CN110343069A - 一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物提取技术领域，具体地说是一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用。一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，包括以下步骤：（1）将荷叶去除杂质后烘干，粉碎；（2）在粉碎后的荷叶粉中加入复合酶，搅拌；（3）将步骤（2）所得混合物调pH为4.1‑6.8，置于超声清洗器中超声辅助酶解；（4）酶解后的混合物加入回流提取器中，回流提取，过滤，得提取液；（5）将提取液经减压浓缩，脱色，萃取，减压蒸干乙醇后，得荷叶碱的粗提取物；（6）将荷叶碱的粗提取物通过阳离子交换树脂洗脱，收集洗脱液，萃取，结晶，即得高纯度荷叶碱。本发明能大幅度缩短提取时间，提高提取效率，荷叶碱粗提物通过阳离子交换树脂进行纯化后纯度更高。

Description

一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用
技术领域
本发明属于植物提取技术领域，具体地说是一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用。
背景技术
荷叶是睡莲科植物莲的干燥叶，具有清暑化湿、升发清阳、凉血止血的功效。《本草纲目》中记载，荷叶能“生发元气，裨助脾胃，涩精浊，散瘀血，清水肿、痈肿，发痘疮。治吐血、咯血、衄血、下血、血淋、崩中、产后恶血、损伤败血”。荷叶中含有生物碱及黄酮类等多种活性成分，现已被卫生部列入“药食同源”范畴内。现代研究表明，荷叶具有多种药理活性，如降脂减肥、抗氧化、降血糖、抗菌等作用。荷叶碱是荷叶中一种阿朴啡型生物碱，是荷叶中降脂的主要活性成分，能通过激活AMP-活化蛋白激酶促进脂肪连接蛋白的表达，从而加速3T3-L1脂肪细胞中葡萄糖的消耗；通过降低Per-Amt-Sim激酶表达，抑制油酸诱导的HepG2肝性脂肪变性细胞模型中的脂肪生成；通过AMPK通路促进GLUT4的转运和表达，影响葡萄糖的吸收水平，降低血糖。
随着现代饮食结构改变，肥胖及血脂代谢异常的患者越来越多，动脉粥样硬化、冠心病及脑卒中等心脑血管疾病的发病机率逐年升高并趋于年轻化，因此使用荷叶碱达到控制血脂和减肥的目的备受关注，市场对荷叶碱的需求大幅增长，但目前荷叶碱的提取效率低，操作程序复杂，耗时长，价格昂贵，限制了荷叶碱的开发和应用。
生物碱类物质属于植物的次生代谢产物，主要存在于植物细胞内，因此，要达到高效提取目的，破坏植物细胞壁，使有效成分快速溶出是提取的关键因素。植物细胞主要由细胞壁和原生质体组成，而在死细胞中，原生质体大都破裂，浸提的阻力主要来源于细胞壁，在提取过程中，当细胞内的有效成分向提取介质扩散时，必须克服细胞壁及细胞间质的双重阻力。近年来，纤维素酶和果胶酶在提取中的应用极大的克服了提取过程中细胞壁的阻力。纤维素酶和果胶酶作用于植物材料，能使细胞壁及其间质结构产生局部的疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁及细胞间质等传质屏障对有效成分从细胞内向提取介质扩散的传质阻力，从传质角度提高有效成分的提取率。
发明内容
为了解决现有荷叶碱提取效率低等技术问题，本发明提供了一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及其应用。
本发明提供的技术方案为：
一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，包括以下步骤：
(1)将荷叶去除杂质后烘干，粉碎，得到荷叶粉；
(2)在粉碎后的荷叶粉中加入复合酶，搅拌均匀，得到混合物；
(3)将步骤(2)所得混合物调pH为4.1-6.8，置于超声清洗器中超声辅助酶解10-120min，得到酶解混合物；
(4)将步骤(3)所得酶解混合物加入回流提取器中，然后加入8-20倍量45-75％乙醇溶液，回流提取20-120min，过滤，得提取液；
(5)将步骤(4)的提取液经减压浓缩回收乙醇，脱色，再经55％乙醇溶液萃取，减压蒸干乙醇后，得荷叶碱的粗提取物；
(6)将荷叶碱的粗提取物通过阳离子交换树脂洗脱，洗脱液中乙醇浓度为45％，NaOH浓度为3.7％，收集洗脱液，石油醚萃取，结晶，即得高纯度荷叶碱。
作为优选，步骤(1)中荷叶粉的粒径为20-80目。
作为优选，步骤(2)中的复合酶的加入量为荷叶粉质量的0.3-5.0％。
作为优选，步骤(2)中的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成，二者的质量比为1∶0.1-1。
作为优选，步骤(3)中超声清洗器的工作参数为：超声功率为140W，温度30-60℃。
