CN110338187A - 一种间充质干细胞无血清冻存液组合物 - Google Patents
一种间充质干细胞无血清冻存液组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO10、甘油5和海藻糖5以100mL∶2～15g∶2～10g∶2～5g的比例组成。本发明的主要用于间充质干细胞的冻存，不含血清及血清替代物，无需梯度降温冻存，给间充质干细胞冻存带来了极大的便利，无需经过程序降温冻存，细胞经复苏，细胞有较高的复苏效率。
Description
技术领域
本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种间充质干细胞无血清冻存液组合物。
背景技术
间充质干细胞是细胞治疗中最常用的细胞，可用于组织的修复和临床治疗。在常规的细胞保存过程中都会加入血清成本，血清的加入可给细胞带来充足的营养，同时增加细胞的复苏成活率。血清冻存细胞的方法是实验室最常用的方法。但血清中含有一些异种蛋白用于临床的细胞含有异种蛋白可能引起病人的过敏反应，血清中还可能存在一些人蓄共患病病毒，可引起人蓄共患病的传播，另外，血清中含有一些外泌体，其也可以传播疾病，也不适用于外泌体研究的试验。干细胞在血清中冻存时间太久，复苏后也会对其分化产生影响。常规的冻存过程采用梯度降温冻存，其过程繁琐，耗时长，给细胞冻存带来了诸多不利。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种间充质干细胞无血清冻存液组合物。
本发明的技术方案如下：
一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO10、甘油5和海藻糖5以100mL∶2～15g∶2～10g∶2～5g的比例组成；
上述间充质干细胞无血清培养基的pH为7.2～7.4，以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松1～100nM/L、氢化可的松0.1～10ug/mL、乙醇胺0.2～2ug/mL、FGF 5～50ng/mL、EGF 5～50ng/mL、亚硒酸钠0.01～0.1ug/mL、胰岛素0.5～1ug/mL、β-巯基乙醇10～50nM、转铁蛋白0.5～5ug/mL、维生素C 0.5～10ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素；
上述间充质干细胞无血清冻存液组合物的配制方法为：将DMSO、甘油和海藻糖溶解于间充质干细胞无血清培养基中，过滤除菌后即成。
在本发明的一个优选实施方案中，所述间充质干细胞无血清培养基以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松5～20nM/L、氢化可的松8～10ug/mL、乙醇胺0.2～1ug/mL、FGF 10～20ng/mL、EGF 10～20ng/mL、亚硒酸钠0.03～0.07ug/mL、胰岛素0.5～0.8ug/mL、β-巯基乙醇40～50nM、转铁蛋白2～3ug/mL、维生素C 2～3ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。
进一步优选的，所述间充质干细胞无血清培养基以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松10nM/L、氢化可的松、10ug/mL、乙醇胺0.2ug/mL、FGF 10ng/mL、EGF10ng/mL、亚硒酸钠0.05ug/mL、胰岛素0.5ug/mL、β-巯基乙醇50nM、转铁蛋白2.5ug/mL、维生素C 2.5ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。
在本发明的一个优选实施方案中，所述抗生素为antibiotic-antimycotic。
在本发明的一个优选实施方案中，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶8～12g∶4～7g∶4～5g的比例组成。
进一步优选的，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶10g∶5g∶5g的比例组成。
本发明的有益效果是：
1、本发明的主要用于间充质干细胞的冻存，不含血清及血清替代物，无需梯度降温冻存，给间充质干细胞冻存带来了极大的便利，无需经过程序降温冻存，细胞经复苏，细胞有较高的复苏效率。
2、本发明的配制方法简单，成本低廉。
附图说明
图1为本发明实施例1中的人间充质干细胞冻存复苏图片。
图2为本发明实施例2中的大鼠间充质干细胞冻存复苏图片。
图3为本发明实施例3中的小鼠间充质干细胞冻存复苏图片。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
下述实施例中，间充质干细胞无血清培养基的pH为7.2～7.4，以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松10nM/L、氢化可的松、10ug/mL、乙醇胺0.2ug/mL、FGF10ng/mL、EGF 10ng/mL、亚硒酸钠0.05ug/mL、胰岛素0.5ug/mL、β-巯基乙醇50nM、转铁蛋白2.5ug/mL、维生素C 2.5ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的antibiotic-antimycotic。其配制方法如下：将地塞米松、氢化可的松、乙醇胺、FGF、EGF、亚硒酸钠、胰岛素、β-巯基乙醇、胰岛素、转铁蛋白、维生素C、L-Glu、NEAA、抗生素溶解于DEME培养基中，用固体碳酸氢钠或hepes调节pH值使其在7.2～7.4之间，过滤除菌后即成。
实施例1
间充质干细胞无血清冻存液配方：将DMSO、甘油、海藻糖溶解于间充质干细胞无血清培养基中，过滤除菌后即成，间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖的比例为100mL∶10g∶5g∶5g。
人脐带间充质干细胞消化离心后去除上清液，加入上述间充质干细胞无血清冻存液，调整细胞浓度为5×106～1×107/mL，将细胞分装入冻存管，每管1～1.5mL，将冻存管放入-80℃冰箱进行冻存。冻存的细胞去除后立即放到37℃水浴锅中溶解1min，细胞转移到15mL离心管中，再加入5mL间充质干细胞无血清培养基，进行980rpm，5min离心，弃上清，收集细胞，加入10mL培养基重悬细胞进行铺板，将铺好的板放入37℃，5％的二氧化碳条件下进行培养，第二天可见人脐带间充质干细胞呈梭形和三角形(见图1)。
实施例2
间充质干细胞无血清冻存液配方：将DMSO、甘油、海藻糖溶解于间充质干细胞无血清培养基中，过滤除菌后即成，间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖的比例为100mL∶10g∶5g∶5g。
