CN110357824A - [3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物及制备方法和应用 - Google Patents
[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物及制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种[3,5‑二取代苯基‑1‑(1,2,4‑三氮唑基)]苯磺酸衍生物及其制备方法和应用。以取代苯甲酸原料,通过酰化反应及与取代苯甲酰胺的缩合成环反应,再与对肼基苯磺酸衍生物反应得到目标产物[3,5‑二取代苯基‑1‑(1,2,4‑三氮唑基)]苯磺酸衍生物。该类化合物可有效对抗由双氧水、硝普钠、铁离子、铜离子引起的神经细胞氧化应激损伤,通过清除自由基和恢复线粒体膜电位修复线粒体功能,对神经元细胞表现出具有显著的保护作用。该类化合物清除自由基和靶向保护线粒体的神经保护作用,可应用于制备预防和治疗中风、脑损伤、脊髓损伤、帕金森病、阿尔兹海默症、肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病的药物。
Description
技术领域
本发明涉及一种[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物及其制备方法,同时本发明还涉及[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。
背景技术
中风、脑损伤、阿尔兹海默症,帕金森症等神经退行性疾病严重影响患者的生活水平,目前尚未有有效的治疗策略。线粒体是脑内重要的提供能量的细胞器,脑内90%的氧分子在线粒体内被消耗,氧作为呼吸链的终端电子受体,参与产ATP的氧化磷酸化过程。当神经系统受到外界损伤和刺激时,氧可通过一系列反应产生有害自由基,发生氧化应激反应,活性氧(ROS)/活性氮(RNS)是氧化应激中产生的两类主要自由基,过量自由基可以与蛋白质和脂质发生反应,导致神经元破坏;自由基可以破坏线粒体的完整性,导致线粒体膜电位丢失,进一步导致线粒体能量代谢障碍,最终导致神经元丢失以及各种神经病理性疾病。靶向线粒体的药物自由基清除剂,一方面可效防止蛋白质和脂质过氧化;另外可有效恢复线粒体膜电位,保护线粒体完整性,保障神经系统能量供给体系,是神经保护剂研究的一个热点领域。
天然存在和合成的酚类化合物、磺胺类药物、三氮唑衍生物被报道具有良好的自由基清除能力,具有良好的抗氧化活性。酚羟基和磺酰胺基团为药效活性基团,这些有效活性基团拼合在三氮唑的取代基中,有望得到一类非常有潜力的自由基清除剂。本研究进一步发现这类化合物可有效恢复线粒体膜电位,恢复线粒体功能,具有显著的神经保护功能。该类化合物有望成为靶向线粒体的自由基清除剂,在神经退行性疾病的预防和治疗中发挥潜在作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种对神经退行性疾病具有潜在的预防与治疗作用的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物。
本发明的另一目的在于提供一种制备工艺科学简单的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的制备方法。
进一步的,本发明还提出了[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物及相关的盐酸盐、硫酸盐及有机酸盐在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。
本发明提供的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物,其结构式如式I所示:
式I中:
R1分别为-H,-OH;
R2分别为-H,-OH,-CH2OH,R(C1-C4),-OR(C1-C4),-X(F,Cl,Br),-CX3(F,Cl),-NO2,-NH2,-NR2(C1-C4),-COOH,-COR(C1-C4),-COOR(C1-C4);
R3分别为R(C1-C4),-NH2,-NR2(C1-C4)。
本发明提供的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的制备方法,包括如下步骤:
(1)以取代苯甲酸为原料,将其转化为取代苯甲酰卤,或直接使用取代苯甲酰卤为原料,加入溶剂一溶解,加入2-羟基苯甲酰胺,加热回流,跟踪检测,待反应原料基本反应完毕后结束反应,蒸除溶剂一,得粘稠状固体,加溶剂二重结晶得中间体;
(2)将上述中间体加入溶剂三溶解,加入肼基苯磺酸衍生物,加热回流,跟踪检测,反应完毕后冷却反应液至室温,抽滤析出的固体,滤饼用冷的溶剂四洗涤,重结晶得白色固体[3,5-二取代苯基-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物。
本发明所述步骤(1)中,取代苯甲酸的结构式为:
式II中,R1分别为-H,-OH,R2分别为-H,-OH,-CH2OH,R(C1-C4),-OR(C1-C4),-X(F,Cl,Br),-CX3(F,Cl),-NO2,-NH2,-NR2(C1-C4),-COOH,-COR(C1-C4),-COOR(C1-C4);
本发明所述步骤(2)中,肼基苯磺酸衍生物的结构式为:
式III中,肼基苯磺酸衍生物为3-肼基苯磺酸衍生物或4-肼基苯磺酸衍生物,R3为R(C1-C4),-NH2,-NR2(C1-C4)。本发明所述步骤(1)中,取代苯甲酸与2-羟基苯甲酰胺的物料比为1:1-5(mol/mol),取代苯甲酸与溶剂一的物料比为1:10-50(g/ml);所述步骤(2)中,中间体与肼基苯磺酸衍生物的物料比为1:1-3(mol/mol),中间体与溶剂三的物料比为1:10-50(g/ml)。
本发明所述溶剂一为苯、甲苯、二甲苯、二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜;所述溶剂二、溶剂三和溶剂四为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、四氢呋喃或二氧六环。
本发明所述的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。
本发明所述的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的盐酸盐、硫酸盐及有机酸盐在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。