作为优选，步骤(6)中阳离子交换树脂为732型强酸性阳离子交换树脂。
本发明还提供了荷叶碱在治疗高血脂、糖尿病和减肥中的用途。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明采用复合酶对植物细胞壁进行酶解，与此同时结合超声提高酶解效率，促进荷叶中荷叶碱的快速溶出，再通过回流提取，能大幅度缩短提取时间，提高提取效率，荷叶碱粗提物通过阳离子交换树脂进行纯化后纯度更高。
(2)本发明使用仪器设备简单，选择性强，节能环保，提取纯化成本低，易于推广使用。
(3)本发明从荷叶中提取纯化的荷叶碱对高血脂模型小鼠、2型糖尿病模型小鼠及ob/ob模型小鼠具有良好的治疗作用，且在给药剂量大于1mg/kg时表现出降血脂作用；在剂量大于25mg/kg时表现出降血糖作用；在剂量大于5mg/kg时，显示出减肥作用。
附图说明
图1为本发明酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及应用提取纯化技术路线图；
图2为本发明酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法及应用的提取单因素试验结果图；
图3为荷叶碱对高血脂模型小鼠的降血脂作用结果图；
图4为荷叶碱对2型糖尿病模型小鼠的降血糖作用结果图；
图5为荷叶碱对ob/ob肥胖小鼠的减肥作用结果图。
具体实施方式
参考下列实施例将更容易理解本发明，给出的实施例不是限制本发明的范围。
实施例1：
一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，包括如下步骤：
(1)将荷叶去除杂质，干燥后粉碎为50目粗粉；
(2)将荷叶粗粉中拌入2.1％的复合酶，搅拌均匀用于酶解，复合酶为1份纤维素酶和0.5份果胶酶混合而成；
(3)将步骤(2)中所得混合物调pH为4.9，温度48℃，140W功率超声辅助酶解32min；
(4)将步骤(3)中所得酶解混合物放入圆底烧瓶，加入14倍量60％乙醇进行回流提取，提取时间为45min，过滤，得提取液；
(5)将步骤(4)中所得提取液减压回收乙醇，脱色，55％乙醇萃取，减压蒸干乙醇，得荷叶碱粗提取物；
(6)将8倍柱体积的浓度22mg/mL荷叶碱粗提取物上样液，上样至阳离子交换柱上，2倍量柱体积去离子水除杂，然后用12倍量柱体积含3.7％NaOH的45％乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液经石油醚萃取后结晶，即为荷叶碱纯品。晶体经HPLC检测，确定纯度并计算荷叶碱提取率。
荷叶碱检测仪器及试剂：岛津高效液相色谱仪(型号Prominence UFLC，配有SPD-M20A二极管阵列检测器，LC/Labsolution色谱工作站，日本岛津公司)；十万分之一电子分析天平(型号MS105DU，梅特勒公司)；KQ-100DA台式数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；荷叶碱标准品购于成都普瑞法有限公司，纯度>98.9％；乙腈(色谱级，美国Fisher公司)；水为自制超纯水；其余为分析纯。
荷叶碱测定色谱方法同2015药典方法。流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27：70.6：1.6：0.78)，检测波长为270nm，柱温40℃，进样量10μL，流速1.0mL/min，理论板数按荷叶碱峰计算应不低于2000。
进一步的酶解辅助提取单因素试验结果：
①粉碎粒度的优化：荷叶的粉碎粒度对荷叶碱提取率的影响见图2A，粉碎粒度为40目时达到最大提取率，当粉碎粒度大于40目后，提取率呈逐渐下降趋势，故选择40目作为最适宜粉碎粒度。
②果胶酶和纤维素酶比例的优化：果胶酶和纤维素酶的混合比例对荷叶碱的提取至关重要，植物细胞壁主要由纤维素和果胶组成，使用适当比例的纤维素酶和果胶酶进行酶解，能够最大程度破环植物细胞壁，促进有效成分溶出。
如图2B所示，果胶酶与纤维素酶的比例小于1时，随着果胶酶比例增加，荷叶碱提取率增加，当果胶酶与纤维素酶0.7：1混合时，提取率达到最大，继续增加果胶酶的比例，荷叶碱提取率不再变化，故认为果胶酶与纤维素酶的最佳比例为0.7：1。
③复合酶加入量的优化：复合酶的加入量对荷叶碱提取率的影响见图2C，当加入量<2.5％时，随着酶加入量的增加荷叶碱提取率升高，酶加入量为2.5％时提取率达到最大，随后荷叶碱提取率不再随酶加入量的增加而升高，因此最优复合酶加入量为2.5％。
④酶解时间的优化：酶解时间决定了荷叶细胞壁是否被充分破坏，从而影响荷叶碱提取率。
由图2D可知，酶解时间为32min时，植物细胞壁破坏彻底，荷叶碱提取率达到最大，继续延长酶解时间并不会改变提取率，因此，确定酶解时间为32min最优。
