CN114145287A - 一种细胞通用冻存液 - Google Patents
一种细胞通用冻存液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114145287A CN114145287A CN202111411039.9A CN202111411039A CN114145287A CN 114145287 A CN114145287 A CN 114145287A CN 202111411039 A CN202111411039 A CN 202111411039A CN 114145287 A CN114145287 A CN 114145287A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- dmso
- content
- dextran
- glycerol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 title claims description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims abstract description 16
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 49
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000000816 effect on animals Effects 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供一种细胞通用冻存液,其成分主要包括人血清白蛋白、DMSO、甘油、复方电解质注射液、右旋糖苷。其中:人血清白蛋白的含量为40%,DMSO的含量为3%,甘油的含量为7%,复方电解质注射液的含量为20%,右旋糖苷的含量为30%。本发明通过结合各冻存成分的特点进行最优配比,显著提高了细胞的存活率,并且避免了血清的使用,降低了污染源。
Description
技术领域
本发明涉及细胞及生物工程学领域,具体涉及一种细胞通用冻存液。
背景技术
细胞冻存时,如果细胞中不添加冻存保护成分,由于细胞内和外环境中的水会形成冰晶导致细胞发生机械损伤、电解质浓度升高等一系列变化,最终导致细胞的死亡。因此添加细胞冻存保护剂对于细胞的冻存是必须的,目前,实验室通用的细胞保存手段是使用90%的新生胎牛血清加10%DMSO,其中血清成分由于批次不确定、成分不确定对细胞造成一定突发性结果,如细胞污染等,且一些细胞的冻存并不可以使用血清,如干细胞等一系列细胞,用血清冻存可能导致干细胞的分化。而DMSO对细胞具有一定的毒副作用。因此,发明一种细胞通用的且易制备的细胞冻存液显得尤为重要。
发明内容
发明一种对所有细胞通用的、甚至是对动物精子有一定保护效果的、无血清、易制备的细胞冻存液。本发明提供一种细胞通用冻存液,其中:人血清白蛋白的含量为40%,DMSO的含量为3%,甘油的含量为7%,复方电解质注射液的含量为20%,右旋糖苷的含量为30%。
本发明的有益效果如下:
以本发明提供的细胞通用冻存液,结合了各冻存成分的特点进行最优配比,显著提高了细胞的存活率,并且避免了血清的使用,易制备、易保存、复苏后的细胞活性极高且避免了血清存在的潜在危险。
附图说明
图1为实施例、对比例1-4的细胞冻存一周后细胞复苏活率数据结果图;
图2为实施例、对比例1-4的细胞冻存三个月后细胞复苏活率数据结果图;
图3为实施例、对比例1-4的细胞冻存六个月后细胞复苏活率数据结果图;
图4位实施例、对比例1-4的细胞冻存六个月后细胞复苏培养三天后的细胞数量结果图;
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点,下面将结合具体实施例对本申请作进一步说明。
实施例
本实施例提供了提供一种细胞通用冻存液配方。以10mL为例:人血清白蛋白4mL,DMSO 0.3mL,甘油0.7mL,复方电解质2mL,右旋糖苷3mL。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
对比例1
本实施例还设置了对比例1、对比例2、对比例3、对比例4,对比例1、2、3、4均为实施例的变形,其中对比例1与实施例的区别在于冻存液配方中的DMSO含量从原先的、3%变为10%,甘油不添加,具体配方为:人血清白蛋白4mL,添加1 mL的DMSO,2mL的复方电解质注射液,3mL的右旋糖苷。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
对比例2
对比例2与实施例的区别在于冻存液配方中的甘油含量从原先的7%变为10%mL,DMSO不添加,具体配方为:人血清白蛋白4mL,添加1mL的甘油,2mL的复方电解质注射液,3mL的右旋糖苷。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
对比例3
对比例3与实施例的区别在于冻存液配方中的人血清白蛋白含量从原先的40%变为20%,复方电解质注射液含量从原先的20%变为40%,具体配方为:人血清白蛋白2mL,添加0.3mL的DMSO,添加0.7mL的甘油,4mL的复方电解质注射液,3mL的右旋糖苷。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
对比例4
对比例3与实施例的区别在于冻存液配方中的人血清白蛋白含量从原先的40%变为60%,复方电解质注射液含量从原先的20%变为10%,右旋糖苷含量从原先的30%变为20%,具体配方为:人血清白蛋白6mL,添加0.3mL的DMSO,添加0.7mL的甘油,1mL的复方电解质注射液,2mL的右旋糖苷。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
使用五种不同的细胞冻存液冻存同一批间充质干细胞,每种冻存液冻存十支细胞,每支冻存5×105细胞,在细胞冻存满一周、三月、六月的时候分别各组取出三支细胞进行复苏并统计细胞存活率进行汇总求平均值。在细胞冻存六个月后复苏细胞对细胞进行三天的培养,分别统计各组细胞的细胞数量。