本发明所述[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的细胞水平药物浓度为1-100μM,动物的药物浓度为1-50mg/kg,其中R1为-OH,R2为OCH3,R3为4-肼基苯磺酸酰胺为优效结构。
本发明所述治疗或预防神经元损伤药物的适应症为神经退行性疾病,包括但不限于帕金森病、阿尔兹海默症、肌萎缩侧索硬化症、脑中风、脑损伤和脊髓损伤。
本发明提出了[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用,分别研究了这些化合物对H2O2及硝普钠(SNP)诱导的神经细胞凋亡的神经保护作用;这些化合物可以减少ROS,恢复细胞线粒体膜电位,具有显着的神经保护作用,具有显著的靶向线粒体和神经保护功能。本发明提供的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物用于制备治疗或预防神经损伤的药物,该药物对中风、脑损伤、脊髓损伤、帕金森病、阿尔兹海默症、肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病具有潜在的预防与治疗作用。
附图说明
图1:多芳基取代三氮唑衍生物a-m对H2O2或SNP诱导的PC12细胞损伤的神经元保护(细胞成活率)。图中,(A)H2O2对PC12细胞的细胞毒性,用不同浓度的H2O2处理PC12细胞5小时;(B)用10μM姜黄素和目标化合物预处理PC12细胞1小时,然后用500μM H2O2再处理5小时;(C)SNP对PC12细胞的细胞毒性,用不同剂量的SNP处理PC12细胞24小时;(D)用10μM依达拉奉和目标化合物预处理PC12细胞1小时,然后用300μM SNP另外处理24小时。(数据表示为三次重复的平均值±SD,与H2O2或SNP组相比,***p<0.001,**p<0.01和*p<0.5)。
图2:多芳基取代三氮唑衍生物e-k对H2O2或SNP诱导的PC12细胞损伤的神经元保护(成活率及LDH释放率及剂量依赖关系)。用化合物e-k和姜黄素预处理PC12细胞1小时,然后用500μM H2O2再处理5小时,并通过MTT(A)和LDH(B)测定法测量。用化合物e-k和依达拉奉预处理PC12细胞1小时,然后用300μM SNP(C)另外处理24小时。(数据表示为三次独立检测的平均值±SD)。
图3:化合物k剂量依赖性减轻H2O2或SNP诱导的PC12细胞凋亡(细胞形态学变化)。将细胞用化合物k(2.5,5,10μM)或10%FBS,5%HS DMEM预处理1小时,然后与或不与(A)500μM H2O2孵育5小时或(B)300μM SNP处理24小时。将10μg/ml Hoechst共孵育30分钟,然后通过荧光显微镜检测,比例尺=200μM。
图4:化合物k剂量依赖性减轻H2O2或SNP诱导的PC12细胞凋亡(ROS变化)。用化合物k(2.5,5,10μM)预处理1小时,再加入500μM H2O2(A)或300μM SNP(B)5或24小时,然后将10μMDCFH-DA温育30分钟。激发和发射波长分别为488nm和525nm,比例尺=50μm。
图5:化合物k保护线粒体膜电位。用化合物k(2.5,5,10μM)预处理1小时后,再加入500μM H2O2作用5h(A)或300μM SNP作用24小时。使用JC-1染料测定线粒体膜电位,比例尺=50μm。
具体实施方式
本发明目标化合物[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的结构式如下:
式中:R1为-H,-OH;R2为-H,-OH,-CH2OH,R(C1-C4),-OR(C1-C4),-X(F,Cl,Br),-CX3(F,Cl),-NO2,-NH2,-NR2(C1-C4),-COOH,-COR(C1-C4),-COOR(C1-C4);R3为R(C1-C4),-NH2,-NR2(C1-C4)。其中,实施例中涉及到的目标化合物为4-肼基苯磺酸衍生物:
a-d:R1=H;R2=H,CF3,F,NO2;R3=NH2;
b-e-k:R1=OH;R2=H,CF3,F,NO2,Cl,CH3,OCH3;R3=NH2;
l-m:R1=H,Ac;R2=H;R3=NHAc
实施例1. 4-[3-(2-羟基苯基)-5-苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺的制备:
将2g苯甲酸和无水吡啶加入到20mL二甲苯中,室温搅拌下滴加0.7ml亚硫酰氯,室温下反应2小时,薄层色谱确定反应完毕后,蒸出反应中的溶剂和残留亚硫酰氯,重新加入30ml二甲苯,加入2.2g 2-羟基苯甲酰胺,混合物140℃加热回流下搅拌5-6h,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤出沉淀物,用乙醇重结晶得到固体中间体。
取2g中间体溶于40ml乙醇中,加入等摩尔的4-肼基苯磺酰胺盐酸盐和三乙胺,混合物加热回流16-18小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤沉淀,将沉淀水洗至中性,用乙醇重结晶得到目标化合物(R1=R2=H,R3=NH2)。
实施例2. 4-[3-(2-羟基苯基)-5-(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺的制备:
将2g水杨酰氯加入20ml二甲苯中,加入1.7g 2-羟基苯甲酰胺,混合物140℃加热回流下搅拌5-6h,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤出沉淀物,用乙醇重结晶得到固体中间体。
取2g中间体溶于40ml乙醇中,加入等摩尔的4-肼基苯磺酰胺盐酸盐和三乙胺,将混合物加热回流下搅拌16-18小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应,反应液冷却至室温,过滤沉淀,将沉淀水洗至中性,用乙醇重结晶得到目标化合物(R1=OH,R2=H,R3=NH2)。
实施例3. 4-[3-(2-羟基-4-甲氧基苯基)-5-(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺的制备:
将2g 2-羟基-4-甲氧基苯甲酰氯加入30ml二甲苯中,加入1.5g 2-羟基苯甲酰胺,140℃加热回流下搅拌5-6h,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤出沉淀物,用乙醇重结晶,得到固体中间体。
