(4800rpm，30min)，得到沉淀，用去离子水清洗2次，丢弃上清液，收集蛋白质沉淀；

冷冻干燥：蛋白质沉淀在-80℃环境下用冻干机冻干，得到干燥的蛋白质样品；

包装：冻干蛋白质样品过100目样品筛，得到碱不溶蛋白质33g。

蛋白质提取率为96.78％(干基)，蛋白质纯度为98.92％，pH在7条件下粒径为6.52μm，从蛋白质二三级结构及微观结构表征显示蛋白质结构保持完整，且蛋白质功能性质中的起泡性(108.33％)和起泡稳定性(74.14％)较常规强碱提取强酸沉淀法(58.33％和91.96％)分别提高了近50％和17.82％，且该蛋白在低于常规强碱提取强酸沉淀法提取的蛋白浓度50％的条件下即可形成凝胶。

对比例1：从菠萝蜜种子中提取蛋白质

脱果胶：称取1kg菠萝蜜种子(蛋白质含量10％，干基；水分含量50％)，用2L自来水将新鲜菠萝蜜种子外层的果胶物质洗掉，清洗至不粘手；

磨粉：将去果胶的种子用粉碎机进行粉碎，得到的种子粉进行室温风干后再次粉碎磨粉，接着过60目筛；

脱脂：将种子粉按照1:5的质量与体积比用正己烷脱脂，磁力搅拌3h后，抽干正己烷，并将种子粉风干；

脱淀粉：所得的脱脂粉用蒸馏水按照1:10的质量比配制成悬浊液，接着加入α-淀粉酶(来自于芽孢杆菌)至浓度为10000U/g，于65℃，pH 6.5酶解1h；再加入淀粉葡萄糖苷酶至浓度为600U/g，于40℃，pH 6.5酶解16h；最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶至浓度为6U/g，于37℃，pH 5.0酶解1h。最后将悬浊液离心(4800rpm，30min)，得到沉淀冻干，得到脱脂脱淀粉种子粉。

提取：用蒸馏水将脱脂、脱淀粉种子粉按照1:10的质量比配制成悬浊液，接着用1mol/L NaOH调pH至10，磁力搅拌1h，提取蛋白质；

离心：悬浊液通过离心机离心(4800rpm，30min)，收集上清液，沉淀按照上述条件再次溶解复提1h，接着再次离心，合并所得上清液；

酸沉：将上清液用1mol/L HCL调pH至4.3(蛋白质等电点)，搅拌后放置于4℃下1h；

离心：将上清液用离心机离心(4800rpm，30min)后，丢弃上清液，收集蛋白质沉淀，得到的蛋白质沉淀用一定量的水溶解后调pH至7；

冷冻干燥：将洗涤过的蛋白质溶液在-80℃环境下用冻干机冻干，得到干燥的蛋白质样品；

包装：冻干蛋白质样品过100目样品筛，提取菠萝蜜种子蛋白质18g。

蛋白质提取率为35.44％(干基)，蛋白质纯度为97.60％，pH在7条件下粒径为10.66μm，从蛋白质二三级结构及微观结构表征显示蛋白质结构不完整，且蛋白质功能性质中的起泡性和起泡稳定性分为58.33％和91.96％，且该蛋白在低于常规强碱提取强酸沉淀法提取的蛋白浓度50％的条件下不形成凝胶。

实施例2：从菠萝蜜种子中提取蛋白质

脱果胶：称取10kg菠萝蜜种子(蛋白质含量12％，干基；水分含量45％)，用20L自来水将新鲜菠萝蜜种子外层的果胶物质洗掉，清洗至不粘手；

磨粉：将去果胶的种子用粉碎机进行粉碎，得到的种子粉进行室温风干后再次粉碎磨粉，接着过60目筛；

脱脂：将种子粉按照1:5的质量与体积比用正己烷脱脂，磁力搅拌3h后，抽干正己烷，并将种子粉风干；

提取：用1mol/L NaHCO₃与种子粉按1:1比例配制成悬浊液，磁力搅拌4h，接着水浴超声处理后(400W)中处理40min，离心收集沉淀，沉淀按上述条件复提1次，合并上清液；

碱溶蛋白质：上清液用1mol/L HAc调pH至4.3，4℃放置1h，离心得到蛋白沉淀，用适量蒸馏水溶解调pH至7后，洗涤，离心，冻干，过筛即得碱溶蛋白质191g；

脱淀粉：沉淀用1mol/L HAc中和，用蒸馏水洗2次，离心得到沉淀物，所得的沉淀物用10倍蒸馏水配制成悬浊液，接着加入α-淀粉酶(来自于芽孢杆菌)至浓度为12000U/g，于65℃，pH 6.5酶解1h；再加入淀粉葡萄糖苷酶至浓度为700U/g，于40℃，pH 6.5酶解16h；最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶至浓度为10U/g，于37℃，pH 5.0酶解1h。最后将悬浊液离心(4800rpm，30min)，得到沉淀冻干，得到脱脂脱淀粉种子粉。

离心：将悬浊液离心(4800rpm，30min)，得到沉淀，用去离子水清洗2次，丢弃上清液，收集蛋白质沉淀；

冷冻干燥：蛋白质沉淀在-80℃环境下用冻干机冻干，得到干燥的蛋白质样品；

包装：冻干蛋白质样品过100目样品筛，得到碱不溶蛋白质447g。

蛋白质提取率为96.69％(干基)，蛋白质纯度为98.62％，pH在7条件下粒径为6.23μm，从蛋白质二三级结构及微观结构表征显示蛋白质结构保持完整，且蛋白质功能性质中的起泡性(108.33％)和起泡稳定性(74.14％)较常规强碱提取强酸沉淀法(58.44％和90.47％)分别提高了近50％和16.33％，且该蛋白在低于常规强碱提取强酸沉淀法提取蛋白浓度50％条件下即可形成凝胶。

对比例2从菠萝蜜种子中提取蛋白质

脱果胶：称取10kg菠萝蜜种子(蛋白质含量12％，干基；水分含量45％)，用2L自来水将新鲜菠萝蜜种子外层的果胶物质洗掉，清洗至不粘手；

磨粉：将去果胶的种子用粉碎机进行粉碎，得到的种子粉进行室温风干后再次粉碎磨粉，接着过60目筛；

脱脂：将种子粉按照1:5的质量与体积比用正己烷脱脂，磁力搅拌3h后，抽干正己烷，并将种子粉风干；

脱淀粉：所得的脱脂粉用蒸馏水按照1:10的质量比配制成悬浊液，接着加入α-淀粉酶(来自于芽孢杆菌)至浓度为12000U/g，于65℃，pH 6.5酶解1h；再加入淀粉葡萄糖苷酶至浓度为700U/g，于40℃，pH 6.5酶解16h；最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶至浓度为10U/g，于37℃，pH 5.0酶解1h。最后将悬浊液离心(4800rpm，30min)，得到沉淀冻干，得到脱脂脱淀粉种子粉。

提取：用蒸馏水将脱脂、脱淀粉种子粉按照1:10的质量比配制成悬浊液，接着用1mol/L NaOH调pH至10，磁力搅拌1h，提取蛋白质；

离心：悬浊液通过离心机离心(4800rpm，30min)，收集上清液，沉淀按照上述条件再次溶解复提1h，接着再次离心，合并所得上清液；

酸沉：将上清液用1mol/L HCL调pH至4.3(蛋白质等电点)，搅拌后放置于4℃下1h；

离心：将上清液离心(4800rpm，30min)后，丢弃上清液，收集蛋白质沉淀，得到的蛋白质沉淀用一定量的水溶解后调pH至7；

冷冻干燥：蛋白质溶液在-80℃环境下冻干，得到干燥的蛋白质样品；

包装：冻干蛋白质样品过100目样品筛，提取菠萝蜜种子蛋白质237g。

蛋白质提取率为36.89％(干基)，蛋白质纯度为97.77％，pH在7条件下粒径为10.78μm，从蛋白质二三级结构及微观结构表征显示蛋白质结构不完整，且蛋白质功能性质中的起泡性和起泡稳定性分为58.44％和90.47％，且该蛋白在低于常规强碱提取强酸沉淀法提取的蛋白浓度50％的条件下不形成凝胶。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种从菠萝蜜种子中提取蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A)将菠萝蜜种子预处理，得到种子粉；

B)将种子粉脱脂、用碱提取，超声、离心，得到上清液和沉淀；沉淀用碱复提一次，合并上清液，备用，得到的沉淀用酸中和，洗涤后，离心得到沉淀物；所述用碱提取为用NaHCO₃提取；所述NaHCO₃的浓度为1mol/L；所述NaHCO₃溶液与菠萝蜜种子的质量比为10:1；所述超声采用数控超声波清洗器，功率为200～500w，时间20～50min；

C)将上清液采用酸调节pH值至4.3，放置、离心、溶解、洗涤、冻干得到碱溶蛋白；

将沉淀物配制成悬浊液，采用α-淀粉酶酶解，接着加入淀粉葡萄糖苷酶酶解，最后加入β-1,3,4-葡聚糖酶酶解，而后将悬浊液离心、清洗、冻干得到碱不溶蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理具体为：采用水洗去菠萝蜜种子外层的果胶，然后磨粉、风干、过筛；所述磨粉为用粉碎机细化处理2min～10min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B)所述脱脂为采用正己烷脱脂；所述种子粉和正己烷的质量体积比为1g/5～8mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C)所述酸为HAc；所述酸浓度为1mol/L；所述放置具体为4℃放置1h；所述溶解为用蒸馏水溶解调pH至7。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每1g沉淀物加入α-淀粉酶的酶活力为10000～12000U/g；每1g种子粉加入淀粉葡萄糖苷酶的酶活力为600～800U/g；每1g种子粉加入β-1,3,4-葡聚糖酶的酶活力为6～10U/g。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C)所述α-淀粉酶酶解温度为60℃～70℃；所述酶解时间为1～2h；所述淀粉葡萄糖苷酶酶解温度为35℃～45℃；所述酶解时间为14～18h；所述β-1,3,4-葡聚糖酶酶解温度为35℃～38℃；所述酶解时间为1～1.5h。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C)所述悬浊液离心转速为4000rpm～5000rpm，离心时间为20～30min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C)所述悬浊液离心后冻干具体为在-80℃将蛋白沉淀干燥至水分质量百分含量为4～6％。