最后所应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (6)
1.一种细胞通用冻存液,其特征在于:其成分主要包括人血清白蛋白、DMSO、甘油、复方电解质注射液、右旋糖苷。
2.如权利要求1所述的一种细胞通用冻存液,其特征在于:人血清白蛋白的浓度范围在20-60%、DMSO的浓度范围在5%-10%;甘油的度范围在0%-10%;复方电解质注射液的度范围在10-50%,右旋糖苷的度范围在10-60%。
3.权利要求1或2所述的一种细胞通用冻存液,其特征在于:人血清白蛋白、DMSO、甘油、复方电解质注射液、右旋糖苷的浓度比为(2-6)∶(0.5-1)∶(0-1)∶(1-5)∶(1-6)。
4.如权利要求1所述的一种细胞通用冻存液,其特征在于:人血清白蛋白、DMSO、甘油、复方电解质注射液、右旋糖苷的浓度比:4∶0.3∶0.7∶2∶3。
5.如权利要求1所述的一种细胞通用冻存液,其特征在于:浓度40%的人血清白蛋白为最优选择,浓度3%的DMSO含量为最优选择,浓度7%的甘油含量为最优选择,浓度20%的复方电解质注射液为最优选择,浓度30%的右旋糖苷为最优选择。
6.如权利要求1所述的一种细胞通用冻存液,其特征在于:通用性不止局限在细胞,该细胞冻存液也可以作为精子冻存液使用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111411039.9A CN114145287A (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 一种细胞通用冻存液 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111411039.9A CN114145287A (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 一种细胞通用冻存液 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114145287A true CN114145287A (zh) | 2022-03-08 |
Family
ID=80457924
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202111411039.9A Pending CN114145287A (zh) | 2021-11-25 | 2021-11-25 | 一种细胞通用冻存液 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114145287A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114467924A (zh) * | 2022-02-24 | 2022-05-13 | 杭州原生生物科技有限公司 | 一种新型无血清细胞冻存液配方 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105660606A (zh) * | 2016-03-10 | 2016-06-15 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种细胞冻存液 |
CN108207934A (zh) * | 2018-02-27 | 2018-06-29 | 广州瑞贝斯药业有限公司 | 一种细胞冻存液 |
CN109430252A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-08 | 成都赋智健康科技有限公司 | 一种干细胞冻存液及其制作方法 |
CN109832261A (zh) * | 2019-04-15 | 2019-06-04 | 无锡芯超生物科技有限公司 | 一种细胞冻存液及其应用 |
CN110338187A (zh) * | 2018-04-08 | 2019-10-18 | 生物角(厦门)科技有限公司 | 一种间充质干细胞无血清冻存液组合物 |
WO2021041399A1 (en) * | 2019-08-29 | 2021-03-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Cell cryopreservation medium |
CN112841175A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-05-28 | 朱灏 | 一种高增殖能力的人脐带间充质干细胞注射液冻存液 |
-
2021
- 2021-11-25 CN CN202111411039.9A patent/CN114145287A/zh active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105660606A (zh) * | 2016-03-10 | 2016-06-15 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种细胞冻存液 |
CN108207934A (zh) * | 2018-02-27 | 2018-06-29 | 广州瑞贝斯药业有限公司 | 一种细胞冻存液 |
CN110338187A (zh) * | 2018-04-08 | 2019-10-18 | 生物角(厦门)科技有限公司 | 一种间充质干细胞无血清冻存液组合物 |
CN109430252A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-08 | 成都赋智健康科技有限公司 | 一种干细胞冻存液及其制作方法 |
CN109832261A (zh) * | 2019-04-15 | 2019-06-04 | 无锡芯超生物科技有限公司 | 一种细胞冻存液及其应用 |
WO2021041399A1 (en) * | 2019-08-29 | 2021-03-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Cell cryopreservation medium |