取2g中间体溶于40ml乙醇中,加入等摩尔的4-肼基苯磺酰胺盐酸盐和三乙胺,混合物加热回流16-18小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤沉淀,将沉淀水洗至中性,用乙醇重结晶得到目标化合物(R1=OH,R2=OCH3,R3=NH2)。
实施例4. 4-[3-(2-羟基-4-氟苯基)-5-(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺的制备:
将2g 2-羟基-4-氟苯甲酰氯加入40ml二甲苯中,加入1.6g 2-羟基苯甲酰胺,140℃加热回流下搅拌5-6h,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤出沉淀物,用乙醇重结晶,得到固体中间体。
取2g中间体溶于40ml乙醇中,加入等摩尔的4-肼基苯磺酰胺盐酸盐和三乙胺,混合物加热回流16-18小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤沉淀,将沉淀水洗至中性,用乙醇重结晶得到目标化合物(R1=OH,R2=F,R3=NH2)。
实施例5. 3-[3-(2-羟基-4-氟苯基)-5-(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺的制备:
将2g 2-羟基-4-氟苯甲酰氯加入20ml二甲苯中,加入1,6g 2-羟基苯甲酰胺,140℃加热回流下搅拌6h,薄层色谱确定反应完毕后,冷却至室温。过滤出沉淀物,用乙醇重结晶,得到固体中间体。
取2g中间体溶于40ml乙醇中,加入等摩尔的3-肼基苯磺酰胺盐酸盐和三乙胺,混合物加热回流16-18小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤沉淀,将沉淀水洗至中性,用乙醇重结晶得到目标化合物(R1=OH,R2=F,R3=NH2)。
实施例6. 4-[3-(2-羟基-4-甲氧基苯基)-5-(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺的盐酸盐的制备:
将2g 2-羟基-4-甲氧基苯甲酰氯加入20ml二甲苯中,加入1.5g 2-羟基苯甲酰胺,140℃加热回流下搅拌5-6h,薄层色谱确定反应完毕后,冷却至室温。过滤出沉淀物,用异丙醇重结晶,得到固体中间体。
取2g中间体溶于40ml乙醇中,加入等摩尔的4-肼基苯磺酰胺盐酸盐和三乙胺,混合物140℃加热回流16-18小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤沉淀,将沉淀水洗至中性,沉淀用乙醇溶解,6N盐酸调pH至5一下,冷却析晶得到目标化合物(R1=OH,R2=OCH3,R3=NH2)。
实施例7. 4-[3-(2-羟基-4-甲氧基苯基)-5-(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺的制备:
将2g 2-羟基-4-甲氧基苯甲酰氯加入20ml N,N-二甲基甲酰胺中,加入1.5g 2-羟基苯甲酰胺,155℃加热回流下搅拌4-5小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤出沉淀物,用乙醇重结晶,得到固体中间体。
取2g中间体溶于40ml乙醇中,加入等摩尔的4-肼基苯磺酰胺盐酸盐和三乙胺,混合物加热回流16-18小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤沉淀,将沉淀水洗至中性,用乙醇重结晶得到目标化合物(R1=OH,R2=OCH3,R3=NH2)。
实施例8. 4-[3-(2-羟基苯基)-5-(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺的盐酸盐的制备:
将2g 2-羟基-4-甲氧基苯甲酰氯加入20ml N,N-二甲基甲酰胺中,加入1.5g 2-羟基苯甲酰胺,155℃加热回流下搅拌4-5小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤出沉淀物,用异丙醇重结晶,得到固体中间体。
取2g中间体溶于40ml异丙醇中,加入等摩尔的4-肼基苯磺酰胺盐酸盐和三乙胺,混合物加热回流16-18小时,薄层色谱确定反应完毕后结束反应。反应液冷却至室温,过滤沉淀,将沉淀水洗至中性,用异丙醇重结晶得到目标化合物(R1=OH,R2=OCH3,R3=NH2)。
实施例9.目标化合物a-m对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用
1)实验分组:
a)control组:细胞全量换完全DMEM培养基;
b)模型组(H2O2):细胞全量换带有溶剂(DMSO)的完全DMEM培养基;
c)药物组(化合物):细胞全量换带有10μM化合物的完全DMEM培养基;
d)阳性药物组1:细胞全量换带有10μM阳性药物姜黄素的完全DMEM培养基;
e)阳性药物组2:细胞全量换带有75μM阳性药物依达拉奉的完全DMEM培养基。
2)供试品药物溶液配制:将化合物a-m溶解于DMSO中,使终浓度为10mM作为药物储备液,将药物储备液用完全DMEM培养基稀释至药物测试浓度为10μM。
3)活性测定:
将PC12细胞铺在96孔板中,稀释至4*104cells/ml,在37℃和5%CO2下培养24小时,将化合物与细胞预孵1小时,加入H2O2终浓度为500μM,再孵育5小时。将10μl 5mg/ml MTT加入到96孔板中,继续培养3小时。弃去上清液,将100μl DMSO加入到96孔板中,并充分混合,用酶标仪在570nm处测量各孔吸光度。取三个孔的平均值进行细胞存活率计算,细胞存活率=OD各浓度/ODcontrol*100%,取三批细胞数据用于统计分析。
结果:用H2O2(500μM)处理PC12细胞5小时导致约60%的细胞死亡(图1A中所示)。在图1B中,通过MTT法初次评估目标化合物在10μM下对H2O2损伤保护效力,含有邻羟基苯基结构的化合物e-k可以保护PC12细胞免受H2O2诱导的细胞死亡,并显示出比姜黄素和依达拉奉更高的活性。单羟基化合物a-d以及乙酰化产物l和m作用微弱,说明羟基起着关键作用。同时,苯基甲胺对位的给电子基团比吸电子基团提供了更强的保护作用。
实施例10.化合物a-m对硝普钠(SNP)诱导的PC12细胞损伤的保护作用
1)实验分组:同实施例9.1)。
2)供试品药物溶液配制:同实施例9.2)。
3)活性测定:
将PC12细胞铺在96孔板中,稀释至4*104cells/ml,在37℃和5%CO2下培养24小时,将化合物与细胞预孵1小时,加入SNP溶液,终浓度为300μM,再孵育24小时。将10μl 5mg/mlMTT加入到96孔板中,继续培养3小时。弃去上清液,将100μl DMSO加入到96孔板中,并充分混合,用酶标仪在570nm处测量各孔吸光度。取三个孔的平均值进行细胞存活率计算,细胞存活率=OD各浓度/ODcontrol*100%,取三批细胞数据用于统计分析。