⑤酶解温度的优化：酶的活性与温度密切相关，温度过低或过高都可能导致酶失活，从而影响提取率。
如图2E所示，在温度为48℃时，复合酶的活性最高，因此荷叶碱的提取率也最大，当温度低于或高于48℃时，荷叶碱的提取率均会下降。
⑥酶解pH的优化：酶解时pH对提取率的影响如图2F所示，当pH<5.0时，随着pH升高，荷叶碱提取率增加，在pH为时提取率达到最大；当酶解pH>5.0时，随着pH的增加，荷叶碱提取率大大降低。
实施例2：荷叶碱对高血脂模型小鼠的治疗作用
2.1材料
2.1.1仪器与试剂
Centrifuge 5418R小型冷冻高速离心机(德国艾本德公司)；IVC饲养系统(上海绍丰实验动物设备公司)；ACCULAB电子分析天平(德国赛多利斯集团)；milli-Q Integral 3超纯水仪(德国merck公司)；HF45高脂鼠粮(戴茨生物科技有限公司)；总胆固醇(TC)测定试剂盒(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)；甘油三酯(TG)测定试剂盒(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂盒(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)；低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)。
2.1.2动物
C57BL/6J小鼠60只，雌雄各半，6-8周龄，购于空军军医大学实验动物中心。人工控制光照，昼夜12h交替，室内温度23℃左右，湿度50％左右，普通饲料适应饲养1周后用于实验。
2.2方法
2.2.1实验药物配置
实验用荷叶碱采用本发明提取纯化方法所得，纯度大于98.1，将荷叶碱样品用去离子水配置成为浓度为1mg/mL、4mg/mL、7mg/mL和10mg/mL荷叶碱溶液，每天现用现配。
2.2.2动物造模及分组
将实验动物随机分为正常组，模型组，荷叶碱10mg/kg组，荷叶碱40mg/kg组，荷叶碱70mg/kg组及荷叶碱100mg/kg组，每组10只。正常组小鼠常规饲料喂养，其余组均采用高脂饲料喂养，高脂饲料喂养同时，荷叶碱各给药组每天灌胃对应浓度的荷叶碱，给药容量10mL，正常组和模型组灌胃等容量去离子水。给药周期3个月。
2.2.3样品收集及检测
给药3个月后，小鼠禁食不禁水12h，乙醚吸入麻醉，眼底静脉丛采血，静置3h，3500r/min离心，得淡黄色透明血清。参照迈瑞TC、TG、HDL-C和LDL-C试剂说明，采用全自动生化仪对所用小鼠血清进行检测。
2.2.4数据分析
所有实验数据采用Means±SD表示，SPSS18.0进行组间差异分析，多组间差异比较用单因素方差分析(One-way ANOVA)，P<0.05即代表有显著性差异。
2.3结果
由图3A、B、D可知，与正常组相比，模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C显著升高(P<0.01)，与模型组相比，荷叶碱各剂量组小鼠血清TC、TG和LDL-C水平降低(P<0.05或P<0.01)，且在10-100mg/kg剂量范围内呈剂量依赖性；由图3C可知，与正常组相比，模型组小鼠血清HDL-C显著下降(P<0.01)，与模型组相比，荷叶碱各剂量组小鼠血清HDL-C显著升高(P<0.05或P<0.01)。
实施例3：荷叶碱对2型糖尿病小鼠的降血糖作用
3.1材料
3.1.1仪器与试剂
自动血糖仪(罗氏)；Centrifuge 5418R小型冷冻高速离心机(德国艾本德公司)；IVC饲养系统(上海绍丰实验动物设备公司)；ACCULAB电子分析天平(德国赛多利斯集团)；milli-Q Integral 3超纯水仪(德国merck公司)；HF45高脂鼠粮(戴茨生物科技有限公司)；血清胰岛素检测试剂盒(武汉优尔生科技股份有限公司)；血浆糖化血红蛋白检测试剂盒(武汉优尔生科技股份有限公司)。
3.1.2动物
C57BL/6J小鼠70只，雄性，6-8周龄，购于空军军医大学实验动物中心。人工控制光照，昼夜12h交替，室内温度23℃左右，湿度50％左右，普通饲料适应饲养一周后用于实验。
3.2方法
3.2.1实验药物配置
实验所用药物配置同实施例2项下2.1，给药剂量更换为12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg即可。
3.2.2动物造模及分组
70只实验动物适应性饲养1周后，随机抽取10只小鼠最为对照组，其余60只采用高糖高脂饲料喂养联合STZ腹腔注射建立2型糖尿病模型。小鼠高糖高脂饲料喂养四周后，禁食不禁水12h，于第2d上午腹腔注射60mg/kg的STZ，连续注射3d，1次/天，注射后1周剪尾测空腹血糖，将血糖值仍然小于11.1mmol/L的小鼠分离出来，1周后再次测血糖，至此，认为空腹血糖大于11.1mmol/L的小鼠即为2型糖尿病小鼠。将成模小鼠随机分为模型组、荷叶碱12.5mg/kg组、荷叶碱25mg/kg组及荷叶碱50mg/kg组。