大鼠骨髓间充质干细胞消化离心后去除上清液，加入上述间充质干细胞无血清冻存液，调整细胞浓度为5×106～1×107/mL，将细胞分装入冻存管，每管1～1.5mL，将冻存管放入-80℃冰箱进行冻存。冻存的细胞去除后立即放到37℃水浴锅中溶解1min，细胞转移到15mL离心管中，再加入5mL间充质干细胞无血清培养基，进行980rpm，5min离心，弃上清，收集细胞，加入10mL培养基重悬细胞进行铺板，将铺好的板放入37℃，5％的二氧化碳条件下进行培养，第二天可见大鼠骨髓间充质干细胞呈梭形和三角形(见图2)。
实施例3
间充质干细胞无血清冻存液配方：将DMSO、甘油、海藻糖溶解于间充质干细胞无血清培养基中，过滤除菌后即成，间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖的比例为100mL∶10g∶5g∶5g。
小鼠骨髓间充质干细胞消化离心后去除上清液，加入上述间充质干细胞无血清冻存液，调整细胞浓度为5×106～1×107/mL，将细胞分装入冻存管，每管1～1.5mL，将冻存管放入-80℃冰箱进行冻存。冻存的细胞去除后立即放到37℃水浴锅中溶解1min，细胞转移到15mL离心管中，再加入5mL间充质干细胞无血清培养基，进行980rpm，5min离心，弃上清，收集细胞，加入10mL培养基重悬细胞进行铺板，将铺好的板放入37℃，5％的二氧化碳条件下进行培养，第二天可见小鼠骨髓间充质干细胞呈梭形和三角形(见图3)。
本领域普通技术人员可知，本发明的技术方案在下述范围内变化时，仍然能够得到与上述实施例相同或相近的技术效果，仍然属于本发明的保护范围：
一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO10、甘油5和海藻糖5以100mL∶2～15g∶2～10g∶2～5g的比例组成；优选的，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶8～12g∶4～7g∶4～5g的比例组成。
上述间充质干细胞无血清培养基的pH为7.2～7.4，以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松1～100nM/L、氢化可的松0.1～10ug/mL、乙醇胺0.2～2ug/mL、FGF 5～50ng/mL、EGF 5～50ng/mL、亚硒酸钠0.01～0.1ug/mL、胰岛素0.5～1ug/mL、β-巯基乙醇10～50nM、转铁蛋白0.5～5ug/mL、维生素C 0.5～10ug/mL、1×的L-G1u、1×的NEAA和1×的抗生素。优选的，上述间充质干细胞无血清培养基以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松5～20nM/L、氢化可的松8～10ug/mL、乙醇胺0.2～1ug/mL、FGF 10～20ng/mL、EGF 10～20ng/mL、亚硒酸钠0.03～0.07ug/mL、胰岛素0.5～0.8ug/mL、β-巯基乙醇40～50nM、转铁蛋白2～3ug/mL、维生素C 2～3ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
Claims (6)
1.一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其特征在于：其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO10、甘油5和海藻糖5以100mL∶2～15g∶2～10g∶2～5g的比例组成；
上述间充质干细胞无血清培养基的pH为7.2～7.4，以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松1-100nM/L、氢化可的松0.1～10ug/mL、乙醇胺0.2～2ug/mL、FGF 5～50ng/mL、EGF 5～50ng/mL、亚硒酸钠0.01～0.1ug/mL、胰岛素0.5～1ug/mL、β-巯基乙醇10～50nM、转铁蛋白0.5～5ug/mL、维生素C 0.5～10ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素；
上述间充质干细胞无血清冻存液组合物的配制方法为：将DMSO、甘油和海藻糖溶解于间充质干细胞无血清培养基中，过滤除菌后即成。
2.如权利要求1所述的一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其特征在于：所述间充质干细胞无血清培养基以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松5～20nM/L、氢化可的松8～10ug/mL、乙醇胺0.2～1ug/mL、FGF 10～20ng/mL、EGF 10～20ng/mL、亚硒酸钠0.03～0.07ug/mL、胰岛素0.5～0.8ug/mL、β-巯基乙醇40～50nM、转铁蛋白2～3ug/mL、维生素C 2～3ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。
3.如权利要求2所述的一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其特征在于：所述间充质干细胞无血清培养基以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松10nM/L、氢化可的松、10ug/mL、乙醇胺0.2ug/mL、FGF 10ng/mL、EGF 10ng/mL、亚硒酸钠0.05ug/mL、胰岛素0.5ug/mL、β-巯基乙醇50nM、转铁蛋白2.5ug/mL、维生素C 2.5ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。
4.如权利要求1所述的一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其特征在于：所述抗生素为antibiotic-antimycotic。
5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的间充质干细胞无血清冻存液组合物，其特征在于：其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶8～12g∶4～7g∶4～5g的比例组成。
6.如权利要求5所述的一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其特征在于：其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶10g∶5g∶5g的比例组成。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20191018 |