结果:用SNP(300μM)处理PC12细胞24小时导致约60%的细胞死亡(图1C中所示)。在图1D中,通过MTT法初次评估目标化合物在10μM下对SNP损伤的保护效力,含有邻羟基苯基结构的化合物e-k可以保护PC12细胞免受SNP诱导的细胞死亡,并显示出比姜黄素和依达拉奉更高的活性。单羟基化合物a-d以及乙酰化产物l和m作用微弱,说明羟基起着关键作用。同时,苯基甲胺对位的给电子基团比吸电子基团提供了更强的保护作用。
实施例11.化合物e-k对H2O2诱导的PC12损伤的剂量依赖性保护作用(MTT法)
1)实验分组:
a)control组:细胞全量换完全DMEM培养基;
b)模型组(H2O2):细胞全量换带有溶剂(DMSO)的完全DMEM培养基;
c)药物组(化合物):细胞全量换带有化合物的完全DMEM培养基;
d)阳性药物组:细胞全量换带有阳性药物姜黄素(浓度为10,5和2.5μM)的完全DMEM培养基。
2)供试品药物溶液配制:将化合物e-k溶解于DMSO中,使终浓度为10mM作为药物储备液,将药物储备液用完全DMEM培养基稀释至药物测试浓度为10,5和2.5μM。
3)活性测定:
将PC12细胞铺在96孔板中,稀释至4*104cells/ml,在37℃和5%CO2下培养24小时,将不同浓度(2.5,5,10μM)的化合物(e-k)与细胞预孵1小时,加入H2O2终浓度为500μM,再孵育5小时。将10μl 5mg/ml MTT加入到96孔板中,继续培养3小时。弃去上清液,将100μl DMSO加入到96孔板中,并充分混合,用酶标仪在570nm处测量各孔吸光度。取三个孔的平均值进行细胞存活率计算,细胞存活率=OD各浓度/ODcontrol*100%,取三批细胞数据用于统计分析。
结果:化合物e-k可以剂量依赖性地(2.5,5和10μM)对抗H2O2对PC12的损伤,增加细胞活力(图2A)。化合物k是这些化合物中最具活性的化合物,B环的羟基和4-甲氧基有可能是作用于神经保护的有效药物活性基团。
实施例12.化合物e-k对H2O2诱导的PC12损伤的剂量依赖性的保护作用(LDH法)
1)实验分组:同实施例11.1)。
2)供试品药物溶液配制:同实施例11.2)。
3)活性测定:
将PC12细胞铺在96孔板中,稀释至4*104cells/ml,在37℃和5%CO2下培养24小时,将不同浓度(2.5,5,10μM)的化合物(e-k)与细胞预孵1小时,H2O2终浓度为500μM,再孵育5小时。根据说明书,通过LDH测定试剂盒测定96孔板中细胞的LDH释放量。
结果:用化合物e-k预处理后,可显著降低H2O2诱导的PC12细胞中的LDH渗漏水平,并剂量依赖性地(2.5,5和10μM)对抗H2O2对PC12的损伤,增加细胞活力(图2B)。LDH测定结果与MTT测定的结果一致。
实施例13.化合物e-k对SNP诱导的PC12损伤的剂量依赖性保护作用(MTT法)
1)实验分组:
a)control组:细胞全量换完全DMEM培养基;
b)模型组(SNP):细胞全量换带有溶剂(DMSO)的完全DMEM培养基;
c)药物组(化合物):细胞全量换带有化合物的完全DMEM培养基;
d)阳性药物组1:细胞全量换带有药物依达拉奉(浓度为10,5和2.5μM)的完全DMEM培养基;
e)阳性药物组2:细胞全量换带有药物依达拉奉(浓度为100,50和25μM)的完全DMEM培养基。
2)供试品药物溶液配制:将化合物e-k溶解于DMSO中,使终浓度为10mM作为药物储备液,将药物储备液用完全DMEM培养基稀释至药物测试浓度为10,5和2.5μM。
3)活性测定:
将PC12细胞铺在96孔板中,稀释至4*104cells/ml,在37℃和5%CO2下培养24小时,将不同浓度(2.5,5,10μM)的化合物(e-k)与细胞预孵1小时,加入SNP终浓度为300μM,再孵育5小时。将10μl 5mg/ml MTT加入到96孔板中,继续培养3小时。弃去上清液,将100μl DMSO加入到96孔板中,并充分混合,用酶标仪在570nm处测量各孔吸光度。取三个孔的平均值进行细胞存活率计算,细胞存活率=OD各浓度/ODcontrol*100%,取三批细胞数据用于统计分析。
结果:化合物e-k可以剂量依赖性地(2.5,5和10μM)对抗SNP对PC12细胞的损伤,增加细胞活力(图2A)。化合物k是这些化合物中最具活性的化合物。
实施例14.化合物e-k对SNP诱导的PC12损伤的剂量依赖性的保护作用(LDH法)
1)实验分组:同实施例13.1)。
2)供试品药物溶液配制:同实施例13.2)。
3)活性测定:
将PC12细胞铺在96孔板中,稀释至4*104cells/ml,在37℃和5%CO2下培养24小时,将不同浓度(2.5,5,10μM)的化合物(e-k)与细胞预孵1小时,SNP终浓度为300μM,再孵育5小时。根据说明书,通过LDH测定试剂盒测定96孔板中细胞的LDH释放量。
结果:用化合物e-k预处理后,可显著降低H2O2诱导的PC12细胞中的LDH渗漏水平,并剂量依赖性地(2.5,5和10μM)对抗SNP对PC12细胞的损伤,增加细胞活力(图2B)。LDH测定结果与MTT测定的结果一致。
实施例15.化合物k减弱H2O2诱导的PC12细胞凋亡(形态学变化)
1)实验分组:
a)control组:细胞全量换完全DMEM培养基;
b)模型组(H2O2):细胞全量换带有溶剂(DMSO)的完全DMEM培养基;
c)药物组(化合物):细胞全量换带有化合物的完全DMEM培养基;
2)供试品药物溶液配制:将化合物k溶解于DMSO中,使终浓度为10mM作为药物储备液,将药物储备液用完全DMEM培养基稀释至药物测试浓度为10,5和2.5μM。
3)活性测定:
将PC12细胞在激光共聚焦皿中培养24小时。然后将细胞用化合物k(2.5,5,10μM)预处理1小时,加入至终H2O2浓度为500μM再孵育5小时。然后将细胞与Hoechst 33258(10μg/ml)在细胞培养箱中共孵育30分钟。除去培养基,用DMEM洗涤2次。37℃染色15分钟后在相差荧光显微镜350nm波长下拍照。
结果:H2O2主要通过诱导细胞凋亡引起对PC12细胞的细胞毒性,形态方面,受损组中的细胞具有核浓缩(增亮),细胞不粘附,变圆,形状不清晰。然而,化合物k组的形态大多是正常的(图3A),通过减少凝核数量来有效预防H2O2诱导的细胞凋亡。
实施例16.化合物k减弱SNP诱导的PC12细胞凋亡(形态学变化)
1)实验分组:
a)control组:细胞全量换完全DMEM培养基;