CN112841175A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-05-28 | 朱灏 | 一种高增殖能力的人脐带间充质干细胞注射液冻存液 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
C.N.KUNDU ET AL.: ""Effect of dextrans on cryopreservation of goat cauda epididymal spermatozoa using a chemically defined medium"", 《REPRODUCTION》 * |
C.N.KUNDU ET AL.: ""Effect of dextrans on cryopreservation of goat cauda epididymal spermatozoa using a chemically defined medium"", 《REPRODUCTION》, 31 December 2002 (2002-12-31), pages 907 - 913 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114467924A (zh) * | 2022-02-24 | 2022-05-13 | 杭州原生生物科技有限公司 | 一种新型无血清细胞冻存液配方 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104663649B (zh) | 人类卵母细胞冷冻保护剂 | |
Fuller et al. | Biopreservation of hepatocytes: current concepts on hypothermic preservation, cryopreservation, and vitrification | |
CN111789104B (zh) | 一种冷冻保存液在干细胞冻存中的应用 | |
CN102648708B (zh) | 一种用于胚胎或细胞的冷冻液及其用途 | |
US11412730B2 (en) | Method for the cryopreservation of cells for therapeutic purposes | |
US3005756A (en) | Diluter containing carbon dioxide for preserving semen | |
Saito et al. | Effect of sugars-addition on the survival of vitrified bovine blastocysts produced in vitro | |
JP4947948B2 (ja) | 細胞保存液 | |
US8435730B2 (en) | Semen extender composition and methods for manufacturing and using | |
JP2018518965A (ja) | 腫瘍浸潤リンパ球の凍結保存方法 | |
Koshimoto et al. | The effect of the osmolality of sugar-containing media, the type of sugar, and the mass and molar concentration of sugar on the survival of frozen-thawed mouse sperm | |
CN102578079A (zh) | 马属动物精液稀释基础液及其配制方法和使用方法 | |
CN114145287A (zh) | 一种细胞通用冻存液 | |
CN111869659A (zh) | 一种无血清细胞冻存液、制备方法及其使用方法 | |
Pope et al. | Live birth following cryopreservation and transfer of a baboon embryo | |
Paula et al. | Vitamin E and reduced glutathione in Prochilodus lineatus (curimba) semen cryopreservation (Characiformes: Prochilodontidae) | |
CN112715533B (zh) | 一种间充质干细胞的冻存液及冻存方法 | |
CN111789100B (zh) | 一种无dmso的冷冻保存液在卵母细胞或胚胎冷冻保存中的应用 | |
De Castro et al. | Dextran vitrification media prevents mucin coat and zona pellucida damage in rabbit embryo | |
Darvelid et al. | Survival rate and ultrastructure of vitrified bovine in vitro and in vivo developed embryos | |
Fitzgerald et al. | Effect of storage temperature, equilibration time, and buffers on survival of Tritrichomonas foetus in the presence of glycerol at freezing temperatures | |
CN111789101A (zh) | 一种基于pva的冻存液在卵母细胞或胚胎冻存中的应用 | |
Zhao et al. | Trehalose addition to a Tris-fructose egg yolk extender on quality of ram sperm preserved at 0° C | |
CN109221085A (zh) | 猪鲜精保存稀释粉 | |
CN111789103B (zh) | 一种冷冻保存用解冻液及解冻方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220308 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |