CN110331151A - 紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法 - Google Patents
紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110331151A CN110331151A CN201910288244.7A CN201910288244A CN110331151A CN 110331151 A CN110331151 A CN 110331151A CN 201910288244 A CN201910288244 A CN 201910288244A CN 110331151 A CN110331151 A CN 110331151A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mokh
- gene
- monascus
- bacterial strain
- plasmid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法,包括下列步骤:(1)设计引物,2)通过PCR扩增紫色红曲菌基因组中的mokH基因;3)将扩增得到的mokH基因连接到pBC‑hygro原核表达载体上,构建pBC‑hygro‑mokH高表达质粒,4)制备红曲菌原生质体,将过表达质粒导入到红曲菌原生质体中,得到mokH过表达菌株。本发明成功的克隆出了紫色红曲菌中的调控基因mokH,将得到的mokH基因在紫色红曲菌中进行过表达,从而探究mokH基因在紫色红曲菌中的功能。通过HPLC检测和潮霉素基因组的扩增,筛选出mokH基因过表达的目的工程菌株。对筛选出的工程菌株次级代谢产物、菌丝体形态及基因表达量进行检测,从而探究mokH基因在紫色红曲菌M1中对代谢、生长及基因表达的作用。
Description
技术领域:
本发明涉及一种紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法,属于生物基因工程领域。
背景技术:
红曲菌又称“红曲霉”,在真菌分类学上属于真菌门,子囊菌亚门,不整子囊菌纲,红曲菌科,红曲霉属。红曲菌可以产生多种次级代谢产物,如红曲色素、Monacolin K、γ-氨基丁酸和桔霉素等,其中许多代谢产物被广泛的应用于食品色素、医药、酿酒等方面,MonacolinK又称“洛伐他汀”,是红曲菌产生的一种具有生理活性的聚酮类物质。研究发现,MonacolinK具有抑制胆固醇合成中关键酶HMG-CoA活性的作用,能够有效的抑制胆固醇合成,因此,Monacolin K被国内外视为降胆固醇的理想药
由于对红曲菌中次级代谢产物Monacolin K生物合成途径的研究起步较晚,所以很多细节尚未清楚。但由于与土曲霉中Monacolin K的结构相似,因此根据土曲霉中MonacolinK的生物合成途径来推测红曲菌中Monacolin K的生物合成途径。经过研究初步推测,红曲菌中Monacolin K的生物合成基因簇中有9个功能域与土曲霉中Monacolin K生物合成酶基因高度同源,即mokA-mokI。基因过表达技术是分子生物学中十分重要的一项技术,主要是通过将完整的强启动子与目的基因融合,使目的基因能在宿主中进行表达,从而构建过表达载体,通过转化受体菌,获得该目的基因产物大量积累的菌株。曾有相关实验对红曲霉CG-6中的mokE基因进行过表达,最后发现mokE的过表达对红曲霉的菌体生长、孢子形态及生殖方式均有影响。而对于mokH基因在紫色红曲菌中的调节机制,目前未有研究,通过比较,发现mokH基因与lovE基因、mlcR基因具有同源性,因此推测mokH基因在Monacolin K合成过程中起到转录因子的作用,调控特异性途径上的基因,其表达量可能会直接影响其余8段基因的表达,从而影响Monacolin K的合成。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:
1) 设计了一对引物mokH-F和mokH-R,具体如下:
mokH-F:5’-GCTCTAGAATGGCCCTATCGCCAGT-3’(XbaI);
mokH-R:5’-CCCAAGCTTTTAGGAGGCCAGGTTGTGTT-3’(HindIII);
2) 通过PCR扩增紫色红曲菌基因组中的mokH基因;
3) 将扩增得到的mokH基因连接到pBC-hygro原核表达载体上,构建pBC-Hygro-mokH高表达质粒;
构建重组质粒后,通过琼脂糖凝胶电泳得到的片段条带大小对重组质粒进行初步验证,再用QuickCutClaⅠ和XbaⅠ进行双酶切验证,经过双酶切后得到大小在6800bp左右和1400bp左右的两段目的片段,与预期大小一致,证明过表达质粒构建成功。
4)制备红曲菌原生质体
(1)将红曲菌M1接种于试管斜面培养基,30 ℃培养7-10 d。
(2)加0.9%无菌生理盐水用接种环轻轻刮菌体表面,释放并收集孢子,制备成均一浓度的孢子悬液(1×108 -1×109个/mL)。
(3)取200 μL均一孢子悬液涂布于铺有玻璃纸的PDA固体培养基上,30 ℃培养36-40 h。
(4)用涂布棒刮取玻璃纸上的菌丝体并收集到500目尼龙布上,用0.6 M MgSO4溶液洗1-2次。
(5)取约0.3 g菌丝体于100 mL三角瓶中,并加入30 mL裂解酶液,于30 ℃,60 r/min酶解2.5 h,然后用500目尼龙布过滤。
(6)滤液于4 ℃,7000 r/min 离心5 min,弃上清。
(7)将收集的原生质体沉淀用1.2 mol/L预冷的山梨醇溶液洗涤2次,然后将其分成2份。一份用预冷的1.2 mol/L山梨醇溶液重悬后,于-80 ℃保存。另一份则用1.2 mol/L山梨醇溶液重悬后置于冰上备用。
5)通过电击转化的方法将过表达质粒导入到红曲菌原生质体中,得到mokH过表达菌株。
本发明的有益效果:
本发明成功的克隆出了紫色红曲菌中的调控基因mokH,将得到的mokH基因在紫色红曲菌中进行过表达,从而探究mokH基因在紫色红曲菌中的功能。
通过HPLC检测和潮霉素基因组的扩增,筛选出mokH基因过表达的目的工程菌株。对筛选出的工程菌株次级代谢产物、菌丝体形态及基因表达量进行检测,从而探究mokH基因在紫色红曲菌M1中对代谢、生长及基因表达的作用。
附图说明:
图1是pBC-hygro-mokH重组质粒双酶切琼脂糖凝胶电泳图,泳道 1:DL10000 DNAMarker;泳道 2,3:pBC-hygro-mokH+QuickCutClaⅠ+ XbaⅠ。
图2a 红曲菌M1菌株对潮霉素B的耐受浓度,图2b是导入质粒菌株的筛选结果,图中,第一行:M1 菌株;第二行;加入质粒的M1菌株。
图3是 RNA 琼脂糖凝胶电泳图,泳道 1:DL2000 DNA Marker;泳道 2:过表达 H7菌株转录组;泳道 3:紫色红曲菌M1 转录组。
图 4是 H7 菌株潮霉素转录组的 PCR 电泳图,泳道 1:DL2000 DNA Marker;泳道2,3: H7 菌株;泳道 4:M1 菌株。
图5是三种菌株 Monacolin K 产量检测。每组比较中,从左到右以此是M1 菌株、过表达菌株和敲除菌株。
图6是三种菌株色素产量检测,A:红曲红色素;B:红曲橙色素;C:红曲黄色素。每组比较中,从左到右以此是M1 菌株、过表达菌株和敲除菌株。
图7 是mokH基因过表达菌株H7与普通M1菌株在不同倍率下扫描电镜图,A:M1菌株5000×;B:H7菌株5000×;C:M1菌株10000×;D:H7菌株10000×。1:凹陷;2:褶皱。
具体实施方式:
实施例1
本实施例提供一种紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法,包括下列步骤:
1) 设计了一对引物mokH-F和mokH-R,具体如下:
mokH-F:5’-GCTCTAGAATGGCCCTATCGCCAGT-3’(XbaI)。
mokH-R:5’-CCCAAGCTTTTAGGAGGCCAGGTTGTGTT-3’(HindIII)。
2) 通过PCR扩增紫色红曲菌基因组中的mokH基因;
3) 将扩增得到的mokH基因连接到pBC-hygro原核表达载体上,构建pBC-Hygro-mokH高表达质粒;
构建重组质粒后,通过琼脂糖凝胶电泳得到的片段条带大小对重组质粒进行初步验证,再用QuickCutClaⅠ和XbaⅠ进行双酶切验证,经过双酶切后得到大小在6800bp左右和1400bp左右的两段目的片段,与预期大小一致,证明过表达质粒构建成功。
4)制备红曲菌原生质体,并通过电击转化的方法将过表达质粒导入到红曲菌原生质体中,得到mokH过表达菌株。
实施例2质粒验证
一、重组质粒的验证
构建重组质粒后,通过琼脂糖凝胶电泳得到的片段条带大小对重组质粒进行初步验证,再用QuickCutClaⅠ和XbaⅠ进行双酶切验证。结果如图1所示,经过双酶切后得到大小在6800bp左右和1400bp左右的两段目的片段,与预期大小一致,证明过表达质粒构建成功。
二、重组质粒的导入及转化子的筛选
制备红曲菌原生质体,并通过电击转化的方法将过表达质粒导入到红曲菌原生质体中,再结合潮霉素 B 浓度筛选浓度结果,筛选导入过表达质粒的转化子。结果如图2a所示,从图中看出,随着潮霉素B浓度的增加,加入质粒和未加入质粒的红曲菌 M1 菌株的菌落数都逐渐减少;当潮霉素B浓度为 10 μg/mL 时,加入质粒的红曲菌 M1 菌株的菌落数明显多于未加入质粒红曲菌 M1 菌株;当潮霉素 B 浓度为 15 μg/mL 时,加入质粒的红曲菌 M1菌株有菌落生长,而未加入质粒的红曲菌 M1 菌株则无菌落生长。因此,挑取潮霉素 B 浓度为 15 μg/mL 抗性板上的菌落,从而成功获得具有潮霉素B 抗性的转化子。
通过电击转化的方法将过表达质粒导入到红曲菌原生质体中,再结合潮霉素 B浓度筛选浓度结果,筛选导入过表达质粒的转化子。结果如图2b所示,从图中看出,随着潮霉素 B 浓度的增加,加入质粒和未加入质粒的红曲菌 M1 菌株的菌落数都逐渐减少;当潮霉素 B 浓度为 10 μg/mL 时,加入质粒的红曲菌 M1 菌株的菌落数明显多于未加入质粒的红曲菌 M1 菌株;当潮霉素 B 浓度为 15 μg/mL 时,加入质粒的红曲菌 M1 菌株有菌落生长,而未加入质粒的红曲菌 M1 菌株则无菌落生长。因此,挑取潮霉素 B 浓度为 15 μg/mL抗性板上的菌落,从而成功获得具有潮霉素 B 抗性的转化子。将获得的转化子在具有潮霉素 B 抗性的平板上传 5 代,再进行发酵培养,对其 Monacolin K 的产量以及潮霉素 B基因组进行测定,以筛选出阳性转化子。
实施例3过表达菌株的验证
一、RNA质量验证
将 M1 菌株在发酵培养基中培养 12 天后,对菌株中的 RNA 进行提取,通过琼脂糖凝胶电泳检测提取的 RNA 质量,电泳结果如图3所示,有清晰的条带出现,且 28s 条带的亮度是 18s 的2倍,说明 RNA 提取成功,且未降解。然后检测 RNA 的 OD260/280 比值、浓度,RNA 的浓度在 300-500ng/μL之间,OD260/280 比值在 1.8-2.1 之间,说明 RNA 提取成功,且未被污染。综上结果,该 RNA 可以作为反转录扩增的模板,并进行后续实验。
二、过表达菌株 H7潮霉素基因的 PCR验证
通过 HPLC 初步筛选出高产 Monacolin K 的转化子红曲菌株 H7 后,对 H7菌株进行潮霉素基因的 PCR 验证。分别提取红曲菌 M1 菌株和 H7 菌株的 RNA,再将其反转录成cDNA。以 cDNA 为模板,Hygro-F 和Hygro-R 为引物进行扩增潮霉素基因。结果如图 4所示,对照菌株红曲菌 M1 菌株未能扩增出明显条带,而 H7 菌株能扩增出明显条带,说明H7 菌株中成功的导入了过表达质粒,因此说明,mokH过表达菌株构建成功。
三、Monacolin K产量检测
将过表达菌株H7、红曲菌 M1 菌株及mokH基因缺失菌株一起进行摇瓶发酵培养,通过HPLC分别检测两种菌株不同阶段 Monacolin K产量,以观测mokH基因对 Monacolin K 产量的影响。结果如图5所示。由图可知,第 15 d 时,过表达菌株与 M1 菌株相比 MonacolinK 产量提高了 0.82倍,达到了 243.84 mg/L,敲除菌株产量为 84.42 mg/L,降低了 0.37倍。由此推测,mokH基因对紫色红曲菌 Monacolin K 的合成起正调控作用。
四、红曲色素产量检测
通过紫外分光光度计分别检测 2,5,8,12,15 d 的 H7 菌株、M1 菌株及mokH基因缺失菌株的红曲红色素、红曲橙色素和红曲黄色素。结果如图6A-C所示,由图得三种色素的产量变化总体呈现一致性,均是过表达菌株的三种色价低于普通的 M1 菌株和敲除菌株;敲除菌株的色价略高M1菌株。结合Monacolin K 产量检测结果及文献报道推测:由于合成Monacolin K 和红曲色素的前体物质均为乙酰辅酶 A,所以两支路存在竞争关系,因此当Monacolin K 产量增多时,红曲色素的产量会在一定程度上减少;反之,当 Monacolin K产量降低时,红曲色素的产量会相应提高。所以,mokH基因过表达菌株的色素产量最低;mokH基因缺失菌株的色素产量最高。
五、过表达菌株H7微观菌体形态的检测
通过扫描电镜检测H7菌株和M1菌株菌丝体的形态差异,结果如图7所示,对比图A和图B可知,H7菌株的菌丝体与M1菌株相比更为饱满;对比图C和图D可知,H7菌株的菌丝体凹陷程度及褶皱明显多于M1菌株。由此推测,mokH基因的过表达可能会刺激胞内物质分泌到胞外,从而使红曲菌菌丝体的形态发生改变。
序列表
<110> 北京工商大学
<120> 紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gctctagaat ggccctatcg ccagt 25
<210> 2
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cccaagcttt taggaggcca ggttgtgtt 29
Claims (1)
1.紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法,其特征在于,包括下列步骤:
1) 设计了一对引物mokH-F和mokH-R,具体如下:
mokH-F:5’-GCTCTAGAATGGCCCTATCGCCAGT-3’(XbaI);
mokH-R:5’-CCCAAGCTTTTAGGAGGCCAGGTTGTGTT-3’(HindIII);
2) 通过PCR扩增紫色红曲菌基因组中的mokH基因;
3) 将扩增得到的mokH基因连接到pBC-hygro原核表达载体上,构建pBC-Hygro-mokH高表达质粒;
构建重组质粒后,通过琼脂糖凝胶电泳得到的片段条带大小对重组质粒进行初步验证,再用QuickCut ClaⅠ和XbaⅠ进行双酶切验证,经过双酶切后得到大小在6800bp左右和1400bp左右的两段目的片段,与预期大小一致,证明过表达质粒构建成功;
4)制备红曲菌原生质体,并通过电击转化的方法将过表达质粒导入到红曲菌原生质体中,得到mokH过表达菌株;
制备红曲菌原生质体的具体步骤是:
(1)将红曲菌M1接种于试管斜面培养基,30 ℃培养7-10 d;
(2)加0.9%无菌生理盐水用接种环轻轻刮菌体表面,释放并收集孢子,制备成均一浓度的孢子悬液(1×108 -1×109个/mL);
(3)取200 μL均一孢子悬液涂布于铺有玻璃纸的PDA固体培养基上,30 ℃培养36-40h;
(4)用涂布棒刮取玻璃纸上的菌丝体并收集到500目尼龙布上,用0.6 M MgSO4溶液洗1-2次;
(5)取约0.3 g菌丝体于100 mL三角瓶中,并加入30 mL裂解酶液,于30 ℃,60 r/ min酶解2.5 h,然后用500目尼龙布过滤;
(6)滤液于4 ℃,7000 r/min 离心5 min,弃上清;
(7)将收集的原生质体沉淀用1.2 mol/L预冷的山梨醇溶液洗涤2次,然后将其分成2份;一份用预冷的1.2 mol/L山梨醇溶液重悬后,于-80 ℃保存;另一份则用1.2 mol/L山梨醇溶液重悬后置于冰上备用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910288244.7A CN110331151A (zh) | 2019-04-11 | 2019-04-11 | 紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910288244.7A CN110331151A (zh) | 2019-04-11 | 2019-04-11 | 紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110331151A true CN110331151A (zh) | 2019-10-15 |
Family
ID=68139024
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910288244.7A Pending CN110331151A (zh) | 2019-04-11 | 2019-04-11 | 紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110331151A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113846111A (zh) * | 2021-07-06 | 2021-12-28 | 北京工商大学 | 紫色红曲菌comp53355_c10基因过表达菌株的构建方法及其应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR830002801B1 (ko) * | 1979-02-20 | 1983-12-16 | 상꾜가부시끼가이샤 | 고(高) 콜레스테롤혈증치료제, 모나콜린 k의 제조방법 |
CN104277985A (zh) * | 2014-09-26 | 2015-01-14 | 浙江师范大学 | 红曲霉(Monascus purpureus)M-24菌株及其用于Monacolin K制备中应用 |
CN106987529A (zh) * | 2017-04-13 | 2017-07-28 | 北京工商大学 | 高产MonacolinK的红曲霉基因工程菌的构建方法及其应用 |
CN107190026A (zh) * | 2017-07-24 | 2017-09-22 | 北京工商大学 | 一种提高红曲菌次级代谢产物的方法 |
-
2019
- 2019-04-11 CN CN201910288244.7A patent/CN110331151A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR830002801B1 (ko) * | 1979-02-20 | 1983-12-16 | 상꾜가부시끼가이샤 | 고(高) 콜레스테롤혈증치료제, 모나콜린 k의 제조방법 |
CN104277985A (zh) * | 2014-09-26 | 2015-01-14 | 浙江师范大学 | 红曲霉(Monascus purpureus)M-24菌株及其用于Monacolin K制备中应用 |
CN106987529A (zh) * | 2017-04-13 | 2017-07-28 | 北京工商大学 | 高产MonacolinK的红曲霉基因工程菌的构建方法及其应用 |
CN107190026A (zh) * | 2017-07-24 | 2017-09-22 | 北京工商大学 | 一种提高红曲菌次级代谢产物的方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
YI-PEI CHEN ET AL: "Identification of the mokH Gene Encoding Transcription Factor for the Upregulation of Monacolin K Biosynthesis in Monascus pilosus", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113846111A (zh) * | 2021-07-06 | 2021-12-28 | 北京工商大学 | 紫色红曲菌comp53355_c10基因过表达菌株的构建方法及其应用 |
CN113846111B (zh) * | 2021-07-06 | 2023-04-25 | 北京工商大学 | 紫色红曲菌comp53355_c10基因过表达菌株的构建方法及其应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102796673B (zh) | 一株阿魏酸酯酶生产菌株及应用该菌株生产阿魏酸酯酶的方法 | |
CN110484572A (zh) | 一种提高酿酒酵母橙花叔醇产量的方法 | |
CN107574173B (zh) | 一种重组质粒及其用于构建红曲色素高产菌株的方法 | |
CN106947705B (zh) | 低产桔霉素高产红曲黄色素的基因重组紫色红曲霉M-piy菌株及其制备方法和用途 | |
CN110373341B (zh) | 一种具有低产高级醇性能的啤酒酵母菌株及其构建方法 | |
CN105420154A (zh) | 双基因敲除重组红球菌、构建方法及其应用 | |
CN106987529A (zh) | 高产MonacolinK的红曲霉基因工程菌的构建方法及其应用 | |
CN108034667B (zh) | 一种红色红曲霉α-淀粉酶基因、其制备方法及应用 | |
CN107502561B (zh) | 冠突散囊菌及其应用、黑茶及其加工方法 | |
CN111394288A (zh) | 重组谷氨酸棒杆菌、其构建方法及其生产四氢嘧啶的方法 | |
CN103834582A (zh) | 一种提高衣康酸发酵产量的菌株及其构建和利用菌株生产衣康酸的方法 | |
CN113604472B (zh) | 一种应用于里氏木霉的CRISPR/Cas基因编辑系统 | |
CN110331151A (zh) | 紫色红曲菌mokH基因过表达菌株的构建方法 | |
CN110331150A (zh) | 紫色红曲菌中调控因子LaeA过表达菌株的构建方法 | |
CN107058144A (zh) | 一种产衣康酸的重组酵母菌株及其构建方法与应用 | |
CN101139566A (zh) | 一种莽草酸生产菌株及其构建方法 | |
CN111334459B (zh) | 一种提高1,3-丙二醇产量的克雷伯氏工程菌构建方法及应用 | |
CN106929438A (zh) | 一株高产四甲基吡嗪的酿酒酵母及其构建方法 | |
CN107177622B (zh) | 一种根癌农杆菌介导的意大利青霉遗传转化方法 | |
CN113980938B (zh) | 一种获取高产高稳定性异源β-葡萄糖苷酶的方法 | |
CN105274112A (zh) | 一种在酸性条件下诱导表达的启动子 | |
CN111057710B (zh) | 一种胁迫耐受性增强的乳酸菌的构建方法、重组乳酸菌及其用途 | |
CN107177623A (zh) | 一种高产甘油低产乙酸的葡萄酒用酿酒酵母菌株及构建方法 | |
CN107641604A (zh) | 一株耐高温酿酒酵母菌株及其构建方法 | |
CN113755420A (zh) | 一种提升酸奶中丁二酮和乙偶姻含量的基因工程菌及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191015 |