b)模型组(SNP):细胞全量换带有溶剂(DMSO)的完全DMEM培养基;
c)药物组(化合物):细胞全量换带有化合物的完全DMEM培养基;
2)同实施例15.2)。
3)活性测定:
将PC12细胞在激光共聚焦皿中培养24小时。然后将细胞用化合物k(2.5,5,10μM)预处理1小时,加入SNP至终浓度为300μM再孵育24小时。然后将细胞与Hoechst 33258(10μg/ml)在细胞培养箱中共孵育30分钟。除去培养基,用DMEM洗涤2次。37℃染色15分钟后在相差荧光显微镜350nm波长下拍照。
结果:SNP诱导的受损组中的细胞具有核浓缩(增亮),细胞不粘附,变圆,形状不清晰。化合物k组的形态大多是正常的(图3A),也是通过减少凝核数量来有效预防SNP诱导的细胞凋亡。
实施例17.化合物k减弱H2O2诱导的PC12细胞凋亡(ROS变化)。
1)同实施例15.1)。
2)同实施例15.2)。
3)ROS测定:
取对数期生长的PC12细胞,经胰酶消化,接种于Confocal皿中,使细胞融合度80%,待细胞贴壁生长24h后,给药组加入新鲜含药培养基,对照组加入等体积的空白培养基继续培养。化合物k预孵1h,加入500μM H2O2作用5h。弃去上清,每孔加入1ml含DCFH-DA的无血清培养液(按照1:1000用稀释DCFH-DA)置于细胞培养箱中37℃避光孵育30min。孵育结束后,DMEM洗涤细胞2次,加入新1ml DMEM后于激光共聚焦显微镜下观察细胞内活性氧(绿色荧光)的变化情况。
结果:氧化应激可以破坏氧化剂和抗氧化剂系统之间的稳态,同时异常增加的活性氧(ROS)水平,DCFH被细胞内ROS氧化成绿色荧光DCF,绿色荧光强度与ROS水平成比例。与对照组相比,H2O2组的绿色荧光显着增强,而化合物k组在三种不同浓度(2.5,5,10μM)下可有效降低ROS水平(见图4A)。化合物k可有效地对抗H2O2诱导的PC12损伤,发挥保护作用。
实施例18.化合物k减弱SNP诱导的PC12细胞凋亡(ROS测定)。
1)同实施例16.1)。
2)同实施例16.2)。
3)ROS测定:
取对数期生长的PC12细胞,经胰酶消化,接种于Confocal皿中,使细胞融合度80%,待细胞贴壁生长24h后,给药组加入新鲜含药培养基,对照组加入等体积的空白培养基继续培养。化合物k预孵1h,加入300μM SNP作用24h。弃去上清,每孔加入1ml含DCFH-DA的无血清培养液(按照1:1000用稀释DCFH-DA)置于细胞培养箱中37℃避光孵育30min。孵育结束后,DMEM洗涤细胞2次,加入新1ml DMEM后于激光共聚焦显微镜下观察细胞内活性氧(绿色荧光)的变化情况。
结果:与对照组相比,SNP组的绿色荧光显着增强,而化合物k组在三种不同浓度(2.5,5,10μM)下可有效降低ROS水平(见图4B)。化合物k可有效地对抗SNP诱导的PC12损伤,发挥保护作用。
实施例19.化合物k恢复H2O2诱导的PC12细胞中的线粒体膜电位
1)同实施例15.1)。
2)同实施例15.2)。
3)取对数期生长的PC12细胞,经胰酶消化,接种于Confocal皿中,使细胞融合度80%,待细胞贴壁生长24h后,给药组加入新鲜含药培养基,对照组加入等体积的空白培养基继续培养。其中化合物k预孵1h,500μM H2O2作用5h。用PBS清洗细胞三遍后,使用照JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞内线粒体膜电位。清洗后的细胞每孔加入1mL JC-1染色工作液,置于细胞培养箱中37℃避光孵育20min。孵育结束后,用JC-1染色缓冲液洗涤细胞2次,加入1ml DMEM后于激光共聚焦显微镜下观察细胞内JC-1单体(绿色荧光)和JC-1聚合物(红色荧光)的变化情况。
结果:在正常线粒体中,JC-1聚集形成聚合物,其发出强烈的红色荧光,但在不健康的线粒体中,JC-1作为单体存在,由于膜电位的降低或丧失而产生绿色荧光,荧光从红色变为绿色表明MMP降低。在图5A中,在正常组中,红色荧光更显著,表明细胞线粒体处于健康状态。在处理H2O2后,观察到具有更亮绿色荧光的细胞,表明MMP降低。在化合物k(2.5,5,10μM)处理后,红色荧光逐渐加强,表明对线粒体膜电位的具有显著的恢复作用。
实施例20.化合物k恢复SNP诱导的PC12细胞中的线粒体膜电位
1)同实施例16.1)。
2)同实施例16.2)。
3)活性测定:
取对数期生长的PC12细胞,经胰酶消化,接种于Confocal皿中,使细胞融合度80%,待细胞贴壁生长24h后,给药组加入新鲜含药培养基,对照组加入等体积的空白培养基继续培养。其中化合物k预孵1h,300μM SNP作用24h。用PBS清洗细胞三遍后,使用照JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞内线粒体膜电位。清洗后的细胞每孔加入1mL JC-1染色工作液,置于细胞培养箱中37℃避光孵育20min。孵育结束后,用JC-1染色缓冲液洗涤细胞2次,加入1ml DMEM后于激光共聚焦显微镜下观察细胞内JC-1单体(绿色荧光)和JC-1聚合物(红色荧光)的变化情况。
结果:在图5B中,在正常组中,红色荧光更显著,表明细胞线粒体处于健康状态。在SNP处理后,观察到具有更亮绿色荧光的细胞,表明MMP降低。在化合物k(2.5,5,10μM)处理后,红色荧光逐渐加强,表明对线粒体膜电位的具有显著的恢复作用。
实施例21.化合物k对H2O2诱导的PC12细胞SOD、GSH-px和GSH的影响
1)同实施例15.1)。
2)同实施例15.2)。
3)SOD、GSH-px和GSH含量测定
PC12细胞在6孔培养板中培养24h,用化合物k(10,5,2.5μm)预处理1h,然后用500μM H2O2损伤5h。弃去上清液,预冷PBS洗涤两次,用裂解液在冰上溶解,然后用12000g离心10分钟。收集上清液,按指示测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、谷胱甘肽(GSH)的含量。
结果:抗氧化防御系统对于清除自由基和保护蛋白质、DNA免受过氧化反应至关重要。GSH是细胞中主要的非酶抗氧化剂,GSH-px和SOD是酶抗氧化剂。GSH,GSH-px和SOD一起增强细胞内源性抗氧化剂去除ROS的能力。三种抗氧化剂在氧化应激下细胞内含量降低,H2O2处理降低了PC12细胞中GSH-px,SOD和GSH的水平,加入化合物k后,三种酶的含量均有升高,并存在剂量依赖性,特别是在10μM时,通过化合物k明显改善细胞中的抗氧化剂含量(结果见表1)。上述结果表明化合物k可通过调节内源性抗氧化剂来增强其抗氧化活性。
表1.化合物k对H2O2诱导的PC12细胞的SOD、GSH-px和GSH的影响(平均值±S.D.)