3.2.3给药
成模后第2d，药物治疗组小鼠开始灌胃相应浓度的荷叶碱溶液，正常组及模型组灌胃等容量去离子水，1次/天，给药周期3个月。实验期间，每周称量小鼠体重，两周测量一次空腹血糖，垫料2d更换一次，每天更换饮用水，实验期间模型组及治疗组小鼠仍高糖高脂饲料喂养。
3.2.3样品收集及检测
给药结束后，所有小鼠禁食不禁水12h，测量空腹血糖后，乙醚吸入麻醉，眼底静脉丛采血，分离血清及血浆，用于血清胰岛素及血浆糖化血红蛋白检测。
血清胰岛素检测：按照血清胰岛素检测试剂盒步骤严格操作。
将试剂盒从冰箱取出，恢复至室温，稀释标准品及样品，配置洗板液；将稀释好的标准品及样品分别加入96孔板中，每个样品重复两个孔，加抗体A，37℃孵育1h；倒掉板内液体，洗板机洗板3次，拍干，加抗体B，37℃孵育30min；倒掉板内液体，洗版5次，拍干，加入显色底物，37℃孵育15min；加反应终止液，450nm处测吸光度值，计算血清胰岛素含量。
血浆糖化血红蛋白检测步骤同胰岛素检测。
3.2.4数据分析
所有实验数据采用Means±SD表示，SPSS18.0进行组间差异分析，多组间差异比较用单因素方差分析(One-way ANOVA)，P<0.05即代表有显著性差异。
3.3结果
如图4所示，与正常组相比，模型组小鼠空腹血糖、血清胰岛素和血浆糖化血红蛋白水平明显升高(P<0.05)，这说明2型糖尿病小鼠模型建立成功且稳定，高血糖同时形成了胰岛素抵抗；与模型组相比，当荷叶碱剂量大于等于25mg/kg时表现出显著的降血糖作用，且血清胰岛素水平和血浆糖化血红蛋白也有所改善(P<0.05或P<0.01)，而12.5mg/kg荷叶碱治疗组降血糖作用不明显，与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。
实施例4：荷叶碱对ob/ob肥胖小鼠的减肥作用
4.1材料
4.1.1仪器与试剂
ACCULAB电子分析天平(德国赛多利斯集团)；IVC饲养系统(上海绍丰实验动物设备公司)；milli-Q Integral 3超纯水仪(德国merck公司)。
4.1.2动物
雄性C57BL/KsJ小鼠8只，5周龄，购于空军军医大学实验动物中心；雄性ob/ob小鼠32只，5周龄，购于南京大学模式动物研究中心。所有小鼠购回适应饲养一周，待其6周龄时用于实验，人工控制光照，昼夜12h交替，室内温度23℃左右，湿度50％左右，普通饲料适应饲养一周后用于实验。
4.2方法
4.2.1实验药物配置
实验所用药物配置同实施例2项下2.1，给药剂量更换为5mg/kg、20mg/kg和80mg/kg即可。
4.2.2动物分组及给药
将32只ob/ob小鼠随机分为四组，每组8只，分别为模型组、荷叶碱5mg/kg组、荷叶碱20mg/kg组和荷叶碱80mg/kg组。荷叶碱治疗组每天灌胃对应浓度药物，模型组和正常组每天灌胃等容量去离子水，1次/天，共治疗8周。
4.2.3样品收集及检测
实验期间每周称量小鼠体重，并计算Lee′s指数，给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，乙醚吸入麻醉，分离小鼠肝脏，称重，并计算肝脏指数。
Lee′s指数＝体重(g)1/3*103/体长(cm)
肝脏指数＝肝脏重量(g)/体重(g)*100％。
4.2.4数据分析
所有实验数据采用Means±SD表示，SPSS18.0进行组间差异分析，多组间差异比较用单因素方差分析(One-way ANOVA)，P<0.05即代表有显著性差异。
4.3结果
如图5A、B、C所示，与正常小鼠相比，ob/ob小鼠体重迅速增加，实验结束时体重为正常小鼠的三倍，此外，小鼠肝脏指数和Lee′s指数也显著增加，具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比，荷叶碱治疗组小鼠体重、肝脏指数和Lee′s指数有所下降(P<0.05或P<0.01)，并在5-80mg/kg剂量范围内呈剂量依赖性，因此，荷叶碱5mg/kg服用8周即对ob/ob小鼠具有减肥作用。
综上所述，荷叶碱对高血脂、糖尿病具有治疗作用，同样也具有减肥的功效，为荷叶碱的进一步应用提供理论依据。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (9)

1.一种酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将荷叶去除杂质后烘干，粉碎，得到荷叶粉；
（2）在粉碎后的荷叶粉中加入复合酶，搅拌均匀，得到混合物；
（3）将步骤（2）所得混合物调pH为4.1-6.8，置于超声清洗器中超声辅助酶解10-120min，得到酶解混合物；
（4）将步骤（3）所得酶解混合物加入回流提取器中，然后加入8-20倍量45-75%乙醇溶液，回流提取20-120min，过滤，得提取液；
（5）将步骤（4）的提取液经减压浓缩回收乙醇，脱色，再经55%乙醇溶液萃取，减压蒸干乙醇后，得荷叶碱的粗提取物；
（6）将荷叶碱的粗提取物通过阳离子交换树脂洗脱，洗脱液中乙醇浓度为45%，NaOH浓度为3.7%，收集洗脱液，石油醚萃取，结晶，即得高纯度荷叶碱。
2.根据权利要求1所述的酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于，步骤（1）中荷叶粉的粒径为20-80目。
3.根据权利要求1所述的酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于，步骤（2）中的复合酶的加入量为荷叶粉质量的0.3-5.0%。
4.根据权利要求1所述的酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于，步骤（2）中的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成，二者的质量比为1∶0.1-1。
5.根据权利要求1所述的酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于，步骤（3）中超声清洗器的工作参数为：超声功率为140 W，温度30-60℃。
6.根据权利要求1所述的酶催化提取纯化荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于，步骤（6）中阳离子交换树脂为732型强酸性阳离子交换树脂。
7.荷叶碱在治疗高血脂中的用途。
8.荷叶碱在治疗糖尿病中的用途。
9.荷叶碱在减肥中的用途。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114635197A (zh) * 2021-12-15 2022-06-17 江苏金太阳纺织科技股份有限公司 荷类再生纤维素纤维及其制备方法
CN114712416A (zh) * 2022-01-24 2022-07-08 华中农业大学 一种水媒法高效同步提取荷叶中黄酮、生物碱和多酚的方法
WO2023178809A1 (zh) * 2022-03-22 2023-09-28 华侨大学 一种荷叶碱或其衍生物的合成方法以及荷叶碱衍生物及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101139321A (zh) * 2007-09-01 2008-03-12 福州大学 一种采用阳离子交换树脂分离纯化荷叶碱的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101139321A (zh) * 2007-09-01 2008-03-12 福州大学 一种采用阳离子交换树脂分离纯化荷叶碱的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIU F ET AL ．: "Cloud point extraction and preconcentration of four alkaloids in Nelumbo nucif-era leaves by ul － trahigh pressure － assisted extraction", 《SEPARATION SCIENCE ANDTECHNOLOGY》 *
宋冠军: "荷叶碱等几种植物降糖功能成分对GLTU4的作用机制", 《医药卫生科技辑》 *
王玉霞 等: "荷叶生物碱提取纯化工艺研究", 《北京中医药大学学》 *
石琳 等: "荷叶中生物碱对昆明小鼠减肥降脂作用的研究", 《农产品加工（学刊）》 *
邢毅: "荷叶碱的提取分离及荷叶提取物降血脂功能研究", 《医药卫生科技辑》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114635197A (zh) * 2021-12-15 2022-06-17 江苏金太阳纺织科技股份有限公司 荷类再生纤维素纤维及其制备方法
CN114712416A (zh) * 2022-01-24 2022-07-08 华中农业大学 一种水媒法高效同步提取荷叶中黄酮、生物碱和多酚的方法
WO2023178809A1 (zh) * 2022-03-22 2023-09-28 华侨大学 一种荷叶碱或其衍生物的合成方法以及荷叶碱衍生物及其应用

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