实施例22.化合物k对SNP诱导的PC12细胞SOD、GSH-px和GSH的影响
1)同实施例16.1)。
2)同实施例16.2)。
3)SOD、GSH-px和GSH含量测定
PC12细胞在6孔培养板中培养24h,用化合物k(10,5,2.5μm)预处理1h,然后用300μM SNP损伤24h。弃去上清液,预冷PBS洗涤两次,用裂解液在冰上溶解,然后用12000g离心10分钟。收集上清液,按指示测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、谷胱甘肽(GSH)的含量。
结果:SNP处理降低了PC12细胞中GSH-px,SOD和GSH的水平,加入化合物k后,三种酶的含量均有升高,并存在剂量依赖性,特别是在10μM时,通过化合物k明显改善细胞中的抗氧化剂含量(结果见表2)。
表2.化合物k对SNP诱导的PC12细胞的SOD、GSH-px和GSH的影响(平均值±S.D.)
GSH(nM/mg) | GSH-px(mU/mg) | SOD(U/mg) | |
Control | 94.76±2.23 | 55.70±3.38 | 42.87±1.82 |
SNP(300μM) | 75.78±1.74<sup>**</sup> | 37.70±2.88<sup>*</sup> | 23.74±2.02<sup>**</sup> |
SNP+k(2.5μM) | 79.07±1.99 | 42.45±7.76 | 34.63±1.88 |
SNP+k(5μM) | 86.74±1.86<sup>#</sup> | 44.38±6.56 | 34.85±2.74<sup>#</sup> |
SNP+k(10μM) | 89.16±1.72<sup>##</sup> | 52.78±3.46<sup>#</sup> | 39.07±3.83<sup>#</sup> |
目标化合物a-m结构确证数据:
4-[3-(2-羟基苯基)-5-苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺(a):类白色固体,产率:68.0%,m.p.283.1±2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.11(s,1H),8.21(dd,J=8.2,1.6Hz,2H),7.94(d,J=8.6Hz,3H),7.68(d,J=8.6Hz,3H),7.64–7.59(m,3H),7.56(s,2H),7.50–7.44(m,1H),7.06(t,J=7.4Hz,1H),6.95(d,J=8.3Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.43,155.58,153.78,143.79,141.14,132.64,131.50,130.74,130.15,129.38,127.16,126.49,123.93,119.82,116.49,115.81.HRMS(m/z):calculated for C20H17O3N4S[M+H]+393.10159,found 393.10201.
4-[3-(2-羟基苯基)-5-(4-三氟甲基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺(b):类白色固体,产率:65.2%,m.p.265.5±1.5.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),8.33(d,J=8.1Hz,2H),7.92(d,J=8.2Hz,2H),7.87(d,J=8.4Hz,2H),7.62(d,J=8.4Hz,2H),7.55(d,J=7.6Hz,1H),7.50(s,2H),7.39(t,J=7.8Hz,1H),6.99(t,J=7.5Hz,1H),6.87(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ160.23,155.55,154.24,144.01,140.97,134.56,132.78,131.57,130.27,129.95,127.17,126.46,126.42,125.99,124.03,123.29,119.85,116.48,115.54,99.99.HRMS(m/z):calculated for C21H16O3N4F3S[M+H]+461.08897,found461.08920.
4-[3-(2-羟基苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺(c):类白色固体,产率:72.4%,m.p.271.6±2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),8.20–8.13(m,2H),7.90–7.82(m,2H),7.62–7.58(m,2H),7.52(dd,J=7.6,1.8Hz,1H),7.48(s,2H),7.42–7.34(m,3H),6.98(td,J=7.5,1.1Hz,1H),6.87(dd,J=8.3,1.1Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ164.69,162.24,160.68,155.61,153.89,143.86,141.10,132.66,131.49,128.80,128.72,127.36,127.17,123.94,119.83,116.52,116.29,115.75.HRMS(m/z):calculated for C20H16O3N4FS[M+H]+411.09217,found 411.09229.
4-[3-(2-羟基苯基)-5-(4-硝基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸酰胺(d):白色固体,产率:57.8%,m.p.292.5±2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),8.47–8.35(m,4H),7.88(d,J=8.9Hz,2H),7.63(d,J=8.4Hz,2H),7.56(d,J=7.6Hz,1H),7.50(s,2H),7.39(t,J=7.8Hz,1H),7.00(t,J=7.5Hz,1H),6.87(d,J=8.3Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ159.79,155.58,154.51,148.47,144.15,140.90,136.72,132.84,131.56,127.56,127.19,124.81,124.08,119.86,116.52,115.43.HRMS(m/z):calculated forC20H16O5N5S[M+H]+438.08667,found 438.08731.
4-[3,5-双(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酰胺(e):白色固体,产率:70.3%,m.p.273.1±1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),10.13(s,1H),8.06(d,J=7.8Hz,1H),7.90(d,J=8.7Hz,2H),7.65(d,J=8.8Hz,2H),7.57(d,J=7.7Hz,1H),7.51(s,2H),7.40(q,J=8.6,8.2Hz,2H),7.10–6.97(m,3H),6.89(d,J=8.2Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ160.40,156.79,155.60,152.56,144.21,140.68,133.07,131.98,131.61,127.23,124.30,120.18,119.95,117.56,116.59,114.77,114.09.HRMS(m/z):calculatedfor C20H17O4N4S[M+H]+409.09650,found 409.09688.
4-[3-(2-羟基-4-三氟苯基)-5-(2-羟基苯基)-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酰胺(f):白色固体,产率:43.8%,m.p.241.7±2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),10.14(s,1H),8.25(d,J=8.1Hz,1H),7.89(d,J=8.7Hz,2H),7.66(d,J=8.7Hz,2H),7.58(dd,J=7.6,1.8Hz,1H),7.52(s,2H),7.46–7.32(m,3H),7.06–6.97(m,1H),6.88(d,J=8.2Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ159.20,156.87,155.63,152.95,144.41,140.58,133.15,131.62,128.69,127.23,125.58,124.40,119.95,118.14,116.62,114.56.HRMS(m/z):calculated for C21H16O4N4F3S[M+H]+477.08389,found 477.08408.
4-[3-(2-羟基-4-氟苯基)-5-(2-羟基苯基)-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酰胺(g):白色固体,产率:14%,m.p.280.9±2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),10.12(s,1H),8.12–8.04(m,1H),7.88(d,J=8.6Hz,2H),7.64(d,J=8.5Hz,2H),7.56(d,J=7.7Hz,1H),7.50(s,2H),7.40(t,J=7.7Hz,1H),7.00(t,J=7.4Hz,1H),6.93–6.84(m,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ165.48,163.03,159.70,158.55,158.42,155.61,152.54,144.25,140.63,133.09,131.59,129.18,129.07,127.28,127.21,124.31,119.93,116.59,114.67,111.18,107.81,107.59,104.59,104.34,99.99.HRMS(m/z):calculated for C20H16O4N4FS[M+H]+427.08708,found 427.08724.
4-[3-(2-羟基-4-硝基苯基)-5-(2-羟基苯基)-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酰胺(h):淡黄色固体,产率:36.7%,m.p.280.1±1.9.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.29(s,1H),10.16(s,1H),8.29(d,J=8.6Hz,1H),7.91–7.88(m,2H),7.88–7.86(m,1H),7.84(d,J=2.3Hz,1H),7.69–7.64(m,2H),7.58(dd,J=7.7,1.7Hz,1H),7.52(s,2H),7.41(ddd,J=9.0,7.5,1.8Hz,1H),7.01(td,J=7.5,1.0Hz,1H),6.88(dd,J=8.3,1.0Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ158.77,157.00,155.65,153.13,149.34,144.47,140.57,133.18,131.61,128.96,127.24,124.41,120.81,119.95,116.63,114.95,114.51,112.31.HRMS(m/z):calculatedfor C20H16O6N5S[M+H]+454.08158,found 454.08173.
4-[3-(2-羟基-4-氯苯基)-5-(2-羟基苯基)-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酰胺(i):白色固体,产率:66.8%,m.p.268.2±1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,2H),8.04(dd,J=7.8,1.7Hz,1H),7.91(d,J=8.7Hz,2H),7.70–7.61(m,3H),7.51(s,2H),7.43–7.35(m,1H),7.09(dd,J=8.3,2.0Hz,1H),7.02(dd,J=13.0,7.8Hz,2H),6.90(d,J=2.0Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ160.50,156.73,156.59,151.62,144.35,140.55,136.94,133.23,132.01,127.32,124.36,120.19,120.11,117.55,116.37,114.09,114.07.HRMS(m/z):calculatedfor C20H16O4N4ClS[M+H]+443.05753,found 443.05772.
4-[3-(2-羟基-4-甲基苯基)-5-(2-羟基苯基)-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酰胺(j):类白色固体,产率:76.7%,m.p.253.0±2.5.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.69(d,J=1.6Hz,1H),10.11(s,1H),7.93(d,J=7.4Hz,1H),7.88(dd,J=8.6,1.7Hz,2H),7.67–7.61(m,2H),7.56(d,J=7.7Hz,1H),7.50(s,2H),7.40(t,J=7.9Hz,1H),7.00(t,J=7.4Hz,1H),6.92–6.78(m,3H),2.33(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ160.49,156.73,155.60,152.43,144.14,142.02,140.70,133.02,131.59,127.21,127.03,124.22,121.21,119.93,117.81,116.59,114.84,111.40,21.57.HRMS(m/z):calculated for C21H19O4N4S[M+H]+423.11215,found423.11225.
4-[3-(2-羟基-5-甲氧基苯基)-5-(2-羟基苯基)-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酰胺(k):淡黄色固体,产率:78.0%,m.p.255.1±2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),9.61(s,1H),8.05(d,J=9.5Hz,1H),7.89(d,J=10.5Hz,2H),7.66(d,J=10.4Hz,2H),7.51(s,2H),7.42–7.35(m,1H),7.14(d,J=3.1Hz,1H),7.07–6.98(m,3H),6.80(d,J=8.9Hz,1H),3.74(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ160.37,156.78,152.48,152.37,149.44,144.25,140.65,131.96,127.30,127.22,124.33,120.16,119.18,117.60,117.55,115.71,114.89,114.12,56.05.HRMS(m/z):calculated for C21H19O5N4S[M+H]+439.10707,found439.10743.
4-[3-苯基-5-(2-羟基苯基)-(1,2,4-三氮唑基)]-N-乙酰基苯磺酰胺(l):白色固体,产率:22.7%,m.p.220.2±2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.20(s,1H),8.13(d,J=7.1Hz,2H),7.99(d,J=8.2Hz,2H),7.67(d,J=8.3Hz,2H),7.61(t,J=7.8Hz,2H),7.53(dd,J=9.7,6.9Hz,3H),7.41(t,J=7.5Hz,1H),7.32(d,J=8.1Hz,1H),1.99(s,3H),1.95(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ169.36,168.70,161.91,152.06,148.50,141.59,139.36,132.61,131.91,130.41,130.37,129.50,129.48,126.73,126.51,124.91,123.97,121.24,23.73,20.95.HRMS(m/z):calculated for C24H21O5N4S[M+H]+477.12272,found477.12295.
4-[3-(2-乙酰氧基苯基)-5-(2-羟基苯基)-(1,2,4-三氮唑基)]-N-乙酰基苯磺酰胺(m):白色固体,产率:31.8%,m.p.246.9±1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(dd,J=7.8,1.8Hz,1H),7.81(d,J=8.6Hz,2H),7.58(dtd,J=24.1,7.8,1.8Hz,3H),7.46(ddd,J=7.7,4.0,1.6Hz,2H),7.42(d,J=8.7Hz,2H),7.35(td,J=8.1,1.2Hz,2H),7.27(dd,J=8.0,1.3Hz,1H),2.29(s,3H),2.05(s,3H),1.69(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ175.68,169.99,169.03,158.87,151.03,148.77,148.57,146.44,138.78,132.44,131.73,131.27,129.53,128.32,126.87,126.67,124.58,123.97,123.79,123.49,121.63,27.01,21.57,20.92.HRMS(m/z):calculated for C26H23O7N4S[M+H]+535.12820,found 535.12829.
Claims (9)
1.一种[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物,其特征在于,其结构式如式I所示:
式I中:
R1分别为-H,-OH;
R2分别为-H,-OH,-CH2OH,R(C1-C4),-OR(C1-C4),-X(F,Cl,Br),-CX3(F,Cl),-NO2,-NH2,-NR2(C1-C4),-COOH,-COR(C1-C4),-COOR(C1-C4);
R3分别为R(C1-C4),-NH2,-NR2(C1-C4)。
2.一种权利要求1所述的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)以取代苯甲酸为原料,将其转化为取代苯甲酰卤,或直接使用取代苯甲酰卤为原料,加入溶剂一溶解,加入2-羟基苯甲酰胺,加热回流,跟踪检测,待反应原料基本反应完毕后结束反应,蒸除溶剂一,得粘稠状固体,加溶剂二重结晶得中间体;
(2)将上述中间体加入溶剂三溶解,加入肼基苯磺酸衍生物,加热回流,跟踪检测,反应完毕后冷却反应液至室温,抽滤析出的固体,滤饼用冷的溶剂四洗涤,重结晶得白色固体[3,5-二取代苯基-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物。
3.根据权利要求2所述的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的制备方法,其特征在于,
所述步骤(1)中,取代苯甲酸的结构式为:
式II中,R1分别为-H,-OH,R2分别为-H,-OH,-CH2OH,R(C1-C4),-OR(C1-C4),-X(F,Cl,Br),-CX3(F,Cl),-NO2,-NH2,-NR2(C1-C4),-COOH,-COR(C1-C4),-COOR(C1-C4);
所述步骤(2)中,肼基苯磺酸衍生物的结构式为:
式III中,肼基苯磺酸衍生物为3-肼基苯磺酸衍生物或4-肼基苯磺酸衍生物,R3为R(C1-C4),-NH2,-NR2(C1-C4)。
4.根据权利要求2所述的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,取代苯甲酸与2-羟基苯甲酰胺的物料比为1:1-5(mol/mol),取代苯甲酸与溶剂一的物料比为1:10-50(g/ml);所述步骤(2)中,中间体与肼基苯磺酸衍生物的物料比为1:1-3(mol/mol),中间体与溶剂三的物料比为1:10-50(g/ml)。
5.根据权利要求2所述的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的制备方法,其特征在于,所述溶剂一为苯、甲苯、二甲苯、二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜;所述溶剂二、溶剂三和溶剂四为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、四氢呋喃或二氧六环。
6.权利要求1所述的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。
7.权利要求1所述的[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的盐酸盐、硫酸盐及有机酸盐在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。
8.根据权利要求6或7所述的应用,其特征在于,所述[3,5-二取代苯基-1-(1,2,4-三氮唑基)]苯磺酸衍生物的细胞水平药物浓度为1-100μM,动物的药物浓度为1-50mg/kg,其中R1为-OH,R2为OCH3,R3为4-肼基苯磺酸酰胺为优效结构。
9.根据权利要求6或7所述的应用,其特征在于,所述治疗或预防神经元损伤药物的适应症为神经退行性疾病,包括但不限于帕金森病、阿尔兹海默症、肌萎缩侧索硬化症、脑中风、脑损伤和脊髓损伤。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112480073A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-03-12 | 武汉药明康德新药开发有限公司 | 1-烷基-3,5-芳基取代的1,2,4三氮唑化合物的合成方法 |
CN114276305A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-05 | 中山大学 | 一种三取代苯基-1,2,4-三氮唑衍生物及其制备和治疗神经元损伤的应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5859257A (en) * | 1995-02-13 | 1999-01-12 | G. D. Searle & Co. | Isoxazole compounds as cyclooxygenase inhibitors |
CN1658853A (zh) * | 2002-05-31 | 2005-08-24 | 法玛西公司 | 用环氧化酶-2(cox 2)抑制剂治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的单药疗法 |
CN102731522A (zh) * | 2011-04-01 | 2012-10-17 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种具有环氧化酶-2异常表达抑制活性的芍药苷类化合物,其制备方法及其用途 |
CN104693133A (zh) * | 2015-02-16 | 2015-06-10 | 广州市盈宇医药科技有限公司 | 一种环氧化酶-2选择性抑制剂及其制备方法和应用 |
-
2019
- 2019-06-10 CN CN201910495224.7A patent/CN110357824A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5859257A (en) * | 1995-02-13 | 1999-01-12 | G. D. Searle & Co. | Isoxazole compounds as cyclooxygenase inhibitors |
CN1658853A (zh) * | 2002-05-31 | 2005-08-24 | 法玛西公司 | 用环氧化酶-2(cox 2)抑制剂治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的单药疗法 |
CN102731522A (zh) * | 2011-04-01 | 2012-10-17 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种具有环氧化酶-2异常表达抑制活性的芍药苷类化合物,其制备方法及其用途 |
CN104693133A (zh) * | 2015-02-16 | 2015-06-10 | 广州市盈宇医药科技有限公司 | 一种环氧化酶-2选择性抑制剂及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
LIPING LIAO ET AL.: "Synthesis and biological evaluation of 1,2,4-triazole derivatives as potential neuroprotectant against ischemic brain injury", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 * |
王晓良 主编: "《应用分子药理学》", 30 September 2015, 中国协和医科大学出版社 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112480073A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-03-12 | 武汉药明康德新药开发有限公司 | 1-烷基-3,5-芳基取代的1,2,4三氮唑化合物的合成方法 |
CN112480073B (zh) * | 2020-12-02 | 2022-03-22 | 武汉药明康德新药开发有限公司 | 1-烷基-3,5-芳基取代的1,2,4三氮唑化合物的合成方法 |
CN114276305A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-05 | 中山大学 | 一种三取代苯基-1,2,4-三氮唑衍生物及其制备和治疗神经元损伤的应用 |
CN114276305B (zh) * | 2021-12-28 | 2023-11-17 | 中山大学 | 一种三取代苯基-1,2,4-三氮唑衍生物及其制备和治疗神经元损伤的应用 |
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